JP2019520058A - バリアントフラビウイルスエンベロープ配列およびその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
「数十年にわたり、蚊伝播性フラビウイルスであるジカウイルス(ZIKV)によるヒト感染は、軽度の疾患と関連して散発的であり、症状が他の急性発熱疾患と類似していたことから過小報告されていた。ZIKVと関連する重症疾患の近年の報告は、認識を大幅に高めている。コンピテントなアエデス(Aedes)蚊ベクターが発見された場合、ZIKVがアメリカおよび世界規模で蔓延し続けているであろうと予測される。最も一般的な蚊伝播性ヒトフラビウイルスであるデングウイルス(DENV)は、十分に確立されており、近年のZIKV導入の分野では大流行の原因でもある。DENVおよびZIKVは、密接に関連しており、結果として実質的な抗原重複が生じる。抗体依存性増強(ADE)を介して、抗DENV抗体は、特定のクラスの免疫細胞に関してDENVの感染力を増強し得、重症疾患の結果と相関するウイルス産生が増加する。同様に、ZIKVは、他のフラビウイルスにより産生された抗体に反応してADEを受けることが分かっている。著者らは、中和アッセイおよびADEアッセイを使用して、ZIKVに対する、十分に特徴付けられた広範な中和ヒト抗DENVモノクローナル抗体(HMAb)およびヒトDENV免疫血清の中和能力および増強能力を試験した。著者らは、抗DENV HMAbが交差反応し、中和せず、インビトロでZIKV感染を大きく増強することを示す。DENV免疫血清は、ZIKVに対する中和の様々な程度を有し、ZIKV感染を同様に増強した。著者らの結果は、既存のDENV免疫がインビボでZIKV感染を増強する場合があり、疾患の重症度を高めるようになる場合があることを示唆する。ZIKVとDENVとの間の相互作用を理解することは、公衆衛生の対応の報告で重要であり、特にZIKVおよびDENVのワクチン設計および実施戦略にとって有益であろう。」
pCRO25 CKRTLVDRGNGSGCGLNGSGSLVTCAKFA(配列番号7)
pCRO29 CKRTLVDRGWGNGCGNHTKGSLVTCAKFA(配列番号8)
pCRO30 CKRTLVDRGNGSGCGLFGKGSLVTCAKFA(配列番号9)
pCRO31 CKRTLVDRGWGNGCGLNGSGSLVTCAKFA(配列番号10)。
1.天然配列中に存在しないグリコシル化のため用の部位を含むアミノ酸配列を含む、フラビウイルスEタンパク質の類似体
2.グリコシル化部位は、N連結グリカンのためのものである、第1項に記載の類似体
3.グリコシル化部位は、O連結グリカンのためのものである、第1項に記載の類似体
4.その類似体に付着された少なくとも1つの追加のグリカンを有する、第1項に記載の類似体
5.グリカンは、N連結グリカンである、第4項に記載の類似体
6.グリカンは、O連結グリカンである、第4項に記載の類似体
7.組換えDNA配列の発現産物である、第1〜6項の何れか1項に記載の類似体
8.N連結グリコシル化シークオン(Asn−X−Ser/Thr)は、置換されており、それにより、シークオンのAsn(N)残基は、フラビウイルスEタンパク質のアミノ酸配列の下記の残基DRGWGNGCGLFGKの何れかである98〜110位の何れかを占め、Xは、プロリン以外の任意のアミノ酸残基であり、およびSer/Thrは、セリン残基またはトレオニン残基を示す、第2項に記載の類似体
9.N連結グリコシル化シークオン(Asn−X−Ser/Thr)は、置換されており、それにより、シークオンのAsn(N)残基は、98〜101位または106〜110位の何れかを占める、第2項に記載の類似体
10.Xは、下記の13種のアミノ酸残基Asn、Gln、Tyr、Val、Ala、Met、Ile、Lys、Gly、Arg、Thr、HisまたはSerの何れかである、第8項に記載の類似体
11.置換シークオンは、NTTであり、T(Thr)は、シークオンの「X」位で明示的に置換されており、およびシークオンの任意選択のSer/Thrエレメントは、Tである、第8項に記載の類似体
12.置換配列は、N連結グリコシル化シークオンの一部(X)として天然システイン残基(C)を利用するDRGWGNNCTLFGK(配列番号11)を示す、第8項に記載の類似体
