JP2018531886A - 免疫調節組成物およびその使用方法 - Google Patents
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Abstract
Description
カウロバクター・クレセンタスは、多くの土壌環境および淡水環境において約23℃で生育する非病原性で無害の水生グラム陰性菌である。カウロバクターは、50年近く研究されてきた。主な実験菌株(C.クレセンタス CB15)は、遺伝的および生化学的に明確な特徴づけがされており、C.クレセンタスのゲノムは、配列決定されている。カウロバクター属は、標準の実験器具を用いて容易に生育される。それらはまた、市販の発酵槽では、動物性タンパク質不含の確立された最小培地中、光学密度単位(OD)で少なくとも30までは容易に生育し得る。
本開示は、カウロバクター・クレセンタス(CC)を含む免疫調整組成物を提供する。本開示の免疫調整組成物は、個体における免疫反応を調整するのに有用である。本開示は、個体における免疫反応を調整する方法であって、CCを含む免疫調整組成物を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。
用語「個体」、「宿主」、「対象」および「患者」は、本明細書で互換的に用いられており、非限定的にヒト、非ヒト霊長類(例えば、類人猿)、非ヒト哺乳動物(例えば、哺乳類の家畜動物(例えば、ウシ、ブタ、ヤギおよびヒツジの動物))、および哺乳動物のペット(例えば、猫、犬)をはじめとする哺乳動物;魚;ならびに鳥(例えば、鶏)を指す。
本開示は、カウロバクター・クレセンタス(CC)、および免疫調整性の生物学的治療薬としてのそれの使用に関する。CCは、自然免疫反応および適応免疫反応を調整することにより免疫調整効果を有することが示されている。本開示は、生存するカウロバクター・クレセンタス(CC)を含む免疫調整組成物を提供する。本開示の免疫調整組成物は、個体における免疫反応を調整するのに有用である。本開示の免疫調整組成物は、個体における望ましくない免疫反応を低減するのに有用である。本開示の免疫調整組成物は、個体における炎症を低減するのに有用である。本開示は、個体における免疫反応を調整する方法であって、CCを含む免疫調整組成物を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。本開示は、個体における望ましくない免疫反応を低減する方法であって、生存するCCを含む免疫調整組成物を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。本開示は、個体における炎症を低減する方法であって、生存するCCを含む免疫調整組成物を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。
本開示は、カウロバクター・クレセンタス(CC)を含む免疫調整組成物を提供する。本開示の免疫調整組成物中のCCは、生育可能である。免疫調整組成物中のCCは、非変性、突然変異、弱毒化、および/または遺伝子改変され得る。本開示の免疫調整組成物は、カウロバクター・クレセンタス菌の1つまたは複数の異なる菌株のカクテルを含み得る。
本開示の免疫調整組成物は、非病原性であるカウロバクターを含む。非病原性のカウロバクター属は、アスチカカウリスの2種を含む、19の異なる種(C.ビブリオイデス(C.vibroides)、C.ヘンリシイ、C.インターメディウス、C.ルビギノーサス、C.ルチリス、C.サブビブリオデス、C.フシフォルミス、C.ロッシ、A.エクスセントリカス、A.ビプロセカムなど)を含む。例えば、JS Poindexter, The Caulobacters: Ubiquitous Unusual Bacteria, Microbiol Rev 45, 123−179, 1981を参照されたい。CB35、CB26、CB28、KA5、CB66、FC4など、カウロバクター属の菌種の幾つかは、American Type Culture Collection(ATCC)から入手できる。生存、非変性、突然変異型または弱毒形態のカウロバクター属のこれらの菌種の全てを、本明細書に記載された免疫調整剤として用いることができる。加えて、カウロバクター菌は、非運動性プロステーカ、運動性スウォーマー、スタビー型(stubby)フラジェリンおよび陽性フラジェリン、陰性フラジェリン、分割および/または非分割形態であり得る。カウロバクター属の菌種は、PYE培地中で、18℃〜42℃の範囲内の温度および5〜9の範囲内のpHで、しかし場合により23〜25℃の範囲内の温度およびpH7で生育され得る。カウロバクター属の菌種の変異または遺伝子改変形態は、培養条件のうち栄養素、化学薬品、pH、温度、紫外線もしくは赤外線、放射線などを変更すること、または生細菌中の様々な酵素、代謝経路、表面分子、核酸、プラスミド、細胞内および細胞壁成分、滑面および粗面LPSを遺伝子改変することによって生成され得る(JS Poindexter, The Caulobacters: Ubiquitous Unusual Bacteria, Microbiol Rev 45, 123−179, 1981)。
本開示の免疫調整組成物は、CCに加えて、1つまたは複数の(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、または10以上の)抗原を含み得る。適切な抗原としては、自己抗原に由来する抗原;およびアレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。
幾つかの例において、本開示の免疫調整組成物は、CCに加えて、自己抗原を含む。幾つかの例において、本開示の免疫調整組成物は、CCに加えて、1種または複数の自己組織からの1つまたは複数の自己抗原、例えば1、2、3、4、5または5つ以上の抗原を含む。
幾つかの例において、本開示の免疫調整組成物は、CCに加えて、アレルゲンを含む。適切なアレルゲンは、公知の方法を用いて得ること、および/または生成することができる。適切なアレルゲンの分類としては、花粉、ネコ皮屑以外の動物皮屑、草、カビ、粉塵、抗生物質、刺咬昆虫毒、および様々な環境アレルゲン(薬品および金属を含む)、薬物アレルゲンおよび食物アレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。一般的な樹木アレルゲンとしては、ハコヤナギ、ポプラ(popular)、セイヨウトネリコ、カバノキ、カエデ、オーク、ニレ、ヒッコリー、およびペカンの木由来の花粉が挙げられ;一般的な植物アレルゲンとしては、ヨモギ、ブタクサ、ヘラオオバコ、ソレルドック(sorrel−dock)およびアカザ由来のものが挙げられ;植物接触アレルゲンとしては、有毒オーク、ツタウルシおよびイラクサ由来のものが挙げられ;一般的な草アレルゲンとしては、ライグラス、オオアワガエリ、ジョンソングラス、バミューダグラス、ウシノケグサおよびイチゴツナギのアレルゲンが挙げられ;一般的なアレルゲンは、アルテルナリア、フザリウム、ホルモデンドラム、アスペルギルス、ミクロポリスポラ、ムコールおよび好熱性放線菌などのカビまたは真菌からも得ることができ;表皮性アレルゲンは、ハウスダストまたは有機ダスト(典型的には、起源の中の真菌)、節足動物、例えばイエダニ(ヤケヒョウヒダニ)、または動物供給源、例えば羽毛、およびイヌ皮屑から得ることができ;一般的な食物アレルゲンとしては、牛乳およびチーズ(乳製品(diary))、卵、小麦、ナッツ(例えば、ピーナッツ)、魚介類(例えば、甲殻類)、エンドウ、豆およびグルテンアレルゲンが挙げられ;一般的な環境アレルゲンとしては、金属(ニッケルおよび金)、化学薬品(ホルムアルデヒド、トリニトロフェノールおよびテレビン油)、ラテックス、ゴム、繊維(綿または羊毛)、バーラップ、染毛剤、化粧品、洗剤および香料アレルゲンが挙げられ;一般的な薬物アレルゲンとしては、局所麻酔薬およびサリチル酸塩のアレルゲンが挙げられ;抗生物質アレルゲンとしては、ペニシリン、テトラサイクリンおよびスルホンアミドアレルゲンが挙げられ;一般的な昆虫アレルゲンとしては、ハチ毒、スズメバチ毒、アリ毒、およびゴキブリ貯卵嚢アレルゲンが挙げられる。詳細には、明確に特徴づけられたアレルゲンとしては、Der pIアレルゲンの主要および潜在性エピトープ(Hoyne et al. (1994) Immunology 83190−195)、ハチ毒ホスホリパーゼA2(PLA)(Akdis et al. (1996) J. Clin. Invest. 98:1676−1683)、カバノキ花粉アレルゲンBet v1(Bauer et al. (1997) Clin. Exp. Immunol. 107:536−541)、およびマルチエピトープ遺伝子組換え草アレルゲンrKBG8.3(Cao et al. (1997) Immunology 90:46−51)が挙げられるが、これらに限定されない。これらのアレルゲンおよび他の適切なアレルゲンは、市販されており、そして/または公知技術に従って抽出物として容易に調製され得る。
幾つかの例において、本開示の免疫調整組成物は、CCに加えて、癌抗原、自己抗原、アレルゲンまたは病原性抗原に対する抗体(例えば、治療抗体、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、免疫化学複合抗体、放射性免疫複合抗体、抗体−サイトカイン融合タンパク質、抗体−抗原融合タンパク質、抗体−免疫毒素融合タンパク質など)を含む。
