JP2019031505A - 超高純度なテトラヒドロカンナビノール−１１−酸 - Google Patents

Abstract

【課題】アジュレム酸を有する組成物の提供。【解決手段】少なくとも９８％（ｗ／ｗ）の（６ａＲ，１０ａＲ）−３−（１'，１'−ジメチルヘプチル）−Δ８−テトラヒドロ−カンナビノール−９−カルボン酸（アジュレム酸）、またはその薬学的に許容可能な塩を有し、有意な痛覚消失が、１０ｍｇ／ｋｇのカンナビノイドの経口投与後のマウスのホットプレート試験において観測されない、医薬組成物。【選択図】なし

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は米国仮特許出願第６１／７６３，６３０号（２０１３年２月１２日出願）および同第６１／８３７，７４３号（２０１３年６月２１日出願）の優先権を主張する（それらのそれぞれの開示は参照によりそれらの全体が本明細書中に組み込まれる）。

本発明は、医薬品化学の分野におけるものであり、超高純度なテトラヒドロカンナビノール−１１−酸化合物、その医薬組成物および合成に関連する。本発明はまた、本発明の化合物および医薬組成物を、様々な状態（例えば、炎症、痛み、および線維症など）を処置および／または防止するために使用する方法に関連する。

テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）はマリファナの主要な精神活性成分である。気分を変化させる影響に加えて、ＴＨＣは、鎮痛性、抗炎症性および制吐性の性質を含めて、他の様々な活性（そのいくつかが治療的価値を有する場合がある）を示すことが報告されている。ＴＨＣの潜在的な治療的価値は、精神活性影響を最小限に抑え、一方で、潜在的に医療に有益である活性を保持する関連化合物についての探索を引き起こしている。

例えば、（６ａＲ、１０ａＲ）−３−（１'，１'−ジメチルヘプチル）−Δ８−テトラヒドロ−カンナビノール−９−カルボン酸（ＩＵＰＡＣ名称）（これはまた、アジュレム酸（ａｊｕｌｅｍｉｃ ａｃｉｄ；ＡＪＡ）として知られている）が、痛みおよび炎症を、単独で、または他の薬剤との組合せでのどちらでも処置するための候補物である。

痛みおよび炎症におけるカンナビノイド研究の現在の一連の知識からは、カンナビノイド受容体のＣＢ１およびＣＢ２が、侵害受容、感作、痛みシグナル伝達および痛み処理に関連づけられるシナプス後シグナル伝達機構および免疫機構の開始および維持において重要な役割を果たしていることが示唆される。以前には、アジュレム酸の純粋でない調製物がＣＢ１受容体およびＣＢ２受容体の両方に対して親和性を有し、ＣＢ１受容体に対する親和性の方が大きいことが示されている（１４）。本発明は初めて、ＣＢ１受容体よりもＣＢ２受容体に対して大きい親和性を示す高度に精製された形態のアジュレム酸を提供する。

この超高純度なアジュレム酸は、線維性疾患、例えば、強皮症、全身性硬化症、強皮症様障害、皮膚硬化を伴わない強皮症（ｓｉｎｅ ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ）、肝硬変、間質性肺線維症、特発性肺線維症、デュピュイトラン拘縮、ケロイド、慢性腎臓疾患、慢性移植片拒絶、臓器（例えば、肝臓、食道、心臓、肺、腸など）の線維症、および他の瘢痕／創傷治癒異常、術後癒着、ならびに反応性線維症など、同様にまた、炎症性疾患、例えば、狼瘡、多発性硬化症、関節リウマチ、皮膚筋炎、マルファン症候群、乾癬、１型糖尿病、糖尿病、ガン、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫性甲状腺障害、潰瘍性大腸炎、クローン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、ＨＩＶ感染、発作および虚血（ＣＢ２受容体の活性化が疾患の病態生理学において役割を果たす場合）などを処置するために使用することができる。

本発明は、超高純度なアジュレム酸を有する組成物であって、前記アジュレム酸はＣＢ２受容体に対する親和性がＣＢ１受容体に対するその親和性よりも大きい組成物を提供する。いくつかの実施形態において、超高純度なアジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対するその親和性よりも約２倍から約１００倍にまで及ぶ大きい親和性、約５倍から５０倍にまで及ぶ大きい親和性、約１５倍から５０倍にまで及ぶ大きい親和性、約１０倍から約４０倍にまで及ぶ大きい親和性、または約２０倍から約４０倍にまで及ぶ大きい親和性をＣＢ２受容体に対して有する。本発明は、アジュレム酸を有する組成物であって、前記アジュレム酸はＣＢ１受容体についてのＫ_ｉがＣＢ２受容体についてのそのＫ_ｉよりも大きい組成物を提供する。いくつかの実施形態において、アジュレム酸は、ＣＢ２受容体についてのそのＫ_ｉよりも約２倍から約１００倍にまで及ぶ大きいＫ_ｉ、約５倍から５０倍にまで及ぶ大きいＫ_ｉ、約１５倍から５０倍にまで及ぶ大きいＫ_ｉ、約１０倍から約４０倍にまで及ぶ大きいＫ_ｉ、または約２０倍から約４０倍にまで及ぶ大きいＫ_ｉをＣＢ１受容体に対して有する。本発明のこの組成物におけるアジュレム酸は、約９７％超の純度、約９８％超の純度、または約９９％超の純度を有する場合がある。

本発明はまた、アジュレム酸を有する組成物であって、前記アジュレム酸が、約９７％超の純度、約９８％超の純度、または約９９％超の純度を有する組成物を提供する。

本発明は、アジュレム酸を有する組成物であって、前記アジュレム酸が、約１％（ｗ／ｗ）未満、約０．５％（ｗ／ｗ）未満、約０．３％（ｗ／ｗ）未満、約０．２％（ｗ／ｗ）未満、約０．１％（ｗ／ｗ）未満、または約０．０５％（ｗ／ｗ）未満の１１−ヒドロキシ−（６ａＲ，１０ａＲ）−３−（１'，１'−ジメチルヘプチル）−Δ８−テトラヒドロカンナビノール（ＨＵ−２１０）または他のＣＢ１高活性化合物を有する組成物を提供する。

本発明のこの組成物におけるアジュレム酸は、ＣＢ２受容体に対する親和性がＣＢ１受容体に対するその親和性よりも大きい場合がある。いくつかの実施形態において、アジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対するその親和性よりも約５倍から５０倍にまで及ぶ大きい親和性、約１０倍から５０倍にまで及ぶ大きい親和性、約２０倍から約４０倍にまで及ぶ大きい親和性をＣＢ２受容体に対して有する。

本発明はさらに、線維性疾患を有する対象を処置する方法であって、治療効果的な量のアジュレム酸を前記対象に投与する工程を有し、前記アジュレム酸はＣＢ２受容体に対する親和性がＣＢ１受容体に対するその親和性よりも大きい方法を提供する。いくつかの実施形態において、アジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対するその親和性よりも約２倍から約１００倍にまで及ぶ大きい親和性、約５倍から５０倍にまで及ぶ大きい親和性、約１５倍から５０倍にまで及ぶ大きい親和性、約１０倍から約４０倍にまで及ぶ大きい親和性、または約２０倍から約４０倍にまで及ぶ大きい親和性をＣＢ２受容体に対して有する。線維性疾患は、皮膚線維症、肺線維症、肝線維症、腎臓線維症、心臓線維症、またはいずれかの他の臓器線維症である場合がある。線維性疾患は、強皮症、全身性硬化症、強皮症様障害、皮膚硬化を伴わない強皮症、肝硬変、間質性肺線維症、特発性肺線維症、デュピュイトラン拘縮、ケロイド、嚢胞性線維症、慢性腎臓疾患、慢性移植片拒絶、または他の瘢痕／創傷治癒異常、術後癒着、および反応性線維症である場合がある。

上記アジュレム酸は、経口投与、静脈内投与、局所投与、眼投与、間質投与によって、吸入によって、またはインプラント若しくはパッチにより投与される場合がある。

本発明は、痛みを対象において軽減させる方法であって、治療効果的な量の超高純度なアジュレム酸を投与する工程を有する方法を提供する。当該アジュレム酸は、ＣＢ２受容体に対する親和性がＣＢ１受容体に対する親和性よりも大きい場合がある。いくつかの実施形態において、アジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対するその親和性よりも約２倍から約１００倍にまで及ぶ大きい親和性、約５倍から５０倍にまで及ぶ大きい親和性、約１５倍から５０倍にまで及ぶ大きい親和性、約１０倍から約４０倍にまで及ぶ大きい親和性、または約２０倍から約４０倍にまで及ぶ大きい親和性をＣＢ２受容体に対して有する。痛みの軽減が、少なくとも１つの疼痛尺度に従って測定される場合がある。例えば、痛みが、１１ポイント疼痛尺度で少なくとも約１ポイント、少なくとも約２ポイント、少なくとも約３ポイント、少なくとも約４ポイント、少なくとも約５ポイント、少なくとも約６ポイント、少なくとも約７ポイント、または少なくとも約８ポイント軽減される場合がある。

本発明はまた、炎症を対象において軽減させる方法であって、治療効果的な量の超高純度なアジュレム酸を投与する工程を有する方法を提供する。当該アジュレム酸は、ＣＢ２受容体に対する親和性がＣＢ１受容体に対する親和性よりも大きい場合がある。いくつかの実施形態において、アジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対するその親和性よりも約２倍から約１００倍にまで及ぶ大きい親和性、約５倍から５０倍にまで及ぶ大きい親和性、約１５倍から５０倍にまで及ぶ大きい親和性、約１０倍から約４０倍にまで及ぶ大きい親和性、または約２０倍から約４０倍にまで及ぶ大きい親和性をＣＢ２受容体に対して有する。炎症の軽減が、少なくとも１つの炎症アッセイによって測定される場合がある。

図１は、アジュレム酸（（６ａＲ，１０ａＲ）−３−（１'，１'ジメチルヘプチル）−Δ８−テトラヒドロカンナビノール−９−カルボン酸）および自然界に存在するペンチル側鎖アナログの（６ａＲ，１０ａＲ）−Δ８−テトラヒドロカンナビノール−９−カルボン酸の構造を示すものである。 図２は、超高純度アジュレム酸の合成のためのいくつかの重要な工程を示すものである。 図３は、超高純度なアジュレム酸（ＡＪＡ）の合成のためのスキームを示すものである。 図４は、米国特許第５，３３８，７５３号明細書に記載されるようなＡＪＡの回分処理物、および５−（１'，１'−ジメチルヘプチル）−レゾルシノール（ＤＭＨＲ）を用いて製造される超高純度なＡＪＡ（ロット：ＪＢＡ１００１Ａ０４）の性質の比較を示すものである。 図５Ａおよび図５Ｂは、超高純度な５−（１'，１'−ジメチルヘプチル）−レゾルシノール（ＤＭＨＲ）を用いて製造されるＡＪＡのＬＣ−ＭＳ分析を示すものである。 図６は、合成された超高純度なＡＪＡのＨＰＬＣ分析を示すものである。 図７は、合成された超高純度なＡＪＡのＨＰＬＣ分析の拡大画像を示すものである。 図８は、９９．８％の純度を示す超高純度なＡＪＡの分析を示すものである。 図９は、選択されたカンナビノイドについての親和性定数を示すものである。超高純度なＡＪＡは、大きな違いをＣＢ１受容体についてのＫ_ｉとＣＢ２受容体についてのＫ_ｉとの間において示す。 図１０は、Ｂｕｒｓｔｅｉｎ，Ｓ．Ｈ．他（１９９２）、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｎｏｎｐｓｙｃｈｏｔｒｏｐｉｃ ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄｓ ｗｉｔｈ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ，ａｎａｌｇｅｓｉｃ，ａｎｄ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｎｔｉａｄｈｅｓｉｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ、Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ３５（１７）、３１３５〜３１４１から引用されるカタレプシー影響および抗侵害受容影響を示すものである。 図１１は、Ｄｙｓｏｎ他［３］に記載されるようなラットでの全身投与の後におけるカンナビノイドの血漿中レベルおよび脳内レベルを示すものである。 図１２は、ＣＢ２およびＣＢ１についての選択されたカンナビノイドの代表的な結合曲線を示すものである。 図１３は、ＨＥＫ−２９３細胞で発現されるｈＣＢ_１受容体およびｈＣＢ_２受容体（上段パネルおよび下段パネル、それぞれ）における［_３５Ｓ］ＧＴＰγＳターンオーバーに対するＣＰ５５９４０（丸）およびＪＢＴ−１０１（超高純度ＡＪＡ；四角）の影響を明らかにするものである。それぞれの濃度−影響曲線は４回の反復の平均（±ＳＥＭ）を表す。使用された条件はＷｉｌｅｙ他（２０）から適合化された。 図１４は、ＪＢＴ−１０１が、３０ｍｇ／ｋｇ以上の大きい用量でのみ、リング試験において活性であることを示すものである。すべての薬物がオイルでの経口投与によって与えられた。条件は、Ｗｉｌｅｙ ＪＬおよびＭａｒｔｉｎ ＢＲ（２１）によって報告される通りであった。この影響は、ＣＢ１媒介であると見なされる。 図１５は、ＪＢＴ−１０１が、３０ｍｇ／ｋｇ以上の大きい用量でのみ、マウスでのホットプレートアッセイにおいて活性であることを示すものである。比較によって、ＨＵ−２３９（すなわち、米国特許第５，３３８，７５３号明細書で報告されるＡＪＡ）は、経口投与によって与えられる少ない用量（０．５ｍｇ／ｋｇ未満）で活性であった。ＭＰＥ：最大可能影響。実験条件は、Ｂｕｒｓｔｅｉｎ他（２２）において報告される通りであった。 図１６は、ＪＢＴ−１０１がマウスでの低体温アッセイにおいて不活性であることを示すものである。すべての薬物がオイルでの経口投与によって与えられた。実験条件は、Ｗｉｌｅｙ ＪＬおよびＭａｒｔｉｎ ＢＲ（２１）によって報告される通りであった。この影響は、ＣＢ１媒介であると見なされる。 図１７は、ＨＬ−６０細胞でのＰＧＪの刺激における超高純度ＪＢＴ−１０１のＣＢ２特異性を示すものである。ＣＢ２アンタゴニストのＳＲ１４４５２８は、ＨＬ６０免疫系細胞における超高純度ＡＪＡにより誘導されるＰＧＪ合成を低い濃度で低下させた（四角）。ＣＢ１アンタゴニストのＳＲ１４１７１６は、はるかにより小さい影響を有する（三角）。ＤＭＳＯコントロール（白丸）。細胞の処置を、２０，０００細胞／５００μｌ ＲＰＭＩ／ＦＣＳ培地／ウエルにより４８ウエルプレートにおいて行った。細胞を３７℃および５％ＣＯ_２において２０時間インキュベーションした。培地を５００μｌの血清非含有ＲＰＭＩに変え、ＴＮＦα（１０ｎＭ）を加えた。ＳＲ１４４５２８［１μＭ］またはＳＲ１４１７１６［１０μＭ］により２時間処置し、１００μｌをＥＬＩＳＡアッセイのために取り出した。Ｎ＝４。 図１８は、ＪＢＴ−１０１が、強皮症のブレオマイシン・マウス・モデルにおける皮膚線維症を阻止することにおいて、すなわち、ＣＢ２依存的応答において効果的であることを示すものである。マウスをブレオマイシンの局所注射により毎日処置し、示された用量のＪＢＴ−１０１（超高純度ＡＪＡ）を経口投与した。１ｍｇ／ｋｇの用量（データは示されず）を含めて、すべての用量が、皮膚の肥厚を阻止することにおいて等しく効果的であった。 図１９は、ＪＢＴ−１０１（超高純度ＡＪＡ）が、ＣＢ１活性が認められる用量よりも十分に低い用量で、アラキドン酸誘導の足浮腫のモデルにおける足の体積を阻止することにおいて、すなわち、ＣＢ２依存的応答において効果的であることを示すものである。マウスには、示された用量のＪＢＴ−１０１（超高純度ＡＪＡ）を経口投与し、右足におけるアラキドン酸の足底内注射を９０分後に続けた。右足の体積をアラキドン酸注射後４５分で測定した。

ＴＨＣ誘導体
テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）はマリファナの主要な精神活性成分である。気分を変化させる影響に加えて、ＴＨＣは、鎮痛性、抗炎症性および制吐性の性質を含めて、他の様々な活性（そのいくつかが治療的価値を有する場合がある）を示すことが報告されている。ＴＨＣの潜在的な治療的価値は、精神活性影響を最小限に抑え、一方で、潜在的に医療に有益である活性を保持する関連化合物についての探索を引き起こしている。

例えば、（６ａＲ、１０ａＲ）−３−（１'，１'−ジメチルヘプチル）−Δ８−テトラヒドロ−カンナビノール−９−カルボン酸（これはまた、アジュレム酸として知られている）が、痛みおよび炎症を、単独で、または他の薬剤との組合せでのどちらでも処置するために使用される場合がある。

