JP2019523768A

JP2019523768A - 移植に伴う虚血／再灌流傷害から臓器を保護するための組成物および方法

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Publication number: JP2019523768A
Application number: JP2018564727A
Authority: JP
Inventors: クリストフィドウ−ソロミドウ，メルポ; カントゥ，エドワード
Original assignee: ユニバーシティオブペンシルベニア
Priority date: 2016-06-07
Filing date: 2017-06-05
Publication date: 2019-08-29
Also published as: WO2017214039A1; EP3463334B1; EP3463334A1; CA3026950A1; CN109689043A; EP3463334A4; IL263555A; KR20190067150A; AU2017278139A1; MA45191A; US20190134071A1; US11071746B2; ES2969209T3

Abstract

本発明は、移植に伴う傷害から肺などの臓器を保護するための組成物および方法を提供する。特に、本発明は、移植に伴う虚血／再灌流傷害などの傷害から肺を保護するための、天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）ならびに関連分子に関する。【選択図】図８

Description

本発明は、移植に伴う傷害から肺などの臓器を保護するための組成物および方法に関する。特に、本発明は、移植に伴う虚血／再灌流傷害などの傷害から肺を保護するための、天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）ならびに関連分子に関する。

肺移植は確立された外科的選択肢であり、進行した慢性疾患に罹患した肺を健常ドナー肺に取り換えることを意味し、肺保存および再灌流の際の血流の停止に伴う虚血エピソードを含む。虚血再灌流（ＩＲ）傷害は原発性移植片機能不全（ＰＧＤ）として臨床的に知られており、移植手術の転帰不良の主な原因である。ＩＲ傷害またはＰＧＤを生じさせる機序として、炎症および免疫傷害修復反応が考えられる。炎症反応の一部において、被移植者の血行から多形核好中球（ＰＭＮ）を動員し、それを移植した（ドナー）肺に接着し移行する形をとる。肺血管の内皮層から発せられるシグナルが、ＰＭＮの動員および血管壁への接着を生じさせると思われるが、これらのシグナルがどのようにいつ誘導されるかは不明である。肺虚血（すなわち、肺内の血流の停止）により、内皮細胞シグナル伝達カスケードの活性化が引き起こされ、これが活性酸素種（ＲＯＳ）の生成につながる。これらの観察に基づいて、保管に伴う肺虚血がおそらくＲＯＳを介して炎症部分の誘導を引き起こすと差し支えなく結論づけることができる。

炎症とは、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）やその受容体（パターン認識受容体［ＰＲＲ］）などの多くの前炎症性メディエータにより調節される複雑なプロセスである。ｈｉｇｈ−ｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｂｏｘ１（ＨＭＧＢ１）のＤＡＭＰタンパク質の増加およびそのＰＲＲの発現の増加、終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）は、炎症の発症および増幅において重要であり、ＩＲおよび内毒血症などの多くの炎症病理に関係があるとされている。このＨＭＧＢ１−ＲＡＧＥ軸は、インフラマソームの活性化によって炎症カスケードを誘発するために細胞が用いる協調反応の一部である。インフラマソーム（感染または組織損傷に応答して形成される多量体タンパク質複合体）により、臓器全体の統合的で簡潔な炎症状態が分かる。インフラマソームは、サイトカインおよびケモカインの産生を誘発し、それにより接着分子の発現を増加させ、内皮に対するさらなるＰＭＮおよび他の免疫細胞の接着を引き起こすため、炎症の増幅において極めて重要である。

したがって、移植に伴う傷害から肺などのドナー臓器を保護するための方法および組成物が必要とされている。

本明細書の一態様において、有効量のセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）、その類似体、その立体異性体、その代謝産物、またはそれらの組み合わせを含む組成物をドナー臓器に投与することを含む、対象に対する移植前のドナー臓器を延命する方法を提供する。いくつかの実施形態において、ドナー臓器は肺である。

本明細書の別の態様において、有効量のセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）、その類似体、その立体異性体、その代謝産物、またはそれらの組み合わせを含む組成物をドナー臓器に投与することを含む、移植用ドナー臓器を保護または保存する方法を提供する。いくつかの実施形態において、ドナー臓器は肺である。