幾つかの例において、本開示の免疫調整組成物は、CCに加えて、サイトカインを含む。本開示の免疫調整組成物に含まれ得るサイトカインとしては、インターロイキン、トランスフォーミング増殖因子(TGF)、線維芽細胞増殖因子(FGF)、血小板由来成長因子(PDGF)、上皮成長因子(EGF)、コロニー刺激因子(CSF)、結合組織活性化ペプチド(CTAP)、骨形成因子、ならびにそのような成長因子の生物学的活性類似体、断片および誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。適切なサイトカインとしては、B/T−細胞分化因子、B/T−細胞増殖因子、分裂促進性サイトカイン、化学走性サイトカイン、コロニー刺激因子、血管新生因子、IFN−α、IFN−β、IFN−γ、IL1、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL9、IL10、IL11、IL12、IL13、IL14、IL15、IL16、IL17、IL18、IL22など、レプチン、ミオスタチン、マクロファージ刺激タンパク質、血小板由来成長因子、腫瘍壊死因子(TNF)−α(TNF−α)、TNF−β、神経成長因子(NGF)、CD40L、CD137L/4−1BBL、ヒトリンフォトキシン−β、G−CSF、M−CSF、GM−CSF、血小板由来成長因子(PDGF)、IL−1α、IL1−β、IP−10、PF4、GRO、9E3、エリスロポエチン、エンドスタチン、アンギオスタチン、血管内皮成長因子(VEGF)または任意のこれらの断片もしくは組み合わせが挙げられる。他のサイトカインとしては、βトランスフォーミング増殖因子(例えばTGF−β1、TGF−β2、TGF−β3);骨形成タンパク質(例えば、BMP−1、BMP−2、BMP−3、BMP−4、BMP−5、BMP−6、BMP−7、BMP−8、BMP−9);ヘパリン−結合成長因子(例えば、線維芽細胞成長因子(FGF)、上皮成長因子(EGF)、血小板由来成長因子(PDGF)、インスリン様成長因子(IGF));造血成長因子(Flt3);脳下垂体成長ホルモンまたは誘導体;成長ホルモン、神経活性ホルモン、インヒビン(例えば、インヒビンA、インヒビンB);分化因子(例えば、GDF−1);およびアクチビン(例えば、アクチビンA、アクチビンB、アクチビンAB)を含むトランスフォーミング増殖因子(TGF)超遺伝子ファミリーのメンバーが挙げられる。幾つかの例において、本開示の免疫調整組成物は、CCに加えて、サイトカインを調整する化合物または薬剤を含む。
本開示の免疫調整組成物は、CCに加えて、1種または複数のアジュバントを含み得る。
本開示の免疫調整組成物は、CCに加えて、1種または複数のプロバイオティクスを含み得る。「プロバイオティクス」は、1種の菌種(即ち、単一単離物)または純粋な細菌の組み合わせ(即ち、所望の細菌の共培養物)を含有する組成物を指し、微生物叢を修復し、そして/または健康利益を提供するために、哺乳動物へ投与され得る任意のさらなる担体、賦形剤および/または治療薬も含み得る。プロバイオティクスの例としては、ラクトバチルス属の菌種、ビフィドバクテリウム属の菌種、サッカロマイセス・ボウラルディイ、ストレプトコッカス属の菌種、エンテロコッカス・フェシウム、バチルス・コアグランス、フェカリバクテリウム属の菌種などが挙げられるが、これらに限定されない。
本開示の免疫調整組成物は、CCに加えて、1種または複数のプレバイオティクスを含み得る。本明細書で用いられる用語「プレバイオティクス」は、摂取する哺乳動物によって消化されないが微生物叢、特に消化管の微生物叢の生育または活性のための基質となる栄養補助物質を指す。多くのプレバイオティクスは、炭水化物、例えば多糖およびオリゴ糖であるが、その定義は非炭水化物を排除しない。プレバイオティクスの最も多くを占める形態は、栄養学的に可溶性繊維として分類される。プレバイオティクスは、胃腸の微生物叢の組成および/または活性に変化をもたらし得る。「プレバイオティクス」はまた、ビフィドバクテリア、ラクトバチルスなどの明確な価値があると考えられる常在細菌によって体内で特有に代謝される非生存可能な食物成分を含有する組成物を指す。プレバイオティクスの例としては、フルクトース、キシロース、大豆、グルコース、マンノースなどが挙げられるが、これらに限定されない。
互換的に用いられる用語「微生物叢」、「マイクロバイオーム」、「シンビオティクス」または「コメンサル」は、消化器、皮膚、唾液、結腸、膣、肺などの様々な場所にある、個体の体内の微生物集団(細菌、ウイルス、真菌、寄生虫)を指す。微生物叢の不均衡は、複数の自己免疫および炎症性疾患の因果関係または発病に関係する。本開示の免疫調整組成物は、CCに加えて、バクテロイデス、プロテオバクテリア、ファーミキューテス、ベルコミクロビア、バクテロイダーレス(Bacteriodales)、エンテロバクテリア、クロストリジウムなどの個体の微生物叢のメンバーを含み得る。微生物叢のメンバーの他の例は、当業者に公知であるか、または明白であろう。米国特許出願公開第2014/0010844号を参照されたい。内在性微生物叢、プロバイオティクスおよびそれらの生物学的産物の役割の説明については、Howarth and Wang, Nutrients. 2013, 5(1):58−81を参照されたい。したがって本発明の組成物は、均衡された微生物叢を確立、調整、調節または維持するために用いられ得る。マイクロバイオームのメンバーは、自家性、同種間の、異種間の起源、野生型、生存可能であり得、不活化、加熱死、突然変異、弱毒化、および/または遺伝子操作され得る。
本開示の免疫調整組成物は、CCに加えて、治療性病原菌、ウイルス、真菌など、例えばリステリア、サッカロマイセス、エシェリヒア、サルモネラ、スタフィロコッカス、クレブシエラ、ポックスウイルス、アデノウイルス、腫瘍溶解性ウイルスを含み得る。治療性微生物病原の別の例は、当業者に公知であるか、または明白であろう。米国特許出願公開第2014/0010844号を参照されたい。治療性病原は、野生型、生存可能であり得、不活化、加熱死、突然変異、弱毒化、および/または遺伝子操作され得る。
本開示の免疫調整組成物は、CCに加えて、1種または複数の治療薬を含み得る。治療薬の例は、当業者に公知であるか、または明白であろう。該治療薬の非限定的例は、本明細書の「方法」の節に提供されており、抗炎症剤、抗増殖剤、免疫抑制剤、抗ヒスタミン薬、免疫調節剤、免疫調整剤、代謝抑制剤、抗アレルギー剤、細胞傷害剤、駆虫薬、抗血管新生薬、抗微生物薬(抗ウイルス薬、抗菌剤、抗寄生虫薬、抗マラリア薬、抗原虫薬など)、治療性ペプチドなどがある。
本開示は、個体における免疫反応を調整する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。本開示は、個体における望ましくない免疫反応を低減する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。本開示は、個体における炎症を低減する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。本開示は、個体における自己免疫障害を処置する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。本開示は、個体におけるアレルギー(アレルギー疾患)を処置する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。本開示は、個体における代謝疾患を処置する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。本開示は、個体における神経障害を処置する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。本開示は、個体における治療的処置の有効性を増大し、そして/または毒性を低減する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。本開示は、個体のマイクロバイオームにおける不均衡に関連する疾患または医学的状態を処置、修復または修正する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。本開示は、個体の腸内菌共生バランス失調を処置、修復または修正する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。
本開示は、個体における免疫反応を調整する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。本開示は、個体における望ましくない免疫反応を低減する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。本開示は、個体における炎症を低減する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。本開示は、個体における自己免疫障害を処置する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。本開示は、個体におけるアレルギー(アレルギー疾患)を処置する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を該個体へ投与することを含む、方法を提供する。
幾つかの実施形態において、表題の方法は、CCおよび1種または複数のアジュバントを含む表題の免疫調整組成物の投与を含む。
幾つかの実施形態において、表題の方法は、単剤療法としての表題の免疫調整組成物の投与、例えば任意の他の治療薬の同時投与を行わない表題の免疫調整組成物のみの投与を含む。別の実施形態において、表題の処置方法は、a)表題の免疫調整組成物と、b)少なくとも1種のさらなる治療薬(または該治療薬の医薬的に許容し得る塩、プロドラッグ、プロドラッグの塩、立体異性体、互変異性体など)と、の投与を含み、該免疫調整組成物および該少なくとも1種のさらなる治療薬が、免疫反応を調整するのに効果的となる組み合わせた量で投与される、併用療法である。適切なさらなる治療薬を、以下に記載する。
