JP2019211792A - 顕微鏡画像校正用スライドガラス - Google Patents

Abstract

【課題】顕微鏡による観察画像の再現性評価のために使用する、異なる倍率の対物レンズ毎に行う再現性評価の作業性がよい顕微鏡画像校正用スライドガラスを提供する。【解決手段】少なくとも透光部６を有する第１の保護基材１、透過光により観察可能な複数の校正用パターン３、４、スペーサー５及び透光部６を有する第２の保護基材２により構成され、校正用パターン３、４の各々は、倍率の異なる対物レンズに対応し、視野内に収め得るサイズの薄板状のものであり、第１の保護基材１と第２の保護基材２の間に挟持され重ならないように配置されてなり、スペーサー５は、第１の保護基材１と第２の保護基材２の間にあって、第１の保護基材１と第２の保護基材２との間隙を保持するように配置されてなり、且つ、少なくとも校正用パターン３、４が設けられた平面視領域を除いた領域にあって複数の校正用パターン３、４を固定するように配置されてなる。【選択図】図６

Description

本発明は、顕微鏡による観察画像の再現性評価のために使用する顕微鏡画像校正用スライドガラスに関する。

近年、顕微鏡による試料の観察は、顕微鏡に取り付けられた撮像装置を用いて行われ、この撮像装置付き顕微鏡によって、観察結果を記録することができることや、ＴＶカメラ、デジタルカメラ等の撮像装置を介して、顕微鏡から入力された情報がディスプレイやプリンタに出力されて、試料を速やかに評価することができる利点があり、医療関係等広い分野において採用されている。
このような撮像装置付き顕微鏡においては、撮像装置自体の画像の再現性評価は行われているが、顕微鏡の対物レンズを介して撮像装置により撮像された画像の再現性については各装置固有の方法によって評価されており、評価方法の標準化が望まれている。
特許文献１は、顕微鏡を使用して撮像された測定試料の画像の色評価及び色補正に使用可能な比較基準となる色情報を提供するためのスライドガラス等に関するものである。このスライドガラスの上面には、顕微鏡の倍率が異なる対物レンズの各視野にそれぞれ対応するように色基準用マイクロカラーフィルタが形成されている。
しかしながら、特許文献１においては、ガラス板の面上に色基準用マイクロカラーフィルタを並置して形成することが開示されているが、再現性評価用として微小サイズでの色や濃度のムラの問題のない基準色を備えたスライドガラスについては開示されていない。

国際公開２００４／０４４６３９号

顕微鏡による観察画像の再現性評価のために使用する顕微鏡画像校正用スライドガラスであって、校正用パターンとして色純度がよいカラーチャートや階調性に優れたグレイスケール等を有し、異なる倍率の対物レンズ毎に行う再現性評価の作業性がよい顕微鏡画像校正用スライドガラスが求められている。

上記の問題を解決する第１の発明の要旨は、少なくとも透光部を有する第１の保護基材、顕微鏡の透過光により観察可能な複数の校正用パターン、スペーサー及び透光部を有する第２の保護基材により構成されてなる顕微鏡画像校正用スライドガラスであって、前記第１の保護基材および前記第２の保護基材は、薄板状で平面視矩形の形状を有し、前記校正用パターンの各々は、前記顕微鏡の倍率の異なる対物レンズに対応して設けられ、前記顕微鏡の前記対物レンズ毎の視野内に収め得るサイズの薄板状のものであり、前記第１の保護基材と前記第２の保護基材の間に挟持され重ならないように配置されてなり、前記スペーサーは、前記第１の保護基材と前記第２の保護基材の間にあって、前記第１の保護基材と前記第２の保護基材との間隙を保持するように配置されてなり、且つ、少なくとも前記校正用パターンが設けられた平面視領域を除いた領域にあって複数の前記校正用パターンを固定するように配置されてなることを特徴とするものである。
上記の問題を解決する第２の発明の要旨は、上記の第１の発明に記載の顕微鏡画像校正用スライドガラスにおいて、前記校正用パターンは、複数の独立した薄板状の校正用パターンチップにより構成されてなり、前記スペーサーは、少なくとも前記校正用パターンチップが設けられた平面視領域を除いた領域にあって複数の前記校正用パターンチップを固定するように配置されてなることを特徴とするものである。
上記の問題を解決する第３の発明の要旨は、上記の第１〜２の発明のいずれかに記載の顕微鏡画像校正用スライドガラスにおいて、前記第１の保護基材および前記第２の保護基材は、平面視上対応する同一位置にパターン状の前記透光部を有し、前記透光部は、前記第１の保護基材と前記第２の保護基材の間に挟み込まれた前記校正用パターンの観察領域に対応するように設けられてなり、前記第１の保護基材および前記第２の保護基材において前記透光部を除く部分に遮光部が設けられてなることを特徴とするものである。
上記の問題を解決する第４の発明の要旨は、上記の第１〜３の発明のいずれかに記載の顕微鏡画像校正用スライドガラスにおいて、接着層が、前記第１の保護基材と前記スペーサーとの間および前記第２の保護基材との前記スペーサーとの間の少なくとも一方に設けられてなることを特徴とするものである。
上記の問題を解決する第５の発明の要旨は、上記の第４の発明に記載の顕微鏡画像校正用スライドガラスにおいて、前記接着層が、前記第１の保護基材と前記校正用パターンの少なくとも一部分との間および前記第２の保護基材と前記校正用パターンの少なくとも一部分との間の少なくとも一方にも設けられてなることを特徴とするものである。
上記の問題を解決する第６の発明の要旨は、上記の第１〜５の発明のいずれかに記載の顕微鏡画像校正用スライドガラスにおいて、請求項１〜５のいずれか１項に記載の顕微鏡画像校正用スライドガラスにおいて、前記校正用パターンが、カラーチャートを含むことを特徴とするものである。
上記の問題を解決する第７の発明の要旨は、上記の第１〜６の発明のいずれかに記載の顕微鏡画像校正用スライドガラスにおいて、前記校正用パターンが、グレイスケールを含むことを特徴とするものである。