本明細書の別の態様において、有効量のセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）、その類似体、その立体異性体、その代謝産物、またはそれらの組み合わせを含む組成物をドナー臓器に投与することを含む、移植用ドナー臓器を調製する方法を提供する。いくつかの実施形態において、ドナー臓器は肺である。

本明細書の別の態様において、有効量の天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）ならびに関連分子を含む組成物を肺に投与することを含む、ヒト患者の移植用ドナー肺の移植片拒絶の尤度を低下させる方法を提供する。

本明細書の別の態様において、有効量の天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）ならびに関連分子を含む組成物を患者に移植する前の肺に投与することを含む、ヒト患者の肺移植に伴う原発性移植片機能不全（ＰＧＤ）の尤度を低下させる方法を提供する。

本明細書の別の態様において、有効量の天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）ならびに関連分子を含む組成物を移植前の肺に投与することを含む、ヒト患者の閉塞性細気管支炎などの肺移植合併症の尤度を低下させる方法を提供する。

本明細書の別の態様において、有効量の天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）ならびに関連分子を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、肺などの移植用ドナー臓器に有効量を対象に対する移植前に投与してドナー臓器を延命するために、組成物を製剤する。いくつかの実施形態において、肺などの移植用ドナー臓器に有効量を投与して移植用ドナー臓器を保護、調製、または保存するために、組成物を製剤する。いくつかの実施形態において、移植用ドナー肺に有効量を投与してヒト患者のドナー肺に対する移植片拒絶または原発性移植片機能不全（ＰＧＤ）の尤度を低下させるために、組成物を製剤する。いくつかの実施形態において、移植用ドナー肺に有効量を投与してヒト患者の閉塞性細気管支炎などの肺移植合併症の尤度を低下させるために、組成物を製剤する。

本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明、実施例、および図面から明らかになるであろう。しかしながら、本発明の精神および範囲内の様々な変更および修正が、詳細な説明により当業者には明らかになるであろうことから、詳細な説明および具体例は、本発明の好ましい実施形態を示すものの、単に例示にすぎないことを理解されたい。

本発明は、図面と併せて以下の詳細な説明を読むことにより、よりよく理解されるであろう。

ヒトドナー肺（Ｂ）の体外肺灌流（ＥＶＬＰ）モデルシステム（Ａ）を示す図である。ヒトドナー肺（Ｂ）の体外肺灌流（ＥＶＬＰ）モデルシステム（Ａ）を示す図である。ＥＶＬＰシステムにおいて噴霧器を介してヒトドナー肺に投与したＬＧＭ２６０５を、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いてＢＡＬＦ、灌流液および肺組織中で数時間にわたって検出することができることを示す図である。ＥＶＬＰヒト肺の血行動態計測値を示す図である。ＥＶＬＰシステムにおいて噴霧器を介してヒトドナー肺に投与したＬＧＭ２６０５により、酸素化（Ｐ／Ｆ比）（図３Ａ）、静的コンプライアンス（図３Ｂ）および動的コンプライアンス（図３Ｃ）が向上する。ＥＶＬＰヒト肺の血行動態計測値を示す図である。ＥＶＬＰシステムにおいて噴霧器を介してヒトドナー肺に投与したＬＧＭ２６０５により、酸素化（Ｐ／Ｆ比）（図３Ａ）、静的コンプライアンス（図３Ｂ）および動的コンプライアンス（図３Ｃ）が向上する。ＥＶＬＰヒト肺の血行動態計測値を示す図である。ＥＶＬＰシステムにおいて噴霧器を介してヒトドナー肺に投与したＬＧＭ２６０５により、酸素化（Ｐ／Ｆ比）（図３Ａ）、静的コンプライアンス（図３Ｂ）および動的コンプライアンス（図３Ｃ）が向上する。エアロゾル化ＬＧＭ２６０５（ＳＤＧ）：試験デザインを用いたＥＶＬＰヒト肺の血行動態計測値を示す図である。エアロゾル化ＬＧＭ２６０５で処置したヒト肺（ＥＶＬＰ）組織において、ＮＲＦ２により調節されるストレス応答酵素であるＨＯ−１の遺伝子発現レベルが低下することを示す図である。時間「０」は、ＬＧＭ２６０５のエアロゾルを投与した時間である。ＬＧＭ２６０５で処置したヒト肺（ＥＶＬＰ）組織において、ＮＲＦ２により調節される抗酸化酵素であるＮＱＯ１およびＧＳＴＭ１の遺伝子発現レベルが増加することを示す図である。時間「０」は、ＳＤＧのエアロゾルを投与した時間である。ＬＧＭ２６０５で処置したヒト肺（ＥＶＬＰ）組織において、炎症性サイトカインであるＩＬ１−βおよびＩＬ−６の遺伝子発現レベルが低下することを示す図である。ＬＧＭ２６０５で処置したヒト肺（ＥＶＬＰ）組織において、ＣＯＸ−２（炎症および疼痛を促進する酵素）の遺伝子発現レベルが低下することを示す図である。

