JP2018519360A - ミノドロン酸の新たな結晶形 - Google Patents

Abstract

本発明は、結晶形Ｘ及び結晶形Ｙと呼ばれる（１−ヒドロキシ−２−イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−３−イル−１−ホスホノエチル）ホスホン酸の安定な２種の結晶形、並びに、各結晶性多形体を単一の結晶形として個別に得ることができる、これらの結晶形の調製のための方法を提供する。

Description

ミノドロン酸、すなわち、（１−ヒドロキシ−２−イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−３−イル−１−ホスホノエチル）ホスホン酸は、式（Ｉ）

の化合物である。

ミノドロン酸は、非常に良好な骨吸収抑制活性並びに抗炎症活性、鎮痛活性及び解熱活性を有することが公知であり、骨吸収の増大が関与する疾患の処置において有用である（ＥＰ０６４７６４９Ｂ１、Ｒｉｚｚｏｌｉ Ｃ．ら、Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．Ｅ７１ ２０１５、５１〜５４）。

医薬調製へのミノドロン酸の利用における主要な課題は、ミノドロン酸の精製及び結晶形の制御に関する。

ミノドロン酸は、数多くの有機溶媒及び水への溶解度が限定的であり、したがって、精製は多くの場合、ミノドロン酸のナトリウム塩の沈殿と、それに続く再酸性化に基づく。しかしながら、この手順は、ミノドロン酸を溶解するために濃ＮａＯＨ、及びミノドロン酸塩を沈殿させるために大量のアルコール溶媒の使用を必要とする。形成した生成物は、ゲル粘稠度を示し、固体のろ過及び乾燥を行うかなり面倒な工程を必要とし、スケールアップのためには手順が実用的でないものになる。

ミノドロン酸は、かなり複雑な多形挙動を有することが公知である。通常、医薬調製において利用される最も好ましい形態は、一水和物形態である。Ｄ及びＥと表記された既知の２種の一水和物形態は、同じＸＲＰＤパターンを有するが、異なる脱水温度を有する。結晶構造が類似しているため、単一の純粋な一水和物結晶形を得ることは、特に形態Ｅの場合は非常に困難である。

容易に得られ、必要な化学的特性及び物理的特性を有するミノドロン酸の新たな結晶形を利用可能にすることに強い関心が寄せられている。

ここで、本発明者らは、形態Ｘ及び形態Ｙと呼ばれるミノドロン酸の新たな２種の結晶形を報告する。

したがって、本発明は、適切な溶媒からの結晶化又は再結晶を含む、前記形態の調製のための方法も対象とする。

本発明は、本明細書において記載されたミノドロン酸形態Ｘ又は形態Ｙを含む医薬組成物、及び医薬としての当該医薬組成物の使用を更に対象とする。

下記に提供されるミノドロン酸形態Ｘ及び形態Ｙの物理化学的特性を参照すると、本発明をより完全に理解することができる。

そうでないと規定されていない限り、本明細書において使用されているすべての専門用語及び科学用語は、本主題が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。

Ｘ線粉末回折の主要なピーク、ＦＴ−ＩＲスペクトルの主要なバンド及び特性、熱重量分析が、提供される。

Ｘ線粉末回折図形（ＸＲＰＤ）は、Ｘ’Ｐｅｒｔ ＰＲＯ ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌという機器を使用して、Ｋα１線を用いる単一の走査によって得られた。回折図形は、反射モードにおいて、３〜４０°２θまでの範囲で測定される。

ＦＴ−ＩＲスペクトル（フーリエ変換赤外分光法）は、ＫＢｒスプリッタ及びＤＴＧＳ ＫＢｒ検出器を備えたＡＴＲモジュール型機器であるＮｉｃｏｌｅｔ ｉＳ５０によって記録された。スペクトルは、４ｃｍ^−１の分解能における３２回の走査によって取得された。

ＤＳＣ分析は、示差走査熱量計ＤＳＣ１ Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏを使用して実施された。試料は、−２５〜２００℃までの温度範囲において、１０Ｋ／分の加熱速度で加熱された。

サーモグラムは、ＴＧＡ／ＤＳＣ１ Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ熱天秤を使用して得られた。試料は、１０Ｋ／分において、２５℃から４５０℃まで加熱された。

本明細書において使用されているとき、「多形」は、ある化合物が、２種以上の別個の結晶種に結晶化できることである。多形体（又は結晶変態）は、同一の化学的構造を有するが、大きく異なる物理化学的特性を有する。

本明細書において使用されているとき、「熱力学的に安定な」という用語は、長期の条件下（２５℃、６０％相対湿度）における貯蔵中において、医薬として許容される期間（少なくとも３か月、好ましくは６か月、より好ましくは１年）にわたって、別の多形形態に実質的に変化しない、多形形態を呼ぶ。

