JP2019522010A - 置換ボロン酸化合物、該化合物を含む医薬組成物およびその使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、置換ボロン酸化合物、該化合物を含む医薬組成物、およびその使用を提供し、前記の置換ボロン酸化合物は、式（Ｉ）で表される化合物、またはその結晶形、薬学的に許容される塩、プロドラッグ、立体異性体、水和物あるいは溶媒和物である。本発明の硼酸化合物は、プロテアソーム阻害活性、より良好な薬力学的／薬物動態学的特性、優れた適用性、および高い安全性を有し、プロテアソームに関連する疾患を治療する薬物の調製に用いることができる。【化１】

Description

本発明は医薬分野に属し、特に、プロテアソームに介された関連疾患の治療のための医薬を調製することに用いられる置換ボロン酸化合物、該化合物を含む医薬組成物に関する。

プロテアソーム（ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ）は、例えばＤＮＡ修復、細胞周期の運転、シグナル伝達、抗原の提示、タンパク質の膜貫通定位などの細胞内の多くの重要な生理学および生化学的プロセスに関与する巨大な多価複合酵素で、重要な細胞内酵素のバランスをとることには主要な役割を果たす。プロテアソームの機能は、ユビキチン・プロテアソーム経路（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ-ｐｒｏｔｅｓｏｍｅ ｐａｔｈｗａｙ、ＵＰＰ）によって実現される。ＵＰＰは異常タンパク質の分解を触媒するだけでなく、多くの調節ならびにタンパク質の再生、プロセシングのプロセスにも関与する。これらのタンパク質の触媒作用のプロセスは、ヒト疾患の発症の重要な生化学的メカニズムに関係する。

プロテアソーム阻害剤（ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）は、プロテアソームの活性を阻害することで、細胞増殖に関連する蛋白、サイトカイン、及びシグナル分子の発現を影響し、細胞本来の増殖、分化、およびアポトーシスのプロセスを妨害し、腫瘍細胞の増殖を阻害することがより顕著である。

プロテアソーム阻害剤は、主にペプチドアルデヒド系、ペプチドボロン酸系、ペプチドエポキシケトン系、ペプチドビニルスルホン系、βラクトン系および他の化合物がある。ペプチドボロン酸系のプロテアソーム阻害剤であるボルテゾミブ（Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ、商品名ＶＥＬＣＡＤＥ）は、初めて臨床に用いたプロテアソーム阻害剤であり、アメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）が２００３および２００６年にそれぞれ多発性骨髄腫（ＭＭ）およびマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）の治療に用いることを承認した。ペプチドエポキシケトン系のペプチドプロテアソーム阻害剤であるカルフィルゾミブ（Ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ、商品名Ｋｙｐｒｏｌｉｓ）は、多発性骨髄腫の治療薬として２０１２年にＦＤＡに承認され、２番目に市販されているプロテアソーム類抗腫瘍薬となった。ペプチドボロン酸系プロテアソーム阻害剤であるイクサゾミブシトレート（Ｉｘａｚｏｍｉｂ ｃｉｔｒａｔｅ、商品名Ｎｉｎｌａｒｏ）は、多発性骨髄腫の治療薬として２０１５年にＦＤＡに承認され、２番目に市販されているペプチドボロン酸系のプロテアソーム阻害剤となった。市販された薬物と報道されたボロン酸系のプロテアソーム阻害剤である、国際公開第２００５／０２１５５８号、国際公開第２００５／０１６８５９号、国際公開第２００６／０８６６００号、国際公開第２００９／００２０４４号、国際公開第２０１０／０１２２２２号、国際公開第２０１１／１０９３５５号、国際公開第２０１１／０２６３４９号、国際公開第２０１１／０８７８２２号、国際公開第２０１３／０９２９７９号などのペプチド系骨格のプロテアソーム阻害剤は、体内安定性が低く、血漿中の半減期が短すぎ、迅速にクリアランスされる（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２０１５，５８：２０３６−４１）。

したがって、本分野において、プロテアソームに対する阻害活性またはより優れた薬力学的特性を有するプロテアソーム阻害剤を開発することが依然として必要とされている。

国際公開第２００５／０２１５５８号 国際公開第２００５／０１６８５９号 国際公開第２００６／０８６６００号 国際公開第２００９／００２０４４号 国際公開第２０１０／０１２２２２号 国際公開第２０１１／１０９３５５号 国際公開第２０１１／０２６３４９号 国際公開第２０１１／０８７８２２号 国際公開第２０１３／０９２９７９号

Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２０１５，５８：２０３６−４１

上記の技術的な課題に鑑み、本発明は、より良好なプロテアソーム阻害活性および／またはより良好な薬力学的／薬物動態学的特性を有する、プロテアソーム阻害剤、医薬組成物およびそれらの使用を開示する。

これに対して、本発明の技術構成は以下の通りである。
式（Ｉ）で表される置換ボロン酸化合物、またはその結晶形、薬学的に許容される塩、水和物あるいは溶媒和物である、プロテアソーム阻害剤。

ただし、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３、Ｒ^１４およびＲ^１５は、それぞれ独立して、水素、重水素、ハロゲンであり、；
追加の条件は、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３、Ｒ^１４、Ｒ^１５の中の少なくとも１つが、重水素または重水素に置換されたものである。

本発明のさらなる改良として、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、それぞれ独立して、重水素または水素である。

本発明のさらなる改良として、Ｒ^４およびＲ^５は、それぞれ独立して、重水素または水素である。

本発明のさらなる改良として、Ｒ^６は重水素である。

本発明のさらなる改良として、Ｒ^７およびＲ^８は、それぞれ独立して、重水素または水素である。

本発明のさらなる改良として、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３、Ｒ^１４およびＲ^１５は、それぞれ独立して、重水素または水素である。

本発明のさらなる改良として、前記した化合物は、以下の化合物またはその薬学的に許容される塩からなる群から選択されるが、これらに限定されない。

このような技術構成を採用する場合、薬物分子において重水素の形状および体積は水素とほぼ同じであるため、薬物分子における水素が重水素で選択的に置換されると、重水素化薬物は一般的に、本来の生物活性および選択性を保持する。同時に、炭素−重水素結合は、炭素−水素結合よりも安定であり、それによって、一部の薬物の吸収、分布、代謝および排泄などの特性に直接影響を及ぼし、薬物の有効性、安全性および忍容性を改善できることを実験で確認した。

好ましくは、重水素は、重水素に置換された位置における重水素同位体含有量が、少なくとも天然の重水素同位体含有量（０．０１５％）より多く、より好ましくは３０％超、さらに好ましくは５０％超、さらに好ましくは７５％超、さらに好ましくは９５％超、さらに好ましくは９９％超である。

具体的には、本発明において、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３、Ｒ^１４およびＲ^１５の重水素に置換された各位置における重水素同位体の含有量は、少なくとも５％であり、好ましくは１０％超、より好ましくは１５％超、より好ましくは２０％超、より好ましくは２５％超、より好ましくは３０％超、より好ましくは３５％超、より好ましくは４０％超、より好ましくは４５％超、より好ましくは５０％超、より好ましくは５５％超、より好ましくは６０％超、より好ましくは６５％超、より好ましくは７０％超、より好ましくは７５％超、より好ましくは８０％超、より好ましくは８５％超、より好ましくは９０％超、より好ましくは９５％超、より好ましくは９９％超である。