本発明によれば、上記のように顕微鏡画像校正用スライドガラスが構成されていることによって、校正用パターンが、顕微鏡画像校正用スライドガラスの平面視上の特定の位置に精度良く配置されていること、倍率の異なる対物レンズに対応したサイズのパターンが同一の顕微鏡画像校正用スライドガラスに並置されていることにより、顕微鏡、及び撮像装置付き顕微鏡の色再現性の評価が、高精度で作業性良く行える効果を有する。
また、校正用パターンを構成する校正用パターンチップが各々の最適条件で作成されたものを所定の小サイズに切断して組込まれたものであるので、校正用パターンチップに色ムラや濃淡ムラがなく色純度のよいカラーチャートや階調性に優れたグレイスケール等を確保できる効果を有し、印刷法やインクジェット法、フォトリソグラフィ法などにより作成されたものに比べて、ムラ等が生じない効果を有する。

顕微鏡画像校正用スライドガラスの第１実施形態を示す平面図と断面図である。 顕微鏡画像校正用スライドガラスの第２実施形態を示す断面図である。 図２におけるスペーサーと校正用パターンチップとの関係を示す平面図である。 校正用パターンチップの他の配置例を示す平面図である。 校正用パターンチップの他の配置例を示す平面図である。 顕微鏡画像校正用スライドガラスの第３実施形態を示す断面図と部分図である。 顕微鏡画像校正用スライドガラスの第４実施形態を示す断面図である。 顕微鏡画像校正用スライドガラスの第５実施形態を示す断面図である。 顕微鏡画像校正用スライドガラスの第６実施形態を示す断面図である カラーチャートに用いられる基準色の特性を示す表である。

以下に本発明の顕微鏡画像校正用スライドガラスを実施するための形態について、図１〜６に基づいて説明する。

（第１実施形態）
第１実施形態は、少なくとも透光部を有する第１の保護基材、顕微鏡の透過光により観察可能な複数の校正用パターン、スペーサー及び透光部を有する第２の保護基材により構成されてなる顕微鏡画像校正用スライドガラスであって、第１の保護基材および第２の保護基材は、薄板状で平面視矩形の形状を有し、校正用パターンの各々は、顕微鏡の倍率の異なる対物レンズに対応して設けられ、顕微鏡の対物レンズ毎の視野内に収め得るサイズの薄板状のものであり、第１の保護基材と第２の保護基材の間に挟持され重ならないように配置されてなり、スペーサーは第１の保護基材と第２の保護基材の間にあって、第１の保護基材と第２の保護基材との間隙を保持するように配置されてなり、且つ、少なくとも校正用パターンが設けられた平面視領域を除いた領域にあって複数の校正用パターンを固定するように配置されてなるものである。
図１は、顕微鏡画像校正用スライドガラスの第１実施形態の一例を示し、図１（ａ）は平面図、図１（ｂ）はその部分断面図である。
図１（ａ）に示すように、顕微鏡画像校正用スライドガラス１０には、校正用パターン３が複数の箇所ここでは７箇所に配置されている。この顕微鏡画像校正用スライドガラス１０を用いて顕微鏡測定する際には、対物レンズを変える毎に、同じ顕微画像校正用スライドガラス１０上の校正用パターン３を各対物レンズに対応したものに変えることによって、即ち顕微画像校正用スライドガラス１０を取り替えることなく、測定を行うことができるものである。
図１（ａ）において、校正用パターン３は７箇所にあるが、校正用パターン３の数は顕微鏡の対物レンズの数に対応した数である。したがって、７箇所に限定されるものではない。
また、図１（ａ）において校正用パターン３は、図中の左側から右側に向けてサイズが段階的に小さくなっており、パターンは相似的になるように設けられている。
校正用パターン３のサイズとしては、図１（ａ）に示されるような長方形の校正用パターン３の場合、顕微鏡の対物レンズ7種の各倍率を、例えば、２．５倍、５倍、１０倍、２０倍、４０倍、６０倍及び１００倍とした場合、各対物レンズによる顕微鏡測定の視野内に収め得るサイズに設計されており、倍率２．５倍の対物レンズに対しては、長辺が５．７ｍｍの長方形の校正用パターン３となり、倍率１００倍の対物レンズに対しては、長辺が０．１４ｍｍの長方形の校正用パターン３となる。
校正用パターン３の形状は限定されないので、上記のような長方形の外に、正方形、多角形、円形などの形状の場合にも顕微鏡視野内に収め得るように校正用パターン３のサイズが適宜定められる。
図１（ｂ）は、図１（ａ）の顕微鏡画像校正用スライドガラス１０において校正用パターン３を２箇所に有する部分についての断面を示すものである。
図１（ｂ）に示すように、校正用パターン３は、少なくとも可視光を透過する第１の保護基材１と第２の保護基材２の間に挟持され重ならないように配置されている。これら校正用パターン３は、第２の保護基材２の図中の下方に配置されており、下方からの顕微鏡光源からの光を透過させて観察を可能とするものである。
また、図１（ｂ）において、スペーサー５は、第１の保護基材１と第２の保護基材２との間隙を保持するように配置されてなり、且つ、少なくとも校正用パターン３が設けられた領域を除いた領域にあって複数の校正用パターン３を固定するように、校正用パターン３の外周を連続的又は非連続的に囲むように設けられている。