本開示は、本開示の免疫調整組成物の有効量を、必要とする個体へ投与することを含む、細菌への、または細菌によって産生される物質への免疫反応を調整する方法を提供する。
本開示は、本開示の免疫調整組成物の有効量を、必要とする個体へ投与することを含む、免疫反応を調整する方法を提供する。
本開示は、本開示の免疫調整組成物の有効量を、必要とする個体へ投与することを含む、微生物寄生虫(例えば、病原性原虫、蠕虫など)への免疫反応を調整する方法を提供する。
本開示は、本開示の免疫調整組成物の有効量を、必要とする個体へ投与することを含む、病原性真菌への免疫反応を調整する方法を提供する。
本開示は、個体における喘息、アレルギー性鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎などのアレルギー疾患を処置する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を、該個体へ投与することを含む、方法を提供する。幾つかの例において、アレルギー疾患を処置する本開示の方法は、アレルゲンを含む本開示の免疫調整組成物の有効量を、必要とする個体へ投与することを含む。適切なアレルゲンは、先に記載されている。
本開示は、個体における自己免疫障害を処置する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を、該個体へ投与することを含む、方法を提供する。自己免疫状態は、関節リウマチ、喘息、1型糖尿病、多発性硬化症、全身エリテマトーデス(SLE)、ショーグレン症候群、アテローム性硬化症、自己免疫性肝炎、自己免疫性膵炎、セリアック病、自己免疫性溶血性貧血、強直性脊椎炎、自己免疫疾患に関連する癌、自己免疫疾患に関連する線維症などの多くの自己免疫障害の原因となる。本開示の免疫調整組成物を通して自然免疫および適応免疫のメカニズムを調整することにより、自己免疫障害が処置され得る。幾つかの例において、自己免疫障害を処置する本開示の方法は、自己抗原を含む本開示の免疫調整組成物の有効量を、必要とする個体へ投与することを含む。適切な自己抗原は、先に記載されている。
本開示は、個体における免疫機能不全を調整、修正および/または調節する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を、該個体へ投与することを含む、方法を提供する。免疫機能不全状態は、関節リウマチ(RA)および関連の疾患、糖尿病、乾癬、全身エリテマトーデス(SLE)および関連の疾患、移植片対宿主病(GVHD)、潰瘍性大腸炎、細菌誘発性大腸炎、クローン病、円形脱毛症、喘息、アレルギー性鼻炎、結膜炎、移植片拒絶、橋本甲状腺炎、炎症性腸疾患(IBD)、短腸症候群および他の胃腸障害(クローン病、潰瘍性大腸炎など)、心臓血管病、肥満、創傷治癒、熱傷の回復、加齢、体重増加、脂肪沈着などの原因となる。腸粘膜表面での免疫反応の調節異常は、腸管からの微生物および微生物産物の移動を増加させることにより全身免疫活性化を誘発する可能性がある。本開示の免疫調整組成物を通して自然免疫および適応免疫のメカニズム(免疫細胞、サイトカイン、抗体などを含む)を調整することによって、免疫調節異常が、予防および/または処置され得る。
本開示は、個体における望ましくない炎症活性を調整および/または調節する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を、該個体へ投与することを含む、方法を提供する。望ましくない炎症状態は、下痢性疾患、化学療法または放射線療法による粘膜炎、感染物質または抗生物質薬による胃腸炎、嚢炎、肥満関連の炎症、虫垂炎、臓器(肝臓、腎臓、肺、心臓、膵島など)移植、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染、癌関連の炎症、泌尿生殖器疾患、細菌性膣疾患、手術関連の外傷、敗血症、食欲不振、高シュウ酸尿症、潰瘍、創傷治癒、腎疾患、肝疾患、肝線維症、アルコール性肝炎、肺線維症、腎線維症、特発性肺線維症などの線維性疾患、ニキビ、望ましくない呼吸器炎症活性、炎症関連の癌、炎症関連の臓器(肺、肝臓、腎臓、心臓、胃腸管、脳など)の損傷および傷害、自己炎症性疾患(TNF受容体関連の周期熱症候群、デュビン・ジョンソン症候群、ベーチェット病、家族性地中海熱など)などの多くの疾患の原因となる。本開示の免疫調整組成物を通して自然免疫および適応免疫のメカニズム(免疫細胞、サイトカイン、ケモカイン、抗体などを含む)を調整することによって、炎症性障害が、予防および/または処置され得る。
本開示は、個体における代謝障害を処置する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を、該個体へ投与することを含む、方法を提供する。代謝障害は、肥満関連の代謝機能不全、糖尿病、インスリン抵抗性、糖代謝異常、低インスリン血症、アテローム性硬化症、高コレステロール血症、虚血、メタボリックシンドローム、酸化ストレス、高血圧、内分泌障害(アジソン病、クッシング病、甲状腺機能亢進症、甲状腺機能低下症、脳下垂体機能低下症、多嚢胞性卵巣症候群など)、脂質代謝異常、肥満関連障害(骨量減少、体重増加など)、膵臓関連障害、ミトコンドリア疾患などの原因となる。本開示の免疫調整組成物を通して自然免疫および適応免疫のメカニズム(免疫細胞、サイトカイン、抗体などを含む)を調整することによって、代謝疾患が予防および/または処置され得る。
本開示は、本開示の免疫調整組成物の有効量を、必要とする個体へ投与することを含む、炎症性応答を調整および/または調節する方法を提供する。炎症状態は、アルツハイマー病、うつ病、注意欠陥多動性障害(ADHD)、気分障害、統合失調症、多発性硬化症、パーキンソン病、自閉症、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、脳性マラリア障害、ハンチントン病、不安障害、てんかんなどの多くの神経障害の原因となる。本開示の免疫調整組成物を通して自然免疫および適応免疫のメカニズム(免疫細胞、サイトカイン、抗体などを含む)を調整することによって、神経障害が予防および/または処置され得る。
本開示は、本開示の免疫調整組成物を、必要とする個体へ投与することを含む、ウイルス感染による、または卒中および他の脳傷害に続く感染による、免疫欠陥/欠損/抑制を予防または限定する方法を提供する。卒中をはじめとするウイルス(例えば、HIV)感染、脳傷害の様々な形態が、長期全身免疫抑制をもたらし、より高い感染率および死亡率をもたらす。さらに、肝臓インバリアントNKT細胞は、全身免疫抑制を改善するのに重要であることが示されている。本開示は、NK、NKTおよび他の免疫細胞の調整を通してこれらの患者における全身免疫抑制および感染を予防する戦略となる。
本開示はまた、治療的処置の有効性を増強し、そして/もしくは毒性を低減するため、そして/または薬物耐性を予防して代謝を改変するための方法、好ましくは個体、細胞または組織への本開示の免疫調整組成物の有効量、好ましくは免疫反応を調節するのに必要な量を投与することによる、抗感染薬(抗菌薬、抗真菌薬、抗ウイルス薬など)、抗癌剤、治療抗体、抗炎症剤、代謝障害関連薬、免疫刺激剤、免疫調整化合物、免疫調節薬、siRNA、プロバイオティクスおよびマイクロバイオームなどの治療微生物(生存可能、不活化、加熱死、突然変異、弱毒化、遺伝子操作)または外科的処置を伴う処置の方法を提供する。
本開示は、a)個体から得られた樹状細胞(DC)を、i)カウロバクター・クレセンタス;および/またはii)抗原、を含む組成物と接触させることを含む、樹状細胞を調整する方法を提供する。DCはCCと接触させ、抗原はインビトロである。DCを抗原およびCCと接触させることで、DC上の抗原の抗原提示を調整し、それにより調整されたDCの集団を作製する。幾つかの例において、該抗原は、拡散、電気穿孔、能動輸送、リポソーム融合、貪食、音波処理などの方法を利用してDCと接触させ得る。幾つかの例において、該方法は、抗原提示DCを、DCを得た個体へ投与することをさらに含む。幾つかの例において、該方法は、抗体、化学療法薬、またはサイトカインと組み合わせた抗原提示DCを、DCを得た個体へ投与することをさらに含む。調整されたDCを個体へ投与することで、個体における疾患を処置し得る。
本開示は、抗原提示細胞の存在下または非存在下で、a)個体から得られたリンパ球(NK、NKT、γδT細胞、ILC、T細胞および/またはB細胞)を、i)カウロバクター・クレセンタス;および/またはii)抗原、を含む組成物と接触させることを含む、NK、NKT、γδT細胞、ILC、T細胞およびB細胞などの調節性リンパ球を作製する方法を提供する。リンパ球とCCを接触させることで、調節性リンパ球の集団を作製する。幾つかの例において、該方法は、調節性リンパ球を、細胞を得た個体へ投与して、宿主における疾患を予防および/または処置することを含む。幾つかの例において、該方法は、抗体、化学療法薬、またはサイトカインと組み合わせた調節性リンパ球を、細胞を得た個体へ投与して、宿主における疾患を予防および/または処置することをさらに含む。
本開示は、個体における細胞内病原(例えば、ウイルス、マイコバクテリア、細菌、寄生虫など)への感染を予防および/または処置する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を、該個体へ投与することを含む、方法を提供する。