別の好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物におけるＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３、Ｒ^１４およびＲ^１５の少なくとも１個のＲが重水素を含み、好ましくは２個のＲ、より好ましくは３個のＲ、より好ましくは４個のＲ、より好ましくは５個のＲ、より好ましくは６個のＲ、より好ましくは７個のＲ、より好ましくは８個のＲ、より好ましくは９個のＲ、より好ましくは１０個のＲ、より好ましくは１１個のＲ、より好ましくは１２個のＲ、より好ましくは１３個のＲ、より好ましくは１４個のＲ、より好ましくは１５個のＲが重水素を含む。

別の好ましい実施形態では、前記の化合物が重水素化されていない化合物を含まない。

また、本発明は、薬学的に許容される担体と、および上記のようなプロテアソーム阻害剤、またはその結晶型、薬学的に許容できる塩、水和物または溶媒化合物、立体異性体、プロドラッグもしくは同位体異性体とを含む医薬組成物を開示する。

本発明のさらなる改良として、前記の薬学的に許容される担体としては、流動促進剤、甘味剤、希釈剤、防腐剤、染料/着色剤、呈味増強剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、崩壊剤、懸濁剤、安定剤、等張剤、溶媒又は乳化剤の少なくとも１種を含む。

本発明のさらなる改良として、前記の医薬組成物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、軟膏剤、乳剤、懸濁剤、液剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、ミクロスフェア、またはエアゾールなどである。

本発明の医薬組成物の典型的な投与経路としては、経口投与、直腸投与、経粘膜投与、経腸投与、または局所投与、経皮投与、吸入投与、非経口投与、舌下投与、膣内投与、鼻腔内投与、眼内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与が挙げられるが、これらに限定されない。経口投与または注射投与が好ましい。

本発明の医薬組成物は、通用の混合法、溶解法、造粒法、糖衣錠剤を製造する方法、細粉砕法、乳化法、凍結乾燥法などの本分野で周知の方法により製造することができる。

さらに、本発明は、薬学的に許容される担体と、前記のようなプロテアソーム阻害剤、またはその結晶形、薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物とを混合して、医薬組成物となる工程を含む医薬組成物の調製方法を提供する。

本発明の化合物は、プロテアソーム酵素阻害活性を有するから、プロテアソームを阻害したり、そのペプチド基質の含有量を増加させたりすることで治療される疾患や病症に罹患する患者を治療するための治療剤として有用であると期待される。従って、本発明の一態様は、患者に有効な量の本発明の化合物を投与することを含む、プロテアソームの阻害によって治療される疾患や病症に罹患する患者を治療する方法に関する。本発明の別の態様は、治療有効量の本発明化合物を患者に投与することを含む心血管疾患の治療方法に関する。本発明の別の態様は、哺乳動物にプロテアソーム阻害量の本発明の化合物を投与することを含む、哺乳動物における高血圧の治療法またはプロテアソームの阻害方法に関する。

また、本発明は、プロテアソーム阻害剤としての上記のような置換ボロン酸化合物の使用、すなわちプロテアソームにより介される疾患の薬物の調製に用いられる本発明の化合物の使用を開示する。

本発明の前記のプロテアソームにより介される疾患には、炎症性病症（例えば、関節リウマチ、炎症性腸疾患、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、変形性関節症、皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬））、血管増殖性疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症、再狭窄）、眼球増殖性疾患（例えば、糖尿病性網膜症）、良性増殖性病変（例えば、血管腫症）、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症、組織および臓器の拒絶反応）、および感染に関連する炎症（例えば、免疫反応）、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病、Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、パーキンソン病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、運動ニューロン疾患、神経因性疼痛、トリプレットリピート病（ｔｒｉｐｌｅｔｒｅｐｅａｔ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、星状細胞腫、およびアルコール性肝臓疾患による神経変性、虚血性損傷（例えば、脳卒中）、ならびに悪液質（例えば、様々な生理学的および病理学的状態（例えば、神経損傷、絶食、発熱、アシドーシス、ＨＩＶ感染、癌、および特定の内分泌疾患）に伴う筋肉タンパク質分解の促進）を含む。

本発明の化合物は特に癌の治療に好適である。本明細書で使用される「癌」という用語は、制御されていないまたは調節不全の細胞増殖、細胞分化の減少、周囲組織への不適切な侵入能力、あるいは異所性部位で新たな増殖を形成する能力を特徴とする細胞障害を指す。「癌」という用語には、充実性腫瘍や血液系腫瘍が含まれるが、これに限定されない。「癌」という用語は、皮膚、組織、臓器、骨、軟骨、血液、血管の疾患を含む。「癌」という用語には、原発癌と転移癌も含まれる。前記の癌の腫瘍細胞は、白血病細胞、骨髄腫細胞、非小細胞肺癌細胞、乳癌細胞、卵巣癌細胞のうちの１つ以上であることが好ましい。

本明細書に開示された範囲内で、本発明の上述の各技術的特徴および以下（例えば実施例）に具体的に説明される技術的特徴は、互いに組み合わされて新しいまたは好ましい技術構成を形成できることが理解されるべきである。紙面スペースに限りがあるため、ここではいちいち説明しない。

本明細書において、特に説明のない限り、「ハロゲン」とは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩを指す。より好ましくは、ハロゲン原子がＦ、ＣｌおよびＢｒから選択される。

本明細書において、特に説明のない限り、「重水素化」とは、化合物または官能基における水素の１個以上が重水素に置換されていることを意味し、重水素化は一置換、二置換、多置換または完全置換であっても良い。「１つ以上の重水素化」および「１回以上の重水素化」という用語は、同じ意味で使用される。

本明細書において、特に説明のない限り、「非重水素化された化合物」とは、重水素原子の割合が天然重水素同位体の含有量（０．０１５％）より多くない化合物を指す。

薬学的に許容される塩としては、無機塩および有機塩がある。一種類の好ましい塩は、本発明の化合物と酸と形成された塩である。塩の形成に適する酸として、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸；ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、ピクリン酸、安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸などの有機酸；及び、プロリン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸などのアミノ酸が挙げられるが、これらに限定されない。別の一種類の好ましい塩は、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩或いはカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、マグネシウム塩或いはカルシウム塩）、アンモニウム塩（例えば、メチルアミン塩、エチルアミン塩、プロピルアミン塩、ジメチルアミン塩、トリメチルアミン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、エチレンジアミン塩、ヒドロキシエチルアミン塩、ジヒドロキシエチルアミン塩、トリヒドロキシアミン塩、及びモルホリン、ピペラジン、リジンからそれぞれ形成されたアミン塩などの低級アルカノールアンモニウム塩および他の薬学的に許容されるアミン塩）などの本発明の化合物をアルカリで形成された塩である。