本発明の校正用パターン３としては、撮像装置付き顕微鏡による測定画像の再現性評価のために使用するもので、カラーチャート、グレイスケール、解像度チャート、インメガチャート、クロスハッチチャート等を挙げることができる。

本発明の第１の保護基材１及び第２の保護基材２は、少なくとも可視光を透過する透光部を有し、薄板状で平面視矩形の形状を有するものであって、校正用パターン３の材料としては、傷や塵から保護するもので、ガラスやプラスチックが使える。好ましくは顕微鏡用スライドガラスとして通常使用されるものと同様の材料であるガラスが用いられる。またプラスチックの場合には顕微鏡測定の際に障害となる材料中にフィラーなどが含まれないものが好ましい。
また、第１の保護基材１及び第２の保護基材２の各々サイズとしては、限定されるものではないが、短辺が２６±０．１ｍｍ、長辺が７６±０．１ｍｍ、厚みが０．２〜０．４ｍｍであることが好ましい。
これは、汎用の顕微鏡用スライドガラスのサイズが短辺２６ｍｍ、長辺７６ｍｍ、厚み１．２ｍｍであるため、同様のサイズであることが顕微鏡観察の操作上好ましいためである。

本発明のスペーサー５は、第１の保護基材１と第２の保護基材２の間にあって、第１の保護基材１と第２の保護基材２との間隙を保持するように配置されてなり、且つ、少なくとも校正用パターン３が設けられた平面視領域を除いた領域にあって複数の校正用パターン３を固定するように、校正用パターン３の外周を連続的又は非連続的に囲むように設けられている。
スペーサー５の形状は、必ずしも校正用パターン３の平面視領域を除いた領域全体を占めるものである必要がなく、第１の保護基材１と第２の保護基材２との間隙を保持し、校正用パターン３の外周を連続的又は非連続的に囲むようなものであればよい。したがって、スペーサー５は、図１（ｂ）に示すような第１、第２の保護基材の外周と同じサイズで設けられてもよく、その外に、第１、第２の保護基材の外周より小さいサイズで設けられてもよい。
スペーサー５の厚みは、総厚で０．０２〜０．４ｍｍであることが好ましい。スペーサー５は、一枚板で構成されたものの外に、総厚より薄いものを複数枚を重ね合わせられたものを使用することができる。校正用パターン３の厚みが異なる場合に、薄いものを重ねてその枚数によって総厚を調整することが可能となる。
スペーサー５の材料としては、金属、ガラス、プラスチックなどを用いることができ、薄板状で剛性があり、パターン状に貫通孔を設ける際に加工し易いものが好ましい。金属材料の場合には、ステンレス、鉄ニッケル合金（４２合金）、銅などを用いることが好ましい。
スペーサー５の形成方法としては、金属板の打抜き加工やエッチング加工、プラスチック板の打抜き加工等による貫通孔加工や、プラスチック成型や印刷加工等など成形加工等の方法を用いることができる。

