JP2019069906A

JP2019069906A - 医薬組成物

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Publication number: JP2019069906A
Application number: JP2017195571A
Authority: JP
Inventors: 大村　智; Satoshi Omura; 智大村; 花木　秀明; Hideaki Hanaki; 秀明花木; 砂塚　敏明; Toshiaki Sunatsuka; 敏明砂塚; 宏太郎福田; Kotaro Fukuda; 英樹池本; Hideki Ikemoto; 綾乃金城; Ayano Kaneshiro; 望嘉尾形; Mochiyoshi Ogata; 敏夫原; Toshio Hara; 平野　隆
Original assignee: SENTAN IRYO KAIHATSU KK; Kitasato Institute
Current assignee: SENTAN IRYO KAIHATSU KK; Kitasato Institute
Priority date: 2017-10-06
Filing date: 2017-10-06
Publication date: 2019-05-09

Abstract

【課題】有効成分の水への溶解性を高めて、有効成分の生体への吸収性を向上させることができる医薬組成物を提供する。【解決手段】医薬組成物は、アベルメクチン又はイベルメクチンを含有する凍結乾燥物を含み、凍結乾燥物は、乳酸・グリコール酸共重合体を含む。当該凍結乾燥物はナノ粒子であって、ナノ粒子のＤ５０の値が、２００ｎｍ以下である、こととしてもよい。【選択図】図３

Description

本発明は、医薬組成物に関する。

アベルメクチン（ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ）は、土壌中の放線菌の一種ストレプトマイセス・アベルメクチニウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）によって産生される、１８員環ラクトン（マクロライド）化合物の一群である。アベルメクチンとしては、４組８種の化合物（Ａ１ａ、Ａ１ｂ、Ａ２ａ、Ａ２ｂ、Ｂ１ａ、Ｂ１ｂ、Ｂ２ａ及びＢ２ｂ）が知られている。アベルメクチンは、駆虫活性及び殺虫活性を有する。

イベルメクチン（ｉｖｅｒｍｅｃｔｉｎ）は、アベルメクチンに基づいて合成された化合物である。イベルメクチンは、イベルメクチンＢ１ａと、イベルメクチンＢ１ｂと、を含む混合物である。イベルメクチンは駆虫薬として、腸管糞線虫症、疥癬及び毛包虫症等の治療に使用される。アベルメクチン及びイベルメクチンは、錠剤又は液剤としてヒト又は動物の駆虫薬として広く使用されている。

アベルメクチン及びイベルメクチンは、水及び生理食塩水にほとんど溶解しない。このため、アベルメクチン及びイベルメクチンを溶解させた注射製剤とする場合、適切な溶媒を使用する必要がある。例えば、特許文献１には、薬剤としてのイベルメクチン、ゴマ油、オレイン酸エチル及びベンジルアルコールを含む注射製剤が開示されている。

特表２００１−５０３０２９号公報

上記特許文献１に開示された注射製剤のように種々の溶媒を混合した溶媒混合物では、保存状態によっては、溶媒混合物中のイベルメクチン自体の安定性、並びに溶媒の物性変化及び異なる溶媒間の相互作用等による品質の低下が懸念される。また、当該注射剤を大量に生体に投与した場合、生体内に溶媒が蓄積し、副作用が現れるおそれがある。

また、設備等の制限により、品質を保持しながら上述のような注射製剤を保管できない環境下では、投与直前に生理食塩水に懸濁されたアベルメクチン等を生体に投与することがある。しかし、生理食塩水に懸濁されたアベルメクチン等は、溶解していないため、生体への吸収性が低く、生体内で投与量に見合った薬効が得られないおそれがある。一方、錠剤としてアベルメクチン等を経口投与しても、水に対して難溶性であるために、血中への吸収性が十分であるとは言えない。アベルメクチン等を有効成分として含む医薬組成物において、有効成分の水への溶解性及び生体への吸収性の向上が求められている。

本発明は、上記実情に鑑みてなされたものであり、有効成分の水への溶解性を高めて、有効成分の生体への吸収性を向上させることができる医薬組成物を提供することを目的とする。

本発明の観点に係る医薬組成物は、
アベルメクチン又はイベルメクチンを含有する凍結乾燥物を含み、
前記凍結乾燥物は、
乳酸・グリコール酸共重合体を含む。

この場合、前記凍結乾燥物はナノ粒子であって、
該ナノ粒子のＤ_５０の値が、
２００ｎｍ以下である、
こととしてもよい。

また、上記本発明の観点に係る医薬組成物は、
生理食塩水をさらに含み、
前記凍結乾燥物は、
イベルメクチンを含有し、
前記生理食塩水に溶解している前記イベルメクチンの濃度が、１．０μｇ／ｍＬ以上である、
こととしてもよい。