「溶媒和物」という用語とは、本発明の化合物が溶媒分子と配位して特定の割合で形成した錯体を指す。「水和物」とは、本発明の化合物が水と配位して形成した錯体を指す。

従来技術と比較して、本発明の有益な効果は、本発明の化合物がプロテアソームに対して優れた阻害性を示し、重水素化という技術により、生体における化合物の代謝を変化させ、化合物がより良好な薬物動態パラメータ特性を持たせる。この場合、投与量を変更し、長時間作用型製剤として、適用性を改善することができる。重水素による化合物中の水素原子の置換では、重水素の同位体効果によって、動物の体内における化合物の薬物濃度を増加させ、薬物の有効性を向上させることができる。また、重水素による化合物中の水素原子の置換では、特定の代謝生成物が阻害されることにより、化合物の安全性を増加させることができる。

以下、本発明の式（Ｉ）で表される構造の化合物の調製方法をさらに具体的に説明するが、これらの具体的な方法は本発明を限定するものではない。また、本発明の化合物は、本明細書に記載された、又は本分野で公知された様々な合成方法を組み合わせることによって容易に調製することができ、そのような組み合わせは、当業者にとって明らかである。

実施例１ （Ｒ）−（１−（２−（２，５−ジクロロベンズアミド）−２，２−ｄ２−アセトアミド）−３−メチルブチル）ボロン酸（化合物Ｉ−１）の調製

具体的な合成工程は次の通りである。

工程１：２，２−ｄ２−グリシン（化合物３）の合成。
フラスコにグリシン（２００ｍｇ，２．６６ｍｍｏｌ）とサリチルアルデヒド（０．０４ｍＬ，０．３７６ｍｍｏｌ）を加え、１０ｍＬの重水素化酢酸を添加して溶解させ、窒素ガス保護下で１００℃に加熱し、攪拌して２時間反応させ、室温まで冷却し、濃縮して酢酸を除去した後、２ｍＬの重水を加え、室温下で１５分間攪拌し、さらに少量の水を加えて希釈させ、活性炭を加えて０．５時間脱色し、ろ過して、濾液を濃縮乾固させた。少量のメタノールを添加し、攪拌して白色固体を析出させ、ろ過して、真空下で乾燥させた後、收率８８％で生成物１７６．７ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝７８．１（Ｍ＋１）^＋。

工程２：２，５−［（ジクロロベンゾイル）アミノ］−ｄ２−酢酸（化合物５）の合成。
フラスコに化合物３（１３１ｍｇ，１．７ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウム（２１２．５ｍｇ，５．３１ｍｍｏｌ）を加え、２ｍＬの水で溶解させ、氷浴中で２，５−ジクロロベンゾイルクロリド（１７６．７ｍｇ，０．８５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液１ｍＬを滴下した後、攪拌して１時間反応させた。ＴＬＣで反応の完了を検出した後、希塩酸でＰＨを酸性に調整し、白色固体を析出させ、ろ過し、氷水で洗浄させ、真空下で乾燥させた後、收率９４．５％で生成物２００ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝２５０．３（Ｍ＋１）^＋。

工程３：２−メチルプロピルボロン酸−（＋）−ピナンジオールエステル（化合物８）の合成。
フラスコにイソブチルボロン酸（５１０．５ｍｇ，５ｍｍｏｌ）と（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｓ）−（＋）−２，３−ピナンジオール（８５０．６５ｍｇ，５ｍｍｏｌ）を加え、５ｍＬのｎ-ヘプタンで溶解させ、室温下で攪拌して２時間反応させ、ＴＣＬで反応の完了を検出した後、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後、ろ過、濃縮して、真空下で乾燥させ、收率９３．１４％で生成物１．１ｇを得た。

工程４：（Ｓ）−１−クロロ−３−メチルブチルボロン酸−（＋）−ピナンジオールエステル（化合物９）の合成。
フラスコに化合物８（１．１ｇ，４．６６ｍｍｏｌ）を加え、６．５ｍＬの無水テトラヒドロフランと１．５４ｍＬの無水ジクロロメタンで溶解させ、窒素ガス保護下で−７８℃に冷却し、２Ｍのリチウムジイソプロピルアミド溶液（ＬＤＡ，４．６６ｍＬ，９．３２ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、攪拌して２時間反応させた。さらに、１Ｍの塩化亜鉛のテトラヒドロフラン溶液（８．１６ｍＬ，８．１６ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、低温で２時間反応させ、ＴＬＣで反応の完了を検出した後、少量の１０％希硫酸を添加して反応をクエンチし、有機相を分離し、水相をｎ−ヘキサンで抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、真空下で乾燥させ、收率９８．９％で生成物１．３１ｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝２８５．５（Ｍ＋１）^＋。

工程５：（Ｒ）−１−（ヘキサメチルジシラニル）アミノ−３−メチルブチルボロン酸ピナンジオールエステル（化合物１０）の合成。
フラスコに化合物９（１．３５ｇ，４．７５ｍｍｏｌ）を加え、１０ｍＬの無水テトラヒドロフランを加えて溶解させ、窒素ガス保護下で−４０℃に冷却し、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬｉＨＭＤＳ，５．７ｍＬ，５．７ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、攪拌して１時間反応させ、さらに室温まで昇温し、１時間反応させ、ＴＬＣで反応の完了を検出した後、シリカゲルのプラグを通してろ過し、濾液を蒸発乾固させて收率９７．７％で生成物１．９ｇを得た。そのまま次の工程に用いた。

工程６：Ｌ−ロイシンボロン酸−（＋）−ピナンジオールエステルトリフルオロ酢酸塩（化合物１１）の合成。
干燥したフラスコに、化合物１０（１．７ｇ，４．１５ｍｍｏｌ）を加え、６ｍＬのジイソプロピルエーテルを添加して溶解させ、窒素ガス保護下で−１５℃に冷却し、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ，１．８９ｇ，１６．６ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、温度を維持して２時間反応させた後、室温まで昇温し、一晩反応させた。ろ過してろ過ケーキをジイソプロピルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させ、收率３９．５％で白色固体６２０ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝２６６．２（Ｍ＋１）^＋。

工程７：２，５−ジクロロ−Ｎ−［２−（｛（１Ｒ）−３−メチル−１−［（３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−３ａ，５，５−トリメチルヘキサヒドロ−４，６−メチレン−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−イル］ブチル｝アミノ）−２−オキサ−１，１−ｄ２−エチル］ベンズアミド（化合物１２）の合成。
フラスコに、化合物５（１００ｍｇ，０．４０２ｍｍｏｌ）および化合物１１（１５２．３ｍｇ，０．４０２ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下でＯ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ，１４２ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ）を加え、２ｍｌの無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を添加して溶解させ、氷浴中でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ，１５６ｍｇ，１．２１ｍｍｏｌ）を滴下した後、室温まで昇温し、攪拌して１時間反応させた。ＴＬＣで反応の完了を検出した後、少量の水を加えて希釈し、酢酸エチルで３〜４回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して收率９８．２％で生成物１９６ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝４９７．５（Ｍ＋１）^＋。