上記のような各部材が構成された顕微鏡画像校正用スライドガラス１０を形成するために、全ての部材が積層された後に顕微鏡画像校正用スライドガラス１０の外周の厚み方向の部分をシール接着する方法や、予め第１の保護基材１及び第２の保護基材に嵌合部を設けておき嵌め合わせて合体する方法や、スペーサー５自体が接着力を有するものを使用して貼り合せる方法等を用いることができる。
また、各部材を積層する際には、第１の保護基材１、第２の保護基材２及びスペーサー５の各部材に見当マークやピン孔を設けておくことにより位置合わせを正確に行うことができる。

（第２実施形態）
第２実施形態は、上記の第１実施形態の顕微鏡画像校正用スライドガラスにおいて、
校正用パターンは、複数の独立した薄板状の校正用パターンチップにより構成されてなり、スペーサーは、少なくとも校正用パターンチップが設けられた平面視領域を除いた領域にあって複数の校正用パターンチップを固定するように配置されてなるものである。
図２は、顕微鏡画像校正用スライドガラスの第２実施態様の一例を示すものである。
図２（ａ）は、顕微鏡画像校正用スライドガラス１０において校正用パターン３を２箇所に有する部分についての断面を示すものである。
図２（ｂ）は、図２（ａ）の断面図において顕微鏡画像校正用スライドガラス１０の積層構成を説明するために、第１の保護基材１、校正用パターン３、校正用パターンチップ４、スペーサー５及び第２の保護基材を分離して示したものである。
図２（ａ）に示すように、校正用パターン３は、第１の保護基材１と第２の保護基材２の間に挟持され重ならないように配置されている。
校正用パターン３は、図２（ｂ）に示すように、複数の、ここでは６つの校正用パターンチップ４から構成されている。
図２（ａ）において、スペーサー５は、第１の保護基材１と第２の保護基材２との間隙を保持するように配置されてなり、且つ、少なくとも校正用パターンチップ４が設けられた領域を除いた領域にあって複数の校正用パターンチップ４を固定するように、校正用パターンチップ４の外周を連続的又は非連続的に囲むように設けられている。

図３は、図２におけるスペーサー５と校正用パターンチップ４との平面視上の位置関係を示す平面図である。
頭３（ａ）は、図２に示す顕微鏡画像校正用スライドガラス１０のスペーサー５のみを示したもので、スペーサー５の校正用パターンチップ４が配置され得る部分が、スペーサー５の表裏を貫通する空洞となっている。
図３（ｂ）は、スペーサー５の空洞に校正用パターンチップ４を嵌めこんだ状態を示すものである。
スペーサー５は、校正用パターンチップ４の外周を連続的又は非連続的に囲むように設けられている。このスペーサー５によって、校正用パターンチップ４を顕微鏡画像校正用スライドガラス１０内の所定の位置に精度よく配置することができる。

ここで、校正用パターン３の一例としてのカラーチャートについて説明する。
カラーチャートは、色評価用の色として、例えば、赤（Ｒ）、緑（Ｇ）、青（Ｂ）、イエロー（Ｙ）、シアン（Ｃ）、マゼンタ（Ｍ）から構成されているものである。
したがって校正用パターン３であるカラーチャートは、校正用パターンチップ４として色評価用の各色を配列したものであり、校正用パターンチップ４は、色評価用の各色を校正用パターンチップ４より大きいサイズで作成したものを切断して形成されたものである。
ここで色評価用の各色を校正用パターンチップ４より大きいサイズで作成したカラーチャートとしては、例えば、図１０に示すような撮像装置用カラーチャートを基準色（大日本印刷（株）製：「スタンダードカラーバーチャート」）を用いることができる。
上記の「スタンダードカラーバーチャート」は、予め設計された赤（Ｒ）、緑（Ｇ）、青（Ｂ）、イエロー（Ｙ）、シアン（Ｃ）、マゼンタ（Ｍ）からなるものである。有効サイズは１７５ｍｍ×２４５ｍｍで６色のカラーバーにより構成されている。
上記の「スタンダードカラーバーチャート」の製造方法としては、ガラス板上に臭化カリウムを硝酸銀の溶液をゼラチンに加えて作製された銀塩乳剤を塗布し乾燥された銀塩写真乾板から脱銀されたものを基板として、その基板を各色に応じた染料により染色して形成する方法を用いることができる。

上記の「スタンダードカラーバーチャート」を校正用パターンチップ４としてのサイズに切断して、用いる場合には、校正用パターンチップ４に色ムラや濃淡ムラがなく安定した特性を確保できる効果を有する。校正用パターンチップ４が高倍率の対物レンズに対応した微小のサイズになっても再現性評価用の基準色として純度が保たれている。耐える例えば、「スタンダードカラーバーチャート」と同様の基準色の校正用パターンチップ４を、ガラス上に印刷法、インクジェット法、フォトリソグラフィ法などにより形成することを試みた場合に比べれば、印刷インキや塗布液の調整による色の純度の低下や、形成された膜の膜厚ムラなどによる色の純度の低下の問題がない効果を有する。

