JP2019517605A - ホスホロジアミダートモルホリノオリゴマーを調製するためのプロセス - Google Patents

Abstract

オリゴマー（例えば、モルホリノオリゴマー）を調製するためのプロセスが本明細書に提供される。本明細書に記載の合成プロセスは、全体の収率および合成されるオリゴマーの純度を維持しながら、オリゴマー合成のスケールアップに有利であり得る。モルホリノオリゴマーを調製するためのプロセスが本明細書に提供される。本明細書に記載のモルホリノオリゴマーは、天然または未修飾のオリゴヌクレオチドに対して、配列選択性を損なうことなくＤＮＡおよびＲＮＡへのより強い親和性を示す。【選択図】なし

Description

関連出願
本特許出願は、２０１７年５月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／５０８，２５６号、２０１６年５月２４日に出願された米国仮特許出願第６２／３４１，０４９号、２０１６年５月２４日に出願された米国仮特許出願第６２／３４０，９５３号、２０１６年６月３０日に出願された米国仮特許出願第６２／３５７，１３４号、および２０１６年６月３０日に出願された米国仮特許出願第６２／３５７，１６６号の利益を主張する。上記参照の仮特許出願の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。

アンチセンス技術は、選択的スプライシング産物を含む１つまたは複数の特定の遺伝子産物の発現を調節するための手段を提供し、多くの治療、診断および研究用途において非常に有用である。アンチセンス技術の背後にある原理は、標的核酸にハイブリダイズするアンチセンス化合物、例えばオリゴヌクレオチドが、いくつかのアンチセンス機構のいずれか１つを通して転写、スプライシングまたは翻訳などの遺伝子発現活性を調節することである。アンチセンス化合物の配列特異性のため、それらは、標的評価および遺伝子機能化のためのツールとして、ならびに疾患に関与する遺伝子の発現を選択的に調節するための治療薬として魅力的である。

デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）は、タンパク質ジストロフィンの発現の欠陥によって引き起こされる。このタンパク質をコードする遺伝子は、ＤＮＡの２００万を超えるヌクレオチドに広がった７９のエクソンを含有する。エクソンの読み枠を変化させる、もしくは停止コドンを導入する、もしくはアウトオブフレームエクソン（単数もしくは複数）全体の除去によって特徴付けられる任意のエクソンの変異、または１つもしくは複数のエクソンの重複は、機能性ジストロフィンの産生を妨げる可能性を有し、結果としてＤＭＤとなる。

ＤＭＤの治療のためのスプライススイッチングオリゴヌクレオチド（ＳＳＯ）の安全性および有効性を試験する最近の臨床試験は、スプライソソームの立体封鎖によるプレｍＲＮＡの選択的スプライシングを誘導するＳＳＯ技術に基づいている（Ｃｉｒａｋ ｅｔ ａｌ．， ２０１１；Ｇｏｅｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．， ２０１１；Ｋｉｎａｌｉ ｅｔ ａｌ．， ２００９；ｖａｎ Ｄｅｕｔｅｋｏｍ ｅｔ ａｌ．， ２００７）。しかしながら、これらの成功にもかかわらず、ＤＭＤの治療に利用可能な薬理学的選択肢は限られている。

Ｇｏｌｏｄｉｒｓｅｎは、読み枠を修復し、ジストロフィンタンパク質の機能的により短い形態を産生するための、エクソン５３スキップを適用可能なＤＭＤの患者のヒトジストロフィン遺伝子のエクソン５３をスキップするように設計されたホスホロジアミダートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）である。

アンチセンス技術の分野において著しい進歩がなされているが、改善されたアンチセンスまたはアンチジーン性能を有するホスホロジアミダートモルホリノオリゴマーを調製する方法が、当該技術分野において依然として必要とされている。

ホスホロジアミダートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）を調製するためのプロセスが本明細書に提供される。本明細書に記載の合成プロセスは、全体の収率および合成されるＰＭＯの純度を維持しながら、ＰＭＯ合成のスケールアップを可能にする。

したがって、一態様では、式（Ａ）：

のオリゴマー化合物を調製するためのプロセスが本明細書に提供される。

ある実施形態では、式（Ｇ）：

のオリゴマー化合物を調製するためのプロセスが本明細書に提供される。

さらに別の実施形態では、例えば、式（Ｇ）のオリゴマー化合物のいくつかの実施形態を含む本開示のオリゴマー化合物は、式（ＸＩＩ）：

のオリゴマー化合物である。

明確にするために、例えば、式（Ｃ）のオリゴマー化合物および式（ＸＩＩ）で表されるＧｏｌｏｄｉｒｓｅｎを含む構造式は、５’から３’への連続した構造式であり、式全体を上記の構造式に小さくまとめた形で図示する便宜上、出願人は、「中断Ａ」および「中断Ｂ」とラベル付けされた様々な図示の中断を含めている。当業者に理解されるであろうように、例えば、「中断Ａ」の各表示は、これらの点で構造式の図が連続することを示す。当業者は、Ｇｏｌｏｄｉｒｓｅｎを含む上記の構造式中の「中断Ｂ」の各場合についても同じであることを理解する。しかしながら、図の中断は、Ｇｏｌｏｄｉｒｓｅｎを含む上記の構造式の実際の不連続を示すことを意図するものではなく、当業者がそれらを意味すると理解するものでもない。

図１および図２は、合成および脱保護されたＧｏｌｏｄｉｒｓｅｎ（ＳＲＰ−４０５３）粗原薬（実施例４参照）の代表的な分析高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）クロマトグラムを示す。 図１および図２は、合成および脱保護されたＧｏｌｏｄｉｒｓｅｎ（ＳＲＰ−４０５３）粗原薬（実施例４参照）の代表的な分析高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）クロマトグラムを示す。 図３および図４は、精製されたＧｏｌｏｄｉｒｓｅｎ原薬溶液（実施例５参照）の代表的な分析ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 図３および図４は、精製されたＧｏｌｏｄｉｒｓｅｎ原薬溶液（実施例５参照）の代表的な分析ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 図５および図６は、脱塩および凍結乾燥されたＧｏｌｏｄｉｒｓｅｎ原薬（実施例５参照）の代表的な分析ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 図５および図６は、脱塩および凍結乾燥されたＧｏｌｏｄｉｒｓｅｎ原薬（実施例５参照）の代表的な分析ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。

モルホリノオリゴマーを調製するためのプロセスが本明細書に提供される。本明細書に記載のモルホリノオリゴマーは、天然または未修飾のオリゴヌクレオチドに対して、配列選択性を損なうことなくＤＮＡおよびＲＮＡへのより強い親和性を示す。いくつかの実施形態では、本開示のモルホリノオリゴマーは、ＲＮａｓｅ Ｈによる切断を最小化するか、または防ぐ。いくつかの実施形態では、本開示のモルホリノオリゴマーは、ＲＮａｓｅ Ｈを活性化しない。

本明細書に記載のプロセスは、工業スケールのプロセスに有利であり、高収率および高スケール（例えば、約１ｋｇ、約１〜１０ｋｇ、約２〜１０ｋｇ、約５〜２０ｋｇ、約１０〜２０ｋｇ、または約１０〜５０ｋｇ）で多量のモルホリノオリゴマーを調製するのに適用され得る。

定義
本開示の記載に使用された様々な用語の定義を以下に列挙する。これらの定義は、特定の場合に、個別にまたはより大きな群の一部として、別段の限定がない限り、本明細書および特許請求の範囲を通して使用される用語に適用される。

「塩基保護された」または「塩基保護」は、モルホリノサブユニット上の塩基対形成基、例えばプリンまたはピリミジン塩基を、段階的オリゴマー合成中に塩基対形成基の反応または干渉を防ぐのに適した保護基で保護することを指す。（塩基保護されたモルホリノサブユニットの例は、以下に示すシトシンアミノ基上にＣＢＺ保護基を有する活性化Ｃサブユニット化合物（Ｃ）である。）

「活性化ホスホロアミダート基」は、典型的には、オリゴマー中の最終的なホスホロジアミダート連結に望ましい窒素での置換を有する、クロロホスホロアミダート基である。例は、（ジメチルアミノ）クロロホスホロアミダート、すなわち、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＭｅ_２）Ｃｌである。

用語「支持体に結合した」は、支持媒体に共有結合的に連結した化学物質を指す。

用語「支持媒体」は、例えば、その上にオリゴマーが付着もしくは合成され得るか、またはオリゴマーの付着もしくは合成のために修飾され得る任意の粒子、ビーズ、または表面を含む任意の材料を指す。代表的な基材としては、ガラスおよび修飾または官能化ガラス、プラスチック（アクリル、ポリスチレンおよびスチレンと他の材料とのコポリマー、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリブチレン、ポリウレタン、テフロン（登録商標）などを含む）、多糖類、ナイロンまたはニトロセルロース、セラミックス、樹脂、シリコンおよび修飾シリコンを含むシリカまたはシリカ系材料、炭素、金属、無機ガラス、プラスチック、光ファイバ束、ならびに様々な他のポリマーなどの無機支持体ならびに有機支持体が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態に特に有用な支持媒体および固体表面はフローセル装置内に位置する。本明細書に記載のプロセスのいくつかの実施形態では、支持媒体は、１％ジビニルベンゼン架橋ポリスチレンを含む。

いくつかの実施形態では、代表的な支持媒体は、オリゴマーの付着または合成のための少なくとも１つの反応部位を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の支持媒体は、オリゴマーを付着または合成するために、入ってくるサブユニットまたは他の活性化された基と化学結合を形成することができる１つまたは複数の末端アミノまたはヒドロキシル基を含む。

