JP2018517667A - 気管支肺異形成症を治療する抗ｆｌｔ−１抗体 - Google Patents

Abstract

本発明は、とりわけ、慢性肺疾患、特に、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）を治療するための方法および組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明による方法は、ＢＰＤの少なくとも１つの症状または特徴が強度、重症度もしくは頻度において減少するように、またはその発症が遅延するように、ＢＰＤを患っているまたはそれを患いやすい個体に、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の治療に有効な量を投与することを含む。
【選択図】なし

Description

関連出願
本出願は、２０１５年４月７日出願の米国特許仮出願第６２／１４４，２４７号に対する優先権を主張するものであり、その開示は本明細書に参照により組み込まれる。

気管支肺異形成症（ＢＰＤ）は、主に早産児に影響を及ぼす、重篤の慢性肺疾患である。早産児は、肺が酸素補給及び機械的呼吸装置の使用により損傷を受けると、ＢＰＤを発症する可能性がある。ＢＰＤを患う乳児は肺の炎症及び瘢痕化を伴い、重篤の場合、人工呼吸または酸素投与の長期にわたる必要性、肺高血圧症、再発性呼吸器感染症、肺機能異常、運動不耐性、遅神経発達状態、及び死さえのリスクも高い。

ＢＰＤを患う多くの乳児は回復し、時間の経過とともに改善するが、これらの児童は、喘息及びウィルス性肺炎を含む更なる合併症を発症するリスクが高い。大部分の乳児は生存するが、極めて重篤なＢＰＤを患う一部の乳児は、数か月にも及ぶ看護の後であっても、その疾患のために死亡する。

本発明はとりわけ、抗Ｆｌｔ−１抗体治療に基づいて、慢性肺疾患、特に気管支肺異形成症（ＢＰＤ）を治療するための改善された方法及び組成物を提供する。下記の実施例に記載されるように、本発明はある程度は、ＶＥＧＦ及び他のリガンドがＦｌｔ−１受容体と結合するのを抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が阻止することができ、それによってＶＥＧＦ受容体と結合するのに利用可能なＶＥＧＦ及び／または他のリガンドの量を増加させるという発見に基づく。この増大した結合は、毛細血管密度を上昇させて、線維症及び炎症の減少、ならびにＢＰＤと関連した症状及び特徴の緩和を容易にする、血管新生促進効果を誘発できる。実際に本実施例に示すように、本発明の発明者は、抗Ｆｌｔ−１抗体の投与がＢＰＤ動物モデルの肺症状の程度が改善することを立証した。したがって本発明は、ＢＰＤの治療のための安全かつ効果的な抗体を用いた治療法を提供する。

一態様では、本発明は、治療を必要とする個人に、有効量の抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）を治療する方法を提供し、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９〜配列番号２１のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義される可変軽（ＶＬ）鎖ＣＤＲ１、配列番号２２〜配列番号２４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ２、配列番号２５〜配列番号３４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ３、配列番号１〜配列番号４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義される可変重（ＶＨ）鎖ＣＤＲ１、配列番号５〜配列番号１４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号１５〜配列番号１８のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ３、からなる群から選択される１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。

いくつかの実施形態において、１つ以上のＣＤＲは、配列番号２５〜配列番号３４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ３、及び配列番号１５〜配列番号１８のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ３を含む。

いくつかの実施形態において、１つ以上のＣＤＲは、配列番号１９〜配列番号２１のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２２〜配列番号２４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２５〜配列番号３４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ３を含む。

いくつかの実施形態において、１つ以上のＣＤＲは、配列番号１〜配列番号４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号５〜配列番号１４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１５〜配列番号１８のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ３を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号１９、配列番号２２及び配列番号２５のアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２ならびにＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬ鎖を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号２０、配列番号２３及び配列番号２５のアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２ならびにＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬ鎖を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号２１及び配列番号２４のアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ１ならびにＶＬ ＣＤＲ２、ならびに配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３または配列番号３４のアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬ鎖を含む。

いくつかの実施形態において、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２ならびにＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ鎖は、それぞれ配列番号２１、配列番号２４及び配列番号３２のアミノ酸配列によって定義される。

いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号１、配列番号５及び配列番号１５のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２ならびにＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨ鎖を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号２、配列番号６及び配列番号１６のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２ならびにＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨ鎖を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号２、配列番号１０及び配列番号１８のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２ならびにＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨ鎖を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号２及び配列番号１７のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ１ならびにＶＨ ＣＤＲ３、ならびに配列番号７、配列番号８、配列番号１３または配列番号１４のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ２を含む、ＶＨ鎖を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号３及び配列番号１７のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ１ならびにＶＨ ＣＤＲ３、ならびに配列番号９、配列番号１１または配列番号１２のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ２を含む、ＶＨ鎖を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号４、配列番号９及び配列番号１７のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２ならびにＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨ鎖を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号３、配列番号１２及び配列番号１７のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２ならびにＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨ鎖を含む。

別の態様において、本発明は、治療を必要とする個人に、有効量の抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）を治療する方法を提供し、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）配列番号４９〜配列番号６１のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）領域、及び／または（ｉｉ）配列番号３５〜配列番号４８のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）領域、を含む。

いくつかの実施形態において、ＶＬ領域は配列番号６０のアミノ酸配列を含み、及びＶＨ領域は配列番号４５のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８７〜配列番号８９のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖定常領域を更に含む。

別の態様において、本発明は、治療を必要とする個人に、有効量の抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）を治療する方法を提供し、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）配列番号７５〜配列番号８６のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び／または（ｉｉ）配列番号６２〜配列番号７４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖は配列番号７６のアミノ酸配列を含み、及び重鎖は配列番号７１のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ）_２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、ＳｃＦｖ、二重特異性抗体、三重特異性抗体及び四重特異性抗体からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧである。いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧ１である。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、ヒト化モノクローナル抗体は、ヒトＦｃ領域を含有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、抗体のｉｎ ｖｉｖｏ半減期が長くなるように、Ｆｃ領域とＦｃＲｎ受容体の間の結合親和性を強化する、１つ以上の突然変異を含む。

いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１のＬｅｕ２３４、Ｌｅｕ２３５及び／またはＧｌｙ２３７に対応する位置において、１つ以上の突然変異を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ＶＥＧＦＲ２及び／またはＶＥＧＦＲ３と結合しない。

いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、マウスまたはサルＦｌｔ−１と結合しない。

別の態様において、本発明は、治療を必要とする個人に、有効量の抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）を治療する方法を提供し、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９０の位置１３９〜１４８、位置１３９〜１５３、位置１７８〜２０６、位置１９９〜２０４及び位置１２８〜１３８に対応するアミノ酸配列を含む、ペプチドもしくはこれらの断片を認識する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、配列番号９０の位置１３０〜１３８、位置１４１〜１４８、位置１４１〜１５３及び位置１９３〜２０６に対応するアミノ酸配列からなる。

いくつかの実施形態では、個体は、ＢＰＤを患うまたはそれを患いやすい乳児である。いくつかの実施形態では、個体は、ＢＰＤを患うまたはそれを患いやすい胎児を妊娠している。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、非経口的に投与される。いくつかの実施形態では、非経口投与は、静脈内、皮内、髄腔内、吸入、経皮（局所）、眼球内、筋肉内、皮下、肺送達、及び／または経粘膜投与から選択される。いくつかの実施形態では、非経口投与は静脈内投与である。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、経口投与される。

いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、隔月、毎月、３週間毎、隔週、毎週、毎日、または不定間隔で投与される。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、肺及び心臓から選択される１つ以上の標的組織へ送達される。いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、肺へ送達される。いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、心臓へ送達される。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の投与は、健康な肺組織の増殖、肺炎症の減少、肺胞形成の増加、血管新生の増加、肺血管床構造の改善、肺の瘢痕化の減少、肺の成長の改善、呼吸不全の減少、運動耐性の改善、有害な神経学的転帰の減少、及び／または対照と比較した肺機能の改善をもたらす。

いくつかの実施形態において、本発明は、サーファクタント、酸素療法、人工呼吸療法、ステロイド、ビタミンＡ、一酸化窒素吸入、高カロリー栄養剤、利尿薬及び／または気管支拡張薬から選択される、少なくとも１つの追加の薬剤または治療を併用投与することを更に含む、方法を提供する。

本出願にて使用する場合「約」及び「およそ」という用語は、同等のものとして使用される。約／およその有無に関係なく、本出願で使用する数字は、関連技術分野の当業者によって認識される通常の増減を含むことを意味する。

本発明の他の特徴、目的及び利点は、以下の詳細な記述で明らかにする。しかし詳細な記述は、本発明の実施形態を示すが、単に例示的なものとして提供されており、限定するものではないことを理解されたい。本発明の範囲内での様々な変更または修正は、詳細な記述から、当業者に明白であろう。

定義
本発明をより容易に理解するために、特定の用語を最初に以下に定義する。以下の用語及び他の用語についての追加の定義は本明細書全体にわたって記載する。

親和性：当該分野において周知のように「親和性」とは、特定のリガンドがそのパートナーと結合する際の堅固さの程度である。いくつかの実施形態では、リガンドまたはパートナーはＦｌｔ−１である。いくつかの実施形態では、リガンドまたはパートナーは可溶なＦｌｔ−１である。いくつかの実施形態では、リガンドまたはパートナーは組換えＦｌｔ−１である。特定の実施形態では、リガンドまたはパートナーはヒトｓＦｌｔ−１である。特定の実施形態では、リガンドまたはパートナーは組換えｓＦｌｔ−１である。他の実施形態では、リガンドまたはパートナーは抗Ｆｌｔ−１抗体である。親和性は様々な方法で測定することができる。いくつかの実施形態では、親和性は定量的アッセイで測定される。いくつかのこのような実施形態において、結合パートナーの濃度は、生理学的条件を模倣するようにリガンド濃度を上回って固定できる。代替的にまたは追加的に、いくつかの実施形態において、結合パートナー濃度及び／またはリガンド濃度は変化できる。いくつかのこのような実施形態において、親和性は、同様の条件下にて（例えば、濃度）、参照と比較することができる。