また、基準色としては、上記の赤（Ｒ）、緑（Ｇ）、青（Ｂ）、イエロー（Ｙ）、シアン（Ｃ）、マゼンタ（Ｍ）の６色に限定されない。
観察対象に応じた色を基準色とする方法を採用することができる。例えば、生物組織や細胞を染色して観察する場合には、生物組織を標準の染色法、例えば、ヘマトキシリン・エオシン染色法やその他の染色法により染色された赤系色、緑系色、青系色、シアン系色、マゼンタ系色、イエロー系色、他の系統色などから選択されたものを基準色とすることができる。

各校正用パターン３の中での校正用パターンチップ４の配列としては、図３（ｂ）のように一列に配置されている場合の外に、格子状や円形状に配置されていてもよい。
図４は、上記のカラーチャートの校正用パターンチップ４が、２×３の格子状に配置されている例を示すものである。
図４に示すように、校正用パターン３において、校正用パターンチップ４は、例えば図中の上段右から左方向にの赤（Ｒ）、緑（Ｇ）、青（Ｂ）の順に配置され、図中の下段左から右方向にシアン（Ｃ）、マゼンタ（Ｍ）、イエロー（Ｙ）が順に配置されている。また上段と下段の間に無色透光性のブランクの領域を有している。

また、本発明の校正用パターン３の一例として、グレイスケールの場合について説明する。
グレイスケールは、反射型では、白から黒までその中間の灰色の範囲を段階的に反射濃度を変化させて諧調を表現したスケールであり、透過型では、透過率を段階的に変化させて諧調を表現したスケールである。ここでは、透過型のグレイスケールを使用する。
校正用パターン３であるグレイスケールは、透過率の異なる諧調毎の校正用パターンチップ４が配列して構成されている。配列の例としては、図３（ｂ）のように一列に図中の左側から右側方向に透過率が段階的に小さくなるものの他に格子状のもの等がある。
図５は、上記グレイスケールの校正用パターンチップ４が２列に構成された例を示すものである。
図５に示すように、校正用パターン３において、校正用パターンチップ４は、例えば図中の下段右から左方向へ、透過率が１．８６％から７７．１４％まで６諧調となり、上段右から左方向へ、透過率５１．４３％から８３．５７％まで６諧調となるように配列されている。
したがって校正用パターン３であるグレイスケールは、校正用パターンチップ４として透過率が小さいものから大きいものまで各諧調のチップを配列したものであり、校正用パターンチップ４は、校正用パターンチップ４より大きいサイズで作成したものを切断して形成されたものである。
グレイスケールとしては、例えばＮＤフィルター（減光フィルター）と同様の形成方法で、クロムニッケル合金をスパッタ法により形成することができる。
上記のＮＤフィルターを校正用パターンチップ４としてのサイズに切断して、用いる場合には、校正用パターンチップ４に濃淡ムラがなく安定した特性を確保できる効果を有する。校正用パターンチップ４が高倍率の対物レンズに対応した微小のサイズになっても再現性評価用の基準色として純度が保たれている。例えば、グレイスケールを上記のようにして得た校正用パターンチップ４を、ガラス上に直接、印刷法、インクジェット法、フォトリソグラフィ法などにより校正用パターンチップ４のサイズで形成することを試みた場合に比べれば、印刷インキや塗布液の配合や、形成された膜の膜厚ムラなどによる諧調性の低下の問題がない効果を有する。

以上のように顕微鏡画像校正用スライドガラス１０が構成されていることによって、校正用パターン３が、顕微鏡画像校正用スライドガラス１０の平面視上の特定の位置に精度良く、倍率の異なる対物レンズの視野に収まるサイズの複数の校正用パターンが配置されることにより、顕微鏡、及び撮像装置付き顕微鏡の色再現性の評価が、高精度で作業性良く行える効果を有する。
また、校正用パターン３がカラーチャートである場合、校正用パターチップ４としては、各色毎に校正用パターンチップ４のサイズより大きいサイズで作成されたものを切断して使用されるので、校正用パターンチップ４に色ムラや濃淡ムラがなく安定した特性を確保できる効果を有する。比較として顕微鏡画像校正用スライドガラス１０上に、印刷法やインクジェット法、フォトリソグラフィ法などで、校正用パターンチップ４を作成する場合に生じ易い微小サイズでの色や濃度のムラの問題などがない効果を有する。