工程８：（Ｒ）−（１−（２−（２，５−ジクロロベンズアミド）−２，２−ｄ２−アセトアミド）−３−メチルブチル）ボロン酸（化合物Ｉ−１）の合成。
フラスコに、化合物１２（１９６ｍｇ，０．３９５ｍｍｏｌ）とイソブチルボロン酸（１０４．８ｍｇ，１．０３ｍｍｏｌ）を加え、２ｍＬのメタノールと２ｍＬのｎ-ヘキサンを添加して溶解させ、１Ｎの塩酸（０．５ｍＬ，０．５ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下で室温で攪拌して一晩反応させ、ＴＬＣで反応の完了を検出した後、メタノール層を分離し、ｎ-ヘプタンで３回洗浄し、減圧下で濃縮乾固させ、少量の２Ｎの水酸化ナトリウムを加えて溶解させ、ジクロロメタンで３回洗浄し、水相を濃塩酸でＰＨ２〜３に調整し、さらにジクロロメタンで３〜４回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、乾燥させ、秤量して收率５９．４％で８５ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３４５．２（Ｍ＋１−Ｈ_２Ｏ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ｍＨｚ，ＤＭＳＯ）δ８．９３（ｓ，１Ｈ），８．７１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，２Ｈ），２．６４（ｓ，１Ｈ），１．６１（ｄｄ，Ｊ＝１３．３，６．５Ｈｚ，１Ｈ），１．４０-１．３２（ｍ，１Ｈ），１．２６（ｓ，１Ｈ），０．８５-０．８０（ｍ，６Ｈ）。

実施例２ （Ｒ）−（１−（２−（２，５−ジクロロベンズアミド）アセトアミド）−１−ｄ−３−メチルブチル）ボロン酸（化合物Ｉ−２）の調製

具体的な合成工程は次の通りである。

工程１：２，５−［（ジクロロベンゾイル）アミノ］酢酸（化合物１３）の合成。
フラスコに、グリシン（１．１２５ｇ，１５ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウム（７５０ｍｇ，１８．７５ｍｍｏｌ）を加え、７．５ｍＬの水を添加して溶解させ、氷浴中で２，５−ジクロロベンゾイルクロリド（６２３．７ｍｇ，３．０ｍｍｏｌ）の１ｍＬのテトラヒドロフラン溶液を滴下した後、攪拌して１時間反応させた。ＴＬＣで反応の完了を検出した後、希塩酸でＰＨを酸性に調整し、白色固体を析出させ、ろ過して、氷水で洗浄し、真空下で乾燥させ、收率９１．１％で生成物６７５ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝２４８．３（Ｍ＋１）^＋。

工程２：（Ｓ）−１−クロロ−１−ｄ−３−メチルブチルボロン酸−（＋）−ピナンジオールエステル（化合物１４）の合成。
フラスコに、化合物８（１．１ｇ，４．６６ｍｍｏｌ）を加え、６．５ｍＬの無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）と１．５４ｍＬの重水素化ジクロロメタンを添加して溶解させ、窒素ガス保護下で−７８℃に冷却し、２ＭのＬＤＡ溶液（４．６６ｍＬ，９．３２ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、攪拌して２時間反応させた。さらに、１Ｍの塩化亜鉛のテトラヒドロフラン溶液（８．１６ｍＬ，８．１６ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、低温を維持して２時間反応させ、ＴＬＣで反応の完了を検出した後、少量の１０％希硫酸を添加して反応をクエンチし、有機相を分離し、水相をｎ−ヘキサンで抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、真空下で乾燥させ、收率９７．０％で生成物１．２９ｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝２８６．２（Ｍ＋１）^＋。

工程３：（Ｒ）−１−（ヘキサメチルジシラニル）アミノ−１−ｄ−３−メチルブチルボロン酸ピナンジオールエステル（化合物１５）の合成。
フラスコに、化合物１４（１．２９ｇ，４．５２ｍｍｏｌ）を加え、９ｍＬの無水テトラヒドロフランを添加して溶解させ、窒素ガス保護下で−４０℃に冷却し、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（５．４ｍＬ，５．４ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、攪拌して１時間反応させ、さらに室温まで昇温し、１時間反応させ、ＴＬＣで反応の完了を検出した後、シリカゲルのプラグを通してろ過し、濾液を蒸発乾固させて、收率８６．３％で生成物１．６ｇを得た。そのまま次の工程に用いた。

工程４：１−ｄ−Ｌ−ロイシンボロン酸−（＋）−ピナンジオールエステルトリフルオロ酢酸塩（化合物１６）の合成。
干燥したフラスコに、化合物１５（１．６ｇ，３．８ｍｍｏｌ）を加え、６ｍＬのジイソプロピルエーテルを添加して溶解させ、窒素ガス保護下で−１５℃に冷却し、トリフルオロ酢酸（１．７５ｇ，１５．４ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、温度を維持して２時間反応させ、その後、室温まで昇温し、一晩反応させた。ろ過して、ろ過ケーキをジイソプロピルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させ、收率３８．９％で白色固体５６１ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝２６７．７（Ｍ＋１）^＋。

工程５：２，５−ジクロロ−Ｎ−［２−（｛（１Ｒ）−３−メチル−１−［（３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−３ａ，５，５−トリメチルヘキサヒドロ−４，６−メチレン−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−イル］−１−ｄ−ブチル｝アミノ）−２−オキサエチル］ベンズアミド（化合物１７）の合成。
フラスコに、化合物１６（１００ｍｇ，０．４０５ｍｍｏｌ）と化合物１３（１５４ｍｇ，０．４０５ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下でＴＢＴＵ（１４３ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）を加え、２ｍＬの無水ＤＭＦを添加して溶解させ、氷浴中でＤＩＰＥＡ（１５７ｍｇ，１．２１ｍｍｏｌ）を滴下した後、室温まで昇温し、攪拌して１時間反応させた。ＴＬＣで反応の完了を検出した後、。少量の水を加えて希釈し、酢酸エチルで３〜４回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して收率７３．８％で生成物１４８ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝４９６．５（Ｍ＋１）^＋。

工程６：（Ｒ）−（１−（２−（２，５−ジクロロベンズアミド）アセトアミド）−１−ｄ−３−メチルブチル）ボロン酸（化合物Ｉ−２）の合成。
フラスコに、化合物１７（１４８ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）をイソブチルボロン酸（７９．６３ｍｇ，０．７８ｍｍｏｌ）を加え、２ｍＬのメタノールと２ｍＬのｎ-ヘキサンを添加して溶解させ、１Ｎの塩酸（０．４ｍＬ，０．４ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下で室温で攪拌して一晩反応させ、ＴＬＣで反応の完了を検出した後、メタノール層を分離し、ｎ-ヘプタンで３回洗浄し、減圧下で濃縮乾固させ、少量の２Ｎの水酸化ナトリウムを加えて溶解させ、ジクロロメタンで３回洗浄し、水相を濃塩酸でＰＨ２〜３に調整し、さらにジクロロメタンで３〜４回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、乾燥させ、秤量して收率５６．３％で６１ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３４４．３（Ｍ＋１−Ｈ_２Ｏ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ｍＨｚ，ＤＭＳＯ）δ８．９４（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，２Ｈ），４．０２（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｄｔ，Ｊ＝１３．３，６．７Ｈｚ，１Ｈ），１．３５（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，６．７Ｈｚ，１Ｈ），１．２５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），０．８６-０．７９（ｍ，６Ｈ）。