本開示は、研究目的で動物モデルにおける免疫反応を調整する方法を提供する。本開示は、抗原提示細胞の存在下または非存在下で、a)個体から得られたエフェクター細胞(NK、NKT、TおよびB細胞)を、i)カウロバクター・クレセンタス;および/またはii)抗原、を含む組成物と接触させることを含む、様々なTLR、NLR、DCならびに/またはNK、NKT、TおよびB細胞などのエフェクターリンパ球を調整する方法をさらに提供する。エフェクターリンパ球とCCを接触させることで、活性化を調整し、それにより調節されたエフェクターリンパ球の集団を作製する。幾つかの例において、該方法は、反応性T細胞および/またはB細胞を同定および増大することにより、疾患状態を診断することで構成される。幾つかの例において、該方法は、研究目的で抗原反応性T細胞および/またはB細胞を同定および増大することで構成される。幾つかの例において、該方法は、活性化エフェクターリンパ球を、細胞を得た個体へ投与して、宿主における疾患を予防および/または処置することで構成される。幾つかの例において、該方法は、研究および/または診断目的で、TLRまたはNLRを活性化することで構成される。
本開示は、個体における幹細胞の増殖、分化および/または調整、ならびにホメオスタシスの修復を誘発する方法であって、本開示の免疫調整組成物の有効量を、該個体へ投与することを含む、方法を提供する。本開示は、幹細胞を、カウロバクター・クレセンタスを含む組成物と接触させる方法であって、該接触が、増大、分化および/または調整された幹細胞の集団を作製することを含む、方法を提供する。
本開示は、カウロバクター・クレセンタスが担体および/または送達ビヒクルとして作用して、治療分子、例えばタンパク質、ペプチド、siRNA、炭水化物、巨大分子などを送達する方法を提供する。静電的および疎水性相互作用などの非遺伝子改変法(GM)として、カウロバクター・クレセンタス表面へ分子が結合することにより、カウロバクター・クレセンタスを担体および/または送達ビヒクルとして作用させることが可能となり得る。さらに、生物接着/粘膜接着により、カウロバクター・クレセンタスは、粘膜表面でのM細胞輸送により送達されたものの取込みを容易にし得る。
本開示の免疫調整組成物は、1種または複数の医薬的に許容し得る賦形剤を含むことができ、様々な方法のいずれかで配合され得るが、それは例えば投与経路に依存し得る。医薬的に許容し得る賦形剤は、当業者に公知であり、例えばA. Gennaro (1995) “Remington: The Science and Practice of Pharmacy”, 19th edition, Lippincott, Williams, & Wilkinsをはじめとする種々の発行物に詳細に記載されている。適切な賦形剤ビヒクルとしては、例えば水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール、不活性タンパク質、親水性ポリマー、アミノ酸、脂肪酸、界面活性剤、非イオン性界面活性剤、炭水化物、デキストリン、ポリオール、キレート化剤など、およびそれらの組み合わせが挙げられる。加えて、所望なら該ビヒクルは、湿潤もしくは乳化剤、またはpH緩衝剤などの補助物質を微量、含有し得る。そのような投薬剤形を調製する実際の方法は、公知であるか、または当業者に明白であろう。例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 17th edition, 1985; Remington: The Science and Practice of Pharmacy, A.R. Gennaro, (2000) Lippincott, Williams & Wilkinsを参照されたい。
幾つかの実施形態において、免疫調整組成物は、そのような免疫調整組成物を、必要とする個体への経口送達のために配合される。
幾つかの実施形態において、免疫調整組成物は、制御放出配合剤中に配合される。
本開示の免疫調整組成物は、幾つかの実施形態において、吸入経路のための医薬送達系によって患者へ投与される。該免疫調整組成物は、吸入による投与に適した形態に配合され得る。吸入の投与経路は、吸入された薬物が血液脳関門を迂回し得るという利点を提供する。薬剤送達系は、気管支の粘膜内層への活性剤の送達による呼吸療法に適したものである。容器から免疫調整組成物を排出するために圧縮ガスの力に依存するシステムもまた、利用され得る。この目的で、エアロゾルまたは加圧パッケージが使用され得る。
本開示の免疫調整組成物の投薬量は、実現される臨床目的、処置される個体の年齢、処置される個体の物理的状態などの因子に応じて変動し得る。
本開示の免疫調整組成物は、インビボおよびエクスビボ法をはじめとする薬物送達に適した任意の利用可能な方法および経路、ならびに全身および局所投与経路を利用して、個体へ投与される。
例えば、
i.全身、粘膜;
ii.全身、全身、粘膜、粘膜;
iii.全身、粘膜、全身;
iv.粘膜、粘膜、全身、全身;
v.粘膜、全身、全身;
vi.粘膜、全身、粘膜。
本開示の方法を利用した処置に適する個体としては、ヒト;非ヒト哺乳動物;魚;および鳥が挙げられる。以下に議論される上記実施形態のいずれかにおいて、表題の方法を利用して処置される個体は、家畜(例えば、豚、羊、山羊、牛、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ウシなど)の非ヒト哺乳動物;哺乳動物のペット(例えば、猫;犬;馬など);鳥、例えば鶏、雌鶏、七面鳥、ガン、ウズラ、アヒルなど;または魚などの他の動物などであり得る。
以下の実施例は、本発明を行う方法および使用する方法の完全な開示および説明を、当業者に提供するために示されており、本発明者らが自身の発明と見なすものの範囲を限定する意図はなく、以下の実験が全てである、もしくは実施された実験のみであることを本発明者らが表す意図はない。用いられた数字(例えば、量、温度など)に関する正確さを確認する努力がなされたが、若干の実験誤差および偏差が説明されなければならない。他に断りがなければ、部は、重量部であり、分子量は、重量平均分子量であり、温度は、摂氏度であり、圧力は、大気圧または大気圧の近似値である。標準的略語、例えばbp:塩基対;kb:キロ塩基;pl:ピコリットル;sまたはsec:秒;min:分;hまたはhr:時間;aa:アミノ酸;kb:キロ塩基(;bp:塩基対;nt:ヌクレオチド;i.m.:筋肉内(筋肉内へ);i.p.:腹腔内(腹腔内へ);i.n.:鼻内(鼻内へ);i.v.:静脈内(静脈内へ);s.c.:皮下(皮下へ);M/ml:ミリ単位または106CFU/ml;M:ミリオン単位/マウスまたは106CFU/マウスなどが用いられる。
以下の材料および方法を、以下に記載される実施例で用いた。
RPMI無血清培地は、Life Technologies(カナダ オンタリオ州バーリントン)から得た。RPMIに5〜10%ウシ胎仔血清、ピルビン酸ナトリウム、ペニシリン−ストレプトマイシンおよび2−メルカプトエタノールを補充し、完全培地を作製して、様々な細胞培養に用いた。ConA、PWMおよびLPSを、Sigma Chemical Companyから得た。サイトカインキットおよび蛍光標識された抗マウス抗体を、eBioscience(カリフォルニア州サンディエゴ)から購入した。抗マウスFOXP3は、Biolegend(カリフォルニア州サンディエゴ)から購入した。Aldraクリーム(5%イミキモド)は、University of Alberta Hospital Pharmacyから得た。野生型およびリポ多糖(LPS)陰性カウロバクター・クレセンタス(LPS−ve CC)を、インキュベーター中、室温(22〜27℃)で発育させて、4℃または室温の生理食塩水中で様々な期間、貯蔵した。野生型カウロバクター・ビブロイデス(CV)を、インキュベーター中、室温(22〜27℃)で発育させて、4℃または室温の生理食塩水中で様々な期間、貯蔵した。
マウス
6〜8週齢C57BL/6または9〜11週齢BALB/cの雄または雌マウスを、Charles River Breeding Laboratoriesから購入した。この試験で用いられた動物実験プロトコルは全て、カナダ、エドモントン所在のUniversity of AlbertaのAnimal Care and Use Committee for Health Sciencesで認可され、University of Albertaのガイドラインを遵守して実施された。
異なる実施例および図の凡例に記載された用量、スケジュールおよび経路を利用して、マウスに、PBS中のカウロバクター・クレセンタス(CC)を単回または反復投与した。用いられたCCは、2つの形式:CC−1(液体PYE培地で生育して生理食塩水中、室温で貯蔵されたCC)およびCC−2(液体PYE培地で生育して冷蔵庫中、4℃で貯蔵されたCC)で調製された。CC−2は、図および明細書ではCCとも称されている。
免疫化後の特定の時間に、マウスを安楽死させて脾細胞を得た。脾臓を3〜5匹のマウスからプールして、1つの細胞懸濁液に破砕し、Falcon 100μmナイロンセルストレイナーでろ過した。遠心分離後に、細胞ペレットを滅菌水2mlに再懸濁させて、短時間ボルテックス処理した。直ちに2×PBSを添加して、短時間のボルテックス処理後に、1×PBSで容量を25mlにした。試験管を遠心分離して、細胞ペレットを完全RPMI 10mlに再懸濁させた。それを再度、Falcon 100μmナイロンセルストレイナーでろ過して、遠心分離した。細胞ペレットをRPMI培地 2mlに再懸濁させた。これらのリンパ球を実験に用いた。