本発明によれば、有効成分の水への溶解性を高めて、有効成分の生体への吸収性を向上させることができる。

実施例１で得られたアベルメクチン封入ナノ粒子（Ａｖｅ−ＮＰ）の粒度分布を示す図である。実施例１で得られたイベルメクチン封入ナノ粒子（Ｉｖｅ−ＮＰ）の粒度分布を示す図である。Ｉｖｅ−ＮＰに関する生理食塩水に対する溶解濃度を示す図である。Ａｖｅ−ＮＰからのアベルメクチン（Ａｖｅ）の溶出率等を示す図である。Ｉｖｅ−ＮＰからのイベルメクチン（Ｉｖｅ）の溶出率等を示す図である。経口投与されたＡｖｅ−ＮＰの生体での吸収性試験の結果を示す図である。（Ａ）はＡｖｅ原体を投与したマウスにおけるＡｖｅの血中濃度の経時変化を示す図である。（Ｂ）はＡｖｅ−ＮＰを投与したマウスにおけるＡｖｅの血中濃度の経時変化を示す図である。（Ｃ）はＡｖｅ原体を投与したマウス及びＡｖｅ−ＮＰを投与したマウスそれぞれにおけるＡｖｅの血中濃度の時間曲線下面積（ＡＵＣ）を示す図である。経口投与されたＩｖｅ−ＮＰの生体での吸収性試験の結果を示す図である。（Ａ）はＩｖｅ原体を投与したマウスにおけるＩｖｅの血中濃度の経時変化を示す図である。（Ｂ）はＩｖｅ−ＮＰを投与したマウスにおけるＩｖｅの血中濃度の経時変化を示す図である。（Ｃ）はＩｖｅ原体を投与したマウス及びＩｖｅ−ＮＰを投与したマウスそれぞれにおけるＩｖｅの血中濃度のＡＵＣを示す図である。

（実施の形態）
本発明に係る実施の形態について説明する。本実施の形態に係る医薬組成物は、アベルメクチン（以下、略称「Ａｖｅ」でも示される）又はイベルメクチン（以下、略称「Ｉｖｅ」でも示される）を含有する凍結乾燥物を含む。

Ａｖｅは、アベルメクチンＡ１ａ、Ａ１ｂ、Ａ２ａ、Ａ２ｂ、Ｂ１ａ、Ｂ１ｂ、Ｂ２ａ及びＢ２ｂの少なくともいずれ１種を含む。例えば、Ｂ１ａ及びＢ１ｂの化学式は、次の化学式におけるＲがそれぞれエチル基及びメチル基で示される。

Ｉｖｅは、イベルメクチンＢ１ａ（２２，２３−ジヒドロアベルメクチンＢ１ａ）及びイベルメクチンＢ１ｂ（２２，２３−ジヒドロアベルメクチンＢ１ｂ）の混合物である。ＩｖｅにおけるイベルメクチンＢ１ａとイベルメクチンＢ１ｂとの組成比は、イベルメクチンＢ１ａが８０重量％以上を占め、残りがイベルメクチンＢ１ｂである。イベルメクチンＢ１ａ及びＢ１ｂの化学式は、次の化学式におけるＲがそれぞれエチル基及びメチル基で示される。

上記凍結乾燥物は、乳酸・グリコール酸共重合体（ポリラクチドグリコライド共重合体ともいう。以下、単に「ＰＬＧＡ」という）を含む。ＰＬＧＡは、例えば１：９９〜９９：１、好ましくは７５：２５、より好ましくは３：１の割合で、乳酸又はラクチドと、グリコール酸又はグリコライドと、からなるコポリマーである。ＰＬＧＡは、任意のモノマーから公知の方法で合成してもよいし、市販のＰＬＧＡを使用してもよい。市販のＰＬＧＡとしては、例えばＰＬＧＡ７５２０（乳酸：グリコール酸＝７５：２５、平均重量分子量２０，０００、和光純薬社製）が挙げられる。乳酸及びグリコール酸の含有量が２５重量％〜６５重量％であるＰＬＧＡは非晶質であり、アセトン等の有機溶媒に可溶である点で好ましい。

上記凍結乾燥物は、凍結乾燥によって得られる固形状物であれば、その態様は特に限定されない。凍結乾燥物がＡｖｅ又はＩｖｅ（以下「Ａｖｅ等」ともいう）を含有するとは、Ａｖｅ等が凍結乾燥物に内包又は封入されてもよく、Ａｖｅ等が凍結乾燥物に内包又は封入され、かつＡｖｅ等の一部が凍結乾燥物の表面に露出していてもよい。

好ましくは、凍結乾燥物はナノ粒子である。特に好ましくは、当該ナノ粒子は、生体への刺激又は毒性が低く、かつ投与後分解して代謝される性質を備える生体適合性粒子である。ナノ粒子の粒径は、１０００ｎｍ未満で、例えば２．５〜９００ｎｍ、好ましくは２５〜５００ｎｍ又は５０〜３００ｎｍ、より好ましくは１００〜２００ｎｍ、さらに好ましくは１５０〜１９０ｎｍ、特に好ましくは１６０〜１８０ｎｍである。

