JP2019089767A - 酸性スフィンゴミエリナーゼ障害のマーカーおよびその使用 - Google Patents

Abstract

【課題】ニーマン・ピック病などの酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）障害を有するヒト対象を処置する方法の提供。
【解決手段】対象にＡＳＭ障害を処置するための治療薬を投与後、ｌｙｓｏ−ＳＰＭ（スフィンゴシルホスフォリルコリン）レベルを測定して参照レベルと比較し、その後の治療薬の用法・用量を調整する方法。治療薬が、組換えヒト酸性スフィンゴミエリナーゼ（ｒｈＡＳＭ）又は修飾ｒｈＡＳＭを含む当該方法。高ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルを検出することなく対象が忍容性を示す治療薬の最高濃度用量以下の用量を含む維持用量の治療薬を投与することをさらに含む当該方法。
【選択図】なし

Description

本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている、２０１３年６月７日に出願した米国仮出願第６１／８３２，３０２号の米国特許法第１１９条に基づく優先権の利益を主張するものである。

本開示は、ニーマン・ピック病などの酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）障害をスクリーニング、診断、モニタリングおよび／または処置する方法に関する。

酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）は、脳、肝臓、肺、脾臓およびリンパ節にみられるリン脂質蓄積物質であるスフィンゴミエリン（ＳＰＭ）をセラミドとホスホリルコリンに加水分解するリソソームのホスホジエステラーゼ酵素である。ＡＳＭ活性の欠乏は、身体がＳＰＭを分解することを不能にする可能性がある。ＡＳＭ障害の患者では、ＳＰＭは、主にマクロファージに蓄積するが、肝細胞および他の細胞型にも蓄積し、著明な肝脾腫大、血小板減少、間質性肺疾患および冠動脈疾患をきたす。ＳＰＭは、血漿、全血または尿中において有意に上昇せず、非侵襲性バイオマーカーとしての使用は限られる。

現在、ＡＳＭ障害の診断は、疑わしい臨床症候の評価、肝臓もしくは肺生検、血液サンプル中のＡＳＭ活性の試験（偽陰性および陽性の症例が報告された場合）、および／または遺伝子検査（例えば、ＳＭＰＤ１遺伝子変異分析）などの、侵襲的検査および／または時間を要する検診を必要とする。ＡＳＭ障害の処置は、補充酵素の投与を含む場合がある。高用量での酵素補充療法は、有毒または有害な代謝物の産生をきたす可能性がある。したがって、ＡＳＭ障害をスクリーニング、診断および／または処置の過程をモニタリングするための改善された方法を開発する必要性が存在する。本明細書で開示されるのは、ＡＳＭ障害を非侵襲的にスクリーニング、診断、治療法をモニタリング、および／またはＡＳＭ障害を処置するための治療薬の用量を調整する方法であって、方法は生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭ（スフィンゴシルホスフォリルコリンもしくはｌｙｓｏ−スフィンゴミエリン）のレベルを測定することを含む。高レベルのｌｙｓｏ−ＳＰＭは、ＡＳＭ障害をスクリーニングまたは診断するために使用することができる。高レベルのｌｙｓｏ−ＳＰＭは、過剰に高用量の酵素補充療法に関連する１つまたはそれ以上の有毒な代謝物の産生のシグナルまたは指標として使用することもでき、これにより、該治療法の有害な副作用を回避しながら、ＳＰＭの蓄積を減少させる酵素療法の検量が可能になる。高レベルのｌｙｓｏ−ＳＰＭは、ＡＳＭ障害の処置の過程の長期有効性をモニタリングするのに使用することもできる（例えば、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが処置の過程を通じて低下しない場合、このことは、無効な処置を示す可能性がある）。

ニーマン・ピック病（ＮＰＤ）は、遺伝的常染色体劣性の脂質蓄積症で、マクロファージおよびニューロンなどの細胞のリソソームへのＳＰＭの過剰蓄積を特徴とし、これは正常な細胞機能を損なう。ニーマン・ピック病Ａ型（「ＮＰＤ−Ａ」）は、乳児の急速進行性神経変性疾患であり、典型的には２〜３歳までに死に至る。ニーマン・ピック病Ｂ型（「ＮＰＤ−Ｂ」）は、肝臓と脾臓の肥大、および呼吸困難をもたらし、一般的に成人期早期までに死亡する。ニーマン・ピック病の他のタイプ、例えばＣ型（「ＮＰＤ−Ｃ」）も、ＳＰＭおよび／またはｌｙｓｏ−ＳＰＭの蓄積に関連している。これらは、本明細書ではＡＳＭ障害（ＡＳＭＤ）とも呼ぶ。ニーマン・ピック病のこれらの各形態は、本明細書では総称してニーマン・ピック病（ＮＰＤ）と呼ぶ。

ＮＰＤは、一般集団よりもアシュケナージ系ユダヤ人を祖先とする個体で発生頻度が高
い。アシュケナージ系ユダヤ人におけるＮＰＤ−Ａの発生は約１／４０，０００で、遺伝子頻度（ｑ）は約１／２００、およびヘテロ接合体キャリア頻度（２ｐｑ）は１／１００である（非特許文献１）。アシュケナージ系ユダヤ人集団におけるＮＰＤ−Ｂのヘテロ接合体キャリアの発生は、より頻度が低い（同上）。ＮＰＤ Ａ型およびＢ型を合わせたヘテロ接合体キャリア頻度は、アシュケナージ系ユダヤ人系統の個体において約１／７０と推定されている（同上）。様々な国で行なわれた疫学研究では、世界のいくつかの国を総合したＮＰＤ Ａ型およびＢ型の発生は、新生児で１／１６７，０００〜１／２５０，０００の間であると推定されている（非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４）。ヘテロ接合体キャリアの割合は、個体で１／２００〜１／２５０の間であると考えられている。

ＮＰＤ−ＡまたはＮＰＤ−Ｂのいずれかの患者は、残留ＡＳＭ活性（正常の約１〜１０％）を有するが、これは、リソソーム内のスフィンゴミエリンの過剰蓄積を防ぐには十分ではない。さらに、ＮＰＤ−Ｂの臨床経過は非常に変わりやすく、現在、疾患の重症度と残留ＡＳＭ活性の相関関係を明らかにすることは不可能である。ＮＰＤ−ＡまたはＮＰＤ−Ｂのいずれかに罹患している患者の酵素的診断は、血液サンプルで行うことができるが、この診断は、肝臓または肺生検など侵襲的手技が先行する場合が多い。さらに、偏性ヘテロ接合体の酵素的検出は、特に末梢白血球を酵素源として使用することに問題があることが証明された。１つには、一部のソースでの中性スフィンゴミエリナーゼの発生および／または変異対立遺伝子から生じる残留ＡＳＭ活性の存在が、どちらかの疾患サブタイプに対して確実にはキャリアを判別できないことに寄与していることが考えられる。中性スフィンゴミエリナーゼを発現しない培養皮膚線維芽細胞を使用しても、ヘテロ接合体の明確な結果は得られていない。したがって、ＮＰＤなどのＡＳＭ障害を正確に検出、スクリーニング、診断および処置する代替的な方法が求められている。

酵素補充療法（ＥＲＴ）は、様々なリソソーム蓄積病を処置するために使用されている。なかでもテイ・サックス、ポンペおよびニーマン・ピック病のＥＲＴを検討している、その全体が本明細書に組み込まれている、特許文献１および特許文献２を参照。ＥＲＴは、欠乏および／または欠損酵素を外部から供給された酵素で補充しようとするものである。ニーマン・ピック病のＥＲＴの場合、罹患している個体がスフィンゴミエリンを処理できるようにし、そのリソソーム内への蓄積を防止することが目標である。効果を得るには、このような療法は、まず蓄積したスフィンゴミエリンを分解するために十分に多量の補充酵素に加えて、スフィンゴミエリンのさらなる蓄積を防止するための補充酵素の継続的投与が必要である。しかしながら、蓄積したスフィンゴミエリンの代謝は、有毒または有害な代謝物の産生をもたらす可能性がある。したがって、有害な副作用をもたらすおそれがある高レベルの代謝物を生じることなく、患者において蓄積したスフィンゴミエリンを効果的に減量するために、ＥＲＴの慎重な調整が必要である。

前述のように、ＳＰＭは、血漿、全血または尿中において有意に上昇せず、ＡＳＭ障害をスクリーニング、診断または処置をモニタリングするための非侵襲性バイオマーカーとしての使用は限られる。本明細書に開示されるように、ＳＰＭの脱アシル化形態である、ｌｙｓｏ−ＳＰＭ（スフィンゴシルホスフォリルコリンもしくはｌｙｓｏ−スフィンゴミエリン）は、ＡＳＭ障害を有するおよび／またはＡＳＭ障害の処置を受けている患者の末梢組織を含む組織中で有意に上昇し、ＡＳＭ障害をスクリーニング、診断および／またはＡＳＭ障害の処置をモニタリングするための有望なマーカーとなる。血漿中のアシル化および脱アシル化スフィンゴ糖脂質の両方のレベルの変化が検出可能であるという、この二分法は、多くの他のリソソーム蓄積障害とは対照的である。ＡＳＭ障害を有するまたはＡＳＭ障害の処置を受けている患者の血漿中においてＳＰＭのレベルの変化が検出できないということをふまえて、ｌｙｓｏ−ＳＰＭも同様に、スクリーニング、診断または処置のモニタリングには適していないことが想定されたかもしれなかった。しかしながら、本明
細書で開示されるように、ｌｙｓｏ−ＳＰＭは、血漿などの末梢組織を含む様々な組織からの生体サンプルにおいて異なるレベルで検出されることが見出されている。

ｌｙｓｏ−ＳＰＭを含むｌｙｓｏ−スフィンゴ脂質（ｌｙｓｏ−ＳＬ）は、スフィンゴ脂質の脱アシル化形態であり；数種類が、いくつかのリソソーム蓄積障害において上昇することが示されている。非特許文献５。ｌｙｓｏ−ＳＰＭおよび他のｌｙｓｏ−ＳＬが産生される機序は、十分に解明されていない。スフィンゴシンに同時的な上昇がみられないことは、対応するスフィンゴ脂質の脱アシル化が、可能性のある生成の経路であることを示唆する。しかしながら、現在までのところ確認されているスフィンゴミエリンデアシラーゼのみが、アトピー性皮膚炎対象の角質層に由来する。非特許文献６。このデアシラーゼの発現は、いくつかの生理学的条件下で選択された細胞型に限定されるように思われる。胎盤、脳および尿からの精製されたＡＳＭは、ｌｙｓｏ−ＳＰＭを加水分解しないことが示されている。非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９。ｌｙｓｏ−ＳＰＭの生合成経路に関する理解が進んでいないことは、推測的にＡＳＭ障害を有する患者におけるｌｙｓｏ−ＳＰＭの発現レベルを予測することが困難であることをさらに強調する。

ｌｙｓｏ−ＳＰＭは、リゾホスホリパーゼＤ活性を有する細胞外酵素であるオートタキシンを介してスフィンゴシン−１−リン酸へ速やかに代謝されるために、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける血中の半減期が短い。非特許文献１０；非特許文献１１。ＮＰＤ−Ｂ患者の脾臓および肝臓、ならびに、ＡＳＭ活性がわずかであるかまたは無く、重篤な神経障害性疾患を発現するＮＰＤ−Ａ対象の脳を除き、他の臓器におけるｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルに関する報告はない。