親和性成熟（または、親和性成熟抗体）：本明細書で使用する場合「親和性成熟」または「親和性成熟抗体」という用語は、変質（複数可）を有さない親抗体と比較して、抗原についての抗体の親和性に改善をもたらす、その１つ以上のＣＤＲにおける１つ以上のその変質を有する抗体を意味する。いくつかの実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に関してナノモル濃度の親和性またはピコモル濃度の親和性さえも有する。親和性成熟抗体は、当該分野において周知の種々の手法の任意のものにより産生され得る。Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９−７８３（１９９２）に、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインシャッフリングによる親和性成熟が記載されている。ＣＤＲ及び／またはフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：３８０９−３８１３（１９９４）、Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １６９：１４７−１５５（１９９５）、Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４（１９９５）、Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９（１９９５）、及びＨａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６（１９９２）に記載されている。

動物：本明細書で使用する場合「動物」という用語は、動物界に属する任意のものを指す。いくつかの実施形態では、「動物」は、任意の発達段階におけるヒトを指す。いくつかの実施形態では、「動物」は、任意の発達段階における非ヒト動物を指す。特定の実施形態では、非ヒト動物は哺乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、及び／またはブタ）である。いくつかの実施形態では、動物には、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、昆虫類、及び／または寄生虫類が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、動物は、遺伝子導入動物、遺伝子操作した動物、及び／またはクローンであり得る。

抗体：本明細書で使用する場合「抗体」という用語は、自然の、または全面的にもしくは部分的に合成的に作成した、任意の免疫グロブリンを指す。特異的結合能力を維持するすべてのその誘導体も、その用語に含まれる。前記用語は、免疫グロブリン結合ドメインと相同である、または大部分は相同である結合ドメインを有する、任意のタンパク質も対象とする。このようなタンパク質は、自然源に由来できる、または部分的にもしくは全面的に合成的に作成することができる。抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。抗体は、ヒトアイソタイプ：ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥのいずれかを含む、任意の免疫グロブリンアイソタイプのメンバーでもあり得る。特定の実施形態で、抗体は、ＩｇＧの免疫グロブリンクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３など）のメンバーであり得る。いくつかの実施形態では、抗体はヒト抗体であり得る。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体であり得る。

当業者に周知のように、自然に生成する抗体は通常、４つのポリペプチド鎖、ジスルフィド結合により相互接続する２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖からなる。各重鎖及び軽鎖は、可変領域（それぞれＨＣＶＲ、ＶＨまたはＶ_Ｈ及びＬＣＶＲ、ＶＬまたはＶ_Ｌとして本明細書で略記される）及び定常領域からなる。重鎖の定常領域は、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメイン（及び所望によりＩｇＭ及びＩｇＥの場合Ｃ_Ｈ４ドメイン）を含む。軽鎖の定常領域は、１つのドメインＣ_Ｌからなる。Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域が、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性領域を更に含み、それはフレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存された領域が散在する。各Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなり、以下の順序ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端まで配置される。重鎖及び軽鎖の結合領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は免疫グロブリンの宿主組織または因子への結合を媒介でき、それは免疫系（例えば、エフェクター細胞）の種々の細胞及び旧来の補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む。

抗原の結合部分：本明細書で使用する場合「抗原結合部分」または「抗原結合断片」という用語は、抗原（例えば、Ｆｌｔ−１）と特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つ以上の断片または部分を意味する。抗原結合部分の例としては、（ｉ）Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、Ｃ_Ｈ１及びＣ_Ｌドメインからなる一価の断片である、Ｆａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域中ジスルフィド架橋で結合した２つのＦａｂ断片を含む２価の断片であるＦ（ａｂ’）_２断片、（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈ及びＣ_Ｈ１ドメインからなるＦｄフラグメント、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶ_Ｈ及びＶ_ＬドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）単一可変ドメインを含むｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６）、（ｖｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）、（ｖｉｉ）ヒンジ領域の部分を持つ本質的にＦａｂであるＦａｂ’断片、（ｖｉｉｉ）単一可変ドメイン及び２つの定常領域を含む、重鎖可変領域であるナノボディが、挙げられる。更に、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは別々の遺伝子によりコードされているが、それらは、組換え法を用いてそれらを単一のタンパク質鎖として作製できる合成リンカーにより結合でき、この鎖中でＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域が対となって１価の分子を形成する（単一鎖のＦｖ（ｓｃＦｖ）として周知。例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６、及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３参照）。抗体の抗原結合断片は、所望により単鎖の抗体断片を含むことができる。代替的にまたは追加的に、抗体の抗原結合断片は、例えばジスルフィド結合によって結合される複数の鎖を含むことができる。抗体の抗原結合断片は、所望により多分子複合体を含むことができる。機能性抗体断片は通常少なくとも約５０のアミノ酸を含み、及びより一般的には少なくとも約２００のアミノ酸を含む。

いくつかの実施形態では、親抗体のように、それが同じ抗原と結合する断片である親抗体の十分な配列を、抗体断片は含む。いくつかの実施形態において、断片は、親抗体に相当する親和性を有する抗原と結合して及び／または抗原との結合において親抗体と競う。

「抗体断片」という用語が生成のいかなる特定の状態も意味せず、かつ限定されていないことを、当業者は理解するであろう。抗体断片は任意の適切な方法を用いることにより調製することができ、それは完全な抗体の開裂、化学合成及び組換え体生成を含むが、これらに限定されない。断片は、完全抗体と同様に使用するためスクリーニングされる。

回復：本明細書で使用する場合「回復」という用語は、対象の状態の予防、軽減もしくは緩和、または状態の改善を意味する。回復は、疾患病態の完全な回復または完全な予防を含むが、必要とはしない。

およそまたは約：本明細書で使用する場合、１つ以上の目的とする値に適用される「およそ」または「約」という用語は、記載された参照値に類似する値を指す。特定の実施形態では、用語「およそ」または「約」は、特に明記しない限りまたは文脈から明白でない限り、記載された参照値のいずれかの方向（超または未満）において、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ未満内に入る値の範囲を指す（このような数値が可能性のある値の１００％を超える場合を除く）。

と関連する：その用語が本明細書で使用される場合、１つのものの存在、レベル及び／または形状が他のものと相関していれば、２つの事象または実体は互いと「関連する」。例えば、特定の実体の存在、レベル及び／または形状が特定の疾患、障害または病態の発現率及び／またはそれに対する感染性と相関する場合（例えば、関連集団全体で）、その特定の実体（例えば、ポリペプチド）はその疾患、障害または病態と関連していると考慮される。いくつかの実施形態では、直接または間接的に相互作用する場合、２つ以上の実体は互いに物理的に「関連」しており、その結果、それらは互いに物理的な近接しており、その状態に留まる。いくつかの実施形態では、互いに物理的に関連する２つ以上の実体は、互いに共有結合される。いくつかの実施形態において、互いに物理的に関連する２つ以上の実体は、互いに共有結合されていないが、例えば水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、磁気及びこれらの組み合わせによって、非共有結合的に関連している。

生物学的に活性：本明細書で使用する場合「生物学的に活性な」という語句は、生物学系において、特に生命体において活性を有する任意の薬剤の特性を指す。例えば生命体に投与される場合、この生命体への生物学的効果を有する薬剤は、生物学的に活性であると考えられる。ペプチドが生物学的に活性である特定の実施形態では、ペプチドの生物学的活性の少なくとも１つを共有する、そのペプチドの一部は通常「生物学的に活性な」部分と呼ばれる。特定の実施形態で、ペプチドは固有の生物活性を有さないが、それは１つ以上のＶＥＧＦリガンドの結合を阻害して、生物学的に活性であると考えられる。

担体または希釈剤：本明細書で使用する場合「担体」及び「希釈剤」という用語は、医薬製剤の調製のために有用な薬学的に許容される（例えば、ヒトへの投与において安全かつ非毒性）担体または希釈剤を指す。例示的な希釈剤としては、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル溶液、またはデキストロース溶液が挙げられる。

キメラ抗体：本明細書で使用する場合、そのアミノ酸配列が、第１種中に見出されるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域配列、ならびに第１種と異なる第２種中に見出される定常領域配列を含む、抗体を意味する。多くの実施形態において、キメラ抗体は、ヒト定常領域に結合するマウスＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を有する。いくつかの実施形態では、非ヒト定常領域（例えば、マウス定常領域）に結合するヒトＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を有する抗体は、「リバースキメラ抗体」と呼ばれる。

ＣＤＲ：本明細書で使用する場合、抗体の可変領域内の相補性決定領域を意味する。重鎖及び軽鎖の可変領域のそれぞれには、３つのＣＤＲが存在しており、可変領域のそれぞれについて、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と名付けられる。「ＣＤＲのセット」または「ＣＤＲセット」は、抗原と結合可能な単一の可変領域、または抗原と結合可能な同種の重鎖及び軽鎖の可変領域のＣＤＲのいずれかにおいて生じる、３つまたは６つのＣＤＲの群を意味する。特定のシステムは、ＣＤＲ境界（例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａなど）を定めるために、当該技術分野において確立されている。当業者はこれらのシステム間の及びこれらのシステムの中の違いを認識しており、特許請求された発明を理解して、実施するのに必要とする範囲でＣＤＲ境界を理解できる。

投与剤形：本明細書で使用する場合「投与剤形」及び「単位投与剤形」という用語は、治療を受ける患者のための治療用タンパク質（例えば、抗体）の物理的に個別の単位を意味する。各単位は、所望の治療効果を生成するために計算された活性物質の所定量を含む。しかし、組成物の全投与量は、健全な医学的判断の範囲内で、担当医師によって決定されることを理解されたい。

機能不全：本発明で使用する場合「機能不全」という用語は、異常な機能を意味する。分子（例えば、タンパク質）の機能不全は、このような分子と関連する活動の増加または減少によって生じることがあり得る。分子の機能不全は、分子と直接的もしくは間接的に相互作用するまたはそれを調整する、分子自体または他の分子に関連した欠陥によって生じることがあり得る。

エピトープ：本明細書で使用する場合、免疫グロブリン（例えば、抗体、その抗体断片、受容体）結合成分によって特に認識される、任意の部分を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、抗原上の複数の化学原子または基からなる。いくつかの実施形態では、このような化学原子または基は、抗原が関連する３次元構造をとるとき、表面に露出する。いくつかの実施形態では、このような化学原子または基は、抗原がこのような構造をとるとき、間隙を介して互いに物理的に近い。いくつかの実施形態では、少なくともいくつかのそのような化学原子及び群は、抗原が他の構造（例えば、線形化）をとるとき、互いから物理的に分離される。