本明細書において使用されているとき、「高いレベルの化学的純度」という用語は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等、このような純度を査定するために当業者によって使用される標準的な分析法によって測定したとき、容易に検出できる不純物の総量が５％未満、有利には２．５％未満、好ましくは１．０未満、より好ましくは０．５％未満である、多形体を指す。

ミノドロン酸形態ＸのＸＲＰＤスペクトルの図である。 粉砕前及び粉砕後のミノドロン酸形態ＸのＸＲＰＤスペクトルの図である。 混練前及び混練後のミノドロン酸形態ＸのＸＲＰＤスペクトルの図である。 ミノドロン酸形態ＸのＦＴ−ＩＲスペクトルの図である。 ミノドロン酸形態ＸのＤＳＣ分析の図である。 ミノドロン酸形態ＸのＴＧＡ分析の図である。 ミノドロン酸形態Ｘの溶融の図である。 ２５℃におけるミノドロン酸形態Ｘの水収着速度の図である。 ２５℃におけるミノドロン酸形態Ｘの水収着及び脱着等温線の図である。 ミノドロン酸形態Ｘを対象にした、水を用いる簡易分析。 ４０℃及び７５％ＲＨにおける１日後（暗い灰色）、３日後（薄い灰色）、７日後（非常に薄い灰色）のミノドロン酸形態Ｘ並びに形態Ｘの基準用パターン（黒色線）のＸＲＰＤスペクトル。 ミノドロン酸形態ＸのＨＰＬＣ分析。 ミノドロン酸形態ＹのＸＲＰＤスペクトル。 粉砕前及び粉砕後のミノドロン酸形態ＹのＸＲＰＤスペクトル。 混練前のミノドロン酸形態Ｙ（形態Ｙという線）及び混練後のミノドロン酸形態Ｙ（形態Ｙ−混練）のＸＲＰＤスペクトル並びにミノドロン酸形態Ｘ（形態Ｘ）のＸＲＰＤスペクトル。 ミノドロン酸形態ＹのＦＴ−ＩＲスペクトル。 ミノドロン酸形態ＹのＤＳＣ分析。 ミノドロン酸形態ＹのＴＧＡ分析。 ミノドロン酸形態Ｙの溶融。 ２５℃におけるミノドロン酸形態Ｙの水収着速度。 ２５℃におけるミノドロン酸形態Ｙの水収着及び脱着等温線。 ＤＶＳ実験後のミノドロン酸形態Ｙ（黒色線）及びＥＰ０６４７６４９Ｂ１において特許請求された形態Ｆ無水（灰色）のＸＲＰＤ。 ミノドロン酸形態Ｙを対象にした、水を用いる簡易分析。 ４０℃及び７５％ＲＨにおける１日（１Ｄ）後のミノドロン酸形態Ｙ、形態Ｙの基準用パターン（形態Ｙという黒色線）並びにＥＰ０６４７６４９Ｂ１において特許請求された形態Ｆ無水（形態Ｆ−無水）のＸＲＰＤスペクトル。 ミノドロン酸形態ＹのＨＰＬＣ分析。 再結晶後のミノドロン酸のＨＰＬＣ分析。 ミノドロン酸形態Ｘ（例２）のＸＲＰＤスペクトル。 ミノドロン酸形態Ｘ（例２）のＨＰＬＣ分析。 ＨＰＬＣによって回収されたミノドロン酸の較正曲線。 ｐＨ４．５における相異なる４種の多形体の溶解の比較。 ｐＨ４．５のとき、溶解の最初の数分における相異なる４種の多形体に関して外挿された溶解速度。 ｐＨ６．８における相異なる４種の多形体の溶解の比較。 ｐＨ６．８のとき、溶解の最初の数分における相異なる４種の多形体に関して外挿された溶解速度。 ｐＨ７．４における相異なる４種の多形体の溶解の比較。 ｐＨ７．４のとき、溶解の最初の数分における相異なる４種の多形体に関して外挿された溶解速度。 ｐＨ４．５における相異なる結晶形の熱力学的溶解度。 ｐＨ６．８における相異なる結晶形の熱力学的溶解度。 ｐＨ７．４における相異なる結晶形の熱力学的溶解度。 ミノドロン酸形態Ｅ及び形態Ｄと、ｐＨ４．５における形態Ｙ、形態Ｄ、形態Ｅ及び形態Ｘの熱力学的検討の最後に回収された粉体とのＸＲＰＤ比較。 ミノドロン酸形態Ｅ及び形態Ｄと、ｐＨ６．８における形態Ｙ、形態Ｄ、形態Ｅ及び形態Ｘの熱力学的検討の最後に回収された粉体とのＸＲＰＤ比較。 ミノドロン酸形態Ｅ及び形態Ｄと、ｐＨ７．４における形態Ｙ、形態Ｄ、形態Ｅ及び形態Ｘの熱力学的検討の最後に回収された粉体とのＸＲＰＤ比較。