米国特許第７，００１，９９４号 米国特許出願第２０１１／００５２５５９号

Ｇｏｏｄｍａｎ、１９７９年「Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ Ａｍｏｎｇ Ｔｈｅ Ｊｅｗｉｓｈ Ｐｅｏｐｌｅ」、Ｊｏｈｎ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｕｎｉｖ． Ｐｒｅｓｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、９６〜１００頁 Ｍｉｅｋｌｅら、１９９９年 ＪＡＭＡ ２８１（３）：２４９〜２５４頁 Ｐｏｏｒｔｈｕｉｓら、１９９９年 Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅｔ． １０５：１５１〜１５６頁 Ｐｉｎｔｏら、２００４年 Ｅｕｒｏ． Ｊ． Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅ． １２：８７〜９２頁 Ｇａｌｂｉａｔｉら、「Ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ａｎｄ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｇｅｎｅ−ｔｒａｎｓｆｅｒ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｉｎ ｎｅｗｂｏｒｎ Ｔｗｉｔｃｈｅｒ ｍｉｃｅ ｒｅｖｅａｌ ｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｎｅｏｕｓ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ Ｋｒａｂｂｅ ｄｉｓｅａｓｅ」、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．８７：１７４８〜１７５９頁（２００９） Ｍｕｒａｔａら、「Ａｂｎｏｒｍａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎ ａｃｙｌａｓｅ ｉｎ ａｔｏｐｉｃ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ：ａｎ ｅｔｉｏｌｏｇｉｃ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｃｅｒａｍｉｄｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ？」、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０６：１２４２〜１２４９頁（１９９６） Ｐｅｎｔｃｈｅｖら、「Ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｐｌａｃｅｎｔａｌ ｔｉｓｓｕｅ」、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．４８８：３１２〜３２１頁（１９７７） Ｙａｍａｎａｋａ ａｎｄ Ｓｕｚｕｋｉ、「Ａｃｉｄ ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｒａｉｎ：ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｈｏｍｏｇｅｎｅｉｔｙ」、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．３８：１７５３〜１７６４頁（１９８２） Ｑｕｉｎｔｅｒｎら、「Ａｃｉｄ ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｕｒｉｎｅ：ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ」、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ． ９２２：３２３〜３３６頁（１９８７） Ｔｏｋｕｍｕｒａら、「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｌａｓｍａ ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ｄ， ａ ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃ ａｃｉｄ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ， ａｓ ａｕｔｏｔａｘｉｎ， ａ ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ」、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７７：３９４３６〜３９４４２頁（２００２） Ｃｌａｉｒら、「Ａｕｔｏｔａｘｉｎ ｈｙｄｒｏｌｙｚｅｓ ｓｐｈｉｎｇｏｓｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ， ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ−１−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ」、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６３：５４４６〜５４５３頁（２００３）

本明細書で開示されるように、ｌｙｓｏ−ＳＰＭは、ＡＳＭ障害を有するおよび／または処置を受けている患者からの生体サンプル（例えば、末梢組織から採取されたサンプル）において濃度の変化で検出される。レベルの変化は、処置の一過性の効果を反映する可能性がある（例えば、ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルは、ＥＲＴに反応した急性毒性代謝物の産生のマーカーとしての役割を果たす可能性がある）。レベルの変化は、診断的に使用することもできる（例えば、ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルの変化は、ＡＳＭ障害を患う症候性または発症前の対象を特定するための診断またはスクリーニングマーカーとしての役割を果たす可能性がある）。レベルの変化は、ＡＳＭ障害の処置の過程の長期有効性をモニタリングするために使用することもできる（例えば、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが処置の過程を通じて低下しない場合、このことは、無効な処置を示す可能性がある）。したがって、本明細書で開示されるのは、ｌｙｓｏ−ＳＰＭ（スフィンゴシルホスフォリルコリンもしくはｌｙｓｏ−スフィンゴミエリン）を含む新規バイオマーカーを使用して、ＮＰＤなどのＡＳＭ障害をスクリーニング、診断、処置の進行をモニタリングおよび／またはＡＳＭ障害の処置の治療薬の用量を調整する新たな方法である。処置の過程をモニタリングすることは、処置の過程を通じて毒性に関する１つまたはそれ以上のマーカー（例えば、ｌｙｓｏ−ＳＰＭ）のレベルの減少を検出することを含み、これにより、有効な処置計画であることが示され、または、経時的にマーカーのレベルに変化がみられないことが検出され、これにより、レジメンが無効であることが示される。

本明細書で開示される方法は、酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）障害を有するヒト対象を処置する方法も含む。いくつかの態様では、方法は、対象に、第１の濃度を有する、ＡＳＭ障害を処置するための第１の用量の治療薬を投与すること；および対象が第１の用量の投与後、参照レベル以下のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを有することが決定された場合、対象に、第１の濃度以上の第２の濃度を有する第２の用量の治療薬を投与すること
を含む。方法は、末梢組織からの生体サンプルにおいてｌｙｓｏ−ＳＰＭを測定すること、およびｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルの変化を検出することにより、ＡＳＭ障害を有する患者を特定することを含む。方法は、治療薬、例えば、患者の組織におけるＳＰＭレベルを減少させる薬剤を用いて、患者を処置する結果として変化するｌｙｓｏ−ＳＰＭを含む１つまたはそれ以上の毒性マーカーのレベルを検出することによって、ＡＳＭ障害の患者の処置をモニタリングまたは調整することも含む。方法によって、このような患者の非侵襲的評価が可能になる。

本明細書で開示される方法は、一部の実施形態では、ＮＰＤなどのＡＳＭ障害をスクリーニング、診断、処置の進行をモニタリング、および／または処置を調整するために使用することもできる。例えば、方法は、処置に起因する有毒な代謝物のレベルを管理するために、毒性マーカー（例えば、ｌｙｓｏ−ＳＰＭ）を測定することによって、ＡＳＭ障害を処置するために患者に与えられる治療薬の用量を調整することを含む。本明細書で開示される方法は、一部の実施形態では、ＡＳＭ障害の処置の過程の長期有効性をモニタリングするために使用することもできる（例えば、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが処置の過程を通じて低下しない場合、このことは、無効な処置を示す可能性がある）。本明細書で開示される方法は、一部の実施形態では、ＡＳＭ障害の初期の徴候としてｌｙｓｏ−ＳＰＭの上昇について対象（例えば、発症前の患者）をスクリーニングするために使用することもできる。スクリーニングにおいてｌｙｓｏ−ＳＰＭの上昇がみられるとして特定された対象は、その後、ＡＳＭ障害を診断／診断を確定するために、追加的な評価（例えば、ＡＳＭ血液検査、遺伝子検査など）にかけられ、一方、ｌｙｓｏ−ＳＰＭの上昇がみられなかった対象については、追加的な評価にかけられない。このようなスクリーニングは、潜在的に検査費用を軽減する可能性がある。

本明細書で開示される方法は、ヒト対象からの生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭの測定、およびｌｙｓｏ−ＳＰＭの測定レベルに基づいて至適化された濃度でＡＳＭ障害を処置するための治療薬の投与（例えば、ＥＲＴ、シャペロン療法、および／または基質減少療法）を含むことができる。様々な実施形態では、生体サンプルは、末梢サンプルである。いくつかの実施形態では、生体サンプルは、血漿、全血（例えば、乾燥血液スポット）、血清および／または尿のサンプルとすることができる。末梢サンプルを使用してｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルを測定することは、肝生検などの侵襲的手技の必要性を回避することができる。

図１Ａは、ＮＰＤ−ＡおよびＮＰＤ−Ｂ患者からの乾燥血液スポット（ＤＢＳ）中のＳＰＭ濃度と、正常な対照サンプルからのＤＢＳ中の平均濃度値の比を示すプロットである。図１Ｂは、ＮＰＤ−ＡおよびＮＰＤ−Ｂ患者からのＤＢＳ中のｌｙｓｏ−ＳＰＭ濃度と、正常な対照サンプルからのＤＢＳ中の平均濃度値の比を示すプロットである。 ０、３または２０ｍｇ／ｋｇのｒｈＡＳＭの単回投与から５分後の濃度と比較した、指定の時点（投与から１、２、４、６、２４、４８および７２時間後）でのＡＳＭノックアウトマウスからのＤＢＳ中のｌｙｓｏ−ＳＰＭ濃度（縦軸）の上昇倍数を示すヒストグラムである。 ｒｈＡＳＭの単回用量（１０ｍｇ／ｋｇ）または減量投与レジメン（３ｍｇ／ｋｇ）に続いて２０ｍｇ／ｋｇの用量のｒｈＡＳＭの投与後の野生型（Ｃ５７ＢＬ／６）またはＡＳＭノックアウト（ＡＳＭＫＯ）マウスから採取したＤＢＳ中のｌｙｓｏ−ＳＰＭの濃度（ｎｇ／ｍｌ）を示す。血液サンプルを、以下の時点：投与から５分後、４時間後、６時間後、２４時間後および７２時間後で採取した。１０ｍｇ／ｋｇ投与群の動物は、２４時間経過後に安楽死させた。 ２６週間にわたって、ｒｈＡＳＭの投与前、ｒｈＡＳＭの投与から２４、４８および７２時間後に採取されたヒトニーマン・ピック患者からのＤＢＳ中のｌｙｓｏ−ＳＰＭの濃度（ｎｇ／ｍｌ）を示すヒストグラムである。用量（０．１、０．３、０．６、１、２または３ｍｇ／ｋｇ）および投与日（初日、第２、４、６、８、１０、１２、１４および２６週）を横軸に示す。第２６週では、投与前、および投与から２４および４８時間後にのみサンプルを採取した。

ここで、本開示に係るいくつかの例示的な実施形態に対して参照が詳細になされ、これらの実施形態のいくつかの例が、添付の図面において説明される。可能な場合、同じ参照番号が、図面全体を通して、同じまたは類似の部分を指すために使用される。

本出願では、単数形の使用は、具体的に別段の記載がないかぎり、複数形を含む。本出願では、「または」の使用は、別段の記載がないかぎり、「および／または」を意味する。さらに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は、限定するものではない。本明細書に記載の任意の範囲は、端点と端点の間のすべての値を含むことが理解されるであろう。

本明細書において使用されるセクションの見出しは、単に構成上の目的にすぎず、説明される主題を限定するものとして解されるべきではない。本出願において引用される、特許、特許出願、記事、書籍および学術論文を含むが、それだけには限定されないすべての文献、または文献の一部は、任意の目的のために、参照によりその内容全体が明示的に本明細書に組み込まれている。

本明細書で開示されるのは、ＮＰＤなどのＡＳＭ障害をスクリーニング、診断、処置の進行をモニタリング、および／または処置するための治療薬の用量を調整する方法である。「ＡＳＭ障害」は、酸スフィンゴミエリナーゼの発現減少または機能障害に関連する任意の障害を包含し得る。ＡＳＭ障害は、組織中のスフィンゴミエリンの蓄積に関連する任意の他の障害も包含し得る。

一部の実施形態では、方法は、対象に、第１の濃度を有する、ＡＳＭ障害を処置するための第１の用量の治療薬を投与すること；および対象が第１の用量の投与後、参照（例えば、ＡＳＭ障害を有していない対照対象からのサンプル中のレベル、または処置前の患者において測定されたベースラインレベル）レベル以下のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを有することが決定された場合、対象に、第１の濃度以上の第２の濃度を有する第２の用量の治療薬を投与することを含む。

いくつかの態様では、方法は、ヒト対象からの生体サンプル中のｌｙｓｏ−スフィンゴミエリン（ｌｙｓｏ−ＳＰＭ）を採取し、測定することを含む。測定されたｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルは、ＡＳＭ障害をスクリーニング、診断、処置の進行のモニタリング、および／または処置するための治療薬の用量を調整するために使用することもできる。方法は、ＮＰＤなどのＡＳＭ障害の患者の末梢組織からの生体サンプルにおいてｌｙｓｏ−ＳＰＭが有意に上昇するという発見に基づいており、ＡＳＭ障害をスクリーニングおよび診断すること、ならびにＡＳＭ障害のための治療法をモニタリング／検量／管理することを含めて、このような患者の非侵襲的評価を可能にする。方法は、蓄積ＡＳＭが処置中に分解されることで、有毒または有害な代謝物の産生を知らせるマーカー（例えば、ｌｙｓｏ−ＳＰＭ）のレベルが上昇する可能性があること、および、これらの代謝物の有害なレベルが、過剰な代謝物産生を防止する用量でＳＰＭのレベルを抑制するようにデザインされた治療薬を投与する方法（例えば、ＥＲＴ、シャペロン療法および／または基質減少療法）によって回避できるという発見にも基づく。ｌｙｓｏ−ＳＰＭの濃度上昇の測定は、その
ような代謝物の産生を検出するために使用することができ、過度に高レベル（例えば、毒性レベル）の代謝物の産生を回避するように治療法を検量するために使用することができる。いくつかの実施形態では、ＡＳＭ障害の処置を受けている患者におけるｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルは、用量を増量、減量、反復、遅延または中止するかどうかを決定する。