Ｆｃ領域：本明細書で使用する場合「Ｆｃ領域」という用語は、２つの「Ｆｃポリペプチド」の二量体を指し、各「Ｆｃポリペプチド」は、第１の定常領域の免疫グロブリンドメインを除く、抗体の定常領域を含む。いくつかの実施形態では、「Ｆｃ領域」は、１つ以上のジスルフィド結合、化学リンカーまたはペプチドリンカーにより結合した２つのＦｃポリペプチドを含む。「Ｆｃポリペプチド」は、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにＩｇＥ及びＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメインを指し、これらの領域に対するＮ末端の可撓性ヒンジの一部または全体を含むこともできる。ＩｇＧにおいて、「Ｆｃポリペプチド」は、免疫グロブリンドメインＣガンマ２（Ｃγ２）及びＣガンマ３（Ｃγ３）、ならびにＣガンマ１（Ｃγ１）とＣγ２の間のヒンジの下部を含む。Ｆｃポリペプチドの境界は変化できるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃポリペプチドは、そのカルボキシル末端に対してＴ２２３またはＣ２２６またはＰ２３０から開始する残基を含むように、通常定義され、番号付けはＫａｂａｔらのＥＵインデックスに従う（１９９１，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＶＡ）。ＩｇＡにおいて、Ｆｃポリペプチドは、免疫グロブリンドメインＣアルファ２（Ｃα２）及びＣアルファ３（Ｃα３）、ならびにＣアルファ１（Ｃα１）とＣα２の間のヒンジの下部を含む。Ｆｃ領域は、ＩＶＩＧなどの自然源から合成される、組換えされる、または生成されることができる。

フレームワークまたはフレームワーク領域：本明細書で使用する場合、ＣＤＲを除いた可変領域の配列を意味する。ＣＤＲ配列が異系統により決定され得るため、同様にフレームワーク配列もそれに相応して種々の解釈の対象である。６つのＣＤＲは、重鎖及び軽鎖上のフレームワーク領域を、各鎖上において４つのサブ領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）に分割する。その中で、ＣＤＲ１はＦＲ１とＦＲ２との間に位置し、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３との間に位置し、ＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４との間に位置する。特定のサブ領域をＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３またはＦＲ４として特定することなく、他のものにより言及されるフレームワーク領域は、単鎖の天然由来の免疫グロブリン鎖の可変領域内の組み合わせられたＦＲを表す。本明細書で使用する場合、ＦＲは４つのサブ領域の１つを表す。例えばＦＲ１は、可変領域のアミノ末端及びＣＤＲ１に関する５’に最も近い第１のフレームワーク領域を表し、ＦＲは、フレームワーク領域を構築する２つ以上のサブ領域を表す。

機能的等価物または誘導体：本明細書で使用する場合「機能的等価物」または「機能的誘導体」という用語は、アミノ酸配列の機能的誘導体という文脈の中では、元の配列のものに実質的に類似する生物活性（機能または構造のいずれか）を保持する分子を意味する。機能的誘導体または等価物は、天然誘導体であり得る、または合成して調製される。例示の機能的誘導体は、１つ以上のアミノ酸の置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列を含むが、タンパク質の生物学的活性が保存されていることを条件とする。置換するアミノ酸は望ましくは、置換されたアミノ酸に類似する化学的物理的特性を有する。望ましい類似する化学的物理的特性としては、電荷、嵩高性、疎水性、親水性などにおける類似性が挙げられる。

融合タンパク質：本明細書で使用する場合「融合タンパク質」または「キメラタンパク質」という用語は、２つ以上の本来別個のタンパク質の結合によって、またはその部分の結合によって生成されたタンパク質を指す。いくつかの実施形態では、リンカーまたはスペーサーは、各タンパク質の間に存在するであろう。

半減期：本明細書で使用する場合「半減期」という用語は、タンパク質濃度または活性などの量が、期間の開始時に測定されたその値の半分まで低下するのに必要な時間である。

ヒト抗体：本明細書で使用する場合、ヒト免疫グロブリン配列から生成した（またはアセンブリされた）可変領域及び定常領域を有する、抗体を含むことを意図する。いくつかの実施形態では、例えば１つ以上のＣＤＲ、特にＣＤＲ３において、そのアミノ酸配列が、ヒト生殖系の免疫グロブリン配列によりコードされない残基またはエレメントを含んでも（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏランダムもしくは部位特異的突然変異誘発、またはｉｎ ｖｉｖｏ体細胞突然変異により（最初から）導入され得る配列変異などを含んでも）、抗体（または抗体成分）は「ヒト」であるとみなされ得る。

ヒトモノクローナル抗体：本明細書で使用する場合、フレームワーク及びＣＤＲ領域がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する、単一の結合特異性を示す抗体を指すことを意図する。一実施形態において、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、トランスジェニック非ヒト動物（例えば、トランスジェニックマウス）から得られたＢ細胞を含む、ハイブリドーマによってヒトモノクローナル抗体は作成される。

ヒト化：当該分野において周知のように「ヒト化」という用語は、アミノ酸配列が、非ヒト種（例えば、マウス、ラマ）において生じる参照抗体からのＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域の配列を含むが、それらをより「ヒト様」、すなわちヒト生殖系の可変配列により類似するようにすることを意図した前記参照抗体に対するそれらの配列における修飾も含む、抗体（または抗体成分）を意味するのに一般的に使用される。いくつかの実施形態では、「ヒト化」抗体（または、抗体成分）は、目的の抗原に免疫特異的に結合し、ヒト抗体のそれと同じアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域、及び非ヒト抗体（例えば、マウス、ラマ）のそれと同じアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を有するものである。ヒト化抗体は、少なくとも１つ、通常は２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）のすべてを実質的に含み、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべては非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー免疫グロブリン）のＣＤＲ領域に対応し、フレームワーク領域のすべてまたは実質的にすべてはヒト免疫グロブリン共通配列のフレームワーク領域である。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも一部の免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）、通常はヒト免疫グロブリンの定常領域のそれも含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖及び少なくとも重鎖の可変ドメインの両方を含む。抗体は、重鎖の定常領域のＣ_Ｈ１、ヒンジ、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３、及び所望によりＣ_Ｈ４領域も含み得る。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化Ｖ_Ｌ領域のみを含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化Ｖ_Ｈ領域のみを含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。

肥大：本明細書で使用する場合「肥大」という用語は、器官または組織の構成細胞の拡大に起因する、器官または組織の体積の増加を指す。

改善する、増加させる、または減少させる：本明細書で使用する場合、用語「改善する」「増加させる」もしくは「低下させる」または文法上の等価物は、ベースライン測定、例えば本明細書に記載の処置の開始前の同じ個体における測定、または本明細書に記載の処置を行わない対照対象（または複数の対照対象）における測定に対する値を示す。「対照対象」は、処置されている対象と同一の型の疾患に罹患した対象であり、処置されている対象とほぼ同一の年齢である。

阻害：本明細書で使用する場合「阻害」「阻害する」及び「阻害すること」という用語は、目的のタンパク質もしくは遺伝子の活性及び／または発現を減らす、または低減する工程ならびに方法を指す。通常、タンパク質または遺伝子を阻害することは、本明細書に記載するまたは当業者が認識する１つ以上の方法によって測定した際、タンパク質または遺伝子の少なくとも１０％以上、例えば２０％、３０％、４０％もしくは５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上の発現もしくは関連する活性の低減、または１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍以上の発現もしくは関連する活性の低下を意味する。

Ｉｎ ｖｉｔｒｏ：本明細書で使用する場合「ｉｎ ｖｉｔｒｏ」という用語は、多細胞生物内よりはむしろ人工的な環境、例えば試験管内または反応容器内、細胞培養中などで起こる事象を指す。

Ｉｎ ｖｉｖｏ：本明細書で使用する場合「ｉｎ ｖｉｖｏ」という用語は、ヒト及び非ヒト動物などの多細胞生物内で発生する事象を指す。細胞ベースのシステムとの関係においては、前記用語は、生細胞内で（例えば、インビトロ系とは対照的に）発生する事象を指すよう使用され得る。

単離された抗体：本明細書で使用する場合「単離された抗体」という用語は、異なる抗原特異性（例えば、Ｆｌｔ−１と特異的に結合する単離された抗体）を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことを意図する。更に、単離された抗体は、他の細胞材料及び／または化学薬品を実質的に含まなくてもよい。

Ｋ_ａ：本明細書で使用する場合、特定の抗体−抗原相互作用の結合速度を指し、本明細書で使用する場合「Ｋ_ｄ」という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を指すことを意図する。本明細書で使用する場合「Ｋ_Ｄ」という用語は解離定数を指すことを意図としており、それはＫｄ対Ｋａの比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られて、モル濃度（Ｍ）として表される。抗体におけるＫ_Ｄ値は、当該技術分野において十分に確立されている方法を使用して決定することができる。抗体のＫ_Ｄを決定するための好ましい方法は、表面プラズモン共鳴を用いる、好ましくはバイオセンサーシステム（例えばＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）システム）を用いることによる。

軽鎖の再シャッフル：本明細書で使用する場合「軽鎖の再シャッフル」という用語は、重鎖配列が一定に保たれ、及び軽鎖配列のライブラリが生成される、親和性成熟ステップを指すことを意図する。軽鎖ライブラリは重鎖に対してスクリーニングされて、改善された結合親和性を備える抗体を識別する。改善された結合親和性は、ナノモルまたはピコモルの範囲内であり得る。

リンカー：本明細書で使用される用語「リンカー」は、融合タンパク質においては、天然タンパク質中の特定の位置において出現するもの以外のアミノ酸配列を指し、通常、２つのタンパク質部分間で柔軟であるように、またはα−へリックスなどの構造を挿置するように設計される。リンカーは、スペーサーとも呼ばれる。リンカーまたはスペーサーは、典型的には、それ自体で生物学的機能を有することはない。

モノクローナル抗体：本明細書で使用する場合「モノクローナル抗体」という用語は、単一分子組成物の抗体分子の調製を指すことを意図する。モノクローナル抗体組成物は、特定エピトープの単一の結合特異性及び親和性を示す。

薬学的に許容される：本明細書で使用する場合「薬学的に許容される」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、妥当な利益／リスク比に見合う、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を有さずに、ヒト及び動物の組織と接触して使用するのに好適な物質を指す。