痛みおよび炎症におけるカンナビノイド研究の現在の一連の知識からは、ＣＢ１受容体およびＣＢ２受容体が、侵害受容、感作、痛みシグナル伝達、および痛み処理に関連づけられるシナプス後シグナル伝達機構および免疫機構の開始および維持において重要な役割を果たしていることが示唆される［Ｃ．ＶｏｓｃｏｐｏｕｌｏｓおよびＭ．Ｌｅｍａ、Ｂｒ．Ｊ．Ａｎａｅｓｔｈ．（２０１０）１０５（増刊１）：ｉ６９〜ｉ８５］。以前には、アジュレム酸のより初期の調製物がＣＢ１受容体およびＣＢ２受容体の両方に対して親和性を有し、ＣＢ１受容体に対する親和性の方が大きいことが示されている。本発明は初めて、ＣＢ１受容体よりもＣＢ２受容体に対して大きい親和性を示す精製された形態のアジュレム酸を提供する。この精製（された）形態のアジュレム酸はまた、超高純度（な）アジュレム酸として示される。

様々な実施形態において、上記アジュレム酸の純度の程度は、約９５％（ｗ／ｗ）超、約９６％（ｗ／ｗ）超、約９７％（ｗ／ｗ）超、約９８％（ｗ／ｗ）超、約９９％ｖ超、約９９．１％（ｗ／ｗ）超、約９９．２％（ｗ／ｗ）超、約９９．３％（ｗ／ｗ）超、約９９．４％（ｗ／ｗ）超、約９９．５％（ｗ／ｗ）超、または約９９．９％（ｗ／ｗ）超である。純度の程度は、下記においてさらに記載されるような様々な異なる方法によって評価される場合がある。

精製された形態のアジュレム酸の、ＣＢ２受容体に対する親和性は、ＣＢ１受容体に対する親和性よりも約５倍大きいから約１０倍大きいにまで及ぶことができ、しかし、約５Ｘ〜５０Ｘ、７Ｘ〜１０Ｘ、８Ｘ〜１５Ｘ、１０Ｘ〜２０Ｘ、１５Ｘ〜３０Ｘ、２５Ｘ〜５０Ｘ、４０〜７５Ｘ、および５０Ｘ〜１００Ｘの親和性範囲もまた、本発明によって包含される（範囲は、ＣＢ１受容体に対するＣＢ２受容体についてのアジュレム酸の親和性の比率を表す）。

１つの実施形態において、本発明の化合物は、式Ｉに示される構造を有する。本発明の化合物は、約９７％超の純度、約９８％超の純度、約９９％超の純度、約９９．１％超の純度、約９９．２％超の純度、約９９．３％超の純度、約９９．４％超の純度、約９９．５％超の純度、または約９９．９％超の純度を有する場合がある。本発明の化合物は、０．１％（ｗ／ｗ）未満の１１−ヒドロキシ−（６ａＲ，１０ａＲ）−３−（１'，１'−ジメチルヘプチル）−Δ８−テトラヒドロカンナビノール（ＨＵ−２１０）または他のＣＢ１高活性化合物を含有する場合がある。本発明の化合物の精製された形態はまた、超高純度な形態として示される場合がある。本発明によって同様に包含されるものが、下記の式Ｉにおける化合物の医薬的に許容される塩、エステル、または溶媒和物である。

式中、Ｒ_１は、水素、ＣＯＣＨ_３またはＣＯＣＨ_２ＣＨ_３であり、Ｒ_２は、末端芳香族環を必要な場合には有することがある分岐したＣ５〜Ｃ１２アルキル基、または必要な場合には、末端芳香族環を有することがある分岐したＯＣＨＣＨ_３（ＣＨ_２）_ｍアルキル基（式中、ｍは０〜７である）であり、Ｒ_３は、水素、Ｃ１〜８アルキル基またはＣ１〜８アルカノール基であり、かつ、Ｙはゼロ（すなわち、非存在）であるか、あるいは、ＮＨまたは酸素の架橋基であるかのどちらかである（ただし、Ｙが酸素であり、かつ、Ｒ_２が、分岐したＣ５〜Ｃ１２アルキルである場合、Ｒ_３はＣＨＣＨ_３ではない）。

超高純度なアジュレム酸の調製
本発明は、精製された形態のアジュレム酸を調製するプロセスを提供する。本発明のプロセスは下記の工程を含む場合がある：（ａ）パラ−メンタ−２，８−ジエン１−オール（ＰＭＤ）および５−（１，１−ジメチルヘプチル）レゾルシノール（ＤＭＨＲ）を反応させて、（６ａＲ，１０ａＲ）−３−（１'，１'−ジメチルヘプチル）−Δ８−テトラヒドロカンナビノール（化合物８）を形成する工程；（ｂ）化合物８をアセチル化して、（６ａＲ，１０ａＲ）−３−（１'，１'−ジメチルヘプチル）−Δ８−テトラヒドロカンナビノールアセタート（化合物９）を形成する工程；（ｃ）化合物９を酸化して、１１−オキソ−（６ａＲ，１０ａＲ）−３−（１'，１'−ジメチルヘプチル）−Δ８−テトラヒドロカンナビノールアセタート（化合物１０）を形成する工程；（ｄ）化合物１０を、過酸化水素を使用して酸化して、（６ａＲ，１０ａＲ）−３−（１'，１'−ジメチルヘプチル）−Δ８−テトラヒドロカンナビノール−９−カルボン酸アセタート（化合物１１）を形成する工程（ただし、過酸化水素対化合物９のモル比は約２：１から約７：１にまで及ぶ）；（ｅ）化合物１１を加水分解して、粗アジュレム酸を形成する工程；（ｆ）粗アジュレム酸をアセチル化して、化合物１１を形成する工程；および（ｇ）化合物１１を加水分解して、精製された形態のアジュレム酸を形成する工程。

工程（ｄ）において、過酸化水素対化合物９のモル比はまた、約２：１から約６：１にまで、約２：１から約５：１にまで、約２：１から約４：１にまで、約２：１、約２．５：１、約３：１、約３．５：１、または約４：１である場合がある。工程（ａ）において、ＰＭＤ対ＤＭＨＲのモル比は、約１：１から約３：１にまで、約１：１から約２：１にまで、約１：１から約１．１：１にまで、約１．１：１、または約１．２：１である場合がある。工程（ａ）が、約５０℃〜約１２０℃で、約６０℃〜約１１０℃で、約７０℃〜約１００℃で、約７５℃〜約９０℃で、約７０℃〜約８０℃で、約７０℃で、約７５℃で、または約８０℃で行われる場合がある。精製されたアジュレム酸は、約９５％（ｗ／ｗ）超の純度、約９６％（ｗ／ｗ）超の純度、約９７％（ｗ／ｗ）超の純度、約９８％（ｗ／ｗ）超の純度、約９９％ｖ超の純度、約９９．１％（ｗ／ｗ）超の純度、約９９．２％（ｗ／ｗ）超の純度、約９９．３％（ｗ／ｗ）超の純度、約９９．４％（ｗ／ｗ）超の純度、約９９．５％（ｗ／ｗ）超の純度、または約９９．９％（ｗ／ｗ）超の純度を有する場合がある。

ある特定の実施形態において、本発明の化合物は１若しくはそれ以上のキラル中心を含む。用語「純度」はまた、キラル純度を包含することができる。アジュレム酸の立体異性体の純度は、当該立体異性体の化学的純度および／またはキラル純度を示す。例えば、アジュレム酸の純度はアジュレム酸の化学的純度およびキラル純度の両方を含むことができる。アジュレム酸の立体異性体のキラル純度は、約９８．５％（ｗ／ｗ）超、約９５％（ｗ／ｗ）超、約９６％（ｗ／ｗ）超、約９７％（ｗ／ｗ）超、約９８％（ｗ／ｗ）超、約９９％ｖ超、約９９．１％（ｗ／ｗ）超、約９９．２％（ｗ／ｗ）超、約９９．３％（ｗ／ｗ）超、約９９．４％（ｗ／ｗ）超、約９９．５％（ｗ／ｗ）超、または約９９．９％（ｗ／ｗ）超である場合がある。

本発明の化合物の純度は、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）または高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によってアッセイされる場合がある。アジュレム酸の純度をアッセイするための、また、不純物の存在を求めるための他の技術には、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、質量分析法（ＭＳ）、ＧＣ−ＭＳ、赤外分光法（ＩＲ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、および示差走査熱量測定法が含まれるが、これらに限定されない。キラル純度は、キラルＧＣ、または旋光の測定によって評価することができる。

精製された形態のアジュレム酸は貯蔵後において安定である場合がある。例えば、約５℃での少なくとも３ヶ月間の貯蔵の後では、本発明の組成物は、約９８．５％（ｗ／ｗ）超、約９９％（ｗ／ｗ）超、約９９．５％（ｗ／ｗ）超、または約９９．９％（ｗ／ｗ）超のアジュレム酸を含有する場合がある。約２５℃および６０％の相対湿度での少なくとも３ヶ月間の貯蔵の後では、本発明の組成物は、約９８．５％（ｗ／ｗ）超、約９９％（ｗ／ｗ）超、約９９．５％（ｗ／ｗ）超、または約９９．９％（ｗ／ｗ）超のアジュレム酸を含有することができる。

上記プロセスのいくつかの実施形態が下記において記載される。これらの実施形態は例示目的のためだけに示され、本発明を限定していない。

精製
Ａ．アジュレム酸の合成に適用されるアリル酸化の最適化
メチルを１１位に含む化合物９のアリル酸化を、二酸化セレン、その後、過酸化水素を用いて行うことにより、不完全に酸化された中間体、例えば、ＣＢ１高活性なＨＵ−２１０を与える１１位でのアルコールなどを生じさせることなく完了に至る、アジュレム酸を合成する経路が提供される。化合物９に対して８当量の過酸化水素を使用する初期の実験室実験では、十分な転換が４時間〜６時間で達成されることが示された^４。図２を参照のこと。

酸化反応は、とりわけ大規模で行われるときには潜在的に危険であるので、安全性評価が行われる。過酸化水素の当量数を、２当量、２．５当量、３当量、および４当量から変化させた^５。これらの低減された当量の過酸化水素による熱的開始温度が、８当量を用いて認められる５５℃の開始温度から変化しなかった。しかし、これらの低減された当量の過酸化水素が使用されたときの最大自己発熱速度がちょうど７℃／分であった。これは、８当量の過酸化水素が使用されたときに測定されるかつて認められた１０００℃／分から著しく低下している。２当量の過酸化水素が使用された場合には、発熱事象は何ら認められず、しかしながら、反応の完了が達成されず、酸へのアルデヒドの７４．１％の転化率が４５時間後に達成され、このことは、アルデヒドは１０．０％以下であるという規格値を満たしていなかった。２．５当量、３当量、および４当量については、反応の完了が達成され、しかしながら、過酸化水素のこれらの当量数に関しては、暴走反応についての潜在的可能性が依然として存在していた。

したがって、様々な計算を、反応を熱暴走時において停止させるために要求される冷水の添加速度および体積を求めるために、４当量の過酸化水素の使用を仮定して行った。冷水の十分な添加速度および体積が、熱暴走を７℃／分の速度で抑制するために決定され、そして、様々なプロトコルが、３当量の過酸化水素を使用する４００ｇの非ＧＭＰ回分処理を実施するために実行され、この場合、予冷された水が熱暴走時には利用可能であった。制御不能な発熱事象が、この工程を製造操作において実行している期間中には何ら認められなかった。改善された収率もまた、これら３工程にわたって認められ、１６％から２１％への収率の増大が認められた。

先行技術を上回る利点がいくつかある。合成で使用される試薬を変化させていないが、先行技術は、８当量の過酸化水素を使用する^１ので、潜在的な破局的事象に対してあまりにも近くで行われていたことが明らかにされた。安全性評価を行い、かつ、低減された当量の過酸化水素を検討することによって、超高純度なアジュレム酸の合成において使用されるアリル酸化反応のための安全に拡大可能なプロセスが明確にされており、一方で、そのようなプロセスはまた、収率を１６％から２１％に改善させている。

Ｂ．ＤＭＨＲおよびＰＭＤからのアジュレム酸の改善された合成
超高純度なＤＭＨＲ（５−（１，１−ジメチルヘプチル）レゾルシノール））を、Ｎｏｒａｃ Ｐｈａｒｍａ（Ａｚｕｓａ、カリフォルニア州）から購入してもよい。

改善された合成手順および安全性
工程１ （６ａＲ，１０ａＲ）−３−（１'，１'−ジメチルヘプチル）−Δ８−テトラヒドロカンナビノールの調製
最初に、反応で使用されるＰＭＤ（図３における７ａ）の量を１．２５当量から１．１当量に減らした。これは、０．１当量過剰のＰＭＤが、ＤＭＨＲ（図３における６）のすべてと反応するために十分であったからであった。

以前の手順では、回分反応物を３時間にわたって加熱還流すること（約１１０℃）が記載される。水を共沸除去すること、および２．０％（ＡＵＣ）以下のカンナビジオールの規格値を満たすことにおいて効果的であるにもかかわらず、この手順では、化合物１の分解およびＤＭＨＲの再生が、長期間の加熱を行ったときに誘導された。副産物の形成を避けるために、反応を７５℃で、すなわち、その後のアセチル化反応と同じ温度で行った。反応は、反応時間に対する影響を何ら伴うことなく２４時間にわたって安定であった。水を共沸除去するために、反応液を不完全な真空のもとに置いた。ディーン・スターク・トラップを使用して、水を回収し、終点を、もはや水がトラップに回収されない点として再定義した。

最後に、結晶化条件を再検討した。溶解性試験により、収率を改善するための最も効果的なイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）：水の比が３：１〜５：１のＩＰＡ：水の範囲であることが明らかにされた。このことは、以前の手順（５．３３：１の比率が用いられた）とは対照的であった。種々の比率による実験の後、８：２のＩＰＡ：水を結晶化のための溶媒比として使用した。また、結晶サイズが、撹拌速度を遅くし、これにより、より大きな結晶を無傷に保つことによって改善された。

種結晶が結晶化のためにもはや要求されなかった。これは、アセチル化ＰＭＤ／ＤＭＨＲカップリング生成物が、記載される手順の後では一貫して結晶化するからである。

工程２ （６ａＲ，１０ａＲ）−３−（１'，１'−ジメチルヘプチル）−Δ８−テトラヒドロカンナビノール−９−カルボン酸アセタートの調製
以前の手順では、３当量の過酸化水素が酸化反応のために使用された。このことは、別の以前の手順で使用される８当量よりもはるかに安全であったが、依然として熱暴走の可能性があった。したがって、２当量の過酸化水素を評価した。これは、以前の安全性研究では、２当量の過酸化水素が熱暴走の危険性を劇的に低下させることが示されたからである。４８時間後、反応液は、未反応アルデヒドは１０％（ＡＵＣ）未満であるという規格値を満たしていなかった。それにもかかわらず、反応液は粗アジュレム酸にまで至っていた（６．２％の収率、９６．８％（ＡＵＣ）の純度）。純度が同程度であったとしても、この収率は、３当量の過酸化水素による反応よりも著しく低かった。３当量の過酸化水素を使用したが、このように、製造期間中のこの工程の綿密な技術的管理により、良好な温度制御を保証することができる。また、４００ｇの非ＧＭＰ回分処理物のために以前に行われたように、冷水が、制御されなかった発熱反応の場合における停止選択肢として存在した。

トルエンが以前には、過酸化水素酸化の後において抽出溶媒として使用された。手順はその後、混合物を蒸発乾固し、ヘプタンを加えることが要求された。蒸発乾固は容易に拡大することができず、また、トルエンからヘプタンへの溶媒切り換えは効率的に実行することができないので、他の溶媒を可能な抽出溶媒として評価した。最初に、ヘプタンを評価した。ヘプタンは生成物を有機層に問題なく抽出したにもかかわらず、相分離が遅く、かつ、３つの層が存在した。第２の試みでは、抽出溶媒を何ら使用しなかった。過酸化水素の反応を２０ｗｔ％のチオ硫酸ナトリウムにより停止させることにより、２つの相がもたらされることが認められた。したがって、水層を、さらなる有機溶媒を用いることなく除くことができた。

合成プロセス開発の期間中、加水分解後の相分離が、３つの層の形成、中間層の大きい粘度、および相のすべてが暗い色であることのために問題となった。ＭＴＢＥを、ヘプタンに代わる可能な抽出溶媒として評価した。ＭＴＢＥ抽出は、２つの層、すなわち、暗褐色の有機層と、透明な赤色水層とへの迅速な相分離を引き起こしたにもかかわらず、ＨＰＬＣ分析により、生成物、および不純物のすべてが有機層に留まっていることが明らかにされた。その後、ヘプタンを抽出溶媒として再び評価した。４００ｇの回分式製造において認められたように、反応混合物が３つの暗い層に分離した；しかしながら、中間の油層は移動性がはるかにより大きかった（これは、ＴＨＦが存在しているためであると考えられる）。ＨＰＬＣ分析により、上部の有機層が不純物を含有し、生成物を全く含有しておらず、一方、２つの下部層がほとんどの場合、生成物を微量の不純物とともに含有することが示された。相分離は依然として、暗い色のために視認困難であったにもかかわらず、ヘプタン抽出では、生成物を不純物から分離することができた。

その後の酸性化工程および抽出工程を４５℃〜５５℃の代わりに周囲温度で行った。これらの条件は、ＭＴＢＥを加水分解して、クロロメタンおよびｔｅｒｔ−ブタノールを生じさせる危険性を低下させた。

次工程が、回分処理物をセライト（登録商標）でろ過して、乳濁液を壊すことであった。ろ過は著しく遅かったので、水層をろ過前に除いた。ＭＴＢＥからアセトニトリルへの溶媒切り換えは問題がなく、また、粗アジュレム酸は記載される手順の後では一貫して結晶化するので、種結晶が、結晶化のためにもはや要求されなかった。