実施例３ （Ｒ）−（１−（２−（２，５−ジクロロベンズアミド）アセトアミド）−２，２−ｄ２−３−メチルブチル）ボロン酸（化合物Ｉ−３）の調製

具体的な合成工程は次の通りである。

工程１：１，１−ｄ２−２−メチルプロパノール（化合物１９）の合成。
イソ酪酸エチル（５８０．８ｍｇ，５ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解し、氷浴中でＬｉＡｌＤ_４（２３０．９ｍｇ，５．５ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、室温まで昇温し、一晩反応させ、ＴＬＣで反応の完了を検出した後、氷浴中で硫酸ナトリウム・十水和物を加えて反応をクエンチし、ろ過で不溶物を除去し、濾液を濃縮して收率６４．７３％で生成物２４６ｍｇを得た。そのまま次の工程に用いた。

工程２：１，１−ｄ２−ブロモイソブタン（化合物２０）の合成。
化合物１９（８５０ｍｇ，１１．１７ｍｍｏｌ）と四臭化炭素（３．７ｇ，１１．１７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解し、氷浴中でトリフェニルホスフィン（ＰＰｈ_３，２．９３ｇ，１１．１７ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、窒素ガス保護下、低温で攪拌して１時間反応させ、さらに室温まで昇温し、１時間反応させた。ＴＬＣで反応の完了を検出した後、少量の水を加えて反応をクエンチし、水相をジクロロメタンで３回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、濃縮した後、カラムクロマトグラフィーで精製して收率５６．２％で生成物８６５ｍｇを得た。

工程３：１，１−ｄ２−イソブチルボロン酸（化合物２１）の合成。
化合物２０（１２０ｍｇ，０．８７ｍｍｏｌ）を５ｍＬの無水ＴＨＦに溶解し、窒素ガス保護下で削り状のマグネシウム（１０４．３ｍｇ，４．３５ｍｍｏｌ）と触媒量のヨウ素（１粒）を加え、５０℃に加熱し、攪拌して３時間反応させた。室温まで冷却した後、グリニャール試薬をシリンジで取り出し、−１５℃でホウ酸トリメチル（１８０．８ｍｇ，１．７４ｍｍｏｌ）の５ｍＬ無水ＴＨＦにゆっくり滴下し、窒素ガス保護下で攪拌して１時間反応させた。ＴＬＣで反応の完了を検出した後、室温まで昇温し、希塩酸を加えてＰＨを２〜３に調整し、１５分間攪拌し、有機相を分離し、水相を酢酸エチルで３回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、濃縮した後、カラムクロマトグラフィーで精製して收率７０．７％で生成物６４ｍｇを得た。

工程４：１，１−ｄ２−２−メチルプロピルボロン酸−（＋）−ピナンジオールエステル（化合物２２）の合成。
フラスコに、化合物２１（１１０ｍｇ，１．０６ｍｍｏｌ）および（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｓ）−（＋）−２，３−ピナンジオール（１７９．８ｍｇ，１．０６ｍｍｏｌ）を加え、３ｍＬのｎ-ヘプタンを添加して溶解させ、室温下で攪拌して２時間反応させ、ＴＣＬで反応の完了を検出した後、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過、濃縮して、真空下で乾燥させて收率９４．２％で生成物２３８ｍｇを得た。

工程５：（Ｓ）−１−クロロ−２，２−ｄ２−３−メチルブチルボロン酸−（＋）−ピナンジオールエステル（化合物２３）の合成。
フラスコに化合物２２（２３８ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）を加え、２ｍＬの無水テトラヒドロフランと０．５ｍＬの無水ジクロロメタンを添加して溶解させ、窒素ガス保護下で−７８℃に冷却し、２ＭのＬＤＡ溶液（１．０ｍＬ，２．０ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、攪拌して２時間反応させた。さらに、１Ｍの塩化亜鉛のテトラヒドロフラン溶液（１．７５ｍＬ，１．７５ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、低温を維持して２時間反応させ、ＴＬＣで反応の完了を検出した後、少量の１０％希硫酸を添加して反応をクエンチし、有機相を分離し、水相をｎ−ヘキサンで抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、真空下で乾燥させて收率９２．６％で生成物２６５ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝２８７．７（Ｍ＋１）^＋。

工程６：（Ｒ）−１−（ヘキサメチルジシラニル）アミノ−２，２−ｄ２−３−メチルブチルボロン酸ピナンジオールエステル（化合物２４）の合成。
フラスコに化合物２３（２６５ｍｇ，０．９３ｍｍｏｌ）を加え、３ｍＬの無水テトラヒドロフランを添加して溶解させ、窒素ガス保護下で−４０℃に冷却し、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１．１１ｍＬ，１．１１ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、攪拌して１時間反応させ、さらに室温まで昇温し、１時間反応させ、ＴＬＣで反応の完了を検出した後、シリカゲルのプラグを通してろ過し、濾液を蒸発乾固させて收率１００％で生成物３８２．５ｍｇを得た。そのまま次の工程に用いた。

工程７：Ｌ−ｄ２−ロイシンボロン酸−（＋）−ピナンジオールエステルトリフルオロ酢酸塩（化合物２５）の合成。
干燥したフラスコに化合物２４（３８２．５ｍｇ，０．９３ｍｍｏｌ）を加え、３ｍＬのジイソプロピルエーテルを添加して溶解させ、窒素ガス保護下で−１５℃に冷却し、トリフルオロ酢酸（４２４．１ｍｇ，３．７２ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、温度を維持して２時間反応させた後、室温まで昇温し、一晩反応させた。ろ過して、ろ過ケーキをジイソプロピルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて收率５７．１％で白色固体２０２ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝２６８．２（Ｍ＋１）^＋。

工程８：２，５−ジクロロ−Ｎ−［２−（｛（１Ｒ）−２，２−ｄ２−３−メチル−１−［（３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−３ａ，５，５−トリメチルヘキサヒドロ−４，６−メチレン−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−イル］ブチル｝アミノ）−２−オキサエチル］ベンズアミド（化合物２６）の合成。
フラスコに、化合物１３（１００ｍｇ，０．４０２ｍｍｏｌ）および化合物２５（１５２．４ｍｇ，０．４０２ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下でＴＢＴＵ（１４２ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ）を加え、２ｍＬの無水ＤＭＦを添加して溶解させ、氷浴中でＤＩＰＥＡ（１５６ｍｇ，１．２１ｍｍｏｌ）を滴下した後、室温まで昇温し、攪拌して１時間反応させた。ＴＬＣで反応の完了を検出した後、少量の水を加えて希釈し、酢酸エチルで３〜４回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して收率９１．９％で生成物１８３ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝４９７．４（Ｍ＋１）^＋。