増殖した共培養物の上清またはマウス血清試料に分泌されたサイトカインおよびケモカインを、製造業者のプロトコル(eBioscience、米国カリフォルニア州)に従って、IL−10、GM−CSF、IL−17A、IFN−γ、TNF−α、IL−2、IL−6、IL−1βIL−22、MIP−1α、IL−8/KCの存在下、サンドイッチ酵素免疫測定法(ELISA)キットを用いて測定した。試料についての1:2〜1:50の希釈物を、5〜2,000pg/mlの範囲内の標準と共に使用した。最後に、ELISAプレートを読取り、濃度を自動ELISAプレートリーダー(Fluostar Optima、BMG Labtech)で算出した。
血清および肺洗浄液中の抗体(IgG、IgG2a、IgE)のレベルを、酵素免疫測定法(ELISA)を利用して測定した。手短に述べると、96ウェルニトロセルロース(Nunc)プレートを、関連の抗原(OVA、MOGペプチドなど)でコーティングして、4℃で一晩インキュベートした。プレートを、正常なマウス血清を含有するPBSでブロックした後、異なる希釈の実験試料と共に室温で2hrインキュベートした。プレートを4回洗浄した後、アルカリフォスファターゼ(AP)をコンジュゲートさせた抗マウスIgアイソタイプ抗体を添加して、2hrインキュベートした。プレートを洗浄した後、PNPP基質を添加して、発色をFluostar ELISAリーダーにより405nmの波長で読み取った。抗体検出のための試薬は全て、Southern Biotech(アラバマ州バーミングハム)から得た。
脾臓T細胞の増殖反応を、96ウェル平底マイクロタイタープレートにおいて三重測定で測定した。免疫化マウスからの合計4×105個の脾臓T細胞および4×105個の抗原提示細胞(APC)(18Gyを照射された対照同一遺伝子マウスからの脾臓細胞)を、異なる濃度(0.1、1および10μg/mL)のMOGペプチドと混合して、RPMI培地(10%ウシ胎仔血清(FBS)を含む)中、37℃(5%CO2)で4日間培養した。
免疫化されたマウスからの合計5×105個の細胞を、マルチカラー蛍光標識mAb(製造業者の使用説明書による濃度)での細胞内および細胞外染色のために採取した。細胞をFcマウス血清(Sigma)と共にインキュベートして、非特異的結合を予防し、蛍光活性化セルソーター(FACS)緩衝液(1×リン酸緩衝生理食塩水(PBS)中の2%ウシ胎仔血清)で洗浄した。細胞外マーカーについて抗マウスCD3e−FITC、CD4−PECy−5、CD25−PE−Cy7、CD8a−APC−Cy7、抗PD−1−PerCP eFluore 710、抗CD49b−Alexafluor−700(BALB/cおよびC57bl/6マウス用)など(eBioscience)と共に4℃で30分間インキュベートした後、細胞を2回洗浄して、固定溶液(FACS緩衝液中に1%パラホルムアルデヒド)中で5分間固定した。2回洗浄した後、低温透過緩衝液(PBS中のFACS緩衝液+0.3%サポニン(Sigma)+5%正常ヒト血清)と共に5分間インキュベートした後、抗マウスIL−10(eBioscience)および抗Foxp3−PE(Biolegend)を添加し、さらに4℃で30分間インキュベートした。細胞を、1%サポニンを含有するFACS緩衝液で1回洗浄して、固定した。それらをFortessaで読み取り、FACS−DIVAソフトウエア(Becton Dickinson、カリフォルニア州マウンテンビュー所在)を用いて解析した。各マーカーを、各アイソタイプ適合対照モノクローナル抗体に基づいてゲーティングした。
末梢血単核細胞(PBMC)を、Ficoll−Paqueを用いて正常なヒトドナーから得た。樹状細胞(DC)を得るために、文献で確立された手順を利用して、接着性PBMCをRPMI培地中で組換えGM−CSFおよびIL−4と共に5〜6日間インキュベートした。各実施例に記載された通り、テスト材料と共に特定の時間培養されたヒトPBMCを、標準手順を利用して、市販の様々なフルオロフォア(eBiosciences)で標識されたCD34、CD45、CD11cおよびCD11bに対する抗体で染色した。
以下の実施例は、本発明の範囲を限定するというよりむしろ例示を意図するものである。
C57/bl6雄マウスを、500×106CFU/マウスのCCまたはPBS対照で週に2回ずつ5回、経口または鼻内処置した。最後の処置の8日後に、マウスを安楽死させた。脾臓を単離して、1μg/ml濃度のT細胞マイトジェンConAで24hr、エクスビボ刺激した。上清を採取して、サイトカイン(IFN−γ、TNF−α、IL−6、およびIL−17A)をELISAで測定した(図1)。これらの結果から、CCでの処置がConAでのエクスビボ刺激による脾細胞中の炎症性サイトカインの産生をダウンレギュレートすることが実証され、ウイルス、細菌、真菌をはじめとする種々の感染から、そして環境毒素、薬物反応および自己免疫障害からの、T細胞が介在する炎症の抑制におけるCCの役割が示唆される。
C57/bl6雄マウスを、500×106CFU/マウスのCCまたはPBS対照で週に2回ずつ5回、経口または鼻内処置した。最後の処置の8日後に、マウスを安楽死させた。処置されたマウスの脾臓を単離して、0.1μg/ml濃度のB細胞マイトジェンPWMで24hr、エクスビボ刺激した。ELISAを用いたサイトカイン(IFN−γ、TNF−α、IL−6、およびIL−17A)測定のために、上清を採取した(図2)。これらの結果から、CCでの処置がPWMでのエクスビボ刺激による脾細胞中の炎症性サイトカインの産生をダウンレギュレートすることが実証され、感染および非感染関連の全身炎症障害における炎症促進性サイトカインの過剰な産生の低減におけるCCの役割が示唆される。
C57/bl6雄マウスの群を、500×106CFU/マウスのCCまたはPBS対照で週に2回ずつ5回、経口または鼻内処置した。最後の処置の8日後に、マウスを安楽死させて、脾臓を単離した。脾細胞を培地、ConAおよびPWMと共に24hr、培養した。ELISAを用いたIL−10測定のために、上清を採取した(図3A〜図3C)。得られた結果から、刺激を加えた、または加えない24hr培養により、CCが脾細胞中のIL−10エクスビボ産生をアップレギュレートすることが実証され、CCがIL−10インビボ産生を誘導する可能性が示唆される。これらの結果から、炎症状態におけるホメオスタシスバランスを再安定化させることにおける全身免疫調整および抗炎症性の役割も示される。
雌C57/bl6マウスを、500×106CFU/マウスのCCまたはPBS対照で週に2回ずつ4回、胃管栄養法を介して経口処置した。最後の処置の4日後に、マウスを安楽死させて、脾臓を採取した。脾細胞を1μg/ml濃度のLPSで24時間および72時間刺激した。上清を採取し、ELISAを用いてIL−10を測定した(図4)。得られた結果から、CCが、プラセボ群(PBS)に比較してLPS刺激による脾細胞中のIL−10エクスビボ産生をアップレギュレートすることが実証される。これらの試験から、調節異常に陥った炎症促進性サイトカイン放出を正常化すること、ならびに炎症反応および/または自己免疫障害に対する防御におけるCCの抗炎症活性が示唆される。
腸リンパ組織中の炎症性サイトカインレベルに及ぼすCCの影響を測定するために、雌C57/bl6マウスを、500×106CFU/マウスのCCまたはPBS対照で週に2回ずつ4回、経口処置した。最後の処置の3日後に、マウスを安楽死させて、局所腸間膜リンパ節を採取した。LPS刺激の24hr後に採取された上清で、サイトカインレベルを測定した。CCの経口投与は、PBS群に比較して、IFN−γ、IL−6およびIL−17Aのレベル低下をもたらした(図5)。これらの結果から、CCが局所腸間膜リンパ節におけるTh1およびTh17サイトカインの産生をダウンレギュレートする可能性が実証された。したがって、外部もしくは内部刺激、または微生物、例えばグラム陽性およびグラム陰性菌、ウイルス、真菌、寄生虫、LPS、毒素、自己抗原、グリコシルホスファチジルイノシトール、組織傷害(外傷、熱傷)などにより免疫調節異常および炎症が惹起される種々の炎症性障害において、CCは、TH1および/またはTH17介在性炎症促進性サイトカインレベルを低減する能力を有する。
雌C57/bl6マウスを、500×106CFU/マウスのCCまたはPBS対照で週2回ずつ4回、経口処置した。最後の処置の4日後に、マウスを安楽死させて、脾臓を採取した。IL−10+を発現するCD3+CD4+およびCD3+CD8細胞の割合%を、フローサイトメトリーにより分析した。CCでの処置は、脾細胞中のCD4+およびCD8+の両T細胞上での細胞内IL−10の発現増加をもたらした(図6)。まとめると、図4〜図6に示された結果から、CCが炎症性障害および自己免疫障害において局所および全身の両方で免疫調節異常を正常化させる強い能力を有することが実証される。
C57/bl6雄マウス3匹の群に、CC(500×106CFU/マウス)またはPBSを週1回ずつ4週間にわたり皮下経路で投与した。最後の処置の28日後にマウスを安楽死させた。脾臓を採取して、脾細胞をConAと共に培養した。24hrのConA刺激後に採取された上清で、サイトカインレベルを測定した。図7に示された結果から、CCがIFN−γ、TNF−α、およびIL−6サイトカイン産生の持続的調整にもたらしたことが示される(図7)。したがってCCは、治療の終了後も、長期持続性の免疫調整効果を提供することができる。