驚くべきことに、高いレベルの化学的純度でミノドロン酸を効率的に製造することができる精製手順が、ここで記載される。

この目的のために、技術水準において公知の手順に従って合成されたミノドロン酸を、６Ｍ ＨＣｌ中に溶解する。ｐＨ１に至るまでＮａＯＨを加えると、生成物が沈殿し、簡便なろ過によって収集することが可能になり、ＮａＯＨの非存在下で必要とされる蒸留のような、大量の水を蒸留する必要性がなくなる。

更に、上記工程において得られた固体を、熱い６Ｍ ＨＣｌ中に再溶解し、メタノールによって沈殿させると、ナトリウム塩に実施されるろ過及び乾燥よりも容易な固体のろ過及び乾燥が可能になる。

最後に、有機塩基の添加により、驚くべきことに、ミノドロン酸を水に容易に溶解できるようになることが、ここで実証されている。特に、２当量のジエチルアミンの使用により、室温でミノドロン酸を溶解することができた。次いで、生成物を、１Ｍ ＨＣｌの添加によって遊離酸として再沈殿させ、ＨＰＬＣ純度が９９．５％より高い生成物を得ることができる。

驚くべきことに、興味深い化学的物理的特性を有するミノドロン酸形態Ｘ及び形態Ｙという新規な２種の結晶形が、ここで記載される。

本発明のミノドロン酸形態Ｘは、熱力学的に安定な非吸湿性の結晶形であり、高いレベルの化学的純度及び医薬組成物の調製のための良好な取扱い特性を特徴とする。ミノドロン酸形態Ｘは、ＨＣｌ １Ｍ中に溶解したミノドロン酸の沸騰溶液を迅速に０℃に冷却することによって得られる。好ましくは、前記溶液の濃度は、約２５ｍｇ／ｍｌである。白色沈殿物が数分で形成されたら、この白色沈殿物を０℃で約１２時間スラリー化する。次いで、生成物を真空下で回収し、中性ｐＨになるまで水によって洗浄し、メタノールによって洗浄する。５０℃で２４時間乾燥させた後には、約９６％の収率で高いレベルの化学的純度（９９．５％超）を有する固体が回収される。

新たな結晶形Ｘは、図１に示されたＸＲＰＤスペクトルを特徴とする。主要なピークは２θ±０．３度で、９．１、１０．２、１５．５、１６．５、１８．７、２５．８である。下記の表１は、スペクトルの顕著なピークを示している。

粉砕された試料の安定性は、試料の回折パターンを標準用の基準品の回折パターン（粉砕前のミノドロン酸形態Ｘ）と比較して測定された。得られた試料は、図２に報告されているように、ミノドロン酸形態Ｘと同じ回折パターンを示していた（形態Ｘという線に対する形態Ｘ−粉砕という線）。

安定性は、混練後に確認されている。混練後に得られた試料（図３、形態Ｘ−混練という線）は、混練前のミノドロン酸形態Ｘと同じ回折パターンを示した。

ＦＴ−ＩＲ分析は、図４に示されたスペクトルを示している。前記ＦＴ−ＩＲスペクトルは、下記の表２に示されたピークを特徴とする。

図５に示されたＤＳＣ分析は、８０〜１３０℃の間の脱水工程（開始８９．３４℃）並びに２１０℃より後の溶融及び分解（開始２３３．３８℃）に対応する、２回の吸熱事象を強調している。

図６に示されたサーモグラムは、約８０℃から１４０℃まで遷移したときの、９．３８％ｗ／ｗの重量減少を強調している。試料は、水を失っており、二水和物形態が示唆されている可能性がある。これに続く３．５％ｗ／ｗの減少は、２２０℃より後の分解事象によるものである。図７に報告された溶融分析は、８０〜１４０℃の間で観察された重量減少が、分解事象に起因するものではないことを確認している。溶融及び分解は、約２５０℃より後に同時に起きており、２５０．４℃以上で撮影された写真を参照されたい。

速度論的水分収着の結果が図８に報告されており、灰色線は、時間を関数とする質量変化の百分率をトレースしており、一方で黒色線は、時間を関数とする相対湿度の変化をトレースしている。図９に報告された等温線において、菱形付きの線は、第１の収着段階を描写しており、正方形付きの黒色線は、第１の脱着段階を描写しており、三角形付きの灰色線は、第２の収着段階を描写しており、正方形付きの灰色線は、第２の脱着段階を描写している。
分析された試料は、疎水挙動を示している。収着／脱着の各サイクルにおいて、重量変化は０．１％を下回るように維持され、この値は一般的に非吸湿性化合物に起因し得るものである。