工程９：（Ｒ）−（１−（２−（２，５−ジクロロベンズアミド）アセトアミド）−２，２−ｄ２−３−メチルブチル）ボロン酸（化合物Ｉ−３）の合成。
フラスコに、化合物２６（１８３ｍｇ，０．３６９ｍｍｏｌ）およびイソブチルボロン酸（９７．９ｍｇ，０．９６ｍｍｏｌ）を加え、２ｍＬのメタノールと２ｍＬのｎ-ヘキサンを添加して溶解させ、１Ｎの塩酸（０．５ｍＬ，０．５ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下で室温で攪拌して一晩反応させ、ＴＬＣで反応の完了を検出した後、メタノール層を分離し、ｎ-ヘプタンで３回洗浄し、減圧下で濃縮乾固させ、少量の２Ｎの水酸化ナトリウムを加えて溶解させ、ジクロロメタンで３回洗浄し、水相を濃塩酸でＰＨ２〜３に調整し、さらにジクロロメタンで３〜４回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、乾燥させ、秤量して收率５６．４％で７５ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３４５．２（Ｍ＋１−Ｈ_２Ｏ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ｍＨｚ，ＤＭＳＯ）δ８．９４（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，２Ｈ），４．０２（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），２．６４（ｓ，１Ｈ），１．２６（ｍ，１Ｈ），０．８６-０．７９（ｍ，６Ｈ）。

実施例４ （Ｒ）−（１−（２−（２，５−ジクロロベンズアミド）−２，２−ｄ２−アセトアミド）−１−ｄ−３−メチルブチル）ボロン酸（化合物Ｉ−４）の調製

具体的な合成工程は次の通りである。

工程１：２，５−ジクロロ−Ｎ−［２−（｛（１Ｒ）−３−メチル−１−［（３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−３ａ，５，５−トリメチルヘキサヒドロ−４，６−メチレン−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−イル］−１−ｄ１−ブチル｝アミノ）−２−オキサ−１，１−ｄ２−エチル］ベンズアミド（化合物２７）の合成。
フラスコに、化合物５（１００ｍｇ，０．４０２ｍｍｏｌ）および化合物１６（１５４ｍｇ，０．４０２ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下でＴＢＴＵ（１４２ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ）を加え、２ｍＬの無水ＤＭＦを添加して溶解させ、氷浴中でＤＩＰＥＡ（１５６ｍｇ，１．２１ｍｍｏｌ）を滴下した後、室温まで昇温し、攪拌して１時間反応させた。ＴＬＣで反応の完了を検出した後、少量の水を加えて希釈し、酢酸エチルで３〜４回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して收率９９％で生成物１９９ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝４９８．２（Ｍ＋１）^＋。

工程２：（Ｒ）−（１−（２−（２，５−ジクロロベンズアミド）−２，２−ｄ２−アセトアミド）−１−ｄ−３−メチルブチル）ボロン酸（化合物Ｉ−４）の合成。
フラスコに、化合物２７（２０３ｍｇ，０．４０８ｍｍｏｌ）およびイソブチルボロン酸（１０８．４ｍｇ，１．０６ｍｍｏｌ）を加え、２ｍＬのメタノールと２ｍＬのｎ-ヘキサンを添加して溶解させ、１Ｎの塩酸（０．５ｍＬ，０．５ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下で室温で攪拌して一晩反応させ、ＴＬＣで反応の完了を検出した後、メタノール層を分離し、ｎ-ヘプタンで３回洗浄し、減圧下で濃縮乾固させ、少量の２Ｎの水酸化ナトリウムを加えて溶解させ、ジクロロメタンで３回洗浄し、水相を濃塩酸でＰＨ２〜３に調整し、さらにジクロロメタンで３〜４回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、乾燥させ、秤量して收率６４．８％で９６ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３４６．４（Ｍ＋１−Ｈ_２Ｏ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ｍＨｚ，ＤＭＳＯ）δ８．９３（ｓ，１Ｈ），８．７１（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６１（ｄｄ，Ｊ＝１３．３，６．６Ｈｚ，１Ｈ），１．３５（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，７．０Ｈｚ，１Ｈ），１．２５（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），０．８３（ｄｄ，Ｊ＝６．５，１．９Ｈｚ，６Ｈ）。

実施例５ （Ｒ）−（１−（２−（２，５−ジクロロベンズアミド）アセトアミド）−１−ｄ−２，２−ｄ２−３−メチルブチル）ボロン酸（化合物Ｉ−５）の調製

具体的な合成工程は次の通りである。

工程１：（Ｓ）−１−クロロ−１−ｄ１−２，２−ｄ２−３−メチルブチルボロン酸−（＋）−ピナンジオールエステル（化合物２８）の合成。
フラスコに、化合物２２（２３８ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）を加え、２ｍＬの無水テトラヒドロフランと０．５ｍＬの重水素化ジクロロメタンを添加して溶解させ、窒素ガス保護下で−７８℃に冷却し、２ＭのＬＤＡ溶液（１．０ｍＬ，２．０ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、攪拌して２時間反応させた。さらに、１Ｍの塩化亜鉛のテトラヒドロフラン溶液（１．７５ｍＬ，１．７５ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、低温を維持して２時間反応させ、ＴＬＣで反応の完了を検出した後、少量の１０％希硫酸を添加して反応をクエンチし、有機相を分離し、水相をｎ−ヘキサンで抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、真空下で乾燥させて收率６９．７％で生成物２００ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝２８８．１（Ｍ＋１）^＋。

工程２：（Ｒ）−１−（ヘキサメチルジシラニル）アミノ−１−ｄ１−２，２−ｄ２−３−メチルブチルボロン酸ピナンジオールエステル（化合物２９）の合成。
フラスコに、化合物２８（２００ｍｇ，０．７０ｍｍｏｌ）を加え、３ｍＬの無水テトラヒドロフランを添加して溶解させ、窒素ガス保護下で−４０℃に冷却し、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（０．８４ｍＬ，０．８４ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、攪拌して１時間反応させ、さらに室温まで昇温し、１時間反応させ、ＴＬＣで反応の完了を検出した後、シリカゲルのプラグを通してろ過し、濾液を蒸発乾固させて收率１００％で生成物２８８．６ｍｇを得た。そのまま次の工程に用いた。

工程３：Ｌ−ｄ３−ロイシンボロン酸−（＋）−ピナンジオールエステルトリフルオロ酢酸塩（化合物３０）の合成。
干燥したフラスコに化合物２９（２８８．６ｍｇ，０．７ｍｍｏｌ）を加え、３ｍＬのジイソプロピルエーテルを添加して溶解させ、窒素ガス保護下で−１５℃に冷却し、トリフルオロ酢酸（３１９．２ｍｇ，２．８ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、温度を維持して２時間反応させた後、室温まで昇温し、一晩反応させた。ろ過して、ろ過ケーキをジイソプロピルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて收率３５．６％で白色固体９５ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝２６９．３（Ｍ＋１）^＋。