工程３ 粗アジュレム酸の調製
トルエンからヘプタンへの困難な溶媒切り換えを避けるために、アセチル化反応を４５℃〜５５℃でヘプタンにおいて完了させた。この変更は小規模では成功し、しかし、反応混合物が、約０．５当量のピリジンが１４．５ｇの規模で反応器に装入された後では固化した。アジュレム酸を回収することを試みるために、ＭＴＢＥを加えて、沈殿物を可溶化し、ＨＣｌを使用して、ピリジンを除いた。この試みは不成功であった。これは、固形物が、溶媒をロータリーエバポレーターで蒸発させている間に析出したからであった。ＮＭＲ分析により、沈殿物がアジュレム酸−ピリジンの部分塩であることが示された。いくつかの実験を、塩形成の原因を明らかにするために完了した。最初に、同じ反応をより小規模（約２．５ｇ）で行った。ピリジン（０．５当量）を混合物にゆっくり加えた。またもや、反応液が固化した。しかしながら、これは、完全な２．１当量のピリジンを加えたときに改善された。その後、反応を２５℃および７５℃で行い、再び、０．５当量のピリジンを加え、その後、完全な量のピリジンを加えた。両方の場合において、塩が沈殿し、しかし、ピリジンのすべてが添加されると溶解した。より大きな回分処理サイズでは、より遅い添加が要求されることになるので、この手順は、拡大可能でないと判断された。

したがって、ヘプタン（６当量）に溶解される粗アジュレム酸を、ヘプタン（２当量）に溶解される完全な２．１当量のピリジンを含有する反応器に加えた。これにより、ピリジンが常に過剰であったので、部分塩の形成が回避された。このことはまた、反応体積を１０当量のヘプタン（追加の２当量が、反応器を洗浄するために使用された）に増大させ、これにより、結晶化期間中の移動性が改善された。

工程４ 超高純度なアジュレム酸の調製
類似する変更を、同じ反応がその都度、行われるように工程２での処理の場合のようにこの工程において行った。反応混合物の酸性化を周囲温度で行って、ＭＴＢＥの加水分解を回避し、また、水による追加の洗浄を加えて、オーブンの腐食を回避した。

工程４に関する主要事項が乾燥時間であった。４１０ｐｐｍ以下のアセトニトリルの規格値に達するために、以前の４００ｇでの一連の非ＧＭＰ回分処理物については９日を必要とした。したがって、ＩＰＡ／水からの結晶化を評価した。溶解性研究では、１：１のＩＰＡ／水混合物におけるアジュレム酸は、３：１のアセトニトリル／水混合物におけるアジュレム酸と同様な溶解性を有することが示された。アジュレム酸がＩＰＡ／水から首尾よく単離されたにもかかわらず、乾燥時間は改善せず、５０００ｐｐｍ以下のＩＰＡの規格値に達するには２．５ｇの規模では７日超を必要とした。生成物に残留するＩＰＡの量はＬＯＤと相関しなかった。このことは、水が乾燥時間において重要な役割を果たしたことを示唆している。したがって、純粋なアセトニトリルからの結晶化を１９．５ｇの規模で評価した。これは、はるかにより短い乾燥時間を、検出可能な量のアセトニトリルを８１時間において全く伴うことなくもたらした。

超高純度なＤＭＨＲ（９９．４％（ＡＵＣ）の純度）の使用試験は首尾よく、アジュレム酸に至った。このアジュレム酸の純度は９９．９％（ＡＵＣ）であり、０．０４％以上の単一ピークは何ら認められなかった。

Ｃ．超高純度ＤＭＨＲおよびＰＭＤからのアジュレム酸の合成（大規模）
工程１
２００ガロン（約７５７リットル）の反応器に、超高純度ＤＭＨＲ（２０．０ｋｇ、１当量）、ＰＴＳＡ（３．４０ｋｇ、０．２当量）、およびトルエン（１０２．３ｋｇ、５体積当量）を装入した。これに、ＰＭＤ（１４．１８ｋｇ、１．１当量）を、回分処理物の温度を１５℃〜３０℃で維持しながら３８分かけて加え、その後、トルエン洗浄（１７．４ｋｇ、１体積当量）を行った。回分処理物を不完全な真空のもとで７０℃〜８０℃に加熱し、そして、トルエンが満たされるディーン・スターク・トラップを使用して、水を、一定体積のトルエンを維持しながらトルエンとの共沸蒸留によって除いた。反応が、ＨＰＬＣによって２時間後には完了していると決定された。この場合、ＨＰＬＣにより、カンナビジオールが全く検出されず、１０６：１のΔ８：Δ９比が得られた（規格値は、２．０％（ＡＵＣ）以下のカンナビジオール、および、Δ８：Δ９比が４：１以上であることであった）。回分処理物を２５℃および大気圧において一晩保った。

回分処理物を７０℃〜８０℃に再加熱し、ピリジン（１０．７０ｋｇ、１．６当量）および無水酢酸（１３．８０ｋｇ、１．６当量）をそれぞれ、回分処理物の温度を７０℃〜８０℃で維持しながら約３０分かけて加えた。２時間後、回分処理物からサンプルを採取した。この回分処理物は、０．４％（ＡＵＣ）の化合物１が検出されたことにより、化合物１は２．０％（ＡＵＣ）以下であるという規格値に合格した。水（１６０．０ｋｇ、８当量）を加え、回分処理物を５０℃〜６０℃に調節した。下側の水層を除き、回分処理物をさらに、５０℃〜６０℃で水（４０ｋｇ、２．０当量）により洗浄した。反応混合物を２００ガロン（約７５７リットル）の反応器から２５０リットルの反応器に移した。

トルエン（１００Ｌ、５体積当量）を留去し、ＩＰＡ（７８．６ｋｇ、８体積当量）を加えた。これをさらに２回繰り返し、その後、サンプルを試験した。サンプルは、トルエンは２．０％（ＡＵＣ）以下であるという規格値に合格した。この回分処理物を２０℃〜３０℃で一晩保った。ＩＰＡ（３１．４ｋｇ、２体積当量）を加えた後、回分処理物を４５℃〜５５℃に再加熱し、水（４０．０ｋｇ、２体積当量）を加え、温度をさらに約１時間維持し、その後、約１０℃／時間で２５±２℃に冷却した。回分処理物をこの温度で１６時間超にわたって保ち、その後、１０℃／時間で０℃〜５℃に冷却し、さらに２時間１０分にわたって保った。スラリーは、底部の出口バルブを通って流れないであろう大きい粒子を含有した。したがって、生成物を、反応器を５５℃に加熱することによって溶解して溶液に戻した。回分処理物を３５℃に冷却し、この温度で一晩保ち、ろ過して、１番晶を得た。その後、ろ液を反応器に戻し、５℃にまで冷却し、さらなる生成物を２番晶として単離した。両方の単離物を２０％水／ＩＰＡ溶液により洗浄した（約３６Ｌを使用して、１番晶を洗浄し、約２４Ｌを使用して、２番晶を洗浄した）。その後、これら２つの単離物を、真空下、１２２°Ｆ（５０±５℃）で乾燥した。生成物を取り出し、この生成物からは、実際の総重量が２５．７６ｋｇの化合物２が得られた。すなわち、１番晶からは１４．５０ｋｇの実際の重量が得られ（９７．０％（ＡＵＣ）の純度）、２番晶からは１１．２６ｋｇの実際の重量が得られた（９３．３％（ＡＵＣ）の純度）。

工程２
２００ガロン（約７５７リットル）の反応器に、化合物２（２５．７６ｋｇ、１当量）、二酸化セレン（８．６６ｋｇ、１．２５当量）、テトラヒドロフラン（９８．５ｋｇ、４．３体積当量）、および水（５．２ｋｇ、０．２当量）を装入した。反応器を加熱し、５５℃〜６５℃で維持した。２０．５時間後、反応は、ＨＰＬＣによって完了していると判断され、１．８％（ＡＵＣ）の残留化合物２により、２．０％（ＡＵＣ）以下の化合物２の規格値に合格した。この回分処理物を約３時間にわたって０℃〜１０℃に冷却した。回分処理物の温度を２５℃未満で維持しながら、３５ｗｔ％過酸化水素（１８．２１ｋｇ、３当量）を加えた。その後、回分処理物の温度を１０℃〜２５℃に調節し、この温度で保った。これを、反応液が、化合物１０はＨＰＬＣによって１０．０％（ＡＵＣ）以下であるという規格値を満たすまで行った。約１６時間後、反応は完了していると判断され（１．７％（ＡＵＣ）の残留化合物１０）、反応を、回分処理物の温度を３５℃未満で維持しながら２０ｗｔ％チオ硫酸ナトリウム溶液（９８．８ｋｇ、２当量）によりゆっくり停止させた。２時間１３分後、過酸化物の痕跡が全く認められなかった。回分処理物をセライト（登録商標）のパッドでろ過し、セライト（登録商標）ケークを２２．９ｋｇのＴＨＦ（１体積当量）により洗浄した。相を分離させ、水層を捨てた。その後、反応混合物を１０ｗｔ％塩化ナトリウム（５１．６ｋｇ、２当量）により洗浄し、清浄化された２００ガロン（約７５７リットル）の反応器に水（１２８．８ｋｇ、５当量）と一緒に戻した。これに、５０ｗｔ％水酸化ナトリウム溶液（１８．８ｋｇ、３．８当量）を、回分処理物の温度を５５℃未満で維持しながら加えた。回分処理物を４５℃〜５５℃で約１時間保ち、その後、サンプルを採取した。この回分処理物は、０．１％（ＡＵＣ）の残留化合物１１が検出されて、化合物１１はＨＰＬＣによって２．０％（ＡＵＣ）以下であるという規格値を満たしていた。

反応液を２５±２℃に冷却し、ヘプタン（４４．１ｋｇ、２．５体積当量）を加えた。反応混合物を３０分間撹拌し、４８時間にわたって静置した。３つの相が認められた：底部の赤色／褐色の水層、中間の粘性黒色層、および上部の透明な赤橙色層。上部の有機層を除き、中間および底部の生成物含有層を一緒にし、さらに４４．１ｋｇ（２．５体積当量）のヘプタンにより洗浄した。またもや、３つの層が認められ、上部の有機層を除いた。

温度を３０℃以下で維持しながら、一緒にされた中間層および底部層のｐＨを、３７ｗｔ％塩酸（２４．３８ｋｇ）を使用してｐＨ＜１．５に調節した。ＭＴＢＥ（６６．８ｋｇ、３．５体積当量）を加え、混合物を３０分間撹拌し、その後、２０分間にわって静置させた。下側の水層を排出しようとしたとき、相が完全に分離されていないことが認められた。少量の反応混合物（ｐＨ試験のためにより早い時期に採取されたもの）を用いた実験により、より多くのＭＴＢＥ（６６．７ｋｇ、３．５体積当量）を反応器に加えた。３０分間撹拌し、反応混合物をさらに２時間にわたって静置させた後、下側の水相を排出し、これにより、透明相の分離を得た。反応混合物を水（５１．５ｋｇ、２当量）により洗浄し、１５時間１０分にわたって一晩保ち、その後、下側の水層を排出した。反応混合物をセライト（登録商標）のパッドでろ過し、セライト（登録商標）ケークをＭＴＢＥ（９．５３ｋｇ、０．５体積当量）により洗浄した。回分処理物を２５０リットルの反応器に移し、１６０Ｌ（約６．２体積当量）の溶媒を蒸留によって除いた［注：蒸留体積は、添加された追加のＭＴＢＥとなるように調節した］。アセトニトリル（３０．４ｋｇ、１．５体積当量）を加え、３８Ｌ〜４２Ｌ（約１．５体積当量）の溶媒を除いた。これを３回繰り返した。回分処理物を約１０℃／ｈで０℃〜５℃に冷却し、その温度で２時間保ち、ろ過した。その後、ケークを３０．４ｋｇの予冷アセトニトリル（１．５体積当量）により洗浄した。ケークを脱液し、１２２°Ｆ（５０±５℃）で乾燥した後、生成物を取り出して、粗アジュレム酸（５．２９ｋｇの実際の重量、２１．１％の収率、純度：方法Ａを使用するＨＰＬＣによって９９．０％（ＡＵＣ）、表１を参照のこと）を灰白色の固体として得た。

工程３
４０リットルの反応器に、粗アジュレム酸（５．２８ｋｇ、１当量）およびヘプタン（２１．８ｋｇ、６体積当量）を装入した。２５０リットルの反応器に、ピリジン（２．１８ｋｇ、２．１当量）およびヘプタン（７．２ｋｇ、２体積当量）を装入した。その後、両方の反応器を５０℃〜６０℃に加熱した。４０Ｌ反応器の内容物が溶解した後、溶液を２５０Ｌ反応器に移し、さらなるヘプタン（７．２ｋｇ、２体積当量）を使用して、４０Ｌ反応器を洗浄し、これを２５０Ｌ反応器に移した。回分処理物の温度を５０℃〜６０℃で維持しながら、無水酢酸（２．５０ｋｇ、１．８当量）を加え、反応混合物を２時間撹拌した。反応混合物からサンプルを採取した。この反応混合物は０．８％（ＡＵＣ）の粗アジュレム酸を示し、これは、０．５％（ＡＵＣ）以下の規格値を満たしていなかった。第２のサンプルを３時間後に得た。このサンプルは、０．２％（ＡＵＣ）の粗アジュレム酸が検出されたことにより規格値に合格した。

その後、反応器に、脱イオン（ＤＩ）水（７．４０ｋｇ、１．４当量）を、温度を５０±５℃で維持しながらゆっくり装入した。反応混合物を２時間撹拌し、ＨＰＬＣによって分析して、０．３％（ＡＵＣ）のアセチル化アジュレム酸が検出されたことにより、反応混合物は、ＨＰＬＣによる０．５％以下のアセチル化アジュレム酸無水物（ＡＵＣ）の規格値を満たした。下側の水層を排出し、有機相を１ＮのＨＣｌ（１４．８０ｋｇ、２．８当量）により洗浄した。水層のｐＨが３であり、このｐＨは、ｐＨ≦５の規格値を満たしていた。有機層をもう一度、水（７．４０ｋｇ、１．４当量）により洗浄して、ｐＨ４を得た。このｐＨは、ｐＨ≧３の規格値を満たしていた。回分処理物を約１０℃／ｈで一晩０℃〜５℃に冷却し、その後、０℃〜５℃で３時間保った。回分処理物をろ過し、事前に冷却されたヘプタン（１１．２ｋｇ、３当量）により洗浄し、真空下、１２２°Ｆ（５０±５℃）で乾燥した。生成物を取り出し、この生成物からは、アセチル化アジュレム酸（５．０３ｋｇの実際の重量、８６．１％の収率）が、純度がＨＰＬＣ（方法Ａ）によって９９．２％（ＡＵＣ）である白色固体として得られた。

工程４
４０リットルの反応器に、アセチル化アジュレム酸（５．０２ｋｇ、１当量）、ＭＴＢＥ（１５．３７ｋｇ、４．１３体積当量）、および２ＮのＮａＯＨ（１４．５４ｋｇ、２．４００当量）を、回分処理物の温度を５０℃以下で維持しながら装入した。回分処理物を４５℃〜５５℃で４時間２分にわたって維持した。その後では、回分処理物は未反応アセチル化アジュレム酸を全く有しておらず、ＨＰＬＣによる０．５％（ＡＵＣ）以下のアセチル化アジュレム酸の規格値を満たしていた。反応混合物を２５℃に冷却した。回分処理物の温度を２５±５℃で維持しながら、回分処理物を３７ｗｔ％のＨＣｌ（３．６２ｋｇ、０．６０体積当量）により酸性化した。３０分間撹拌した後、下側の水層を分離し、有機層を水（５．５３ｋｇ、１．１当量）により洗浄した。ｐＨが２であった。さらに２回の水洗浄を行い、反応混合物はｐＨ３に達した。これはｐＨ＞３の規格値を満たしていなかったにもかかわらず、反応を続けた。

有機層を、セライト（登録商標）、１０ミクロンのフィルター、および２．４ミクロンのフィルターでろ過して、２５０リットルの反応器に入れた。その後、４０リットルの反応器をＭＴＢＥ（１．８６ｋｇ、０．５体積当量）により洗浄し、回分処理物を洗浄液と一緒に１０ミクロンのフィルターおよび２．４ミクロンのフィルターに通して、清浄化された４０リットルの反応器に戻した。ＭＴＢＥ（１０Ｌ、２体積当量）を留去し、アセトニトリル（１７．４ｋｇ、４．４体積当量）を加えた。その後、２２．２５Ｌ（約４．４体積当量）の溶媒を留去し、蒸留物をＮＭＲによって分析して、４６％のＭＴＢＥが明らかにされた。最後に、さらなるアセトニトリル（１７．４ｋｇ、４．４体積当量）を加え、１４．６Ｌ（２．９体積当量）の溶媒を留去した。蒸留物をＮＭＲによって分析して、０．６％のＭＴＢＥが明らかにされた。温度を９時間２５分にわたって２０℃〜３０℃に調節した。結晶が存在し、反応混合物を２時間にわたって０℃〜５℃に冷却した。反応混合物を３時間保ち、その後、内容物をろ過した。母液を数回、反応器を介して再循環して、スラリー移送を容易にした。結晶を９．８ｋｇ（２．５体積当量）の事前に冷却されたアセトニトリルにより洗浄した。生成物を、真空オーブンにおいて、わずかな窒素抽気を伴って１２２°Ｆ〜１３０°Ｆで乾燥した。２５８時間後、生成物をＧＣによってアッセイした。この生成物は２００ｐｐｍ以下の規格値を満たしていた。生成物を取り出し、この生成物からは、アジュレム酸（４．１２ｋｇの実際の重量、９０．７％の収率）が、ＨＰＬＣ（方法Ａ）による９９．８％（ＡＵＣ）の純度により得られた。