ＡＳＭ障害を有する対象（例えば、ＮＰＤ患者）における高ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルの検出は、処置の間の有害な副作用をモニタリングする方法の一部として使用することができる。例えば、方法は、対象から生体サンプルを採取すること、サンプル中のｌｙｓｏ−スフィンゴミエリン（ｌｙｓｏ−ＳＰＭ）のレベルを測定すること、サンプル中の測定したｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベルと比較すること、およびサンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが上昇する場合、有害な副作用を検出することを含むことができる。一部の実施形態では、参照サンプル（例えば、ＡＳＭ障害を有していない対照対象からのサンプル中の参照レベル）と比べてｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが所定の量だけ上昇する場合、または、処置の過程を通じて経時的に対象においてｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが所定の量だけ上昇する場合（すなわち、本明細書では参照レベルとも呼ぶ処置前の患者において測定されたベースラインレベルを上回る上昇）、測定したｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを、処置による有害な副作用の指標として使用することができる。一部の実施形態では、処置は、酵素補充療法（ＥＲＴ）であり、ＥＲＴの投与量は、患者から１つまたはそれ以上の生体サンプルを採取すること、ｌｙｓｏ−ＳＰＭの上昇について各サンプルを検査すること、および所定の閾値を超える高ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルをもたらさないレベルへＥＲＴの用量を設定することによって管理される。治療薬の用量を管理することは、治療薬の濃度を増加、減少もしくは維持する、および／または処置を中止することを含むことができる。いくつかの実施形態では、ある用量の治療薬を投与した後、および／または、治療薬の後続の用量の投与直前に、１つまたはそれ以上の生体サンプルを採取する。一部の実施形態では、生体サンプル（例えば、血漿、血清または乾燥血液スポットなどの血液サンプル）中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、約１００〜７００ｎｇ／ｍｌの参照レベルよりも高い（例えば、約１００、２００、２５０、３００、４００、５００、６００もしくは７００ｎｇ／ｍｌまたは中間の任意の濃度よりも高い）場合、または生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、参照レベルよりも少なくとも約１．１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５もしくは１０倍以上（または中間の任意の値）上昇する場合、有害な副作用が検出される可能性がある。例えば、該上昇は、少なくとも約３倍である。参照レベルは、例えば、ＡＳＭ障害を有していない対照対象からのサンプル中のレベル、または治療薬のある用量を用いた処置の前の患者において測定されたベースラインレベルとすることができる。

さらに本明細書で開示されるのは、ＡＳＭ障害（例えば、ＮＰＤ）を有する対象を処置する方法である。様々な実施形態では、方法は、濃度を増加させて連続用量でＡＳＭ障害を処置するための治療薬を投与すること（例えば、ＥＲＴ、シャペロン療法、および／または基質減少療法）ならびに各投与後（例えば、投与から１分、５分、１０分、３０分もしくは４５分後、または１、２、３、４、５、１０、１２、１５もしくは２０時間後、または１日、２日、５日、１週間、２週間、３週間もしくは４週間後、または中間の任意の時点で）または次回用量の直前の生体サンプル中の高ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルについて対象をモニタリングすることを含む。対象のモニタリングは、対象から生体サンプルを採取すること、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを測定すること、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベル（例えば、ＡＳＭ障害を有していないドナーからのサンプル中のレベル、または処置前のＡＳＭ患者におけるレベル）と比較すること、および参照レベルと比べた場合のサンプル中の高ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルを検出することを含むことができる。一部の実施形態では、参照レベルは、ＡＳＭ障害を有していない対照対象からの生体サンプルにおいて測定されたｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルである。一部の実施形態では、参照レベルは、初回低用量のＥＲＴの投与後、または任意のＥＲＴの投与前に、対
象から採取された生体サンプルにおいて測定されたｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルである。一部の実施形態では、生体サンプル（例えば、血清サンプル、血漿サンプルまたは乾燥血液スポットなどの血液サンプル）中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベル上昇は、例えば、約１００〜７００ｎｇ／ｍｌの参照レベルを超えるレベルである。一部の実施形態では、生体サンプル（例えば、血液サンプル）中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベル上昇は、参照レベルよりも少なくとも約１．１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５もしくは１０倍以上（または中間の任意の値）である。例えば、該レベルは、少なくとも約３倍高い。一部の実施形態では、前回の用量の投与後にｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベル上昇が検出される場合、高濃度の用量のＥＲＴは投与されない。

治療法および治療方法のモニタリングに加えて、本明細書で開示されるのは、対象におけるＡＳＭ障害（例えば、ＮＰＤ）をスクリーニングおよび／または診断する方法である。様々な実施形態では、方法は、対象から生体サンプルを採取すること、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを測定すること、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベルと比較すること、およびサンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照サンプルに比べて上昇する場合、ＡＳＭ障害を検出／診断することを含む。一部の実施形態では、参照サンプルは、ＡＳＭ障害を有していない対照対象からのサンプルである。一部の実施形態では、生体サンプル（例えば、血漿サンプル、血清サンプルまたは乾燥血液スポットなどの血液サンプル）中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、参照レベルよりも少なくとも約１．１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５もしくは１０倍以上（または中間の任意の値）高い場合、または少なくとも約２００ｎｇ／ｍｌ、少なくとも約２５０ｎｇ／ｍｌ、少なくとも約３００ｎｇ／ｍｌ、少なくとも約４００ｎｇ／ｍｌ、少なくとも約５００ｎｇ／ｍｌ、少なくとも約５２５ｎｇ／ｍｌ、少なくとも約５７５ｎｇ／ｍｌ、少なくとも約７００ｎｇ／ｍｌ、および／もしくは少なくとも約９００ｎｇ／ｍｌなど、少なくとも約２００〜２０００ｎｇ／ｍｌの参照レベルよりも高い（例えば、約２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１０５０、１１００、１１５０、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００もしくは２０００ｎｇ／ｍｌ、または中間の任意の濃度を超える）場合、ＡＳＭ障害をスクリーニングおよび／または診断することができる。一部の実施形態では、正常な対象からの生体サンプルは、約２５〜２００ｎｇ／ｍｌの範囲（例えば、約２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５または２００ｎｇ／ｍｌ、または中間の任意の濃度）でｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルを含む可能性がある。

ｌｙｓｏ−ＳＰＭの測定
ｌｙｓｏ−ＳＰＭの化学構造の検討については、Ｉｔｏら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７０：２４３７０−４（１９９５）を参照；Ｃａｙｍｅｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．のカタログ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃａｙｍａｎｃｈｅｍ．ｃｏｍ／ａｐｐ／ｔｅｍｐｌａｔｅ／Ｐｒｏｄｕｃｔ．ｖｍ／ｃａｔａｌｏｇ／１０００７９４７に提示されている、Ｃａｙｍｅｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ． Ｉｔｅｍ Ｎｕｍｂｅｒ １０００７９４７も参照。

本明細書で開示される方法は、末梢組織からのサンプルを含む、様々な生体サンプルからのｌｙｓｏ−ＳＰＭの測定に関わる。生体サンプルを採取、調製、および生体サンプルからのｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを定量化するための任意の方法を使用することができる。生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルは、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳなどの質量分析装置、またはＵＶ−ＶＩＳ、ＩＲもしくはＮＭＲなどの電磁波周波数分析装置のような分光計を使用して定量化することができる。一部の実施形態では、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを
定量化する方法は、生体サンプルを採取すること（例えば、動脈または静脈穿刺、組織生検、頬側口腔検体拭き取り、尿サンプルなどによる）、サンプル中の他の成分からｌｙｓｏ−ＳＰＭを検出および／または分離すること（例えば、抗体、指標化学物質、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳなどの質量分析装置、またはＵＶ−ＶＩＳ、ＩＲもしくはＮＭＲなどの電磁波周波数分析装置を使用）、ならびにｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照サンプル中のレベルと比較することを含むことができる。

ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルは、本明細書に記載の方法を用いて、様々な組織からの生体サンプルにおいて測定することができる。例えば、血漿、全血（例えば、乾燥血液スポット）、血清、皮膚および／または尿などの末梢組織からの生体サンプルを、高ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルを検出する際の使用のために、採取することができる。他の組織、例えば、脾臓、肺、心臓、肝臓、腎臓および／または脳組織からの生体サンプルも使用することができる。２つまたはそれ以上の組織（例えば、２、３、４、５つまたはそれ以上の組織）の組合せからのサンプルを使用することができる。一部の実施形態では、末梢組織からの生体サンプルの使用は、肝生検などの侵襲的手技の必要性を回避することができる。

一部の実施形態では、生体サンプルは、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭの検出および／または測定の前に、１つまたはそれ以上の前処理工程にかけられる。一部の実施形態では、サンプルは、遠心分離、ろ過、沈殿、透析、もしくはクロマトグラフィー、またはそのような前処理工程の組合せにより前処理される。他の実施形態では、サンプルは、凍結、化学的固定、パラフィン包埋、脱水、透過処理および／または均質化に続き、遠心分離、ろ過、沈殿、透析および／またはクロマトグラフィーにより前処理される。いくつかの実施形態では、サンプルは、ｌｙｓｏ−ＳＰＭの評価の前に、サンプルからある一定の型の細胞を除去すること、またはサンプルから壊死組織片を除去することにより、前処理される。

様々な実施形態では、生体サンプルは、サンプル中の１つまたはそれ以上のマーカーのレベルを定量化または半定量化するためのデバイスを使用して評価する。例えば、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭおよび／または他のマーカーのレベルは、定量的または半定量的に評価することができる。一部の実施形態では、タンデム液体クロマトグラフィー−質量分析（例えば、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）などの生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭおよび／または他のマーカーのレベルを定量化するためのデバイスを使用することができる。一部の実施形態では、生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭおよび／または他のマーカーに結合する１つまたはそれ以上の抗体もしくは他の検出剤を使用することができる。検出剤と反応して、その強度、輝度、色などを、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭおよび／または他のマーカーのレベルを定量的または半定量的に決定するために使用することができる検出可能なシグナルを発する１つまたはそれ以上の薬剤（例えば、比色分析剤）を適用することができる（例えば、１つまたはそれ以上の参照サンプルからのシグナルと比較することによる）。例えば、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降およびウエスタンブロットなどの免疫測定法、ならびに蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、ＲＴ−ＰＣＲおよび／またはノーザンブロット法などの、生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭおよび／または他のマーカーを定量化するためのさらなる方法も使用することができる。

ＡＳＭ障害の処置の管理
様々な実施形態では、ＡＳＭ障害の治療法の一部としてｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルを測定することができる。例えば、ＡＳＭ障害は、ニーマン・ピック病（ＮＰＤ）、例えば、ＮＰＤ−Ａ、ＮＰＤ−ＢまたはＮＰＤ−Ｃである。ＡＳＭ障害の治療法は、患者の組織中のＳＰＭのレベルを減少させる１つまたはそれ以上の治療薬の投与（例えば、ＥＲＴ、シャペロン療法、および／または基質減少療法）を含むことができる。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている米国特許第２０１１／００５２５５９号に開示され
ているＡＳＭ用量漸増法（例えば、用量漸増プロトコールを記載する段落［００６３］〜［００７５］を参照）などの、患者内用量漸増酵素補充療法（ＥＲＴ）を使用することもできる。