本発明は、移植に伴う傷害から肺などの臓器を保護するための組成物および方法を提供する。特に、本発明は、移植に伴う虚血／再灌流傷害などの傷害から肺を保護するための、天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）ならびに関連分子に関する。

本出願の発明者らは、意外にも予期せずに、天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのＳＤＧならびに関連分子が強力なＲＯＳスカベンジャーであり、そのことにより肺移植に伴う虚血／再灌流（ＩＲ）傷害を予防するために使用できることを見出した。本発明者らは、天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのＳＤＧならびに関連分子が強力な抗炎症特性およびインフラマソーム阻害特性を有することを示し、その結果、ＩＲ傷害を阻止するために使用できることを見出した。本発明者らはまた、天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのＳＤＧならびに関連分子を、肺保存期間を延長し、臓器状態を改善し、移植片拒絶の尤度を低下させ、閉塞性細気管支炎（ＢＯ）を治療するために用いることができるエビデンスを得た。

ＳＤＧとは、アマ、ヒマワリ、ゴマ、およびカボチャの種子に存在する抗酸化物質のフィトエストロゲンである。食品では、アマニを含有する市販のパンに含まれ得る。アマニ、その生理活性成分およびその代謝産物は当該技術分野で知られており、米国特許出願公開第２０１０／０２３９６９６号、同第２０１１／０３００２４７号、および同第２０１４／０３０８３７９号ならびに国際出願公開ＷＯ２０１４／２００９６４号に記載されており、それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

アマニに含まれる主なリグナンは、植物の天然状態で共役セコイソラリシレシノールジグルコシド（ＳＤＧ）として貯蔵される、２，３−ビス（３−メトキシ−４−ヒドロキシベンジル）ブタン−１，４−ジオール（セコイソラリシレシノールまたはＳＥＣＯ）である。ＳＤＧはヒト腸内で代謝され、エンテロジオール（ＥＤ）とエンテロラクトン（ＥＬ）になる。エンテロジオールとエンテロラクトンの合成類似体が当該技術分野で知られている（例えば、Ｅｋｌｕｎｄｅｔａｌ．、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．、２００３、５：４９１を参照）。

ＳＤＧの抽出精製手法は当該技術分野で知られており、米国特許第５，７０５，６１８号に記載されており、参照によりその全体が組み込まれる。ＳＤＧ、その立体異性体および類似体の合成手法は、ＭｉｓｈｒａＯＰ，ｅｔａｌ．、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙＬｅｔｔｅｒｓ２０１３、（１９）：５３２５−５３２８および国際出願公開ＷＯ２０１４／２００９６４号に記載されており、それらは参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。本明細書において、合成ＳＤＧはＬＧＭ２６０５とも呼ばれる。本明細書で提供する方法で使用するための生理活性成分を、当該技術分野で知られているように、哺乳動物で容易に代謝可能な形態のエンテロジオール（ＥＤ）またはエンテロラクトン（ＥＬ）に化学的に直接合成することもできる。

本明細書で用いる用語「代謝産物」とは、代謝または代謝過程で産生される物質を指すこともある。例えば、ＳＤＧの代謝産物は、ＥＬまたはＥＤである。

当業者であれば、代謝産物が天然代謝産物の化学的合成等価物であり得ることを理解されよう。

本明細書で用いる用語「類似体」とは、その構造が他の化合物の構造に関連する化合物を指すこともある。類似体は合成類似体であってもよい。

本明細書で用いる用語「成分（ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ）」または「成分（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）」とは、混合物または化合物の要素または構成要素を指すこともある。