受容体結合
親和性、すなわち、結合親和性は、平衡結合定数または速度論的結合速度パラメーターによって定義することができる２つ以上の別個の分子実体の間（例えば、化合物と受容体間）における結合相互作用の強さの尺度である。好適な定数またはパラメーターおよびそれらの測定単位の様々な例がこの技術分野では広く知られており、これらには、会合定数（Ｋ_Ａ）；解離定数（Ｋ_Ｄ）または阻害定数（Ｋ_ｉ）；会合速度定数（Ｋ_ｏｎ）および解離速度定数（Ｋ_ｏｆｆ）が含まれるが、これらに限定されない。１つの実施形態において、Ｋ_ｉは、［受容体］・［阻害剤］／［阻害剤が結合する受容体］に等しく、したがって、Ｋ_ｉは、受容体に結合する阻害剤についての平衡定数である。Ｋ_Ａの場合には、より大きい値により、より強い、またはより大きい結合親和性が意味される。Ｋ_ｉ（またはＫ_Ｄ）の場合には、より小さい値により、より強い、またはより大きい結合親和性が意味される。

本発明の化合物（例えば、超高純度なＡＪＡ）は、ＣＢ２受容体に対する親和性が、ＣＢ１受容体に対する場合よりも大きい。このことは、本発明の化合物（例えば、超高純度なＡＪＡ）が、ＣＢ２に対してＣＢ１よりも強固に、すなわち、そのＫ_ｉ（ＣＢ１）（すなわち、ＣＢ１受容体についてのＫ_ｉ）よりも小さいＫ_ｉ（ＣＢ２）（すなわち、ＣＢ２受容体についてのＫ_ｉ）で結合することを意味する。同様に、本発明の化合物（例えば、超高純度なＡＪＡ）は、ＣＢ１受容体に対する親和性が、ＣＢ２受容体に対する場合よりも小さい。言い換えれば、本発明の化合物（例えば、超高純度なＡＪＡ）は、ＣＢ１に対してＣＢ２ほどには強く結合せず、すなわち、そのＫ_ｉ（ＣＢ２）よりも大きいＫ_ｉ（ＣＢ１）で結合する。

精製された形態の、ＣＢ２受容体に対するアジュレム酸の親和性は、ＣＢ１受容体に対する親和性よりも約５倍大きいから約１０倍大きいにまで及ぶことができる。約５Ｘ〜約５０Ｘ、約７Ｘ〜約１０Ｘ、約８Ｘ〜約１５Ｘ、約１０Ｘ〜約２０Ｘ、約１５Ｘ〜約３０Ｘ、約２５Ｘ〜約５０Ｘ、約４０〜約７５Ｘ、約５０Ｘ〜約１００Ｘ、約２Ｘ〜約１０００Ｘ、約２Ｘ〜約８００Ｘ、約５Ｘ〜約６００Ｘ、約１０Ｘ〜約５００Ｘ、約１５Ｘ〜約３００Ｘ、約５Ｘ〜約２００Ｘ、約１０Ｘ〜約１００Ｘ、約２０Ｘ〜約８０Ｘ、または約１０Ｘ〜約５０Ｘの範囲もまた、本発明によって包含される（範囲は、ＣＢ２受容体についてのアジュレム酸の親和性の、ＣＢ１受容体についての親和性に対する比率、例えば、Ｋ_ｉ（ＣＢ１）／Ｋ_ｉ（ＣＢ２）を表す）。

いくつかの実施形態において、本発明の化合物（例えば、超高純度なＡＪＡ）のＫ_ｉ（ＣＢ１）（すなわち、ＣＢ１受容体についてのＫ_ｉ）は、Ｋ_ｉ（ＣＢ２）（すなわち、ＣＢ２受容体についてのＫ_ｉ）の少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約８倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約１０００倍、少なくとも約１０，０００倍、約２倍〜約１０，０００倍、約２倍〜約１，０００倍、約５倍〜約５００倍、約５倍〜約１００倍、約７倍〜約１０倍、約８倍〜約１５倍、約１０倍〜約２０倍、約１５倍〜約３０倍、約２５倍〜約５０倍、約４０倍〜約７５倍、または約５０倍〜約１００倍である場合がある。

本発明の化合物（例えば、超高純度なＡＪＡ）のＫ_ｉ（ＣＢ１）／Ｋ_ｉ（ＣＢ２）の比率は、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約８、少なくとも約１０、少なくとも約５０、少なくとも約１００、少なくとも約２００、少なくとも約４００、少なくとも約５００、少なくとも約１０００、少なくとも約１０，０００、約２〜約１０，０００、約２〜約１，０００、約５〜約５００、約５〜約１００、約７〜約１０、約８〜約１５、約１０〜約２０、約１５〜約３０、約２５〜約５０、約４０〜約７５、または約５０〜約１００である場合がある。

ある特定の実施形態において、精製された形態のＡＪＡは、ＣＢ２受容体についてのＫ_ｉが、約１５０ｎＭ以下、約１２５ｎＭ以下、約１１０ｎＭ以下、約１００ｎＭ以下、約９０ｎＭ以下、約８０ｎＭ以下、約７０ｎＭ以下、約６０ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、または約３０ｎＭ以下である。

受容体結合親和性を測定するための従来の方法はどれも、ＣＢ１受容体またはＣＢ２受容体に対するリガンドの結合をアッセイするために使用することができる（Ｐｅｒｔｗｅｅ ＲＧ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄｓ、Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、１６８：１−５１（２００５）；ＭｃＰａｒｔｌａｎｄ他、Ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄ ｌｉｇａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ：ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ、Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１５２：５８３−５９３（２００７）を参照のこと）。

２つの成分の間における結合親和性が、直接的または間接的に測定される場合がある。親和性の間接的測定が、親和性を示す、および／または、親和性に比例する代理特性を使用して行われる場合がある。そのような代理特性には、第１の成分が第２の成分に結合する量またはレベル、あるいは、第１の成分または第２の成分の生物物理学的特徴で、第２の成分についての第１の成分の見かけの結合親和性を予測するか、または第２の成分についての第１の成分の見かけの結合親和性に相関させられる生物物理学的特徴が含まれる。具体的な例には、第１の成分が第２の成分に結合する量またはレベルを第１の成分または第２の成分のどちらかの亜飽和濃度において測定することが含まれる。測定することができる他の生物物理学的特徴には、第１の成分および第２の成分の一方または両方の正味の分子電荷、回転活性、拡散速度、融解温度、静電的ステアリング（ｓｔｅｅｒｉｎｇ）、または立体配座が含まれるが、これらに限定されない。測定することができるさらに他の生物物理学的特徴には、温度、ｐＨ、またはイオン強度を変えることの影響に対する結合相互作用の安定性を求めることが含まれる。

結合親和性は、化合物／受容体複合体の形成および解離の速度を測定することによって定量化することができる。したがって、「オン速度定数」（Ｋ_ｏｎ）および「オフ速度定数」（Ｋ_ｏｆｆ）の両方を、濃度、ならびに会合および解離の実際の速度を計算することによって求めることができる（Ｎａｔｕｒｅ、３６１：１８６−８７（１９９３）を参照のこと）。Ｋ_ｏｆｆ／Ｋ_ｏｎの比率は解離定数Ｋ_Ｄに等しい（一般には、Ｄａｖｉｅｓ他（１９９０）、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、５９：４３９−４７３を参照のこと）。Ｋ_ｉが、様々なアッセイによって、例えば、放射性リガンド結合アッセイ（例えば、実施例４において記載されるような手順）、または当業者に知られている類似するアッセイなどによって測定される場合がある。

それぞれの受容体についての相対的親和性が、標識された化合物と、増大する濃度の標識されていない化合物との間における競合結合アッセイによって求められる場合がある。結合親和性を、標識された化合物を使用する競合ＦＡＣＳ、または他の競合的結合アッセイによって求めることができる。

受容体に対する化合物の結合親和性はまた、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって求めることができる。Ｋ_ＤまたはＫ_ｉが、ＢＩＡｃｏｒｅ技術（ＧＥ）、またはＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）親和性分析によって求められる場合がある。

処置される状態
本発明はまた、本明細書中に記載される状態を、本発明の化合物または組成物を対象に投与することによって処置または防止する方法を提供する。

本発明の化合物または組成物によって処置または防止することができる状態には、線維性疾患、炎症性疾患、および痛みが含まれるが、これらに限定されない。線維性疾患には、例えば、強皮症、全身性硬化症、強皮症様障害、皮膚硬化を伴わない強皮症、肝硬変、間質性肺線維症、特発性肺線維症、デュピュイトラン拘縮、ケロイド、嚢胞性線維症、慢性腎臓疾患、慢性移植片拒絶、臓器（例えば、肝臓、食道、心臓、肺、腸など）の線維症、および他の瘢痕／創傷治癒異常、術後癒着、ならびに反応性線維症が含まれる。炎症性疾患には、例えば、全身性エリテマトーデス、ＡＩＤｓ、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、１型糖尿病、糖尿病、ガン、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫性甲状腺障害、潰瘍性大腸炎、クローン病、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病など）、パーキンソン病、発作、および虚血などが含まれる。

線維症の限定されない例には、肝線維症、肺線維症（例えば、硅肺症、石綿肺、特発性肺線維症）、口腔線維症、心内膜心筋線維症、後腹膜線維症、三角筋線維症、腎臓線維症（糖尿病性腎症を含む）、嚢胞性線維症、および糸球体硬化症が含まれる。例えば、肝線維症が、慢性肝傷害に対する創傷治癒応答の一部として生じる。線維症が、ヘモクロマトーシス、ウィルソン病、アルコール依存症、住血吸虫症、ウイルス性肝炎、胆管閉塞症、毒素への暴露、および代謝障害の合併症として生じる可能性がある。心内膜心筋線維症は、拘束型心筋症の発達によって特徴づけられる特発性障害である。心内膜心筋線維症では、その根底にあるプロセスにより、心臓の心内膜表面の斑状線維症が生じ、この結果、低下した伸展性と、究極的には、心内膜心筋表面がより全般的に関与するような拘束性生理学とが引き起こされる。口腔粘膜下線維症は、粘膜下組織（粘膜固有層およびより深部の結合組織）の炎症および進行性線維症によって特徴づけられる口腔の慢性的消耗性疾患である。頬粘膜が、最も一般的な関与部位であり、しかし、口腔のどのような部分も関与する可能性があり、咽頭でさえ関与する。後腹膜線維症は、後腹膜全体にわたる、典型的には第４腰椎および第５腰椎の腹側表面を中心とする広範囲の線維症によって特徴づけられる。

強皮症は、皮膚および内臓器官の線維症によって特徴づけられる結合組織の疾患である。強皮症は多様な徴候および様々な治療的関連を有する。強皮症は、限局性強皮症、全身性硬化症、強皮症様障害、および、皮膚硬化を伴わない強皮症を有する。全身性硬化症は散在性または限定的である可能性がある。限定的全身性硬化症はまた、ＣＲＥＳＴ（石灰沈着症、レイノー食道機能不全、強指症、毛細血管拡張症）と呼ばれる。全身性硬化症は、強皮症肺疾患、強皮症腎クリーゼ、心臓の徴候、筋力低下（疲労または限定的ＣＲＥＳＴを含む）、胃腸の運動障害および痙攣、ならびに、中枢神経系、末梢神経性および自律神経系における異常を有する。

強皮症、特に全身性硬化症の主要な症状および徴候が、不適切な過度なコラーゲン合成およびコラーゲン沈着、内皮機能不全、血管痙攣、線維症による血管の虚脱および閉塞である。

例えば、式Ｉに示されるような構造を有する化合物はアジュレム酸であることが可能である。特に、本出願人らは、超高純度なアジュレム酸の投与が、ＣＢ１媒介の行動的副作用を何ら伴うことなく、強皮症の広く確立された動物モデルを使用して明らかにされるように、肺および皮膚の組織線維症を処置することにおいて効果的であることを認めている。

治療効果的な量の本発明の化合物（例えば、超高純度なアジュレム酸）は、対象が経験する痛みのレベルを低下させる場合がある。１つの実施形態において、患者が経験する痛みのレベルを、視覚的アナログ尺度（ＶＡＳ）またはリッカート型尺度の使用によって評価することができる。ＶＡＳは、直線の一方の端が痛みの非存在を表し、直線の反対側の端が最も悪い考えられ得る痛みを表す直線である。患者には、その痛みがそれぞれの時点において位置すると見なされるところを直線上にマークするように依頼され、痛みの非存在から当該マークまでの長さをフルスケールの長さに関連づけることができる。リッカート型尺度は、様々な記載事項に対する同意または不同意の程度に基づく評定尺度（通常の場合には１から５までの範囲での評定尺度）である。類似するタイプの尺度が１１ポイントの尺度（０から１０にまで及ぶ）に基づいているが、これもまた使用することができる。そのような疼痛尺度を適用して、患者が処置期間中に経験する痛みのレベルの変化を、例えば、患者または患者集団が痛み治療の開始前および開始後に経験する痛みのレベルの低下を可視化することができる。米国特許第７，４１３，７４８号明細書。例えば、痛みが、１１ポイント疼痛尺度で少なくとも約１ポイント、少なくとも約２ポイント、少なくとも約３ポイント、少なくとも約４ポイント、少なくとも約５ポイント、少なくとも約６ポイント、少なくとも約７ポイント、または少なくとも約８ポイント軽減される場合がある。痛みのレベルはまた、他の好適な方法によって評価される場合がある。

治療効果的な量の本発明の化合物（例えば、超高純度なアジュレム酸）は、線維症を処置または防止するために使用される場合がある。線維症が、インビトロモデルまたはインビボモデルを使用して評価される場合がある。１つの実施形態において、インビトロでの線維症を、ＴＧＦ−ｂｅｔａ、ＰＤＧＦ、ＣＴＧＦ、または他の前線維症性因子に対する応答における細胞外マトリックスタンパク質産生の量を測定することによって、あるいは線維芽細胞活性化のマーカーの存在を介してアッセイすることができる。一般的な終点には、コラーゲン、フィブロネクチン、およびアクチンの測定が含まれる。別の実施形態において、インビボでの線維症が、特定の組織における細胞外マトリックス産生の程度によって測定される。線維症のインビボモデルには、外部の線維症媒介因子（例えば、ブレオマイシン、ＨＯＣｌ、ＣＣｌ_４、またはアルコールなど）を使用して、肝臓、腎臓、皮膚または肺の線維症を誘導する化学的誘導モデルが含まれる。線維症の遺伝的モデルもまた一般に使用されており、これらには、ＴＧＦ−ｂｅｔａ、ＰＤＧＦ、オステオポンチン、およびインターロイキンを過剰発現する動物、ならびに、タイトスキン（ｔｉｇｈｔ ｓｋｉｎ）（ｔｓｋ）マウスモデルが含まれる。線維症はまた、他の好適な方法によって評価される場合がある。

治療効果的な量の本発明の化合物（例えば、超高純度なアジュレム酸）は、炎症を処置または防止するために使用される場合がある。炎症が、インビトロモデルまたはインビボモデルを使用して評価される場合がある。１つの実施形態において、インビトロでの炎症を、炎症性細胞の走化性および活性化状態を測定することによってアッセイすることができる。別の実施形態において、炎症を、特異的な炎症性媒介因子（例えば、インターロイキン、サイトカイン、およびエイコサノイド系媒介因子など）の産生を調べることによって測定することができる。さらに別の実施形態において、インビボでの炎症が、局所組織の腫脹および浮腫、または白血球の遊走によって測定される。炎症の動物モデルでは、ホルボールエステル、アラキドン酸、血小板活性化因子、ザイモサン、ＬＰＳ、チオグリコラート、または他の薬剤などの刺激剤が、炎症を様々な組織（例えば、耳、足、皮膚、腹膜など）において誘発するために使用される場合がある。炎症はまた、器官機能によって、例えば、肺または腎臓などにおける器官機能によって、また、前炎症性因子の産生によって測定される場合がある。炎症はまた、他の好適な方法によって評価される場合がある。

処置方法
本明細書中に記載される化合物および組成物は、上記で議論されるような、また、下記においてさらに記載されるような様々な状態／疾患の処置、防止、および／または診断を行うために、培養中の細胞に、例えば、インビトロまたはエクスビボにおいて、あるいは、対象に、例えば、インビボにおいて投与することができる。

用語「処置する」または「処置」には、化合物を、例えば、どのような経路によってでも、例えば、経口投与によって対象に投与することが含まれる。化合物は、単独で、または第２の化合物との組合せで投与することができる。処置は逐次的である場合があり、この場合、本発明の化合物が他の薬剤の投与の前または後において投与される。代替では、様々な薬剤が同時に投与される場合がある。対象、例えば、患者は、障害（例えば、本明細書中に記載されるような障害）、障害の症状、または障害に対する素因を有するものであることが可能である。処置は、治療または完全な治癒に限定されるのではなく、障害を緩和すること、障害を軽減すること、障害を変化させること、障害を部分的に治療すること、障害を寛解させること、障害を改善すること、または障害に影響を与えること、障害の１若しくはそれ以上の症状、または障害に対する素因を軽減することのうちの１若しくはそれ以上をもたらすことができる。実施形態において、処置により、線維症が（少なくとも部分的に）緩和または軽減される。１つの実施形態において、処置により、障害の少なくとも１つの症状が軽減され、または障害の少なくとも１つの症状の発症が遅らされる。効果は、処置の非存在下で見られる効果を越えている。

