JP2018526645A - 2つ以上の分析物の検出および区別のための2つの流体流路を有する免疫アッセイ試験装置 - Google Patents
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Abstract
【選択図】なし
Description
[0002] 配列リストは、2016年8月24日作成で「04189609438116WO00SeqList.txt」(9,252バイト)の題名でテキストファイルの形式でEFSを介して電子出願しており、その内容はそれらの全体において参照により本明細書中に組み込まれる。
[0042] 配列番号1は、ボレリア(Borrelia)の病原性株からのエピトープに対する結合親和性を有するペプチド抗原:MKKNDQIVAAIALRGVAである。
[0063] ここで、本明細書中で以後、様々な態様をより詳細に記載する。しかし、このような態様は多くの異なる形態で具体化され得、本明細書中で示される実施形態に限定されるものとして解釈されるべきではなく;むしろ、これらの実施形態は、本開示が徹底したものであり、完全であり、当業者にその範囲を十分に伝えるように提供される。
[0068] 第1の態様において、感染病原体による感染の存在を判定するための装置が提供される。本装置の様々な実施形態は、ある一定の図面を参照して記載する。
[0082] 何らかの病原性または感染病原体の検出における使用のために、本明細書中に記載の装置が企図されるが、ここでいくつかの例を記載する。
A.ライム病の検出
病原性ボレリア(Borrelia)種に対するIgGおよびIgM免疫グロブリンの検出および区別のための上記の試験ストリップに加えて、単純ヘルペスウイルス−1および単純ヘルペスウイルス−2(HSV−1およびHSV−2)、インフルエンザAおよびインフルエンザB(FluAおよびFluB)、インフルエンザA+Bおよび呼吸器多核体ウイルス(RSV)を検出および区別または識別する試験装置が企図される。ジカウイルスに付随するIgAおよびIgGの検出および区別のための試験ストリップも企図される。認識され得るように、共通の試料リザーバから連絡する2つの個別の流体流路を有する双方向型試験ストリップは、共通試料リザーバ上に置かれる試料からの関心のある2つ以上の分析物を区別するためのアプローチを提供する。
[0107] 次の例は、本来、例示であり、何ら限定するものではない。
B.ブルグドルフェリ(B.BURGDORFERI)に対する抗体の存在を検出するための試験ストリップ
[0108] ヒト血液中のIgGおよびIgM抗体の有無の検出のためのラテラルフロー免疫アッセイ装置は次のように調製される。試験ストリップは、試験ストリップに対する共通試料リザーバとなる、中央に配置される試料パッドを有するように構築する。下流から上流方向で、試料リザーバの片側に(例えば図1A参照)、ユウロピウムビーズに連結されるヤギ抗ヒトIgM抗体を含む第1の標識ライン、以下で列挙されるペプチド配列から構成される固定化ペプチド抗原を伴う第1の試験ラインおよび固定化ウサギ抗ヤギIgM抗体を伴う参照ラインを置く。下流から上流方向で、試料リザーバの逆側に(例えば図1Aを参照)、ユウロピウムビーズに結合されるヤギ抗ヒトIgG抗体を含む第2の標識ラインおよび以下で列挙されるペプチド配列から構成される固定化ペプチド抗原を伴う第2の試験ラインを置く。試験ストリップに連結されるストレプトアビジン部分および各ペプチドに連結されるビオチンを通じて固定化され、第1および第2の試験ラインのそれぞれに置かれるペプチド抗原は:
MKKDDQIAAAIALRGMA(配列番号4)
YGQNWTNPENMVTSGPFKLKERIPNEKIVFEKNNK(配列番号11)
MTLFLFISCNNSGKDGNTSA(配列番号12);および
VQEGVQQEGAQQPGGGMTLFLFISCNNSGKDGNTSAGGGMKKNDQIVAAIALRGVA(配列番号16)である。
B.ブルグドルフェリ(B.BURGDORFERI)に対する抗体の存在を検出するための試験ストリップ
[0111] ヒト血液中のIgGおよびIgM抗体の有無の検出のためのラテラルフロー免疫アッセイ装置を次のように調製する。試験ストリップは、試験ストリップに対する共通試料リザーバとなる、中央に配置された試料パッドを有するように構築する。下流から上流方向で、試料リザーバの片側に(例えば図1A参照)、B.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)に対する抗体への特異的な結合をそれぞれが有し、ユウロピウムビーズに連結される、B.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)からの複数のペプチド抗原を含む第1の標識ライン;固定化ヤギ−抗ヒトIgG抗体を伴う第1の試験ライン;および固定化抗グルコースオキシダーゼ抗体を伴う参照ラインを置く。第1の標識ラインは、液体試料とともに下流に移動するユウロピウムビーズに連結されるグルコースオキシダーゼ酵素を含む。下流から上流方向で、試料リザーバの逆側に(例えば図1A参照)、それぞれがB.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)に対する抗体への特異的な結合を有し、ユウロピウムビーズに連結される、B.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)からの複数のペプチド抗原を含む第2の標識ライン;および固定化ヤギ−抗ヒトIgM抗体を伴う第2の試験ラインを置く。第1および第2の標識ライン上に置かれるペプチド抗原は:
MKKDDQIAAAIALRGMA(配列番号4)
YGQNWTNPENMVTSGPFKLKERIPNEKIVFEKNNK(配列番号11)
MTLFLFISCNNSGKDGNTSA(配列番号12);および
VQEGVQQEGAQQPGGGMTLFLFISCNNSGKDGNTSAGGGMKKNDQIVAAIALRGVA(配列番号16)である。
B.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)に対する抗体の存在を検出するための試験ストリップ
[0113] ヒト血液中のIgGおよびIgM抗体の有無の検出のためのラテラルフロー免疫アッセイ装置を次のように調製する。試験ストリップは、試験ストリップに対する共通試料リザーバとなる、中央に配置される試料パッドを有するように構築する。下流から上流方向で、試料リザーバの片側に(例えば図1A参照)、ユウロピウムビーズに連結される可動性ヤギ抗ヒトIgM抗体を含む第1の標識ライン、B.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)のOspC領域(配列番号12)およびDbpA領域(配列番号14)に対する固定化ペプチド抗原を伴う第1の試験ラインおよび固定化ウサギ抗ヤギIgM抗体を伴う参照ラインを置く。下流から上流方向で、試料リザーバの逆側に(例えば図1A参照)、ユウロピウムビーズに結合される可動性マウス抗ヒトIgG抗体を含む第2の標識ラインおよびB.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)のC10(配列番号8または配列番号10)、C6(配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5または配列番号6)およびp41(FlaB;配列番号7)エピトープに対する固定化ペプチド抗原を伴う第2の試験ラインを置く。N−末端またはN末端領域においてビオチン部分を含むようにペプチド抗原を修飾し、係留されたストレプトアビジン分子との結合を介して試験ストリップに係留した。
B.ブルグドルフェリ(B.BURGDORFERI)による感染をステージ分類するための試験ストリップ
[0116] 実施例1に記載のような試験ストリップを調製する。筋肉痛、疲労および遊走性紅斑の症状を呈する女性対象から血液試料を採取する。血液試料を試験ストリップの試料パッド上に置く。20分後、血液試料中のB.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)に対するIgGおよびIgM抗体の量または相対量を決定するための光学系およびソフトウェアを伴う機器に試験ストリップを挿入する。血液試料中のB.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)に対するIgM抗体が捕捉される試験ラインは、機器により探索される場合、検出可能なシグナルを放射する。血液試料中のB.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)に対するIgG抗体が捕捉される試験ラインは、機器により探索される場合、検出可能なシグナルを放射する。IgG抗体の試験ラインで放射されるシグナルはIgM抗体の試験ラインで放射されるシグナルよりも大きく、IgG抗体は感染後4〜12週間で産生されるので、後期感染を示す(E.D.ShapiroおよびP.Auwaerter,INFECTIOUS DISEASE AND ANTIMICROBIAL AGENTS:Borrelia burgdorferi(Lyme Disease),2002 Edition)。
B.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)に対する抗体を検出するための試験ストリップ
[0117] 試験ストリップを次のように調製した。試料パッドをニトロセルロースのストリップ上の中央に配置した。下流から上流方向で、単一の共通試料パッドの片側に(例えば図1A参照)、表面結合ヤギ抗ヒトIgM抗体を伴う複数のユウロピウムビーズを置き、第1の標識ラインを形成させた。第1の標識ラインの下流に、第1の試験ラインを置き、第1の試験ラインは、そのN−末端でビオチンにそれぞれが連結され、ストレプトアビジンを介してニトロセルロースに固定化される、組み換えOspC(配列番号20)および組み換えDbpA(配列番号21)から構成された。第1の試験ラインの下流に、ウサギ抗ヤギIgG抗体を置いて、ニトロセルロース上に参照ラインを形成させた。下流から上流方向で、試料パッドの逆側に、表面結合マウス抗ヒトIgG抗体を伴う複数のユウロピウムビーズを置いて、第2の標識ラインを形成させた。第2の標識ラインの下流に、第2の試験ラインを置き、この第2の試験ラインは、B.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)のC10(配列番号8)、C6(配列番号6)およびC6−p41(配列番号18)エピトープに対する固定化ペプチド抗原から構成された。N−末端またはN末端領域にビオチン部分を含むように、このペプチド抗原を修飾し、係留されたストレプトアビジン分子との結合を介してニトロセルロース基板に係留した。C10ペプチド抗原をヒドロキシル基によりそのC−末端修飾した。吸収性パッドを試験ストリップの各末端に配置した。