ポリペプチド：本明細書で使用する場合「ポリペプチド」という用語は、ペプチド結合を介して結合されたアミノ酸の連続的な鎖を指す。前記用語は、任意の長さのアミノ酸鎖を指すよう使用されるが、当業者であれば、この用語が長大な鎖に限定されるものではなく、ペプチド結合を介して結合される２つのアミノ酸を含む最小の鎖を指すこともできることを理解するであろう。当業者には周知のように、ポリペプチドは加工及び／または修飾され得る。

予防する：本明細書で使用する場合「予防する」または「予防」という用語は、疾患、障害及び／または病態の発生に関連して使用される場合、疾患、障害及び／または病態を発症するリスクを減少させることを指す。「リスク」の定義を参照のこと。

タンパク質：本明細書で使用する場合「タンパク質」という用語は、個別単位として機能する１つ以上のポリペプチドを指す。単一のポリペプチドが別個に機能する単位であり、別個の機能する単位を形成するために、他のポリペプチドとの永久的または一時的な物理的結合を必要としないならば、用語「ポリペプチド」及び「タンパク質」は同じ意味で使用され得る。別個の機能的単位が、互いに物理的に結合する２つ以上のポリペプチドからなる際、用語「タンパク質」は、物理的にカップリングされて、別個の単位として一緒に機能する複数のポリペプチドを指す。

リスク：文脈から理解されるように、疾患、障害及び／または病態の「リスク」は、特定の個体が疾患、障害及び／または病態（例えば、ＢＰＤ）を発症する可能性を含む。いくつかの実施形態では、リスクは百分率として表される。いくつかの実施形態では、リスクは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０％から最大１００％である。いくつかの実施形態では、リスクは、参照試料または参照試料の群に関連するリスクに対するリスクとして表される。いくつかの実施形態では、参照試料または参照試料の群は、疾患、障害、病態及び／または事象（例えば、ＢＰＤ）の既知のリスクを有する。いくつかの実施形態では、参照試料または参照試料の群は、特定の個体と比較できる個体から得られる。いくつかの実施形態では、相対的リスクは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上である。

選択結合性：本明細書で使用する場合「選択結合性」「選択的に結合する」「特異的結合」または「特異的に結合する」は、結合部分及び標的に関して、標的でない実体ではなく、標的に対する結合部分の優先的結合を指す。ある程度の非特異的結合は、結合部分と非標的の間に発生する場合がある。いくつかの実施形態では、結合部分と標的の間の結合が、結合部分と非標的の結合と比較して２倍超、５倍超、１０倍超または１００倍超の場合、結合部分は標的と選択的に結合する。いくつかの実施形態では、結合親和性が約１０^−５Ｍ未満、約１０^−６Ｍ未満、約１０^−７Ｍ未満、約１０^−８Ｍ未満、または約１０^−９Ｍ未満の場合、結合部分は標的と選択的に結合する。

対象：本明細書で使用する場合「対象」という用語は、ヒトまたは任意の非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマまたは霊長類）を指す。ヒトは、出生前及び出生後の状態を含む。多くの実施形態では、対象はヒトである。対象は患者であることができ、前記患者は、疾患の診断または処置のために医療提供者を受診するヒトを意味する。「対象」という用語は、本明細書において「個体」または「患者」と区別なく使用される。対象は、疾患または障害を罹患し得る、または患いやすいが、疾患または障害の徴候を示しても、示さなくてもよい。

実質的に：本明細書で使用する場合「実質的に」という用語は、目的の特徴もしくは特性の全体的もしくはほぼ全体的な範囲または程度を示す、質的な条件を指す。生物学的分野における当業者であれば、生物学的及び化学的現象は、完結することならびに／もしくは完結まで進むことがあるにしてもごくまれであること、または絶対的結果を成し遂げるもしくは回避することがあるとしてもごくまれであることを理解するであろう。したがって用語「実質的に」は、多くの生物学的及び化学的現象において固有の潜在的な完結性の欠如をとらえるために本明細書で使用される。

実質的に相同性：本明細書で使用する場合「実質的に相同性」という語句は、アミノ酸または核酸配列の間の比較を指す。当業者であれば理解するように、２つの配列は、それらが対応する位置において相同の残基を含有する場合、一般的に「実質的に相同性」であるとみなされる。相同の残基は、同一残基であり得る。あるいは相同の残基は、適切に類似した構造的及び／または機能的特徴を有する、非同一残基であり得る。例えば当業者には周知であるように、特定のアミノ酸は通常「疎水性」もしくは「親水性」アミノ酸として、及び／または「極性」もしくは「非極性」側鎖を有するものとして分類される。１つのアミノ酸による同一のタイプの別のものの置換は、多くの場合「相同な」置換とみなされ得る。

当該技術分野において周知であるように、アミノ酸または核酸配列は、ヌクレオチド配列についてはＢＬＡＳＴＮ、ならびにアミノ酸配列についてはＢＬＡＳＴＰ、ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ及びＰＳＩ−ＢＬＡＳＴなどの市販のコンピュータプログラム中で利用可能なものを含む、種々のアルゴリズムのいずれかを用いて比較され得る。例示のこのようなプログラムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３−４１０，１９９０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，“Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ ａｎｄ ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ：ａ ｎｅｗ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄａｔａｂａｓｅ ｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒａｍｓ”，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２，１９９７、Ｂａｘｅｖａｎｉｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８、及びＭｉｓｅｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，１９９９に記載されている。相同配列を同定することに加えて、上述のプログラムは通常、相同性の程度の表示を提供する。いくつかの実施形態では、２つの配列は、それらの対応する残基の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上が、残基の関連する並びにわたって相同である場合、実質的に相同であるとみなされる。いくつかの実施形態では、関連する並びは完全な配列である。いくつかの実施形態では、関連する並びは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００個以上の残基である。

実質的な同一性：本明細書で使用する場合「実質的な同一性」という語句は、アミノ酸または核酸配列の間の比較を指すために使用される。当業者であれば理解するように、２つの配列は、それらが対応する位置で同一の残基を含有する場合、一般的に「実質的に同一性」であるとみなされる。当該技術分野において周知であるように、アミノ酸または核酸配列は、ヌクレオチド配列についてはＢＬＡＳＴＮ、ならびにアミノ酸配列についてはＢＬＡＳＴＰ、ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ及びＰＳＩ−ＢＬＡＳＴなどの市販のコンピュータプログラム中で利用可能なものを含む、種々のアルゴリズムのいずれかを用いて比較され得る。例示のこのようなプログラムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３−４１０，１９９０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２，１９９７、Ｂａｘｅｖａｎｉｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８、及びＭｉｓｅｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，１９９９に記載されている。同一配列を同定することに加えて、上述のプログラムは通常、同一性の程度の表示を提供する。いくつかの実施形態では、２つの配列は、それらの対応する残基の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上が、残基の関連のある並びにわたって同一である場合、実質的に同一であるとみなされる。いくつかの実施形態では、関連する並びは完全な配列である。いくつかの実施形態では、関連する並びは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００個以上の残基である。

患う：疾患、障害及び／または病態を「患う」個体は、疾患、障害及び／または病態の１つ以上の徴候により診断されている、またはその徴候を示す。

表面プラズモン共鳴：本明細書で使用する場合、例えばＢｉａｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ ａｎｄ Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を使用することによってなどバイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出による、リアルタイムの特異的結合の相互作用の分析を可能にする、光学現象を指す。更なる説明については、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．，ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １１：６２０−６２７、Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５−１３１、及びＪｏｈｎｎｓｏｎ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８−２７７を参照のこと。

患いやすい：疾患、障害及び／または病態を「患いやすい」個体は、疾患、障害及び／または病態を診断されていない。いくつかの実施形態では、疾患、障害及び／または病態を患いやすい個体は、疾患、障害及び／または病態の徴候を示していなくてもよい。いくつかの実施形態では、疾患、障害、病態または事象（例えば、ＢＰＤ）を患いやすい個体は、以下（１）疾患、障害及び／または病態の発症に関連する遺伝子突然変異、（２）疾患、障害及び／または病態の発症に関連する遺伝子多型、（３）疾患、障害及び／または病態に関連するタンパク質の発現及び／または活性の増加及び／または減少、（４）疾患、障害、病態及び／または事象の発症に関連する習慣及び／または生活様式、（５）移植を行ったことがあること、移植を行う予定があること、または移植を必要としていること、のうちの１つ以上によって特徴づけられ得る。いくつかの実施形態では、疾患、障害及び／または病態を患いやすい個体は、疾患、障害及び／または病態を発症する。いくつかの実施形態では、疾患、障害及び／または病態を患いやすい個体は、疾患、障害及び／または病態を発生しない。

標的組織：本明細書で使用する場合「標的組織」という用語は、ＢＰＤなどの治療されることになる疾患に罹患している任意の組織を指す。いくつかの実施形態では、標的組織は、肺炎症、肺の瘢痕化、肺の成長の異常、初期の肺損傷、長期の呼吸不全、肺感染症、運動不耐性、及び有害な神経学的転帰を含むがこれらに限定されない疾患に関連する病変、症状または特徴を表す組織を含む。

治療に有効な量：本明細書で使用する場合、治療薬の「治療に有効な量」という用語は、疾患、障害及び／または病態を患う対象または、疾患、障害及び／または病態を患いやすい対象に投与されるとき、疾患、障害及び／または病態の症状（複数可）の発症を治療、診断、予防及び／または遅延するのに十分な量を意味する。治療に有効な量は通常、少なくとも１つの単位用量を含む投与レジメンによって投与されることを、当業者であれば理解するであろう。

治療：本明細書で使用する場合「治療する」「治療」または「治療すること」という用語は、特定の疾患、障害及び／または病態の１つ以上の症状もしくは特徴を部分的にもしくは完全に緩和し、改善し、軽減し、抑制し、予防し、その発症を遅延し、その重篤度を減少させ、及び／またはその発症率を減少させるために用いられる任意の方法を指す。治療は、疾患に関連する病状を発達させるリスクを減少させる目的で、疾患の徴候を示さない対象及び／または疾患の初期徴候のみを示す対象に適用され得る。

本発明はとりわけ、ＢＰＤの治療のための治療薬として、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の使用に基づいて、慢性肺疾患、特に気管支肺異形成症（ＢＰＤ）を治療するための方法及び組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、ＢＰＤの少なくとも１つの症状または特徴が強度、重症度もしくは頻度において減少するように、またはその発症が遅延するように、ＢＰＤを患っている、またはそれを患いやすい個体に、有効量のＦｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、ＢＰＤを治療する方法を提供する。