障害を処置するために効果的である化合物は、対象への単回用量または多回用量での投与のとき、処置を達成するために効果的である量の当該化合物を示す。治療効果的な量による処置の程度は、標準的な臨床的に関連する基準によって測定されるような疾患のどのような改善または治療も包含する。

障害を防止するために効果的である化合物の量、すなわち、該化合物の「予防効果的な量」は、対象への単回用量または多回用量での投与のとき、障害または該障害の症状の発症または再発の発生を妨げるか、または遅らせることにおいて効果的である量を示す。

本発明の化合物および方法により処置することができる対象には、ヒトおよび非ヒト動物の両方が含まれる。例示的なヒト対象には、障害（例えば、本明細書中に記載される障害）を有するヒト患者、または正常な対象が含まれる。本発明の用語「非ヒト動物」には、すべての脊椎動物、例えば、非哺乳動物（例えば、ニワトリ、両生類、爬虫類など）および哺乳動物（例えば、ヒト以外の霊長類、飼育動物および／または農業有用動物など、例えば、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタなど）が含まれる。実施形態において、動物は齧歯類（例えば、ラットまたはマウス）以外であるか、またはヒト以外の霊長類である。

対象の状態決定
対象の処置は、当該対象の状態を求めることによって最適化することができ、その結果、例えば、処置がそれぞれの化合物の次善の用量または無効の用量により開始され、そして増大されて、当該対象における線維性疾患または炎症性疾患の処置および／または防止のための超高純度アジュレム酸の最適な用量を決定することができるようにすることができる。

対象を超高純度なアジュレム酸により処置することにより、様々な副作用が、例えば、めまい、口内乾燥、頭痛、悪心、蒼白、傾眠、および嘔吐などが引き起こされる可能性がある。

これらの副作用は、低用量で開始し、用量を、例えば、処置の経過期間中に、例えば、数週間、数ヶ月、または数年の経過にわたって上方にゆっくり決定することによってある程度は調節することができる。

１つの実施形態において、対象は、有害事象を最小限に抑え、かつ、超高純度なアジュレム酸の適切な投薬形態物の治療レベルを達成するために状態が求められる。

医薬組成物
本発明の超高純度な化合物（例えば、超高純度なアジュレム酸）の様々な投薬形態物を、様々な状態を先行技術のアジュレム酸よりも良好な安全性および許容性のプロフィルにより処置および／または防止するために本発明の方法において使用することができる。ある特定の実施形態において、投薬形態物は経口用投薬形態物であり、例えば、錠剤、またはカプセル、または腸溶性被覆錠剤、または浸透圧放出カプセル、または賦形剤の独特の組合せなどである。他の実施形態において、投薬形態物は、液体剤、局所用パッチ、ゲル、軟膏、クリーム、エアロゾル、または吸入配合物である。

本発明の組成物は、約０．５ｍｇ〜約２４０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１８０ｍｇ、または約１０ｍｇ〜約１２０ｍｇの本発明の超高純度な化合物（例えば、超高純度なアジュレム酸）を２４時間の期間にわたって送達するために配合される場合がある。

さらなる実施形態において、投薬形態物はさらなる薬剤を含むか、または、このさらなる薬剤を含む第２の投薬形態物と一緒に提供される。例示的なさらなる薬剤には、鎮痛剤、例えば、ＮＳＡＩＤまたはオピエートなど、抗炎症剤、あるいは天然薬剤、例えば、トリグリセリド含有不飽和脂肪酸または単離された純粋な脂肪酸、例えば、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ジホモガンマリノレン酸（ＤＧＬＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などが含まれる。さらなる実施形態において、投薬形態物はカプセルを有し、この場合、カプセルは、所望される持続放出配合物を提供するための材料の混合物を含有する。

投薬形態物は、半透過性被膜により被覆される錠剤を含むことができる。ある特定の実施形態において、錠剤は、超高純度なアジュレム酸を含有する層と、「プッシュ」層として示される第２の層との２つの層を有する。半透過性被膜は、流体（例えば、水）が錠剤に進入し、層を侵食することを可能にするために使用される。ある特定の実施形態において、この持続放出投薬形態物はさらに、被覆錠剤の中心に開けられるレーザー孔を有する。アジュレム酸または他の（３Ｒ，４Ｒ）−Δ８−テトラヒドロカンナビノール−１１−酸を含有する層は、アジュレム酸または別の（３Ｒ，４Ｒ）−Δ８−テトラヒドロカンナビノール−１１−酸、崩壊剤、粘性増強剤、結合剤、および浸透圧剤を有する。プッシュ層は、崩壊剤、結合剤、浸透圧剤、および粘性増強剤を有する。

別の態様において、本発明は、制御放出投薬形態物である超高純度アジュレム酸の投薬形態物を特徴とし、これにより、超高純度アジュレム酸の制御された放出が提供される。

さらなる実施形態において、投薬形態物は、生体適合性マトリックスおよび超高純度アジュレム酸を有する錠剤を有する。持続放出投薬形態物はまた、治療活性薬剤を含有するバイオポリマー微小球体を含有する硬質外皮カプセルを有する場合がある。生体適合性マトリックスおよびバイオポリマー微小球体はそれぞれ、薬物の放出および送達のための細孔を含有する。これらの細孔は、バイオポリマー微小球体の生体適合性マトリックスを細孔形成剤と混合することによって形成される。それぞれの生体適合性マトリックスまたはバイオポリマー微小球体が、生体適合性ポリマー、または生体適合性ポリマーの混合物から構成される。マトリックスおよび微小球体は、生体適合性ポリマーおよび活性薬剤（本明細書中に記載される化合物）を溶媒に溶解し、細孔形成剤（例えば、揮発性塩）を加えることによって形成させることができる。溶媒および細孔形成剤の蒸発により、活性化合物を含有するマトリックスまたは微小球体が提供される。さらなる実施形態において、持続放出投薬形態物は、超高純度アジュレム酸および１若しくはそれ以上のポリマーを含有し、かつ、超高純度アジュレム酸および１若しくはそれ以上のポリマーを圧縮することによって調製することができる錠剤を有する。いくつかの実施形態において、そのような１若しくはそれ以上のポリマーは、超高純度アジュレム酸と配合される吸湿性ポリマーを有する場合がある。水分にさらされたとき、錠剤は溶解し、膨潤する。この膨潤は、持続放出投薬形態物が上部ＧＩ管に留まることを可能にする。ポリマー混合物の膨潤速度を、種々の等級品のポリエチレンオキシドを使用して変化させることができる。

他の実施形態において、持続放出投薬形態物は、活性薬剤および結合剤の懸濁物により被覆される粒子コアをさらに有し、続いてポリマーにより被覆されるカプセルを有する。ポリマーは速度抑制ポリマーである場合がある。一般に、速度抑制ポリマーの送達速度は、活性薬剤が溶解させられる速度によって決定される。

超高純度アジュレム酸の様々な投薬形態物を対象に投与することができる。例示的な投薬形態物には、経口用投薬形態物（例えば、錠剤またはカプセル）、局所用投薬形態物（例えば、局所用パッチ、ゲル、および軟膏など）、眼用投薬形態物（例えば、点眼剤または液体配合物など）、介在性投薬形態物（例えば、液体配合物など）、および吸入型投薬形態物（例えば、吸入剤、噴霧剤、エアロゾル、およびスプレー剤など）が含まれる。

ある特定の実施形態において、超高純度アジュレム酸は、単回投薬量が１日１回での約０．５ｍｇ〜約１２０ｍｇであるか、または、１日３回まででの約０．１５ｍｇ〜約４０ｍｇである投薬形態物に配合される。

他の実施形態において、超高純度アジュレム酸は、単回投薬量が対象の体重１ｋｇにつき約０．０１ｍｇ〜約１．５ｍｇである投薬形態物に配合される。さらなる実施形態において、投薬形態物は、１日３回までで、かつ、対象の体重１ｋｇにつき約０．００３ｍｇから約０．５ｍｇまでで投与される。

本明細書中で使用される場合、用語「治療効果的な量」は、指定された障害または疾患を処置するために、あるいは代替では、障害または疾患を処置する薬理学的応答を得るために十分である量である。投与の最も効果的な手段および投薬量を決定する方法は、治療のために使用される組成物、治療の目的、処置されている標的細胞、および処置されている対象により変化する可能性がある。処置投薬量は一般に、安全性および効力を最適化するために決定される場合がある。単回または多数回の投与を、用量レベルおよび服用パターンが処置医によって選択されることにより行うことができる。好適な投薬配合物、および薬剤を投与する好適な方法は、当業者によって容易に決定することができる。例えば、組成物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇで投与される場合がある。本明細書中に記載される化合物が別の薬剤または治療法と同時に施されるとき、効果的な量が、当該薬剤が単独で使用されるときよりも少なくなる場合がある。

実施形態において、上記で議論される状態を防止するために、および／または処置するために本発明の方法において使用することができる治療剤のうちの１若しくはそれ以上が、医薬的に許容されるキャリア、ビヒクル、または補助剤とともに配合される。用語「医薬的に許容されるキャリア、ビヒクル、または補助剤」は、本発明の化合物と一緒に対象に投与されることがあるキャリア、ビヒクル、または補助剤で、治療量の当該化合物を送達するために十分である用量で投与されるときにその薬理学的活性を損なわず、かつ、非毒性であるものを示す。

化合物は、塩として、例えば、医薬的に許容される塩形態などとして配合される場合があり、これらには、下記の酸付加塩が含まれるが、それらに限定されない：無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、および硝酸など）により形成される酸付加塩、および、有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、マレイン酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、およびポリガラクツロン酸など、これらに限定されない）により形成される酸付加塩。医薬的に許容される塩にはまた、存在する酸性プロトンが無機塩基または有機塩基と反応することができるときに形成されることがある塩基付加塩が含まれる。好適な医薬的に許容される塩基付加塩には、金属塩、例えば、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、および亜鉛から作製される塩など、または第一級アミン、第二級アミンおよび第三級アミン、環状アミンを含む置換アミンを含む有機塩基から作製される塩、例えば、カフェイン、アルギニン、ジエチルアミン、Ｎ−エチルピペリジン、ヒスチジン、グルカミン、イソプロピルアミン、リシン、モルホリン、Ｎ−エチルモルホリン、ピペラジン、ピペリジン、トリエチルアミン、トリメチルアミンなどから作製される塩が含まれる。これらの塩のすべてが、例えば、適切な酸または塩基を本発明の化合物と反応させることにより本発明の対応する化合物から従来の手段によって調製される場合がある。Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ａｎｄ Ｕｓｅ（Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ & Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ編、Ｖｅｒｌａｇ Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ、２００２）［１］。

本発明の投薬形態物において使用されることがある医薬的に許容されるキャリア、補助剤、およびビヒクルには、下記のものが含まれるが、それらに限定されない：イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、自己乳化性薬物送達システム（ＳＥＤＤＳ）（例えば、ｄ−Ｅ−トコフェロールポリエチレングリコール１０００スクシナートなど）、薬学的投薬形態物において使用される界面活性剤（例えば、各種Ｔｗｅｅｎ、または他の類似するポリマー状送達マトリックスなど）、血清タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミンなど）、緩衝剤物質（例えば、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の不完全グリセリド混合物、水、塩など）、または電解質（例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩など）、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリラート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックコポリマー、ポリエチレングリコール、および羊毛脂。シクロデキストリン（例えば、アルファ−シクロデキストリン、ベータ−シクロデキストリン、およびγ−シクロデキストリンなど）、または化学修飾された誘導体（例えば、２−および３−ヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリンを含めて様々なヒドロキシアルキルシクロデキストリンなど）、あるいは他の可溶化された誘導体もまた、線維性状態の防止および／または処置のために本発明の方法において使用することができる本明細書中に記載される式の化合物の送達を高めるために都合良く使用される場合がある。さらなる好適な賦形剤が、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（Ｒ．Ｃ．Ｒｏｗｅ他、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ、２００９）［９］に見出される場合がある。ある特定の実施形態において、単位投薬配合物が即時放出のために調合され、だが、一方または両方の薬剤の遅延放出または持続放出のために調合される単位投薬配合物もまた開示される。

１つの実施形態において、本発明の方法において使用することができる２つ以上の治療剤は、これらの薬剤が異なる時間で投薬物から放出されるように単一の単位用量物で配合される。

別の実施形態において、例えば、治療剤のうちの１若しくはそれ以上が１日に１回または２回投与される場合、当該薬剤は、長期の放出を提供するために配合される。例えば、薬剤は腸溶性被覆とともに配合される。代替の実施形態において、薬剤は、二相性の徐放性送達システムを使用して配合され、それにより、長期の胃滞留を提供する。例えば、いくつかの実施形態において、送達システムは下記のものを含む：（１）大きい水溶性を有する医薬品と、１若しくはそれ以上の親水性ポリマー、１若しくはそれ以上の疎水性ポリマーおよび／または１若しくはそれ以上の疎水性材料（例えば、１若しくはそれ以上のワックス、脂肪アルコールおよび／または脂肪酸エステルなど）を含有する実質的に均一な顆粒から形成される内側の固体微粒子相、ならびに、（２）内側の固体微粒子相の上記顆粒が埋め込まれ、かつ、全体にわたって分散される外側の固体連続相で、１若しくはそれ以上の疎水性ポリマー、１若しくはそれ以上の疎水性ポリマーおよび／または１若しくはそれ以上の疎水性材料（例えば、１若しくはそれ以上のワックス、脂肪アルコールおよび／または脂肪酸エステルなど）を含み、錠剤に圧縮される場合があるか、またはカプセルに詰められる場合がある外側の固体連続相。いくつかの実施形態において、薬剤は、水を吸収したときに膨潤して、摂取様式の期間中での胃における投薬形態物の保持を促進させるために十分に大きいサイズになる親水性ポリマーから構成されるポリマーマトリックスに組み込まれる。

配合物における超高純度アジュレム酸は、速効性形態および徐放性形態の組合せとして配合される場合がある。例えば、超高純度アジュレム酸は単一の放出特性を伴って配合される。例えば、超高純度アジュレム酸は、改変放出型形態物、例えば、徐放性形態物には存在しない。

本発明の組成物は、３回の食事のそれぞれ、２回の主要な食事のそれぞれ、または１回の食事の直前に、あるいは、３回の食事のそれぞれ、２回の主要な食事のそれぞれ、または１回の食事とともに服用される場合がある。他の実施形態において、本明細書中に開示される組成物は１日１回または１日２回で投与することができ、食事の直前または食事とともに投与される必要はない。

本発明の方法において使用することができる本発明の投薬形態物は、経口投与、非経口投与、吸入スプレー、局所投与、直腸投与、腸管投与、鼻腔投与、口内投与、膣投与によって、または埋め込まれたリザーバーを介して、好ましくは、経口投与によって、または注射による投与によって投与される場合がある。本発明の医薬組成物は、どのようなキャリア、補助剤、またはビヒクルであれ、従来の非毒性の医薬的に許容されるキャリア、補助剤、またはビヒクルを含有する場合がある。場合により、配合物のｐＨが、配合された化合物またはその送達形態の安定性を高めるために、医薬的に許容される酸、塩基または緩衝剤により調節される場合がある。非経口の用語には、本明細書中で使用される場合、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液包内、胸骨内、クモ膜下腔内、病巣内、および頭蓋内への注射技術または注入技術が含まれる。

本発明の方法において使用することができる投薬形態物は、無菌の注射可能な調製物の形態である場合があり、例えば、無菌の注射可能な水性懸濁物または油性懸濁物としてである場合がある。この懸濁物は、好適な分散化剤または湿潤化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０など）および懸濁化剤を使用して、この技術分野において知られている技術に従って配合される場合がある。無菌の注射可能な調製物はまた、非経口的に許容される非毒性の希釈剤または溶媒における無菌の注射可能な溶液または懸濁物である場合があり、例えば、１，３−ブタンジオールにおける溶液としてである場合がある。用いられることがある許容され得るビヒクルおよび溶媒には、マンニトール、水、リンゲル液、および等張性塩化ナトリウム溶液が含まれる。加えて、無菌の固定油が、溶媒または懸濁用媒体として従来から用いられる。この目的のために、無刺激性の固定油はどれも用いられる場合があり、これには、合成されたモノグリセリドまたはジグリセリドが含まれる。天然の医薬的に許容される様々なオイル（例えば、オリーブ油またはひまし油など）が、それらのポリオキシエチル化体ではとりわけ、注射剤の調製において有用であるように、脂肪酸（例えば、オレイン酸およびそのグリセリド誘導体など）が注射剤の調製において有用である。これらのオイル溶液またはオイル懸濁物はまた、医薬的に許容される投薬形態物（例えば、エマルションおよび／または懸濁物など）の配合において一般に使用される長鎖アルコール系の希釈剤または分散剤、あるいはカルボキシメチルセルロースまたは同様な分散化剤を含有する場合がある。他の一般に使用されている界面活性剤、例えば、医薬的に許容される固体投薬形態物、液体投薬形態物または他の投薬形態物の製造において一般に使用される各種Ｔｗｅｅｎ若しくは各種Ｓｐａｎおよび／または他の類似する乳化剤あるいは生物学的利用能強化剤などもまた、配合目的のために使用される場合がある。