「医薬組成物」とは、薬学的に許容される担体または希釈剤とともに、有効量の有効成分、例えば（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧ、メソＳＤＧ、ＳＤＧ、ＳＥＣＯ、ＥＬ、ＥＤおよびそれらの類似体を指す。「有効量」とは、所与の条件および投薬レジメンに効果をもたらす量を指す。

本明細書に記載の組成物は、「有効量」を含むことができる。「有効量」とは、所望の結果を達成するのに必要な量および期間の有効な量を指す。個体または臓器の病状、年齢、性別、および重量ならびに個体または臓器において所望の反応を引き出す組成物の能力などの要因に応じて、有効量は変動し得る。有効量とはまた、有益効果が分子の毒性効果または有害効果を上回る量である。

本明細書の別の態様において、有効量の天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）ならびに関連分子を含む組成物をドナー臓器に投与することを含む、移植用ドナー臓器を調製する方法を提供する。いくつかの実施形態において、ドナー臓器は肺である。

一例では、有効量の範囲は約１ナノモル（ｎＭ）〜約１モル（Ｍ）である。別の例では、有効量の範囲は約１ｎＭ〜約１ｍＭである。別の例では、有効量の範囲はナノモル〜ミリモルである。さらに別の例では、有効量の範囲は約１ｎＭ〜約１μＭである。

本明細書で用いる語句「薬学的に許容される」とは、正当な医学的判断の範疇で、妥当なベネフィット／リスク比に鑑みて、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、もしくは他の問題または合併症を伴わずに、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに好適な化合物、物質、組成物、担体、および／または剤形を指す。

「薬学的に許容される賦形剤」とは、一般的に安全で非毒性であり、生物的にもその他の点でも望ましくはないものではない医薬組成物を調製するのに有用な賦形剤を意味し、獣医用途およびヒト医薬用途で許容される賦形剤を含む。本明細書で用いる「薬学的に許容される賦形剤」には、そのような賦形剤の１種および２種類以上の両方が含まれる。

経口、非経口、経粘膜、経皮、筋肉内、静脈内、皮内、皮下、腹腔内、心室内、脳内、膣内、腫瘍内または頬側などの当業者に公知の任意の好適な方法により、医薬組成物を対象に投与することができる。有効成分を適切なポリマーに包埋し、その後、皮下、腫瘍内、頬側、皮膚パッチとして、または膣に挿入することにより、徐放することもできる。医療機器を有効成分で被覆することもできる。

いくつかの実施形態において、液状製剤または固形製剤として、投与に好適な形態で医薬組成物を製剤する。好適な液剤として、エアロゾル、溶液、懸濁液、分散液、乳濁液、および油などが挙げられる。好適な固形剤として、錠剤、カプセル、丸剤、粒剤、およびペレットなどが挙げられる。いくつかの実施形態において、医薬組成物を液状製剤の静脈注射により投与する。いくつかの実施形態において、医薬組成物を静脈内投与するため、静脈内投与に好適な形態で製剤する。

一例では、本明細書で提供する医薬組成物は徐放性組成物、すなわち、アマニ、その生理活性成分、またはその代謝産物が投与後一定期間にわたって放出される組成物である。徐放性組成物または持効性組成物として、脂溶性デポ剤（例えば、脂肪酸、ワックス、油）の製剤が挙げられる。別の例では、組成物は速放性組成物、すなわち、アマニ、その生理活性成分、またはその代謝産物のすべてが投与直後に放出される組成物である。

いくつかの実施形態において、本明細書で提供する方法で使用するための組成物を、１日１回投与する。いくつかの実施形態において、組成物を、２日に１回、１週間に２回、１週間に１回、または２週間に１回投与する。

天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧ、（Ｓ，Ｒ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｓ）−ＳＤＧ、メソＳＤＧ、ＳＥＣＯ、ＥＬ、ＥＤまたはそれらの類似体を、０．１ｎｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇの用量で投与してもよい。

天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧ、（Ｓ，Ｒ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｓ）−ＳＤＧ、メソＳＤＧ、ＳＤＧ、ＳＥＣＯ、ＥＬ、ＥＤまたはそれらの類似体を用いた治療において、単回投与または数日、数ヶ月、数年または無期限にわたって投与する。