本発明の種々の態様は、下記の項において詳細に説明される。項の使用は、本発明を限定することを意味しない。各項は、本発明の任意の態様に適用し得る。本出願では特に明記しない限り、「または」の使用は「及び／または」を意味する。

気管支肺異形成症（ＢＰＤ）
サーファクタント療法、母体ステロイド、新しい人工呼吸管理、動脈管開存の積極的治療、改良された栄養及び他の治療の導入と合わせて、ＲＤＳに罹患した早産の新生児の臨床経過及び転帰は、過去３０年で劇的に変化した。ＢＰＤを発症する乳児の約２／３が出生時に軽度の呼吸困難のみを有していたことが、最近明らかにされた。このことは、肺損傷の発症のタイミングがＢＰＤの病因の重要なファクターであることを示唆している。

この変化する疫学的及び臨床パターンに伴って、鍵となるＢＰＤの肺組織学的特徴も変化した。早産後に持続的肺疾患に罹患した乳児が、このサーファクタント前段階にＢＰＤによって死亡した乳児で従来観察されるものとは異なる、臨床経過及び病理所見を有するという認識は、現在大きくなっている。最初にＢＰＤの特性を明らかにした従来の進行期は、臨床治療の変化のため、多くの場合存在しておらず、ＢＰＤは、急性肺損傷の重症度によって主に定義されていたものから、現在の評価に明らかに変化しており、それは主に末梢の肺の成長の破壊により定義される。したがって、サーファクタント後のいわゆる新しいＢＰＤは、末梢気腔及び脈管構造の変化した肺構造、成長ならびに機能を有する肺発生の阻害を表す。生理学的にこれは、肺胞毛細血管表面積の著しい減少、運動不耐性、肺高血圧症及び急性呼吸器感染症の低耐性へのリスクの増大を伴う、ガス交換の障害への潜在的な関与を示唆する。

ＢＰＤの病因
ＢＰＤは、肺の成長の臨界期、すなわち管状期（ヒトの１７〜２６週）、気腔中隔形成及び血管形成が劇的に増加する期間の肺の損傷に対する反応を表す。いくつかの実施形態で、早産の新生児のＢＰＤ発症の感受性を増大させる要因は、サーファクタントの欠乏、抗酸化防御機構の減少、上皮性イオン及び水輸送機能の損傷、ならびに肺構造の未熟を含む。いくつかの実施形態で、早産後の肺の損傷及びその後肺の成長の停止は、十分に防御されなかった発育過程の肺の炎症、過酸素症、機械的人工呼吸及び感染を含む、複数の有害な刺激の間の複雑な相互作用から生じる。いくつかの実施形態において、母体の絨毛羊膜炎が原因による、炎症誘発性サイトカイン（例えばＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８など）への出生前の曝露は、子宮内の肺の成熟を高めるが、ＢＰＤへのリスクを増大させる。

過酸素症及び酸化ストレスは、ＢＰＤ発症の重要なファクターである。いくつかの実施形態では、通常の胎児の低酸素分圧環境から子宮外生活の相対的に酸素過剰への、早産の新生児の移行は、肺胞形成の減少及び異形脈管構造を伴うＢＰＤのリスクを増大させる。いくつかの実施形態では、酸素環境の早すぎる変化は、通常の上皮間充織相互作用を妨害し、微小血管系の内皮細胞生存、分化及び組織の変質につながる。いくつかの実施形態では、早産児は、早産後の適切な抗酸化物質の欠乏のため、活性酸素種（ＲＯＳ）誘発性損傷に特に影響されやすい。いくつかの実施形態では、抗酸化酵素［例えば、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、カタラーゼ及びグルタチオンペルオキシダーゼ］は、妊娠後期中、著しく増加する。いくつかの追加の実施形態において、過酸素に反応して抗酸化酵素の合成を増加させる能力は、早産の動物で減少し、そのため早産は、抗酸化物質の通常の上方制御を先行することができ、それは初期の出生後生活の間、持続する。いくつかの実施形態では、内皮及び肺胞ＩＩ型細胞は、過酸素及びＲＯＳ誘発性損傷に極度に影響されやすく、浮腫の増大、細胞の機能不全、ならびに細胞生存及び成長の障害を生じさせる。

いくつかの実施形態では、気圧外傷または容量損傷の明白な徴候がない状態でさえ、機械的人工呼吸による早産の新生児の治療は、炎症及び透過性浮腫を伴う肺損傷を惹起させ、促進して、ＢＰＤに寄与する。いくつかの実施形態では、人工呼吸器関連の肺損傷（ＶＡＬＩ）は、末梢気道上皮及び血管内皮を伸展させることにより生じ、それは透過性浮腫を増加させ、サーファクタント機能を阻害し、複雑な炎症カスケードを誘発する。いくつかの実施形態では、短い期間の陽圧換気（例えば分娩室の蘇生中）でさえ、進行性の肺炎症及び肺障害を招く、肺の気管支上皮及び内皮障害を引き起こす可能性がある。

出生前（絨毛羊膜炎から）または出生後早期中（過酸素症またはＶＡＬＩによる）に誘発されたかどうかに関わらず、肺炎症はＢＰＤ発症で顕著な役割を果たす。いくつかの実施形態で、ＢＰＤのリスクは、気管体液好中球数、活性化マクロファージ、高濃度の脂質生成物、酸化体不活性化α−１−アンチトリプシン活性、及びＩＬ−６及びＩＬ−８を含む炎症誘発性サイトカインの持続した増加、ならびにＩＬ−１０濃度の低下に関連している。いくつかの実施形態で、マクロファージ及び可溶な接着分子（すなわち、セレクチン）の存在による、初期応答サイトカイン（例えばＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−８及びＴＧＦ−β）の放出は、他の細胞に影響を与えて、好中球を補充する走化性因子を放出して、炎症反応を増幅できる。いくつかの実施形態で、減少した抗炎症生成物（すなわち、ＩＬ−１０）と共に炎症誘発性サイトカインの上昇した濃度は、その後にＢＰＤを発症する乳児の出生後数時間内に気管吸引物に現れる。いくつかの実施形態で、活性化好中球からの増加したエラスターゼ及びコラゲナーゼの放出は、肺のエラスチン及びコラーゲンフレームワークを直接破壊でき、コラーゲン及びエラスチン分解のマーカーは、ＢＰＤに罹患した乳児の尿で回収され得る。いくつかの実施形態では、比較的低い病原性生命体からの感染（例えばウレアプラズマウレアリチカムの気道コロニー形成）は、炎症反応を増大させることができ、ＢＰＤのリスクを更に増加させる。いくつかの実施形態では、他の要因（例えば栄養不良）及び遺伝学的要因（例えばビタミンＡ及びＥ欠乏症、またはサーファクタントタンパク質の一塩基多形の変異体）はそれぞれ、一部の早産の新生児のＢＰＤのリスクを増大させる傾向が見られる。

ＢＰＤの肺循環
気道及び末梢気腔への有害作用に加えて、急性肺損傷も、早産後に発達中の肺循環の増殖、構造及び機能を損なう。いくつかの実施形態で、内皮細胞は、特に過酸素症または炎症による酸化的障害の影響を受けやすい。いくつかの実施形態で、小さな肺動脈の中膜は、平滑筋細胞増殖、未成熟な間葉細胞の成熟した平滑筋細胞への早熟性成熟、及び線維芽細胞／筋線維芽細胞の血管壁への組み込みを含む、著しい変化を受ける。いくつかの実施形態で、肺血管構造の構造変化は、血管直径及び減少した血管コンプライアンスを狭くすることによる高肺血管抵抗（ＰＶＲ）に寄与する。いくつかの実施形態で、これらの構造変化に加えて、肺循環は、異常な血管反応性によって更に特徴づけられ、それはＰＶＲも増加させる。いくつかの実施形態で、減少した血管新生は、特に運動またはストレスによる高心拍出量に反応して、ＰＶＲの更なる上昇を引き起こす、血管表面積を制限できる。

概して、肺循環への初期の損傷は、肺高血圧の急速な発現を引き起こし、それは重篤なＢＰＤの罹患及び死亡率に著しく寄与する。いくつかの実施形態で、高い死亡率は、長期にわたる人工呼吸補助を必要とするＢＰＤ及び肺高血圧症に罹患した乳児で発生する。いくつかの実施形態で、肺高血圧症はより進行したＢＰＤのマーカーであり、高ＰＶＲも、右心室機能の不良、心拍出量の障害、酸素供給の制限、肺水腫の増大、及びおそらくは突然死のより大きなリスクを生じさせる。いくつかの実施形態では、ＢＰＤの肺循環の生理的異常は、急性低酸素への著しい血管収縮反応によって明示されるように、高ＰＶＲ及び異常な血管反応性を含む。いくつかの実施形態で、軽度の低酸素でさえ、肺高血圧症の適度の基底レベルを有する乳児における、肺動脈圧の著しい上昇をもたらす。いくつかの実施形態で、９２〜９４％超の酸素飽和の治療レベルは、肺動脈圧を効果的に下げる。いくつかの実施形態で、肺動脈圧を下げる、または肺血管構造への損傷を制限する方法は、ＢＰＤのその後の肺高血圧の発症を制限できる。

結局、肺高血圧及び右心機能は、ＢＰＤに罹患した乳児の主要な臨床的懸念材料のままである。いくつかの実施形態で、ＢＰＤの肺血管疾患は、増殖の障害により減少した肺動脈密度を含み、それはガス交換の障害の生理的異常及びＢＰＤの実際の病因に寄与する。いくつかの実施形態で、血管新生の障害は、肺胞形成を妨害し、ならびにＢＰＤの予防に治療的方法を提供する内皮細胞生存、増殖及び機能を保存かつ強化する方法を妨害する。

