JP2019509252A - 組織の区別、例えば、手術中の可視化のための、イメージングシステムおよび方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2015年12月15日に出願した米国仮出願第62/267,676号および2016年6月13日に出願した米国仮出願第62/349,538号の利益を主張する。これらの出願の内容は、それらの全体が、これにより本明細書に参考として援用される。
この発明は、国立衛生研究所(National Institutes of Health)によって付与された助成金番号CA199081の下、政府の支援を受けてなされた。政府は、この発明に一定の権利を有する。
本明細書は、配列表を参照する(2016年12月15日に「SEQUENCE LISTING2003080−1277.txt」という名称のテキストファイルとして電子的に提出された)。このテキストファイルは2016年12月13日に作成され、サイズは1.75キロバイトである。配列表の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、例えば手術中に、異なるリンパ排液経路間をグラフィカルに区別するための、および異なる組織(例えば、神経、例えば副甲状腺)間をグラフィカルに区別するための方法に一般的に関する。より詳細には、ある特定の実施形態では、本発明は、例えばリンパ水腫の発生を回避するための、またはリンパ水腫の処置での移植のために節を同定するための、逆リンパ多重マッピング(reverse lymphatic multiplex mapping)、外科的手順の間のリンパ節の区別のための多重化リアルタイム方法に関する。さらに、ある特定の実施形態では、本発明は、神経再構築および他の手術のための、神経(例えば、感覚神経対運動神経)の視覚的区別に関する。
神経変性は手術域内の神経構造を同定する、手術している外科医の技量を低下させるが、それは外科的修復の取り組みを複雑にし、および/または制限する可能性がある。例えばがん切除からの慢性脱神経損傷は片側性筋肉麻痺につながり、それは、動作を制限し、機能的障害(すなわち、瞬目反射の喪失)をもたらす。神経の外科的再構築は、機能を再確立することができる。適切な再構築アプローチの選択は、欠損局在化および損傷からのタイミング間隔に依存する。
さらに、例えばリンパ水腫の外科処置においてリンパ節移行を促進するために、リンパマッピングのための高感度の多重化リアルタイム方法の必要性がまだある。さらに、外科的手順の間に異なるタイプの神経(例えば、運動神経対感覚神経)を区別する必要性は、決定的に重要である。
本開示がより容易に理解されるように、ある特定の用語を先ず下で定義する。以下の用語および他の用語の追加の定義は、本明細書全体で説明される。
明細書全体で、組成物が特定の構成成分を有する(having)、含む(including)もしくは含む(comprising)と記載される場合、または、方法が特定のステップを有する(having)、含む(including)もしくは含む(comprising)と記載される場合、さらに、列挙される構成成分から本質的になる(consist essentially of)、またはそれからなる(consist of)本発明の組成物があること、および列挙される加工ステップから本質的になる(consist essentially of)、またはそれからなる(consist of)本発明による方法があることが考えられる。
・ペプチド(例えば、環状または線状)の配列におけるNメチル化アミノ酸などの非天然アミノ酸の使用;
・二次構造モチーフ(例えば、アルファヘリックス構造)を有するペプチド(例えば、環状または線状)の使用;および
・特異性を増加させ、異なるタイプのヒト神経を区別するためのファージディスプレイの使用。
本実施例で使用されるペプチドは17AANP41であり、それはコア配列NTQTLAKAPEHT(配列番号3)を含む。しかし、本実施例は、提供される17AA神経結合性ペプチドに限定されない。例えば、本明細書に記載されるように、他のペプチド(例えば、抗副甲状腺ホルモン(PTH)およびGATA抗体(例えばGATA1抗体、例えばGATA2抗体、例えばGATA3抗体、例えばGATA4抗体、例えばGATA5抗体)、例えば抗ChAT、例えば抗CGRP)を、様々な実施形態で使用することができる。
運動神経マッピングのためにC’ドットイムノコンジュゲートを作製するためのリガンドとして、市販されている抗ChAT抗体断片(例えば、scFvまたはFab)を使用した。抗体断片をPBS緩衝液(pH=7.5)中で、N−アセチル−L−システインNHSエステル(1:10のモル比)と一晩反応させ、その後バイオゲルカラムによって精製した。結果として得られたシステイン残基を有する精製抗体断片を、MAL−PEG−C’ドットに次に加えた。後者の粒子コンジュゲートは、その表面にマレイミド官能基を組み込んでいた。コンジュゲーション反応は、粒子対抗体断片の1:5のモル比で、PBS緩衝液(pH=7.5)中で実行した。ゲル浸透クロマトグラフィーおよびセファデックスカラムを使用して、生成物を精製した。手術中の可視化のためにいくつかの近赤外色素(例えば、Cy5.5)を封入するために、C’ドットを合成した。
37アミノ酸神経ペプチドである、カルシトニン遺伝子関連ペプチド(CGRP)は、感覚ニューロンにおいて豊富であり、したがって、この神経タイプを同定するための魅力的な標的として役立つ。
ヒト神経組織試料を使用して、ex vivo実験を実行した。使用した組織試料は、National Disease Research Interchange(NDRI)によって新たに切除され、得られた、死体顔面神経および顔面腓腹神経であった。組織を24ウェルプレートにおいて調製し、PBSで洗浄し、次に対照とともに、15μMのC’ドットコンジュゲートと室温で30分間インキュベートした。C’ドットコンジュゲート濃度は、蛍光プレートリーダーを使用して決定した。粒子コンジュゲートとの約20〜30分間のインキュベーションの後、組織試料をPBSによる数ラウンドの洗浄に供した。IVISスペクトルイメージングシステムを使用して、プレートを画像化した。PerkinElmerソフトウェアを使用して、神経および筋肉の検体について蛍光シグナルの関心領域(ROI)分析を実行する。