ナノ粒子の粒径は、ふるい分け法、沈降法、顕微鏡法、光散乱法、レーザー回折・散乱法、電気的抵抗試験、透過型電子顕微鏡による観察、及び走査型電子顕微鏡による観察等で測定できる。粒径は粒度分布計で測定してもよい。粒径は、測定方法に応じて、ストーク相当径、円相当径及び球相当径で表すことができる。また、粒径は、複数の粒子を測定対象として、平均で表した平均粒径、体積平均粒径及び面積平均粒径等であってもよい。また、粒径は、レーザー回折・散乱法等の測定に基づく個数分布等から算出される平均粒径であってもよい。

好適には、ナノ粒子の粒径は、粒子の集団の全体積を１００％とした累積カーブにおける５０％となる点の粒径である５０％径（Ｄ_５０）で表される。累積カーブ及びＤ_５０は、市販の粒度分布計を用いて求めることができる。例えば、ナノ粒子のＤ_５０の値は、１０００ｎｍ未満である。例えば、ナノ粒子のＤ_５０の値は、２．５〜９００ｎｍ、好ましくは２５〜５００ｎｍ又は５０〜３００ｎｍ、より好ましくは１００〜２００ｎｍ、さらに好ましくは１５０〜１９０ｎｍ、特に好ましくは１６０〜１８０ｎｍであってもよい。好適には、ナノ粒子のＤ_５０の値は２００ｎｍ以下である。粒度分布計としては、例えば、ＮＩＫＫＩＳＯＮａｎｏｔｒａｃＷａｖｅ−ＥＸ１５０（日機装社製）が挙げられる。

上記ナノ粒子は、表面をポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で修飾されてもよい。例えば、上記ナノ粒子の製造に、ＰＬＧＡのＰＥＧ修飾体を用いることで、表面がＰＥＧで修飾されたナノ粒子が得られる。ナノ粒子の表面がＰＥＧで修飾されることで、ナノ粒子の血中安定性が向上する。

本実施の形態に係る医薬組成物は、生理食塩水をさらに含んでもよい。生理食塩水とは、塩化ナトリウムを０．９ｗ／ｖ％含有する食塩水を意味する。この場合、好ましくは、上記凍結乾燥物は、イベルメクチンを含有し、生理食塩水に溶解しているイベルメクチンの濃度が１．０μｇ／ｍＬ以上、１．０〜１００μｇ／ｍＬ、１．５〜９０μｇ／ｍＬ、５〜７０μｇ／ｍＬ又は１０〜６０μｇ／ｍＬである。また、生理食塩水に溶解しているイベルメクチンの濃度は、１〜３μｇ／ｍＬ、５〜１５μｇ／ｍＬ又は６０〜９０μｇ／ｍＬであってもよい。

上記凍結乾燥物の製造方法としては、公知の任意の製造方法を採用できる。凍結乾燥物は、Ａｖｅ等及びＰＬＧＡを有機溶媒等の適切な溶媒に懸濁して得られた懸濁液から溶媒を除去し、公知の方法で凍結乾燥したものである。好ましくは、溶媒の除去では、減圧下で溶媒が留去される。

本実施の形態に係る凍結乾燥物としてのナノ粒子は、例えば水中エマルジョン法で製造できる。水中エマルジョン法では、ＰＬＧＡが溶解する良溶媒と、ＰＬＧＡが溶解しない貧溶媒の２種類の溶媒を用いる。良溶媒には、ＰＬＧＡが溶解し、かつ貧溶媒へ混和する有機溶媒を用いる。良溶媒及び貧溶媒の種類は、特に限定されない。

貧溶媒としては、水が挙げられる。貧溶媒として水を用いる場合、水に界面活性剤を添加してもよい。例えば、界面活性剤としては、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）が好ましい。ＰＶＡ以外の界面活性剤としては、レシチン、ヒドロキシメチルセルロース及びヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。

良溶媒としては、低沸点かつ難水溶性の有機溶媒であるハロゲン化アルカン類、アセトン、メタノール、エタノール、エチルアセテート、ジエチルエーテル、シクロヘキサン、ベンゼン及びトルエン等が挙げられる。好ましくは、例えば環境や人体に対する悪影響が少ないアセトンのみ又はアセトンとエタノールとの混合液が用いられる。

水中エマルジョン法では、まず、良溶媒中にＰＬＧＡ及びＡｖｅ等を溶解後、ＰＬＧＡとＡｖｅ等とを含む良溶媒を、撹拌下で貧溶媒中に滴下する。これにより、良溶媒が貧溶媒中へ急速に拡散移行する。その結果、貧溶媒中で良溶媒の乳化が起き、良溶媒のエマルジョン滴が形成される。