ＢＰＤにおける血管新生因子のシグナル伝達の変化
複数の増殖因子及びシグナル伝達系は、通常の肺血管の発達において重要な役割を果たす。いくつかの実施形態で、早産、ならびに酸素分圧、炎症性サイトカイン及び他の信号の変化は、通常の増殖因子発現及びシグナル伝達、ならびにしたがって肺／肺の血管発生を変える。いくつかの実施形態では、増殖因子はＶＥＧＦである。ＶＥＧＦシグナル伝達障害は、臨床現場のＢＰＤの病因と関連づけられてきた。いくつかの実施形態で、ＶＥＧＦは、ＢＰＤをその後発症する早産の新生児からの気管体液試料において、慢性肺疾患を発症しない者より低いことが判明している（１８５）。いくつかの実施形態では、過酸素症は、肺ＶＥＧＦ発現を下方制御し、ＶＥＧＦシグナル伝達の薬理学的阻害は肺血管の発達を損なって、肺胞形成を阻害する。血管発達の減少及び肺胞形成の障害をもたらす、ＶＥＧＦシグナル伝達障害における生物学的基盤は、十分に確立されている。

血管の発達及び肺胞形成
上述のとおり、気道と血管の間の発達の密接な連携は、通常の肺発生にとって重要である。いくつかの実施形態で、肺の成長の臨界期（嚢状または肺胞発生段階）中の肺の血管発達の不全は、中隔形成を低下させて、最終的にＢＰＤを特徴づける肺形成不全に寄与する。いくつかの実施形態で、血管新生は、肺発生中、肺胞形成に関与しており、肺血管の発達を損傷かつ阻害するメカニズムは、早産後の肺胞の成長を妨害し得る。いくつかの実施形態において、出生後の肺の成長の臨界期中の肺血管の発達の阻害は、肺胞形成を損なう。

Ｆｌｔ−１受容体
血管内皮増殖因子受容体１としても既知のＦｌｔ−１受容体は、ＦＬＴ１遺伝子によってコードされる受容体である。シグナルグリコプロテインの血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の群は、胚形成及び生後の発育中、血管新生の強力なプロモータとして作用する。具体的には、ＶＥＧＦ−ＡリガンドとＶＥＧＦ受容体の結合は、血管透過性を促進して、更に内皮細胞の遊走、増殖及び生存を惹起することを示しており、新しく形成された内皮細胞は、新しい脈管構造の基本構造を提供する。血管新生のためのドミナントＶＥＧＦシグナル分子（ＶＥＧＦ−Ａ）は、ＶＥＧＦ受容体−１（ＶＥＧＦＲ−１、別名Ｆｌｔ−１）及びＶＥＧＦ受容体−２（ＶＥＧＦＲ−２、別名Ｆｌｋ−１）を通してその信号を仲介する。Ｆｌｔ−１（ｓＦｌｔ−１）の可溶性形態も存在するが、細胞内シグナル伝達ドメインを欠いており、したがってＶＥＧＦ−Ａまたはそれに結合する他のリガンドを隔離することにより制御能力で役割を果たすだけであると考えられている。細胞内シグナル伝達経路に連結されていないＦｌｔ−１結合部位を含有するｓＦｌｔ−１及び他の分子は「おとり受容体」と呼ばれる。Ｆｌｔ−１及びＦｌｋ−１受容体は細胞外ＶＥＧＦ−Ａ結合ドメイン及び細胞内チロシンキナーゼドメインを含有し、両方とも血管芽細胞及び内皮細胞系譜の発達段階及び組織再生中に、発現を示す。Ｆｌｔ−１は、Ｆｌｋ−１と比較してＶＥＧＦ−Ａ（Ｋｄ約２〜１０ｐＭ）について約１０倍超の結合親和性を有するが、より弱いチロシンキナーゼドメインは、ＶＥＧＦ−ＡのＦｌｔ−１への結合後の血管新生シグナル伝達がＦｌｋ−１シグナルに比べて比較的弱いことを示す。したがってホモ接合型Ｆｌｔ−１遺伝子ノックアウトマウスは、内皮細胞過剰産生及び血管組織崩壊から胎児期で死ぬ。逆に、ホモ接合型Ｆｌｋ−１遺伝子ノックアウトマウスは、胚形成中の卵黄嚢血島形成の不足のため、器質化血管の発現の障害が原因で死ぬ。Ｆｌｔ−１及びＦｌｋ−１受容体の両方は正常な発育のために必要とされている。しかし、ＶＥＧＦ−Ａ濃度の選択的増大は、Ｆｌｋ−１受容体へのより大きな結合を可能にさせることができ、毛細血管密度を上昇させて、線維症及び炎症の減少、ならびにＢＰＤと関連した症状及び特徴の緩和を容易にする、血管新生促進効果を誘発できる。

本明細書で使用する場合「Ｆｌｔ−１受容体」という用語は、可溶性及び膜結合性の両方のＦｌｔ−１受容体またはその機能的断片を指す。

抗Ｆｌｔ−１抗体
本明細書で使用する場合「抗Ｆｌｔ−１抗体」という用語は、Ｆｌｔ−１受容体（例えば、可溶性または膜結合性Ｆｌｔ−１受容体）に結合する任意の抗体またはその抗原結合断片を指す。いくつかの実施形態において、高親和性でＦｌｔ−１受容体に結合する抗Ｆｌｔ−１抗体を作成する。理論に束縛されるものではないが、抗Ｆｌｔ−１抗体のＦｌｔ−１受容体への結合は、１つ以上の内在性リガンドがＦｌｔ−１に結合するのを阻害して、それによってより大量の利用可能なリガンドが、Ｆｌｋ−１受容体などの他のＶＥＧＦ受容体と関連するのを可能にすると考えられている。Ｆｌｋ−１受容体の増大した活性化は、毛細血管密度を上昇させて、線維症及び炎症の減少、ならびにＢＰＤと関連した症状及び特徴の緩和を容易にすることができた。いくつかの実施形態では、抗体のＦｌｔ−１受容体への結合は、他のＶＥＧＦ受容体に結合できるＶＥＧＦの量を増加させる。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、表１に提供する配列を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９〜配列番号２１のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２２〜配列番号２４のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ２、配列番号２５〜配列番号３４のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ３、配列番号１〜配列番号４のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＨ鎖ＣＤＲ１、配列番号５〜配列番号１４のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１５〜配列番号１８のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ３からなる群から選択される、１つ以上の相補的決定領域（ＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号１５ではない。いくつかの実施形態では、ＶＬ ＣＤＲ３は配列番号２５ではない。

いくつかの実施形態において、１つ以上のＣＤＲは、配列番号２５〜配列番号３４のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ３、及び配列番号１５〜配列番号１８のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号１５ではない。いくつかの実施形態では、ＶＬ ＣＤＲ３は配列番号２５ではない。

いくつかの実施形態において、１つ以上のＣＤＲは、配列番号１９〜配列番号２１のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２２〜配列番号２４のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２５〜配列番号３４のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ ＣＤＲ３は配列番号２５ではない。

いくつかの実施形態において、１つ以上のＣＤＲは、配列番号１〜配列番号４のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号５〜配列番号１４のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１５〜配列番号１８のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号１５ではない。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号１９、配列番号２２及び配列番号２５のアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２ならびにＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬ鎖を含む。別の実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号２０、配列番号２３及び配列番号２５のアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２ならびにＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬ鎖を含む。更に別の実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号２１及び配列番号２４のアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ１ならびにＶＬ ＣＤＲ２、ならびに配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３または配列番号３４のアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬ鎖を含む。特定の実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２１のアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３２のアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬ鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ ＣＤＲ３は配列番号２５ではない。

別の実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号１、配列番号５及び配列番号１５のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２ならびにＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨ鎖を含む。別の実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号２、配列番号６及び配列番号１６のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２ならびにＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨ鎖を含む。別の実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号２、配列番号１０及び配列番号１８のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２ならびにＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨ鎖を含む。別の実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号２及び配列番号１７のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ１ならびにＶＨ ＣＤＲ３、ならびに配列番号７、配列番号８、配列番号１３または配列番号１４のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ２を含む、ＶＨ鎖を含む。別の実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号３及び配列番号１７のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ１ならびにＶＨ ＣＤＲ３、ならびに配列番号９、配列番号１１または配列番号１２のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ２を含む、ＶＨ鎖を含む。別の実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号４、配列番号９及び配列番号１７のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２ならびにＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨ鎖を含む。特定の実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１７のアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨ鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ３は配列番号１５ではない。

別の実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４９〜配列番号６１のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖ＶＬ領域、及び／または配列番号３５〜配列番号４８のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖ＶＨ領域を含む。特定の実施形態において、ＶＬ領域は配列番号６０のアミノ酸配列を含み、及びＶＨ領域は配列番号４５のアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号８７〜配列番号８９のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖定常領域を更に含む。いくつかの実施形態では、軽鎖ＶＬ領域は配列番号４９ではない。いくつかの実施形態では、重鎖ＶＨ領域は配列番号３５ではない。