図1A〜1Dは、マウスの座骨神経への神経結合性ペプチド(NBP)−C’ドット(60μM)の局所適用を示す。画像は、Zeiss Stereo Lumar.V12で取得した。曝露時間は、600ミリ秒であった。17アミノ酸(AA)環状ペプチドコンジュゲート化C’ドットの60μMを、ヌードマウスの坐骨神経に適用した。C’ドットを1、3、5および10分間インキュベートし、続いてPBS緩衝液により3回洗浄した。蛍光シグナルの強度および分布を観察するために、Zeiss stereo lumarスコープを使用した。手術の間、マウスはイソフルラン麻酔下におかれた。
本明細書に記載されるように、比(例えば、値の範囲)が提供される:環状ペプチド−C’ドット対環状ペプチドだけ:約2から約6;および環状ペプチド−C’ドット対スクランブル化ペプチド−C’ドット:約3から約6。
図4A〜4Bは、環状ペプチド−色素コンジュゲートと比較した環状ペプチド官能化C’ドット、線状ペプチド官能化C’ドットおよびスクランブル化(対照)ペプチド官能化C’ドット(15μM)のヒト顔面神経取り込みを示す。ヒト神経検体についての、ペプチド−色素(Cy5.5)コンジュゲートをペプチド官能化深赤色/NIR色素含有(Cy5.5)C’ドットと比較するex vivo結合/取り込み研究を実行した。ヒト顔面神経を0.5cm長の断片に切り、ペプチドまたはペプチド結合C’ドットの15μM溶液中、室温で40分間インキュベートし、続いてリン酸緩衝食塩水で複数回洗浄した。IVISスペクトルイメージングによってインキュベーションから40分後に得られた非侵襲性関心領域(ROI)分析は、以下の通りにペプチド結合C’ドットに曝露した神経組織において最高から最低の光学シグナルを実証した:17AA環状ペプチド結合C’ドットを使用して検出されたシグナルは、17AA環状ペプチドを使用して検出されたシグナルより大きく、それは、17AA線状ペプチド結合C’ドットを使用したシグナルより大きく、それは、スクランブル化環状ペプチド結合C’ドットを使用したシグナルより大きかった。
図5A〜5Bは、ペプチド−Cy5.5コンジュゲート対環状およびスクランブル化(対照)ペプチド官能化Cy5.5−C’ドット(15μM)のヒトex vivo顔面神経取り込みを示す。ヒト神経検体についての、ペプチド−色素コンジュゲートをペプチド官能化深赤色/NIR色素含有(Cy5.5)C’ドットと比較するex vivo結合/取り込み研究。ヒト顔面神経を0.5cm長の断片に切り、ペプチドまたはペプチド結合C’ドットの15μM溶液中、室温で40分間わずかな振盪を加えてインキュベートし、続いてリン酸緩衝食塩水で3回洗浄した。インキュベーションから40分後に、関心領域分析がIVISスペクトルイメージングにより得られた;最高から最低の光学シグナルが、以下の通りに見出された:環状ペプチド結合C’ドットから検出されたシグナルは環状ペプチドから検出されたシグナルより大きく、スクランブル化ペプチド結合C’ドットから検出されたシグナルより大きかった。
図6A〜6Cは、NBP−Cy5.5コンジュゲート対NBP−C’ドットのex vivoヒト顔面神経取り込みを示す。環状ペプチド結合C’ドット対環状ペプチド比は約6であって、環状ペプチド結合C’ドット対スクランブル化ペプチド結合C’ドット比も約6であった。
図7A〜7Cは、マウス顔面神経へのC’ドット(60μM)の局所適用を示す。画像は、Zeiss Stereo Lum,V12で取得した。曝露時間は、600ミリ秒であった。17環状ペプチドコンジュゲート化C’ドットの60μMを、ヌードマウスの顔面神経に適用した。C’ドットを3分間インキュベートし、続いてPBS緩衝液により3回洗浄した。蛍光シグナルの強度および分布を観察するために、Zeiss stereo lumarスコープを使用した。手術の間、マウスはイソフルラン麻酔下におかれた。神経または周囲の筋肉のROIを得、Zeiss stereo lumarスコープから取得した蛍光結果画像(fluorescence results images)によって、その蛍光強度を比較した。顔面神経対筋肉比は、約1.5であった。
甲状腺摘出は、非常に頻繁な処置である(MSKCCで約15件/週)。甲状腺乳頭癌の過診断の発生率は、過去10年わたって増加した。例えば、最も恐れられた合併症は、再発性の喉頭神経病変および副甲状腺機能低下症である。
図1は、節転移の手術前PETスクリーニングおよびリアルタイムの手術中蛍光ベースの多重化検出を示す。図1は、124I−cRGDY−CW800−C’ドットを腫瘍周囲に注射した自然発生メラノーマミニブタモデルにおける、節転移の二重モダリティー手術前および手術中のイメージングを示す。高解像度PETスキャンは、手術中に切除するための、その後にマークされたPET-avid節を示す。携帯式の多チャネル蛍光カメラシステムおよび異なる受容体を標的にするスペクトルが異なる粒子プローブ(インテグリン:赤色;MC1R:緑色)を使用して、転移リンパ節への腫瘍リンパ排液は、組織学的相関を伴ってリアルタイムに観察された。節(黄色)による同時の示差的取り込みが見出され、節の各々において様々な程度の腫瘍負荷を検出する感度を示唆した。
手術ベッドにおける目的の組織(例えば、神経、例えばリンパ節、例えば、副甲状腺)への提供されるナノ粒子の正確で制御された局所適用は、特別な同軸エアスプレーまたはネブライザーデバイスを用いることにより達成することができる(図12)。ある特定の実施形態では、デバイスは:公称上より大きなチューブ(例えば、噴霧器)の中の毛細管;空気またはガスの圧力供給源;ポンプ;および、必要に応じて、低電圧の調整可能な電源を含む。アルゴンガスが外部のスリーブにポンプで注入される間、ナノ粒子溶液は毛細管を通してポンプ圧送される。ナノ粒子溶液の流速およびガス圧力は、各々調節することができる。さらに、溶液、ガスまたは噴霧器の温度は、必要に応じて調整することができる;噴霧器の電圧を調整することもできる。これらの特徴は精細で高度に制御された噴霧をもたらし、それによって手術領域へのナノ粒子の正確な局所適用を可能にする。ある特定の実施形態では、デバイスは、エレクトロスプレーイオン化質量分析装置で使用されるネブライザーに類似する。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される:
(項目1)