工程４：２，５−ジクロロ−Ｎ−［２−（｛（１Ｒ）−１−ｄ１−２，２−ｄ２−３−メチル−１−［（３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−３ａ，５，５−トリメチルヘキサヒドロ−４，６−メチレン−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−イル］ブチル｝アミノ）−２−オキサエチル］ベンズアミド（化合物３１）の合成。
フラスコに、化合物１３（５６ｍｇ，０．２２６ｍｍｏｌ）および化合物３０（８６．４ｍｇ，０．２２６ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下でＴＢＴＵ（８０ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）を加え、２ｍＬの無水ＤＭＦを添加して溶解させ、氷浴中でＤＩＰＥＡ（８７．６ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ）を滴下した後、室温まで昇温し、攪拌して１時間反応させた。ＴＬＣで反応の完了を検出した後、少量の水を加えて希釈し、酢酸エチルで３〜４回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して收率７８．６％で生成物８８ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝４９８．４（Ｍ＋１）^＋。

工程５：（Ｒ）−（１−（２−（２，５−ジクロロベンズアミド）アセトアミド）−１−ｄ−２，２−ｄ２−３−メチルブチル）ボロン酸（化合物Ｉ−５）の合成。
フラスコに、化合物３１（８８ｍｇ，０．１７７ｍｍｏｌ）およびイソブチルボロン酸（４７ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）を加え、１ｍＬのメタノールと１ｍＬのｎ-ヘキサンを添加して溶解させ、１Ｎの塩酸（０．３ｍｌ，０．３ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス保護下、室温で攪拌して一晩反応させ、ＴＬＣで反応の完了を検出した後、メタノール層を分離し、ｎ-ヘプタンで３回洗浄し、減圧下で濃縮乾固させ、少量の２Ｎの水酸化ナトリウムを加えて溶解させ、ジクロロメタンで３回洗浄し、水相を濃塩酸でＰＨ２〜３に調整し、さらにジクロロメタンで３〜４回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、乾燥させ、秤量して收率５０．１％で３２ｍｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３４６．４（Ｍ＋１−Ｈ_２Ｏ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ｍＨｚ，ＤＭＳＯ）δ８．９４（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，２Ｈ），４．０２（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），１．２６（ｍ，１Ｈ），０．８６-０．７９（ｍ，６Ｈ）。

実施例６：生物活性実験
（１）２０Ｓプロテアソームアッセイ
３８４ウェルの黒色マイクロタイタープレートにおいて、ＤＭＳＯに溶解した１μＬの試験化合物に、ヒトＰＡ２８アクチベーター（Ｂｏｓｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ、最終濃度１２ｎｍ）およびＡｃ−ＷＬＡ−ＡＭＣ（β５選択性基質）（最終濃度１５μｍ）を含むアッセイ緩衝液２５μＬを３７℃で添加し、さらにヒト２０Ｓプロテアソーム（Ｂｏｓｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ、最終濃度０．２５ｎｍ）を含むアッセイ緩衝液２５μＬを３７℃で添加した。アッセイ緩衝液は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．５ｍＭのＥＤＴＡおよび０．０１％のＢＳＡからなり、ｐＨの値は７．４であった。ＢＭＧ Ｇａｌａｘｙプレートリーダー（３７℃、３８０ｎｍ励起、４６０ｎｍ発光、２０ゲイン）を用いて反応を追跡した。０％阻害（ＤＭＳＯ）および１００％阻害（１０μＭのボルテゾミブ）対照群に基づいて阻害パーセントを算出した。
上記の測定法により本発明の化合物のプロテアソーム阻害作用を測定したところ、本発明の化合物がプロテアソームに対する阻害活性を示すことが観察された。本発明の化合物のプロテアソームに対する阻害活性のＩＣ_５０値は５０ｎｍ未満である。

（２）代謝安定性評価
ミクロソーム実験：ヒト肝臓ミクロソーム：０．５ｍｇ／ｍＬ，Ｘｅｎｏｔｅｃｈ；ラット肝臓ミクロソーム：０．５ｍｇ／ｍＬ，Ｘｅｎｏｔｅｃｈ；補酵素（ＮＡＤＰＨ／ＮＡＤＨ）：１ｍＭ，Ｓｉｇｍａ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ；塩化マグネシウム：５ｍＭ、１００ｍＭのリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．４）。
ストック溶液の調製：一定量の実施例化合物の粉末を精確に秤量し、それぞれＤＭＳＯで５ｍＭに溶解した。
リン酸塩緩衝液（１００ｍＭ，ｐＨ７．４）の調製：予め０．５Ｍのリン酸二水素カリウム１５０ｍＬと０．５Ｍのリン酸水素二カリウム溶液７００ｍＬとを混合し、更に０．５Ｍのリン酸水素二カリウム溶液で混合液のｐＨを７．４に調整し、使用前に超純水で５倍に希釈し、塩化マグネシウムを加えて、１００ｍＭのリン酸カリウム、３．３ｍＭの塩化マグネシウムを含む、ｐＨが７．４であるリン酸塩緩衝液（１００ｍＭ）を得た。
ＮＡＤＰＨ再生系溶液（６．５ｍＭのＮＡＤＰ、１６．５ｍＭのＧ−６−Ｐ、３Ｕ／ｍＬのＧ−６−Ｐ Ｄ、３．３ｍＭの塩化マグネシウムを含む）を調製し、使用前に湿った氷上に置いた。

停止液の調製：５０ｎｇ／ｍＬの塩酸プロプラノロールと２００ｎｇ／ｍＬのトルブタミド（内部標準）を含むアセトニトリル溶液である。２５０５７．５μＬのリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．４）を５０ｍＬ遠心管に入れ、ヒト肝臓ミクロソーム８１２．５μＬをそれぞれ添加し、均一に混合して、タンパク質濃度が０．６２５ｍｇ／ｍＬである肝臓ミクロソーム希釈液を得た。２５０５７．５μＬのリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．４）を５０ｍＬ遠心管に入れ、ＳＤラット肝臓ミクロソーム８１２．５μＬをそれぞれ添加し、均一に混合して、タンパク質濃度が０．６２５ｍｇ／ｍＬの肝臓ミクロソーム希釈液を得た。
サンプルのインキュベーション：対応する化合物のストック溶液を、７０％アセトニトリルを含む水溶液でそれぞれ０．２５ｍＭに希釈し、作業溶液として使用した。３９８μＬのヒト肝臓ミクロソーム或いはラット肝臓ミクロソームの希釈液を９６ウェルインキュベーションプレート（Ｎ＝２）にそれぞれ加え、０．２５ｍＭの作業溶液２μＬにそれぞれ添加して均一に混合した。