水を用いる簡易分析により、８０〜１４０℃の間の重量減少は、脱水工程に起因することが確認された。登録された量はＴＧＡによって観察された量と一致しており、図１０に報告されているように、二水和物ミノドロン酸形態を確認している。

ここで記載されたミノドロン酸形態Ｘは、ストレス条件に曝露された場合にも安定である。ミノドロン酸形態Ｘは、４０℃及び７５％ＲＨにおいて７日間の曝露によって試験された。１日後、３日後及び７日後に記録された試料のＸＲＰＤパターンが、図１１に報告されており、結晶形が変化しなかったことを実証している。ここで主張されたミノドロン酸形態Ｘは、熱力学的に安定である。

図１２に報告されたＨＰＬＣ純度プロファイルは、９９．９７％超の高いレベルの化学的純度を有するミノドロン酸形態Ｘを単離できることを実証している。

驚くべきことに、上記ミノドロン酸形態Ｘを真空下において８０℃で２４時間乾燥させることによって、興味深い特徴を示すミノドロン酸形態Ｙである新たな多形体が得られた。

新たな結晶形Ｙは、図１３に示されたＸＲＰＤスペクトルを特徴とする。主要なピークは２θ±０．３度で、９．５、１０．７、１３．９、１９．１、１９．７８、１９．８５である。下記の表３は、スペクトルの顕著なピークを示している。

粉砕された試料の安定性は、試料の回折パターンを標準用の基準品の回折パターンと比較して測定された。得られた試料は、図１４に報告されているように、ミノドロン酸形態Ｙと同じ回折パターンを示していたが、結晶性の度合いが低下している（形態Ｙという線に対する形態Ｙ−粉砕という線）。

興味深いことに、本発明のミノドロン酸形態Ｙを混練した後には、図１５において強調されているように、結晶形Ｘへの完全な変換が起きる。混練後に得られた試料（形態Ｙ−混練という線）は、ミノドロン酸形態Ｘ（形態Ｘという線）と同じ回折パターンを示していた。

ＦＴ−ＩＲ分析は、図１６に示されたスペクトルを示している。前記ＦＴ−ＩＲスペクトルは、下記の表４に示されたピークを特徴とする。

図１７に示されたミノドロン酸形態ＹのＤＳＣ分析は、試料の溶融及び分解（開始２３８．９８℃）に対応する約２４５℃における単一の事象を伴う、線形プロファイルを示している。

図１８に示されたミノドロン酸形態Ｙのサーモグラムは、約１４０℃から約２２０℃まで遷移したときの、１．６５％ｗ／ｗの重量減少を強調している。これに続く４．２７％ｗ／ｗの減少は、２２０℃より後の分解事象によるものである。図１９に報告された溶融分析は、１４０〜２２０℃の間で観察された重量減少が、分解事象に起因するものではないことを確認している。溶融及び分解は、約２４０℃より後に同時に起きたが、２４０．０℃以上で撮影された写真を参照されたい。

速度論的水分収着の結果が図２０に報告されており、灰色線は、時間を関数とする質量変化の百分率をトレースしており、一方で黒色線は、時間を関数とする相対湿度の変化をトレースしている。図２１に報告されている等温線において、菱形付きの線は、第１の収着段階を描写しており、正方形付きの黒色線は、第１の脱着段階を描写しており、三角形の灰色線は、第２の収着段階を描写しており、正方形付きの灰色線は、第２の脱着段階を描写している。
分析された試料は、わずかに吸湿挙動を示している。第１の収着サイクルにおいて、約１％の水が吸着された。次の脱着工程において、約１．５％ｗ／ｗの水が失われ、出発物質より少ない量の水を有するミノドロン酸形態が得られた。
収着／脱着の第２のサイクルにおいて、約７５％の湿度において、結晶性構造が崩壊して、無水形態を生じさせた。
分析の最後に回収された試料をＸＲＰＤによって分析すると、ＥＰ０６４７６４９Ｂ１において無水形態として特許請求されたミノドロン酸形態Ｆと同様の回折図形が登録された。灰色線が比較用の形態Ｆを表している図２２を参照されたい。

水を用いる簡易分析は、１４０〜２２０℃の間の重量減少が、脱水工程に起因することを確認した。登録された量は、重量分析によって登録された量よりわずかに多い。一般に、より確度の高い分析はＴＧＡであり、水を用いる簡易分析は、失われた溶媒が水であることを確認するために実施された。

ミノドロン酸形態Ｙは、４０℃及び７５％ＲＨにおいて７日間の曝露によって試験された。１日後、３日後及び７日後に記録された試料のＸＲＰＤパターンが、図２４に報告されており、１日後にはすでに、ＥＰ０６４７６４９Ｂ１において特許請求された無水形態Ｆへの完全な変換が起きることを実証している。

新たな結晶形Ｙの完全性及び高いレベルの化学的純度は、図２３に報告されているＨＰＬＣ分析によって確認された。９９．８％超という高いレベルの化学的純度のミノドロン酸形態Ｙを単離することができる。