スペクトルで区別可能な蛍光レポーターを各々含む2つまたはそれよりも多くの異なるプローブ種をリンパ系に投与するステップ;および
該リンパ節に励起光を導き、それによってスペクトルで識別可能な放射波長を有する該蛍光レポーターを励起させるステップ
を含む方法。
(項目2)
前記投与するステップが、2つまたはそれよりも多くの異なるプローブ種を静脈内投与することを含む、項目1に記載の方法。
(項目3)
前記2つまたはそれよりも多くの異なるプローブ種が、ナノ粒子を含む、項目1または2に記載の方法。
(項目4)
少なくとも第1のプローブが、腫瘍部位に投与され、少なくとも第2のプローブが、リンパ水腫によって潜在的に影響を受ける四肢に投与される、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目5)
前記腫瘍部位が、乳房、体幹、腹部、骨盤および胸腔からなる群から選択されるメンバーを含む、項目4に記載の方法。
(項目6)
前記四肢が、上肢および下肢からなる群から選択されるメンバーを含む、項目4または5に記載の方法。
(項目7)
前記励起光が、2つまたはそれよりも多くの波長を含み、それによって異なる前記蛍光レポーターを励起させる、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目8)
リンパ水腫の処置における移植に適したリンパ節を同定するステップを含む、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目9)
スペクトルが異なる放射波長の蛍光を同時に検出するステップを含み、検出された該蛍光が、各プローブ種から受けるシグナル間を区別するための励起光による照射の結果として、前記リンパ節および/または排液経路の中のそれぞれの前記プローブ種の前記蛍光レポーターによって放出されたものである、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目10)
前記励起光を受けた第1のプローブ種の前記蛍光レポーターが、前記励起光を受けた別のプローブ種の第2の蛍光レポーターと比較してスペクトルで識別可能な波長で蛍光を発する、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目11)
前記スペクトルで識別可能な放射波長を含むシグナルが、ディスプレイに表示されて、2種類のリンパ節および/または排液経路の間がグラフィカルに識別される、項目10に記載の方法。
(項目12)
切除に適したリンパ節を同定するステップをさらに含む、項目9〜11のいずれか一項に記載の方法。
(項目13)
前記ディスプレイの上部が、第1のプローブ種を示し、該ディスプレイの下部が、第2のプローブ種を示す、11または12に記載の方法。
(項目14)
前記ディスプレイが、前記第1および第2プローブ種の重畳画像を示す、項目11〜13のいずれか一項に記載の方法。
(項目15)
前記リンパ系のリンパ節および/またはリンパ経路のマップを表示するステップ
を含み、前記マップは、特異的リンパ節の間および/または特異的リンパ節タイプの間をグラフィカルに区別する、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目16)
少なくとも1つのリンパ節が、前記四肢を排液させ、少なくとも1つのリンパ節が、腫瘍部位を排液させる、項目15に記載の方法。
(項目17)
前記腫瘍部位が、乳房、体幹、腹部、骨盤および胸腔からなる群から選択されるメンバーを含む、項目15に記載の方法。
(項目18)
1つのプローブ種の前記蛍光レポーターが、前記四肢への排液を示す、項目15〜17のいずれか一項に記載の方法。
(項目19)
1つのプローブ種の前記蛍光レポーターが、前記腫瘍部位への排液を示し、それによってリンパ水腫をもたらし得る重大なリンパ節を回避する、項目15〜18のいずれか一項に記載の方法。
(項目20)
スペクトルで区別可能な蛍光レポーターを各々含む2つまたはそれよりも多くの異なるプローブ種を神経に投与するステップ;および
該神経に励起光を導き、それによってスペクトルで識別可能な放射波長を有する該蛍光レポーターを励起させるステップ
を含む方法。
(項目21)
前記投与するステップが、2つまたはそれよりも多くの異なるプローブ種を静脈内投与することを含む、項目20に記載の方法。
(項目22)
前記2つまたはそれよりも多くの異なるプローブ種が、ナノ粒子を含む、項目20または21に記載の方法。
(項目23)
前記神経が、運動神経および感覚神経からなる群から選択されるメンバーを含む、項目20〜22のいずれか一項に記載の方法。
(項目24)
少なくとも第1のプローブが、運動神経に投与され、少なくとも第2のプローブが、感覚神経に投与される、項目20〜23のいずれか一項に記載の方法。
(項目25)
前記励起光が、2つまたはそれよりも多くの波長を含み、それによって異なる前記蛍光レポーターを励起させる、項目20〜24のいずれか一項に記載の方法。
(項目26)
神経移植または他の手術に適した神経を同定するステップを含む、項目20〜25のいずれか一項に記載の方法。
(項目27)
スペクトルが異なる放射波長の蛍光を同時に検出するステップ
を含み、検出された該蛍光は、各プローブ種から受けるシグナル間を区別するための励起光による照射の結果として、前記神経の中のそれぞれの前記プローブ種の前記蛍光レポーターによって放出されたものである、項目20〜26のいずれか一項に記載の方法。
(項目28)
前記励起光を受けた第1のプローブ種の前記蛍光レポーターが、前記励起光を受けた別のプローブ種の第2の蛍光レポーターと比較してスペクトルで識別可能な波長で蛍光を発する、項目27に記載の方法。
(項目29)
前記スペクトルで識別可能な放射波長を含むシグナルが、ディスプレイに表示されて、2種類またはそれよりも多くの神経がグラフィカルに識別される、項目28に記載の方法。
(項目30)
切除に適した神経を同定するステップを含む、項目28または29に記載の方法。
(項目31)
前記ディスプレイの上部が、第1のプローブ種を示し、該ディスプレイの下部が、第2のプローブ種を示す、項目28〜30のいずれか一項に記載の方法。
(項目32)
前記ディスプレイが、前記第1および第2プローブ種の重畳画像を示す、項目28〜31のいずれか一項に記載の方法。
(項目33)