本明細書に記載のプロセスに適しているいくつかの代表的な支持媒体としては、以下：コントロールドポアガラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｏｒｅ ｇｌａｓｓ）（ＣＰＧ）、オキサリルコントロールドポアガラス（例えば、Ａｌｕｌ， ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９９１， １９， １５２７を参照）、トリクロロ−［３−（４−クロロメチル）フェニル］プロピルシランと多孔質ガラスビーズとの反応によって形成されるもののような、多孔質ガラスビーズおよびシリカゲルなどのシリカ含有粒子（Ｐａｒｒ ａｎｄ Ｇｒｏｈｍａｎｎ， Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔｅｒｎａｌ． Ｅｄ． １９７２， １１， ３１４を参照、商標「ＰＯＲＡＳＩＬ Ｅ」でＷａｔｅｒｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ， Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ， Ｍａｓｓ．， ＵＳＡにより販売）、１，４−ジヒドロキシメチルベンゼンとシリカとのモノエステル（Ｂａｙｅｒ ａｎｄ Ｊｕｎｇ， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．， １９７０， ４５０３を参照、商標「ＢＩＯＰＡＫ」でＷａｔｅｒｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓにより販売）、
ＴＥＮＴＡＧＥＬ（例えば、Ｗｒｉｇｈｔ， ｅｔ ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ １９９３， ３４， ３３７３を参照）、架橋スチレン／ジビニルベンゼンコポリマービーズマトリックス、またはＰＯＲＯＳ、ポリスチレン／ジビニルベンゼンのコポリマー（Ｐｅｒｃｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから入手可能）、ポリエチレングリコール ＰＥＧのような可溶性支持媒体（Ｂｏｎｏｒａ ｅｔ ａｌ．， Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， ２０００， ４， ２２５−２３１を参照）、ペンダント長鎖ポリスチレン（ＰＳ）グラフトを有するポリエチレン（ＰＥ）フィルムであるＰＥＰＳ支持体（Ｂｅｒｇ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．，１９８９， １１１， ８０２４および国際特許出願公開ＷＯ １９９０／０２７４９を参照）、既知の量のＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ベータ−アラニル−Ｎ’−アクリロイルヘキサメチレンジアミンを含む、Ｎ、Ｎ’−ビスアクリロイルエチレンジアミンと架橋したジメチルアクリルアミドのコポリマー（Ａｔｈｅｒｔｏｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １９７５， ９７， ６５８４， Ｂｉｏｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． １９７９， ８， ３５１，およびＪ． Ｃ． Ｓ． Ｐｅｒｋｉｎ Ｉ ５３８ （１９８１）を参照）、疎水性架橋スチレンポリマーで被覆されたガラス粒子（Ｓｃｏｔｔ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｈｒｏｍ． Ｓｃｉ．， １９７１， ９， ５７７を参照）、ポリスチレンをグラフトされたフッ化エチレンポリマー（Ｋｅｎｔ ａｎｄ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ， Ｉｓｒａｅｌ Ｊ． Ｃｈｅｍ． １９７８， １７， ２４３およびｖａｎ Ｒｉｅｔｓｃｈｏｔｅｎ ｉｎ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ １９７４， Ｙ． Ｗｏｌｍａｎ， Ｅｄ．， Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９７５， ｐｐ． １１３−１１６を参照）、ヒドロキシプロピルアクリレート被覆ポリプロピレン膜（Ｄａｎｉｅｌｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．１９８９， ４３４５）、アクリル酸グラフトポリエチレンロッド（Ｇｅｙｓｅｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９８４， ８１， ３９９８）、伝統的に使用されているポリマービーズを含有する「ティーバッグ」（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９８５， ８２， ５１３１）、ならびにそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

用語「フローセル装置」は、１つまたは複数の流体試薬（例えば、液体もしくは気体）を流すことができる表面（例えば、固体表面）を含むチャンバを指す。

用語「脱ブロッキング剤」は、保護基を除去するための化学酸または化学酸の組み合わせを含む組成物（例えば、溶液）を指す。脱ブロッキング剤に使用される例示的な化学酸としては、ハロゲン化酸、例えば、クロロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリクロロ酢酸、フルオロ酢酸、ジフルオロ酢酸、およびトリフルオロ酢酸が挙げられる。いくつかの実施形態では、脱ブロッキング剤は、例えば、オリゴマー、支持体に結合したオリゴマー、支持体に結合したサブユニット、または他の保護された窒素もしくは酸素部分から、１つまたは複数のトリチル基を除去する。

用語「ハロゲン」および「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素からなる群から選択される原子を指す。

用語「キャッピング剤」は、例えば、入ってくるサブユニットまたは他の活性化された基と化学結合を形成する支持媒体の、反応部位をブロックするのに有用な酸無水物（例えば、無水安息香酸、無水酢酸、フェノキシ酢酸無水物など）を含む組成物（例えば、溶液）を指す。

用語「切断剤」は、例えば、支持体に結合したオリゴマーを支持媒体から切断するのに有用な化学塩基（アンモニアもしくは１，８−ジアザビシクロウンデカ−７−エン）または化学塩基の組み合わせを含む組成物（例えば、液体溶液もしくは気体混合物）を指す。

用語「脱保護剤」は、保護基を除去するのに有用な化学塩基（アンモニア、１，８−ジアザビシクロウンデカ−７−エンもしくは炭酸カリウム）または化学塩基の組み合わせを含む組成物（例えば、液体溶液もしくは気体混合物）を指す。例えば、脱保護剤は、いくつかの実施形態では、例えばモルホリノサブユニット、モルホリノオリゴマーのモルホリノサブユニット、またはそれらの支持体に結合した形から塩基保護を除去し得る。

用語「溶媒」は、溶質がその中に溶解される溶液または混合物の成分を指す。溶媒は、無機または有機溶媒（例えば、酢酸、アセトン、アセトニトリル、アセチルアセトン、２−アミノエタノール、アニリン、アニソール、ベンゼン、ベンゾニトリル、ベンジルアルコール、１−ブタノール、２−ブタノール、ｉ−ブタノール、２−ブタノン、ｔ−ブチルアルコール、二硫化炭素、四塩化炭素、クロロベンゼン、クロロホルム、シクロヘキサン、シクロヘキサノール、シクロヘキサノン、フタル酸ジ−ｎ−ブチル、１，１−ジクロロエタン、１，２−ジクロロエタン、ジエチルアミン、ジエチレングリコール、ジグリム、ジメトキシエタン（グリム）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、ジメチルホルムアミド、ジメチルフタレート、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、エタノール、エーテル、酢酸エチル、アセト酢酸エチル、安息香酸エチル、エチレングリコール、グリセリン、ヘプタン、１−ヘプタノール、ヘキサン、１−ヘキサノール、メタノール、酢酸メチル、メチルｔ−ブチルエーテル、塩化メチレン、１−オクタノール、ペンタン、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタノール、２−ペンタノン、３−ペンタノン、１−プロパノール、２−プロパノール、ピリジン、テトラヒドロフラン、トルエン、水、ｐ−キシレン）であってよい。

語句「モルホリノオリゴマー」および「ホスホロジアミダートモルホリノオリゴマー」または「ＰＭＯ」は、１つのサブユニットのモルホリノ窒素を隣接するサブユニットの５’−環外炭素に接合するホスホロジアミダート連結によって共に連結されたモルホリノサブユニットを有するオリゴマーを指す。各モルホリノサブユニットは、核酸塩基特異的水素結合によって標的中の核酸塩基に結合するのに有効な核酸塩基対形成部分を含む。

用語「ＥＧ３テール」は、例えば、その３’末端または５’末端でオリゴマーにコンジュゲートしたトリエチレングリコール部分を指す。例えば、いくつかの実施形態では、オリゴマーの３’末端にコンジュゲートした「ＥＧ３テール」は、構造：

のものであり得る。

用語「約（ａｂｏｕｔ）」または「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、関連する対象領域の有識者によって一般に理解されるが、ある状況では、所与の値または範囲の±１０％以内または±５％以内を意味し得る。

モルホリノオリゴマーを調製するためのプロセス
合成は一般に、本明細書に記載されているように、支持媒体上で調製される。一般に、第１のシントン（例えば、モルホリノサブユニットのようなモノマー）をまず支持媒体に付着させ、その後、支持体に結合したシントンにサブユニットを連続的にカップリングすることによってオリゴマーを合成する。この反復伸長は、最終的に最終オリゴマー化合物をもたらす。好適な支持媒体は、可溶性もしくは不溶性であり得、または成長している支持体結合ポリマーが、所望のように溶液中もしくは溶液外のいずれかに存在できるように、異なる溶媒中で変化する溶解度を有してもよい。伝統的な支持媒体は大部分が不溶性であり、オリゴマーが目標の長さに達するまで、試薬および溶媒が成長鎖と反応および／または成長鎖を洗浄し、その後、このオリゴマーが支持体から切断され、必要に応じてさらに加工されて最終ポリマー化合物が生成される間、常に反応容器中に置かれる。より最近のアプローチは、可溶性ポリマー支持体を含む可溶性支持体を導入し、反復合成された生成物を合成の所望の点で沈殿および溶解させることができる（Ｇｒａｖｅｒｔ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ． Ｒｅｖ．，１９９７，９７，４８９−５１０）。

モルホリノオリゴマーを調製するためのプロセスが本明細書に提供される）。

したがって、一態様では、式（ＩＩ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を調製するためのプロセスが本明細書に提供され、
プロセスは、式（Ａ１）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択される）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（ＩＩ）の化合物を形成することを含む。

別の態様では、式（Ａ３）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択される）の化合物を調製するためのプロセスが本明細書に提供され、
プロセスは、式（ＩＩ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を式（Ａ２）：

（式中、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択される）の化合物と接触させて式（Ａ３）の化合物を形成することを含む。

さらに別の態様では、式（ＩＶ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を調製するためのプロセスが本明細書に提供され、
プロセスは、式（Ａ３）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択される）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（ＩＶ）の化合物を形成することを含む。

さらに別の態様では、式（Ａ５）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は以下：

からなる群から選択される）の化合物を調製するためのプロセスが本明細書に提供され、
プロセスは、式（ＩＶ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を式（Ａ４）：

（式中、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は以下：

からなる群から選択される）の化合物と接触させて式（Ａ５）の化合物を形成することを含む。

別の態様では、式（Ａ９）：

（式中、ｎは１０〜４０の整数であり、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：

からなる群から選択される）の化合物を調製するためのプロセスが本明細書に提供され、
プロセスは、
（ａ）式（ＩＶ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を式（Ａ４）：

