JP2018528772A - 検体検出のための方法およびキット - Google Patents
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Abstract
Description
アプタマーは、タンパク質、低分子量化合物、代謝産物、化合物などのさまざまな異なる化学的および生化学的部分に結合することができる一本鎖核酸(ssDNAまたはssRNA)分子である。この結合事象は、アプタマーおよび検体特異的であり、高い親和性で高度に特異的であるように操作することができる。したがって、アプタマーは、モノクローナル抗体と同等の多くの特性を共有しており、現在抗体が伝統的に使用されている多くのプロセスにおいて実行可能な選択肢と考えられている。
この実施例は、化学的にコーティングされたセルロース系固体支持体マトリックス上にスポットされた生体試料が、RNAアプタマーおよびマイクロRNAに例示されるような低分子量一本鎖RNA分子(約20nt長)の単離および精製の前に、周囲条件で保存可能であることを示す。
1.EDTA中に採取した後、40μlアリコートの血液を紙系固体支持体マトリックスに適用し、室温で最低3時間乾燥させた。
1.EDTA中に採取した後、40μlアリコートの血液をセルロース系固体支持体マトリックス(支持体1はFTA(登録商標)であり、支持体2はFTA Elute(登録商標)である)に適用し、室温で最低3時間乾燥させた。
1.TRIZOL(登録商標)試薬(1ml)を、1.5mlの微量遠心管内の500μlの全血に添加し、短時間ボルテックスした。
RT−qPCR−機能検査を用いてさまざまな条件下で単離したRNAを評価するために、臨床的に検証された、閉塞性冠動脈疾患の遺伝子発現に基づく診断試験で使用された23の遺伝子をRT−qPCRによりアッセイした。全体的に、ベースライン群と比較して37℃または6日間保存されたRSM紙からは遺伝子発現レベルのわずかな変化しか観察されず、両方の比較で0.15のメジアンデルタ交差点(Cp)が観察された。試験した23の遺伝子のうちの15の遺伝子は、3群の間の発現レベル(Cp値)に有意差を示さなかった。2つの遺伝子(CD3D、TLR4)は37℃の群においてCp値の有意なシフトを示したが、7種の遺伝子(CD3D、IL18RAP、KLRC4、NCF4、RPL28、TNFAIP6、TNFRSF10C)は6日間の分群において有意なシフトを示し、CD3Dだけが両法の群において有意に影響を受けた。比較して、ベースライン群と37℃との間のメジアンデルタCpは、RSMと比較してPAXgene試料でわずかに大きかった(それぞれ0.53対0.15Cp;および6日間の群と比較してPAXgeneで顕著に大きかった(1.97対0.15Cp;)。したがって、分析された23種の遺伝子について、RSM紙からの平均遺伝子発現は、PAXgene安定化RNAと比較して、高温または長時間の保存に対して感受性が低かった。
Claims (16)
- 1または複数の検体を検出する方法であって、低分子量一本鎖核酸(10〜100nt)を固体支持体上に保存する工程、ならびに前記核酸を増幅する工程を含む方法。
- 前記低分子量核酸が、特異的ssDNAもしくはssRNAアプタマーまたはアプタマーのライブラリであり、1または複数の検体と、検体検出のための前記増幅されたアプタマーとの結合の工程、または検体検出前のアプタマーの選択の工程を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記固体支持体が、セルロース系紙、人工または天然に存在するポリマー繊維を含む織物または不織の繊維性材料、ガラス繊維材料などの鉱物繊維系材料、または表面処理固体材料、例えば、レーザーエッチング表面を含む、すべてが、主にDNA、RNAおよびタンパク質分子を保持するための十分な粗さの表面粗さを備えた化学的または機械的に処理された材料、またはアルギン酸塩などのゲルを含み、これらすべてが場合により安定化試薬または試薬混合物で化学的に処理されている、請求項1または2に記載の方法。
- 前記試薬または試薬混合物が、弱塩基、抗酸化剤およびキレート剤、ならびに場合によりアニオン性界面活性剤を含むか、またはカオトロピック塩などのカオトロピック物質を含む、請求項3に記載の方法。
- 保存されたアプタマーが提供された固体支持体、またはパンチなどのその一部を切り取り、既に増幅試薬が提供されているか、または提供されるであろう反応ウェルまたはチューブに入れる、請求項1乃至4の1または複数項に記載の方法。
- 前記アプタマーを前記固体支持体から抽出し、溶液として前記次の増幅工程に添加する、請求項5に記載の方法。
- 保存されたアプタマーを有する前記パンチを反応プレートの反応ウェルに入れ、前記ウェルに増幅試薬を提供し、前記保存したアプタマーを前記反応ウェル内で増幅させる、請求項5に記載の方法。
- 前記増幅試薬が凍結乾燥物質として前記反応ウェルに存在する、請求項5、6または7に記載の方法。
- 前記反応プレートのウェルを一次アプタマーでコーティングし、前記パンチから増幅されたアプタマーを、検体の検出反応において二次アプタマーとして作用させる、請求項5、6、7または8に記載の方法。