前記神経のマップを表示するステップを含み、該マップは特異的神経タイプ間を視覚的に区別する、項目20〜32のいずれか一項に記載の方法。
(項目34)
1つの神経が、感覚神経であり、1つの神経が、運動神経である、項目33に記載の方法。
(項目35)
1つのプローブ種の前記蛍光レポーターが、運動神経を示す、項目33または34に記載の方法。
(項目36)
1つのプローブ種の前記蛍光レポーターが、感覚神経を示し、それによって神経のタイプ間を区別する、項目33〜35のいずれか一項に記載の方法。
(項目37)
2つまたはそれよりも多くの前記プローブ種が、シリカを含む、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目38)
2つまたはそれよりも多くの前記プローブ種が、シリカ構造および色素に富むコアを有するナノ粒子を含む、項目37に記載の方法。
(項目39)
前記ナノ粒子が、CドットまたはC’ドットを含む、項目38に記載の方法。
(項目40)
前記色素に富むコアが、前記蛍光レポーターを含む、項目37または38に記載の方法。
(項目41)
前記蛍光レポーターが、近赤外色素または遠赤色素である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目42)
前記蛍光レポーターが、蛍光体、蛍光色素、色素、ピグメント、蛍光遷移金属および蛍光タンパク質からなる群から選択される、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目43)
前記蛍光レポーターが、Cy5、Cy5.5、Cy2、FITC、TRITC、Cy7、FAM、Cy3、Cy3.5、Texas Red、ROX、HEX、JA133、AlexaFluor 488、AlexaFluor 546、AlexaFluor 633、AlexaFluor 555、AlexaFluor 647、DAPI、TMR、R6G、GFP、強化GFP、CFP、ECFP、YFP、シトリーン、ビーナス、YPet、CyPet、AMCA、スペクトラムグリーン、スペクトラムオレンジ、スペクトラムアクア、リサミン、ユウロピウム、Dy800色素およびLiCor 800色素からなる群から選択される、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目44)
前記蛍光レポーターからの前記蛍光が、携帯式の蛍光カメラシステムを使用してリアルタイムに検出され、マッピングされる、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目45)
複数の容器;
第1の蛍光レポーターを各々含む第1のプローブ種;
第2の蛍光レポーターを各々含む第2のプローブ種
を含むキットであって、各容器は、アンプル、バイアル、カートリッジ、レザバー、lyo−jectおよびプレフィルドシリンジからなる群から選択されるタイプを有し、該複数の容器の第1の容器は、該第1のプローブ種を保持し、該複数の容器の第2の容器は、該第2のプローブ種を保持する、キット。
(項目46)
切除に適したリンパ節の同定のための、項目45に記載のキット。
(項目47)
リンパ水腫の処置で使用するための、項目45に記載のキット。
(項目48)
移植に適した神経の同定のための、項目45に記載のキット。
(項目49)
前記神経が、運動神経および感覚神経からなる群から選択されるメンバーを含む、項目48に記載のキット。
(項目50)
前記第1のプローブ種および第2のプローブ種が、ナノ粒子、CドットおよびC’ドットからなる群から選択されるメンバーを含む、項目45〜49のいずれか一項に記載のキット。
(項目51)
前記第1のプローブ種および第2のプローブ種が、第1の神経結合性ペプチドおよび第2の神経結合性ペプチドをさらに含む、項目45〜50のいずれか一項に記載のキット。
(項目52)
前記第1および第2の神経結合性ペプチドが、ペプチド配列NTQTLAKAPEHT(配列番号3)、TYTDWLNFWAWP(配列番号4)、KSLSRHDHIHHH(配列番号5)およびDFTKTSPLGIH(配列番号6)を含むからなる群から選択されるペプチド配列を含む、項目45〜51のいずれか一項に記載のキット。
(項目53)
複数の組成物を被験体に投与して、該被験体の組織に選択的に結合させるステップであって、各組成物が、少なくとも1つのペプチドを含み、該複数の組成物のうち第1の組成物が、第1の組織タイプに選択的に結合する第1のペプチドを含み、該複数の組成物のうち第2の組成物が、第2の組織タイプに選択的に結合する第2のペプチドを含む、ステップ;
該被験体の組織を励起光に曝露するステップ;および
該第1の組成物の第1の蛍光剤および該第2の組成物の第2の蛍光剤によって放出された光を検出して画像を作成し、該画像を表示するステップ
を含むイメージング方法。
(項目54)
前記第1の組織タイプが、感覚神経組織を含む、項目53に記載のイメージング方法。
(項目55)
前記第2の神経組織タイプが、運動神経組織を含む、項目53または54に記載のイメージング方法。
(項目56)
前記第1の組織タイプが、副甲状腺組織を含む、項目53に記載のイメージング方法。
(項目57)
前記第1の組織タイプが、リンパ節を含む、項目53に記載のイメージング方法。
(項目58)
前記曝露するステップが、手術中に実行される、項目53〜57のいずれか一項に記載のイメージング方法。
(項目59)
前記第1の蛍光剤によって放出された光が、前記第2の蛍光剤によって放出された光から識別可能である、項目53〜58のいずれか一項に記載のイメージング方法。
(項目60)
前記第1の蛍光剤によって放出された光が、前記第2の蛍光剤によって放出された光から視覚的に識別可能である、項目59に記載のイメージング方法。
(項目61)
前記第1の蛍光剤によって放出された光が、前記第2の蛍光剤によって放出された光と異なる色を有する、項目59または60に記載のイメージング方法。
(項目62)
被験体の組織を励起光に曝露するステップであって、該組織は、該被験体に投与された組織結合性組成物を含む製剤を含み、該組織結合性組成物は特定の組織タイプに優先的に結合する、ステップ;および
該組成物の該蛍光剤によって放出された光を検出し、それによって該組織結合性組成物を含む該特定の組織タイプを周囲組織から視覚的に識別するステップ
を含むイメージング方法。
(項目63)