（式中、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は以下：

からなる群から選択される）の化合物と接触させて式（Ａ５）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は以下：

からなる群から選択される）の化合物を形成するステップ、ならびに
（ｂ）以下の連続したステップのｎ−１回の反復を実施するステップであって、
（ｂ１）直前のステップによって形成された生成物を脱ブロッキング剤と接触させるステップ、および
（ｂ２）直前のステップによって形成された化合物を式（Ａ８）：

（式中、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は、以下：

からなる群から選択される）の化合物と接触させて式（Ａ９）の化合物を形成するステップ
の連続したステップのｎ−１回の反復を実施するステップ
の連続したステップを含む。

さらに別の態様では、式（Ａ１０）：

（式中、ｎは１０〜４０の整数であり、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：

からなる群から選択される）の化合物を調製するためのプロセスが本明細書に提供され、
プロセスは、式（Ａ９）：

（式中、ｎは１０〜４０の整数であり、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：

からなる群から選択される）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（Ａ１０）の化合物を形成することを含む。

さらに別の態様では、式（Ａ１１）：

（式中、ｎは１０〜４０の整数であり、Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：

からなる群から選択される）の化合物を調製するためのプロセスが本明細書に提供され、
プロセスは、式（Ａ１０）：

（式中、ｎは１０〜４０の整数であり、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：

からなる群から選択される）の化合物を切断剤と接触させて式（Ａ１１）の化合物を形成することを含む。

別の態様では、式（Ａ）：

（式中、ｎは１０〜４０の整数であり、各Ｒ^２は、各出現について独立して、以下：

からなる群から選択される）のオリゴマー化合物を調製するためのプロセスが本明細書に提供され、
プロセスは、式（Ａ１１）：

（式中、ｎは１０〜４０の整数であり、Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：

,
からなる群から選択される）の化合物を脱保護剤と接触させて式（Ａ）のオリゴマー化合物を形成することを含む。

別の態様では、式（Ａ）：

（式中、ｎは１０〜４０の整数であり、各Ｒ^２は、各出現について独立して、以下：

からなる群から選択される）のオリゴマー化合物を調製するためのプロセスが本明細書に提供され、プロセスは、
（ａ）式（Ａ１）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択される）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（ＩＩ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を形成するステップ；
（ｂ）式（ＩＩ）の化合物を式（Ａ２）：

（式中、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択される）の化合物と接触させて式（Ａ３）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択される）の化合物を形成するステップ；
（ｃ）式（Ａ３）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（ＩＶ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を形成するステップ；
（ｄ）式（ＩＶ）の化合物を式（Ａ４）：

（式中、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は以下：

からなる群から選択される）の化合物と接触させて式（Ａ５）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は以下：

からなる群から選択される）の化合物を形成するステップ；
（ｅ）以下の連続したステップのｎ−１回の反復を実施するステップであって、
（ｅ１）直前のステップによって形成された生成物を脱ブロッキング剤と接触させるステップ、および
（ｅ２）直前のステップによって形成された化合物を式（Ａ８）：

（式中、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は、式（Ａ８）の各化合物について独立して、以下：

からなる群から選択される）の化合物と接触させて式（Ａ９）：

（式中、ｎは１０〜４０の整数であり、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：

からなる群から選択される）の化合物を形成するステップ
の連続したステップのｎ−１回の反復を実施するステップ；ならびに
（ｆ）式（Ａ９）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（Ａ１０）：

（式中、ｎは１０〜４０の整数であり、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：

からなる群から選択される）の化合物を形成するステップ；
（ｇ）式（Ａ１０）の化合物を切断剤と接触させて式（Ａ１１）：

（式中、ｎは１０〜４０の整数であり、Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：

からなる群から選択される）の化合物を形成するステップ；ならびに
（ｈ）式（Ａ１１）の化合物を脱保護剤と接触させて式（Ａ）のオリゴマー化合物を形成するステップ
の連続したステップを含む。

一実施形態では、ステップ（ｄ）またはステップ（ｅ２）は、それぞれ式（ＩＶ）の化合物または直前のステップによって形成された化合物を、キャッピング剤と接触させることをさらに含む。

別の実施形態では、各ステップは少なくとも１つの溶媒の存在下で実施される。

さらに別の実施形態では、各ステップで使用される脱ブロッキング剤は、ハロゲン化酸を含む溶液である。

さらに別の実施形態では、各ステップで使用される脱ブロッキング剤は、シアノ酢酸である。

別の実施形態では、ハロゲン化酸は、クロロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリクロロ酢酸、フルオロ酢酸、ジフルオロ酢酸、およびトリフルオロ酢酸からなる群から選択される。

別の実施形態では、ハロゲン化酸は、トリフルオロ酢酸である。

さらに別の実施形態では、ステップ（ａ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｇ１）の少なくとも１つは、各ステップの脱ブロックされた化合物を中和剤と接触させるステップをさらに含む。

さらに別の実施形態では、ステップ（ａ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｇ１）の各々は、各ステップの脱ブロックされた化合物を中和剤と接触させるステップをさらに含む。

別の実施形態では、中和剤はジクロロメタンおよびイソプロピルアルコールを含む溶液中に存在する。

さらに別の実施形態では、中和剤はモノアルキル、ジアルキル、またはトリアルキルアミンである。

さらに別の実施形態では、中和剤はＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンである。

別の実施形態では、各ステップで使用される脱ブロッキング剤は、４−シアノピリジン、ジクロロメタン、トリフルオロ酢酸、トリフルオロエタノール、および水を含む溶液である。

さらに別の実施形態では、キャッピング剤は、エチルモルホリンおよびメチルピロリジノンを含む溶液中に存在する。

さらに別の実施形態では、キャッピング剤は酸無水物である。

別の実施形態では、酸無水物は無水安息香酸である。

別の実施形態では、式（Ａ４）および式（Ａ８）の化合物は、各々独立して、エチルモルホリンおよびジメチルイミダゾリジノンを含む溶液中に存在する。

別の実施形態では、切断剤は、ジチオトレイトールおよび１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エンを含む。

さらに別の実施形態では、切断剤は、Ｎ−メチル−２−ピロリドンを含む溶液中に存在する。

さらに別の実施形態では、脱保護剤はＮＨ_３を含む。

さらに別の実施形態では、脱保護剤は水溶液中に存在する。

さらに別の実施形態では、支持媒体は、１％ジビニルベンゼン架橋ポリスチレンを含む。

別の実施形態では、式（Ａ４）の化合物は式（Ａ４ａ）：

の化合物であり、式中、
Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、
Ｒ^４は、以下：

から選択される。

別の実施形態では、式（Ａ５）の化合物は式（Ａ５ａ）：

の化合物であり、式中、
Ｒ^１は支持媒体であり、
Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、
Ｒ^４は、以下：

から選択される。

さらに別の実施形態では、式（Ａ８）の化合物は式（Ａ８ａ）：

の化合物であり、式中、
Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、
Ｒ^４は、式（Ａ８ａ）の化合物の各出現で独立して、以下：

からなる群から選択される。

さらに別の実施形態では、式（Ａ９）の化合物は式（Ａ９ａ）：

の化合物であり、式中、
ｎは１０〜４０の整数であり、
Ｒ^１は支持媒体であり、
Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、
Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：

からなる群から選択される。

別の実施形態では、式（Ａ１０）の化合物は式（Ａ１０ａ）：

の化合物であり、式中、
ｎは１０〜４０の整数であり、
Ｒ^１は支持媒体であり、
Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：

からなる群から選択される。

別の実施形態では、式（Ａ１１）の化合物は式（Ａ１１ａ）：

の化合物であり、式中、
ｎは１０〜４０の整数であり、
Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：

からなる群から選択される。

式（Ａ）のオリゴマー化合物の実施形態では、ｎは３０であり、Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：

であり、
式（Ａ）のオリゴマー化合物は式（Ｇ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩である。

Ｇｏｌｏｄｉｒｓｅｎは、以前はそのコード名「ＳＰＲ−４０５３」で知られており、５’−ＧＴＴＧＣＣＴＣＣＧＧＴＴＣＴＧＡＡＧＧＴＧＴＴＣ−３’（配列番号１）の塩基配列を有するＰＭＯである。Ｇｏｌｏｄｉｒｓｅｎは、ＣＡＳ登録番号１４２２９５９−９１−８で登録されている。化学名としては、ａｌｌ−Ｐ−ａｍｂｏ−［Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコ］（２’ａ→５’）（Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ｃ） ５’−［４−（｛２−［２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ］エトキシ｝カルボニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルピペラジン−１−ホスホンアミダート］が挙げられる。

Ｇｏｌｏｄｉｒｓｅｎは以下の構造：

を有し、以下の化学構造：

によっても表される。

Ｇｏｌｏｄｉｒｓｅｎは式（ＸＩＩ）：

の構造によっても表され得る。

したがって、上記のプロセスの一実施形態では、式（Ａ）のオリゴマー化合物は式（Ｇ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩である。

さらに別の実施形態では、式（Ｇ）のオリゴマー化合物は式（ＸＩＩ）：

のオリゴマー化合物、またはその医薬的に許容される塩である。

さらに別の実施形態では、Ｒ^３は、各出現で、トリチルである。

Ｇｏｌｏｄｉｒｓｅｎを調製するためのプロセス
Ｇｏｌｏｄｉｒｓｅｎを調製するためのプロセスが本明細書に提供される。

一態様では、式（Ｇ）：

のオリゴマー化合物を調製するためのプロセスが本明細書に提供され、
プロセスは、
（ａ）式（Ｉ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（ＩＩ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を形成するステップ；
（ｂ）式（ＩＩ）の化合物を化合物（Ｂ）：

と接触させて式（ＩＩＩ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を形成するステップ；
（ｃ）式（ＩＩＩ）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（ＩＶ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を形成するステップ；
（ｄ）式（ＩＶ）の化合物を式（ＤＰＧ）：

の化合物と接触させて式（Ｖ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を形成するステップ；
（ｅ）式（Ｖ）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（ＶＩ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を形成するステップ；
（ｆ）式（ＶＩ）の化合物を式（Ｔ）：