様々な実施形態では、ＡＳＭ障害の用量漸増療法の間、ｌｙｓｏ−ＳＰＭなどのマーカーをモニタリングすることにより、有害な副作用（例えば、有毒または有害なレベルの代謝物の産生）について対象をモニタリングする方法が開示される。方法は、対象から生体サンプルを採取すること、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを測定すること、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベルと比較すること、およびサンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照サンプルに比べて上昇している場合、有害な副作用を検出することを含むことができる。１つまたはそれ以上のサンプルは、治療薬のある用量の投与後、または次回用量の投与前に、採取および評価することができる。例えば、サンプルは、ある治療用量の投与から１分、５分、１０分、３０分もしくは４５分後、または１、２、３、５、１０、１２、１５もしくは２０時間後、または１、２、３、４、５日後、または１、２、３もしくは４週間後、または中間の任意の時点で、または次回用量の投与前に、採取および評価することができる。一部の実施形態では、参照サンプルは、ＡＳＭ障害を有していない対照対象からのサンプルである。一部の実施形態では、参照サンプルは、高濃度用量の治療薬の投与前（または任意の治療薬の投与前）の、対象からの初期の生体サンプルである。一部の実施形態では、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、治療薬の初回用量の投与後、または治療薬の増加（すなわち高濃度）用量（例えば、高濃度のＥＲＴ）の投与後、参照サンプル中のレベルに比べて、所定の量増加するまたは所定の閾値を超えて増加する場合、これは、処置による有害な副作用の表示として使用することができる。いくつかの実施形態では、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが増加しない、または閾値レベルを超えて増加しない場合、これは、有害な副作用が生じていないことの表示として使用することができる。

様々な実施形態では、ＡＳＭ障害の治療法が提供される。該治療法は、患者の組織中のＳＰＭのレベルを減少させる１つまたはそれ以上の治療薬の投与を含むことができる（例えば、ＥＲＴ、シャペロン療法、および／または基質減少療法）。いくつかの実施形態では、治療法は、ＥＲＴ（例えば、ＡＳＭ補充療法）を含むことができる。治療法は、治療法の間のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベル上昇について対象をモニタリングすること、および治療薬の濃度（例えば、ＥＲＴの用量の濃度）を調整してｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルを所定の閾値レベル未満に減少させることを含むことができる。一部の実施形態では、モニタリングすることは、治療薬の各用量の投与後、または治療薬の各後続用量の投与前、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベル上昇についてサンプルを評価することを含む。いくつかの実施形態では、各用量後にモニタリングすることは任意であり、治療薬の一定回数の用量後、または治療薬の一定回数の後続用量前に、定期的に行われる。

一部の実施形態では、治療法は、濃度を増加させて連続用量でＥＲＴ（例えば、ＡＳＭ補充療法）を投与すること、一定回数の用量後（例えば、各用量後または各後続用量の前）に患者から生体サンプルを採取すること、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを（例えば、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを使用して）検出すること、および各用量後または次回用量の投与前に、高ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルについて対象をモニタリングすることを含むことができる。例えば、生体サンプルは、ある用量のＥＲＴが投与されてから１分、５分、１０分、３０分もしくは４５分後、もしくは１、２、３、５、１０、１２、１５もしくは２０時間後、もしくは１、２、３、４、５日後、もしくは１、２、３もしくは４週間後、もしくは中間の任意の時点で、または次回用量の投与前に、採取およびモニタリングすることができる。対象をモニタリングすることは、対象から生体サンプルを採取すること、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを測定すること、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベルと比較すること、およびサンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照
サンプルと比べて所定の量だけ上昇する場合、ＥＲＴの用量を調整することを含むことができる。一部の実施形態では、参照サンプルは、ＡＳＭ障害を有していない対照対象からのサンプルである。一部の実施形態では、参照サンプルは、高濃度用量のＥＲＴの投与前（または任意のＥＲＴの投与前）の、対象からの初期の生体サンプルである。一部の実施形態では、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが対象サンプルにおいて所定の量だけ増加、および／または参照閾値よりも高い場合、これは、有毒または有害レベルの代謝物の産生を回避するために、ＥＲＴ投与量を減量、遅延または終了することを要することの表示として使用することができる。一部の実施形態では、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが閾値以下である場合、等しいまたはより高い濃度の後続用量を投与することができる。

様々な実施形態では、蓄積したＳＰＭの急速な加水分解に起因する有毒または有害なレベルの代謝物を産生することなく、蓄積したＳＰＭを減量させるために、経時的に用量を増加させながらＥＲＴを対象に投与することを含む、用量漸増療法が提供される。一部の実施形態では、高ｌｙｓｏ−ＳＰＭが有毒または有害なレベルの代謝物の産生を示す可能性があることから、用量漸増療法の間、患者からの生体サンプルをｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベル上昇についてモニタリングする。一部の実施形態では、閾値濃度を超えるｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが検出される場合、または前回のサンプル中のレベルと比べてｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルの大幅な増加が検出される場合、ＥＲＴの増量を遅延するかまたは投与しない。ＥＲＴは、静脈内、皮内、皮下、腹腔内、肺内、局所的、鼻腔内、頭蓋内、または筋肉内を含む、治療効果を達成するのに適した任意の経路で投与することができる。

一部の実施形態では、ＥＲＴは、組換えヒトＡＳＭ（ｒｈＡＳＭ）などの酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）の投与を含むことができ、または、ＥＲＴは、修飾ＡＳＭ（例えば、修飾ｒｈＡＳＭ）の投与を含むことができる。修飾ＡＳＭは、リソソームスフィンゴミエリンをセラミドとホスホリルコリンに加水分解する酵素の能力を著しく改変しない、酵素に対する任意の修飾を含むことができる（例えば、修飾ＡＳＭは、未修飾ＡＳＭの酵素活性の少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９５、９９、９９．５もしくは９９．９％、または中間の任意の百分率を示す）。修飾ＡＳＭの加水分解能力は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている米国特許第４，０３９，３８８号、第４，０８２，７８１号、第５，６８６，２４０号および第７，５６３，５９１号、ならびに国際出願番号ＷＯ２００７／０７８８０６およびＷＯ２００６／０５８３８５に記載されているものなど、当業者に周知の技術により評価することができる。

一部の実施形態では、ＥＲＴは、組換えヒトＡＳＭ（ｒｈＡＳＭ）または修飾ｒｈＡＳＭの投与を含むことができる。当技術分野において周知の様々なＡＳＭアイソフォームが存在し、これらのすべてを本明細書に開示される方法において使用することができる。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている米国出願第２０１１／００５２５５９号を参照（例えば、段落［１０８］〜［０１１７］および［０１２４］〜［０１２７］の、ヒトＡＳＭアイソフォームおよびその酵素抱合体ならびにＥＲＴでのこれらの使用の検討を参照）。

一部の実施形態では、酵素補充療法は、非毒性の初回低用量の後、後続の投与では漸増して対象に投与される。対象が有毒または有害なレベルの代謝物を産生することなく（例えば、ｌｙｓｏ−ＳＰＭなどの毒性マーカーのレベルをモニタリングすることにより検出されるような）忍容できる酵素の最大用量を、その後、維持用量として使用することができる。代替として、最大忍容用量未満の治療効果のある用量を維持用量として使用することができる。治療効果のある用量は、１回またはそれ以上の回数の投与の後、ＡＳＭ対象の蓄積スフィンゴミエリンの濃度を、少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５もしくは９９％（または中間の任意の百分率）減少させるのに十分な任意の用量を含むことが
できる。

ＮＰＤなどのＡＳＭ障害の処置は、病変臓器（例えば、脾臓、肺、肝臓、心臓、腎臓および脳）における治療薬の適正分布を達成するのに十分な高用量の治療薬（例えば、ＥＲＴ、シャペロン療法、および／または基質減少療法）を必要とする。ＡＳＭノックアウトマウスに組換えヒトＡＳＭを静脈内投与した後、ＡＳＭ活性のほとんどは肝臓に分布し、わずかなＡＳＭ酵素活性が、脾臓、心臓、腎臓および肺などの他の臓器で検出されることが示されている。例えば、Ｈｅら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｓｙｉｃａ Ａｃｔａ １４３２：２５１〜２６４頁（１９９９）を参照。そのため、ＮＰＤなどのＡＳＭ障害を有する対象の、例えば肺、肝臓、心臓および腎臓における適正な分布および送達を確実にするために、高濃度の治療薬（例えば、高濃度の補充酵素）の投与が必要となる。

ＡＳＭノックアウトマウスでの研究によって、十分に高用量での酵素補充療法がスフィンゴミエリンの有毒または逆に有害な代謝物の産生をもたらす可能性があることも示された。例えば、Ｃ．Ｎｉｃｋｅｒｓｏｎら、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ （２００５）；およびＪ．Ｍｕｒｒａｙら、Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ （２００６）を参照。理論に拘束されるものではないが、ＮＰＤ対象への高用量のＡＳＭの投与は、大量の蓄積スフィンゴミエリンのセラミドおよびホスホリルコリンへの加水分解をもたらす可能性がある。セラミドは細胞死で役割を果たすことが知られており、プロアポトーシス剤である可能性があることが知られている。例えば、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｓｃｈｕｃｈｍａｎ、ＦＡＳＥＢ ２２：３４１９−３４３１頁（２００８）を参照。したがって、セラミドは、ＡＳＭノックアウトマウスおよびＮＰＤ対象において観察される有毒な副作用を引き起こす可能性がある。

したがって、過剰な濃度の毒性代謝物の産生も回避しながら、病変臓器全体におけるリソソームスフィンゴミエリンの今後の蓄積を減量および防止するのに十分な濃度の治療薬を提供するために、治療法（例えば、ＥＲＴ、シャペロン療法、および／または基質減少療法）の検量および調整が必要とされる。一部の実施形態では、この調整は、一定回数の用量後または毎用量後に患者サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭなどの毒性マーカーのレベルを評価することによって用量漸増プロトコールを管理すること、および必要に応じて本明細書に記載の投与レジメンを調整することを通じてなされる。治療薬の用量を管理することは、治療薬の濃度を増大、減少もしくは維持すること、および／または処置を中止することを含むことができる。

様々な実施形態では、処置の用量漸増法は、対象に蓄積したスフィンゴミエリンの量を減少させるために、１回またはそれ以上の回数の初回低用量の治療薬（例えば、補充酵素）を対象に投与することを含む。その後、対象が忍容性を示し、治療効果のある最高用量に達するまで、治療薬の用量を系統的により高い濃度で投与することができる。一部の実施形態では、治療薬は、補充酵素（例えば、ｒｈＡＳＭ）であり、１つまたはそれ以上の病変臓器（例えば、ＡＳＭ障害を有する患者においてＳＰＭのリソソームレベルの上昇を示す臓器）における酵素活性が、ＡＳＭ障害を有していない対象（例えば、健常者）の対応する臓器における活性の活性レベルの少なくとも約５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％（または、中間の任意の百分率）となるように投与される。

一部の実施形態では、ＡＳＭ障害を処置する方法は、（ａ）（ｉ）初回低用量のｒｈＡＳＭまたは修飾ｒｈＡＳＭを対象に投与すること；および（ｉｉ）後続のより高い用量のｒｈＡＳＭまたは修飾ｒｈＡＳＭを対象に投与すること（用量漸増）を含む、対象の蓄積
スフィンゴミエリン基質を減量するための酵素補充レジメンを投与すること；（ｂ）工程（ａ）（ｉ）および（ａ）（ｉｉ）での一定回数の用量後または各用量後、ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルの上昇および／または有害な副作用に関する１つまたはそれ以上の追加のマーカーについて対象をモニタリングすること（例えば、ｌｙｓｏ−ＳＰＭ濃度を定量化するためにＬＣ／ＭＳ／ＭＳを使用）；（ｃ）ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルの上昇が検出された後、および／または１つもしくはそれ以上の追加の有害な副作用が検出された後、用量漸増プロトコールを反復、減量および／または終了することを含むことができる。いくつかの実施形態では、対象が忍容性を示した最高用量以下の用量を維持用量として患者に投与すること、および、場合により、維持レジメンの投与の間、ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルの上昇をモニタリングすることをさらに含む。いくつかの実施形態では、ｒｈＡＳＭまたは修飾ｒｈＡＳＭの初回用量の範囲は、約０．０３ｍｇ／ｋｇ〜約１．０ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ（用量の濃度は、体重１ｋｇに対する酵素ｍｇとして測定される）とすることができる。一部の実施形態では、前回の用量から約１、２、３、４、５、６もしくは７日後、または１、２、３、４もしくは５週間後に、酵素濃度を増加させた各後続用量が投与される。一部の実施形態では、濃度を増加させた酵素の後続用量は、約０．１および５ｍｇ／ｋｇの間（例えば、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５もしくは５ｍｇ／ｋｇ、または中間の任意の濃度）とすることができる。