13.置換配列は、N連結グリコシル化シークオンの一部として天然システイン残基(C)を利用し、かつ第11項のトレオニンシークオン残基の代わりにセリン残基を有するDRGWGNNCSLFGK(配列番号12)を示す、第8項に記載の類似体
14.第1〜13項の何れか1項に記載のフラビウイルスEタンパク質の類似体をコードする、DNA配列
15.哺乳類の発現可能なプロモーターを有する第1〜13項の何れか1項に記載のフラビウイルスEタンパク質の類似体をコードする、プラスミドまたは線形DNAをベースとするワクチン免疫原
16.真核宿主細胞であって、前記フラビウイルスEタンパク質の類似体を発現することを可能にする方法で第1項に記載のDNA配列でトランスフェクトされている、真核宿主細胞
17.第1〜16項の何れか1項に記載のフラビウイルスEタンパク質類似体の治療上有効な量を薬学的に許容される希釈剤、アジュバントまたは担体と一緒に含むワクチン組成物
18.4種のデング血清型DEN−1、DEN−2、DEN−3およびDEN−4を表す4種のデングEタンパク質の治療上有効な量を含む、第17項に記載のワクチン組成物
19.ジカウイルスEタンパク質の治療上有効な量を含む、第17項に記載のワクチン組成物
20.ジカウイルスEタンパク質の治療上有効な量をさらに含む、第18項に記載のワクチン組成物。
図1「A」は、4種のデング血清型DEN−1、DEN−2、DEN−3およびDEN−4を含む、当技術分野で既知の生弱毒化ワクチン等のフラビウイルスワクチンによるワクチン接種の効果を示す。このワクチンにより、ウイルス中和が可能な抗体と感染の抗体依存性増強が可能な他の抗体との混合物が産生される。ウイルス中和が可能な抗体として、ビリオンEタンパク質のレセプター相互作用表面(即ちDCSIGNレクチン/レセプターに結合する表面)上の部位を認識するものが挙げられる。(説明を簡単にするためにDCSIGNレセプターのみを示しており、通常、デングおよびフラビウイルスの他のレセプターが存在することに留意されたい)。「C」は、このEタンパク質の融合ループに対する感染増強抗体が、このビリオンのEタンパク質に結合した場合、Fc−ガンマ−レセプター−IIaにどのように高親和性で関与し得、骨髄細胞の感染を促進するかを示す。この現象では、いくつかのタイプのFc−ガンマレセプター(通常、骨髄細胞およびB細胞に対して抑制性である低親和性レセプターFc−ガンマ−レセプター−IIbさえも(逆説的に)含む)が関与している(Bournazos S,Signaling by Antibodies...Ann.Rev.Immunol 2017,35:285−311)。生弱毒化ワクチン(当技術分野で既知のワクチンの一例)によるワクチン接種の結果は、抗体の2つの対立集団(デングビリオンを中和する1つのセットおよび感染増強が可能であるさらなるセット)の正味の効果である。ワクチン接種のほとんどの対象では、中和抗体は、感染増強抗体の影響を克服し、その結果、ワクチン接種の正味の効果は、4種のデング血清型に対する防御である。しかしながら、4種の血清型に対して釣り合いがとれた反応を開始しない対象または例えば麻疹もしくはHIV感染に起因して免疫抑制されている対象では、フラビウイルス感染増強抗体が優性であり、そのような対象を、デングによる重度の感染に対する防御よりもむしろデングによる重度の感染に罹りやすくし、かつ他のフラビウイルスにより感染しやすくする。さらに、一部の健康な(免疫抑制されていない)デングワクチン接種済対象での感染増強抗体は、ジカウイルスと交差反応する。これらのデング免疫付与済対象は、ジカ感染した蚊に最初に刺された際に現在はジカ感染に罹りやすい「C」。逆に、「B」は、本発明に従って設計されたワクチン免疫原を示す。Eタンパク質を含む新規の免疫原において、融合ループ配列が改変されておりかつ感染増強抗体を産生することなくこのワクチンのEタンパク質に対して中和抗体を産生することを目的としてグリカンで置換されるように設計されている新規の免疫原。「D」は、本発明のワクチンの一部の対象(例えば、免疫抑制されいてる)中での防御レベルの抗体反応の誘発の時折の失敗を表すが、当技術分野で既知の他のワクチン設計と異なり、本発明のワクチンは、免疫抑制対象をデングウイルスまたはジカウイルスによる感染の増強に対して感受性にしないように設計されている。それにより、本設計の免疫原およびワクチンは、個々の対象基準でより安全であるように設計されており、さらに、中和抗体の非存在下でジカ感染増強抗体を有する対象の集団を作ることによりジカの流行的蔓延を促進する可能性を欠くように設計されている。(WT=野生型)。