さらに良溶媒と貧溶媒の相互拡散により、エマルジョン内から有機溶媒が貧溶媒へと継続的に拡散するため、エマルジョン滴内のＰＬＧＡ及びＡｖｅ等の溶解度が低下する。最終的には、Ａｖｅ等を含有する球形結晶粒子であるナノ粒子が生成する。その後、良溶媒である有機溶媒を遠心分離又は減圧留去し、ナノ粒子粉末を得る。得られた粉末は、そのまま、又は必要に応じて凍結乾燥等により再分散可能な凝集粒子に複合化される。

Ａｖｅ等を含有するナノ粒子は、強制薄膜式マイクロリアクターを用いて製造されてもよい。強制薄膜式マイクロリアクターを用いる場合、まず、互いに対向して配設され、少なくとも一方が他方に対して相対的に回転する処理用面間に、上述の良溶媒と貧溶媒とを導入する。これにより形成される薄膜流体中で、良溶媒と貧溶媒とを混合し、Ａｖｅ等を含有するナノ粒子を、薄膜流体中に析出させる。強制薄膜式マイクロリアクターとしては、好ましくはＵＬＲＥＡＳＳ−１１（エム・テクニック社製）が用いられる。

上記凍結乾燥物におけるＡｖｅ等の含有率は特に限定されず、好ましくは０．０１〜９９重量％、０．１〜５０重量％、０．５〜４０重量％、１〜３０重量％、３〜２０重量％又は５〜１０重量％である。ここでのＡｖｅ等の含有率は、凍結乾燥物の重量に対するＡｖｅ等の重量の割合である。含有率は、所定重量の凍結乾燥物から抽出されたＡｖｅ等の重量を定量し、凍結乾燥物の重量に対するＡｖｅ等の重量の割合を算出することで求められる。

好適には、上記凍結乾燥物としてのナノ粒子におけるＡｖｅの含有率は、０．０１〜９９重量％、１〜３０重量％、２〜２０重量％、５〜１５重量％、６〜１２重量％又は９〜１０重量％である。好適には、上記凍結乾燥物としてのナノ粒子におけるＩｖｅの含有率は、０．０１〜９９重量％、１〜３０重量％、３〜２０重量％、４〜１５重量％、５〜１０重量％又は６〜７重量％である。

なお、凍結乾燥物としてのナノ粒子におけるＡｖｅ等の含有率を高めるため、貧溶媒にカチオン性高分子を添加してもよい。カチオン性高分子としては、キトサン並びにキトサン誘導体、セルロースに複数のカチオン基を結合させたカチオン化セルロース及びポリエチレンイミン、ポリビニルアミン並びにポリアリルアミン等のポリアミノ化合物等が挙げられる。

本実施の形態に係る医薬組成物が使用される疾患としては、Ａｖｅ等の公知の対象疾患が挙げられる。当該対象疾患は、寄生虫感染症、例えば、腸管糞線虫症、疥癬及び毛包虫症等の治療に使用される。好適には、医薬組成物は駆虫薬として使用される。当該医薬組成物は、ヒト及び動物に投与される。動物としては、好ましくは哺乳類で、より具体的には、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ及びシカ等があげられる。

本実施の形態に係る医薬組成物のヒト及び動物への投与経路は特に限定されない。上記医薬組成物は、外用剤、注射剤及び経口投与剤として用いられるのが好ましい。このとき、医薬組成物は、例えば、薬理的に許容される担体と配合された合剤であってもよい。薬理的に許容される担体は、製剤素材として用いられる各種の有機担体物質又は無機担体物質である。薬理的に許容される担体は、例えば、固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤及び崩壊剤、又は液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤及び無痛化剤等として医薬組成物に配合される。また、必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤及び甘味剤等の添加物を用いることもできる。

本実施の形態に係る医薬組成物は、既知の方法で製造され、有効成分として０．０００００１〜９９．９重量％、０．００００１〜９９．８重量％、０．０００１〜９９．７重量％、０．００１〜９９．６重量％、０．０１〜９９．５重量％、０．１〜９９重量％、０．５〜６０重量％、１〜５０重量％又は１〜２０重量％の凍結乾燥物を含む。

本実施の形態に係る医薬組成物の投与量は、投与対象のヒト又は動物の年齢、体重及び症状等によって適宜決定される。当該医薬組成物は、Ａｖｅ等が有効量となるように投与される。有効量とは、所望の結果を得るために必要なＡｖｅ等の量であり、治療又は処置する状態の進行の遅延、阻害、予防、逆転又は治癒をもたらすのに必要な量である。

当該医薬組成物の投与量は、典型的には、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．２ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇであり、１日に１回、又は複数回投与することができる。また、医薬組成物は、毎日、隔日、１週間に１回、隔週、１ヶ月に１回等の様々な投与頻度で投与してもよい。好ましくは、投与頻度は、医師等により容易に決定される。なお、必要に応じて、上記の範囲外の量を用いることもできる。