本発明の多形体の溶解度は、速度論的条件及び熱力学的条件下において、異なる３種のバッファー媒体（ｐＨ４．５、６．８及び７．４）中で調査された。データは、下記の実験の部において報告されている。試験されたすべてのバッファーにおいて、結晶形Ｘは、速度論的条件下でより可溶なものとなっており、溶解速度が、技術水準による形態Ｅ及び形態Ｄより２倍又は３倍高い。

ここで記載されたミノドロン酸の結晶形は、医薬組成物中に利用することができる。前記結晶形を含む医薬組成物は、添加剤を含有してもよい。本発明による医薬製剤の調製のために、任意の従来の技法を使用することができる。

（例１）
ミノドロン酸の合成

１２．３ｇのイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−３−イル酢酸塩酸塩、１２．０７ｇのＨ_３ＰＯ_３及び８２ｍＬのクロロベンゼンを、機械式撹拌棒及びＮａＯＨトラップに接続された凝縮器を備えたジャケット付き２５０ｍＬ反応器に加えた。反応混合物を３０分間１１０℃に加熱し、次いで、３０分で８０℃に冷却した。３０．７９ｇのＰＣｌ_３を加え、溶液を１５分間８０℃に保ち、次いで、３０分で１１０℃に加熱した。反応混合物をこの温度で８時間撹拌し（９０〜１２０ｒｐｍ）、次いで、３０分で２５℃に冷却し、撹拌しながらこの温度で終夜放置した。クロロベンゼンを、ぜん動ポンプを使用して除去し、残留物を２００ｍＬの６Ｍ ＨＣｌ中に溶解し、溶液を１１０℃で２時間加熱した。オレンジ色溶液を、１．２ｇの活性炭素（ＤＡＲＣＯ １００メッシュ）が入った三角フラスコに注ぎ込み、４０分間撹拌しながら室温に冷却した。溶液をろ紙によってろ過し、固体残留物を２０ｍｌの６Ｍ ＨＣｌによって洗浄した。溶液をジャケット付き反応器に注ぎ込み、２５〜３０℃で撹拌した。ｐＨ１になるまでＮａＯＨの３０％水溶液を滴下した。この条件下において、固体の沈殿が起き、混合物を室温で２時間撹拌した。沈殿物を真空ろ過によって収集し、次いで、水（２×２５ｍＬ）及びメタノール（２×２５ｍＬ）によって洗浄した。淡黄色固体を５０℃で４時間乾燥させ、１１．８５ｇの式（Ｉ）のミノドロン酸を得たが、このミノドロン酸は、９８．５％のＨＰＬＣ純度を示した。
固体を三角フラスコ内に移し、４７．４ｍＬのＨＣｌ ６Ｍを加えた。固体の完全な溶解が起きるまで懸濁液を１００℃で撹拌し、次いで、３３２ｍＬのメタノールを一まとめにして加えた。スラリーを室温で冷却し、次いで、この温度で３時間撹拌した。沈殿物を真空ろ過によって収集し、次いで、洗浄溶媒のｐＨが中性になるまで水によって洗浄した。白色固体を５０℃で４時間乾燥させ、１０．２０ｇの生成物を得たが、この生成物は、９９．４０％のＨＰＬＣ純度を示した（図２６）。

（例２）
ミノドロン酸の精製
例１の最後に得られた固体をビーカー内に移し、２０４ｍＬの水を加えた。スラリーを室温で撹拌し、６．１２ｍｌのジエチルアミン（２当量）を加えた。溶液が透明な状態になるまで混合物を室温で撹拌し、次いで４０８ｍＬのＨＣｌ １Ｍを一まとめにして加え、溶液を室温で３時間撹拌した。ミノドロン酸が白色固体として沈殿したら、真空ろ過によって収集した。固体を、洗浄溶媒のｐＨが中性になるまで水によって洗浄し、次いで、メタノール（２×２５ｍＬ）によって洗浄した。白色固体を５０℃で４時間乾燥させ、９．７３ｇのミノドロン酸（９５．４％の収率）を得たが、このミノドロン酸は、９９．６４％のＨＰＬＣ純度を示した（図２８）。ＸＲＰＤ分析は、形態Ｘと表記された新規な結晶形の存在を示した（図２７）。