の化合物と接触させて式（ＶＩＩ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を形成するステップ；
（ｇ）以下の連続したステップの２３回の反復を実施するステップであって、
（ｇ１）直前のステップによって形成された生成物を脱ブロッキング剤と接触させるステップ、および
（ｇ２）直前のステップによって形成された化合物を式（ＶＩＩＩ）：

（式中、Ｒ^２は、式（ＶＩＩＩ）の各化合物について独立して、以下：

からなる群から選択され、各反復１〜２３について、Ｒ^２は、以下：

である）の化合物と接触させて式（ＩＸ）：

（式中、
Ｒ^１は支持媒体であり、
Ｒ^２は、各出現について独立して、以下：

からなる群から選択され、
Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：

である）の化合物を形成するステップ
の連続したステップの２３回の反復を実施するステップ；
（ｈ）式（ＩＸ）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（Ｘ）：

（式中、
Ｒ^１は支持媒体であり、
Ｒ^２は、各出現について独立して、以下：

からなる群から選択され、
Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：

である）の化合物を形成するステップ；
（ｉ）式（Ｘ）の化合物を切断剤と接触させて式（ＸＩ）：

（式中、Ｒ^２は、各出現について独立して、以下：

からなる群から選択され、
Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：

である）の化合物を形成するステップ；ならびに
（ｊ）式（ＸＩ）の化合物を脱保護剤と接触させて式（Ｇ）のオリゴマー化合物を形成するステップ
の連続したステップを含む。

一実施形態では、ステップ（ｄ）、ステップ（ｆ）、ステップ（ｇ２）またはそれらの組み合わせは、それぞれ式（ＩＶ）の化合物、式（ＶＩ）の化合物または直前のステップによって形成された化合物を、キャッピング剤と接触させることをさらに含む。

ある実施形態では、ステップ（ｄ）、ステップ（ｆ）、ステップ（ｇ２）の各々は、それぞれ式（ＩＶ）の化合物、式（ＶＩ）の化合物または直前のステップによって形成された化合物を、キャッピング剤と接触させることをさらに含む。

別の実施形態では、各ステップは少なくとも１つの溶媒の存在下で実施される。

さらに別の実施形態では、各ステップで使用される脱ブロッキング剤は、ハロゲン化酸を含む溶液である。

さらに別の実施形態では、各ステップで使用される脱ブロッキング剤は、シアノ酢酸である。

別の実施形態では、ハロゲン化酸は、クロロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリクロロ酢酸、フルオロ酢酸、ジフルオロ酢酸、およびトリフルオロ酢酸からなる群から選択される。

さらに別の実施形態では、ハロゲン化酸は、トリフルオロ酢酸である。

さらに別の実施形態では、ステップ（ｃ）、（ｅ）および（ｇ１）の少なくとも１つは、各ステップの脱ブロックされた化合物を中和剤と接触させるステップをさらに含む。

別の実施形態では、ステップ（ｃ）、（ｅ）および（ｇ１）の各々は、各ステップの脱ブロックされた化合物を中和剤と接触させるステップをさらに含む。

さらに別の実施形態では、中和剤はジクロロメタンおよびイソプロピルアルコールを含む溶液中に存在する。

さらに別の実施形態では、中和剤はモノアルキル、ジアルキル、またはトリアルキルアミンである。

別の実施形態では、中和剤はＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンである。

さらに別の実施形態では、各ステップで使用される脱ブロッキング剤は、４−シアノピリジン、ジクロロメタン、トリフルオロ酢酸、トリフルオロエタノール、および水を含む溶液である。

さらに別の実施形態では、キャッピング剤は、エチルモルホリンおよびメチルピロリジノンを含む溶液中に存在する。

別の実施形態では、キャッピング剤は酸無水物である。

さらに別の実施形態では、酸無水物は無水安息香酸である。

さらに別の実施形態では、式（ＶＩＩＩ）の化合物、式（ＤＰＧ）の化合物および化合物（Ｆ）は、各々独立して、エチルモルホリンおよびジメチルイミダゾリジノンを含む溶液中に存在する。

別の実施形態では、切断剤は、ジチオトレイトールおよび１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エンを含む。

さらに別の実施形態では、切断剤は、Ｎ−メチル−２−ピロリドンを含む溶液中に存在する。

さらに別の実施形態では、脱保護剤はＮＨ_３を含む。

別の実施形態では、脱保護剤は水溶液中に存在する。

さらに別の実施形態では、支持媒体は、１％ジビニルベンゼン架橋ポリスチレンを含む。

別の実施形態では、式（ＤＰＧ）の化合物は式（ＤＰＧ１）の化合物である。

別の実施形態では、式（Ｖ）の化合物は式（Ｖａ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物である。

別の実施形態では、式（Ｔ）の化合物は式（Ｔ１）の化合物である。

別の実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は式（ＶＩＩａ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物である。

別の実施形態では、式（ＶＩＩＩ）の化合物は式（ＶＩＩＩａ）：

（式中、Ｒ^２は、式（ＶＩＩＩａ）の各化合物について独立して、以下：

からなる群から選択される）の化合物である。

別の実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は式（ＩＸａ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩であり、式中、
Ｒ^１は支持媒体であり、
Ｒ^２は、各出現で独立して、以下：

からなる群から選択され、
Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：

である。

別の実施形態では、式（Ｘ）の化合物は式（Ｘａ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩であり、式中、
Ｒ^１は支持媒体であり、
Ｒ^２は、各出現で独立して、以下：

からなる群から選択され、
Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：

である。

別の実施形態では、式（ＸＩ）の化合物は式（ＸＩａ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩であり、式中、
Ｒ^２は、各出現で独立して、以下：

からなる群から選択され、
Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：

である。

別の実施形態では、式（ＶＩ）の化合物は式（ＶＩａ）：

（式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物である。

さらに別の実施形態では、式（Ｇ）のオリゴマー化合物は式（ＸＩＩ）のオリゴマー化合物である。

別の態様では、式（Ａ５）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩が本明細書に提供され、式中、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は以下：

からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、式（Ａ５）の化合物は式（Ａ５ａ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩であり、式中、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は以下：

からなる群から選択される。

別の態様では、式（Ｖ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩が本明細書に提供され、式中、Ｒ^１は支持媒体である。

いくつかの実施形態では、式（Ｖ）の化合物は式（Ｖａ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩であり、式中、Ｒ^１は支持媒体である。

別の態様では、式（ＶＩ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩が本明細書に提供され、式中、Ｒ^１は支持媒体である。

いくつかの実施形態では、式（ＶＩ）の化合物は式（ＶＩａ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩であり、式中、Ｒ^１は支持媒体である。

別の態様では、式（ＶＩＩ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩が本明細書に提供され、式中、Ｒ^１は支持媒体である。

いくつかの実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は式（ＶＩＩａ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩であり、式中、Ｒ^１は支持媒体である。

別の態様では、式（ＩＸ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩が本明細書に提供され、式中、
Ｒ^１は支持媒体であり、
Ｒ^２は、各出現で独立して、以下：

からなる群から選択され、
Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：

である。

一実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は式（ＩＸａ）：


の化合物、またはその医薬的に許容される塩であり、式中、
Ｒ^１は支持媒体であり、
Ｒ^２は、各出現で独立して、以下：

からなる群から選択され、
Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：

である。

別の態様では、式（Ａ９）：
の化合物、またはその医薬的に許容される塩が本明細書に提供され、式中、
ｎは１０〜４０の整数であり、
Ｒ^１は支持媒体であり、
Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、
Ｒ^４は、各出現で独立して、以下：

からなる群から選択される。

一実施形態では、式（Ａ９）の化合物は式（Ａ９ａ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩であり、式中、
ｎは１０〜４０の整数であり、
Ｒ^１は支持媒体であり、
Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、
Ｒ^４は、各出現で独立して、以下：

からなる群から選択される。

別の態様では、式（Ｘ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩が本明細書に提供され、式中、
Ｒ^１は支持媒体であり、
Ｒ^２は、各出現で独立して、以下：

からなる群から選択され、
Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：

である。

一実施形態では、式（Ｘ）の化合物は式（Ｘａ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩であり、式中、
Ｒ^１は支持媒体であり、
Ｒ^２は、各出現で独立して、以下：

からなる群から選択され、
Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：

である。

別の態様では、式（Ａ１０）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩が本明細書に提供され、式中、
ｎは１０〜４０の整数であり、
Ｒ^１は支持媒体であり、
Ｒ^４は、各出現で独立して、以下：

からなる群から選択される。

一実施形態では、式（Ａ１０）の化合物は式（Ａ１０ａ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩であり、式中、
ｎは１０〜４０の整数であり、
Ｒ^１は支持媒体であり、
Ｒ^４は、各出現で独立して、以下：

からなる群から選択される。

これらの化合物の別の実施形態では、支持媒体は、１％ジビニルベンゼン架橋ポリスチレンを含む。

別の態様では、式（ＸＩ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩が本明細書に提供され、式中、
Ｒ^２は、各出現で独立して、以下：

からなる群から選択され、
Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：

である。

一実施形態では、式（ＸＩ）の化合物は式（ＸＩａ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩であり、式中、
Ｒ^２は、各出現で独立して、以下：

からなる群から選択され、
Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：

である。

別の態様では、式（Ａ１１）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩が本明細書に提供され、式中、
ｎは１０〜４０の整数であり、
Ｒ^４は、各出現で独立して、以下：

からなる群から選択される。

一実施形態では、式（Ａ１１）の化合物は式（Ａ１１ａ）：

の化合物、またはその医薬的に許容される塩であり、式中、
ｎは１０〜４０の整数であり、
Ｒ^４は、各出現で独立して、以下：

からなる群から選択される。

オリゴマー
モルホリノベースのサブユニットの重要な特性としては、１）安定な、非荷電、または正に帯電した骨格連結によってオリゴマー形態で連結する能力；２）形成されたポリマーが標的ＲＮＡを含む相補塩基標的核酸とハイブリダイズすることができるようにヌクレオチド塩基（例えば、アデニン、シトシン、グアニン、チミジン、ウラシル、５−メチル−シトシン、およびヒポキサンチン）を支持する能力；３）オリゴマーが哺乳類細胞中に能動的または受動的に輸送される能力；ならびに４）オリゴマーおよびオリゴマー：ＲＮＡヘテロ二本鎖のＲＮＡｓｅおよびＲＮａｓｅ Ｈ分解にそれぞれ耐える能力が挙げられる。

いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、塩基修飾または置換を含有する。例えば、本明細書に記載のアンチセンスオリゴマーの結合親和性を増加させるために、特定の核酸塩基が選択されてもよい。５−メチルシトシン置換は、核酸二本鎖の安定性を０．６〜１．２℃上昇させることが示されており、本明細書に記載のアンチセンスオリゴマーに組み込まれてもよい。一実施形態では、オリゴマーの少なくとも１つのピリミジン塩基は、５−置換ピリミジン塩基を含み、ピリミジン塩基は、シトシン、チミンおよびウラシルからなる群から選択される。一実施形態では、５−置換ピリミジン塩基は５−メチルシトシンである。別の実施形態では、オリゴマーの少なくとも１つのプリン塩基は、ヒポキサンチンを含む。

モルホリノベースのオリゴマー（アンチセンスオリゴマーを含む）は、例えば、米国特許第５，６９８，６８５号、第５，２１７，８６６号、第５，１４２，０４７号、第５，０３４，５０６号、第５，１６６，３１５号、第５，１８５，４４４号、第５，５２１，０６３号、第５，５０６，３３７号、第８，２９９，２０６号および第８，０７６，４７６号、国際特許出願公開ＷＯ／２００９／０６４４７１およびＷＯ／２０１２／０４３７３０、ならびにＳｕｍｍｅｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９７、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，７，１８７−１９５）に詳述されており、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本開示のオリゴマー化合物は、不斉中心、キラル軸、およびキラル面を有してもよく（例えば、Ｅ． Ｌ． Ｅｌｉｅｌ ａｎｄ Ｓ． Ｈ． Ｗｉｌｅｎ， Ｓｔｅｒｅｏ−ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃａｒｂｏｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９４， ｐａｇｅｓ １１１９−１１９０、およびＭａｒｃｈ， Ｊ．， ， Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ３ｄ． Ｅｄ．， Ｃｈａｐ． ４， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８５）に記載されているような）、光学異性体を含むすべての可能な異性体およびそれらの混合物に関して、ラセミ体、ラセミ混合物として、および個々のジアステレオマーとして、生じてもよい。その立体化学のいかなる指示もなく本明細書に具体的に述べられた本開示のオリゴマー化合物は、すべての可能な異性体およびそれらの混合物を表すことを意図している。

具体的には、いかなる特定の理論にも縛られることを望むものではないが、本開示のオリゴマー化合物は、本明細書に記載されるように、式（ＶＩＩＩ）：

の化合物のような非限定的な例などを含む活性化モルホリノサブユニットから調製され、式中、Ｒ^２は、式（ＶＩＩＩ）の各化合物について独立して、以下：

からなる群から選択される。

上述の式（ＶＩＩＩ）の化合物の各々は、例えば、以下に示すような対応するベータ−Ｄ−リボフラノシルから調製されてもよい。

Ｓｕｍｍｅｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ． ７：１８７−１９５ （１９９７）を参照されたい。いかなる特定の理論にも縛られることなく、２つのキラル炭素の立体化学は、例えば、アルファ−Ｌ−リボフラノシル、アルファ−Ｄ−リボフラノシル、ベータ−Ｌ−リボフラノシル、またはベータ−Ｄ−リボフラノシル出発物質の選択に基づいて、各モルホリノサブユニットの多くの可能な立体異性体が生成され得るように、合成条件下で保持される。

例えば、いくつかの実施形態では、本開示の式（ＶＩＩＩ）の化合物は、式（ＶＩＩＩａ）：

の化合物であってもよく、式中、Ｒ^２は、式（ＶＩＩＩａ）の各化合物について独立して、以下：

からなる群から選択される。

いかなる特定の理論にも縛られることを望むものではないが、１０〜４０個の式（ＶＩＩＩ）の化合物の、例えば本開示のオリゴマー化合物中への組み込みは、多数の可能な立体異性体をもたらし得る。

いかなる特定の理論にも縛られることを望むものではないが、本開示のオリゴマー化合物は１つまたは複数のリン含有サブユニット間を含み、それは各リンでキラル中心を作り出し、その各々は、当該技術分野で理解されているように、「Ｓｐ」または「Ｒｐ」立体配置と名付けられる。いかなる特定の理論にも縛られることを望むものではないが、このキラリティは、同一の化学組成を有するが、それらの原子の３次元配置が異なる立体異性体を作り出す。

いかなる特定の理論にも縛られることを望むものではないが、各リンサブユニット間連結の立体配置は、例えば、本開示のオリゴマー化合物の合成中にランダムに生じる。いかなる特定の理論にも縛られることを望むものではないが、本開示のオリゴマー化合物は、多数のリンサブユニット間連結で構成され、各リンサブユニット間連結はランダムなキラル立体配置を有するため、合成プロセスは、本開示のオリゴマー化合物の指数関数的に多くの立体異性体を生み出す。具体的には、いかなる特定の理論にも縛られることを望むものではないが、付加されるモルホリノサブユニットの各サブユニット間連結は、生成物の立体異性体の数を２倍にするので、本開示のオリゴマー化合物の従来通りの調製物は、実際は、２^Ｎ個の立体異性体（Ｎはリンサブユニット間連結の数を表す）の非常に不均一な混合物である。

したがって、別段の指示がない限り、例えば、１つまたは複数の立体中心からの１つまたは複数の結合が、当該技術分野で理解されるであろうように、「−」または「〜〜」または等価物で示されるような場合、ジアステレオマーおよびエナンチオマーの混合物、ならびに純粋なエナンチオマーおよびジアステレオマーを含む、すべてのそのような異性体が含まれる。

表１は、本明細書に記載のプロセスで提供されるモルホリノサブユニットの様々な実施形態を示す。

実施例
実施例は、例示の目的のために、および本開示のある特定の実施形態を説明するために、以下に記載されている。しかしながら、特許請求の範囲は、本明細書に記載された実施例によって何ら限定されるものではない。開示された実施形態に対する様々な変更および修正は当業者には明らかであり、本開示の化学構造、置換基、誘導体、配合物または方法に関するものを含むがこれらに限定されないそのような変更および修正が、本開示の趣旨および添付の特許請求の範囲から逸脱することなくなされてもよい。本明細書のスキーム中の構造における変数の定義は、本明細書に提示される式中の対応する位置のものに一致する。

実施例１：ＮＣＰ２アンカー合成
１． ４−フルオロ−３−ニトロ安息香酸メチル（１）の調製

１００Ｌフラスコに１２．７ｋｇの４−フルオロ−３−ニトロ安息香酸を入れ、４０ｋｇのメタノールおよび２．８２ｋｇの濃硫酸を加えた。混合物を還流（６５℃）しながら３６時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却した。３８℃で結晶が生じた。混合物を０℃で４時間保持し、その後、窒素下で濾過した。１００Ｌフラスコを洗浄し、０℃に冷却された１０ｋｇのメタノールで濾過ケーキを洗浄した。固体濾過ケーキを漏斗上で１時間乾燥し、トレーに移し、真空オーブンで室温にて一定重量まで乾燥して１３．６９５ｋｇの４−フルオロ−３−ニトロ安息香酸メチルとした（１００％収率、ＨＰＬＣ ９９％）。

２． ３−ニトロ−４−（２−オキソプロピル）安息香酸の調製
Ａ． （Ｚ）−メチル４−（３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソブタ２−エン−２−イル）−３−ニトロベンゾエート（２）

１００Ｌフラスコに、前のステップからの３．９８ｋｇの４−フルオロ−３−ニトロ安息香酸メチル（１）、９．８ｋｇのＤＭＦ、２．８１ｋｇのアセト酢酸メチルを入れた。混合物を撹拌し、０℃に冷却した。これに３．６６ｋｇのＤＢＵを、温度を５℃以下に維持しながら約４時間かけて加えた。混合物をさらに１時間撹拌した。反応温度を１５℃以下に維持しながら、反応フラスコに３７．５ｋｇの精製水中の８．１５ｋｇのクエン酸の溶液を加えた。加えた後、反応混合物をさらに３０分間撹拌し、その後、窒素下で濾過した。ウェット濾過ケーキを１４．８ｋｇの精製水と共に１００Ｌフラスコに戻した。スラリーを１０分間撹拌し、その後濾過した。ウェットケーキを再度１００Ｌフラスコに戻し、１４．８ｋｇの精製水で１０分間スラリー化し、濾過して、粗（Ｚ）−メチル４−（３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソブタ２−エン−２−イル）−３−ニトロベンゾエートとした。

Ｂ． ３−ニトロ−４−（２−オキソプロピル）安息香酸

粗（Ｚ）−メチル４−（３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソブタ２−エン−２−イル）−３−ニトロベンゾエートを窒素下で１００Ｌ反応フラスコに入れた。これに１４．２ｋｇの１，４−ジオキサンを加え、撹拌した。混合物に１６．６５５ｋｇの濃塩酸および１３．３３ｋｇの精製水の溶液（６Ｍ ＨＣｌ）を、反応混合物の温度を１５℃未満に維持しながら２時間かけて加えた。加え終えたら、反応混合物を還流（８０℃）しながら２４時間加熱し、室温まで冷却して、窒素下で濾過した。固体濾過ケーキを１４．８ｋｇの精製水で粉砕し、濾過し、１４．８ｋｇの精製水で再度粉砕し、濾過した。固体を３９．９ｋｇのＤＣＭと共に１００Ｌフラスコに戻し、１時間撹拌しながら還流した。１．５ｋｇの精製水を残っている固体を溶解するために加えた。下層の有機層を予熱した７２Ｌフラスコに分け、その後清浄な乾燥した１００Ｌフラスコに戻した。溶液を０℃に冷却し、１時間保持し、その後濾過した。固体濾過ケーキを２回、それぞれ９．８ｋｇのＤＣＭおよび５ｋｇのヘプタンの溶液で洗浄し、その後、漏斗上で乾燥した。固体をトレーに移し、一定重量まで乾燥して１．８５５ｋｇの３−ニトロ−４−（２−オキソプロピル）安息香酸とした。化合物１からの全体の収率４２％。ＨＰＬＣ ９９．４５％。