本明細書で用いる「治療（処置）する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」とは、治療処置または防止的措置もしくは予防的措置を指すこともあり、その目的は、本明細書に記載のように、標的とする病態もしくは障害、またはその両方を予防または軽減することにある。

さらに、本明細書で用いる用語「治療（処置）する（ｔｒｅａｔ）」および「治療（処置）（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、治療処置および防止的措置または予防的措置を指し、その目的は、疾患または病気に伴う望まない生理的変化を予防または緩徐（軽減）することにある。検出可能であるか検出不能であるかに関わらず、有益な臨床結果または所望の臨床結果として、症状の緩和、疾患または病気の程度の減少、疾患または病気の安定化（すなわち、疾患または病気が悪化しないこと）、疾患または病気の進行の遅延または減速、疾患または病気からの回復または寛解、および疾患または病気の（部分的または全体的な）軽快が挙げられるが、限定されない。「治療（処置）（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、治療を受けてない場合の予測生存期間と比較して生存期間を延ばすことも意味することができる。

いくつかの実施形態において、治療ならびに本明細書に記載の方法および組成物を必要とする対象として、喘息、癌、ＣＯＰＤ、および中皮腫などの肺疾患および肺障害に罹患した対象を挙げることができるが、限定されない。一例示的実施形態において、対象は、肺移植が必要な患者である。別の例示的実施形態において、対象は、肺移植を待っている患者である。別の例示的実施形態において、対象は、肺移植を予定している患者である。

用語「対象」には、哺乳動物、例えばヒト、コンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコ、およびトリなど）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、および家禽など）、および実験動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、およびトリなど）が含まれる。ヒトのほかに、対象には、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、スイギュウ、ダチョウ、モルモット、ラット、マウス、トリ（例えば、インコ）、および他の野生動物、家畜、または商業的に有用な動物（例えば、ニワトリ、ガチョウ、シチメンチョウ、サカナ）が含まれていてもよい。用語「対象」は、あらゆる面で正常な個体を排除するものではない。用語「対象」には、病気またはその後遺症の治療を必要としているか、それに罹りやすいヒトが含まれるが、限定されない。

用語「約」または「およそ」とは、当業者によって決定されるような特定の値に対する許容可能な誤差範囲内を意味し、値がどのように計測または決定されるかによって、すなわち、計測装置の限界に部分的に左右されよう。

本明細書で引用する特許、特許出願および科学刊行物のすべては、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

本発明の好ましい実施形態をより完全に説明するために、以下の実施例を提示する。しかしながら、これらは、本発明の広範囲を限定するものとして決して解釈されるべきではない。

（実施例）
ＳＤＧは移植に伴う虚血／再灌流傷害から臓器を保護する
肺移植は、この２０年間でかなりの進歩を遂げ、嚢胞性線維症などの特定の適応症に対する生存率が倍増した。これらの改善から、医師が患者に早期肺移植を提案することを勧奨する。腎臓や肝臓のような他の臓器とは異なり、移植候補の肺移植片に対する承認基準は非常に厳格であるため、脳死ドナーのわずか２０％からしか肺が得られない。この厳しい選択は、肺移植後の高死亡率により動機づけられ、最初の５年間は約５０％のままであった。利用可能な肺移植片の数を増やそうとする、いくつかの戦略が実施されている。生体ドナーからの臓器調達は、いまだ不確実なままである。あるチームは拡大した基準で肺を移植するが、これらの肺は、胸部Ｘ線異常、年齢７０歳超、酸素化不良、または体外評価手順なしの吸引が原因で、最初にはねられている。多くの場合、この状況において移植後転帰に明らかな有害効果は見られなかった。しかしながら、いくつかの点でドナーの許容性の拡大が、主に初期移植片機能不全の割合を増加させ、より不良な早期転帰につながるといういくつかのエビデンスがある。