（例３）
高いレベルの化学的純度を有するミノドロン酸形態Ｘの調製
３５．７ｇのミノドロン酸及び１２１ｍＬの水を、機械式撹拌棒を備えたジャケット付き２Ｌ反応器内に加えた。２０〜３０℃の間の温度を保ちながら、ｐＨ７．１〜７．２になるまでＮａＯＨの３０％水溶液を滴下した。９２９ｍＬのメタノールを、一まとめにして透明な溶液に加え、白色スラリーを室温で１５分撹拌した。白色固体を真空ろ過によって収集し、メタノールによって洗浄し、５０℃で２４時間乾燥させた。乾燥済み固体を、１８６ｍＬの脱イオン水と一緒にジャケット付き１Ｌ反応器内に加えた。固体の完全な溶解が起きるまで混合物を８０℃で加熱し、次いで、１３９ｍＬのＨＣｌ（８％水溶液）を加えた。溶液を１時間で１３℃に冷却し、この温度で３時間撹拌した（１２０ｒｐｍ）。固体を真空ろ過によって収集し、洗浄溶媒のｐＨが中性になるまで水によって洗浄し、次いで、メタノールによって洗浄した。白色固体を５０℃で４時間乾燥させ、９９．８５％のＨＰＬＣ純度を有する３５．３１ｇのミノドロン酸を得た。
固体（３５．３１ｇ）を、撹拌子を備えた２Ｌビーカー内に移し、１４１ｍＬの６Ｍ ＨＣｌを加えた。固体の完全な溶解が起きるまで混合物を１００℃で加熱した。９８８ｍＬのメタノールを一まとめにして加え、スラリーを室温に冷却し、この温度で３時間撹拌した。固体を真空下でろ過し、洗浄溶媒のｐＨが中性になるまで水によって洗浄し、次いで、メタノールによって洗浄した。白色固体を５０℃で４時間乾燥させ、９９．９３％のＨＰＬＣ純度を有する３０．３６ｇのミノドロン酸を得た。
固体（３０．３６ｇ）を、凝縮器及び機械式撹拌棒を備えたジャケット付き１Ｌ反応器内に移した。５６０ｍＬの水を加え、混合物を８０℃で３０分加熱した。熱い溶液を真空下でろ過し、固体をメタノールによって洗浄し、真空下で１時間乾燥させ、９９．９５％のＨＰＬＣ純度を有する２９．４５ｇのミノドロン酸を得た。
固体（２９．４５ｇ）を、凝縮器及び機械式撹拌棒を備えたジャケット付き３Ｌ反応器内に移した。１．０９Ｌの１Ｍ ＨＣｌを加え、固体の完全な溶解が起きるまで混合物を１１０℃で加熱した。あらかじめ０℃に冷却された別のジャケット付き反応器内に直接入るように、熱い溶液を綿パッドに通してろ過した。溶液を０℃で終夜撹拌し（１１０ｒｐｍ）、次いで、真空下でろ過した。洗浄溶媒のｐＨが中性になるまで固体を水によって洗浄した、次いで、メタノールによって洗浄した。白色固体を５０℃で終夜乾燥させて、ＨＰＬＣ純度が９９．９７％の２８．２７ｇのミノドロン酸形態Ｘ（９６％の収率）を得た。

（例４）
ミノドロン酸形態Ｘの脱水
１ｇの結晶形Ｘを、真空下において８０℃で終夜乾燥させた。得られた固体をＸＲＰＤによって分析すると、新たな結晶形が確認された。新たな形態は、結晶形Ｙと表記された。