３． Ｎ−トリチルピペラジンコハク酸塩（ＮＴＰ）の調製

７２Ｌジャケット付きフラスコに窒素下で１．８０５ｋｇの塩化トリフェニルメチルおよび８．３ｋｇのトルエンを入れた（ＴＰＣ溶液）。混合物を固体が溶解するまで撹拌した。１００Ｌジャケット付き反応フラスコに窒素下で５．６１ｋｇのピペラジン、１９．９ｋｇのトルエン、および３．７２ｋｇのメタノールを加えた。混合物を撹拌し、０℃に冷却した。これにＴＰＣ溶液を少しずつ、反応温度を１０℃以下に維持しながら４時間かけてゆっくりと加えた。混合物を１０℃で１．５時間撹拌し、その後、１４℃に昇温させた。３２．６ｋｇの精製水を７２Ｌフラスコに入れ、その後、内部バッチ温度を２０±５℃に維持しながら１００Ｌフラスコに移した。層を分かれさせ、下層の水層を分離および保存した。有機層を３回、各３２ｋｇの精製水で抽出し、水層を分離し、保存しておいた水溶液と合わせた。

残っている有機層を１８℃に冷却し、１０．８７ｋｇ精製水中の８４７ｇのコハク酸の溶液を有機層に少しずつゆっくりと加えた。混合物を２０±５℃で１．７５時間撹拌した。混合物を濾過し、固体を２ｋｇのＴＢＭＥおよび２ｋｇのアセトンで洗浄し、その後、漏斗上で乾燥した。濾過ケーキを２回、各５．７ｋｇのアセトンで粉砕し、粉砕と粉砕の間に濾過し、１ｋｇのアセトンで洗浄した。固体を漏斗上で乾燥し、その後、トレーに移し、真空オーブンで室温にて一定重量まで乾燥して２．３２ｋｇのＮＴＰとした。収率８０％。

４． （４−（２−ヒドロキシプロピル）−３−ニトロフェニル）（４−トリチルピペラジン−１−イル）メタノンの調製
Ａ． １−（２−ニトロ−４（４−トリチルピペラジン−１−カルボニル）フェニル）プロパン−２−オンの調製

１００Ｌジャケット付きフラスコに窒素下で２ｋｇの３−ニトロ−４−（２−オキソプロピル）安息香酸（３）、１８．３ｋｇのＤＣＭ、１．８４５ｋｇのＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ．ＨＣｌ）を入れた。均一な混合物が形成されるまで溶液を撹拌した。３．０４８ｋｇのＮＴＰを３０分以上かけて室温で加え、８時間撹拌した。５．４４ｋｇの精製水を反応混合物に加え、３０分間撹拌した。層を分離させ、生成物を含有する下層の有機層を排出および保存した。水層を５．６５ｋｇのＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機層を４．０８ｋｇの精製水中の１．０８ｋｇの塩化ナトリウムの溶液で洗浄した。有機層を１．０６８ｋｇの硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。硫酸ナトリウムを１．３ｋｇのＤＣＭで洗浄した。合わせた有機層を２５２ｇのシリカゲルでスラリー化し、２５２ｇのシリカゲルのベッドを含有する濾過用漏斗を通して濾過した。シリカゲルベッドを２ｋｇのＤＣＭで洗浄した。合わせた有機層をロータリーエバポレータで留去した。４．８ｋｇのＴＨＦを残留物に加え、その後、ＴＨＦ中の粗１−（２−ニトロ−４（４−トリチルピペラジン−１−カルボニル）フェニル）プロパン−２−オンが２．５倍量に達するまでロータリーエバポレータで留去した。

Ｂ． （４−（２−ヒドロキシプロピル）−３−ニトロフェニル）（４−トリチルピペラジン−１−イル）メタノン（５）の調製

１００Ｌジャケット付きフラスコに窒素下で前のステップからの３６００ｇの４および９８００ｇのＴＨＦを入れた。撹拌した溶液を５℃以下に冷却した。溶液を１１５２５ｇのエタノールで希釈し、１９４ｇの水素化ホウ素ナトリウムを５℃以下で約２時間かけて加えた。反応混合物を５℃以下でさらに２時間撹拌した。約３ｋｇの水中の約１．１ｋｇの塩化アンモニウムの溶液を、温度を１０℃以下に維持するためにゆっくりと加えることにより、反応をクエンチした。反応混合物をさらに３０分間撹拌し、濾過して無機物を除去し、１００Ｌジャケット付きフラスコに再び入れ、２３ｋｇのＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、水層をさらに２回、各４．７ｋｇのＤＣＭで抽出した。合わせた有機層を、約３ｋｇの水中の約８００ｇの塩化ナトリウムの溶液で洗浄し、その後２．７ｋｇの硫酸ナトリウムで乾燥した。懸濁液を濾過し、濾過ケーキを２ｋｇのＤＣＭで洗浄した。合わせた濾液を２．０倍量に濃縮し、３６０ｇの酢酸エチルで希釈し、留去した。粗生成物を、窒素下でＤＣＭで充填した４ｋｇのシリカのシリカゲルカラムにかけ、７．２ｋｇのＤＣＭ中の２．３ｋｇの酢酸エチルで溶出した。合わせた画分を留去し、残留物を１１．７ｋｇのトルエンに取り入れた。トルエン溶液を濾過し、濾過ケーキを２回、各２ｋｇのトルエンで洗浄した。濾過ケーキを一定重量まで乾燥して２．２７５ｋｇの化合物５とした（化合物３からの収率４６％）、ＨＰＬＣ ９６．９９％。

５． 炭酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（１−（２−ニトロ−４−（４−トリフェニルメチルピペラジン−１−カルボニル）フェニル）プロパン−２−イル）（ＮＣＰ２アンカー）の調製

１００Ｌジャケット付きフラスコに窒素下で４．３ｋｇの化合物５（重量は^１Ｈ ＮＭＲによる残留トルエンに基づいて調整され、この後のすべての試薬はそれにしたがってスケールを合わせた）および１２．７ｋｇのピリジンを入れた。これに３．１６０ｋｇのＤＳＣ（^１Ｈ ＮＭＲで７８．９１重量％）を、内部温度を３５℃以下に維持しながら入れた。反応混合物を周囲条件で約２２時間熟成させ、その後濾過した。濾過ケーキを２００ｇのピリジンで洗浄した。濾液体積の１／２を各々含む２つのバッチで、約５０ｋｇの水中の約１１ｋｇのクエン酸の溶液を含有する１００Ｌジャケット付きフラスコに濾液をゆっくりと入れ、３０分間撹拌して固体を沈殿させた。固体を濾過用漏斗で回収し、１回の洗浄につき４．３ｋｇの水で２回洗浄し、濾過用漏斗上で真空乾燥した。

合わせた固体を１００Ｌジャケット付きフラスコに入れ、２８ｋｇのＤＣＭ中に溶解させ、４．３ｋｇの水中の９００ｇの炭酸カリウムの溶液で洗浄した。１時間後、層を分離させ、水層を除去した。有機層を１０ｋｇの水で洗浄し、分離し、３．５ｋｇの硫酸ナトリウムで乾燥した。ＤＣＭを濾過し、留去し、真空乾燥して６．１６ｋｇのＮＣＰ２アンカーとした（１１４％収率）。

実施例２：アンカー担持樹脂合成
７５Ｌ固相合成反応器に、約５２ＬのＮＭＰおよび２６００ｇのアミノメチルポリスチレン樹脂を入れた。樹脂をＮＭＰ中で撹拌し、約２時間膨潤させ、その後排出した。樹脂を１回の洗浄につき約３９ＬのＤＣＭで２回洗浄し、その後１回の洗浄につき３９Ｌの中和溶液で２回洗浄し、その後１回の洗浄につき３９ＬのＤＣＭで２回洗浄した。撹拌中の樹脂溶液にＮＣＰ２アンカー溶液をゆっくりと加え、室温で２４時間撹拌し、排出した。樹脂を１回の洗浄につき３９ＬのＮＭＰで４回洗浄し、１回の洗浄につき３９ＬのＤＣＭで６回洗浄した。樹脂をＤＥＤＣキャッピング溶液の１／２で３０分間処理および撹拌し、排出し、２回目の１／２のＤＥＤＣキャッピング溶液で３０分間処理および撹拌し、排出した。樹脂を１回の洗浄につき３９ＬのＤＣＭで６回洗浄し、その後オーブンで一定重量まで乾燥して３５７３．７１ｇのアンカー担持樹脂とした。

実施例３：活性化ＥＧ３テールの調製
１．トリチルピペラジンフェニルカルバメート３５の調製

冷却したジクロロメタン（６ｍＬ／ｇ ＮＴＰ）中のＮＴＰの懸濁液に、水（４ｍＬ／ｇ炭酸カリウム）中の炭酸カリウム（３．２等量）の溶液を加えた。この２相混合物に、ジクロロメタン（２ｇ／ｇクロロギ酸フェニル）中のクロロギ酸フェニル（１．０３等量）の溶液をゆっくりと加えた。反応混合物を２０℃に加温した。反応が完了したら（１〜２時間）、層を分離した。有機層を水洗し、無水炭酸カリウムで乾燥した。生成物３５をアセトニトリルからの結晶化により単離した。収率＝８０％。

２．カルバメートアルコール（３６）の調製

水素化ナトリウム（１．２等量）を１−メチル−２−ピロリドン（３２ｍＬ／ｇ水素化ナトリウム）中に懸濁させた。この懸濁液にトリエチレングリコール（１０．０等量）および化合物３５（１．０等量）を加えた。結果として生じるスラリーを９５℃に加熱した。反応が完了したら（１〜２時間）、混合物を２０℃に冷却した。この混合物に３０％ジクロロメタン／メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ｖ：ｖ）および水を加えた。生成物含有有機層をＮａＯＨ水溶液、コハク酸水溶液、および飽和塩化ナトリウム水溶液で連続して洗浄した。生成物３６をジクロロメタン／メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル／ヘプタンからの結晶化により単離した。収率＝９０％。