C57/bl6雄マウス3匹の群に、CC(500×106CFU/マウス)またはPBSを週1回ずつ4週間にわたり経口処置した。マウスを、最後の処置の28日後に安楽死させて脾細胞を採取し、フローサイトメトリーにより分析した。CCでの経口処置は、CD8+、CD8+CD25+およびNKT(CD3+CD49b+)細胞上のFOXP3発現増加およびNK細胞上のPD−1発現増加をもたらした(図8)。したがってCCは、様々な調節性リンパ球を誘導して、炎症を制御する。このデータから、CCが自然および適応免疫細胞上の異なる調節性分子の発現を調節することによりホメオスタシスを誘導し得ること、それゆえCCを用いて様々な疾患における過剰な炎症を制御し得ることが示唆される。NK細胞上でのPD−1発現が、マイコバクテリア感染において炎症反応を制御することが示されている。加えて、NK上のPD−1もまた、ウイルス、細菌および自己免疫障害をはじめとする炎症を防御することを示されている。
C57/bl6雄マウス3匹の群に、CC(500×106CFU/マウス)またはPBSを週1回ずつ4週間にわたり皮下処置した。マウスを、最後の処置の28日後に安楽死させて脾細胞を採取し、フローサイトメトリーにより分析した。CCでの皮下処置は、CD4+、CD4+CD25+およびCD8+CD25+T細胞上のFOXP3発現増加をもたらした(図9)。したがって、CCの非経口投与は、持続性の免疫調整効果も提供する可能性がある。これらの結果から、調節性T細胞のサブセットを誘導および増大することにおけるCCの影響が実証される。T調節性細胞は、自己免疫性脳脊髄炎、IBD、細菌性大腸炎、1型糖尿病、気道の好酸球性炎症、移植片対宿主病、臓器移植などの広範囲の疾患において炎症活性を抑制することが示されている。
C57/bl6雄マウス3匹の群を、PBS 100μl中の7mg/kgのLPSで腹腔内にチャレンジし、LPSでの2hrおよび24hrインビボチャレンジの後に、CC(500×106CFU/マウス)を経口処置した。健常な非チャレンジマウスおよびPBS摂取マウスもまた、対照として含めた。マウスを2回目の処置後に安楽死させて、血液試料を採取し、ELISAによりサイトカインについて分析した。LPSチャレンジマウスは、血清中に高レベルの炎症性サイトカインを有した。対照的にCC処置は、炎症性サイトカインIL−1βおよびIL−6の産生をダウンレギュレートし、抗炎症性サイトカインIL−10の産生をアップレギュレートした(図10)。したがってCCは、非損傷性免疫反応を促進する。IL−1βおよびIL−6の誘導は、複数の急性および慢性炎症性および自己免疫性疾患、例えば敗血症、MS、アルツハイマー病、パーキンソン病、RA、痛風、代謝疾患(アテローム性硬化症、II型糖尿病)、高血圧、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、喘息、乾癬およびアレルギーに関連づけられている。それゆえCCは、これらの炎症性の医学的状態の管理および改善を支援する可能性がある。
C57/bl6雄マウス3匹の群を、PBS 100μl中の7mg/kg LPSで腹腔内にチャレンジし、LPSでの2hrおよび24hrインビボチャレンジの後に、CC(500×106CFU/マウス)で経口処置した。健常な非チャレンジマウスおよびPBS摂取マウスもまた、対照として含めた。これらの試験において、用いられたCCは、2つの形式:CC−1(液体PYE培地中で生育させて、生理食塩水中、室温で貯蔵したCC)およびCC−2(液体PYE培地中で生育させて、冷蔵庫内で4℃で貯蔵されたCC)で調製した。マウスを、2回目のCC−1およびCC−2処置の後に安楽死させて、肺および肝臓を採取した後、それらのホモジネート中のサイトカインを測定した。CC−1およびCC−2は両者とも、LPSチャレンジ群に比較して、肺および肝臓の炎症性サイトカインTNF−α、IL−6、IL−1βおよびIL−17Aの産生をダウンレギュレートした(図11)。これらの結果から、CCが、様々な臓器(腸、肺、肝臓、脳、皮膚、心臓など)におけるウイルスおよび細菌病原に関連する炎症後の医学的状態、組織損傷、細胞ストレス、代謝撹乱などの炎症工程を制御して、組織機能を正常化する際に使用できる可能性が実証される。LPS介在性の敗血症は、救命救急、手術および焼灼設備で共通の致死原因である。宿主の免疫成分を標的にすることによりLPSが介在する致死性炎症カスケードの改善に向かわせる治療的アプローチは、臨床および治療的利点を有する可能性がある。
C57/bl6雄マウス3匹の群を、PBS 100μl中の7mg/kg LPSで腹腔内にチャレンジし、LPSでの2hrおよび24hrインビボチャレンジの後に、CC(500×106CFU/マウス)を経口処置した。健常な非チャレンジマウスおよびPBS摂取マウスもまた、対照として含めた。これらの試験において、用いられたCCは、2つの形式:CC−1(液体PYE培地中で生育させて、生理食塩水中、室温で貯蔵したCC)およびCC−2(液体PYE培地中で生育させて、冷蔵庫内で4℃で貯蔵されたCC)で調製した。マウスを、2回目のCC−1およびCC−2処置の後に安楽死させて、血液試料を採取し、生化学的マーカーに及ぼす影響を測定した。CC−1およびCC−2の両者での処置は、LPSチャレンジマウスの血清中グルコース(Glu)、グロブリン(GLOB)、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)、総リン酸塩(TP)および総ビリルビン(TBIL)レベルを、非チャレンジおよびPBS摂取マウスのレベルまで正常化させた(図12)。これらの結果から、CCが肝臓関連疾患をはじめとする様々な炎症介在性障害を処置することにおいて効果的に使用できる可能性が実証される。
C57/bl6雄マウス3匹の群を、PBS 100μl中の7mg/kg LPSで腹腔内にチャレンジし、LPSでの2hrおよび24hrインビボチャレンジの後に、CC(500×106CFU/マウス)を経口処置した。健常な非チャレンジマウスおよびPBS摂取マウスもまた、対照として含めた。これらの試験において、用いられたCCは、2つの形式:CC−1(液体PYE培地中で生育させて、生理食塩水中、室温で貯蔵したCC)およびCC−2(液体PYE培地中で生育させて、冷蔵庫内で4℃で貯蔵されたCC)で調製した。マウスを、2回目のCC−1およびCC−2処置の後に安楽死させて、様々な臓器を採取した。肺、肝臓および他の臓器の炎症または損傷は、CC−1およびCC−2の両者で観察されなかった。肝臓切片のH&E染色を実施した。図13に示された結果から、LPSチャレンジマウスに比較した、LPS誘導性炎症および肝臓損傷の予防における経口経路で投与されたCCの防御作用が実証される。大規模な肝臓破壊が、感染性および非感染性病原の結果としての望ましくない炎症活性による複数の医学的状態に関連づけられている。それゆえCCは、自己免疫性肝炎、アルコール関連の肝臓障害、ウイルス介在性肝炎などによる肝臓損傷を予防および改善することにおける強力な能力を有する。
10〜11週齢Balb/c雌マウスに、5%IMQクリーム(Aldra、イミキモド)の外用の用量6.25mgを剃毛された背部に連続6日間投与した。マウスを500×106CFU/マウスのCCで3日目から(週5日ずつ2週間)経口処置した。マウスを、最後の処置の3日後に安楽死させて、脾臓を採取した。脾細胞を培地で4日間、エクスビボ培養して、培養上清をサイトカインについて検査した(図14)。CCでの処置は、PBS処置乾癬マウスに比較して、Aldra誘導性乾癬マウスにおいてIFN−γ、IL−6、IL−17AおよびIL−22の産生の減少をもたらした(図14)。これらの試験から、CCが炎症および自己免疫疾患においてサイトカイン調節異常を修正して、有益な治療効果をもたらし得ることが示唆される。感染の他にも、真皮および表皮における免疫細胞の浸潤もまた、アトピー性皮膚炎、化膿性汗腺炎、ロザケアなどの他の慢性皮膚疾患において生じる。それゆえCCは、様々な皮膚障害を炎症成分で処置することに用いることができる。まとめると、図14に表された結果から、CCが病原または自己免疫関連の炎症反応を防御する全身免疫調整および抗炎症活性を有することが実証される。
雄C57bl/6の5匹の群に、飲料水中の3%デキストラン硫酸ナトリウム(DSS)を連続7日間与えた。マウスを、DSS開始と同日にCC(500×106CFU/マウス)で処置した。水処置マウスを、対照として用いた。10日目にマウスを安楽死させて、結腸組織を採取し、24時間培養した。サイトカインを、ELISAを用いて培養上清で測定した。得られた結果から、CCが炎症促進性サイトカインIFN−γ、TNF−α、IL−1β、ならびにケモカインIL−8/KCおよびMIP−1αを減少させることが示される(図15)。したがって、IBDの上皮浸透性、アポトーシス、潰瘍、下痢などをもたらす連鎖の活性化の原因となるIBDのネズミDSS誘導性大腸炎モデルの結腸で、CCの経口処置が局所的に炎症性サイトカインおよびケモカインのレベルの異常を減少させた。
自己抗原特異性免疫反応の低減におけるCCの影響を測定するために、C57Bl6雌マウス5匹の群を、生理食塩水100μl中のCFAに乳化されたMOG35−55ペプチド 200μgで皮下に免疫化した。加えてマウスは、生理食塩水200μl中の百日咳毒素400ngを0日目および3日目に腹腔内に受けた。マウスは、免疫化の3日目から開始して、実験の終了時まで連続で3日ごとにCC(500×106CFU/マウス)を経口処置された。PBS処置されたチャレンジマウスを、対照として用いた。マウスを免疫化の30日後に安楽死させて、脾臓および血液試料を採取した。T細胞の反応を、脾細胞中でMOGペプチド(10、1および0.1μg/ml)に対して検査した。抗MOG抗体(IgGおよびIgG2a)の力価を、血清試料中、ELISAにより分析した。興味深いこととして、CCは、PBS対照群に比較して、自己抗原MOG特異性T細胞反応を低減した(図16)。CCはまた、PBS対照群に比較して、自己抗原MOG特異性IgGおよびIgG2a抗体力価を減少させた(図16)。これらの結果から、CCが自己抗原特異性TおよびB細胞の反応を低減する可能性が示唆される。EAEモデルは、ヒト炎症性脱髄疾患である多発性硬化症(MS)に一般に用いられるモデルである。MSは、中枢神経系(CNS)の炎症性疾患である。EAEは、免疫病理学的メカニズムと神経病理学的メカニズムの相互作用がMSの病理学的特色、即ち炎症、脱髄、軸索損傷およびグリオーシスを引き起こす複合的状態である。それゆえCCは、自己免疫および神経障害、自己免疫性血液疾患、自己免疫性溶血性貧血などを処置するのに効果的である可能性がある。