（例５）
速度論的溶解及び熱力学的溶解
ミノドロン酸の新たな多形体（形態Ｘ及びＹ）並びに公知の多形体である形態Ｅ及びＤの溶解度を、速度論的条件及び熱力学的条件下において、相異なる３種のバッファー媒体（ｐＨ４．５、６．８及び７．４）について調査した。ＨＰＬＣ法は、合成されたミノドロン酸の新たな多形体の溶解度を評価するために最適化した。
検討の目的は、市販のＡＰＩの結晶形に比較して、新たな結晶形の溶解能力を評価することであった。
錠剤は、５０ｍｇのミノドロン酸形態Ｘ、Ｙ並びに基準用の対照であるＥ及びＤを、５０ｍｇのミクロセルロースと混合することによって調製された。試験されたすべてのバッファーにおいて、結晶形Ｘは、速度論的条件下においてより可溶なものとなっており、溶解速度が、標準物質として考えられる形態Ｅ／Ｄより２倍又は３倍高かった。分析の３０分後の最終的なミノドロン酸の濃度は、すべての多形体において同等であったが、７００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌ及び９００μｇ／ｍｌの値が、それぞれｐＨ４．５、６．８及び７．４において外挿された。
分析の最初の数分における多形体の間の主要な差異は、結晶形Ｘが並外れた溶解度を示すことであった。
ＨＰＬＣ法：
機器：１２００ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ Ｓｅｒｉｅｓ ＡＧＩＬＥＮＴ
Ｇ４２２０Ｂ−１２９０ ＢｉｎＰｕｍｐＶＬ
Ｇ４２２６Ａ−１２９０ Ｓａｍｐｌｅｒ
Ｇ１３１６Ａ−１２６０ ＴＣＣ
Ｇ１３１４Ｆ−１２６０ ＶＷＤ
カラム：Ｘ−ｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）５．０μｍ、Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎｓ
カラム温度：３５±０．３℃
移動相：イオン対溶液（２６．３ｇのリン酸水素二ナトリウム、３ｇのＥＤＴＡの二ナトリウム塩及び１．９ｇのテトラブチルアンモニウムブロミドを、適切な容器内に導入した。内容物を８００ｍＬの水中に溶解する。同じ容器内に２．０ｍＬの濃塩酸をピペットで移し、溶解し、よく混合する。溶液のｐＨを７．５に調節し、内容物を１０００ｍＬ測定シリンダーに移し、水によって９６０ｍＬに希釈する。内容物を適切な容器に移し、よく混合する。４０ｍＬのメタノールを同じ容器内に加え、よく混合して、前記イオン対溶液を得る）。
イソクラティック溶離：あり
流量：１ｍＬ／分
初期圧力：１８０ｂａｒ
流量増大：１００ｍＬ／ｍｉｎ２
流量減少：１００ｍＬ／ｍｉｎ２
Ｊｅｔ Ｗｅａｖｅｒ：Ｖ１００ミキサー
検出器波長：２８０ｎｍ
ピーク幅：＞０．００３１分（０．６３秒 応答時間）（８０Ｈｚ）
注入量：１０μｌ
ニードル洗浄＋注入：３．０秒
分析停止：３０分
保持時間：ミノドロン酸を対象にして４．４５分
希釈剤：移動相と同じ
較正曲線と、較正曲線のための標準溶液
基準用の標準物質の溶液：厳密に秤量された２５．５２ｍｇのミノドロン酸（９９．９５％の純度）を、２５ｍＬメスフラスコ内に導入した。固体を４０ｍＬの希釈剤中に溶解し、完全な溶解が達成されるまで混合物を超音波処理した。溶液を（恒温浴を使用して）室温に維持し、希釈剤によってある体積にした（標準溶液濃度 ミノドロン酸１ｍＬ当たり１．０２０８ｍｇ、標準溶液ＳＳ０）。
５ｍＬの標準溶液を１０ｍＬメスフラスコ内に移し、ある体積になるまで希釈剤溶液によって希釈した（ＳＳ１、ミノドロン酸１ｍＬ当たり０．５１０ｍｇ）。
４ｍＬの標準溶液を１０ｍＬメスフラスコ内に移し、ある体積になるまで希釈剤溶液によって希釈した（ＳＳ２、ミノドロン酸１ｍＬ当たり０．４０８３２ｍｇ）
２．５ｍＬの標準溶液を１０ｍＬメスフラスコ内に移し、ある体積になるまで希釈剤溶液によって希釈した（ＳＳ３、ミノドロン酸１ｍＬ当たり０．２５５２ｍｇ）
１ｍＬの標準溶液を１０ｍＬメスフラスコ内に移し、ある体積になるまで希釈剤溶液によって希釈した（ＳＳ４、ミノドロン酸１ｍＬ当たり０．１０２０８ｍｇ）
較正曲線のためのＨＰＬＣ法
各標準試料を、最適化されたクロマトグラフィー条件によって３回分析した。
生成物のピークを積分し、平均を計算した。結果を表５に報告する。