体外肺灌流（ＥＶＬＰ）により体外のこれら「最低限」の肺を評価することで、これら臓器についてより客観的に再現性のある判断をすることができる。体外評価以外にも、ＥＶＬＰにより肺保存期間を最大１２時間延ばすことができる。有望な研究において、手順中に治療剤を送達することにより、損傷した移植片の保護または修復をＥＶＬＰ中に行なうことができることが示唆された。本発明者らは、ＬＧＭ２６０５（ＳＤＧ）がそのような治療剤になり得ることで、肺保存期間を延長し、臓器状態を改善して、移植片拒絶および閉塞性細気管支炎（ＢＯ）などのさらなる慢性合併症の尤度を低下させるのに有用であり得るエビデンスを提供する。

体外肺移植片灌流試験デザイン
地元の臓器調達機関（いのちの贈り物）を通じて、ドナー肺が本発明者らの肺移植プログラムに提供され、匿名化した。組み入れ基準を満たすドナー肺（すなわち、非移植性）を回収し、標準的な冷蔵輸送手段により低カリウムデキストラン溶液（Ｐｅｒｆａｄｅｘ、Ｖｉｔｒｏｌｉｆｅ）に入れた状態で本発明者らのセンターに送付し、ＥＶＬＰシステムで３〜６時間灌流した。灌流期間中、ドナー体重１キログラムあたり７ｍｌの一回呼吸量および１分あたり７回の呼吸速度を用いて肺に人工呼吸を施しながら、ＥＶＬＰ中のＰＯ_２：ＦＩＯ_２比、すなわち吸入酸素濃度（ＦＩＯ_２）に対する体外酸素分圧（ＰＯ_２）が３５０ｍｍＨｇ以上であり、３つの生理計測値（肺血管抵抗、動的コンプライアンス、および最大吸気圧）のすべてのベースラインレベルからの劣化が１５％未満である場合に、肺は移植に対して好適であるとみなされた（図１）。

手法：無細胞ＥＶＬＰ手法の詳細については他に記載されている（Ｃｙｐｅｌｅｔａｌ．、ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ．２０１１Ａｐｒ１４；３６４（１５）：１４３１−４０）。３〜６時間のＥＶＬＰの後、１０分間かけて肺を４℃まで冷却した。その後、灌流および人工呼吸を停止し（肺を保管するため、ＦＩＯ_２を０．２１に変更）、気管を完全吸気時にクランプし、肺を膨張状態で維持した。次いで、肺をＰｅｒｆａｄｅｘに入れ、移植まで４℃で保菅した。

体外機能判断：体外機能判断のため、ＦＩＯ_２を１．０とし、一回呼吸量をドナー体重１キログラムあたり１０ｍｌ、１分あたり１０回の呼吸に設定した。次の計算により、ＥＶＬＰ中の肺機能を１時間ごとに評価した：ＰＯ_２＝［左心房ＰＯ_２−肺動脈ＰＯ_２（ｍｍＨｇ）］、および肺血管抵抗＝［（肺動脈圧−左心房圧）×８０］÷肺動脈流（ダイン・秒・ｃｍ^−５）、動的コンプライアンス（水１センチメートルあたりミリリットル）および最大吸気圧（水センチメートル）。軟性気管支鏡検査を、ＥＶＬＰのベースライン、３時間、および６時間の時点に行った。

ＬＧＭ２６０５（ＳＤＧ）はヒト肺組織内に蓄積する：ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析技法を用いて、２００ｍｇの薬物／肺のエアロゾル滴下注入３０分後から３６０分の複数の時点にわたる左右の肺組織、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）および灌流液中の合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）レベルを決定した（図２）。ここで重要なのは、エアロゾル化ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）（すなわち、気道に滴下注入される）が体循環に漏出し、灌流液中で少なくとも２４０分間検出できることである。重要なことに、肺組織生検中のレベルにおいて、１２０分までに最長２４０分まで持続する薬物の最大値が示される。さらに、ＢＡＬＦ中のレベルが３６０分超持続する。送達経路（吸入または静脈内）に関係なく、ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）は、肺に蓄積する。

ＬＧＭ２６０５（ＳＤＧ）により肺酸素化とコンプライアンスが改善する：上記と同じ肺（ＥＶＬＰ＃３）のエアロゾル化薬物（ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５））により、動的コンプライアンス（中央）と静的コンプライアンス（最後のパネル）が改善されつつ、Ｐ／Ｆ比が２００から３５０未満まで改善した（図３、第１パネル）。したがって、ＳＤＧにより、ＥＶＬＰ肺滴下注入後数分内に肺血行動態計測値が改善した。