代謝安定性アッセイ：予め冷却した停止液３００μＬを９６ウェルディープウェルプレートの各ウェルに添加し、氷上に置いて停止プレートとした。９６ウェルインキュベーションプレートおよびＮＡＤＰＨ再生系を３７℃の水浴に置いて、１００ｒｐｍで振とうし、５分間プレインキュベートした。インキュベーションプレートの各ウェルから８０μＬのインキュベーション溶液を取出し、停止プレートに加え、均一に混合し、ＮＡＤＰＨ再生系溶液２０μＬを補充して０分間サンプルとした。インキュベーションプレートの各ウェルに８０μＬのＮＡＤＰＨ再生系溶液を更に添加し、反応を開始し、時間を計り始めた。対応する化合物の反応濃度は１μＭで、タンパク濃度は０．５ｍｇ／ｍＬである。反応の１０分間、３０分間、９０分間に、それぞれ１００μＬの反応液を採取し、停止プレートに加え、３分間ボルテックス操作を行い、反応を停止させた。５０００×ｇ、４℃の条件下で停止プレートを１０分間遠心分離した。予め１００μＬの蒸留水を入れた９６ウェルプレートに、１００μＬの上清を加え、均一に混合し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いてサンプルを分析した。
データ分析：ＬＣ−ＭＳ／ＭＳシステムによって対応する化合物および内部標準のピーク面積を検出し、化合物と内部標準のピーク面積の比を計算した。時間に対する化合物残存量の百分率の自然対数をプロットすることによって、傾きを測定して、以下の式に従ってｔ_1／２及びＣＬ_ｉｎｔを計算した。ここで、Ｖ／Ｍは１／タンパク濃度に等しい。

本発明の化合物と重水素化されていない化合物を同時に試験して比較し、ヒトとラット肝臓ミクロソームの代謝安定性を評価した。代謝安定性の指標である半減期と肝臓内因性クリアランスを表に示す。表では、重水素化されていない化合物Ｉｘａｚｏｍｉｂを対照品とした。表に示されるように、ヒトとラット肝臓ミクロソームの実験において、Ｉｘａｚｏｍｉｂと比べて、本発明の化合物は代謝安定性を有意に改善することができる。

（３）ラットの薬物動態実験
実験目的：ラットにＩｘａｚｏｍｉｂ、実施例の化合物を投与した後、本発明の化合物の薬物動態学的挙動を研究する。
実験動物：
種および系：ＳＤ ラットの等級：ＳＰＦ級
性別および数量：オス、６匹
重量範囲：１８０〜２２０ｇ（実際の重量範囲は１８７〜１９７ｇ）
供給：Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｉｐｐｒ−ＢＫ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ． Ｌｔｄ
実験室および動物の証明書番号：ＳＣＸＫ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）２０１３−００１６

実験プロセス：
血液サンプルを採取する前に、２Ｍのフッ化ナトリウム溶液（エステラーゼ阻害剤）２０μＬをＥＤＴＡ−Ｋ２抗凝固剤チューブに予め添加し、８０℃のオーブンで乾燥させた後、４度の冷蔵庫に保管した。
ラット（オス、体重１８７〜１９７ｇ）をランダムに２グループに分け、実験の１日前の午後から一晩絶食させたが、水を自由に飲ませ、薬物を投与した後、４時間に食物を与えた。ＡグループにはＩｘａｚｏｍｉｂ ３ｍｇ／ｋｇ、Ｂグループには実施例の化合物３ｍｇ／ｋｇを投与した後、１５分間、３０分間、１時間、２時間、３時間、５時間、８時間および１０時間後にそれぞれラット眼窩静脈から１００〜２００μＬ程度採血し、ＥＤＴＡ−Ｋ２で抗凝固化した０．５ｍＬのエッペンドルフチューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｔｕｂｅ）に入れ、直ちに均一に混合し、抗凝固化した後、できるだけ早くチューブを穏やかに５〜６回反転させて均一に混合した。その後、採血した後、アイスボックスに置き、血液サンプルを３０分間内に４０００ｒｐｍ、１０分間、４℃の条件で遠心分離し、すべての血漿を回収して直ちに−２０℃で保存した。全ての時点のサンプルを採取した後に、各時点における薬物の血中濃度を測定した。

上記により得られた投与後の平均血中濃度−時間データに基づいて、Ｗｉｎｎｏｎｉｎソフトウェアを使用して、非コンパートメント統計モーメント理論に従って、オスのＳＤラットにｉ．ｇでＩｘａｚｏｍｉｂ（３ｍｇ／ｋｇ）および実施例の化合物（３ｍｇ／ｋｇ）をそれぞれ投与した後の薬物動態関連パラメータを算出した。

実験結果から、Ｉｘａｚｏｍｉｂと比較して、本発明の化合物は、優れた薬物動態学的性質を有することから、プロテアソームを阻害する化合物としてより好適であり、さらにプロテアソームに介された疾患を治療する医薬の調製に適していることが示された。

これらの実施例は本発明を説明するためのものに過ぎず、本発明の範囲を限定するものではないことを理解すべきである。実施例における具体的な条件を記載していない実験方法は、通常、慣用の条件または製造業者の推奨条件に従う。特に説明のない限り、部および百分率は重量部および重量百分率である。

上記の内容は、特定の好ましい実施形態を参照して本発明に対するさらなる詳細な説明であるが、本発明の実施形態がこれらの記載に限定されない。当業者にとって明らかであるように、本発明の精神から逸脱することなく様々な変更や修正を加えることができることは、すべてが本発明の保護範囲内にあるとみなされるべきである。

Claims (10)

1. 式（Ｉ）で表される置換ボロン酸化合物、またはその結晶形、薬学的に許容される塩、プロドラッグ、立体異性体、水和物あるいは溶媒和物である、プロテアソーム阻害剤。
   

   

   ただし、
   Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３、Ｒ^１４およびＲ^１５は、それぞれ独立して、水素、重水素、ハロゲンであり、；
   追加の条件は、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３、Ｒ^１４、Ｒ^１５の中の少なくとも１つが重水素、または重水素に置換されたものである。
2. Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、それぞれ独立して、重水素または水素であることを特徴とする、請求項１に記載のプロテアソーム阻害剤。
3. Ｒ^４およびＲ^５は、それぞれ独立して、重水素または水素であることを特徴とする、請求項１に記載のプロテアソーム阻害剤。
4. Ｒ^６は重水素であることを特徴とする、請求項１に記載のプロテアソーム阻害剤。
5. Ｒ^７およびＲ^８は、それぞれ独立して、重水素または水素であることを特徴とする、請求項１に記載のプロテアソーム阻害剤。
6. Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３、Ｒ^１４およびＲ^１５は、それぞれ独立して、重水素または水素であることを特徴とする、請求項１に記載のプロテアソーム阻害剤。
7. 前記化合物は、以下の化合物またはその薬学的に許容される塩からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載のプロテアソーム阻害剤。
   

   
8. 薬学的に許容される担体と、請求項１〜７のいずれかに記載のプロテアソーム阻害剤、またはその結晶形、薬学的に許容できる塩、水和物または溶媒化合物、立体異性体、プロドラッグもしくは同位体異性体とを含む、医薬組成物。
9. プロテアソームに介された疾患を治療する医薬の調製に用いることへの、請求項１〜７のいずれかに記載のプロテアソーム阻害剤の使用。
10. 前記のプロテアソームに介された疾患は癌であることを特徴とする、請求項９に記載の使用。