4種のデング血清型およびジカを代表する天然野生型(WT)外部ドメイン配列の様々な新規の組換え形態をコードし、かつ大腸菌(E.coli)複製起点およびサイトメガロウイルス(CMV)プロモーターならびにヘキサヒスチジンC末端タグを含むプラスミド挿入物をデノボ遺伝子合成により作製した(Thermofisher,GeneArt)。2つのグリコシル化シークオンをこのDNA配列に挿入する場合、望ましくない相同組換え事象を許容し得る直接DNA配列反復の生成を回避するために、この配列を「手動」で変更した。
実施例2から選択したタンパク質の2つ(HEK293のトランスフェクションから得られたpCRO22(融合ループ中に2つのグリカンを有するように全てが設計されている選択したデング構築物の代表)のデング−2血清型産物およびジカの産物(pCRO28の産物、融合ループ中に1つのグリカンを有するように設計されている))に対してグリカン組成分析(GlycoThera,Germany)を実施した。
部位占有率をトリプシンペプチドのLC−MS測定により決定した。この分析は、PNGアーゼFにより酵素的に脱N−グリコシル化されたタンパク質から遊離したトリプシン生成ペプチドまたはエンドLys−C生成ペプチドのLC−MS測定に基づいた。PNGアーゼFは、グリコアミダーゼであることから、アスパラギン(N)は、アスパラギン酸残基(D)に変換される。抽出イオンクロマトグラム(EIC)の作成により定量化を行った。0.01の+/−m/zの質量ウィンドウ内で異なる荷電標的ペプチドの理論m/z値を使用してEICを作成した。脱N−グリコシル化により生成された、特異的に改変されたカウンターパートとペプチド強度を比較するために、EICのピーク面積を使用した。次いで、改変の比率/程度を下記のように算出した:改変の程度=[改変ペプチドのEIC下の面積]/([改変ペプチドのEIC下の面積]+[非改変ペプチドのEIC下の面積])。
であった。高グリコシル化ジカ外部ドメイン(単一の導入されたグリコシル化シークオン「NHT」を有する)では、関連するペプチドは、T10
であった。
雌のBalb−cマウスを、PBS(陰性コントロール)、ならびにAlhydrogel上の、単独(ジカモノ)でのおよび組み合わせ(ペンタ−)での高グリコシル化外部ドメインタンパク質の様々なデング製剤およびジカ製剤、ならびに裸のDNA(DNA)で免疫付与した。タンパク質のAlhydrogel製剤を200ulの総体積で皮下(s.c.)注射し、五価DNA(各プラスミド免疫原5マイクログラムを表す)の場合に裸のDNA(デングのプラスミドpCRO21、pCRO22、pCRO23およびpCRO24ならびにジカを表すpCRO28を含む)を50ulの総体積で筋肉内(i.m.)注射した。五価のタンパク質組み合わせは、各高グリコシル化外部ドメインの用量当たり5ugの量を含み、一価(ジカ)は、用量当たり10ugを含んだ。マウスに3回(0日目、14日目および21日目のそれぞれで1回)投与した。図4の右下の凡例は各免疫原の組成を示す。各パネルの表題は、固相ELISAプレート上で使用した抗原を示す。(野生型組換えVLPを、免疫原(群4)としておよび図4での抗原としての両方で使用した)。示した間隔でマウスの後眼窩から採血し、ELISAアッセイおよびPRNTアッセイのために血清を採取した。
固相上のHis−6−タグ付与外部ドメインタンパク質の指向性補足を用いるELISA試験(図5)を考案した(図4のVLPはHis−タグを有しない)。別途明記しない限り、条件は、実施例4および図4のELISA試験の場合と同一であった。8ウェルストリップELISAプレート(Dynex)を室温で1時間にわたりウサギモノクローナル抗His−6タグ(Anti−6X His tag(登録商標)抗体[HIS.H8](ab18184)Abcam)でコーティングし、次いで重炭酸塩−炭酸塩コーティング緩衝液中の1μg/mlの濃度で一晩コーティングした。