ＮＲＦ２により調節されるストレス応答酵素であるＨＯ−１の遺伝子発現レベル：別の試験（ＥＶＬＰ＃４）において、ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）を１つの肺（右）にのみ滴下注入し、一方、溶媒対照を対側肺に滴下注入した（図４）。薬物濃度（２００ｍｇ／肺）を、上記と同様に保持した。定量ＲＴ−ＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）を用いた、ＥＶＬＰ肺組織における遺伝子発現変化の動態の分析により、肺に滴下注入したＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）に会合したその肺におけるストレス応答遺伝子であるヘムオキシゲナーゼ−１（ＨＯ−１）が降下することが明らかになった（図５）。左肺の降下は、灌流液を介したその肺へのＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）の作用を反映している可能性がある（薬物の一部が体循環中に現われることを上記に既に示した）。

ＬＧＭ２６０５（ＳＤＧ）で処置したヒト肺（ＥＶＬＰ）組織において、ＮＲＦ２により調節される抗酸化酵素であるＮＱＯ１およびＧＳＴＭ１の遺伝子発現レベルが増加する：Ｎｒｆ２とは、ＮＱＯ−１やＧＳＴＭｕ１などの抗酸化の細胞保護遺伝子の発現を調節する転写因子である。したがって、本発明者らは、肺組織（ＥＶＬＰ＃４）における遺伝子発現レベルを１２０分のサンプリング時間にわたって評価した。ｑＲＴ−ＰＣＲ分析により、ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）で処置した肺では両遺伝子の発現が強く増加するが、溶媒で処置した肺では増加しないことが明らかになった。本発明者らの発見は、虚血の際のヒト肺組織における内因性抗酸化防御がＳＤＧにより高まることを裏付けるものである（図６）。

ＬＧＭ２６０５（ＳＤＧ）で処置したヒト肺（ＥＶＬＰ）組織において、炎症性サイトカインであるＩＬ１−ｂおよびＩＬ−６の遺伝子発現レベルが低下する：上記と同様に、溶媒で処置したリング（ｌｉｎｇ）とは対照的に、ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）で処置した右肺では、ＩＬ−１βやＩＬ−６などの炎症性サイトカインの発現レベルが有意に減少した（図７）。本発明者らの発見は、虚血の際のヒト肺組織の炎症性パラメーターがＳＤＧにより低下することを裏付けるものである。

ＬＧＭ２６０５（ＳＤＧ）で処置したヒト肺（ＥＶＬＰ）組織において、ＣＯＸ−２（炎症および疼痛を促進する酵素）の遺伝子発現レベルが低下する：シクロオキシゲナーゼ−２とは、トロンボキサンやプロスタングランジン（ｐｒｏｓｔａｎｇｌａｎｄｉｎｓ）などのプロスタノイドの形成を担う酵素である。ＣＯＸを薬理学的に阻害することにより、炎症および疼痛の症状を和らげることができる。ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）のエアロゾル滴下注入により、滴下注入５０分以内にヒトＥＶＬＰ肺組織におけるＣＯＸ−２の発現が完全に阻止される。溶媒で処置した肺における降下は、灌流液を介した薬物の作用を反映している可能性がある（体循環−図８）。

発見のまとめ：統括すると、これらの発見は、ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）が、ＥＶＬＰ中にヒト肺組織に蓄積すること；ヒト肺血行動態（Ｐ／Ｆ比、動的コンプライアンス、および静的コンプライアンス）を改善すること；酸化ストレス（ＨＯ１）を低下させること；組織抗酸化防御（ＮＱＯ−１およびＧＳＴＭｕ１）を高めること；炎症性マーカー（ＩＬ−１βおよびＩＬ−６）を低下させること；ＣＯＸ−２発現を低下させることを示す。

添付図面を参照して本発明の好ましい実施形態を説明したが、本発明は、その正確な実施形態に限定されず、当業者であれば添付の特許請求の範囲に定義される本発明の範囲または精神の範囲から逸脱することなく様々な変更および修正が実施形態内で可能であることを理解されたい。