一部の実施形態では、次回のより高い濃度用量が投与される前に、所与の濃度の補充酵素の用量が、少なくとも２回（例えば、少なくとも２、３、４または５回）投与される。いくつかの実施形態では、後続のより高い用量は、前回の用量よりも約０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．７５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇ（または中間の任意の値）高い。一部の実施態様では、後続のより高い用量は、前回の用量よりも約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ〜約４ｍｇ／ｋｇ、または約２ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ（または中間の任意の値）高い。いくつかの実施形態では、有毒または有害な代謝物を産生することなく対象が忍容性を示す最高用量は、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇである。一部の実施態様では、最高忍容用量は、その後ヒト対象に維持用量として投与される。一部の実施形態では、維持用量は約１〜８週毎に（例えば、約１、２、３、４、５、６、７もしくは８週毎に、または中間の任意の期間毎に）投与される。

最大忍容投与量（例えば、有毒または逆に有毒なレベルの代謝物を産生しない用量）が特定されると、該最大忍容投与量を前述の対象を処置するための維持用量として使用することができる。維持用量は、毎日、週１回、週２回、月１回、月２回または３カ月に１回（または中間の任意の間隔で）投与することができる。ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルの上昇をモニタリングすることは、維持レジームの投与の間、例えば、維持用量の投与から１、２、３、５、１０、１２、１５もしくは２０時間後、もしくは１、２、３、４、５日後、もしくは１、２、３もしくは４週間後、または中間の任意の期間後に行うことができる。高ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベル（例えば、約１００〜７００ｎｇ／ｍｌの参照レベルを超えるレベル、または参照レベルよりも少なくとも約１．１〜１０倍高いレベル）が検出された場合、維持用量を減少させるかまたは中止することができる。

治療法の間（例えばＥＲＴの間）、対象をモニタリングするために、および／または対象が忍容性を示す最大用量を決定するために治療法の一部として、いくつかの他のパラメータをｌｙｓｏ−ＳＰＭと組み合わせて測定することができる。例えば、対象を、ＳＰＭ
レベル、血漿セラミドレベルおよび／またはビリルビン濃度を測定することによってさらにモニタリングすることができる。対象を、炎症反応の尺度である「急性期反応物」および炎症性メディエーターの生成、ならびに／または他の生化学マーカーについてモニタリングすることもできる。これらの他の生化学マーカーとしては、ＣＲＰ／ｈｓ−ＣＲＰ、サイトカイン（例えば、１Ｌ−８、ＩＩ−６）、カルシトニンおよびフェリチンを含むが、これらには限定されない。一部の実施形態では、用量を高濃度に増加する前に、上に挙げたパラメータのうちの１つまたはそれ以上をモニタリングして、治療法に対する反応を確実に安定させることができる。一部の実施形態では、対象は、全身症状（例えば、発熱、悪心、嘔吐、疼痛、筋肉痛および黄疸）を含む１つ以上の関連有害事象に関してモニタリングされる場合がある。マーカーの組合せもモニタリングすることができる（例えば、ビリルビンおよび／またはセラミドレベルと組み合わせてｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルをモニタリングすることができる）。ｌｙｓｏ−ＳＰＭと組み合わせてモニタリングすることができる適切な閾値レベルは、例えば、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国出願第２０１１／００５２５５９号に開示されている（例えば、段落［００６７］〜［００８６］を参照）。

一部の実施形態では、用量漸増プロトコール（例えば、ＥＲＴ用量漸増プロトコール）を受けている対象を、各回の治療的投与後（例えば、投与から約１分、５分、１０分、３０分もしくは４５分、もしくは１、２、３、４、５、６、８、１０、１２、１８もしくは２４時間、もしくは２、３、４、５、６もしくは７日、もしくは１、２、３もしくは４週間以上、もしくは中間の任意の期間後）または高濃度の治療薬の投与前に、有毒または有害な副作用についてモニタリングする（例えば、ｌｙｓｏ−ＳＰＭなどの１つまたはそれ以上の毒性マーカーのレベルをモニタリングすることによる）。一部の実施形態では、維持用量の各投与後（投与から約１、２、３、４、５、６、８、１０、１２、１８もしくは２４時間後、もしくは２、３、４、５、６もしくは７日後、もしくは１、２、３もしくは４週間もしくはそれ以上後、または中間の任意の期間後）あるいは後続の治療薬の維持用量の投与前に対象をモニタリングする。一部の実施形態では、対象は、１、２、３年またはそれ以上にわたって維持用量を受け、有毒または有害な副作用について定期的にモニタリングされる。モニタリングすることは、上述の毒性マーカーをモニタリングすることに加えて、関連有害事象をモニタリングすることを含む場合がある。対象が有害事象を経験するか、またはモニタリングする対象のマーカーのうち１つまたはそれ以上が有害な副作用を示す場合（例えば、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベル上昇が検出される場合）、望ましくない副作用を減少または最小化するために、維持用量の投与を終了または調整することができる（例えば、低濃度のＥＲＴを投与することができる）。

様々な実施形態では、ＥＲＴの用量の投与後（例えば、ｒｈＡＳＭまたは修飾ｒｈＡＳＭの投与後）に採取された生体サンプルからｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルを測定することによって、ＥＲＴの有毒および／または逆に有害な用量について対象をモニタリングすることができる。一部の実施形態では、方法は、対象から生体サンプルを採取すること、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを測定すること、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベルと比較すること、およびサンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照サンプルと比べて上昇するかまたは参照サンプルと比べて特定の量だけ上昇する場合、有害な副作用を検出することを含むことができる。一部の実施形態では、生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、前回の用量の投与後、指定の閾値を上回らない場合に限り、より高濃度でのＥＲＴの次回用量が投与される。適切な閾値レベルの例は、本明細書に記載される。一部の実施形態では、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルは、維持用量の投与の間にもモニタリングされる。一部の実施形態では、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、維持用量の投与の間、所定の閾値を超える場合、維持投与は中止されるか、または、所定の閾値を上回るｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルをもたらさない低用量が投与される。

一部の実施形態では、ＥＲＴの有害な副作用は、生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、所定の参照レベルよりも高い場合、検出することができる。一部の実施形態では、有害な副作用は、生体サンプル（例えば、血液サンプル）中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、約１００〜７００ｎｇ／ｍｌの参照レベルよりも高い（例えば、約１００、２００、２５０、３００、４００、５００、６００もしくは７００ｎｇ／ｍｌまたは中間の任意の濃度よりも高い）場合、検出することができる。一部の実施形態では、有害な副作用は、生体サンプル（例えば、血液サンプル）中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、参照レベルよりも少なくとも約１．１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５または１０倍以上（または中間の任意の値）高い場合、検出することができる。例えば、上昇は、少なくとも約３倍である可能性がある。

一部の実施形態では、本明細書に提供されているＡＳＭ障害を処置する方法は、ＭＲＩなど、当技術分野で周知の技術で評価した脾臓体積を減少させる。いくつかの実施形態では、方法は、肝臓サンプルの生化学分析および／または組織形態計測的分析など、当技術分野で周知の技術で評価された肝臓スフィンゴミエリンレベルを減少させる。一部の実施形態では、方法は、百分率予測最大作業負荷（ｐｅｒｃｅｎｔ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｍａｘｉｍｕｍ ｗｏｒｋｌｏａｄ）、ピーク酸素消費量および／または二酸化炭素産生を含む、サイクル運動力測定（ｃｙｃｌｅ ｅｒｇｏｍｅｔｒｙ）による最大作業負荷など、当技術分野で周知の技術で評価された、運動能力を増加させる。一部の実施形態では、方法は、例えば、ＤＬｃｏ、ＦＶＣ、ＦＥＶ、および／またはＴＬＣなど、当技術分野で周知の技術で評価された肺機能を向上および／または肺クリアランスを改善する。いくつかの実施形態では、方法は、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）スフィンゴミエリンを減少させる。いくつかの実施形態では、方法は、高解像度ＣＴスキャンおよび／または胸部Ｘ線など、当技術分野で周知の技術で評価された肺の外観を改善する。

様々な実施形態では、本明細書に提供されているＡＳＭ障害を処置する方法は、肝臓、皮膚および／もしくは血漿中のスフィンゴミエリン濃度を減少させる、ならびに／または血漿キトトリオシダーゼ、ＣＣＬ１８レベル、ｌｙｓｏ−ＳＰＭ、セラミドおよび／もしくはビリルビンを減少させる。一部の実施形態では、方法は、患者の脂質プロファイルを改善する（例えば、コレステロールの低下）。一部の実施態様では、方法は、対象の１つまたはそれ以上の神経機能（例えば、精神運動機能、社会的反応性など）を改善する。一部の実施形態では、方法は、ＡＳＭ障害および／またはその障害に関連する１つまたはそれ以上の症状の重症度および／または期間を減少または改善する。一部の実施形態では、方法は、ＡＳＭ障害に関連する症状の再発を防止する。一部の実施形態では、方法は、処置後の対象の生存率を上昇させる。

ＡＳＭ障害のスクリーニングおよび／または診断
様々な実施形態では、本明細書で開示されるのは、ＡＳＭ障害をスクリーニングおよび／または診断する方法である。一部の実施形態では、ＡＳＭ障害は、ニーマン・ピック病（ＮＰＤ）である。一部の実施形態では、ＡＳＭ障害は、ＮＰＤ Ａ型、Ｂ型および／またはＣ型である。一部の実施形態では、ＡＳＭ障害（例えば、ＮＰＤ）は、対象から採取した生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルを測定することによってスクリーニングおよび／または診断することができる。

一部の実施形態では、対象におけるＡＳＭ障害をスクリーニングおよび／または診断する方法は、対象から生体サンプルを採取すること、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを測定すること、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベルと比較すること、およびサンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベルに比べて上昇した場合、ＡＳＭ障害を検出／診断することを含む。一部の実施形態では、参照レベルは、ＡＳＭ障害
を有していない対照対象からのサンプル中で測定されたｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルである。一部の実施形態では、ＡＳＭ障害は、対象からの生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが所定の参照レベルよりも高い場合、検出／診断することができる。一部の実施形態では、ＡＳＭ障害は、生体サンプル（例えば、血液サンプル）中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、約２００ｎｇ／ｍｌよりも高い、約３００ｎｇ／ｍｌよりも高い、約４００ｎｇ／ｍｌよりも高い、約５００ｎｇ／ｍｌよりも高い、約５２５ｎｇ／ｍｌよりも高い、約５７５ｎｇ／ｍｌよりも高い、および／または約７００ｎｇ／ｍｌよりも高いなど、少なくとも約２００〜２０００ｎｇ／ｍｌ（例えば、約２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１０５０、１１００、１１５０、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００もしくは２０００ｎｇ／ｍｌよりも高い、または中間の任意の濃度）の参照レベルよりも高い場合、検出および／または診断することができる。一部の実施形態では、ＡＳＭ障害は、生体サンプル（例えば、血液サンプル）中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、参照レベルよりも約１〜１０倍高い場合、検出および／または診断することができる。

様々な組織からの生体サンプルは、本明細書に記載のスクリーニングおよび診断方法を用いて使用することができる。例えば、血漿、全血（例えば、乾燥血液スポット）、血清、皮膚および／または尿などの末梢組織からの生体サンプルを、ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルの上昇についてモニタリングするために使用することができる。例えば、脾臓、肺、肝臓、心臓、腎臓および／または脳組織など、他の組織からの生体サンプルも使用することができる。２つまたはそれ以上の組織（例えば、２、３、４、５またはそれ以上の組織）の組合せからのサンプルを使用することができる。一部の実施形態では、末梢組織から採取した生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルを測定することによって、ＡＳＭ障害（例えば、ＮＰＤ）を検出／診断することができる。いくつかの実施形態では、末梢組織は、血漿、全血（例えば、乾燥血液スポット）、血清および／または尿とすることができる。末梢サンプルの使用は、肝生検などの侵襲的手技の必要性を回避することができる。

様々な実施形態では、本明細書で開示されるスクリーニングおよび／または診断方法は、ＡＳＭ障害が検出／診断された場合、対象に治療薬（例えば、酵素補充療法）を投与することをさらに含むことができる。一部の実施形態では、酵素補充療法は、対象にｒｈＡＳＭまたは修飾ｒｈＡＳＭを投与することを含む。