別の実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７５〜配列番号８６のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び／または配列番号６２〜配列番号７４のいずれか一つに少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態において、軽鎖は配列番号７６のアミノ酸配列を含み、及び重鎖領域は配列番号７１のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の重鎖は、アミノ酸配列
ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳＥＬＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＳＡＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＷＳＧＤＳＴＹＹＡＥＳＶＫＧＲＦＴＩＦＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＷＡＴＰＩＥＳＬＹＹＹＧＳＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＸ（配列番号１０８）を含む。いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の重鎖は、アミノ酸配列
ＥＬＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＳＡＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＷＳＧＤＳＴＹＹＡＥＳＶＫＧＲＦＴＩＦＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＷＡＴＰＩＥＳＬＹＹＹＧＳＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０９）を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の重鎖は、アミノ酸配列
ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳＳＹＥＬＴＱＰＬＳＶＳＶＡＬＲＱＡＡＫＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＱＴＡＱＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＡＮＮＲＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＡＱＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＡＳＴＱＡＩＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＸ（配列番号１１０）を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０８または配列番号１０９の重鎖、及び配列番号１１０または配列番号７６の軽鎖を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、約１０^−７Ｍ超、約０．５×１０^−７Ｍ超、約１０^−８Ｍ超、約０．５×１０^−８Ｍ超、約１０^−９Ｍ超、約０．５×１０^−９Ｍ超、約１０^−１０Ｍ超、約０．５×１０^−１０Ｍ超、約１０^−１１Ｍ超、約０．５×１０^−１１Ｍ超、約１０^−１２Ｍ超、または約０．５×１０^−１２Ｍ超の親和性でヒトＦｌｔ−１と結合する。他の実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、約１０^−７Ｍ超、約０．５×１０^−７Ｍ超、約１０^−８Ｍ超、約０．５×１０^−８Ｍ超、約１０^−９Ｍ超、約０．５×１０^−９Ｍ超、約１０^−１０Ｍ超、約０．５×１０^−１０Ｍ超、約１０^−１１Ｍ超、約０．５×１０^−１１Ｍ超、約１０^−１２Ｍ超、または約０．５×１０^−１２Ｍ超の親和性でマウスＦｌｔ−１と結合する。Ｆｌｔ−１抗体の親和性は、例えばＢＩＡＣＯＲＥアッセイなどの表面プラズモン共鳴アッセイで測定することができる。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＦｌｔ−１との競合アッセイにおいて、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約２５ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約５ｐＭ未満または約１ｐＭ未満のＩＣ_５０を特徴とする。いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、マウスＦｌｔ−１との競合アッセイにおいて、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約２５ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約５ｐＭ未満または約１ｐＭ未満のＩＣ_５０を特徴とする。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、Ｆｌｔ−１受容体でのＶＥＧＦの結合及び／または活動を阻害する。いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、競合アッセイにおけるＶＥＧＦのヒトＦｌｔ−１との結合の阻害に関して、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約２５ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約５ｐＭ未満または約１ｐＭ未満のＩＣ_５０を特徴とする。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、可溶性Ｆｌｔ−１に対するＶＥＧＦの結合と競合する及び／またはそれを阻害する。他の実施形態において、前記競合及び／または阻害は、用量依存的である。特定の実施形態において、Ｆｌｔ−１に対するＶＥＧＦの結合の阻害は、ＶＥＧＦ Ｒ２の増大したリン酸化をもたらす。理論に束縛されるものではないが、Ｆｌｔ−１に対する抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の結合は、Ｆｌｔ−１に対するＶＥＧＦの結合を阻害する。結合しなかったＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ Ｒ２に結合し、これはＶＥＧＦ Ｒ２のリン酸化を測定することによって示され得る。特定の実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、用量依存的にＶＥＧＦ Ｒ２のリン酸化を救済する。例えばＶＥＧＦ Ｒ２のリン酸化は、少なくとも約１００％、約９５％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％または約５％救済され得る。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、バイオアッセイにおいて、約９５％超、約９０％超、約８５％超、約８０％超、約７５％超、約７０％超、約６５％超、約６０％超、約５５％超、約５０％超、約４５％超、約４０％超、約３５％超、約３０％超、約２５％超、約２０％超、約１５％超または約１０％超の救済を提供する。特定の実施形態において、前記バイオアッセイは、ｓＦｌｔ−１及び抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の存在下で、ＶＥＧＦによって刺激されるヒト主要静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を含む。細胞のＶＥＧＦ誘発性活性化は、ＶＥＧＦ Ｒ２受容体のリン酸化状態を判定することによって試験できる。データは、ｓＦｌｔ−１のみの存在下で（例えば、抗Ｆｌｔ−１抗体なしで）、ＶＥＧＦ Ｒ２受容体のリン酸化に対して、ＶＥＧＦ Ｒ２受容体のリン酸化の救済％として表され得る。

いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、約２００時間超、約１５０時間超、約１００時間超、約９５時間超、約９０時間超、約８５時間超、約８０時間超、約７５時間超、約７０時間超、約６５時間超、約６０時間超、約５５時間超、約５０時間超または約４５時間超、及びその範囲の半減期を有する。いくつかの実施形態では、半減期はマウスで測定される。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、約４００ｕｇ／ｍＬ超、３７５ｕｇ／ｍＬ超、約３５０ｕｇ／ｍＬ超、約３２５ｕｇ／ｍＬ超、約３００ｕｇ／ｍＬ超、約２７５ｕｇ／ｍＬ超、約２５０ｕｇ／ｍＬ超、約２２５ｕｇ／ｍＬ超、約２００ｕｇ／ｍＬ超、約１７５ｕｇ／ｍＬ超、約１５０ｕｇ／ｍＬ超、約１２５ｕｇ／ｍＬ超、約１００ｕｇ／ｍＬ超、約７５ｕｇ／ｍＬ超または約５０ｕｇ／ｍＬ超、及びその範囲の最大血清中濃度を有する。いくつかの実施形態において、最大血清中濃度はマウスで測定される。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は選択的にＦｌｔ−１に結合して、他のＶＥＧＦ受容体には最小の結合を有する、またはその結合は強くはない。いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は選択的にＦｌｔ−１に結合して、ＶＥＧＦＲ２（Ｆｌｋ−１）及び／またはＶＥＧＦＲ３（Ｆｌｔ−４）には最小の結合を有する、またはその結合は強くはない。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＦｌｔ−１に結合するとき、約１×１０^−３Ｍ^−１秒^−１超、約１×１０^−４Ｍ^−１秒^−１超、約１×１０^−５Ｍ^−１秒^−１超、約１×１０^−６Ｍ^−１秒^−１超、または約１×１０^−７Ｍ^−１秒^−１超のｋａを有する。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＦｌｔ−１に結合するとき、約１×１０^−３秒^−１超、約１×１０^−４秒^−１超、約１×１０^−５秒^−１超、または約１×１０^−６秒^−１超のｋｄを有する。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＦｌｔ−１に結合するとき、約１×１０^−８Ｍ超、約１×１０^−９Ｍ超、約１×１０^−１０Ｍ超、約１×１０^−１１Ｍ超、または約１×１０^−１２Ｍ超のＫ_Ｄを有する。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、可溶性Ｆｌｔ−１に結合する。特定の実施形態において、前記結合は投与量に依存しており、抗体またはその抗原結合断片の濃度が高ければ、より大量の可溶性Ｆｌｔ−１に結合する。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、約９９％超、約９８％超、約９７％超、約９６％超、約９５％超、約９４％超、約９３％超、約９２％超、約９１％超、約９０％超または約８０％超のヒト識別％を有する。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、約９９％超、約９８％超、約９７％超、約９６％超、約９５％超、約９４％超、約９３％超、約９２％超、約９１％超、約９０％超または約８０％超のヒト相同性％を有する。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、Ｆｌｔ−１タンパク質に結合する。いくつかの実施形態では、Ｆｌｔ−１タンパク質は組換えタンパク質、例えば組換えｓＦｌｔ−１である。特定の実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＦｌｔ−１アイソフォーム１（ＮＰ＿００２０１０．２ ＧＩ：１５６１０４８７６、配列番号９０）に結合する（表２）。別の実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＦｌｔ−１アイソフォームＸ１（ＸＰ＿０１１５３３３１６．１ ＧＩ：７６７９７７５１１、配列番号９１）に結合する。別の実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＦｌｔ−１アイソフォーム２前駆体（ＮＰ＿００１１５３３９２．１ ＧＩ：２２９８９２２２０、配列番号９２）に結合する。更に別の実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＦｌｔ−１アイソフォーム３前駆体（ＮＰ＿００１１５３５０２．１ ＧＩ：２２９８９２３００、配列番号９３）に結合する。別の実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＦｌｔ−１アイソフォーム４前駆体（ＮＰ＿００１１５３５０３．１ ＧＩ：２２９８９２３０２、配列番号９４）に結合する。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、Ｆｌｔ−１タンパク質の特定のエピトープに結合する。例えば抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合部分は、表２に示すようにアミノ酸配列に結合する。

いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片のｉｎ ｖｉｖｏ投与は、少なくとも約７００ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約６５０ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約６００ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約５５０ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約４５０ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約３５０ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｕｇ、少なくとも約５０ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約４０ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｕｇ／ｍＬまたは少なくとも約５ｕｇ／ｍＬ、及びその範囲の最高血清中抗体濃度になる。いくつかの実施形態では、最高血清中抗体濃度は投与量に依存している。

いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片のｉｎ ｖｉｖｏ投与は、少なくとも約４５０ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約３５０ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｕｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｕｇ／ｍＬまたは少なくとも約２５ｕｇ／ｍＬ、及びその範囲の最低血清中抗体濃度になる。いくつかの実施形態では、最低血清中抗体濃度は投与量に依存している。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片のｉｎ ｖｉｖｏ投与は、ベースライン濃度と比較して、または溶媒のみを投与した対象の濃度と比較して、可溶性Ｆｌｔ−１の減少した血清中濃度になる。通常ベースライン濃度は、投与の直前に測定される。いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の投与は、投与直前の可溶性Ｆｌｔ−１のベースライン血清中濃度と比較して、少なくとも約９５％、約９０％、約８０％、約７０％、約６０％、約５０％、約４０％、約３０％、約２０％または約１０％の可溶性Ｆｌｔ−１の減少した血清中濃度になる。いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の投与は、約４０００ｐｇ／ｍＬ未満、約３５００ｐｇ／ｍＬ、約３０００ｐｇ／ｍＬ、約２５００ｐｇ／ｍＬ、約２０００ｐｇ／ｍＬ、約１７５０ｐｇ／ｍＬ、約１５００ｐｇ／ｍＬ、約１２５０ｐｇ／ｍＬ、約１０００ｐｇ／ｍＬ、約９００ｐｇ／ｍＬ、約８００ｐｇ／ｍＬ、約７００ｐｇ／ｍＬ、約６００ｐｇ／ｍＬ、約５００ｐｇ／ｍＬ、約４５０ｐｇ／ｍＬ、約４００ｐｇ／ｍＬ、約３５０ｐｇ／ｍＬ、約３００ｐｇ／ｍＬ、約２５０ｐｇ／ｍＬ、約２００ｐｇ／ｍＬ、約１５０ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬまたは約１０ｐｇ／ｍＬ、及びその範囲の可溶性Ｆｌｔ−１の減少した血清中濃度になる。いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の投与は、抗体またはその抗原結合断片を投与されない対象の可溶性Ｆｌｔ−１の血清中濃度と比較して、可溶性Ｆｌｔ−１の減少した血清中濃度になる。いくつかの実施形態では、可溶性Ｆｌｔ−１の減少した血清中濃度は、投与量に依存している。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片のｉｎ ｖｉｖｏ投与は、ベースライン濃度と比較して、または溶媒のみを投与した対象の濃度と比較して、ＶＥＧＦの増加した血清中濃度になる。通常ベースライン濃度は、治療の直前に測定される。いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の投与は、投与直前のＶＥＧＦのベースライン血清中濃度と比較して、少なくとも約９５％、約９０％、約８０％、約７０％、約６０％、約５０％、約４０％、約３０％、約２０％または約１０％のＶＥＧＦの増加した血清中濃度になる。いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の投与は、約５００ｐｇ／ｍＬ超、約４５０ｐｇ／ｍＬ、約４００ｐｇ／ｍＬ、約３５０ｐｇ／ｍＬ、約３００ｐｇ／ｍＬ、約２５０ｐｇ／ｍＬ、約２００ｐｇ／ｍＬ、約１５０ｐｇ／ｍＬ、約１００ｐｇ／ｍＬ、約５０ｐｇ／ｍＬまたは約２５ｐｇ／ｍＬ、及びその範囲のＶＥＧＦの増加した血清中濃度になる。いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の投与は、治療していない対象のＶＥＧＦの血清中濃度と比較して、ＶＥＧＦの増加した血清中濃度になる。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦの増加した血清中濃度は、投与量に依存している。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片のｉｎ ｖｉｖｏ投与は、肺組織の増加した血管新生になる。いくつかの実施形態では、増加した血管新生は、内皮細胞マーカー、例えばＣＤ３１の増大したＣＤ３１染色によって示される。いくつかの実施形態では、増大した染色は、例えば抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片を投与したラットの肺組織のＣＤ３１陽性領域％を測定することによって測定できる。例えば、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片を投与したラットの肺組織のＣＤ３１陽性領域％は、全組織領域の少なくとも約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１．０％、約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、約２．０％、約２．１％、約２．２％、約２．３％、約２．４％または約２．５％であり得る。特定の実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体を投与したラットの肺組織のＣＤ３１陽性領域％は、アイソタイプ対照抗体を投与したラットの肺組織のＣＤ３１陽性領域％より著しく高いことがあり得る。