（第３実施形態）
第３実施形態は、上記の第１〜第２実施形態における顕微鏡画像校正用スライドガラスにおいて、第１の保護基材および第２の保護基材は、平面視上対応する同一位置にパターン状の前記透光部を有し、透光部は、第１の保護基材と第２の保護基材の間に挟み込まれた校正用パターンの観察領域に対応するように設けられてなり、第１の保護基材および第２の保護基材において透光部を除く部分に遮光部が設けられてなるものである。
図６は、顕微鏡画像校正用スライドガラスの第３実施形態の一例を示す断面図と部分図である。
図６（ａ）は、顕微鏡画像校正用スライドガラス１０において校正用パターン３を２箇所に有する部分についての断面を示すものである。
図６（ｂ）は、図６（ａ）の断面図において顕微鏡画像校正用スライドガラス１０の積層構成を説明するために、透光部６と遮光部７を有する第１の保護基材１、校正用パターン３、校正用パターンチップ４、スペーサー５及び透光部６と遮光部７を有する第２の保護基材を分離して示すものである。
図６（ｃ）は、透光部６と遮光部７を有する第２の保護基材と校正用パターチップ４との構成上の関係を示す部分図である。

図６（ａ）に示すように、校正用パターン３は、第１の保護基材１と第２の保護基材２の間に挟持され重ならないように配置されている。
校正用パターン３は、図６（ｂ）に示すように、複数の、ここでは６つの校正用パターンチップ４から構成されている。
図６（ａ）において、スペーサー５は、第１の保護基材１と第２の保護基材２との間隙を保持するように配置されてなり、且つ、少なくとも校正用パターンチップ４が設けられた領域を除いた領域にあって複数の校正用パターンチップ４を固定するように、校正用パターンチップ４の外周を連続的又は非連続的に囲むように設けられている。
図６（ａ）に示すように、顕微鏡画像校正用スライドガラス１０において、第１の保護基材１および第２の保護基材２の両方が、平面視上対応する同一位置にパターン状の透光部６と遮光部７（以下「遮光パターン」と称する。）とを有している。
図６（ａ）において、透光部６は、第１の保護基材１と第２の保護基材２の間に挟み込まれた校正用パターン３又は校正用パターンチップ４の観察領域に対応するように設けられており、顕微鏡画像校正用スライドガラス１０を顕微鏡に設置した際に、校正用パターン３又は校正用パターンチップ４を顕微鏡に設けられた光源からの光が透過するように設けられている。
遮光部７は、第１の保護基材１および前記第２の保護基材２において透光部６を除く部分に設けられている。
図６（ｃ）は、図６（ａ）において遮光パターンを有する第２の保護基材２と校正用パターンチップ４の積層された状態を、校正用パターンチップ４側から見た図である。
図６（ｃ）に示すように、図６（ａ）に示す第２の保護基材２に形成された遮光パターンと校正用パターンチップ４との関係の一例を示している。
図６（ｃ）に示すように校正用パターンチップ４と対応する遮光パターンの透光部６との関係において、校正用パターンチップ４は対応する透光部６よりサイズが大きく、校正用パターンチップ４は対応する透光部６を全て覆いさらに外周部を超えることが好ましい。
以上の実施形態は、第２実施形態において第１の保護基材及び第２の保護基材に遮光パターンを有する場合について記載したが、第１実施形態においても同様に行うことが可能である。その場合には、校正用パターン３を一体として取扱い、校正用パターン３と対応する遮光パターンの透光部６との関係において、校正用パターン３は対応する透光部６よりサイズが大きく、校正用パターン３は対応する透光部６を全て覆いさらに外周部を超えることが好ましい。

本発明の遮光パターンを有する第１の保護基材１及び第２の保護基材２は、銀塩写真法、印刷法、フォトリソ法などによって形成することができる。
銀塩写真法によれば、透明基材上の銀塩乳剤層面をレーザー描画法やフォトマスクを介した方法により露光し現像することによって、パターン状の透光部６と遮光部７とを有する第１の保護基材１および第の保護基材２を作成することができる。
また、印刷法によれば、透明基材上に黒色インキでグラビア印刷により黒色パターンを印刷することによって、パターン状の透光部６と遮光部７とを有している第１の保護基材１および第の保護基材２を作成することができる。
また、インクジェット法によれば、透明基材上に黒色インキでインクを吐出することによって、パターン状の透光部６と遮光部７とを有している第１の保護基材１および第の保護基材２を作成することができる。

以上のように顕微鏡画像校正用スライドガラス１０が構成されていることによって、校正用パターン３又は校正用パターンチップ４が、顕微鏡画像校正用スライドガラス１０の平面視上の特定の位置に精度良く配置されていること、第１の保護基材１および第２の保護基材２は、平面視上対応する同一位置にパターン状の透光部６と遮光部７とを有し、透光部６は、顕微鏡画像校正用スライドガラス１０を前記顕微鏡に設置した際に、前記校正用パターン３又は校正用パターンチップ４を光が透過するように設けられていることにより、校正用パターン３又は校正用パターンチップ４の部分以外の顕微鏡の光が眼や撮像装置に間接的に眼や撮像装置に入り難くなるので、顕微鏡、及び撮像装置付き顕微鏡の色再現性の評価を高精度で作業効率良く行える効果を有する。