以上詳細に説明したように、本実施の形態に係る医薬組成物は、有効成分としてＡｖｅ等がＰＬＧＡを含む凍結乾燥物に含有されているため、下記実施例２に示すように、水及び生理食塩水へのＡｖｅ等の溶解性が原体に比べて顕著に増大する。この結果、当該医薬組成物は、原体と比較して、Ａｖｅ等の生体への吸収性を高めることができる。また、上記の医薬組成物は、下記実施例４に示すように、Ａｖｅを含有する凍結乾燥物が経口投与された場合にＡｖｅの生体への吸収性を向上させることができる。

別の実施の形態では、Ａｖｅ等を含有する凍結乾燥物を含む医薬組成物を患者又は動物に投与することにより、該患者又は動物の体に寄生する寄生虫を駆除する方法及び寄生虫に起因する疾患の治療又は予防方法が提供される。この場合の投与方法としては、経皮、経口、皮下注射及び静脈注射等が挙げられる。また、別の実施の形態では、アベルメクチン又はイベルメクチンを１．０μｇ／ｍＬ以上の濃度で生理食塩水に溶解する溶解ステップを含む、医薬組成物の製造方法が提供される。

以下の実施例により、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。

（実施例１：Ａｖｅ−ＮＰ及びＩｖｅ−ＮＰの調製）
以下のように、抗生物質（Ａｖｅ等）を封入したナノ粒子を調製した。Ａｖｅ−ＮＰの調製では、まず、０．３９ｇのＰＬＧＡ（ＰＬＧＡ７５０２０、乳酸：グリコール酸＝７５：２５、平均分子量２０，０００、和光純薬工業社製）と、０．１ｇのＡｖｅとを、アセトン４０ｇ及びエタノール２０ｇの混合溶媒に溶解したポリマー溶液を調製した。得られたポリマー溶液を、４０℃、４００ｒｐｍで撹拌した０．５ｗ／ｗ％ポリビニルアルコール溶液（日本合成化学工業株式会社製）１２０ｇ中にペリスタポンプを介して４ｒｐｍで滴下し、Ａｖｅ−ＮＰの懸濁液を得た。得られた懸濁液から溶媒を減圧下で留去した後、凍結乾燥して１．２ｇのＡｖｅ−ＮＰを得た。

Ｉｖｅ−ＮＰの調製では、まず、０．３９ｇのＰＬＧＡ（ＰＬＧＡ７５０２０、乳酸：グリコール酸＝７５：２５、平均分子量２０，０００、和光純薬工業社製）と、０．１ｇのＩｖｅとを、アセトン４０ｇ及びエタノール２０ｇの混合溶媒に溶解したポリマー溶液を調製した。得られたポリマー溶液を、４０℃、４００ｒｐｍで撹拌した０．５ｗ／ｗ％ポリビニルアルコール溶液１２０ｇ中にペリスタポンプを介して４ｒｐｍで滴下し、Ｉｖｅ−ＮＰの懸濁液を得た。得られた懸濁液から溶媒を減圧下で留去した後、凍結乾燥して１．０ｇのＩｖｅ−ＮＰを得た。

Ａｖｅ−ＮＰ及びＩｖｅ−ＮＰの粒度分布を次のように評価した。Ａｖｅ−ＮＰ及びＩｖｅ−ＮＰをそれぞれチューブに量りとり、各チューブにミリＱ水を加えて、１ｍｇ／ｍＬに調整した。各チューブをボルテックスミキサーで３０秒間撹拌後、５分間超音波処理を行った。ミリＱ水を対照とし、Ａｖｅ−ＮＰ及びＩｖｅ−ＮＰの粒度分布をＮＩＫＫＩＳＯＮａｎｏｔｒａｃＷａｖｅ−ＥＸ１５０（日機装社製）で測定した。

Ａｖｅ−ＮＰにおけるＡｖｅの含有率を次のように評価した。まず、標準溶液を調製した。１０ｍｇのＡｖｅを量りとり、１０ｍＬのアセトニトリルを加えて溶解し、標準原液（１ｍｇ／ｍＬ）とした。調製した標準原液をアセトニトリルで段階希釈し、標準溶液とした。

試料溶液の調製では、Ａｖｅ−ＮＰをミリＱ水で１ｍｇ／ｍＬに調製した。ボルテックスミキサーで３０秒間撹拌後、３０分間超音波処理し試料原液とした。試料原液１．０ｍＬにアセトニトリルを加え１０ｍＬとした。この液を２０℃、１０，０００×ｇで１５分間遠心分離した。遠心後の上澄み液を、ポアサイズ０．２μｍのフィルタを用いてろ過し、得られたろ液を試料溶液とした。試料溶液についてはｎ＝３で試験を実施した。標準溶液及び試料溶液を下記ＨＰＬＣの条件１にて高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分析し、標準溶液の検量線から試料溶液中のＡｖｅ−ＮＰにおけるＡｖｅの含有率を計算により求めた。