前記特定の組織タイプが、神経組織である、項目62に記載の方法。
(項目64)
前記特定の組織タイプが、リンパ節組織である、項目62に記載の方法。
(項目65)
前記特定の組織タイプが、副甲状腺組織である、項目62に記載の方法。
(項目66)
前記組織結合性組成物が、
ペプチド;
ナノ粒子;
蛍光剤;および
リンカー部分
を含む組織結合性ペプチドコンジュゲートを含む、項目62〜65のいずれか一項に記載のイメージング方法。
(項目67)
前記ペプチドが、アルファヘリックス構造を含む、項目66に記載のイメージング方法。
(項目68)
前記ペプチドが、環状ペプチドおよび線状ペプチドからなる群から選択されるメンバーを含む、項目66または67に記載のイメージング方法。
(項目69)
前記ペプチドが、Nメチル化アミノ酸を含む、項目66〜68のいずれか一項に記載のイメージング方法。
(項目70)
前記組織結合性ペプチドコンジュゲートが、神経結合性ペプチドコンジュゲート、リンパ節結合性コンジュゲートおよび副甲状腺結合性コンジュゲートからなる群から選択されるメンバーを含む、項目66〜69のいずれか一項に記載のイメージング方法。
(項目71)
前記イメージング方法が、神経組織を他の組織と区別する、項目62〜70のいずれか一項に記載のイメージング方法。
(項目72)
前記組織結合性組成物が、
NTQTLAKAPEHT(配列番号3)、TYTDWLNFWAWP(配列番号4)、KSLSRHDHIHHH(配列番号5)およびDFTKTSPLGIH(配列番号6)からなる群から選択されるペプチド配列を含む線状または環状ペプチド
を含む、項目62〜71のいずれか一項に記載のイメージング方法。
(項目73)
前記組織結合性組成物が、神経結合性ペプチドコンジュゲートを含み、該神経結合性ペプチドコンジュゲートは、
蛍光剤と;
NTQTLAKAPEHT(配列番号3)、TYTDWLNFWAWP(配列番号4)、KSLSRHDHIHHH(配列番号5)およびDFTKTSPLGIH(配列番号6)からなる群から選択されるペプチド配列を含む線状または環状ペプチドと
を含む線状または環状ペプチド組成物
を含む、項目62〜72のいずれか一項に記載のイメージング方法。
(項目74)
前記ペプチドが、抗コリンアセチルトランスフェラーゼ(抗ChAT)および抗カルシトニン遺伝子関連ペプチドからなる群から選択されるメンバーを含む、項目66〜73のいずれか一項に記載のイメージング方法。
(項目75)
前記組織結合性ペプチドコンジュゲートが、副甲状腺結合性コンジュゲートを含み、副甲状腺組織を他の組織と区別する、項目66〜74のいずれか一項に記載のイメージング方法。
(項目76)
前記ペプチドが、抗副甲状腺ホルモン(PTH)およびGATA抗体(例えば、GATA1抗体、例えば、GATA2抗体、例えば、GATA3抗体、例えば、GATA4抗体、例えば、GATA5抗体)からなる群から選択されるメンバーを含む、項目75に記載のイメージング方法。
(項目77)
前記抗PTHが、Ser−Val−Ser−Glu−Ile−Gln−Leu−Met−His−Asn−Leu−Gly−Lys−His−Leu−Asn−Ser−Met−Glu−Arg−Val−Glu−Trp−Leu−Arg−Lys−Lys−Leu−Gln−Asp−Val−His−Asn−Phe(配列番号1)を含む配列を有するPTHタンパク質を標的にする、項目76に記載のイメージング方法。
(項目78)
前記ペプチドが、GATA3抗体を含む、項目76に記載のイメージング方法。
(項目79)
前記投与するステップが、溶液を局所に投与することを含む(例えば、該溶液が、項目1〜44のいずれか一項に記載の前記2つまたはそれよりも多くの異なるプローブ種を含む)(例えば、該溶液が、項目53〜61のいずれか一項に記載の前記複数の組成物を含む)(例えば、該溶液が、項目62〜78のいずれか一項に記載の前記製剤を含む)、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
(項目80)
前記投与するステップが、デバイス(例えば、ナノスケールの噴霧デバイス、例えば、ネブライザーデバイス)を通して組織に前記溶液を局所に沈着させることを含む、項目79に記載の方法。
(項目81)
前記デバイスが、前記組織結合性組成物の前記溶液を(例えば、噴霧剤として)霧状にし、該溶液を低流速で前記組織に施与する、項目80に記載の方法。
(項目82)
前記低流速が、約1μL/分から約100μL/分の範囲(例えば、約10μL/分から約75μL/分の範囲、例えば、約15μL/分から約50μL/分の範囲)にある、項目81に記載の方法。
(項目83)
電源をモジュレートして、前記溶液中の少なくとも1つの組成物の表面(例えば、ナノ粒子表面)の電荷をモジュレートし、それによって該少なくとも1つの組成物の組織浸透および/または結合特性を変更するステップを含む、項目81または82に記載の方法。
(項目84)
項目79〜83のいずれか一項に記載の前記溶液の局所適用のためのデバイス(例えば、ナノスケールのエアスプレー、例えば、ネブライザーデバイス)であって、
公称上より大きなチューブ(例えば、噴霧器)の中の毛細管;
空気またはガス圧力供給源(例えば、該空気またはガスの圧力は制御可能である);および
ポンプ(例えば、蠕動ポンプ、例えば、シリンジポンプ)
を含むデバイス。
(項目85)
前記ポンプが、(例えば、流速を約1μl/分から約100μl/分まで制御するように)調節可能である、項目84に記載のデバイス。
(項目86)
前記ガス圧力供給源が、約1L/分から約20L/分(例えば、約1psiから約20psi)の範囲にガス圧力を適用する、項目84または85に記載のデバイス。
(項目87)
前記デバイスが、前記溶液を、約25℃から約60℃の温度(例えば、制御可能な温度)で投与する、項目84〜86のいずれか一項に記載のデバイス。
(項目88)
前記より大きなチューブの出口が、約80μmから約200μmの範囲内の直径を有する、項目84〜87のいずれか一項に記載のデバイス。
(項目89)
電源を含む(例えば、該電源(例えば、低電圧)は、約0Vから約+/−10Vの範囲内の電圧を印加する)、項目84〜88のいずれか一項に記載のデバイス。
Claims (89)
- スペクトルで区別可能な蛍光レポーターを各々含む2つまたはそれよりも多くの異なるプローブ種をリンパ系に投与するステップ;および