３．ＥＧ３テール酸（３７）の調製

テトラヒドロフラン（７ｍＬ／ｇ ３６）中の化合物３６の溶液に、無水コハク酸（２．０等量）およびＤＭＡＰ（０．５等量）を加えた。混合物を５０℃に加熱した。反応が完了したら（５時間）、混合物を２０℃に冷却し、ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ８．５に調整した。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを加え、生成物を水層に抽出した。ジクロロメタンを加え、混合物をクエン酸水溶液でｐＨ３に調整した。生成物含有有機層をｐＨ＝３のクエン酸緩衝液と飽和塩化ナトリウム水溶液との混合物で洗浄した。この３７のジクロロメタン溶液を、化合物３８の調製に単離せずに使用した。

４．活性化ＥＧ３テール（３８）の調製

化合物３７の溶液に、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボン酸イミド（ＨＯＮＢ）（１．０２当量）、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．３４当量）、およびその後１−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）（１．１当量）を加えた。混合物を５５℃に加熱した。反応が完了したら（４〜５時間）、混合物を２０℃に冷却し、１：１の０．２Ｍクエン酸／ブラインおよびブラインで連続して洗浄した。ジクロロメタン溶液をアセトン、およびその後Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶媒交換し、生成物をアセトン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドから飽和塩化ナトリウム水溶液への沈殿により単離した。粗生成物を水中で数回再スラリー化して残留Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよび塩を除去した。化合物３６からの活性化ＥＧ３テール３８の収率＝７０％。

実施例４：Ｇｏｌｏｄｉｒｓｅｎ［オリゴマー化合物（ＸＩＩ）］粗原薬の５０Ｌ固相合成
１．材料

出発物質の化学構造：
Ａ．活性化ＥＧ３テール

Ｂ．活性化Ｃサブユニット（調製については、米国特許第８，０６７，５７１号を参照）

Ｃ．活性化Ａサブユニット（調製については、米国特許第８，０６７，５７１号を参照）

Ｄ．活性化ＤＰＧサブユニット（調製については、ＷＯ２００９／０６４４７１を参照）

Ｅ．活性化Ｔサブユニット（調製については、ＷＯ２０１３／０８２５５１を参照）

Ｆ．アンカー担持樹脂

式中、Ｒ^１は支持媒体である。

２．Ｇｏｌｏｄｉｒｓｅｎ粗原薬の合成
Ａ．樹脂膨潤
７５０ｇのアンカー担持樹脂および１０．５ＬのＮＭＰを５０Ｌのシラン処理した反応器に入れ、３時間撹拌した。ＮＭＰを排出し、アンカー担持樹脂を各５．５ＬのＤＣＭで２回、各５．５Ｌの３０％ ＴＦＥ／ＤＣＭで２回洗浄した。

Ｂ．サイクル０：ＥＧ３テールカップリング
アンカー担持樹脂を各５．５Ｌの３０％ ＴＦＥ／ＤＣＭで３回洗浄し、排出し、５．５ＬのＣＹＦＴＡ溶液で１５分間洗浄し、排出し、再度５．５ＬのＣＹＴＦＡ溶液で１５分間洗浄し、排出せずに１２２ｍＬの１：１ ＮＥＭ／ＤＣＭを入れ、懸濁液を２分間撹拌し、排出した。樹脂を５．５Ｌの中和溶液で１０分間１回洗浄し、排出し、５．５Ｌの中和溶液で５分間２回洗浄し、排出し、その後各５．５ＬのＤＣＭで２回洗浄し、排出した。３ＬのＤＭＩ中の７０６．２ｇの活性化ＥＧ３テール（ＭＷ ７６５．８５）および２３４ｍＬのＮＥＭの溶液を樹脂に入れ、室温で３時間撹拌し、排出した。樹脂を５．５Ｌの中和溶液で１０分間１回洗浄し、排出し、５．５Ｌの中和溶液で５分間１回洗浄し、排出し、５．５ＬのＤＣＭで１回洗浄し、排出した。２６８０ｍＬのＮＭＰ中の３７４．８ｇの無水安息香酸および１９５ｍＬのＮＥＭの溶液を入れ、１５分間撹拌し、排出した。樹脂を５．５Ｌの中和溶液で１０分間１回洗浄し、排出し、５．５Ｌの中和溶液で５分間１回洗浄し、排出し、５．５ＬのＤＣＭで１回洗浄し、排出し、各５．５Ｌの３０％ ＴＦＥ／ＤＣＭで２回洗浄した。樹脂を５．５Ｌの３０％ ＴＦＥ／ＤＣＭ中に懸濁させ、１４時間保持した。

Ｃ．サブユニットカップリングサイクル１〜３０
ｉ．カップリング前処理
図１に記載されているような各カップリングサイクルの前に、樹脂を：１）３０％ ＴＦＥ／ＤＣＭで洗浄し、２）ａ）ＣＹＴＦＡ溶液で１５分間処理し、排出し、ｂ）ＣＹＴＦＡ溶液で１５分間処理して１：１ ＮＥＭ／ＤＣＭを加え、撹拌し、排出し、３）中和溶液で３回撹拌し、４）ＤＣＭで２回洗浄した。表４を参照。

ｉｉ．カップリング後処理
各サブユニット溶液を表４に記載されているように排出した後、樹脂を：１）ＤＣＭで洗浄し、２）３０％ ＴＦＥ／ＤＣＭで３回洗浄した。樹脂を次のカップリングサイクルの前にある時間保持する場合、第３のＴＦＥ／ＤＣＭ洗浄液を排出せず、樹脂を前述のＴＦＥ／ＤＣＭ洗浄溶液中に保持した。表４を参照。

ｉｉｉ．活性化サブユニットカップリングサイクル
カップリングサイクルを、表４に記載されているように実施した。

ｉｖ．最終ＩＰＡ洗浄
最終カップリングステップを表４に記載されているように実施した後、樹脂を各１９．５ＬのＩＰＡで８回洗浄し、室温で約６３．５時間、乾燥重量４８５７．９ｇまで真空乾燥した。

Ｄ．切断
上記樹脂結合エテプリルセン（Ｅｔｅｐｌｉｓｅｎ）粗原薬を２つのロットに分け、各ロットを以下のように処理した。１６１９．３ｇのロットの樹脂を：１）１０ＬのＮＭＰと共に２時間撹拌し、その後ＮＭＰを排出し、２）各１０Ｌの３０％ ＴＦＥ／ＤＣＭで３回洗浄し、３）１０ＬのＣＹＴＦＡ溶液で１５分間処理し、４）その後、１５分間１０ＬのＣＹＴＦＡ溶液に１３０ｍｌの１：１ ＮＥＭ／ＤＣＭを加え、２分間撹拌し、排出した。樹脂を各１０Ｌの中和溶液で３回処理し、１０ＬのＤＣＭで６回、各１０ＬのＮＭＰで８回洗浄した。樹脂を１５３０．４ｇのＤＴＴの切断溶液および６．９６ＬのＮＭＰ中の２９８０ ＤＢＵで２時間処理して樹脂からエテプリルセン（Ｅｔｅｐｌｉｓｅｎ）粗原薬を取り外した。切断溶液を排出し、別の容器に保持した。反応器および樹脂を、４．９７ＬのＮＭＰで洗浄し、それを切断溶液と合わせた。

[1] ｍｌは１：１ ＮＥＭ／ＤＣＭの量を示す

Ｅ．脱保護
切断溶液とＮＭＰ洗浄とを合わせたものを圧力容器に移し、冷凍庫で−１０〜−２５℃の温度に冷やした３９．８ＬのＮＨ_４ＯＨ（ＮＨ_３・Ｈ_２Ｏ）を加えた。圧力容器を密閉し、４５℃に１６時間加熱し、その後２５℃に冷却させた。このＧｏｌｏｄｉｒｓｅｎ粗原薬を含有する脱保護溶液を溶媒除去の前に精製水で３：１に希釈した。溶媒除去の間、脱保護溶液を２Ｍリン酸でｐＨ ３．０に調整し、その後ＮＨ_４ＯＨでｐＨ ８．０３に調整した。ＨＰＬＣ：Ｃ１８ ７７．５５２％（図１）およびＳＣＸ−１０ ７３．７６８％（図２）。

実施例５：Ｇｏｌｏｄｉｒｓｅｎ粗原薬の精製
Ｇｏｌｏｄｉｒｓｅｎ粗原薬を含有する実施例４のパートＥからの脱保護溶液を、ＴｏｙｏＰｅａｒｌ Ｓｕｐｅｒ−Ｑ ６５０Ｓ陰イオン交換樹脂（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）のカラムに充填し、１７カラム容積にわたって０〜３５％Ｂの勾配で溶出し（緩衝液Ａ：１０ｍＭ水酸化ナトリウム；緩衝液Ｂ：１０ｍＭ水酸化ナトリウム中の１Ｍ塩化ナトリウム）、許容される純度の画分（Ｃ１８およびＳＣＸ ＨＰＬＣ）を貯めて精製された薬物生成物溶液とした。ＨＰＬＣ：９３．５７１％（Ｃ１８；図３） ８８．２７０％（ＳＣＸ；図４）。

精製された原薬溶液を脱塩および凍結乾燥して１４５０．７２ｇの精製されたＧｏｌｏｄｉｒｓｅｎ原薬とした。収率５４．５６％；ＨＰＬＣ：９３．５３１％（図５；Ｃ１８） ８８．３５４％（図６；ＳＣＸ）。

参照による組み込み
本出願を通じて引用されるすべての参考文献の内容（文献参照、発行された特許、公開特許出願、および同時係属中の特許出願を含む）は、その全体が本明細書に明示的に組み込まれる。別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術的および科学的用語は、当業者に一般に知られている意味と一致する。

均等物
当業者は、本明細書に記載された開示の特定の実施形態の多くの均等物を、認識するか、または所定の実験方法だけを用いて確認することができるであろう。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。