較正曲線及び実験結果を内挿するために使用された関連式は、図２９に報告されている。
速度論的溶解を、異なる３種の媒体、すなわち、ｐＨ４．５、ｐＨ６．８及びｐＨ７．４のリン酸バッファー中で実施した。
溶解試験は、特許ＥＰ０６４７６４９Ｂ１に従って調製された各ミノドロン酸形態Ｄ及びＥ、並びに、錠剤に製剤化された形態Ｘ及び形態Ｙと表記されている合成による新たな多形体を対象にして実施された。
収集された値は、下記の図３１〜図３６に内挿してプロットされており、多形体Ｘ及びＹの溶解のデータから外挿された値をミノドロン酸形態Ｄ又はＥのデータと比較した。
新たな多形体形態Ｘは、最良の溶解プロファイルを示していた。より高い濃度のＡＰＩが、溶解分析の最初の部分において達成されており、この高い濃度は、実験中維持された（図３０、薄い灰色カラム）。
溶解速度は、分析の最初の５分における各形態に関して外挿された（図３１）。
同じ実験をｐＨ６．８（図３２、図３３）及びｐＨ７．４（図３４、図３５）において繰り返し、形態Ｘに関する最良の結果を確認した。
熱力学的溶解度試験を、速度論的溶解試験に供された同じ結晶形に実施した。
５０ｍｇの各結晶形を紛体として、磁気撹拌子を備え付けたガラス管内に加え、２ｍＬのバッファーによって希釈した。
混合物を、磁気撹拌しながら（１００ｒｐｍ）３７℃で２４時間放置した。
実験は、ｐＨ４．５、ｐＨ６．８及びｐＨ７．４で実施された。
懸濁液を０．２０ミクロンフィルターによってろ過し、先に報告したＨＰＬＣ法によって分析し、結果を報告された較正曲線によって内挿した。
熱力学的溶液を２０倍に希釈して、較正曲線に含まれるデータを得る。
ミノドロン酸の溶解度は、ｐＨ７．４のときの方がｐＨ４．５及び６．８のときより高いことが明らかであり、これは、リン酸部分の存在によって妥当とすることができる。
ｐＨ４．５において、結晶形Ｘは、他の形態よりわずかに可溶である。特にＤ及びＥは、同等の溶解度を示したが、形態Ｙに関しては、わずかな低下が登録された（図３６）。
ｐＨ６．８において、約５．５ｍｇ／ｍＬの溶解度が想定される形態Ｄを除いて、すべての形態が、約７．５ｍｇ／ｍＬという類似した溶解度を示した（図３７）。
ｐＨ７．４において、ｐＨ４．５と同様の傾向が観察された。やはり、形態Ｘは、より可溶のもの（約１４．３ｍｇ／ｍＬ超）であるが、他の多形体に関しては、１３．２〜１４ｍｇ／ｍｌの間の良好な溶解度が計算された（図３８）。
熱力学的溶解度試験の後、粉体を回収し、ＸＲＰＤによって分析した。検討されたすべての結晶形において、形態Ｄ／ＥのＸＲＰＤを記録した。この結果は、分析された異なる多形体の熱力学的試験における最終的な値が類似していることを妥当にするものである（図３９〜図４１）。

Claims (14)

1. ２θ±０．３度で、９．１、１０．２、１５．５、１６．５、１８．７、２５．８の主要なピークを示すＸＲＰＤスペクトルを特徴とする、ミノドロン酸形態Ｘと呼ばれるミノドロン酸の結晶形。
2. 図１のＸＲＰＤスペクトルを特徴とする、請求項１に記載の結晶形。
3. 図４に示された赤外線吸収スペクトルを特徴とする、ミノドロン酸の結晶形。
4. ＨＣｌ １Ｍ中に溶解したミノドロン酸の沸騰溶液を迅速に０℃に冷却することによって得られる、請求項１から３までのいずれか一項に記載の結晶形。
5. ａ） ｐＨ１になるまでミノドロン酸の酸性溶液にＮａＯＨを加え、ミノドロン酸である固体を沈殿させ、その後に乾燥させる工程
   を含む、ミノドロン酸を精製するための方法。
6. ｂ） 前記工程ａ）において得られた固体を熱いＨＣｌ ６Ｍ中に再溶解し、続いて、メタノールによって沈殿させ、ミノドロン酸である固体を収集する工程
   を更に含む、請求項５に記載の方法。
7. ｃ） 前記工程ａ）又はｂ）において得られた固体に有機塩基を加える工程と、
   ｄ） ミノドロン酸である固体を酸性化し、沈殿させる工程
   を更に含む、請求項５又は６に記載の方法。
8. 前記有機塩基が、ジエチルアミンであり、好ましくは２当量のジエチルアミンが、前記固体に加えられる、請求項７に記載の方法。
9. ａ） ミノドロン酸のナトリウム塩を合成し、再酸性化する工程と、
   ｂ） ＨＰＬＣ純度が９９．８５％のミノドロン酸である固体を収集する工程と、
   ｃ） 工程ｂ）の固体をＨＣｌ ６Ｍ中に溶解し、メタノールによって沈殿させる工程と、
   ｄ） ＨＰＬＣ純度が９９．９３％のミノドロン酸である固体を収集する工程と、
   ｅ） 沸騰水によって洗浄し、１Ｍ ＨＣｌから結晶化させ、ＨＰＬＣ純度が９９．９７％のミノドロン酸形態Ｘを得る工程と
   を含む、高いレベルの化学的純度を有するミノドロン酸形態Ｘを調製するための方法。
10. ２θ±０．３度で、９．５、１０．７、１３．９、１９．１、１９．７８、１９．８５の主要なピークを示すＸＲＰＤスペクトルを特徴とする、ミノドロン酸形態Ｙと呼ばれるミノドロン酸の結晶形。
11. 図１３のＸＲＰＤスペクトルを特徴とする、請求項６に記載の結晶形。
12. 図１６に示された赤外線吸収スペクトルを特徴とする、ミノドロン酸の結晶形。
13. 真空下でミノドロン酸形態Ｘを乾燥させることによって得られる、請求項１０から１２までのいずれか一項に記載の結晶形。
14. 請求項１から３までのいずれか一項又は請求項１０から１２までのいずれか一項に記載のミノドロン酸の結晶形を活性成分として含む、医薬組成物。