（第４実施形態）
第４実施形態は、上記の第１〜第３実施形態の顕微鏡画像校正用スライドガラスにおいて、接着層８が、第１の保護基材１とスペーサー５との間、及び第２の保護基材とスペーサー５との間の少なくとも一方に設けられているものである。
図７は、顕微鏡画像校正用スライドガラスの第４実施形態の一例を示す断面図である。
図７（ａ）は断面図であり、図７（ｂ）は、積層構成を判り易くするために、第１の保護基材１、校正用パターン３、スペーサー５、接着層８及び第２の保護基材２を分離して示したものである。
図７（ａ）及び（ｂ）に示すように、顕微鏡画像校正用スライドガラス１０において、接着層８が、第１の保護基材１とスペーサー５との間、及び第２の保護基材２とスペーサー５との間の両方に設けられている。

接着層８は、第１の保護基材１とスペーサー５との間、及び第２の保護基材２とスペーサー５との間のいずれか一方又は両方にあって、各部材間を接着するものである。
接着層８は、接着された状態の顕微鏡画像校正用スライドガラス１０に外観上の歪みがなく、顕微鏡台に載置されて観察される際に全体に焦点のズレがないように形成されている。
接着層８の材料としては、接着剤や粘着剤を、液状またはテープ状にしたものを用いることができる。なかでもテープ状のものが好ましく、校正用パターン３に接着剤が浸透する等により汚染することがない利点がある。

以上のように顕微鏡画像校正用スライドガラス１０が構成されていることによって、校正用パターン３が、顕微鏡画像校正用スライドガラス１０の平面視上の特定の位置に精度良く配置されていること、接着層８を有する部分が、第１の保護基材１とスペーサー５との間、及び第２の保護基材２とスペーサー５との間のいずれか一方又は両方にあることにより、各部材間の固定を安定して行え、スペーサー５への校正用パターン３の嵌め込み等の高精度の加工がなくても容易に固定できる効果を有する。

（第５実施形態）
第５実施形態は、上記の第４実施形態の顕微鏡画像校正用スライドガラスにおいて、接着層が、第１の保護基材と校正用パターンの一部分との間および第２の保護基材と校正用パターンの一部分との間の少なくとも一方にも設けられているものである。
図８は、顕微鏡画像校正用スライドガラスの第５実施形態の一例を示す断面図である。
図８（ａ）は断面図であり、図８（ｂ）は、積層構成を判り易くするために、第１の保護基材１、校正用パターン３、スペーサー５、接着層８及び第２の保護基材２を分離して示したものである。
図８（ａ）及び（ｂ）に示すように、顕微鏡画像校正用スライドガラス１０において、接着層８を有する部分が、第１の保護基材１と校正用パターン３の一部分との間、及び第２の保護基材２と校正用パターン３の一部分との間の両方にある。
接着層８は、校正用パターン３の一部分にも重なるように形成されており、校正用パターン３とスペーサー５との間に平面視上間隙がある場合でも各部材間を固定することができるものである。
接着層８の校正用パターン３の一部分に重なる部分は、顕微鏡観察の際に影響のない領域に設けられており、第１の保護基材１および第２の保護基材２の遮光部７に対応する領域に覆われて設けられていることが好ましい。
接着層８は、接着された顕微鏡画像校正用スライドガラス１０の外観上の歪みがないように厚みを調整して設けられていることが好ましい。

（第６実施形態）
第６実施形態は、上記の第４〜第５実施形態の顕微鏡画像校正用スライドガラスにおいて、接着層が、第１の保護基材と校正用パターンとの間および第２の保護基材と校正用パターンとの間の少なくとも一方にも設けられているものである。
図９は、顕微鏡画像校正用スライドガラスの第６実施形態の一例を示す断面図である。
図９（ａ）は断面図であり、図９（ｂ）は、積層構成を判り易くするために、第１の保護基材１、校正用パターン３、スペーサー５、接着層８及び第２の保護基材２を分離して示したものである。
図９（ａ）及び（ｂ）に示すように、顕微鏡画像校正用スライドガラス１０において、接着層８が、第１の保護基材１と校正用パターン３との間、第１の保護基材とスペーサー５との間、第２の保護基材２と校正用パターン３との間、第２の保護基材とスペーサー５との間に設けられている。
接着層８は校正用パターン３上に形成されているので、顕微鏡観察の際には接着剤を通して測定される。したがって、接着剤８は、測定に影響のない材料からなり、光透過性に優れ、フィラー等が含まれないものが好ましい。
以上のような接着層８の構成によれば、顕微鏡画像校正用スライドガラス１０の製造方法として、接着層８を第１の保護基材１の全面に形成しておき、その接着層側にスペーサー５を積層して、校正用パターン３を上記スペーサー５の所定位置に配置した後に、接着層が形成された第２の保護基材を積層する方法を用いることができる。