Claims (39)
- 感染病原体による感染があることが疑われる対象からの液体試料を受容するように構成される試料受容ゾーンであって、第1の流体流路に沿って第1の標識ゾーンに、および第2の流体流路に沿って第2の標識ゾーンに、前記試料を分配するように配置され、前記第1および第2の標識ゾーンのそれぞれが、第1の可動性で検出可能な種および第2の可動性で検出可能な種をそれぞれ含み、各可動性で検出可能な種が前記感染病原体または前記感染病原体に対する抗体に結合可能である、試料受容ゾーンと;
前記第1の可動性で検出可能な種に対する結合親和性を有する固定化種を含む、前記第1の標識ゾーンの下流に配置される前記第1の流体流路中の第1の試験ラインと;
前記第2の可動性で検出可能な種に対する結合親和性を有する固定化種を含む、前記第2の標識ゾーンの下流に配置される前記第2の流体流路中の第2の試験ラインと;
前記第1の流体流路に配置される参照ラインであって、前記参照ラインの上流の装置上に置かれる検出可能部分に対する結合親和性を有する固定化種を含む参照ラインと、
を含む、感染病原体による感染の存在を判定するための装置。 - 前記第1の流体流路および前記第2の流体流路が、平角(180°)、鈍角および鋭角から選択される角度をなす、請求項1に記載の装置。
- 前記第1の流体流路中の前記参照ラインが、前記第1の試験ラインの下流にある、請求項1または請求項2に記載の装置。
- 前記第2の流体流路にさらなる参照ラインをさらに含む、請求項1〜3の何れか1項に記載の装置。
- 前記さらなる参照ラインが、前記第2の試験ラインの下流にある、請求項4に記載の装置。
- 前記第1の試験ラインが、前記液体試料中に存在する前記感染病原体に対する抗体に直接結合し、前記第1の標識ゾーン中の前記可動性で検出可能な種および前記試料中の前記感染病原体に対する抗体から構成される結合物に特異的に結合する、第1の固定化種を含む、請求項1〜5の何れかに記載の装置。
- 前記第2の試験ラインが、前記液体試料中に存在する前記感染病原体に対する抗体に直接結合し、前記第2の標識ゾーン中の前記可動性で検出可能な種および前記試料中の前記感染病原体に対する抗体から構成される結合物に特異的に結合する第2の固定化種を含む、請求項1〜5の何れか1項に記載の装置。
- 前記第1および第2の固定化種が同じである、請求項6または7の何れか1項に記載の装置。
- 前記第1の標識ゾーン中の前記可動性で検出可能な種が抗IgM抗体である、請求項1〜8の何れかに記載の装置。
- 前記抗IgM抗体が、非ヒト抗ヒトIgM抗体である、請求項9に記載の装置。
- 前記第1の試験ライン中の前記固定化種が、B.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)に対するヒトIgM抗体に対する結合親和性を有するB.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)に対する複数の抗原を含む、請求項10に記載の装置。
- 第2の標識ゾーン中の前記可動性で検出可能な種が抗IgG抗体である、請求項1〜11の何れかに記載の装置。
- 前記抗IgG抗体が、非ヒト抗ヒトIgG抗体である、請求項12に記載の装置。
- 前記第1の試験ライン中の前記固定化種が、B.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)に対するヒトIgG抗体に対する結合親和性を有するB.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)に対する複数の抗原を含む、請求項13に記載の装置。
- 前記可動性で検出可能な種が光学的に検出可能な標識を含む、請求項1〜14の何れかに記載の装置。
- 前記光学的に検出可能な標識が、蛍光または化学発光マーカーである、請求項15に記載の装置。
- 前記可動性で検出可能な種が、ユウロピウムビーズである、請求項1〜16の何れか1項に記載の装置。
- 前記試料受容ゾーンが、前記第1の標識ゾーンと前記第2の標識ゾーンとの間に配置される、請求項1〜17の何れかに記載の装置。
- 基板が、前記第1の標識ゾーンおよび前記第2の標識ゾーンに共通である単一の試料受容ゾーンを含む、請求項1〜18の何れかに記載の装置。
- 前記第1および第2の試験ラインが、機器による検査のための単一の光学的な窓(optical window)内にある、請求項1〜19の何れかに記載の装置。