プレートを洗浄し、次いで室温で30分にわたりStarting Block(ThermoFisher 37538)に暴露し、次いで37度で2時間にわたり、次いで4度で一晩、0.5μg/mlの濃度で様々な外部ドメインタンパク質(全てがC末端ヘキサ−ヒスチジンタグを有する)に暴露した。抗体をPBS−Tween中の0.4%BSA中の適切なウェルに添加し、37度で2時間にわたりインキュベートした。次に、マウス抗体用の二次抗体コンジュゲート(ウサギ−抗マウスHRP IgG H&L、Abcam ab97046)を1/10,000の希釈でPBS−Tween中の0.4%BSAでアプライした。ヒト血清の場合、希釈係数は、PBS−Tween0.4%BSAで1/1000であり、続いて予め吸着されたヤギ抗ヒトIgGFc(HRP)(Abcam ab98624)で1/20,000であった。二次抗体HRPコンジュゲートを37度で2時間にわたりインキュベートした。連続した試薬への暴露中にプレートを洗浄した。最後に、TMB基質を添加し、室温で10分後に停止させた。
ELISA試験を確立して、融合ループ(この実施例では、固相ELISAプレート上のデング血清型−3VLPで表される)に対するポリクローナル抗体の結合を測定した。
実施例4からの血清プールを、プラーク減少中和試験(PRNT)においてVero細胞を使用して、デング血清型2ウイルスおよびジカウイルスを中和する能力に関して試験した。
血清インキュベーション中に10μg/mlの濃度での、競合するマウスモノクローナルフラビウイルス融合ループ抗体4G2(抗デング血清型−2モノクローナル抗体)の存在下(灰色のバー、各対の右側)および非存在下(黒色のバー、各対の左側)での、ウサギ抗His−タグモノクローナル抗体による補足によって固相上で配向された、固定されたジカおよびデングの野生型(WT)外部ドメインタンパク質および高グリコシル化(HX)外部ドメインタンパク質との、デング熱回復期血清中の抗体のELISA反応性である(図8、上方のパネル)。ヒト血清を1/1000の一定濃度で試験した。
1)本発明のHXジカ抗原は、回復期デング血清によるWTジカ外部ドメインのオフターゲット認識に対して感受性ではない。
2)デング血清によるWTジカ外部ドメイン(Aalto)のオフターゲット認識は、VLP(1ml当たり10マイクログラム)に対して80%阻害を引き起こす濃度において溶液相中で4G2(抗融合ループモノクローナル抗体)により無効になることから、融合ループ特異的現象である(この場合の固相上の抗原は、VLPではなく外部ドメインである)。
3)「ジカ」回復期血清は、3種のジカ外部ドメインを何れも認識しないが、WTデング2およびWTデング4を強く認識する。実施例6では、本発明のHXジカ抗原およびAaltoのジカ外部ドメインは、高次構造依存性の抗ジカ中和抗体と反応する)。これにより、この特定のジカ血清(ジカプラーク中和およびジカNS1抗体に対して陽性)は、別のフラビウイルスにも暴露された対象由来であることが実証される。ジカ回復期血清(デング熱回復期血清と異なる)は、融合ループが覆い隠された外部ドメインを認識しないことから、この他のフラビウイルスは、デングではないと結論付けられ得る。
4)ヒトジカ回復期血清によるWTデング−2外部ドメインおよびWTデング−4外部ドメインのオフターゲット認識は、本発明のHXにより覆い隠されたデング外部ドメインでは見られない。これは、オフターゲット認識が融合ループ特異的であり、本発明に従ってグリカンにより覆い隠されたタンパク質を使用しない他のフラビウイルス診断試験において偽陽性を示すことになることを示唆する。
5)ヒトジカ回復期血清によるWTデング−2外部ドメインおよびWTデング−4外部ドメインのオフターゲット認識は、オフターゲット認識が融合ループ特異的現象であることを示す4G2により完全にブロックされる。
6)デング熱回復期血清は、WT2およびWT4を無差別に認識するが、4の組のうちのd2外部ドメインを明らかに好む。これにより、本発明の融合ループ抗原は、この融合ループのグリカンによる覆い隠しに起因して、デング血清型を識別するのに(この野生型の等価の形態を比較して)優れた選択性を有することが実証される。
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Claims (38)