ＨＰＬＣの条件１
機器：Ｓｈｉｍａｄｚｕ１０Ａｓｅｒｉｅｓ（島津製作所社製）
検出：ＳｈｉｍａｄｚｕＥＬＳＤ−ＬＴ
ゲイン：８
ドリフト温度：４０℃
ガス圧力：３５０ｋＰａ（実測３５８ｋＰａ）
ネブライザーガス：Ｎ_２
カラム：ＳｈｏｄｅｘＡｓａｈｉｐａｋＮＨ２Ｐ−５０４Ｄ（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ）
カラム温度：４０℃
移動相：Ａ：水、Ｂ：アセトニトリル
Ｂ．濃度７５％→６９％（８分）６９→７５％（８分→１６分）
流量：１．０ｍＬ／分
カラム温度：４０℃
注入量：２０μＬ
測定時間：１６分

Ｉｖｅ−ＮＰについても、Ａｖｅ−ＮＰと同様に標準溶液及び試料溶液を調製し、ＨＰＬＣを用いてＩｖｅの含有率を評価した。

（結果）
Ａｖｅ−ＮＰの粒度分布を図１に示す。Ａｖｅ−ＮＰのＤ_５０及びスパン値は、それぞれ１７０ｎｍ及び０．７であった。Ａｖｅ−ＮＰにおけるＡｖｅの含有率は９．３％であった。図２は、Ｉｖｅ−ＮＰの粒度分布を示す。Ｉｖｅ−ＮＰのＤ_５０及びスパン値は、それぞれ１７２ｎｍ及び１．８であった。Ｉｖｅ−ＮＰにおけるＩｖｅの含有率は６．５％であった。

（実施例２：Ｉｖｅ−ＮＰの溶解性の検討）
Ｉｖｅ原体及び実施例１で調製したＩｖｅ−ＮＰの生理食塩水に対する溶解試験を行った。Ｉｖｅ換算で０．５ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ及び１０．０ｍｇ／ｍＬの各濃度になるようにＩｖｅ−ＮＰを生理食塩水１５ｍＬにそれぞれ添加した。また、Ｉｖｅ原体１５０ｍｇを生理食塩水１５ｍＬに添加した。これら試料について、Ｉｖｅの溶解試験を添加直後（０分後）、５分後及び１０分後に行った。

溶解試験では、ボルテックスミキサーで試料を３０秒間撹拌後、試料から採取した被検液１．５ｍＬをマイクロピペットで採取し、２０℃で２０，０００×ｇ、５分間遠心分離し、得られた上清をポアサイズ０．２μｍのフィルタを用いてろ過した。得られたろ液の１００μＬを、アセトニトリル９００μＬを用いて１０倍に希釈した。さらに、得られたアセトニトリル希釈液１ｍｌを室温で２０，０００×ｇ、１５分間遠心分離し、得られた上清をポアサイズ０．２μｍのフィルタを用いてろ過し、下記ＨＰＬＣの条件２にてＨＰＬＣで測定した。別に１０ｍｇのＩｖｅをアセトニトリルに加え１０ｍＬとし、標準原液とした。標準原液をアセトニトリルで希釈し標準溶液とし検量線を作成した。

ＨＰＬＣの条件２
カラム：ＧＬＳｃｉｅｎｃｅｓＩｎｅｒｔｓｕｓｔａｉｎＣ１８５μｍ２５０×４．６ｍｍＩＤ．
移動相：メタノール：ミリＱ水＝９０：１０ｖ／ｖ
流量：１ｍＬ／分
波長：ＵＶ２５４ｎｍ
カラムオーブン：３０℃
注入量：５μＬ

（結果）
ＨＰＬＣの測定結果に基づく生理食塩水中のＩｖｅの濃度の経時変化を図３に示す。１０ｍｇ／ｍＬとなるように生理食塩水に添加したＩｖｅ原体は生理食塩水に対してほとんど溶解しなかった（０．２〜０．４μｇ／ｍＬ）。Ｉｖｅ原体では、添加したイベルメクチンの０．００３〜０．００４重量％しか生理食塩水中に溶解しなかった。一方、ナノ粒子化によってＩｖｅの溶解性が著しく増加することが示された。

詳細には、Ｉｖｅの濃度で０．５ｍｇ／ｍＬとなるようにＩｖｅ−ＮＰを生理食塩水に添加したところ、０分後、５分後及び１０分後の生理食塩水中のＩｖｅの濃度は、それぞれ２．７μｇ／ｍＬ、１．７μｇ／ｍＬ及び１．８μｇ／ｍＬであった。このため、Ｉｖｅ−ＮＰに含有されていたイベルメクチンの０．３４〜０．５４重量％が該生理食塩水中に溶解していた。