本発明の化合物または組成物は、例えば、投薬形態物における成分として経口投与される場合がある。投薬形態物は、どのようなキャリア、補助剤、またはビヒクルであれ、従来の非毒性の医薬的に許容されるキャリア、補助剤、またはビヒクルを含有する場合がある。場合により、配合物のｐＨが、配合された化合物またはその送達形態の安定性を高めるために、医薬的に許容される酸、塩基または緩衝剤により調節される場合がある。

本発明の投薬形態物は、いずれかの経口的に許容される投薬形態物で経口投与される場合があり、そのような投薬形態物には、カプセル、錠剤、エマルション、ならびに、水性の懸濁物、分散物、および溶液が含まれるが、これらに限定されない。経口使用のための錠剤の場合、一般に使用されるキャリアには、ラクトースおよびトウモロコシデンプンが含まれる。滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムなどもまた、典型的に加えられる。カプセル形態での経口投与のために、有用な希釈剤には、ラクトースおよび乾燥トウモロコシデンプンが含まれる。水性の懸濁物および／またはエマルション剤が経口投与されるとき、有効成分は、乳化剤および／または懸濁化剤と組み合わされる油相に懸濁または溶解される場合がある。所望されるならば、ある特定の甘味剤および／または香味剤および／または着色剤が加えられる場合がある。

本発明の投薬形態物はまた、直腸投与のための坐薬の形態で投与される場合がある。これらの組成物は、線維性状態の防止および／または処置のために本発明の方法において使用することができる本発明の化合物を、室温では固体であるが、直腸温度では液体であり、したがって、直腸において融解して、活性成分を放出することになる好適な非刺激性賦形剤と混合することによって調製することができる。そのような材料には、カカオバター、蜜ろう、およびポリエチレングリコールが含まれるが、これらに限定されない。

本発明の投薬形態物の眼投与が、所望される処置が眼適用によって容易にアクセス可能である領域または器官を伴うときには有用である。眼投与のために、組成物が、クリーム、軟膏、または液体点眼調製物の結膜嚢における滴注によって適用され得るかもしれない。

本発明の投薬形態物の局所投与が、所望される処置が局所適用によって容易にアクセス可能である領域または器官を伴うときには有用である。皮膚への局所適用のために、投薬形態物は、キャリアに懸濁または溶解される活性成分を含有する好適な軟膏とともに配合されなければならない。本発明の化合物の局所投与のためのキャリアには、鉱油、流動パラフィン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化用ワックス、および水が含まれるが、これらに限定されない。代替では、本発明の方法において使用することができる医薬組成物は、好適な乳化剤とともにキャリアに懸濁または溶解される活性成分を含有する好適なローションまたはクリームとともに配合することができる。好適なキャリアには、鉱油、ソルビタンモノステアラート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、および水が含まれるが、これらに限定されない。本発明の医薬組成物はまた、直腸坐薬配合物によって、または好適な浣腸配合物で下部腸管に局所適用される場合がある。局所用経皮パッチもまた、本発明において含まれる。

本発明の方法において使用することができる本発明の投薬形態物は、鼻腔エアロゾルまたは鼻腔吸入によって投与される場合がある。そのような組成物が、医薬品配合の技術分野において広く知られている技術に従って調製され、また、ベンジルアルコールまたは他の好適な保存剤、生物学的利用能を高めるための吸収促進剤、フルオロカーボン、および／またはこの技術分野において知られている他の可溶化剤若しくは分散化剤を用いて、生理的食塩水における溶液として調製される場合がある。

本発明の投薬形態物が、本明細書中に記載される式の化合物と、１若しくはそれ以上のさらなる治療剤または予防剤との組合せを有するとき、当該化合物および当該さらなる薬剤はともに、単独療法による療法で通常の場合には投与される投薬量の約１％〜１００％の間、より好ましくは約５％〜９５％の間での投薬量レベルで存在しなければならない。さらなる薬剤は、多回服用療法の一部として、本発明の化合物とは別に投与される場合がある。代替では、それらの薬剤は、単一組成物において本発明の化合物と一緒に混合される単回投薬形態物の一部である場合がある。

ある特定の実施形態において、本発明の方法において使用することができる投薬形態物は、所望される持続放出を提供するための材料の混合物を有するカプセルを有する。

他の実施形態において、本発明の方法において使用することができる投薬形態物は、半透過性被膜により被覆される錠剤を有する。ある特定の実施形態において、錠剤は、超高純度なアジュレム酸を含有する層と、「プッシュ」層として示される第２の層との２つの層を有する。半透過性被膜は、流体（例えば、水）が錠剤に進入し、層を侵食することを可能にするために使用される。ある特定の実施形態において、この持続放出投薬形態物はさらに、被覆錠剤の中心に開けられるレーザー孔を有する。超高純度アジュレム酸を含有する層は、超高純度アジュレム酸、崩壊剤、粘性増強剤、結合剤、および浸透圧剤を有する。プッシュ層は、崩壊剤、結合剤、浸透圧剤、および粘性増強剤を有する。

さらなる実施形態において、本発明の方法において使用することができる投薬形態物は、生体適合性マトリックスおよび超高純度アジュレム酸を有する錠剤を有する。持続放出投薬形態物はまた、治療活性薬剤を含有するバイオポリマー微小球体を含有する硬質外皮カプセルを有する場合がある。生体適合性マトリックスおよびバイオポリマー微小球体はそれぞれ、薬物の放出および送達のための細孔を含有する。これらの細孔は、生体適合性マトリックスまたはバイオポリマー微小球体を細孔形成剤と混合することによって形成される。それぞれの生体適合性マトリックスまたはバイオポリマー微小球体が、生体適合性ポリマー、または生体適合性ポリマーの混合物から構成される。マトリックスおよび微小球体は、生体適合性ポリマーおよび活性薬剤（本明細書中に記載される化合物）を溶媒に溶解し、細孔形成剤（例えば、揮発性塩）を加えることによって形成させることができる。溶媒および細孔形成剤の蒸発により、活性化合物を含有するマトリックスまたは微小球体が提供される。

本発明の方法において使用することができる持続放出投薬形態物は、超高純度アジュレム酸および１若しくはそれ以上のポリマーを含有し、かつ、超高純度アジュレム酸および１若しくはそれ以上のポリマーを圧縮することによって調製することができる錠剤を有する。いくつかの実施形態において、そのような１若しくはそれ以上のポリマーは、超高純度アジュレム酸活性薬剤（すなわち、本明細書中に記載される化合物）と配合される吸湿性ポリマーを有する場合がある。水分にさらされたとき、錠剤は溶解し、膨潤する。この膨潤は、持続放出投薬形態物が上部ＧＩ管に留まることを可能にする。ポリマー混合物の膨潤速度を、種々の等級品のポリエチレンオキシドを使用して変化させることができる。

他の実施形態において、本発明の方法において使用することができる持続放出投薬形態物は、活性薬剤および結合剤の懸濁物により被覆される粒子コアをさらに有し、続いてポリマーにより被覆されるカプセルを有する。ポリマーは速度抑制ポリマーである場合がある。一般に、速度抑制ポリマーの送達速度は、活性薬剤が溶解させられる速度によって決定される。

カプセルの限定されない例には、ゼラチンカプセル、ＨＰＭＣ、硬質外皮、軟質外皮、または持続放出混合物を収容するためのいずれかの他の好適なカプセルが含まれるが、これらに限定されない。

上記の持続放出投薬形態物において使用される溶媒には、酢酸エチル、トリアセチン、ジメチルスルホキシド（ＤＩＶ１Ｓ０）、炭酸プロピレン、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、エチルアルコール、ベンジルアルコール、グリコフロール、アルファ−トコフェロール、Ｍｉｇｌｙｏｌ８１０、イソプロピルアルコール、フタル酸ジエチル、ポリエチレングリコール４００（ＰＥＧ４００）、クエン酸トリエチル、および安息香酸ベンジルが含まれるが、これらに限定されない。

上記の持続放出投薬形態物において使用される粘性改変剤には、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド（Ｍｉｇｌｉｏｌ８１０）、ミリスチン酸イソプロピル（ＩＰＭ）、オレイン酸エチル、クエン酸トリエチル、フタル酸ジメチル、安息香酸ベンジル、およびポリエチレンオキシドの様々な等級品が含まれるが、これらに限定されない。上記の持続放出投薬形態物において使用される高粘性液体キャリアには、ショ糖酢酸イソ酪酸エステル（ＳＡＩＢ）および酢酸酪酸セルロース（ＣＡＢ）３８１−２０が含まれるが、これらに限定されない。

好ましい半透過性層を構成する材料の限定されない例には、セルロース系ポリマー、例えば、酢酸セルロース、セルロースアシラート、セルロースジアシラート、セルローストリアシラート、二酢酸セルロース、三酢酸セルロース、またはそれらのいかなる混合物など、エチレン酢酸ビニルコポリマー、ポリエチレン、エチレンのコポリマー、ポリオレフィン（エチレンオキシドコポリマー（例えば、Ｅｎｇａｇｅ（登録商標）−Ｄｕｐｏｎｔ Ｄｏｗ Ｅｌａｓｔｏｍｅｒｓ）を含む）、ポリアミド、セルロース系材料、ポリウレタン、ポリエーテルブロック化アミド、およびコポリマー（例えば、ＰＥＢＡＸ（登録商標）、セルロース系酢酸酪酸エステルおよびポリ酢酸ビニル）が含まれるが、これらに限定されない。上記の持続放出投薬形態物において用いられることがある崩壊剤の限定されない例には、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、アルギン酸ナトリウム、または類似する賦形剤が含まれるが、これらに限定されない。

上記の持続放出投薬形態物において用いられることがある結合剤の限定されない例には、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルアルキルセルロース、またはポリビニルピロリドンが含まれるが、これらに限定されない。

上記の持続放出投薬形態物において用いられることがある浸透圧剤の限定されない例には、ソルビトール、マンニトール、塩化ナトリウム、または他の塩が含まれるが、これらに限定されない。上記の持続放出投薬形態物において用いられることがある生体適合性ポリマーの限定されない例には、ポリ（ヒドロキシル酸）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、ポリアルキレンテレフタラート、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリハロゲン化ビニル、ポリビニルピロリドン、ポリシロキサン、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（酢酸ビニル）、ポリスチレン、ポリウレタンおよびそのコポリマー、合成セルロース、ポリアクリル酸、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、およびポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、エチレン酢酸ビニル、それらのコポリマーおよびブレンド物が含まれるが、これらに限定されない。

上記の持続放出投薬形態物において用いられることがある吸湿性ポリマーの限定されない例には、ポリエチレンオキシド（例えば、４，０００，０００〜１０，０００，０００の分子量を有するｐｏｌｙｏｘ（登録商標））、セルロースヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、架橋ポリアクリル酸、およびキサンタムガムが含まれるが、これらに限定されない。

上記の持続放出投薬形態物において用いられることがある速度抑制ポリマーの限定されない例には、ポリマー状アクリラート、メタクリラートラッカーまたはその混合物、ポリマー状アクリラートラッカー、メタクリラートラッカー、アクリル酸エステルおよびメタクリル酸エステルのコポリマーを有するアクリル樹脂、または可塑剤を伴うメタクリル酸アンモニウムラッカーが含まれるが、これらに限定されない。

キット
本明細書中に記載される投薬形態物はキットにおいて提供される場合がある。キットは、（ａ）本明細書中に記載される方法において使用される化合物と、必要な場合には、（ｂ）情報提供物とを含む。情報提供物は、本明細書中に記載される方法および／または本明細書中に記載される方法のための投薬形態物の使用に関する記述物、説明物、販売用資料、または他のものであることが可能である。

キットの情報提供物はその形態において限定されない。１つの実施形態において、情報提供物は、当該化合物の製造、当該化合物の分子量、濃度、使用期限に関する情報、回分処理または製造地の情報、およびその他を含むことができる。１つの実施形態において、情報提供物は、当該化合物を投与するための方法に関連する。

１つの実施形態において、情報提供物は、本明細書中に記載される化合物を、本明細書中に記載される方法を行うための好適な様式で、例えば、本明細書中に記載される化合物を製造するために反応を行うための好適な様式で使用するための説明書を含むことができる。

キットの情報提供物はその形態において限定されない。多くの場合において、情報提供物、例えば、説明書が、印刷物で、例えば、印刷された文面、図面、および／または写真、例えば、ラベルまたは印刷シートで提供される。しかしながら、情報提供物はまた、他の形式で、例えば、Ｂｒａｉｌｌｅ点字、コンピューター読み取り可能物、ビデオ記録、または音声記録などで提供することができる。別の実施形態において、キットの情報提供物は、キットの使用者が、本明細書中に記載される化合物および／または本明細書中に記載される方法におけるその使用に関する実質的情報を得ることができる連絡先情報、例えば、実際の住所、電子メールアドレス、ウエブサイト、または電話番号である。当然のことではあるが、情報提供物はまた、様々な形式のどのような組合せでも提供されることが可能である。

本明細書中に記載される投薬形態物に加えて、キットの組成物は他の成分を含むことができ、例えば、溶媒または緩衝剤、安定剤、保存剤、香味矯臭剤（例えば、苦いアンタゴニストまたは甘味剤）、芳香剤、色素または着色剤、例えば、キットにおける１若しくはそれ以上の成分を染めるための、または着色するための色素または着色剤、あるいは他の化粧用成分、および／または、本明細書中に記載される状態若しくは障害を処置するための第２の薬剤などを含むことができる。代替では、そのような他の成分は、キットにおいて、しかし、本明細書中に記載される化合物とは異なる組成物または容器において含まれることが可能である。そのような実施形態において、キットは、本明細書中に記載される化合物およびそのような他の成分を混合するための説明書、または本明細書中に記載される化合物をそのような他の成分と一緒に使用するための説明書を含むことができる。

いくつかの実施形態において、キットの成分は、不活性な条件のもとで（例えば、窒素または別の不活性ガス（例えば、アルゴンなど）のもとで）貯蔵される。いくつかの実施形態では、キットの成分は、（例えば、乾燥剤とともに）無水条件のもとで貯蔵される。いくつかの実施形態では、キットの成分は遮光容器（例えば、琥珀色バイアルなど）において貯蔵される。

本明細書中に記載される投薬形態物はどのような形態でも提供されることが可能であり、例えば、液体形態、乾燥形態、または凍結乾燥形態で提供されることが可能である。本明細書中に記載される化合物は実質的に純粋および／または無菌であることが好ましい。本明細書中に記載される化合物が液体溶液で提供されるとき、液体溶液は好ましくは水溶液であり、無菌の水溶液が好ましい。本明細書中に記載される化合物が乾燥形態で提供されるとき、再構成が一般には、好適な溶媒の添加によって行われる。当該溶媒（例えば、無菌水または無菌の緩衝液）を必要な場合にはキットにおいて提供することができる。

キットは、本明細書中に記載される投薬形態物を含有する組成物のための１若しくはそれ以上の容器を含むことができる。いくつかの実施形態において、キットは、別個の容器、仕切り、または区画を組成物および情報提供物のために含有する。例えば、組成物を、びん、バイアル、またはシリンジにおいて含有することができ、情報提供物をビニール袋またはパケットにおいて含有することができる。他の実施形態において、キットの別々の要素が、仕切りのない１つの容器の中に含有される。例えば、投薬形態物が、ラベルの形態での情報提供物が貼付されているびん、バイアル、またはシリンジに含有される。いくつかの実施形態において、キットは、本明細書中に記載される化合物の１若しくはそれ以上の単位投薬形態物（例えば、本明細書中に記載される投薬形態物）をそれぞれが含有する複数（一包み）の個別容器を含む。例えば、キットは、本明細書中に記載される投薬形態物の単一の単位用量物をそれぞれが含有する複数のシリンジ、アンプル、ホイルパケット、またはブリスターパックを含む。

キットの容器は、気密性、防水性（例えば、水分または蒸発における変化に対して不浸透性）、および／または光非透過性であることが可能である。

キットは必要な場合には、投薬形態物の使用のために好適であるデバイスを含み、例えば、シリンジ、ピペット、鉗子、計量スプーン、スワブ（例えば、綿スワブまたは木製スワブ）、またはいずれかのそのようなデバイスを含む。

したがって、具体的な様々な組成物および超高純度なテトラヒドロカンナビノール−１１−酸が開示されている。本発明の数多くの実施形態が記載されている。それにもかかわらず、様々な改変が、本発明の精神および範囲から逸脱することなく行われることがあることが理解されるであろう。したがって、他の様々な実施形態が下記の特許請求項の範囲内である。しかしながら、当業者には、既に記載されている改変のほかにはるかに多くの改変が、本明細書中における発明的概念から逸脱することなく可能であることが明らかであるはずである。したがって、本発明の主題は、本開示の精神における場合を除いて限定されることはない。本明細書中で言及されるすべての特許、特許公開物、および刊行物は、これらの刊行物が関連において引用される方法および／または材料を開示するために、また記載するために、それらの全体において参照によって本明細書中に組み込まれる。本明細書中で議論される刊行物は、本出願の出願日前におけるそれらの開示のためにだけ提供される。本明細書中のいかなる部分も、本発明には、そのような刊行物に先行する資格がないことを先行発明によって認めるものとして解釈されることはない。

下記の実施例は、本発明のある特定の好ましい実施形態および態様を明らかにするために、また、さらに例示するために提供されており、本発明の範囲を限定するものとして解釈されることはない。