該リンパ節に励起光を導き、それによってスペクトルで識別可能な放射波長を有する該蛍光レポーターを励起させるステップ
を含む方法。 - 前記投与するステップが、2つまたはそれよりも多くの異なるプローブ種を静脈内投与することを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記2つまたはそれよりも多くの異なるプローブ種が、ナノ粒子を含む、請求項1または2に記載の方法。
- 少なくとも第1のプローブが、腫瘍部位に投与され、少なくとも第2のプローブが、リンパ水腫によって潜在的に影響を受ける四肢に投与される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
- 前記腫瘍部位が、乳房、体幹、腹部、骨盤および胸腔からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項4に記載の方法。
- 前記四肢が、上肢および下肢からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項4または5に記載の方法。
- 前記励起光が、2つまたはそれよりも多くの波長を含み、それによって異なる前記蛍光レポーターを励起させる、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
- リンパ水腫の処置における移植に適したリンパ節を同定するステップを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
- スペクトルが異なる放射波長の蛍光を同時に検出するステップを含み、検出された該蛍光が、各プローブ種から受けるシグナル間を区別するための励起光による照射の結果として、前記リンパ節および/または排液経路の中のそれぞれの前記プローブ種の前記蛍光レポーターによって放出されたものである、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
- 前記励起光を受けた第1のプローブ種の前記蛍光レポーターが、前記励起光を受けた別のプローブ種の第2の蛍光レポーターと比較してスペクトルで識別可能な波長で蛍光を発する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スペクトルで識別可能な放射波長を含むシグナルが、ディスプレイに表示されて、2種類のリンパ節および/または排液経路の間がグラフィカルに識別される、請求項10に記載の方法。
- 切除に適したリンパ節を同定するステップをさらに含む、請求項9〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ディスプレイの上部が、第1のプローブ種を示し、該ディスプレイの下部が、第2のプローブ種を示す、11または12に記載の方法。
- 前記ディスプレイが、前記第1および第2プローブ種の重畳画像を示す、請求項11〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記リンパ系のリンパ節および/またはリンパ経路のマップを表示するステップ
を含み、前記マップは、特異的リンパ節の間および/または特異的リンパ節タイプの間をグラフィカルに区別する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。 - 少なくとも1つのリンパ節が、前記四肢を排液させ、少なくとも1つのリンパ節が、腫瘍部位を排液させる、請求項15に記載の方法。
- 前記腫瘍部位が、乳房、体幹、腹部、骨盤および胸腔からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項15に記載の方法。
- 1つのプローブ種の前記蛍光レポーターが、前記四肢への排液を示す、請求項15〜17のいずれか一項に記載の方法。
- 1つのプローブ種の前記蛍光レポーターが、前記腫瘍部位への排液を示し、それによってリンパ水腫をもたらし得る重大なリンパ節を回避する、請求項15〜18のいずれか一項に記載の方法。
- スペクトルで区別可能な蛍光レポーターを各々含む2つまたはそれよりも多くの異なるプローブ種を神経に投与するステップ;および
該神経に励起光を導き、それによってスペクトルで識別可能な放射波長を有する該蛍光レポーターを励起させるステップ
を含む方法。 - 前記投与するステップが、2つまたはそれよりも多くの異なるプローブ種を静脈内投与することを含む、請求項20に記載の方法。
- 前記2つまたはそれよりも多くの異なるプローブ種が、ナノ粒子を含む、請求項20または21に記載の方法。
- 前記神経が、運動神経および感覚神経からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項20〜22のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも第1のプローブが、運動神経に投与され、少なくとも第2のプローブが、感覚神経に投与される、請求項20〜23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記励起光が、2つまたはそれよりも多くの波長を含み、それによって異なる前記蛍光レポーターを励起させる、請求項20〜24のいずれか一項に記載の方法。
- 神経移植または他の手術に適した神経を同定するステップを含む、請求項20〜25のいずれか一項に記載の方法。
- スペクトルが異なる放射波長の蛍光を同時に検出するステップ
を含み、検出された該蛍光は、各プローブ種から受けるシグナル間を区別するための励起光による照射の結果として、前記神経の中のそれぞれの前記プローブ種の前記蛍光レポーターによって放出されたものである、請求項20〜26のいずれか一項に記載の方法。 - 前記励起光を受けた第1のプローブ種の前記蛍光レポーターが、前記励起光を受けた別のプローブ種の第2の蛍光レポーターと比較してスペクトルで識別可能な波長で蛍光を発する、請求項27に記載の方法。
- 前記スペクトルで識別可能な放射波長を含むシグナルが、ディスプレイに表示されて、2種類またはそれよりも多くの神経がグラフィカルに識別される、請求項28に記載の方法。
- 切除に適した神経を同定するステップを含む、請求項28または29に記載の方法。