以上のように顕微鏡画像校正用スライドガラス１０が構成されていることによって、校正用パターン３が、顕微鏡画像校正用スライドガラス１０の平面視上の特定の位置に精度良く配置されていること、接着層８を有する部分が、第１の保護基材１とスペーサー５との間、及び第２の保護基材２とスペーサー５との間のいずれか一方又は両方にあり、第１の保護基材１と校正用パターン３の一部分との間、及び第２の保護基材２と校正用パターン３の一部分との間のいずれか一方又は両方にあることによって、スペーサー５への校正用パターン３の嵌め込み等の高精度の加工がなくても容易に固定できる効果を有する。

１ 第１の保護基材
２ 第２の保護基材
３ 校正用パターン
４ 校正用パターンチップ
５ スペーサー
６ 透光部
７ 遮光部
８ 接着層
１０ 顕微鏡画像校正用スライドガラス

Claims (4)

1. 少なくとも、透光部を有する第１の保護基材と、顕微鏡の透過光により観察可能な複数の校正用パターンと、スペーサーと、透光部を有する第２の保護基材とにより構成されてなる顕微鏡画像校正用スライドガラスであって、
   前記第１の保護基材および前記第２の保護基材は、薄板状であり、
   前記校正用パターンの各々は、前記顕微鏡の倍率の異なる対物レンズに対応して設けられ、前記顕微鏡の前記対物レンズ毎の視野内に収め得るサイズの薄板状のものであり、前記第１の保護基材と前記第２の保護基材との間に挟持され重ならないように配置されてなり、
   前記スペーサーは、前記第１の保護基材と前記第２の保護基材との間にあって、前記第１の保護基材と前記第２の保護基材との間隙を保持するように配置されてなり、且つ、複数の前記校正用パターンを固定するように配置されてなり、
   前記校正用パターンは、複数の独立した薄板状の校正用パターンチップにより構成されてなり、
   前記校正用パターンにおいて、前記校正用パターンチップは、赤（Ｒ）、緑（Ｇ）、青（Ｂ）、シアン（Ｃ）、マゼンタ（Ｍ）およびイエロー（Ｙ）が配置され、無色透光性のブランクの領域を有する、顕微鏡画像校正用スライドガラス。
2. 前記校正用パターンにおいて、前記校正用パターンチップは、一方の段に前記赤（Ｒ）、前記緑（Ｇ）および前記青（Ｂ）が配置され、他方の段に前記シアン（Ｃ）、前記マゼンタ（Ｍ）および前記イエロー（Ｙ）が配置され、前記一方の段と前記他方の段との間に前記無色透光性のブランクの領域を有する、請求項１に記載の顕微鏡画像校正用スライドガラス。
3. 少なくとも、透光部を有する第１の保護基材と、顕微鏡の透過光により観察可能な複数の校正用パターンと、スペーサーと、透光部を有する第２の保護基材とにより構成されてなる顕微鏡画像校正用スライドガラスであって、
   前記第１の保護基材および前記第２の保護基材は、薄板状であり、
   前記校正用パターンの各々は、前記顕微鏡の倍率の異なる対物レンズに対応して設けられ、前記顕微鏡の前記対物レンズ毎の視野内に収め得るサイズの薄板状のものであり、前記第１の保護基材と前記第２の保護基材との間に挟持され重ならないように配置されてなり、
   前記スペーサーは、前記第１の保護基材と前記第２の保護基材との間にあって、前記第１の保護基材と前記第２の保護基材との間隙を保持するように配置されてなり、且つ、複数の前記校正用パターンを固定するように配置されてなり、
   前記校正用パターンは、複数の独立した薄板状の校正用パターンチップにより構成されてなり、
   前記校正用パターンあるいは前記校正用パターンチップのいずれか一方は、対応する前記透光部よりサイズが大きく、対応する前記透光部を全て覆いさらに外周部を超えている、顕微鏡画像校正用スライドガラス。
4. 少なくとも、透光部を有する第１の保護基材と、顕微鏡の透過光により観察可能な複数の校正用パターンと、スペーサーと、透光部を有する第２の保護基材とにより構成されてなる顕微鏡画像校正用スライドガラスであって、
   前記第１の保護基材および前記第２の保護基材は、薄板状であり、
   前記校正用パターンの各々は、前記顕微鏡の倍率の異なる対物レンズに対応して設けられ、前記顕微鏡の前記対物レンズ毎の視野内に収め得るサイズの薄板状のものであり、前記第１の保護基材と前記第２の保護基材との間に挟持され重ならないように配置されてなり、
   前記スペーサーは、前記第１の保護基材と前記第２の保護基材との間にあって、前記第１の保護基材と前記第２の保護基材との間隙を保持するように配置されてなり、且つ、複数の前記校正用パターンを固定するように配置されてなり、
   前記接着層が、前記第１の保護基材と前記校正用パターンとの間および前記第２の保護基材と前記校正用パターンとの間の少なくとも一方に設けられている、顕微鏡画像校正用スライドガラス。