ＣＢ１およびＣＢ２に関しての超高純度ＡＪＡの評価
超高純度なアジュレム酸（ＪＢＴ−１０１）を合成し、ＣＢ１受容体およびＣＢ２受容体に対するその結合を以前の調製物の結合と比較した。

超高純度ＡＪＡに関して、著しい違いが、ＣＢ１およびＣＢ２に関してのそのＫ_ｉにおいて存在する。１つの具体的な実施形態において、図９に示されるように、ＣＢ２についての超高純度ＡＪＡの結合親和性が、ＣＢ１についての結合親和性よりも約１０Ｘ〜２０Ｘ大きい。比較のために、図９には、様々な他のＫｉおよびＫｉ（ＣＢ１）／Ｋｉ（ＣＢ２）比が様々な他のカンナビノイドおよび他の以前に合成的に製造されたＡＪＡについて示される［１０、１１］。

同じ研究におけるＡＪＡ対ＴＨＣの直接比較
１．結合−ＣＢ１／ＣＢ２＊ ＣＢ２結合は、向精神性作用を伴うことなく抗炎症性影響および抗線維性影響を媒介するようであるので非常に望ましい性質である。

２．リング試験−脳のレベルにおけるＣＢ１アゴニスト活性によって媒介される向精神性影響として一般に受け入れられるカタレプシー応答。それぞれの化合物を様々な治療的用量で試験した［１１］。

３．インビボでのガン。ＡＪＡは、ＴＨＣによってもたらされる阻害よりも大きい、腫瘍成長の小さいが、有意な阻害を示す。選ばれた用量は抗炎症性範囲であった［１２］。

４．ＰＫデータ。ＡＪＡはいくらかのカンナビノイド様ＣＮＳ活性をより大きい用量で示す一方で、優れた治療指数を他のカンナビノイド化合物と比較して示す。これは、比較的低下したＣＮＳ浸透を反映しているかもしれない［３］。そのうえ、薬物動態学的分析は、いくらかの脳内浸透がラットにおいて認められるにもかかわらず、脳内浸透は幾分か限定されることを示している。これは、脳におけるピークレベルが、ピークでの薬力学的時点で測定される場合、血漿において見られるレベルのほんの２５％〜３０％に達するからである。このことは、著しくより大きい相対的な脳内浸透を示すＷＩＮ５５，２１２−２およびＴＨＣにより認められるプロフィル（脳内レベルが、血漿において見られるレベルの１００％〜１９０％に達する）とは対照的である。これらのデータは、ＡＪＡが神経障害性疼痛患者における疼痛スコアを大麻様の向精神性有害事象の非存在下で低下させることが見出されたヒトにおける近年の知見を補うものである［１３］。

ＣＢ１受容体およびＣＢ２受容体に対する超高純度ＡＪＡの活性の研究
超高純度なアジュレム酸（ＪＢＴ−１０１）を、マウスにおけるその薬理学的影響について、同様にまた、ＣＢ１およびＣＢ２のカンナビノイド受容体の機能的なインビトロ活性化について評価した。

具体的には、ＪＢＴ−１０１を、［３５Ｓ］ＧＴＰγＳターンオーバーをインビトロでのＣＢ１受容体およびＣＢ２受容体において刺激するその能力について評価した。この化合物はまた、ホットプレートアッセイでのその抗侵害受容影響について、また、リング不動性試験でのカタレプシー影響について、ともにメスのＣＤ−１マウスにおいて評価された。直腸温度もまたこれらのマウスにおいて測定した。

使用された方法の概論
抗侵害受容のためのホットプレート試験
ホットプレート試験を使用して、超高純度ＡＪＡおよび他の薬理学的薬剤の鎮痛活性を、マウスがその前足を舐める反応時間、および／または、５４℃〜５６℃に加熱され、かつ、その温度で維持されるアルミニウム製ホットプレートに置かれた後で飛び跳ねる反応時間に基づいて測定した。Ｋｉｔｃｈｅｎ ＩおよびＧｒｅｅｎ ＰＧ、Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＤＦＰ Ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｎ Ｏｐｉｏｉｄ Ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ、Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．、３３：６６９−６７２（１９８３）。この試験は、ＣＢ１アゴニスト活性を測定することが示されている。

アルミニウム表面を、水を金属内の通路に循環することによって５５℃±１℃で維持した。透明なプラスチック円筒（１８ｃｍの直径および２６ｃｍの高さ）を表面に置いて、逃亡を阻止した。終点を、マウスが、後足を舐めることを行ったか、または表面から飛び跳ねたかのどちらかである時間とした；どのような場合でも、動物は、３０秒を超えてプレートの上に置かなかった。マウスは２回以上は決して使用しなかった；コントロール値および試験値を、例えば、３時間離して測定した。超高純度ＡＪＡおよび他の試験化合物をホットプレート試験の約９０分前に経口投与した。応答時間（潜伏時間）におけるパーセント変化を、コントロール値の平均を試験値の平均と比較することによって計算し、統計学的有意性をペアードｔ検定によって求めた。

用量応答を０．０５ｍｇ／ｋｇ〜５６ｍｇ／ｋｇの用量で超高純度ＡＪＡについて行った。超高純度ＡＪＡは、米国特許第５，３３８，７５３号明細書から得られるＡＪＡよりもはるかに大きい用量を、痛覚消失を認めるためには必要とした。

カタレプシー影響の測定
カタレプシー応答を、Ｐｅｒｔｗｅｅによって記載されるリング試験を使用して測定した（Ｐｅｒｔｗｅｅ ＲＧ、Ｔｈｅ Ｒｉｎｇ Ｔｅｓｔ．Ａ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｃａｔａｌｅｐｔｉｃ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｃａｎｎａｂｉｓ ｉｎ Ｍｉｃｅ、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、４６：７５３−７６３（１９７２））。マウスを、１６ｃｍの垂直の棒に取り付けられる直径が５．５ｃｍの水平のワイヤリングに載せた。後足および前足をリングの反対側に置いた。周囲温度を３０℃で維持し、環境は聴覚刺激および明るい光が除かれていた。応答を、マウスが５分の試験期間にわたって不動であった時間の割合として計算した。

用量応答を０．０５ｍｇ／ｋｇ〜５６ｍｇ／ｋｇの経口用量に対して超高純度ＡＪＡについて行った。超高純度ＡＪＡは、米国特許第５，３３８，７５３号明細書から得られるＡＪＡ（３ａ）よりもはるかに大きい用量を、カタレプシーを認めるためには必要とした。

ＧＴＰ−ガンマ−Ｓアッセイ
ＣＢ１受容体またはＣＢ２受容体がアゴニストによって活性化されるとき、Ｇタンパク質アルファサブユニットの親和性がＧＤＰに対してＧＴＰに関して増大する。結果として、ＧＤＰがＧタンパク質から追い出され、ＧＴＰまたはＧＴＰγＳが結合する。放射性標識（例えば、［^３５Ｓ］など）がＧＴＰγＳ分子に結合するならば、Ｇタンパク質／［^３５Ｓ］ＧＴＰγＳ複合体の形成を、液体シンチレーション分光光度法を使用して直接に測定することができる。Ｗｅｉｌａｎｄ他（１９９４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、２３７：３−１３。Ｇｒｉｆｆｉｎ他、ＰＥＴ、２８５：５５３−５６０、１９９８。

ＧＴＰ−ガンマ−Ｓアッセイを使用して、ヒトのＣＢ１受容体およびＣＢ２受容体に対するＡＪＡの機能的活性化を研究し、ＣＢ２受容体についての超高純度ＡＪＡの選択性をさらに求めた。図１３に示されるように、ＧＴＰ−ガンマ−Ｓアッセイにおける超高純度ＡＪＡの効力は、ＣＢ１アッセイの場合よりもＣＢ２アッセイにおいて約１０Ｘ良好であった。このことは、ＣＢ１に対してＣＢ２についての超高純度ＡＪＡの改善された選択性を裏づけている。

実験の詳細
インビトロ機能的アッセイのためのストック溶液の調製
インビトロ機能的アッセイのために、ＪＢＴ−１０１のストック溶液をエタノールまたはＤＭＳＯにおいて調製した。

インビボ試験のための溶液の調製
Δ^９−ＴＨＣ［Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｎ Ｄｒｕｇ Ａｂｕｓｅ（ＮＩＤＡ）、メリーランド州Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ］、インドメタシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）、およびＪＢＴ−１０１をピーナッツ油またはベニバナ油（食品等級）のビヒクルに溶解した。化合物を経口胃管法により２０μｌ／ｋｇの体積で投与した。

カンナビノイド受容体におけるインビトロ機能的アッセイ
材料および方法
ＣＢ１受容体アッセイおよびＣＢ２受容体アッセイは、ＨＥＫ−２９３発現系から単離される、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ（マサチューセッツ州Ｗａｌｔｈａｍ）から購入される膜調製物を伴う。試験化合物のＧタンパク質共役シグナル伝達（ＧＴＰ−γ−［３５Ｓ］）アッセイを、０．４ｍＬのアッセイ緩衝液（５０ｍＭ ＴＲＩＳ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．５％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ）における試験化合物（２５０ｎＭ〜１ｍＭ）、ＧＤＰ（２０μＭ）、ＧＴＰ−γ−［３５Ｓ］（１００ｐＭ）、ならびに、ｈＣＢ１膜調製物およびｈＣＢ２膜調製物（０．４ｐＭ）から成るインキュベーション混合物において行った。非特異的結合を１００μＭの非標識ＧＴＰ−γ−Ｓの存在下で求め、基礎的結合を薬物の非存在下で求めた。二連のサンプルを３０℃で１時間インキュベーションし、結合した複合体を前記のような反応混合物からろ過し、液体シンチレーションカウンターで計数した。特異的結合を、非特異的結合を総結合から引き、総基礎的結合−非特異的結合によって除することによって計算した。データをプロットし、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、カリフォルニア州Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ）を用いて分析した。

インビトロアッセイ：結果および考察
ＣＰ５５９４０（陽性コントロール）は、ＧＴＰ−γ−３５Ｓターンオーバーを、ｈＣＢ１受容体およびｈＣＢ２受容体の両方を介してｎＭ濃度で刺激した（表２；ＣＢ１についてはＥＣ５０＝９．９９±２．５ｎＭ、ＣＢ２についてはＥＣ５０＝３．９６±１．３ｎＭ）。これらの結果は、ＣＰ５５，９４０がこれらのＧタンパク質共役受容体部位においてアゴニストとして作用することを示している（図１３、上段パネル）。ＪＢＴ−１０１もまた、ＧＴＰ−γ−３５Ｓターンオーバーを、両方のカンナビノイド受容体を介して刺激し、しかし、はるかにより小さい効力により刺激した（図１３、下段パネル）。ＣＢ１受容体におけるＪＢＴ−１０１についてのＥＣ５０が９２０９±２０４２ｎＭであり、これに対して、ＣＢ２受容体におけるＥＣ５０が１０２０±９２ｎＭであった（表２）。ＣＢ１受容体に対してＣＢ２受容体の活性化についての効力における９倍の差は、ＣＢ２受容体と結合することについてのこの化合物の１２倍の選択性と一致しており、このことは、ＪＢＴ−１０１が、ＣＢ１受容体において活性でない用量でＣＢ２受容体を活性化するであろうことを示唆している。

マウスでのインビボ試験
被験体
Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ（ノースカロライナ州Ｒａｌｅｉｇｈ）から得られるメスのＣＤ−１マウス（２０ｇ〜２５ｇ）を、ホットプレート侵害受容アッセイ、直腸温度アッセイ、およびリング不動性アッセイにおける評価のために使用した。別々のマウスを、それぞれの化合物のそれぞれの用量をこの一連の手順で試験するために使用した。マウスは、そのホームケージに居るときには餌および水を自由に取ることができた。すべての動物を、１２時間の明暗サイクル（午前７時に照明開始）を伴う温度制御された（２０℃〜２２℃）環境で飼育した。

インビボ方法
それぞれのマウスを一連の３つの試験で試験した。この場合、試験では、カンナビノイドＣＢ１アゴニストにより、マウスにおけるインビボ影響（Ｍａｒｔｉｎ他、１９９１）、抗侵害受容（ホットプレートアッセイ）、低下した直腸温度およびリング不動性がもたらされる。試験化合物の投与に先立って、直腸温度およびホットプレート試験でのベースライン潜伏時間をマウスにおいて測定した。後者の手順では、マウスを５５℃の設定での加熱された表面（マウス低温／高温プレート痛覚消失装置、Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ、イリノイ州Ｗｏｏｄ Ｄａｌｅ）に置くことが伴った。マウスが足を上げるか、または舐めるまでの時間を測定し、測定後、マウスを装置から除いた。マウスが３０秒以内に足を上げなかったか、または舐めなかったならば、マウスを装置から除き、３０秒の潜伏時間を記録した。ベースラインにおける温度およびホットプレート潜伏時間の測定の後、マウスにはビヒクルまたは薬物を経口胃管法により投与した。ホットプレート潜伏時間および温度を、ピーナッツ油ビヒクルまたはＪＢＴ−１０１の（経口胃管法による）投与の９０分後に、あるいは、Δ９−ＴＨＣまたはインドメタシンの（経口胃管法による）投与の６０分後に再び測定した。続いて、マウスを、１６ｃｍの高さでリングスタンドに取り付けられる５．５ｃｍのリングに載せ、動物が５分の期間の期間中に動かないままであった時間の量を記録した。加えて、マウスがリングから落ちたか、または飛び降りた回数を記録した。動物マウスが５回を超えてリングから落ちたならば、試験を終了した。

データ分析
直腸温度の値を、（注入前の）コントロール温度と薬物投与後の温度との差（Δ℃）として表した。抗侵害受容を、下記のように３０秒最大試験潜伏時間を使用してパーセント最大可能影響（ＭＰＥ）として表した：［（試験−コントロール）／（３０−コントロール）］×１００。カタレプシーについての評価の期間中、マウスがリング装置の上で動かないままであった時間（秒単位）の総量（呼吸およびひげ運動については除く）を測定し、カタレプシー様行動の目安として使用した。この値を３００ｓによって除し、１００を乗じて、パーセント不動性を得た。マウスが５回を超えてリングから落ちたならば、試験を終了し、当該マウスについてのリング不動性データは分析において含まれなかった。別々の被験体間ＡＮＯＶＡｓを使用して、それぞれの測定を分析した。コントロール（ビヒクル）からの有意な差を、必要に応じてチューキー事後検定（α＝０．０５）によりさらに分析した。

インビボ試験：結果および考察
コントロール試験により、ピーナッツ油ビヒクル（陰性コントロール）はこれら３つの試験（ホットプレート、直腸温度、およびカタレプシー）のいずれにおいても活性でなかったことが明らかにされた［図１４、図１５、および図１６、それぞれのパネルの左側］。インドメタシンの３０ｍｇ／ｋｇの用量もまた、有意な影響をこれら３つの測定のいずれにも及ぼさなかった。対照的に、３０ｍｇ／ｋｇおよび／または１００ｍｇ／ｋｇの経口用量において、Δ９−ＴＨＣ（陽性コントロール）は、それぞれの測定をビヒクル条件と比較した場合、有意な抗侵害受容［１００ｍｇ／ｋｇのみ；Ｆ（９，５０）＝５．７１、ｐ＜０．０５、図１５］、リング不動性［両方の用量；Ｆ（９，４８）＝２１．１８、ｐ＜０．０５、図１４］、および低体温［両方の用量；Ｆ（９，５０）＝１５．０８、ｐ＜０．０５、図１６］をもたらした。ＪＢＴ−１０１を、０．０５ｍｇ／ｋｇから５６ｍｇ／ｋｇにまで及ぶ経口用量でこれら３つのインビボ試験で評価した。試験された用量のどれも、ホットプレート試験における有意な抗侵害受容をもたらさず（図１５、右側）、また、直腸温度における有意な変化をもたらさなかった（図１６、右側）。３０ｍｇ／ｋｇおよび５６ｍｇ／ｋｇの経口用量において、ＪＢＴ−１０１は、ビヒクル条件と比較した場合、カタレプシー試験におけるパーセントリング不動性を有意に増大させた（図１４、右側。Ｆ（９，４８）＝２１．１８、ｐ＜０．０５］。増大の大きさは３０ｍｇ／ｋｇおよび５６ｍｇ／ｋｇの用量において類似しており、Δ９−ＴＨＣの３０ｍｇ／ｋｇの用量で認められる増大に近かった。ＪＢＴ−１０１のより低い用量（最大で１０ｍｇ／ｋｇ）はこの測定に影響を及ぼさなかった。

まとめると、マウスにおけるホットプレート試験および直腸温度試験においてＪＢＴ−１０１（０．０５ｍｇ／ｋｇ〜５６ｍｇ／ｋｇ）によってもたらされる影響のパターンは、Δ９−ＴＨＣ（本研究；Ｍａｒｔｉｎ他、１９９１）および他の精神活性カンナビノイド（アミノアルキルインドール類（Ｃｏｍｐｔｏｎ他、１９９２ａ）、二環性カンナビノイド（Ｃｏｍｐｔｏｎ他、１９９２ｂ）、ならびにインドール由来カンナビノイドおよびピロール由来カンナビノイド（Ｗｉｌｅｙ他、１９９８；Ｗｉｌｅｙ他、２０１２）を含む）によって示されるパターンと似ていなかった。ＪＢＴ−１０１はリング不動性をより大きい用量（３０ｍｇ／ｋｇおよび５６ｍｇ／ｋｇ）で増大させ、大きさが、３０ｍｇ／ｋｇのΔ９−ＴＨＣによってもたらされる大きさと類似していたにもかかわらず、薬力学的影響のその全体的パターンはΔ９−ＴＨＣ様の精神活性を示唆していなかった。