気道/肺の炎症性疾患におけるCCの影響を測定するために、Balb/c雄マウス5匹の群を、1日目および6日目に生理食塩水400μl中のオボアルブミン10μgおよびAl(OH)3 2mgで腹腔内に感作した。12日目および14日目に、マウスにオボアルブミン50μgで鼻内に(15μl/ノストリル)チャレンジした。感作の7日目以降、17日目まで3日ごとに、マウスをCC(500×106CFU/マウス)で経口処置した。別の群で、マウスをデキサメタゾン(DEX、2mg/kg i.p.)単独で13日目に1回、またはデキサメタゾンおよびCCで処置した。対照マウスは、CCと同じスケジュールで生理食塩水を受けた。マウスを最後の処置の翌日に安楽死させて、血液試料、肺洗浄液および脾臓を採取した。脾細胞の1つの細胞懸濁液(2×106細胞/ml)をOVA 50μgと共に96h培養し、サイトカイン(IL−4およびIL−6)レベルをELISAにより培養上清で分析した。CCでの経口処置は、OVAで感作されたマウスの血清および肺洗浄液中のOVA特異性IgEの産生を低減した(図17)。IL−4およびIL−6のレベルが、CC処置により脾臓中で低減することも見出された(図18)。CC処置とデキサメタゾンとの組み合わせは、デキサメタゾン単独処置に比較して、脾臓中のIL−4およびIL−6レベルのさらなる低減をもたらした(図19)。これらのデータから、CCでの処置が、マウスのOVA誘導性アレルギー性気道炎症を予防することが示唆される。アレルギーは、複数の免疫細胞および炎症メディエータがアレルギー疾患の開始および症状発現に寄与する複合的疾患である。アレルギーは最も多くは、IgE介在性過敏性反応の結果である。IL−4およびIL−6の産生増加は、アレルギー疾患と相関する。血清中のIgEの存在は、B細胞中でのIL−4介在性Igクラススイッチにより生じたアレルギー疾患の証拠である。IgE依存性アレルギー反応は、1種または複数の臓器、ならびに鼻炎、副鼻腔炎、結膜炎、喘息、皮膚炎、および食物アレルギーなどのアレルギー疾患に影響を及ぼす可能性がある。
C57bl/6マウス5匹の群に高脂肪食を4〜6ヶ月間摂餌させて、CC(500×106CFU/マウス)を週3回ずつ4〜6ヶ月間処置した。PBS処置された高脂肪食マウスを、対照として用いた。耐糖能テストを、約180日目に実験を終了する前に実施した。血中グルコースは、OneTouchモニタリングシステムを利用して測定した。マウスを安楽死させて、血液、肝臓および脾臓を採取した。血清試料を用い、Vetテストにより生化学的パラメータを測定した。肝臓ホモジネートを調製して、炎症促進性サイトカイン(IFN−γ、TNF−α、IL−6、IL−1β)をELISAにより測定した。脾細胞(2×106細胞/ml)をLPS(1mg/ml)と共に24h培養し、サイトカイン(IFN−γ、TNF−α、IL−6)をELISAにより培養上清で分析した。CCでの経口処置は、高脂肪食対照マウスに比較して、肝臓(図20)および脾臓(図21)中の炎症促進性サイトカインを有意に減少させており、CCが慢性および全身炎症を効果的に低減する可能性が示唆される。CCでの経口処置はまた、高脂肪食誘導性肥満モデルにおける代謝疾患に関連する生化学的パラメータにおいて明確な利益を提供した(図22)。さらにCC処置のマウスは、対照群に比較して、耐糖能の改善を実証した(図23)。肥満が低悪性度の炎症に関連し、2型糖尿病、心臓血管疾患、高血圧、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、非アルコール性脂肪肝疾患、脱毛などの複数の代謝障害に寄与することは、確定されている。肥満状態では、複数の炎症性サイトカインおよびケモカイン(例えば、IFN−γ、TNF−α、IL−6、IL−1βなど)の産生が、調節異常である。肥満はまた、インスリン抵抗性に関連し、耐糖能障害および非アルコール性脂肪肝疾患をもたらす。TNF−αの活性の阻害が、アルコール摂取動物における脂肪性肝炎の発症を有意に阻害することも示されている。高コレステロールは、冠動脈心疾患(アテローム性硬化症)、卒中、末梢血管疾患、糖尿病、および高血圧のリスク上昇に関連する。トリグリセリドのレベル上昇は、アテローム性硬化症に関連し、急性膵炎のリスクも上昇させる。高レベルの尿酸は、腎臓が尿酸を効率的に排出しない場合に生じる。高レベルの尿酸を誘発し得る他の因子には、肥満、甲状腺機能低下症などがある。尿酸の蓄積は、炎症および痛風発作の強烈な疼痛をもたらし得る。高レベルのクレアチンキナーゼは、心臓発作、全ての型の筋ジストロフィー、内分泌障害、神経筋疾患などでも認められる。TNF−α、IL−6、IFN−γ、IL−1βなどの炎症促進性サイトカインは、肥満、肥満関連の病理、例えば2型糖尿病、インスリン抵抗性、非アルコール性脂肪肝疾患、アルコール誘導性肝疾患、アルツハイマー病などの血管機能不全関連の神経変性工程、うつ病、統合失調症などの精神神経障害に関与することが知られている。ミトコンドリア活性酸素種(ROS)は、慢性ヒト疾患における炎症促進性サイトカイン(TNF−α、IL−6、IFN−γ、IL−1β)産生を促す。これらの試験から、CCでの処置が、高脂肪食による肥満マウスにおいて、代謝障害に関連する血清中生化学的マーカーを低減し、耐糖能を改善し、肝臓の炎症促進性サイトカインを低減することが示される。
治療的処置に関連する毒性の低減におけるCCの影響を測定するために、C57Bl6マウス5匹の群を、生理食塩水100μl中の0.25×106 EL−4細胞/マウスで左下部脇腹の皮下にチャレンジした。CC(50×106cfu/マウス)を、El−4細胞でのチャレンジ後5日目から開始して週に1回経口投与した。17日目および21日目に、マウスを150mg/kgシクロホスファミドで腹腔内処置した。健常な非チャレンジマウスおよびシクロホスファミド単独処置チャレンジマウスを、対照として用いた。EL−4チャレンジの30日後に、マウスを人により安楽死させて、血液試料を採取した。CCとシクロホスファミドとの処置は、EL−4腫瘍担持マウスの血清中リン酸塩(PHOS)レベルおよび総ビリルビン(TBIL)レベルを、非チャレンジ正常マウスのレベルまで正常化させた(図24)。これらの結果から、CCが抗癌剤の毒性低下または治療的処置に効果的に使用できる可能性が実証される。
癌化学療法に関連する毒性の低減におけるCCの影響を測定するために、C57Bl6マウス5匹の群を、生理食塩水100μl中の0.4×106 B16細胞/マウスで腹腔内にチャレンジした。B16チャレンジ後7日目および10日目に、マウスをシスプラチン(4mg/kg)で腹腔内処置して、CC(50×106cfu/マウス)を週1回、経口投与した。健常な非チャレンジマウスおよびシスプラチン単独処置チャレンジマウスを、対照として用いた。B16チャレンジの30日後に、マウスを安楽死させて、血液試料を採取し、血清中生化学的マーカーに及ぼす影響を測定した。CCとシスプラチンとの処置は、B16転移癌担持マウスの血清中リン酸塩(PHOS)、尿素、総ビリルビン(TBIL)およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)を、非チャレンジ正常マウスのレベルまで正常化させた(図25)。これらの結果から、CCが抗癌剤の毒性低下または治療的処置に効果的に使用できる可能性が実証される。
治療抗体に関連する毒性の低減におけるCCの影響を測定するために、C57Bl6マウス5匹の群を、生理食塩水100μl中の0.4×106 B16細胞/マウスで左下部脇腹の皮下にチャレンジした。CC(50×106cfu/マウス)を、B16メラノーマ癌細胞でのチャレンジ後3日目から開始して週1回、経口投与した。CCでの最初の処置の2日後に、抗PD−1抗体(200μg/マウス)を腹腔内投与し、引き続き3〜4日ごとに行った。健常な非チャレンジマウスおよび抗PD−1抗体単独処置チャレンジマウスを、対照として用いた。腫瘍チャレンジの25日後に、マウスを安楽死させて、血液試料を採取し、生化学的マーカーへの影響を測定した。抗PD−1モノクローナル抗体と組み合わせたCCでの処置は、B16腫瘍担持マウスの血清中リン酸塩、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)レベルを、非チャレンジ正常マウスのレベルまで正常化させた(図26)。これらの結果から、CCが治療抗体およびチェックポイント阻害剤抗体の毒性低減、または治療的処置において、効果的に使用できる可能性が実証される。