- 前記ディスプレイの上部が、第1のプローブ種を示し、該ディスプレイの下部が、第2のプローブ種を示す、請求項28〜30のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ディスプレイが、前記第1および第2プローブ種の重畳画像を示す、請求項28〜31のいずれか一項に記載の方法。
- 前記神経のマップを表示するステップを含み、該マップは特異的神経タイプ間を視覚的に区別する、請求項20〜32のいずれか一項に記載の方法。
- 1つの神経が、感覚神経であり、1つの神経が、運動神経である、請求項33に記載の方法。
- 1つのプローブ種の前記蛍光レポーターが、運動神経を示す、請求項33または34に記載の方法。
- 1つのプローブ種の前記蛍光レポーターが、感覚神経を示し、それによって神経のタイプ間を区別する、請求項33〜35のいずれか一項に記載の方法。
- 2つまたはそれよりも多くの前記プローブ種が、シリカを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
- 2つまたはそれよりも多くの前記プローブ種が、シリカ構造および色素に富むコアを有するナノ粒子を含む、請求項37に記載の方法。
- 前記ナノ粒子が、CドットまたはC’ドットを含む、請求項38に記載の方法。
- 前記色素に富むコアが、前記蛍光レポーターを含む、請求項37または38に記載の方法。
- 前記蛍光レポーターが、近赤外色素または遠赤色素である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
- 前記蛍光レポーターが、蛍光体、蛍光色素、色素、ピグメント、蛍光遷移金属および蛍光タンパク質からなる群から選択される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
- 前記蛍光レポーターが、Cy5、Cy5.5、Cy2、FITC、TRITC、Cy7、FAM、Cy3、Cy3.5、Texas Red、ROX、HEX、JA133、AlexaFluor 488、AlexaFluor 546、AlexaFluor 633、AlexaFluor 555、AlexaFluor 647、DAPI、TMR、R6G、GFP、強化GFP、CFP、ECFP、YFP、シトリーン、ビーナス、YPet、CyPet、AMCA、スペクトラムグリーン、スペクトラムオレンジ、スペクトラムアクア、リサミン、ユウロピウム、Dy800色素およびLiCor 800色素からなる群から選択される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
- 前記蛍光レポーターからの前記蛍光が、携帯式の蛍光カメラシステムを使用してリアルタイムに検出され、マッピングされる、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
- 複数の容器;
第1の蛍光レポーターを各々含む第1のプローブ種;
第2の蛍光レポーターを各々含む第2のプローブ種
を含むキットであって、各容器は、アンプル、バイアル、カートリッジ、レザバー、lyo−jectおよびプレフィルドシリンジからなる群から選択されるタイプを有し、該複数の容器の第1の容器は、該第1のプローブ種を保持し、該複数の容器の第2の容器は、該第2のプローブ種を保持する、キット。 - 切除に適したリンパ節の同定のための、請求項45に記載のキット。
- リンパ水腫の処置で使用するための、請求項45に記載のキット。
- 移植に適した神経の同定のための、請求項45に記載のキット。
- 前記神経が、運動神経および感覚神経からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項48に記載のキット。
- 前記第1のプローブ種および第2のプローブ種が、ナノ粒子、CドットおよびC’ドットからなる群から選択されるメンバーを含む、請求項45〜49のいずれか一項に記載のキット。
- 前記第1のプローブ種および第2のプローブ種が、第1の神経結合性ペプチドおよび第2の神経結合性ペプチドをさらに含む、請求項45〜50のいずれか一項に記載のキット。
- 前記第1および第2の神経結合性ペプチドが、ペプチド配列NTQTLAKAPEHT(配列番号3)、TYTDWLNFWAWP(配列番号4)、KSLSRHDHIHHH(配列番号5)およびDFTKTSPLGIH(配列番号6)を含むからなる群から選択されるペプチド配列を含む、請求項45〜51のいずれか一項に記載のキット。
- 複数の組成物を被験体に投与して、該被験体の組織に選択的に結合させるステップであって、各組成物が、少なくとも1つのペプチドを含み、該複数の組成物のうち第1の組成物が、第1の組織タイプに選択的に結合する第1のペプチドを含み、該複数の組成物のうち第2の組成物が、第2の組織タイプに選択的に結合する第2のペプチドを含む、ステップ;
該被験体の組織を励起光に曝露するステップ;および
該第1の組成物の第1の蛍光剤および該第2の組成物の第2の蛍光剤によって放出された光を検出して画像を作成し、該画像を表示するステップ
を含むイメージング方法。 - 前記第1の組織タイプが、感覚神経組織を含む、請求項53に記載のイメージング方法。
- 前記第2の神経組織タイプが、運動神経組織を含む、請求項53または54に記載のイメージング方法。
- 前記第1の組織タイプが、副甲状腺組織を含む、請求項53に記載のイメージング方法。
- 前記第1の組織タイプが、リンパ節を含む、請求項53に記載のイメージング方法。
- 前記曝露するステップが、手術中に実行される、請求項53〜57のいずれか一項に記載のイメージング方法。
- 前記第1の蛍光剤によって放出された光が、前記第2の蛍光剤によって放出された光から識別可能である、請求項53〜58のいずれか一項に記載のイメージング方法。
- 前記第1の蛍光剤によって放出された光が、前記第2の蛍光剤によって放出された光から視覚的に識別可能である、請求項59に記載のイメージング方法。
- 前記第1の蛍光剤によって放出された光が、前記第2の蛍光剤によって放出された光と異なる色を有する、請求項59または60に記載のイメージング方法。
- 被験体の組織を励起光に曝露するステップであって、該組織は、該被験体に投与された組織結合性組成物を含む製剤を含み、該組織結合性組成物は特定の組織タイプに優先的に結合する、ステップ;および