要約
ＪＢＴ−１０１（超高純度アジュレム酸）によってもたらされる薬理学的影響のプロフィルは、アジュレム酸の以前に報告された影響と著しく異なる。以前に合成された（精製されていない）アジュレム酸は効力を（Ｗｉｌｅｙ（２００５）において総説される）痛みおよび炎症のいくつかの前臨床モデルにおいて示している；しかしながら、これはまた、Δ９−ＴＨＣおよび他の精神活性なＣＢ１受容体アゴニストに特徴的であるインビボでの薬理学的影響のプロフィルをもたらした。これらの影響には、マウスにおける自発的活動の抑制、抗侵害受容、低体温、およびカタレプシー、ならびにラットにおけるΔ９−ＴＨＣ様の判別可能な刺激影響（Ｖａｎｎ他、２００７）が含まれた。これらの影響は、これらのより初期のアジュレム酸合成産物によって示される良好なＣＢ１受容体結合親和性と一致している：Ｎｏｖａｒｔｉｓ化合物についてはＫｉ＝５．７ｎＭ（Ｄｙｓｏｎ他、２００５）、ＨＵ−２３９についてはＫｉ＝３２．３ｎＭ（Ｐｅｒｔｗｅｅ他、２０１０）。さらに、これらの化合物についてのＣＢ１／ＣＢ２結合の比率が低かった（０．１０および０．１９、それぞれ）。対照的に、ＪＢＴ−１０１は、ＣＢ１受容体（Ｋｉ＝６２８±６ｎＭ）と比較した場合、ＣＢ２受容体における１２倍を超える選択的結合親和性（Ｋｉ＝５１±１１ｎＭ）を示した。本明細書中に示されるように、ＪＢＴ−１０１はまた、ＣＢ１受容体と比較した場合、ＣＢ２受容体の活性化についての類似する選択性を示した。そのうえ、５６ｍｇ／ｋｇ（ｐ．ｏ．）までの用量において、Δ９−ＴＨＣおよび他の精神活性カンナビノイドの投与の後で特徴的に認められる行動影響が、超高純度アジュレム酸に関しては最小限に認められた。ＪＢＴ−１０１はリング不動性を増大させたが、より大きい用量（３０ｍｇ／ｋｇおよび５６ｍｇ／ｋｇ）においてのみであった。まとめると、これらの結果は、ＪＢＴ−１０１の影響が（非精製の）アジュレム酸のより初期の合成物の影響とは異なることを明らかにする。結論として、ＪＢＴ−１０１の薬理学的プロフィルは、ＪＢＴ−１０１が、ＣＢ１受容体活性をほとんど有しないＣＢ２選択的化合物であることと一致している。

ＣＢ２およびＣＢ１についての選択されたカンナビノイドの結合曲線
図１２は、超高純度ＡＪＡ、ならびに、ＣＢ２およびＣＢ１に対して選択的な参照カンナビノイドアンタゴニストについての結合曲線を示す。

ＣＢ受容体結合アッセイ
膜の調製−ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞をＡＴＣＣ（バージニア州Ｍａｎａｓｓａｓ）の指針に従って培養し、Ｐｏｌｙｆｅｃｔ（Ｑｉａｇｅｎ、カリフォルニア州Ｖａｌｅｎｃｉａ）またはＦｕｇｅｎｅ（Ｒｏｃｈｅ、ニュージャージー州Ｎｕｔｌｅｙ）を製造者の説明書に従って使用して、ＳＶ４０プロモーターに機能的に連結されるヒトＣＢ１ ｃＤＮＡ（Ｇｅｎｂａｎｋ Ｘ５４９３７）またはＣＢ２ ｃＤＮＡ（Ｇｅｎｂａｎｋ Ｘ７４３２８）によりトランスフェクションした。トランスフェクション後４８時間で、細胞を、細胞スクレーパーを使用して、氷冷の膜緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、６ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．２）に集めた。細胞を窒素キャビテーションチャンバーに移し、９００ｂａｒの圧力を３０分間加えた。圧力を解放し、細胞破片を回収し、４℃で１０分間、１０００ｇで遠心分離した。上清を回収し、遠心分離を、上清が沈殿物を含まなくなるまで繰り返した。その後、膜を、４℃で２０分間の１２，０００ｇでの遠心分離によってペレット化した。膜を適量の膜緩衝液に再懸濁した。膜濃度を、ＢｉｏＲａｄ（カリフォルニア州Ｈｅｒｃｕｌｅｓ）タンパク質アッセイ色素試薬を製造者の説明書に従って使用して求めた。膜を１ｍｇ／ｍｌに希釈し、小分け物を液体窒素において急速凍結し、−８０℃で貯蔵した。

結合アッセイ−ヒトＣＢ１受容体またはヒトＣＢ２受容体を発現する膜の０．５ｎｇ〜１０ｎｇを、結合緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％ ＢＳＡ、ｐＨ７．４）中、０．５ｎＭ〜２ｎＭの放射性リガンド（［３Ｈ］−ＣＰ５５９４０；Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、ただし、示される場合には、３ｎＭの［３Ｈ］−ＳＲ１４１７１６を放射性リガンドとして使用した）、および様々な濃度のリガンドの存在下でインキュベーションした（９６ウエルプレートのウエルあたり２００μＬの総体積）。膜を室温で２時間インキュベーションし、その後、Ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ １９６ Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、イリノイ州Ｄｏｗｎｅｒｓ Ｇｒｏｖｅ）を使用して、（０．１％ポリエチレンイミンにより１時間〜２時間）予浸された９６ウエルＧＦ／Ｂフィルタープレート（Ｐａｃｋａｒｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、コネティカット州Ｓｈｅｌｔｏｎ）の上にろ過し、５００ｍＬの氷冷の洗浄緩衝液（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ ＣａＣｌ_２、５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、０．２５Ｍ ＮａＣｌ）により洗浄した。フィルタープレートを乾燥し、その後、５０μＬのシンチレーション液をそれぞれのウエルに加えた（Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ ２０、Ｐａｃｋａｒｄ、コネティカット州Ｓｈｅｌｔｏｎ）。プレートを、Ｔｏｐｃｏｕｎｔ ＮＸＴ（Ｐａｃｋａｒｄ、コネティカット州Ｓｈｅｌｔｏｎ）で計数した。

データ分析−グラフをプロットし、ＩＣ_５０値を、Ｐｒｉｓｍソフトウエア（ＧｒａｐｈＰａｄ、バージョン４．０、米国カリフォルニア州Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ）を使用する非線形回帰分析によって求めた。Ｋｉ値を、ヒトＣＢ１受容体についてＳＲ１４１７１６受容体についての２．９ｎＭ、ならびに、ヒトＣＢ１受容体およびヒトＣＢ２受容体についてＣＰ５５，９４０についての２．５ｎＭおよび０．９２ｎＭの報告されるＫｉ値（ＭｃＰａｒｔｌａｎｄ他、ＢＪＰ、２００７）をそれぞれ使用するＣｈｅｎｇ & Ｐｒｕｓｓｏｆｆ法を使用してＩＣ_５０値から計算した。

超高純度ＡＪＡにより誘導されるＣＢ２受容体媒介インビボ影響
線維症動物モデル−ブレオマイシン誘導皮膚線維症
８匹のマウス（６週齢〜１２週齢のＣ５７Ｂ１）から成る群にブレオマイシン（２０ｕｇ／マウス）またはビヒクルのｓ．ｃ．注射を１４日間与え、その後、１週間の回復を与えた。並行して、１日目に開始して、２％メチルセルロース（ＭＣ）に懸濁される超高純度ＡＪＡ、またはビヒクルを、０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇで経口胃管法によって投与した。２１日目に、マウスを屠殺した。その皮膚を集め、常法による組織学アッセイ（Ｈ&Ｅ染色、トリクローム染色、およびピクロシリウスレッド染色）、免疫組織化学アッセイ（パラフィン包埋サンプルまたは凍結サンプル）、インサイチューハイブリダイゼーション・アッセイ、コラーゲンアッセイ（ＳＩＲＣＯＬ）、およびリアルタイムｑＲＣＲまたはマイクロアレイハイブリダイゼーションのためのＲＮＡ単離のために処理した。皮膚切片を注意深く特徴づけし、損傷皮膚における皮膚炎症、皮膚肥厚、コラーゲン蓄積（トリクローム）、およびコラーゲン架橋（シリウスレッド）について定量化した。

結果：図１８に示されるように、超高純度ＡＪＡは、マウス・ベロマイシン（ｂｅｌｏｍｙｃｉｎ）・モデルにおけるＣＢ２媒介皮膚線維症の阻害のために試験されたすべての用量において効果的であった。これらの同じ用量は、図１４〜図１６に示されるＣＢ１媒介の行動モデルでは完全に効果的ではなく、このことは、超高純度アジュレム酸におけるＣＢ２活性がいかなるＣＢ１活性の非存在下においても維持されることを裏づけていた。

炎症動物モデル−足浮腫モデル
ＣＤ−１マウス（メス）を実験群に無作為に割り当て、１週間にわたって順応させた。試験化合物の投与に先立って、ベースラインでの右側後足の体積を、水置換デバイス（プレチスモメーター、Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ）を使用してガス（イソフルラン）麻酔下で測定した。０日目に、２％のＭＣに懸濁される超高純度ＡＪＡ、またはビヒクルを、経口胃管法によって、０ｕｇ／ｋｇ、５ｕｇ／ｋｇ、５０ｕｇ／ｋｇ、および５００ｕｇ／ｋｇで投与した。処置を施した９０分後、動物には、５％エタノールにおける１００ｍｇ／ｍｌのアラキドン酸溶液の１０マイクロリットルを皮下注射によって右側後足の足裏面に与えた。コントロール動物群（群１）には等体積の５％エタノール溶液を投与した。左側後足には注射しなかった。足底内注射をガス麻酔下で行った。足裏内注射の４５分後、右側後足の体積を、プレチスモメーターを使用してガス麻酔下で測定した。

結果：図１９に示されるように、超高純度ＡＪＡは、炎症をマウス足浮腫モデルで阻害することにおいて試験されたすべての用量において効果的であった。これらの同じ用量は、図１４〜図１６に示されるＣＢ１媒介の行動モデルでは完全に効果的ではなく、このことは、超高純度アジュレム酸におけるＣＢ２活性がいかなるＣＢ１活性の非存在下においても維持されることを裏づけていた。

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１８．Ｗｅｉｌａｎｄ他（１９９４）、Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｇｕａｎｏｓｉｎｅ−５'−Ｏ−（γ−ｔｈｉｏ）ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｙ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、２３７：３−１３
１９．Ｇｒｉｆｆｉｎ他、Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｇｏｎｉｓｔｓ ａｎｄ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ−５'−Ｏ−（３−［３５Ｓ］ｔｈｉｏ）−ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ａｓｓａｙ ｉｎ Ｒａｔ Ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ Ｍｅｍｂｒａｎｅｓ、ＪＰＥＴ、２８５：５５３−５６０、１９９８
２０．Ｗｉｌｅｙ他、Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｏ−２０５０，ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｎｅｕｔｒａｌ ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄ ＣＢ（１） ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、２０１１、６５１（１−３）：９６−１０５
２１．Ｗｉｌｅｙ ＪＬおよびＭａｒｔｉｎ ＢＲ、Ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｃｏｍｍｏｎ ｔｏ ｏｔｈｅｒ ｃｅｎｔｒａｌｌｙ ａｃｔｉｎｇ ｄｒｕｇｓ、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、２００３、４７１（３）：１８５−１９３
２２．Ｂｕｒｓｔｅｉｎ他、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｎｏｎ−ｐｓｙｃｈｏｔｒｏｐｉｃ ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄｓ ｗｉｔｈ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ，ａｎａｌｇｅｓｉｃ ａｎｄ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｎｔｉ ａｄｈｅｓｉｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、３５：３１３５−３１４１（１９９２）

Claims (34)

1. アジュレム酸を有する組成物であって、前記アジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対する親和性よりも約２倍〜約１００倍大きい、ＣＢ２受容体に対する親和性を有する組成物。
2. 請求項１記載の組成物において、前記アジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対する親和性よりも約５倍〜約５０倍大きい、ＣＢ２受容体に対する親和性を有する組成物。
3. 請求項２記載の組成物において、前記アジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対する親和性よりも約１０倍〜約４０倍大きい、ＣＢ２受容体に対する親和性を有する組成物。
4. 請求項１記載の組成物において、前記アジュレム酸は約９７％超の純度を有する組成物。
5. 請求項４記載の組成物において、前記アジュレム酸は約９８％超の純度を有する組成物。
6. 請求項５記載の組成物において、前記アジュレム酸は約９９％超の純度を有する組成物。
7. アジュレム酸を有する組成物であって、前記アジュレム酸は、ＣＢ２受容体に対するＫ_ｉよりも約２倍〜約１００倍大きい、ＣＢ１受容体に対するＫ_ｉを有する組成物。
8. 請求項７記載の組成物において、前記アジュレム酸は、ＣＢ２受容体に対するＫ_ｉよりも約５倍〜約５０倍大きい、ＣＢ１受容体に対するＫ_ｉを有する組成物。
9. 請求項８記載の組成物において、前記アジュレム酸は、ＣＢ２受容体に対するＫ_ｉよりも約２０倍〜約４０倍大きい、ＣＢ１受容体に対するＫ_ｉを有する組成物。
10. 請求項７記載の組成物において、前記アジュレム酸は約９７％超の純度を有する組成物。
11. 請求項１０記載の組成物において、前記アジュレム酸は約９８％超の純度を有する組成物。
12. 請求項１１記載の組成物において、前記アジュレム酸は約９９％超の純度を有する組成物。
13. アジュレム酸を有する組成物であって、前記アジュレム酸は約９７％超の純度を有する組成物。
14. 請求項１３記載の組成物において、前記アジュレム酸は約９８％超の純度を有する組成物。
15. 請求項１４記載の組成物において、前記アジュレム酸は約９９％超の純度を有する組成物。
16. 請求項１３記載の組成物において、前記アジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対する親和性よりも約２倍〜１００倍大きい、ＣＢ２受容体に対する親和性を有する組成物。
17. 請求項１６記載の組成物において、前記アジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対する親和性よりも約５倍〜５０倍大きい、ＣＢ２受容体に対する親和性を有する組成物。
18. 請求項１７記載の組成物において、前記アジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対する親和性よりも約２０倍〜約４０倍大きい、ＣＢ２受容体に対する親和性を有する組成物。
19. アジュレム酸を有する組成物であって、前記アジュレム酸は約０．１％（ｗ／ｗ）未満の１１−ヒドロキシ−（６ａＲ，１０ａＲ）−３−（１'，１'−ジメチルヘプチル）−Δ８−テトラヒドロカンナビノール（ＨＵ−２１０）を有する組成物。
20. 請求項１９記載の組成物において、前記アジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対する親和性よりも約２倍〜約１００倍大きい、ＣＢ２受容体に対する親和性を有する組成物。
21. 請求項２０記載の組成物において、前記アジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対する親和性よりも約５倍〜約５０倍大きい、ＣＢ２受容体に対する親和性を有する組成物。
22. 請求項２１記載の組成物において、前記アジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対する親和性よりも約２０倍〜約４０倍大きい、ＣＢ２受容体に対する親和性を有する組成物。
23. 線維性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療的に有効な量のアジュレム酸を前記対象に投与する工程を有し、前記アジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対する親和性よりも約２倍〜約１００倍大きい、ＣＢ２受容体に対する親和性を有する、方法。
24. 請求項２３記載の方法において、前記線維性疾患は皮膚線維症である方法。
25. 請求項２４記載の方法において、前記線維性疾患は肺線維症である方法。
26. 請求項２３記載の方法において、前記線維性疾患は、強皮症、全身性硬化症、強皮症様障害、皮膚硬化を伴わない強皮症（ｓｉｎｅ ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ）、肝硬変、間質性肺線維症、特発性肺線維症、デュピュイトラン拘縮、ケロイド、嚢胞性線維症、慢性腎臓疾患、慢性移植片拒絶、および他の瘢痕／創傷治癒異常、術後癒着、ならびに反応性線維症から成る群から選択される方法。
27. 請求項２３記載の方法において、前記アジュレム酸は経口投与される方法。
28. 請求項２３記載の方法において、前記アジュレム酸は静脈内投与される方法。
29. 請求項２３記載の方法において、前記アジュレム酸は局所投与される方法。
30. 請求項２３記載の方法において、前記アジュレム酸は眼に投与される方法。
31. 請求項２３記載の方法において、前記アジュレム酸はインプラントまたはパッチによって投与される方法。
32. 対象における痛みを軽減させる方法であって、アジュレム酸を有する組成物を前記対象に投与する工程を有し、前記アジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対する親和性よりも約２倍〜約１００倍大きい、ＣＢ２受容体に対する親和性を有する、方法。
33. 請求項３２記載の方法において、前記痛みは１１ポイント疼痛尺度で少なくとも１ポイント軽減される方法。
34. 対象における炎症を軽減させる方法であって、アジュレム酸を有する組成物を前記対象に投与する工程を有し、前記アジュレム酸は、ＣＢ１受容体に対する親和性よりも約２倍〜約１００倍大きい、ＣＢ２受容体に対する親和性を有する、方法。

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