キット
様々な実施形態では、ｌｙｓｏ−ＳＰＭおよび／またはＡＳＭ障害の他のマーカーを含有する生体サンプルを採取するためのデバイスと、生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルおよび／または他のマーカーを測定するキットを使用するための指示書とを含むキットが本明細書で開示される。一部の実施形態では、生体サンプルを採取するためのデバイスは、試験管、シリンジおよび／もしくは液体サンプルを保管するための他の容器、ならびに／または試験片、尿試験紙などを含むことができる。当技術分野で周知の生体サンプルを採取するための任意の他のデバイスも使用することができる。一部の実施形態では、生体サンプルは、血漿、全血（例えば、乾燥血液スポット）、血清、皮膚および／または尿などの末梢組織からのサンプルである。例えば、脾臓、肺、心臓、肝臓、腎臓および／または脳組織など、他の組織からの生体サンプルも採取することが可能であり、キットは列挙した組織からサンプルを採取するためのデバイスを含む。２つ以上の組織の組合せからのサンプルを使用することができる。

一部の実施形態では、キットは、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルおよび／または生体サンプル中の他のマーカーを測定するためのデバイスをさらに含むことができる。例えば、キットは、ｌｙｓｏ−ＳＰＭまたは生体サンプル中の他のマーカーを検出するために使用する
ことができる抗体および／または検出剤を含むことができる。一部の実施形態では、検出剤は、組織採取デバイス中に含まれるか、もしくはデバイス上に置かれており（例えば、試験片に含浸された抗体もしくは化学的指示薬）、一方、他の実施形態では、検出剤は、採取デバイスとは別個に提供される。

一部の実施形態では、キットは、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルおよび／またはサンプル中の他のマーカーを定量化する、または半定量化するためのデバイスさらに含むことができる。例えば、検出剤と反応して、その強度、輝度、色などを、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルおよび／またはサンプル中の他のマーカーを定量的または半定量的に決定するために使用することができる検出可能なシグナルを発する薬剤（例えば、比色分析剤）を提供することができる（例えば、１つまたはそれ以上の参照サンプルからのシグナルと比較することによる）。一部の実施形態では、デバイスは、例えば、液体クロマトグラフィーおよび／または質量分析を使用して、サンプルの他の成分からｌｙｓｏ−ＳＰＭを分離するためのデバイスを含むことができる。一部の実施形態では、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルおよび／またはサンプル中の他のマーカーを定量化するためのデバイスは、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳなどの質量分析装置、またはＵＶ−ＶＩＳ、ＩＲもしくはＮＭＲなどの電磁波周波数分析装置のような分光計である。

一部の実施形態では、キットは、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルおよび／またはサンプル中の他のマーカーを参照レベルと比較する、ならびに１つまたはそれ以上の参照レベルと比べてサンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルおよび／または他の毒性マーカーが上昇した場合、ＡＳＭ障害の処置の間、１つまたはそれ以上の代謝物の毒性レベルおよび／または有害な副作用の存在を検出するための指示書をさらに含むことができる。一部の実施形態では、キットは、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照サンプル中のレベルと比較する、ならびにサンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルが参照サンプル中のレベルと比べて上昇した場合、ＡＳＭ障害についてスクリーニングおよび／または診断するための指示書をさらに含むことができる。

一部の実施形態では、キットは、ＡＳＭ障害の治療法の一部として、および／またはＡＳＭ障害を診断するために使用することができる。一部の実施形態では、ＡＳＭ障害は、ＮＰＤ−Ａ、ＮＰＤ−ＢまたはＮＰＤ−Ｃである。

対象集団
様々な実施形態では、本明細書で使用される対象は、ＡＳＭ障害についてスクリーニングされているヒトである。様々な実施形態では、本明細書で使用される対象は、本明細書に提供されている方法に従ってＡＳＭ障害について診断または処置を受ける対象であって、１つまたはそれ以上の病変臓器においてリソソームＳＰＭの過剰蓄積をきたすＡＳＭ障害を有するもしくは有すると診断されているヒトである。一部の実施形態では、対象は、酸性スフィンゴミエリナーゼをコードしている遺伝子に１つまたはそれ以上の変異、例えば、欠失、フレームシフト、ミスセンス変異および／またはナンセンス変異を有する。特定の実施形態では、対象はＮＰＤを有している。一実施形態では、対象はＮＰＤ−Ａ、ＮＰＤ−ＢまたはＮＰＤ−Ｃを有している。

一部の実施形態では、対象は、ＳＭＰＤ１遺伝子に１つまたはそれ以上の変異を有する。いくつかの実施形態では、変異は、ΔＲ６０８（アルギニン６０８の欠失）である。一部の実施形態では、変異はミスセンス変異である。いくつかの実施形態では、ミスセンス変異は、Ｌ３０２Ｐ、Ｈ４２１ＹまたはＲ４９６Ｌである。他の実施形態では、変異は、１つ、２つ、３つまたはそれ以上のアミノ酸残基の欠失をもたらす欠失である。具体的な実施形態では、本明細書に提供されている方法に従ってＡＳＭ障害の処置を受ける対象は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている米国出願第２０１１／００５２５５
９号の表１に示される変異のうちの１つまたはそれ以上を有する。酸性スフィンゴミエリナーゼ遺伝子（指定ＳＭＰＤ１）の変異については、Ｓｉｍｏｎａｒｏら、Ａｍ． Ｊ．
Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅｔ． ７１：１４１３〜１４１９頁（２００２）も参照。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されている方法に従ってＡＳＭ障害のスクリーニングもしくは診断または処置を受ける対象は、正常（例えば未変異の）ヒトＡＳＭ、例えばＡＳＭ−１の活性の約２〜５％、５〜１０％、５〜１５％、５〜２０％、５〜３０％、２０〜３０％、または５〜３５％でＡＳＭを内因的に発現する。一部の実施形態では、対象は、正常ヒトＡＳＭ、例えばＡＳＭ−１の活性の３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満でＡＳＭを内因的に発現する。ＡＳＭの活性を測定するために使用できる技術については、例えば、米国特許第４，０３９，３８８号、第４，０８２，７８１号、第５，６８６，２４０号、および第７，５６３，５９１号、ならびに国際公開番号ＷＯ２００７／０７８８０６とＷＯ２００６／０５８３８５（これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照；Ｈｅら、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３１４：１１６〜１２０頁（２００３）に記載されている蛍光ベースの高性能液体クロマトグラフィーアッセイも参照。

様々な実施態様では、本明細書に提供されている方法に従ってＡＳＭ障害のスクリーニングもしくは診断または処置を受ける対象は、ＮＰＤの１つまたはそれ以上の症状を示す場合がある。ＮＰＤの症状には、腹部膨張、肝腫大、脾腫、肝脾腫大、好中球減少、肺疾患、リンパ節症、組織化学的に特徴的なＮＰＤ泡沫細胞の存在、貧血（例えば、小球性貧血）、血小板減少症、反復性嘔吐、慢性便秘、成長障害、（例えば、線形成長および体重の減少）、思春期遅発症、反復性のあざ、反復性出血、アテローム性脂質プロファイル（高コレステロール、トリグリセリド、ＬＤＬおよび／または低ＨＤＬ）、疼痛（頭痛、背中、四肢、腹部）、疲労、早期満腹感、低持久力、骨減少症、神経学的兆候、および呼吸困難（例えば、間質性肺疾患および／または息切れ）を含むがこれに限定されない。ＮＰＤの神経学的兆候には、サクランボ赤色斑点、低血圧、筋力低下、精神運動遅延、痙性、社会的不応症、易刺激性、および／または痙攣を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されている方法に従ってＡＳＭ障害のスクリーニングもしくは診断または処置を受ける対象は、ヒト乳児である。別の実施形態では、対象はヒト小児である。いくつかの実施形態では、対象はヒト成人（１８歳以上）である。いくつかの実施形態では、対象はヒト女性である。他の実施形態では、対象はヒト男性である。いくつかの実施形態では、対象は、妊娠していないまたは授乳中ではないヒト女性である。

実施例
以下の実施例は、本開示を説明する役割を果たし、決して制限するものではない。

材料および方法
本研究で使用される全血を、書面によるインフォームドコンセント後、２０例の以前にＮＰＤ−Ｂと診断された対象および２０例の健常成人から入手した（ＰｒｏＭｅｄＤｘ，
ＬＬＣ， Ｎｏｒｔｏｎ， ＭＡから購入）。静脈血を、ＥＤＴＡ入りＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）採血管（Ｂｅｃｔｏｎ， Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ， ＮＪ）で採血し、一晩冷凍パックで輸送し、４℃で保存した。採血後４８時間以内に、複数回にわたり採血管を反転させて血液を混ぜ合わせ、スポット当たり７５μｌの血液をＷｈａｔｍａｎ９０３（登録商標）検体採取紙上に置き、室温で少なくとも４時間乾燥させた。

ｌｙｓｏ−ＳＰＭを定量化するために、１−Ｏ−ヘキサデシル−（７，７，８，８−ｄ４）−２−Ｏ−アセチル−ｓｎ−グリセリル−３−ホスホリルコリン（血小板活性化因子Ｃ１６−ｄ４；ＰＡＦ Ｃ１６−Ｄ４、Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，Ｍｉｃｈｉｇａｎ）を内部標準（ｉｎｔａｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ）として使用した。３．２ｍｍの穿孔器の乾燥血液スポット（ＤＢＳ）を０．８ｎｇ内部標準含有のメタノール／アセトニトリル／水（８０／１５／５）２００μＬ中に抽出し、３０分間ボルテックスし、１０分間超音波処理した。溶離液を５分間の遠心分離により１６，２００ｇで取り除き、その後、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）システム（Ａｇｉｌｅｎｔ， Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ， ＣＡ）と連動したＡＰＩ Ｑｔｒａｐ ４０００ ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ（ＡＢ Ｓｃｉｅｘ，Ｔｏｒｏｎｔｏ，Ｃａｎａｄａ）システムの中に３０μＬを注入した。移動相としてメタノール／アセトニトリル／水の混合物を使用して均一濃度の方式で、順相シリカカラムを用いてＨＰＬＣを行った。以下の移行：ｍ／ｚ ｌｙｓｏ−ＳＰＭについて４６５．４＞１８４．１およびＰＡＦ Ｃ１６−Ｄ４について５２８．５＞１８４．１で、多重反応モニタリング（ＭＲＭ）の方式で質量分析（ＭＳ）を行った。ＳＰＭを定量化するために、内部標準としてＣ１２−ＳＰＭ（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ， Ａｌａｂａｓｔｅｒ， Ａｌａｂａｍａ）を使用した。抽出およびＬＣ／ＭＳ／ＭＳ手順は、注入前に溶離液を３２０倍に希釈したことを除いて、ｌｙｓｏ−ＳＰＭについて使用されたものと同様であり、ＳＰＭの１２のアイソフォームをモニタリングし、要約した。

ＮＰＤの診断
ＳＰＭレベルは、ＮＰＤ−Ｂ対象の肝臓および脾臓において１０倍超上昇することが知られているが、ＮＰＤ−Ｂ対象の血漿中のＳＰＭレベルは、認識できるほどに上昇せず、正常な対照のＳＰＭレベルと重複する。図１Ａに示すように、ＮＰＤ−ＡおよびＮＰＤ−Ｂ患者の乾燥血液スポット（ＤＢＳ）中のＳＰＭ濃度と正常な対照サンプルのＤＢＳ中の平均濃度値の比によって示されるように、ＮＰＤ−ＡおよびＮＰＤ−Ｂ患者のＳＰＭのレベルは、有意に上昇しなかった。ＳＰＭは、細胞膜およびリポタンパク質の主要成分であり、ＮＰＤ対象のＤＢＳ中のＳＰＭのわずかな上昇は、循環におけるＳＰＭのすでに高レベルおよび急速な代謝回転に関係している可能性がある。