Claims

移植用の肺を保護または保存する方法であって、有効量の天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）ならびに関連分子を含む組成物を前記肺に投与することを含む、方法。
前記組成物を体外肺灌流（ＥＶＬＰ）中に投与する、請求項１に記載の方法。
前記ＳＤＧが（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧである、請求項１に記載の方法。
前記ＳＤＧが（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧである、請求項１に記載の方法。
前記ＳＤＧが合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）である、請求項１に記載の方法。
前記組成物を噴霧器で投与する、請求項１に記載の方法。
前記組成物をエアロゾルの形態で投与する、請求項１に記載の方法。
前記組成物を静脈内投与する、請求項１に記載の方法。
前記ＳＤＧを生理食塩水として投与する、請求項１に記載の方法。
前記ＳＤＧをナノモル（ｎＭ）〜ミリモル（ｍＭ）の範囲の濃度で投与する、請求項１に記載の方法。
前記肺がヒト肺である、請求項１に記載の方法。
対象に対する移植のために前記肺を判断するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
移植用の肺を調製する方法であって、有効量の天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）ならびに関連分子を含む組成物を前記肺に投与することを含む、方法。
前記組成物を体外肺灌流（ＥＶＬＰ）中に投与する、請求項１３に記載の方法。
前記ＳＤＧが（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧである、請求項１３に記載の方法。
前記ＳＤＧが（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧである、請求項１３に記載の方法。
前記ＳＤＧが合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）である、請求項１３に記載の方法。
前記組成物を噴霧器で投与する、請求項１３に記載の方法。
前記組成物をエアロゾルの形態で投与する、請求項１３に記載の方法。
前記組成物を静脈内投与する、請求項１３に記載の方法。
前記ＳＤＧを生理食塩水として投与する、請求項１３に記載の方法。
前記ＳＤＧをナノモル（ｎＭ）〜ミリモル（ｍＭ）の範囲の濃度で投与する、請求項１３に記載の方法。
前記肺がヒト肺である、請求項１３に記載の方法。
対象に対する移植のために前記肺を判断するステップをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
対象に対する移植前のドナー臓器を延命する方法であって、有効量の天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）ならびに関連分子を含む組成物を前記ドナー臓器に投与することを含む、方法。
前記組成物を体外肺灌流（ＥＶＬＰ）中に投与する、請求項２５に記載の方法。
前記ＳＤＧが（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧである、請求項２５に記載の方法。
前記ＳＤＧが（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧである、請求項２５に記載の方法。
前記ＳＤＧが合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）である、請求項２５に記載の方法。
前記組成物を噴霧器で投与する、請求項２５に記載の方法。
前記組成物をエアロゾルの形態で投与する、請求項２５に記載の方法。
前記組成物を静脈内投与する、請求項２５に記載の方法。
前記ＳＤＧを生理食塩水として投与する、請求項２５に記載の方法。
前記ＳＤＧをナノモル（ｎＭ）〜ミリモル（ｍＭ）の範囲の濃度で投与する、請求項２５に記載の方法。
前記対象がヒトである、請求項２５に記載の方法。
対象に対する移植のために前記ドナー臓器を判断するステップをさらに含む、請求項２５に記載の方法。
ヒト患者の移植用ドナー肺の移植片拒絶の尤度を低下させる方法であって、有効量の天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）ならびに関連分子を含む組成物を前記肺に投与することを含む、方法。
ヒト患者の肺移植に伴う原発性移植片機能不全（ＰＧＤ）の尤度を低下させる方法であって、有効量の天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）ならびに関連分子を含む組成物を前記患者に移植する前の前記肺に投与することを含む、方法。
ヒト患者の肺移植の合併症の尤度を低下させる方法であって、有効量の天然ＳＤＧ、合成ＳＤＧ（ＬＧＭ２６０５）、（Ｓ，Ｓ）−ＳＤＧ、（Ｒ，Ｒ）−ＳＤＧおよびそれらの混合物などのセコイソラリシレシノールジグルコシド（ｓｅｃｏｉｓｏｌａｒｉｃｉｒｅｃｉｎｏｌｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ：ＳＤＧ）ならびに関連分子を含む組成物を移植前の前記肺に投与することを含む、方法。
前記合併症が閉塞性細気管支炎である、請求項４２に記載の方法。