Ｉｖｅの濃度で２ｍｇ／ｍＬとなるようにＩｖｅ−ＮＰを生理食塩水に添加した場合は、０分後、５分後及び１０分後の生理食塩水中のＩｖｅの濃度は、それぞれ８．５μｇ／ｍＬ、１０．３μｇ／ｍＬ及び１０．２μｇ／ｍＬであった。このため、Ｉｖｅ−ＮＰに含有されていたイベルメクチンの０．４３〜０．５２重量％が該生理食塩水中に溶解していた。

Ｉｖｅの濃度で１０ｍｇ／ｍＬとなるようにＩｖｅ−ＮＰを生理食塩水に添加した場合は、０分後、５分後及び１０分後の生理食塩水中のＩｖｅの濃度は、それぞれ６８．１μｇ／ｍＬ、７４．６μｇ／ｍＬ及び８１．０μｇ／ｍＬであった。このため、Ｉｖｅ−ＮＰに含有されていたイベルメクチンの０．６８〜０．８１重量％が該生理食塩水中に溶解していた。

（実施例３：Ａｖｅ−ＮＰ及びＩｖｅ−ＮＰの溶出試験）
上記実施例１で調製したＡｖｅ−ＮＰ及びＩｖｅ−ＮＰについて、腸液内でのＡｖｅ及びＩｖｅの溶出率を次のように評価した。まず、絶食時の腸液を再現するために人工腸液を調製した。２．１８ｇの人工腸液調製用試薬（セレステ社製）、６．１９ｇのＮａＣｌ、３．４４ｇのＮａＨ２ＰＯ４、及び０．４２ｇのＮａＯＨを、精製水１０００ｍＬに溶解させた。続いて、１ＮＮａＯＨ又は１ＮＨＣｌ水溶液を用いて溶液のｐＨを６．５に調整し、該溶液を人工腸液とした。

Ａｖｅ原体、Ｉｖｅ原体、実施例１で調製したＡｖｅ−ＮＰ又はＩｖｅ−ＮＰ１５ｍｇを人工腸液３０ｍＬに添加し、３０秒間ボルテックスミキサーで撹拌した。０時間の試料として１ｍＬを採取した後、３７℃で振盪し、３、６、２４時間後にもそれぞれ１ｍＬを採取した。採取した試料を２０℃で１５分間、２０，０００ｒｐｍで遠心し、ポアサイズ０．２μｍのフィルタでろ過した。ろ液１００μＬにアセトニトリル９００μＬを加え、３０秒間撹拌した。試料をさらに２０℃で１５分間、２０，０００ｒｐｍで遠心し、ポアサイズ０．２μｍのフィルタでろ過した。得られた試料に含まれるＡｖｅ等の量を上述の実施例１と同様にＨＰＬＣ分析で定量した。

（結果）
図４は、Ａｖｅ−ＮＰからのＡｖｅの溶出率及び試料に含まれるＡｖｅ原体に対する溶解していたＡｖｅ原体の割合を示す。図５は、Ｉｖｅ−ＮＰの溶出率及び試料に含まれるＩｖｅ原体に対する試料中に溶解していたＩｖｅ原体の割合（原体の溶解率）を示す。人工腸液に添加して２４時間後、溶解していたＡｖｅ原体の割合（２．２％）と比べて、Ａｖｅ−ＮＰの試料には、約１３倍の濃度でＡｖｅが含まれていた（Ａｖｅ−ＰＬ−ＮＰ：２９．６％）。また、Ｉｖｅ原体は人工腸液にほとんど溶解しなかったのに対し（０．３６％）、Ｉｖｅ−ＮＰからはＩｖｅがほぼ１００％溶出し、試料中に溶解していた。

（実施例４：Ａｖｅ−ＮＰ及びＩｖｅ−ＮＰの生体での吸収性試験）
上記実施例１で調製したＡｖｅ−ＮＰ及びＩｖｅ−ＮＰについて、マウスにおける抗生物質の吸収性を評価した。マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、８週齢、雄、日本チャールズ・リバー社製）を取得し、７日間馴化させた。Ａｖｅ等の投与量として２μｇ／ｇ（体重）になるように、Ａｖｅ原体、Ａｖｅ−ＮＰ、Ｉｖｅ原体又はＩｖｅ−ＮＰを経口投与した。なお、Ａｖｅ原体及びＩｖｅ原体は、それぞれ０．５％カルボキシメチルセルロースに分散させて投与した。一方、Ａｖｅ−ＮＰ及びＩｖｅ−ＮＰはＭｉｌｌｉＱ水に分散させて投与した。所定時間経過ごとに眼窩静脈より血液を採取した（ｎ＝３）。採取した血液を遠心分離し、上清の血漿を得た。