ＳＰＭとは異なり、ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルは、ＮＰＤ−ＡおよびＮＰＤ−Ｂ対象からのＤＢＳにおいて明らかに上昇した。図１Ｂに示すように、ＮＰＤ−ＡおよびＮＰＤ−Ｂ患者の乾燥血液スポット（ＤＢＳ）におけるｌｙｓｏ−ＳＰＭ濃度と正常な対照サンプルのＤＢＳ中の平均濃度値の比によって示されるように、ＮＰＤ−ＡおよびＮＰＤ−Ｂ患者のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルは上昇した。ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルは、残留ＡＳＭ活性の量または採取時の対象の年齢と相互に関係しなかった。つまり、ｌｙｓｏ−ＳＰＭは、ＮＰＤ対象の末梢組織（ＤＢＳ）中で、正常な対照とは識別できるレベルで増加する。

マウスにおける用量漸増の効果
ＡＳＭノックアウトマウス（ニーマン・ピックモデルマウス）における以前の研究は、１０ｍｇ／ｋｇ以上の単回用量が使用されるまで毒性の臨床症状が観察されなかったことを示した。Ｎｉｃｋｅｒｓｏｎら、「Ｄｏｓｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ Ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎ Ａｃｉｄ Ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅ （ｒｈＡＳＭ） ｔｏ Ａｃｉｄ Ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅ Ｋｎｏｃｋ−ｏｕｔ （ＡＳＭＫＯ） Ｍｉｃｅ」、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２００５；および、Ｍｕｒｒａｙら、「Ｅｌｅｖａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｒｏ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｃｙｔ
ｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｃｒｅａｓｅｓ ｉｎ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｈｅｍｏｄｙｎａｍｉｃｓ Ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎ Ａｃｉｄ Ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅ （ｒｈＡＳＭ） ｔｏ Ａｃｉｄ Ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅ Ｋｎｏｃｋ−ｏｕｔ （ＡＳＭＫＯ） Ｍｉｃｅ」、Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ ２００６。

本研究では、３つの異なる濃度：０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ（非毒性用量、臨床的に明白な副作用は観察されない）または２０ｍｇ／ｋｇ（中毒量）のうちの１つでｒｈＡＳＭの単回静注投与量をＡＳＭノックアウトマウスに投与した。３例の雄マウスおよび３例の雌マウスを各投与群に割り当て（全１８例の動物）、表１に示す各時点で血液サンプルを採取した。

ＤＢＳサンプルのｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルを定量化し、ｒｈＡＳＭ用量濃度を増加させるにつれてｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルが上昇し、投与からおよそ６時間後に３ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇ処置群でピークになったことを示した。投与から５分後の濃度と比較した際の、サンプルとして抽出した投与からの各時点でのＤＢＳ中のｌｙｓｏ−ＳＰＭ濃度の上昇倍数を示すヒストグラムである図２を参照。驚くべきことに、中毒量（２０ｍｇ／ｋｇ）のｒｈＡＳＭに反応してのｌｙｓｏ−ＳＰＭの血漿中濃度の上昇倍数は、非中毒量（３ｍｇ／ｋｇ）のｒｈＡＳＭに反応してのｌｙｓｏ−ＳＰＭの血漿中濃度の上昇倍数よりも著明に高かった。この結果は、ｌｙｓｏ−ＳＰＭが、ＡＳＭ障害の患者において蓄積したＳＰＭのレベルを減少させる治療薬の毒性効果を計測するためのマーカーとして有用であることを示唆する。

単回用量および減量レジメンの比較
ｒｈＡＳＭの単回用量または減量投与レジメンの投与後の野生型（Ｃ５７ＢＬ／６）またはＡＳＭノックアウト（ＡＳＭＫＯ）マウスから乾燥血液スポットを採取した。５例のＡＳＭＫＯマウスに１０ｍｇ／ｋｇのｒｈＡＳＭの単回用量を投与した。５例のＣ５７ＢＬ／６および５例のＡＳＭＫＯマウスを３ｍｇ／ｋｇのｒｈＡＳＭの減量レジメンを使用して処置し、その後２０ｍｇ／ｋｇの用量を与えた。血液サンプルを、以下の時点：投与から５分、４時間、６時間、２４時間および７２時間後で採取した。１０ｍｇ／ｋｇ投与群の動物は、２４時間後に安楽死させた。

全７０個の血液スポットサンプルを、液体マルチプレックス抽出手順（ｌｉｐｉｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）を使用して調製し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析した。簡潔には、各サンプルカードから単一のＤＢＳスポットを穿孔し、個々のエッペンドルフ管内に置いた。次いで、各管に２００マイクロリットルの８０：１５：５溶液（ＭｅＯＨ：ＡＣＮ：Ｈ_２Ｏ）を加え、その後、３０分間ボルテックスし、１０分間超音波処理し、遠心分離にかけて任意の微粒子に遠心沈殿させた。ｌｙｓｏ−ＳＰＭ検量線（内部標準なし）を使用して各サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭの濃度を決定した。

図３中のデータは、減量レジメンにかけられたＡＳＭＫＯ群とは対照的に、１０ｍｇ／ｋｇの単回（高）用量のｒｈＡＳＭで処置されたＡＳＭＫＯ群に限りｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルが上昇したことを示す。このような高用量では、少なくとも５０％のマウスが２４時間から７２時間の間に死亡し、一方、減量レジメンにおいてはすべてのマウスが生存することが予想される。これらの結果は、ｌｙｓｏ−ＳＰＭが、高用量の治療薬の毒性効果を計測するためのマーカーとして有用となり得ることを示唆する。

ヒト試験
ｒｈＡＳＭを用いて処置中のニーマン・ピック患者から血液サンプルを採取した。代表的な例を図４に示す。２６週間にわたり（初日、第２、４、６、８、１０、１２、１４および２６週について）ｒｈＡＳＭの投与前および指定用量（０．１、０．３、０．６、１、２もしくは３ｍｇ／ｋｇ）のｒｈＡＳＭの投与から２４、４８および７２時間後にサンプルを採取した。第２６週では、投与前、および投与から２４および４８時間後にのみサンプルを採取した。ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルは、ｎｇ／ｍｌで測定した。データは、投与前と各各投与から７２時間後の時点との間でｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルに増減はあるものの、高濃度での反復投与後のｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルの全般的な低下傾向を示す。早期の投与後のサンプルは、２４時間後に採取し、その時点まで、投与後のｌｙｓｏ−ＳＰＭ濃度の急上昇は観察されなかった可能性がある。投与された投与量もまた、投与後のｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルの有意な急上昇が観察されるために必要とされる濃度未満であった可能性がある。

前述の実施例は、本開示を説明するものであり、決して制限するものではない。開示されるデバイスおよび方法の他の実施形態は、本明細書で開示されるデバイスおよび方法の詳述および実施から当業者には明らかであろう。

Claims (87)