- 天然フラビウイルスEタンパク質融合ループ配列中に存在しないN連結グリカンのための少なくとも1つのグリコシル化部位を含むフラビウイルスEタンパク質融合ループの単離組換え類似体において、前記少なくとも1つのグリコシル化部位は、N連結グリコシル化シークオン(Asn−X−Ser/Thr)であり、および前記シークオンのAsn(N)残基は、天然フラビウイルスEタンパク質融合ループアミノ酸配列の98〜110位(DRGWGNGCGLFGK)の何れかを占め、Xは、プロリン以外の任意のアミノ酸残基であり、およびSer/Thrは、セリン残基またはトレオニン残基を示すことを特徴とするフラビウイルスEタンパク質融合ループの単離組換え類似体。
- 請求項1に記載のフラビウイルスEタンパク質融合ループの単離組換え類似体において、天然フラビウイルスEタンパク質融合ループ配列中に存在しない2つのグリコシル化部位を含むことを特徴とするフラビウイルスEタンパク質融合ループの単離組換え類似体。
- フラビウイルスEタンパク質の単離組換え類似体において、請求項1または2に記載のフラビウイルスEタンパク質融合ループの類似体を含むことを特徴とするフラビウイルスEタンパク質の単離組換え類似体。
- 請求項1乃至3の何れか1項に記載の類似体において、それに付着された少なくとも1つの追加のグリカンを有することを特徴とする類似体。
- 請求項4に記載の類似体において、前記少なくとも1つの追加のグリカンは、N連結グリカンであることを特徴とする類似体。
- 請求項1乃至5の何れか1項に記載の類似体において、組換えDNA配列または組換えRNA配列の発現産物であることを特徴とする類似体。
- 請求項1乃至6の何れか1項に記載の類似体において、N連結グリコシル化シークオン(Asn−X−Ser/Thr)を含み、それにより、前記シークオンのAsn(N)残基は、98〜101位および/または106〜110位の何れかを占めることを特徴とする類似体。
- 請求項1乃至7の何れか1項に記載の類似体において、Xは、以下の13種のアミノ酸残基Gly、His、Asn、Gln、Tyr、Val、Ala、Met、Ile、Lys、Arg、ThrまたはSerの何れかであることを特徴とする類似体。
- 請求項1乃至8の何れか1項に記載の類似体において、前記フラビウイルスEタンパク質は、デングウイルスEタンパク質であり、およびシークオンのAsn(N)残基は、前記フラビウイルスEタンパク質融合ループのアミノ酸配列の101位、108位もしくは101位および108位の両方を占めるか、または前記フラビウイルスEタンパク質は、ジカEタンパク質であり、およびシークオンのAsn(N)残基は、前記フラビウイルスEタンパク質融合ループの前記アミノ酸配列の100位を占めることを特徴とする類似体。
- 単離組換えDNA配列または単離組換えRNA配列において、請求項1乃至11の何れか1項に記載のフラビウイルスEタンパク質融合ループの類似体をコードする配列を含むことを特徴とする単離組換えDNA配列または単離組換えRNA配列。
- 請求項12に記載の単離組換えDNA配列において、プラスミドまたは線形DNAをベースとするワクチンであることを特徴とする単離組換えDNA配列。
- 請求項12または13に記載の単離組換えDNA配列において、哺乳類のプロモーターの制御下において、請求項1乃至11の何れか1項に記載のフラビウイルスEタンパク質の類似体をコードすることを特徴とする単離組換えDNA配列。
- 宿主細胞において、請求項12乃至14の何れか1項に記載のDNA配列またはRNA配列を含むことを特徴とする宿主細胞。
- 真核宿主細胞において、請求項12に記載のDNA配列または請求項13もしくは14に記載のプラスミドもしくは線形DNAをベースとするワクチン免疫原を含むことを特徴とする真核宿主細胞。
- 請求項15または16に記載の宿主細胞において、請求項1乃至11の何れか1項に記載の類似体を発現し得ることを特徴とする宿主細胞。
- 請求項15乃至17の何れか1項に記載の宿主細胞において、請求項1乃至11の何れか1項に記載の類似体を発現およびグリコシル化し得ることを特徴とする宿主細胞。
- 請求項1乃至11の何れか1項に記載の類似体を作製する方法において、請求項15乃至18の何れか1項に記載の宿主細胞を前記類似体の発現に適した条件で培養するステップと、前記類似体を単離するステップとを含むことを特徴とする方法。