- 前記試料受容ゾーンが、基本的に等量および基本的に等速度で前記第1の標識ゾーンおよび前記第2の標識ゾーンに試料を分配する、請求項1〜20の何れかに記載の装置。
- 感染病原体による感染があることが疑われる対象からの液体試料を受容するように構成される試料受容ゾーンであって、第1の流体流路に沿って第1の標識ゾーンに、および第2の流体流路に沿って第2の標識ゾーンに、前記試料を分配するように配置され、前記第1および第2の標識ゾーンのそれぞれが、第1の可動性で検出可能な種および第2の可動性で検出可能な種をそれぞれ含み、各可動性で検出可能な種が前記感染病原体に対する個別の異なる抗体に結合可能である、試料受容ゾーンと;
前記第1の可動性で検出可能な種に対する結合親和性を有する固定化種を含む、前記第1の標識ゾーンの下流に配置される前記第1の流体流路中の第1の試験ラインと;
前記第2の可動性で検出可能な種に対する結合親和性を有する固定化種を含む、前記第2の標識ゾーンの下流に配置される前記第2の流体流路中の第2の試験ラインと;
前記第1の流体流路に配置される参照ラインであって、前記参照ラインの上流の装置上に置かれる検出可能部分に対する結合親和性を有する固定化種を含む参照ラインと、
を含む、感染病原体による感染の存在を判定するための装置。 - 前記第1の可動性で検出可能な種が、非ヒト、抗ヒトIgM抗体またはライム病抗原である、請求項22に記載の装置。
- 前記第2の可動性で検出可能な種が、非ヒト、抗ヒトIgG抗体またはライム病抗原である、請求項22または請求項23に記載の装置。
- 前記第1の可動性で検出可能な種に対する結合親和性を有する前記第1の試験ライン上の前記固定化種が、非ヒト、抗ヒトIgM抗体またはライム病抗原である、請求項22〜24の何れか1項に記載の装置。
- 前記第2の可動性で検出可能な種に対する結合親和性を有する前記第2の試験ライン上の前記固定化種が、非ヒト、抗ヒトIgG抗体またはライム病抗原である、請求項22〜25の何れか1項に記載の装置。
- 前記参照ラインが、前記第1の試験ラインの下流に配置される、請求項22〜26の何れか1項に記載の装置。
- 前記参照ラインが、非ヒト、抗ヒトIgG抗体または非ヒト、抗ヒトIgM抗体に対する結合親和性を有する固定化種を含む、請求項27に記載の装置。
- 前記参照ラインが、前記液体試料中に存在しない物質に対する結合親和性を有する固定化種を含む、請求項22〜26の何れか1項に記載の装置。
- 前記感染病原体に対する前記個別の異なる抗体が、前記液体試料中に存在し、前記第1の試験ラインおよび前記第2の試験ラインのそれぞれの上の前記固定化種に結合可能であり、前記第1の標識ライン上または前記第2の標識ライン上の前記可動性で検出可能な種のうち1つに結合可能である、請求項22〜28の何れか1項に記載の装置。
- 前記感染病原体に対する前記個別の異なる抗体が、前記液体試料中に存在し、第1の結合物を形成させるために前記第1の標識ライン上および第2の結合物を形成させるために前記第2の標識ライン上の前記可動性で検出可能な種に結合可能であり、前記第1の試験ライン上の前記固定化種が、前記第1の結合物に対する結合親和性を有し、前記第2の試験ライン上の前記固定化種が、前記第2の結合物に対する結合親和性を有する、請求項22〜28の何れか1項に記載の装置。
- 前記第1の試験ライン上の前記固定化種が、非ヒト、抗ヒトIgM抗体である、請求項31に記載の装置。
- 前記第1の試験ライン上の前記固定化種が、非ヒト、抗ヒトIgG抗体である、請求項31または請求項32に記載の装置。
- ボレリア・ブルグドルフェリ(Borrelia burgdorferi)(B.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi))感染をステージ分類するための方法であって;
請求項22〜33の何れか1項に記載の装置上にB.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)に曝露された疑いがあるかまたはそのリスクがある者からの液体試料を置くことと;
前記可動性で検出可能な種の有無について前記第1の試験ラインおよび前記第2の試験ラインを調べることと、
を含む、方法。 - 前記液体試料が、血液、脳脊髄液または尿である、請求項34に記載の方法。
- 前記液体試料が、血液であり、約50μL未満の量で置かれる、請求項34または請求項35に記載の方法。
- 前記調べることが、前記液体試料を置いた後約10分以内に行われる、請求項34〜36の何れか1項に記載の方法。
- 前記置くことおよび調べることが、曝露2週間以内の曝露対照の70%超でB.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)曝露に反応するIgM抗体を検出するための感度を提供する、請求項34〜37の何れか1項に記載の方法。
- 前記置くことおよび調べることが、曝露2週間以内の曝露対照の70%超でB.ブルグドルフェリ(B.burgdorferi)曝露に反応するIgG抗体を検出するための感度を提供する、請求項34〜37の何れか1項に記載の方法。
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