1. 酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）障害を有するヒト対象を処置する方法であって、
   （ａ）対象に、第１の濃度を有する、ＡＳＭ障害を処置するための第１の用量の治療薬を投与すること；および
   （ｂ）対象が第１の用量の投与後、参照レベル以下のｌｙｓｏ−スフィンゴミエリン（ｌｙｓｏ−ＳＰＭ）のレベルを有することが決定された場合、対象に、第１の濃度以上の第２の濃度を有する第２の用量の治療薬を投与すること
   を含む前記方法。
2. 対象が参照レベルよりも高いｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを有することが決定されるまで、用量濃度を増加させて工程（ａ）〜（ｂ）の方法を反復することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
3. 対象におけるｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを決定することが、
   （ａ）対象から生体サンプルを採取すること；
   （ｂ）生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを測定すること；および
   （ｃ）サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベルと比較すること
   を含む、請求項１または２に記載の方法。
4. 対象におけるｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベルよりも高いことが決定される場合、治療薬の用量を維持すること、用量を減少させること、または投与を中止することをさらに含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
5. 前回の用量から１、２、３、４、５、６もしくは７日後、または１、２、３もしくは４週間後に、それぞれの後続のより高い濃度用量の治療薬が投与される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
6. 治療薬療法の各用量が少なくとも２回投与される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
7. 生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、約１００〜７００ｎｇ／ｍｌの参照レベルよりも高い、または参照レベルよりも少なくとも約１．１〜１０倍高いもしくは少なくとも３倍高い場合、高ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルが検出される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
8. 生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、約４００ｎｇ／ｍｌの参照レベルよりも高い場合、高ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルが検出される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
9. 生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、約５００ｎｇ／ｍｌの参照レベルよりも高い場合、高ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルが検出される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
10. 生体サンプルが全血である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
11. 全血が乾燥血液スポットである、請求項１０に記載の方法。
12. 生体サンプルが血清である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
13. 治療薬が、静脈内、皮内、皮下または筋肉内投与される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
14. 治療薬が、組換えヒト酸性スフィンゴミエリナーゼ（ｒｈＡＳＭ）または修飾ｒｈＡＳＭを含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
15. 高ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルを検出することなく対象が忍容性を示す治療薬の最高濃度用量以下の用量を含む維持用量の治療薬を投与することをさらに含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
16. 維持用量が、忍容性が示された最高用量よりも低い濃度の治療効果のある用量である、請求項１５に記載の方法。
17. 維持用量が、２〜４週毎に対象に投与される、請求項１５または１６に記載の方法。
18. ＡＳＭ障害がＮＰＤ Ａ型またはＮＰＤ Ｃ型である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
19. ＡＳＭ障害がＮＰＤ Ｂ型である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
20. 対象が、酸性スフィンゴミエリナーゼをコードしている遺伝子にミスセンス変異を有する、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
21. 変異が、Ｌ３０２Ｐ、Ｈ４２１ＹまたはＲ４９６Ｌである、請求項２０に記載の方法。
22. 対象が、酸性スフィンゴミエリナーゼをコードしている遺伝子に変異を有し、変異がΔＲ６０８である、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
23. ＡＳＭ障害を有するヒト対象を処置する方法であって、
    （ａ）ヒト対象に、約０．０３〜約１．０ｍｇ／ｋｇの第１の用量の組換えヒト酸性スフィンゴミエリナーゼ（ｒｈＡＳＭ）または修飾ｒｈＡＳＭを投与すること；
    （ｂ）対象から生体サンプルを採取すること；
    （ｃ）生体サンプル中のｌｙｓｏ−スフィンゴミエリン（ｌｙｓｏ−ＳＰＭ）のレベルを測定すること；
    （ｄ）サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベルと比較すること；
    （ｅ）第１の用量のｒｈＡＳＭまたは修飾ｒｈＡＳＭの投与後、生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベル以下である場合、第１の濃度以上の濃度を有する第２の用量のｒｈＡＳＭまたは修飾ｒｈＡＳＭを投与すること；および
    （ｆ）前記用量のｒｈＡＳＭまたは修飾ｒｈＡＳＭの投与後、ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベルを超えるまで、用量濃度を増加させて工程（ａ）〜（ｅ）の方法を反復すること
    を含む前記方法。
24. ｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベルよりも高い場合、ｒｈＡＳＭまたは修飾ｒｈＡＳＭの用量を維持すること、用量を減少させること、または投与を中止することをさらに含む、請求項２３に記載の方法。
25. 前回の用量から１、２、３または４週間後に、それぞれの後続のより高い濃度用量が投与される、請求項２３または２４に記載の方法。
26. ｒｈＡＳＭまたは修飾ｒｈＡＳＭの各用量が少なくとも２回投与される、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の方法。
27. サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、約１００〜７００ｎｇ／ｍｌの参照レベルよりも高い、または参照レベルよりも少なくとも約１．１〜１０倍高い、もしくは少なくとも約３倍高い場合、高ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルが検出される、請求項２３〜２６のいずれか１項に記載の方法。
28. サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、約４００ｎｇ／ｍｌの参照レベルよりも高い場合、高ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルが検出される、請求項２３〜２７のいずれか１項に記載の方法。
29. サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、約５００ｎｇ／ｍｌの参照レベルよりも高い場合、高ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルが検出される、請求項２３〜２７のいずれか１項に記載の方法。
30. 生体サンプルが全血である、請求項２３〜２９のいずれか１項に記載の方法。
31. 全血が乾燥血液スポットである、請求項３０に記載の方法。
32. 生体サンプルが血清である、請求項２３〜２９のいずれか１項に記載の方法。
33. ｒｈＡＳＭまたは修飾ｒｈＡＳＭが、静脈内、皮内、皮下または筋肉内投与される、請求項２３〜３２のいずれか１項に記載の方法。
34. 高ｌｙｓｏ−ＳＰＭレベルを検出することなく対象が忍容性を示す最高濃度用量以下のｒｈＡＳＭまたは修飾ｒｈＡＳＭの用量を含む維持用量を投与することをさらに含む、請求項２３〜３３のいずれか１項に記載の方法。
35. 維持用量が、忍容性が示された最高用量よりも低い濃度のｒｈＡＳＭまたは修飾ｒｈＡＳＭの治療効果のある用量である、請求項３４に記載の方法。
36. 維持用量が、２〜４週毎に対象に投与される、請求項３４または３５に記載の方法。
37. ＡＳＭ障害がＮＰＤ Ａ型またはＮＰＤ Ｃ型である、請求項２３〜３６のいずれか１項に記載の方法。
38. ＡＳＭ障害がＮＰＤ Ｂ型である、請求項２３〜３６のいずれか１項に記載の方法。
39. ＡＳＭ障害を処置する治療法の間、有害な副作用について対象をモニタリングする方法であって、
    対象に、ＡＳＭ障害を処置するある用量の治療薬を投与すること、
    ある用量の治療薬の投与後、対象から生体サンプルを採取すること、
    サンプル中のｌｙｓｏ−スフィンゴミエリン（ｌｙｓｏ−ＳＰＭ）のレベルを測定すること、
    サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベルと比較すること、および
    サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベルよりも高い場合、有害な副作用を検出すること
    を含む前記方法。
40. サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、約１００〜７００ｎｇ／ｍｌよりも高い、または参照レベルよりも少なくとも約１．１〜１０倍高い、もしくは少なくとも約３倍高い場合、有害な副作用が検出される、請求項３９に記載の方法。
41. サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、約４００ｎｇ／ｍｌよりも高い場合、有害な副作用が検出される、請求項３９または４０に記載の方法。
42. サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、約５００ｎｇ／ｍｌよりも高い場合、有害な副作用が検出される、請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の方法。
43. 生体サンプルが全血である、請求項３９〜４２のいずれか１項に記載の方法。
44. 全血が乾燥血液スポットである、請求項４３に記載の方法。
45. 生体サンプルが血清である、請求項３９〜４２のいずれか１項に記載の方法。
46. 濃度を増加させて連続用量で治療薬を投与し、各用量の投与後、生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを測定することにより有毒な副作用について対象をモニタリングする、請求項３９〜４５のいずれか１項に記載の方法。
47. 前回の用量の投与後、参照レベルよりも高いｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが検出される場合、高濃度用量の治療薬を投与しない、請求項４６に記載の方法。
48. ある用量の治療薬の投与から約１、６、１２、１８もしくは２４時間、１〜７日、または１もしくは２週間超が経過した後、生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベルよりも高い場合、有害な副作用が検出される、請求項３９〜４７のいずれか１項に記載の方法。
49. 治療薬が、組換えヒト酸性スフィンゴミエリナーゼ（ｒｈＡＳＭ）または修飾ｒｈＡＳＭである、請求項３９〜４８のいずれか１項に記載の方法。
50. 対象におけるＡＳＭ障害を診断する方法であって、
    対象から生体サンプルを採取すること、
    サンプル中のｌｙｓｏ−スフィンゴミエリン（ｌｙｓｏ−ＳＰＭ）のレベルを測定すること、
    サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベルと比較すること、および
    サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベルよりも高い場合、ＡＳＭ障害を診断すること
    を含む前記方法。
51. ＡＳＭ障害がＮＰＤ Ａ型またはＮＰＤ Ｃ型である、請求項５０に記載の方法。
52. ＡＳＭ障害がＮＰＤ Ｂ型である、請求項５０または５１に記載の方法。
53. 対象が、酸性スフィンゴミエリナーゼをコードしている遺伝子にミスセンス変異を有する、請求項５０〜５２のいずれか１項に記載の方法。
54. 変異が、Ｌ３０２Ｐ、Ｈ４２１ＹまたはＲ４９６Ｌである、請求項５３に記載の方法。
55. 対象が、酸性スフィンゴミエリナーゼをコードしている遺伝子に変異を有し、変異がΔＲ６０８である、請求項５０〜５４のいずれか１項に記載の方法。
56. 生体サンプルが全血である、請求項５０〜５５のいずれか１項に記載の方法。
57. 全血が乾燥血液スポットである、請求項５６に記載の方法。
58. 生体サンプルが血清である、請求項５０〜５６のいずれか１項に記載の方法。
59. サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、約２００〜２０００ｎｇ／ｍｌの参照レベルよりも高い、もしくは約２００、４００、５２５、５７５、７００、９００もしくは２０００ｎｇ／ｍｌの参照レベルよりも高い、または参照レベルよりも少なくとも約１〜１０倍高い場合、ＡＳＭ障害が検出される、請求項５０〜５８のいずれか１項に記載の方法。
60. サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、約５７５ｎｇ／ｍｌよりも高い場合、ＡＳＭ障害が検出される、請求項５０〜５９のいずれか１項に記載の方法。
61. サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、約９００ｎｇ／ｍｌよりも高い場合、ＡＳＭ障害が検出される、請求項５０〜５９のいずれか１項に記載の方法。
62. ＡＳＭ障害が診断された場合、対象に酵素補充療法を投与することをさらに含む、請求項５０〜６１のいずれか１項に記載の方法。
63. 酵素補充療法が、対象にｒｈＡＳＭまたは修飾ｒｈＡＳＭを投与することを含む、請求項６２に記載の方法。
64. ｌｙｓｏ−ＳＰＭを含有する生体サンプルを採取するためのデバイスと、生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを測定するキットを使用するための指示書とを含むキット。
65. 生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを測定するためのデバイスをさらに含む、請求項６４に記載のキット。
66. 生体サンプルが血清または全血である、請求項６４または６５に記載のキット。
67. 全血が乾燥血液スポットである、請求項６６に記載のキット。
68. サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベルと比較し、ＡＳＭ障害を診断する、またはＡＳＭ障害の処置の間、サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベルよりも高い場合、有害な副作用を検出するための指示書をさらに含む、請求項６４〜６７のいずれか１項に記載のキット。
69. ＡＳＭ障害を有するヒト対象を処置する方法であって、
    （ａ）対象に、第１の濃度を有する、ＡＳＭ障害を処置するための第１の用量の治療薬を投与すること；
    （ｂ）対象から生体サンプルを採取すること；
    （ｃ）生体サンプル中のｌｙｓｏ−スフィンゴミエリン（ｌｙｓｏ−ＳＰＭ）のレベルを測定すること；
    （ｄ）サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベルと比較すること；および
    （ｅ）生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベル以下である場合、第１の濃度以上の濃度を有する第２の用量の治療薬を投与すること
    を含む前記方法。
70. 対象におけるＡＳＭ障害を処置するための治療薬の投与量を検量する方法であって、
    （ａ）第１の濃度を有する、ＡＳＭ障害を処置するための第１の用量の治療薬の投与後、対象から生体サンプルを採取すること、
    （ｂ）生体サンプル中のｌｙｓｏ−スフィンゴミエリン（ｌｙｓｏ−ＳＰＭ）のレベルを測定すること、および
    （ｃ）サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベルと比較すること
    を含み、生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベル以下もしくは参照レベルよりも１．１〜１０倍超低い場合、治療薬の投与量を増量することができ、または参照レベルよりも高いもしくは参照レベルよりも少なくとも１．１〜１０倍超高い場合、減量することができる、前記方法。
71. 生体サンプルが、血液サンプル、血漿サンプル、血清サンプル、および／または乾燥血液スポットである、請求項７０に記載の方法。
72. 生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベル以下である場合、高用量が対象に推奨および／または投与され、ならびに検量が反復される、請求項７０または７１に記載の方法。
73. 生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベルと整合するまで、漸増用量で検量が繰り返される、請求項７２に記載の方法。
74. 検量の間に、参照レベルに等しいｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルをもたらす用量として特定された用量である維持用量を対象に投与する、請求項７３に記載の方法。
75. 治療薬が、組換えヒト酸性スフィンゴミエリナーゼ（ｒｈＡＳＭ）または修飾ｒｈＡＳＭである、請求項７０〜７４のいずれか１項に記載の方法。
76. 対象におけるＡＳＭ障害を処置するための治療薬の有効用量を決定する方法であって、
    （ａ）第１の濃度を有する、ＡＳＭ障害を処置するための第１の用量の治療薬の投与後、対象から生体サンプルを採取すること、
    （ｂ）生体サンプル中のｌｙｓｏ−スフィンゴミエリン（ｌｙｓｏ−ＳＰＭ）のレベルを測定すること、および
    （ｃ）サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベルと比較すること
    を含み、生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベル以下もしくは参照レベルよりも１．１〜１０倍超低い場合、治療薬の投与量を増量することができ、および参照レベルよりも高いもしくは参照レベルよりも少なくとも１．１〜１０倍超高い場合、減量することができる、前記方法。
77. 生体サンプルが、血液サンプル、血漿サンプル、血清サンプル、および／または乾燥血液スポットである、請求項７６に記載の方法。
78. 治療薬が、組換えヒト酸性スフィンゴミエリナーゼ（ｒｈＡＳＭ）または修飾ｒｈＡＳＭである、請求項７６または７７に記載の方法。
79. 対象におけるＡＳＭ障害を処置するための治療薬の過量投与を検出する方法であって、
    （ａ）第１の濃度を有する、ＡＳＭ障害を処置するための第１の用量の治療薬の投与後
    、対象から生体サンプルを採取すること、
    （ｂ）生体サンプル中のｌｙｓｏ−スフィンゴミエリン（ｌｙｓｏ−ＳＰＭ）のレベルを測定すること、および
    （ｃ）サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベルと比較すること
    を含み、生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベルよりも高い場合、または生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベルよりも１．１〜１０倍超高い場合、過量投与が検出される、前記方法。
80. 生体サンプルが、血液サンプル、血漿サンプル、血清サンプル、および／または乾燥血液スポットである、請求項７９に記載の方法。
81. 治療薬が、組換えヒト酸性スフィンゴミエリナーゼ（ｒｈＡＳＭ）または修飾ｒｈＡＳＭである、請求項７９または８０に記載の方法。
82. ＡＳＭ障害について対象または対象の集団をスクリーニングする方法であって、
    （ａ）第１の濃度を有する、ＡＳＭ障害を処置するための第１の用量の治療薬の投与後、対象から生体サンプルを採取すること、
    （ｂ）生体サンプル中のｌｙｓｏ−スフィンゴミエリン（ｌｙｓｏ−ＳＰＭ）のレベルを測定すること、および
    （ｃ）サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルを参照レベルと比較すること
    を含み、生体サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが参照レベルよりも高い場合、対象がＡＳＭ障害を有するまたは有する可能性が高いと特定される、前記方法。
83. 生体サンプルが、血液サンプル、血漿サンプル、血清サンプル、および／または乾燥血液スポットである、請求項８２に記載の方法。
84. 高レベルのｌｙｓｏ−ＳＰＭを有する対象が、遺伝子検査またはＡＳＭ酵素活性検査を使用してＡＳＭ障害についてさらに評価される、請求項８２または８３に記載の方法。
85. ＡＳＭ障害を有するまたは有する可能性が高いと特定された対象に、ＡＳＭ障害を処置するための治療薬を投与することをさらに含む、請求項８２〜８４のいずれか１項に記載の方法。
86. 治療薬が、組換えヒト酸性スフィンゴミエリナーゼ（ｒｈＡＳＭ）または修飾ｒｈＡＳＭである、請求項８２〜８５のいずれか１項に記載の方法。
87. サンプル中のｌｙｓｏ−ＳＰＭのレベルが、約２００〜２０００ｎｇ／ｍｌの参照レベルよりも高い、または参照レベルよりも少なくとも約１〜１０倍高い場合、対象がＡＳＭ障害を有するまたは有する可能性が高いと特定される、請求項８２〜８６のいずれか１項に記載の方法。

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