- 組成物において、請求項1乃至11の何れか1項に記載の類似体と希釈剤とを含むことを特徴とする組成物。
- 免疫原性(ワクチン)組成物において、前記組成物を接種された対象中で免疫反応を誘発し得、請求項1乃至11の何れか1項に記載の類似体を薬学的に許容される希釈剤、アジュバントおよび/または担体と一緒に含むことを特徴とする組成物。
- 請求項20または21に記載の組成物において、DEN−1の類似体、DEN−2の類似体、DEN−3の類似体、DEN−4の類似体およびジカの類似体から選択される1種または複数のフラビウイルス類似体を含むことを特徴とする組成物。
- 請求項20乃至22の何れか1項に記載の組成物において、4種のデングウイルス血清型DEN−1、DEN−2、DEN−3およびDEN−4のそれぞれを表す4種のデング類似体を含むことを特徴とする組成物。
- 請求項20乃至23の何れか1項に記載の組成物において、ジカウイルス類似体を含むことを特徴とする組成物。
- 請求項20乃至24の何れか1項に記載の組成物において、前記4種のデング血清型DEN−1、DEN−2、DEN−3およびDEN−4のそれぞれを表す4種のデング類似体と、ジカウイルス類似体とを含むことを特徴とする組成物。
- 結合分子において、請求項1乃至11の何れか1項に記載の類似体に特異的に結合し得ることを特徴とする結合分子。
- 請求項26に記載の結合分子において、請求項1乃至11の何れか1項に記載の類似体に特異的に結合し得る抗体もしくはその断片、ドメイン抗体、タンパク質足場またはアプタマーであることを特徴とする結合分子。
- 請求項1乃至11、20乃至25または26もしくは27の何れか1項に記載の類似体、組成物または結合分子において、薬剤としての使用のためのものであることを特徴とする類似体、組成物または結合分子。
- 請求項1乃至11、20乃至25または26もしくは27の何れか1項に記載の類似体、組成物または結合分子において、ワクチンとしての使用のためのものであることを特徴とする類似体、組成物または結合分子。
- 請求項1乃至11、20乃至25または26もしくは27の何れか1項に記載の類似体、組成物または結合分子において、フラビウイルス感染の予防的処置もしくは治療的処置における使用、またはフラビウイルス感染の予防的処置もしくは治療的処置のための薬剤の製造のためのものであることを特徴とする類似体、組成物または結合分子。
- フラビウイルスによる感染から対象を防御する方法において、請求項1乃至11、または20乃至25、または26もしくは27の何れか1項に記載の類似体、組成物または結合分子を前記対象に投与するステップを含むことを特徴とする方法。
- 請求項1乃至11、20乃至25または26もしくは27の何れか1項に記載の類似体、組成物または結合分子において、診断薬としての使用のためのものであることを特徴とする類似体、組成物または結合分子。
- 診断キットにおいて、請求項1乃至11、20乃至25または26もしくは27の何れか1項に記載の類似体、組成物または結合分子と、前記単離類似体または結合分子を含有する免疫学的(抗原−抗体)複合体を検出し得る試薬とを含むことを特徴とする診断キット。
- 請求項33に記載の診断試験キットにおいて、1種または複数のコントロール標準物質、および/または検体希釈剤、および/または洗浄緩衝液をさらに含むことを特徴とする診断試験キット。
- 請求項33または34に記載の診断試験キットにおいて、前記類似体および/または結合分子は、固体支持体上に固定されていることを特徴とする診断試験キット。
- 請求項33乃至35の何れか1項に記載の診断試験キットにおいて、前記固体支持体は、マイクロプレートウェルであることを特徴とする診断試験キット。
- 請求項33乃至36の何れか1項に記載の診断試験キットにおいて、前記単離類似体または結合分子を含有する免疫学的複合体は、ELISAによって検出されることを特徴とする診断試験キット。
- 請求項33乃至37の何れか1項に記載の診断試験キットにおいて、前記単離類似体または結合分子を含有する前記免疫学的複合体は、ラテラルフローによって検出されることを特徴とする診断試験キット。
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