免疫調整におけるリポ多糖陰性(LPS−ve)CCの役割を測定するために、C57/bl6雌マウスを、生理食塩水200μl中の25mg/kg LPSで腹腔内にチャレンジし、LPSでの2hrおよび20hrインビボチャレンジの後に、LPS−ve CC(50×106CFU/マウス)で経口処置した。健常な非チャレンジマウスおよびPBS摂取マウスもまた、対照として含めた。マウスを、2回目の処置の24h後に安楽死させて、肝臓を採取した後、ホモジネート中のサイトカインを測定した。LPSチャレンジマウスは、肝臓ホモジネート中に高レベルの炎症性サイトカインおよびケモカインを有した。対照的に、LPS−ve CC処置は、炎症性サイトカインIFN−γ、TNF−α、IL−1β、IL−6、IL−8/KC、およびケモカインMIP−1αの産生をダウンレギュレートし、抗炎症性サイトカインIL−10の産生をアップレギュレートした(図27)。これらの結果から、LPS−ve CCが、野生型CCを用いて得られた効果と類似の、炎症工程を制御する上で明確な効果を示すことも実証される。それゆえ、LPS陰性CCは、炎症工程の制御、および炎症後の医学的状態をはじめとする組織機能の正常化において使用できる可能性がある。
ヒトPBMC(4×106/ウェル)を、不活化されたラクトバチルス・ラムノサス(LB)またはリステリア・モノサイトゲネス(LM)(50×106CFU/ml)で6h刺激した。その後、CV(250×106CFU/ml)を添加して、プレートをさらに24hまたは96hインキュベートした。培養上清を採取して、ELISAによりIFN−γおよびTNF−αについてアッセイした。CVでの処置は、LBおよびLMにより誘導されたIFN−γおよびTNF−αのレベルを低減した(図28)。これらの結果から、カウロバクターの他の菌種が、細菌またはウイルス病原に関連する炎症を低減する可能性が示唆される。同じくこれらの結果から、カウロバクター属の菌種を用いて、関連マイクロバイオームおよび非関連微生物により誘導された望ましくない炎症反応を処置する可能性が示唆される。さらにそれらが、マイクロバイオーム治療薬の免疫調整活性を調整するのに使用できる可能性がある。
末梢血単球から分化させたヒト骨髄樹状細胞(2×106/ml)を、CC(50または10CFU/ml)の非存在下または存在下で24h培養した。培養上清を採取して、ELISAによりIL−10レベルについて検査した。得られた結果から、CCが調整されたDC産生IL−10の集団を作製する可能性が示唆される(図29)。樹状細胞(DC)は、T細胞抑制および耐性を誘導する能力を有する適応免疫の重要な調節因子である。DCにより産生されたIL−10は、調節性T細胞の生成、増大および維持において役割を担う。これらの結果から、CCがDCを基にした免疫治療戦略のためのエクスビボDC操作に使用できる可能性が示唆される。
ヒトPBMC(4×106/ウェル)をCC(500×106、50×106、10×106および1×106CFU/ml)および生理食塩水と共に10日間培養した。PBMCを表面マーカーCD34、CD45、CD11cおよびCD11bについて染色した。細胞をCD34+CD45−多能性幹細胞についてゲーティングし、さらにCD11c+およびCD11b+DCならびにマクロファージについてゲーティングして、データをフローサイトメトリーにより分析した。得られた結果から、CCが幹細胞を骨髄細胞に分化する可能性が示唆される(図30)。骨髄細胞は、多能性造血幹細胞から発生する。これらの細胞は、自然および適応免疫、炎症反応、免疫ホメオスタシスの修復、骨リモデリングなどにおいて重要な役割を担う。したがってCCは、患者専用の免疫療法で使用される幹細胞からの骨髄細胞の分化および/または増大をもたらす可能性がある。
Claims (33)
- a)生存するカウロバクター・クレセンタスと、
b)医薬的に許容し得る賦形剤と
を含む免疫調整組成物。 - 抗原、自己抗原、またはアレルゲンをさらに含む、請求項1に記載の組成物。
- 前記カウロバクター・クレセンタスが、野生型、リポ多糖陰性菌株、またはS層陰性菌株である、請求項1または2に記載の組成物。
- 前記カウロバクター・クレセンタスが、生存可能、非変性、突然変異型、弱毒性、または遺伝子改変型である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記カウロバクター・クレセンタスが、1種または複数の異種ポリペプチドを産生するように遺伝子改変され、異種ポリペプチドが、自己抗原、アレルゲン、サイトカイン、共刺激性または共阻害性分子、ケモカイン、免疫グロブリンまたはその抗原結合断片、抗微生物薬から選択される、請求項1〜3のいずれか1項に記載の組成物。
- 治療抗体をさらに含む、請求項1〜5のいずれか1項に記載の組成物。
- 患者のマイクロバイオームからのプロバイオティクス、シンビオティクス、治療性病原、または治療性細菌をさらに含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載の組成物。
- 少なくとも1種のアジュバント、サイトカイン、または抗炎症剤、抗増殖剤、細胞傷害剤、免疫抑制剤、免疫調節剤、免疫調整剤、抗ヒスタミン薬もしくは抗微生物薬から選択される治療薬をさらに含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載の組成物。
- 個体における免疫反応を調整する方法であって、請求項1〜8のいずれか1項に記載の免疫調整組成物の有効量を、前記抗体に投与することを含む、方法。
- 前記免疫反応が、1種または複数のサイトカインの調整を含む、請求項9に記載の方法。
- 前記免疫反応が、液性免疫反応、細胞免疫反応、または自然免疫反応である、請求項9に記載の方法。
- 自己抗原またはアレルゲンを、前記個体へ投与することをさらに含む、請求項9に記載の方法。
- 放射線療法、レーザ治療、光線力学療法および/または手術などの治療的処置を、前記個体へ施すことをさらに含む、請求項9に記載の方法。
- 抗菌剤、抗マイコバクテリア剤、抗原虫薬、抗マラリア薬、抗蠕虫薬、抗ウイルス薬、
抗ヒスタミン薬、抗糖尿病薬、抗炎症剤、抗増殖剤、細胞傷害剤、免疫抑制剤または免疫調整剤を、前記個体へ投与することをさらに含む、請求項9に記載の方法。 - 抗体を前記個体へ投与することをさらに含む、請求項9に記載の方法。
- サイトカイン、アジュバント、または免疫調節剤を前記個体へ投与することをさらに含む、請求項9に記載の方法。
- マイクロバイオームまたは治療性病原からのプロバイオティクス、シンビオティクス、治療性メンバーを、前記個体へ投与することをさらに含む、請求項9に記載の方法。
- 前記個体が、ヒト、非ヒト哺乳動物、または非哺乳動物の動物である、請求項9〜17のいずれか1項に記載の方法。
- 前記組成物が、経口、経鼻、皮下、筋肉内、静脈内、膣内、経皮、外用、直腸、眼、または粘膜投与経路を介して投与される、請求項9〜18のいずれか1項に記載の方法。
- 樹状細胞を調整する方法であって、
(a)個体から得られた樹状細胞(DC)を、(i)カウロバクター・クレセンタス;および/または(ii)抗原、を含む組成物と接触させることを含み、前記接触させることが、インビトロであり、前記接触させることが、前記DC上の前記抗原の抗原提示を調整し、それにより調整されたDCの集団を生成する、方法。 - 前記調整されたDCを前記個体へ投与することをさらに含む、請求項20に記載の方法。
- ナチュラルキラー(NK)細胞、NKT細胞、γδT細胞、(ILC)、T細胞、またはB細胞である調節性リンパ球を生成する方法であって、個体から得られた前記リンパ球を、(i)カウロバクター・クレセンタス;および/または(ii)抗原、を含む組成物と接触させることを含み、前記接触させることが、インビトロであり、前記接触させることが、調節性リンパ球の集団を生成する、方法。
- 前記調節性細胞を抗原提示細胞(APC)と接触させることをさらに含む、請求項22に記載の方法。
- 前記調節性リンパ球を前記個体へ投与することをさらに含む、請求項22に記載の方法。
- 個体における免疫反応を調節する方法であって、請求項1〜8のいずれか1項に記載の免疫調整組成物の有効量を、前記個体へ投与することを含み、調節性T細胞、および/またはB細胞、および/またはNK細胞、および/またはNKT細胞、および/またはγδ細胞、ILC、および/またはマクロファージ、および/または樹状細胞の集団の数、活性および/またはエフェクター機能が調整される、方法。
- 個体における幹細胞の増殖、分化および/または調整、ならびにホメオスタシスの修復を誘導する方法であって、請求項1〜8のいずれか1項に記載の免疫調整組成物の有効量を、前記個体へ投与することを含む、方法。
- 幹細胞を改質する方法であって、前記幹細胞を、カウロバクター・クレセンタスを含む組成物と接触させることを含み、前記接触させることが、増大(expanded)、分化および/または調整された幹細胞の集団を生成する、方法。
- 個体における望ましくない炎症活性、免疫調節異常、または自己免疫障害を処置する方法であって、請求項1〜8のいずれか1項に記載の免疫調整組成物の有効量を、前記個体へ投与することを含む、方法。
- 個体における代謝障害を処置する方法であって、請求項1〜8のいずれか1項に記載の免疫調整組成物の有効量を、前記個体へ投与することを含む、方法。
- 個体における神経障害を処置する方法であって、請求項1〜8のいずれか1項に記載の免疫調整組成物の有効量を、前記個体へ投与することを含む、方法。
- 個体におけるアレルギー疾患を処置する方法であって、請求項1〜8のいずれか1項に記載の免疫調整組成物の有効量を、前記個体へ投与することを含む、方法。
- 個体における治療的処置の有効性を増大し、そして/または毒性を低減する方法であって、請求項1〜8のいずれか1項に記載の免疫調整組成物の有効量を、前記個体へ投与することを含む、方法。
- 個体におけるマイクロバイオームの不均衡に関連する疾患または医学的状態を処置、修復、または修正する方法であって、請求項1〜8のいずれか1項に記載の免疫調整組成物の有効量を、前記個体へ投与することを含む、方法。
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