該組成物の該蛍光剤によって放出された光を検出し、それによって該組織結合性組成物を含む該特定の組織タイプを周囲組織から視覚的に識別するステップ
を含むイメージング方法。 - 前記特定の組織タイプが、神経組織である、請求項62に記載の方法。
- 前記特定の組織タイプが、リンパ節組織である、請求項62に記載の方法。
- 前記特定の組織タイプが、副甲状腺組織である、請求項62に記載の方法。
- 前記組織結合性組成物が、
ペプチド;
ナノ粒子;
蛍光剤;および
リンカー部分
を含む組織結合性ペプチドコンジュゲートを含む、請求項62〜65のいずれか一項に記載のイメージング方法。 - 前記ペプチドが、アルファヘリックス構造を含む、請求項66に記載のイメージング方法。
- 前記ペプチドが、環状ペプチドおよび線状ペプチドからなる群から選択されるメンバーを含む、請求項66または67に記載のイメージング方法。
- 前記ペプチドが、Nメチル化アミノ酸を含む、請求項66〜68のいずれか一項に記載のイメージング方法。
- 前記組織結合性ペプチドコンジュゲートが、神経結合性ペプチドコンジュゲート、リンパ節結合性コンジュゲートおよび副甲状腺結合性コンジュゲートからなる群から選択されるメンバーを含む、請求項66〜69のいずれか一項に記載のイメージング方法。
- 前記イメージング方法が、神経組織を他の組織と区別する、請求項62〜70のいずれか一項に記載のイメージング方法。
- 前記組織結合性組成物が、
NTQTLAKAPEHT(配列番号3)、TYTDWLNFWAWP(配列番号4)、KSLSRHDHIHHH(配列番号5)およびDFTKTSPLGIH(配列番号6)からなる群から選択されるペプチド配列を含む線状または環状ペプチド
を含む、請求項62〜71のいずれか一項に記載のイメージング方法。 - 前記組織結合性組成物が、神経結合性ペプチドコンジュゲートを含み、該神経結合性ペプチドコンジュゲートは、
蛍光剤と;
NTQTLAKAPEHT(配列番号3)、TYTDWLNFWAWP(配列番号4)、KSLSRHDHIHHH(配列番号5)およびDFTKTSPLGIH(配列番号6)からなる群から選択されるペプチド配列を含む線状または環状ペプチドと
を含む線状または環状ペプチド組成物
を含む、請求項62〜72のいずれか一項に記載のイメージング方法。 - 前記ペプチドが、抗コリンアセチルトランスフェラーゼ(抗ChAT)および抗カルシトニン遺伝子関連ペプチドからなる群から選択されるメンバーを含む、請求項66〜73のいずれか一項に記載のイメージング方法。
- 前記組織結合性ペプチドコンジュゲートが、副甲状腺結合性コンジュゲートを含み、副甲状腺組織を他の組織と区別する、請求項66〜74のいずれか一項に記載のイメージング方法。
- 前記ペプチドが、抗副甲状腺ホルモン(PTH)およびGATA抗体(例えば、GATA1抗体、例えば、GATA2抗体、例えば、GATA3抗体、例えば、GATA4抗体、例えば、GATA5抗体)からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項75に記載のイメージング方法。
- 前記抗PTHが、Ser−Val−Ser−Glu−Ile−Gln−Leu−Met−His−Asn−Leu−Gly−Lys−His−Leu−Asn−Ser−Met−Glu−Arg−Val−Glu−Trp−Leu−Arg−Lys−Lys−Leu−Gln−Asp−Val−His−Asn−Phe(配列番号1)を含む配列を有するPTHタンパク質を標的にする、請求項76に記載のイメージング方法。
- 前記ペプチドが、GATA3抗体を含む、請求項76に記載のイメージング方法。
- 前記投与するステップが、溶液を局所に投与することを含む(例えば、該溶液が、請求項1〜44のいずれか一項に記載の前記2つまたはそれよりも多くの異なるプローブ種を含む)(例えば、該溶液が、請求項53〜61のいずれか一項に記載の前記複数の組成物を含む)(例えば、該溶液が、請求項62〜78のいずれか一項に記載の前記製剤を含む)、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
- 前記投与するステップが、デバイス(例えば、ナノスケールの噴霧デバイス、例えば、ネブライザーデバイス)を通して組織に前記溶液を局所に沈着させることを含む、請求項79に記載の方法。
- 前記デバイスが、前記組織結合性組成物の前記溶液を(例えば、噴霧剤として)霧状にし、該溶液を低流速で前記組織に施与する、請求項80に記載の方法。
- 前記低流速が、約1μL/分から約100μL/分の範囲(例えば、約10μL/分から約75μL/分の範囲、例えば、約15μL/分から約50μL/分の範囲)にある、請求項81に記載の方法。
- 電源をモジュレートして、前記溶液中の少なくとも1つの組成物の表面(例えば、ナノ粒子表面)の電荷をモジュレートし、それによって該少なくとも1つの組成物の組織浸透および/または結合特性を変更するステップを含む、請求項81または82に記載の方法。
- 請求項79〜83のいずれか一項に記載の前記溶液の局所適用のためのデバイス(例えば、ナノスケールのエアスプレー、例えば、ネブライザーデバイス)であって、
公称上より大きなチューブ(例えば、噴霧器)の中の毛細管;
空気またはガス圧力供給源(例えば、該空気またはガスの圧力は制御可能である);および
ポンプ(例えば、蠕動ポンプ、例えば、シリンジポンプ)
を含むデバイス。 - 前記ポンプが、(例えば、流速を約1μl/分から約100μl/分まで制御するように)調節可能である、請求項84に記載のデバイス。
- 前記ガス圧力供給源が、約1L/分から約20L/分(例えば、約1psiから約20psi)の範囲にガス圧力を適用する、請求項84または85に記載のデバイス。
- 前記デバイスが、前記溶液を、約25℃から約60℃の温度(例えば、制御可能な温度)で投与する、請求項84〜86のいずれか一項に記載のデバイス。
- 前記より大きなチューブの出口が、約80μmから約200μmの範囲内の直径を有する、請求項84〜87のいずれか一項に記載のデバイス。
- 電源を含む(例えば、該電源(例えば、低電圧)は、約0Vから約+/−10Vの範囲内の電圧を印加する)、請求項84〜88のいずれか一項に記載のデバイス。
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