得られた血漿１００μＬにアセトニトリルを２００μＬ加え、ボルテックスミキサーで撹拌し、さらに超音波処理を行い、遠心分離後、上清を得た。上清をポアサイズ０．２μｍのフィルタにかけ、液体クロマトグラフ質量分析（ＬＣ／ＭＳ）測定用試料とした。Ａｖｅ等の血中濃度を、下記ＬＣ／ＭＳの測定条件でＬＣ／ＭＳを用いて測定した。

ＬＣ／ＭＳの測定条件
装置：１２６０Ｉｎｆｉｎｉｔｙ，６４３０ＴｒｉｐｌｅＱｕａｄＬＣ／ＭＳ，ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
分析カラム：ＴＳＫ−ＧＥＬＯＤＳ１００Ｖ，３μｍ，２×５０ｍｍ
カラムオーブン温度：４０℃
移動相：２０ｍＭギ酸アンモニウム：アセトニトリル＝３０：７０
イオン源：ＥＳＩ
極性：Ｐｏｓｉｔｉｖｅ
ＮｅｂｕｌｉｚｅｒＰｒｅｓｓｕｒｅ：３０ｐｓｉ
ＤｒｙｉｎｇＧａｓの流速：５Ｌ／分
ＤｒｙｉｎｇＧａｓの温度：２５０℃
ＣａｐｉｌｌａｒｙＶｏｌｔａｇｅ：５，０００Ｖ

ＬＣ／ＭＳにおける測定対象物質のトランジション等を表１に示す。

（結果）
図６（Ａ）及び（Ｂ）は、それぞれＡｖｅ原体及びＡｖｅ−ＮＰを経口投与したマウスにおけるＡｖｅの血中濃度を示す。Ａｖｅ原体投与群においては、投与１時間後にＡｖｅが検出され、２４時間後にはＡｖｅが消失していた。一方、Ａｖｅ−ＮＰ投与群においては２時間後からＡｖｅが検出され、２４時間後においてもＡｖｅは残存していた。Ａｖｅ原体及びＡｖｅ−ＮＰのＣ_ｍａｘは、７９．４ｎｇ／ｍＬ及び２２６．９ｎｇ／ｍＬであった。Ａｖｅ原体及びＡｖｅ−ＮＰのＴ_ｍａｘは、両方ともに２時間であった。

図６（Ｃ）に示すように、Ａｖｅ原体及びＡｖｅ−ＮＰのＡＵＣ（ＡｒｅａＵｎｄｅｒＣｕｒｖｅ）を比較すると、経口投与の場合、Ａｖｅ−ＮＰでは、血中への吸収量がＡｖｅ原体よりも約２．５倍上昇していた。以上の結果から、Ａｖｅ原体をＰＬＧＡナノ粒子化することによって、溶解性が向上し、徐放性の機能が付与されることが示唆された。

図７（Ａ）及び（Ｂ）は、それぞれＩｖｅ原体及びＩｖｅ−ＮＰを経口投与したマウスにおけるＩｖｅの血中濃度を示す。投与１時間後からＩｖｅがＩｖｅ原体投与群及びＩｖｅ−ＮＰ投与群の両方において検出された。Ｉｖｅ原体及びＩｖｅ−ＮＰのＣ_ｍａｘは、３４０．５ｎｇ／ｍＬ及び３８０．７ｎｇ／ｍＬであった。Ｉｖｅ原体及びＩｖｅ−ＮＰのＴ_ｍａｘは、それぞれ６時間及び２時間であった。このことから、Ｉｖｅ原体をＰＬＧＡナノ粒子化することによって、Ｉｖｅの血中濃度を、Ｉｖｅ原体と比較して、より高い血中濃度に、より早く到達させることが示された。ＡＵＣに関しては、図７（Ｃ）に示すように、Ｉｖｅ原体とＩｖｅ−ＮＰとの間に大きな差は見られなかった。

本発明は、本発明の広義の精神と範囲を逸脱することなく、様々な実施の形態及び変形が可能とされるものである。また、上述した実施の形態は、本発明を説明するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。すなわち、本発明の範囲は、実施の形態ではなく、特許請求の範囲によって示される。そして、特許請求の範囲内及びそれと同等の発明の意義の範囲内で施される様々な変形が、本発明の範囲内とみなされる。

本発明は、医薬、特には駆虫薬に好適である。

Claims

アベルメクチン又はイベルメクチンを含有する凍結乾燥物を含み、
前記凍結乾燥物は、
乳酸・グリコール酸共重合体を含む、
医薬組成物。
前記凍結乾燥物はナノ粒子であって、
該ナノ粒子のＤ_５０の値が、
２００ｎｍ以下である、
請求項１に記載の医薬組成物。
生理食塩水をさらに含み、
前記凍結乾燥物は、
イベルメクチンを含有し、
前記生理食塩水に溶解している前記イベルメクチンの濃度が、１．０μｇ／ｍＬ以上である、
請求項１又は２に記載の医薬組成物。