- 前記固体支持体がセルロース系紙を含み、アプタマーの増幅がRCA、Rolling Circle Amplificationによって行われる、請求項1乃至9の1または複数項に記載の方法。
- 前記増幅されたアプタマーに、蛍光色素、触媒アプタマー(リボザイムおよびDNAzyme)などのレポーター分子が提供される、請求項1乃至10の1または複数項に記載の方法。
- 固体支持体、好ましくはセルロース系紙上に保存されたアプタマーと、増幅試薬を含む反応ウェルを備えた反応プレートとを含むキット。
- 前記反応プレートのウェルが一次アプタマーでコーティングされている、請求項12に記載のキット。
- 低分子量核酸(10〜100nt)、好ましくは特異的アプタマーまたはアプタマーのライブラリを保存するための固体紙支持体の使用。
- 固体支持体に適用されたアプタマーが、i)予めアプタマーについてスクリーニングされた結合親和性より高い結合親和性を有する特異的アプタマーを選択するために、またはii)特定の検体に対する新しいアプタマーを選択するために使用する、請求項14に記載の使用。
- 前記アプタマーがRNAアプタマーであり、前記固体支持体が好ましくはRSMである、請求項14または15に記載の使用。
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Citations (3)
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---|---|---|---|---|
WO2014009121A1 (de) * | 2012-07-12 | 2014-01-16 | Siemens Aktiengesellschaft | Federpaket, maschine und schweisskopf |
WO2014113294A2 (en) * | 2013-01-15 | 2014-07-24 | ElectroCore, LLC | Medical self-treatment using non-invasive vagus nerve stimulation |
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WO2014009121A1 (de) * | 2012-07-12 | 2014-01-16 | Siemens Aktiengesellschaft | Federpaket, maschine und schweisskopf |
WO2014113294A2 (en) * | 2013-01-15 | 2014-07-24 | ElectroCore, LLC | Medical self-treatment using non-invasive vagus nerve stimulation |
WO2014143714A2 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Ge Healthcare Uk Limited | Methods for one step nucleic acid amplification of non-eluted samples |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
BINGLING LI: "AMPLIFIED ELECTROCHEMICAL APTASENSOR TAKING AUNPS BASED SANDWICH SENSING PLATFORM AS A MODEL", BIOSENSORS AND BIOELECTRONICS, vol. VOL:23, NR:7, JPN5018005333, 30 January 2008 (2008-01-30), NL, pages 965 - 970, ISSN: 0004316281 * |
BMC CLINICAL PATHOLOGY, vol. 14, no. 22, JPN6021014494, 2014, pages 1 - 9, ISSN: 0004491130 * |
JULIANA M. LAYZER ET AL., OLIGONUCLEOTIDES, vol. 17, JPN6020027942, 2007, pages 1 - 11, ISSN: 0004316278 * |
KAORI TSUKAKOSHI, ANALYTICAL CHEMISTRY, vol. 84, JPN5018005330, 30 May 2012 (2012-05-30), pages 5542 - 5547, ISSN: 0004316279 * |
YOSHIHITO YOSHIDA: "QUANTITATIVE AND SENSITIVE PROTEIN DETECTION STRATEGIES BASED ON APTAMERS", PROTEOMICS - CLINICAL APPLICATIONS, vol. VOL:6, NR:11-12, JPN5018005332, 8 December 2012 (2012-12-08), pages 574 - 580, ISSN: 0004316280 * |
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