Claims (23)

1. 式（Ａ）：
   
   （式中、ｎは１０〜４０の整数であり、各Ｒ^２は、各出現について独立して、以下：
   
   からなる群から選択される）のオリゴマー化合物を調製するためのプロセスであって、以下の連続したステップ：
   （ａ）式（Ａ１）：
   
   （式中、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択される）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（ＩＩ）：
   
   （式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を形成するステップ；
   （ｂ）式（ＩＩ）の化合物を式（Ａ２）：
   
   （式中、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択される）の化合物と接触させて式（Ａ３）：
   
   （式中、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択される）の化合物を形成するステップ；
   （ｃ）式（Ａ３）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（ＩＶ）：
   
   （式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を形成するステップ；
   （ｄ）式（ＩＶ）の化合物を式（Ａ４）：
   
   （式中、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は以下：
   
   からなる群から選択される）の化合物と接触させて式（Ａ５）：
   
   （式中、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は以下：
   
   から選択される）の化合物を形成するステップ；
   （ｅ）以下の連続したステップ：
   （ｅ１）直前のステップによって形成された生成物を脱ブロッキング剤と接触させるステップ、および
   （ｅ２）直前のステップによって形成された化合物を式（Ａ８）：
   
   （式中、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は、式（Ａ８）の各化合物について独立して、以下：
   
   からなる群から選択される）の化合物と接触させて式（Ａ９）：
   
   （式中、ｎは１０〜４０の整数であり、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：
   
   からなる群から選択される）の化合物を形成するステップ
   のｎ−１回の反復を実施するステップ；
   （ｆ）式（Ａ９）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（Ａ１０）：
   
   （式中、ｎは１０〜４０の整数であり、Ｒ^１は支持媒体であり、Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：
   
   からなる群から選択される）の化合物を形成するステップ；
   （ｇ）式（Ａ１０）の化合物を切断剤と接触させて式（Ａ１１）：
   
   （式中、ｎは１０〜４０の整数であり、Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：
   
   からなる群から選択される）の化合物を形成するステップ；ならびに
   （ｇ）式（Ａ１１）の化合物を脱保護剤と接触させて式（Ａ）のオリゴマー化合物を形成するステップ
   を含むプロセス。
2. 式（Ａ４）の化合物が式（Ａ４ａ）：
   
   の化合物であり、式中、
   Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、
   Ｒ^４は、以下：
   
   から選択される、
   請求項１に記載のプロセス。
3. 式（Ａ５）の化合物が式（Ａ５ａ）：
   
   の化合物であり、式中、
   Ｒ^１は支持媒体であり、
   Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、
   Ｒ^４は、以下：
   
   から選択される、
   請求項１または２に記載のプロセス。
4. 式（Ａ８）の化合物が式（Ａ８ａ）：
   
   の化合物であり、式中、
   Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、
   Ｒ^４は、式（Ａ８ａ）の化合物の各出現で独立して、以下：
   
   からなる群から選択される、
   請求項１〜３のいずれか一項に記載のプロセス。
5. 式（Ａ９）の化合物が式（Ａ９ａ）：
   
   の化合物であり、式中、
   ｎは１０〜４０の整数であり、
   Ｒ^１は支持媒体であり、
   Ｒ^３はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシトリチルからなる群から選択され、
   Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：
   
   からなる群から選択される、
   請求項１〜４のいずれか一項に記載のプロセス。
6. 式（Ａ１０）の化合物が式（Ａ１０ａ）：
   
   の化合物であり、式中、
   ｎは１０〜４０の整数であり、
   Ｒ^１は支持媒体であり、
   Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：
   
   からなる群から選択される、
   請求項１〜５のいずれか一項に記載のプロセス。
7. 式（Ａ１１）の化合物が式（Ａ１１ａ）：
   
   の化合物であり、式中、
   ｎは１０〜４０の整数であり、
   Ｒ^４は、各出現について独立して、以下：
   
   からなる群から選択される、
   請求項１〜６のいずれか一項に記載のプロセス。
8. 式（Ａ）のオリゴマー化合物について、ｎは２５であり、Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：
   
   であり、
   式（Ａ）のオリゴマー化合物は式（Ｇ）：
   
   の化合物、またはその医薬的に許容される塩である、
   請求項１〜７のいずれか一項に記載のプロセス。
9. 式（Ｇ）のオリゴマー化合物は式（ＸＩＩ）：
   
   のオリゴマー化合物、またはその医薬的に許容される塩である、請求項１〜８のいずれか一項に記載のプロセス。
10. Ｒ^３は、各出現でトリチルである、請求項１〜９のいずれか一項に記載のプロセス。
11. 式（Ｇ）：
    
    のオリゴマー化合物を調製するためのプロセスであって、以下の連続したステップ：
    （ａ）式（Ｉ）：
    
    （式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（ＩＩ）：
    
    （式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を形成するステップ；
    （ｂ）式（ＩＩ）の化合物を化合物（Ｂ）：
    
    と接触させて式（ＩＩＩ）：
    
    （式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を形成するステップ；
    （ｃ）式（ＩＩＩ）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（ＩＶ）：
    
    （式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を形成するステップ；
    （ｄ）式（ＩＶ）の化合物を式（ＤＰＧ）：
    
    の化合物と接触させて式（Ｖ）：
    
    （式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を形成するステップ；
    （ｅ）式（Ｖ）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（ＶＩ）：
    
    （式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を形成するステップ；
    （ｆ）式（ＶＩ）の化合物を式（Ｔ）：
    
    の化合物と接触させて式（ＶＩＩ）：
    
    （式中、Ｒ^１は支持媒体である）の化合物を形成するステップ；
    （ｇ）以下の連続したステップ：
    （ｇ１）直前のステップによって形成された生成物を脱ブロッキング剤と接触させるステップ、および
    （ｇ２）直前のステップによって形成された化合物を式（ＶＩＩＩ）：
    
    （式中、Ｒ^２は、式（ＶＩＩＩ）の各化合物について独立して、以下：
    
    からなる群から選択され、各反復１〜２３について、Ｒ^２は、以下：
    
    である）の化合物と接触させて式（ＩＸ）：
    
    （式中、
    Ｒ^１は支持媒体であり、
    Ｒ^２は、各出現について独立して、以下：
    
    からなる群から選択され、
    Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：
    
    である）の化合物を形成するステップ
    の２３回の反復を実施するステップ；
    （ｈ）式（ＩＸ）の化合物を脱ブロッキング剤と接触させて式（Ｘ）：
    
    （式中、
    Ｒ^１は支持媒体であり、
    Ｒ^２は、各出現について独立して、以下：
    
    からなる群から選択され、
    Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：
    
    である）の化合物を形成するステップ；
    （ｉ）式（Ｘ）の化合物を切断剤と接触させて式（ＸＩ）：
    
    （式中、Ｒ^２は、各出現について独立して、以下：
    
    からなる群から選択され、
    Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：
    
    である）の化合物を形成するステップ；ならびに
    （ｊ）式（ＸＩ）の化合物を脱保護剤と接触させて式（Ｇ）のオリゴマー化合物を形成するステップ
    を含むプロセス。
12. ステップ（ｄ）、ステップ（ｆ）またはステップ（ｇ２）が、それぞれ式（ＩＶ）の化合物、式（ＶＩ）の化合物または前記直前のステップによって形成された化合物を、キャッピング剤と接触させることをさらに含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のプロセス。
13. 各ステップで使用される前記脱ブロッキング剤は、シアノ酢酸である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のプロセス。
14. 前記ハロゲン化酸は、クロロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリクロロ酢酸、フルオロ酢酸、ジフルオロ酢酸、およびトリフルオロ酢酸からなる群から選択される、請求項１３に記載のプロセス。
15. 前記支持媒体は、ガラス、修飾または官能化ガラス、プラスチック（アクリル、ポリスチレン（例えば、１％ジビニルベンゼン架橋ポリスチレン）、スチレンと他の材料とのコポリマー、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリブチレン、ポリウレタン、およびテフロン（登録商標）を含む）、多糖類、ナイロンまたはニトロセルロース、セラミックス、樹脂、シリカまたはシリカ系材料（シリコンおよび修飾シリコンを含む）、炭素、金属、ならびに光ファイバ束からなる群から選択される材料を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のプロセス。
16. 式（Ｇ）のオリゴマー化合物が式（ＸＩＩ）：
    
    のオリゴマー化合物である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のプロセス。
17. 式（ＩＸ）：
    
    の化合物であって、式中、
    Ｒ^１は支持媒体であり、
    Ｒ^２は、各出現で独立して、以下：
    
    からなる群から選択され、
    Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：
    
    である、
    化合物、またはその医薬的に許容される塩。
18. 式（ＩＸ）の化合物が式（ＩＸａ）：
    
    の化合物であり、式中、
    Ｒ^１は支持媒体であり、
    Ｒ^２は、各出現で独立して、以下：
    
    からなる群から選択され、
    Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：
    
    である、
    請求項１７に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
19. 式（Ｘ）：
    
    の化合物であって、式中、
    Ｒ^１は支持媒体であり、
    Ｒ^２は、各出現で独立して、以下：
    
    からなる群から選択され、
    Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：
    
    である、
    化合物、またはその医薬的に許容される塩。
20. 式（Ｘ）の化合物が式（Ｘａ）：
    
    の化合物であり、式中、
    Ｒ^１は支持媒体であり、
    Ｒ^２は、各出現について独立して、以下：
    
    からなる群から選択され、
    Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：
    
    である、
    請求項１９に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
21. 前記支持媒体は１％ジビニルベンゼン架橋ポリスチレンを含む、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の化合物。
22. 式（ＸＩ）：
    
    の化合物であって、式中、
    Ｒ^２は、各出現で独立して、以下：
    
    からなる群から選択され、
    Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：
    
    である、
    化合物、またはその医薬的に許容される塩。
23. 式（ＸＩ）の化合物が式（ＸＩａ）：
    
    の化合物であり、式中、
    Ｒ^２は、各出現で独立して、以下：
    
    からなる群から選択され、
    Ｒ^２は５’から３’へ向かって１〜２５の各位置で以下：
    
    である、
    請求項２２に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。