いくつかの実施形態では、内皮細胞マーカーの増大した染色は、例えば抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片を投与したラットの肺組織の正規化ＣＤ３１陽性パーセントを測定することによって測定できる。特定の実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片を投与したラットの肺組織の増加したＣＤ３１染色は、アイソタイプ対照抗体を投与したラットの肺組織で測定したＣＤ３１染色と比較したものである。例えば、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片を投与したマウスの肺組織の正規化ＣＤ３１陽性％は、少なくとも約２００％、約１９０％、約１８０％、約１７０％、約１６０％、約１５０％、約１４０％、約１３０％、約１２０％または約１１０％であり得る。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、選択的にヒトＦｌｔ−１に結合して、他の哺乳動物のＦｌｔ−１受容体には最小の結合を有する、またはその結合は強くはない（例えば、１０^−７Ｍまたは１０^−６Ｍ未満の結合親和性で）。いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は選択的にヒトＦｌｔ−１に結合して、サルＦｌｔ−１に結合しない。いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は選択的にヒトＦｌｔ−１に結合して、マウスＦｌｔ−１に結合しない。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＦｌｔ−１及びサルＦｌｔ−１に結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、カニクイザルＦｌｔ−１に結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＦｌｔ−１及びマウスＦｌｔ−１に結合する。

いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ）_２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、ＳｃＦｖ、二重特異性抗体、三重特異性抗体及び四重特異性抗体からなる群から選択される。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧである。いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧ１である。

遺伝子操作した定常領域
いくつかの実施形態では、好適な抗Ｆｌｔ−１抗体は、ＦｃＲｎ受容体に結合するＦｃドメインまたはその一部分を含有する。非限定的な例として、好適なＦｃドメインは、ＩｇＧなどの免疫グロブリンサブクラス由来であり得る。いくつかの実施形態では、好適なＦｃドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４由来である。特に好適なＦｃドメインは、ヒトまたはヒト化抗体由来のものを含む。

ＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体の間の改善された結合は、長期の血清半減期をもたらすことが企図される。したがって、いくつかの実施形態では、好適なＦｃドメイン（配列番号１０４）は、ＦｃＲｎへの結合の改善に導く１つ以上のアミノ酸突然変異を含む。ＦｃＲｎへの結合の改善をもたらすＦｃドメイン内の種々の突然変異は当該技術分野において周知であり、本発明の実施に適応することができる。いくつかの実施形態において、好適なＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１のＬｅｕ２３４、Ｌｅｕ２３５、Ｇｌｙ２３７、Ｔｈｒ２５０、Ｍｅｔ２５２、Ｓｅｒ２５４、Ｔｈｒ２５６、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｕ３８０、Ｍｅｔ４２８、Ｈｉｓ４３３及び／またはＡｓｎ４３４に対応する１つ以上の位置において１つ以上の突然変異を含む。

Ｆｃドメインのいくつかの突然変異は、ＩｇＧとＦｃＲｎ受容体の結合の減少をもたらして、それによってエフェクター機能を阻害する。いくつかの実施形態において、好適なＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１のＬｅｕ２３４、Ｌｅｕ２３５及びＧｌｙ２３７に対応する１つ以上の位置において１つ以上の突然変異を含む。特定の実施形態において、Ｌｅｕ２３４はＡｌａに変異する。別の実施形態では、Ｌｅｕ２３５はＡｌａに変異する。更に別の実施形態では、Ｇｌｙ２３７はＡｌａに変異する。

いくつかの実施形態において、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片はスペーサーを含有する、及び／または別の実体に連結する。いくつかの実施形態において、リンカーまたはスペーサーは、

（配列番号１０５）（ＧＡＧリンカー）に少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）同一の配列を含む。いくつかの実施形態において、リンカーまたはスペーサーは、

（配列番号１０６）（ＧＡＧ２リンカー）に少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）同一の配列を含む。いくつかの実施形態において、リンカーまたはスペーサーは、

（配列番号１０７）（ＧＡＧ３リンカー）に少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）同一の配列を含む。

抗Ｆｌｔ−１抗体及び抗原結合断片の作成
本発明の好適な組換え抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片は、任意の利用可能な方法によって産生されることができる。例えば組換え抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片は、組換え抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片をコードする核酸を発現するよう操作された宿主細胞系を利用することによって組換え的に産生され得る。

したがって本発明は、本明細書に記載の種々のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を更に提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体重鎖または軽鎖アミノ酸配列、例えば配列番号６２〜８６または配列番号１０８〜１１０のいずれか一つをコードするポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体重鎖または軽鎖、例えば配列番号３５〜６１のいずれか一つの可変領域をコードするポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体重鎖または軽鎖、例えば配列番号１〜３４のいずれか一つのＣＤＲ領域をコードするポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、抗Ｆｌｔ−１抗体、例えば配列番号８７〜８９のいずれか一つの定常領域をコードするポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体、例えば配列番号１０４のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体、例えば配列番号１０５〜１０７のリンカーをコードするポリヌクレオチド配列を提供する。

いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体重鎖、軽鎖、可変領域、ＣＤＲ領域、Ｆｃ領域またはリンカー領域をコードするポリヌクレオチド配列は、シグナルペプチドをコードする配列を更に含む。非限定的な例として、好適なシグナルペプチドは、アミノ酸配列ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳ（配列番号１１１）を含む。

本明細書に記載の種々のポリヌクレオチド配列は、組換え抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の発現において種々のベクター系で具現化され得る。

抗体が組換え的に産生される場合、任意の発現系を使用することができる。少しではあるが例を挙げれば、既知の発現系は、例えば卵子、バキュロウイルス、植物、酵母または哺乳動物細胞を含む。

いくつかの実施形態では、本発明に好適な組換え抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片は、哺乳動物細胞中で産生される。本発明に従って使用できる哺乳動物細胞の非限定例は、ＢＡＬＢ／ｃマウス骨髄腫株（ＮＳＯ／ｌ、ＥＣＡＣＣ番号：８５１１０５０３）、ヒト網膜芽細胞（ＰＥＲ．Ｃ６、ＣｒｕＣｅｌｌ、Ｌｅｉｄｅｎ、Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、及びＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ヒト細胞から産生される組換え抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＨＯ細胞から産生される抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片を提供する。

本発明の抗体を含有する医薬品組成物
本発明は、本発明に従った治療的活性成分（例えば、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片）と共に１つ以上の薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、医薬組成物を更に提供する。このような医薬組成物は所望により、１つ以上の追加の治療的活性物質を含むことができる。

本明細書にて提供される医薬組成物の説明は、ヒトへの倫理的投与に好適な医薬組成物を主に目的としているが、このような組成物が一般的に、あらゆる種類の動物への投与に適していることは当業者なら理解するであろう。組成物を種々の動物への投与に好適にするため、ヒトへの投与に好適な医薬組成物の改変は十分に理解されており、通常の知識を有する獣医薬理学者はもし必要ならば、このような改変を単に通常の実験で設計及び／または実施することができる。

本明細書に記載の医薬組成物の製剤は、薬理学の当該技術分野において周知または以後開発された任意の方法により調製され得る。広くはこのような調製法は、希釈剤または別の賦形剤もしくは担体及び／または１つ以上の他の補助成分と、活性成分を調和させるステップ、次いで必要に応じて及び／または望ましくは、生成物を所望の単回投与単位または多回投与単位に成形及び／または包装するステップを含む。

本発明に従う医薬組成物は、バルク状態で、単回単位用量及び／または複数の単回単位用量として調製、包装及び／または販売され得る。本明細書で使用する場合「単位用量」は、所定量の活性成分を含む医薬組成物の個々の量である。活性成分の量は一般的には、対象に投与されるであろう活性成分の用量、及び／またはこのような用量の都合の良い分量、例えばこのような用量の１／２もしくは１／３に等しい。

本発明による医薬組成物における活性成分、薬学的に許容される賦形剤または担体及び／または任意の追加成分の相対量は、処置される対象の同一性、大きさ及び／または病態に応じて、ならびに組成物が投与される経路に応じて変動する。例として前記組成物は、０．１％と１００％（ｗ／ｗ）の間で活性成分を含み得る。

医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤または担体を追加的に含むことができ、それは本明細書で使用する場合、所望の特定の投与剤形に適するように、あらゆる溶媒、分散媒、希釈剤または他の液体溶媒、分散または懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、保存剤、固体結合剤、滑沢剤などを含む。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１^ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６、参照により本明細書に組み込まれる）に、医薬組成物を配合するのに使用される種々の賦形剤及びそれを調製するための周知の技術が開示されている。例えば任意の望ましくない生物学的効果を生じることにより、またはそれ以外に有害な方法で医薬組成物の任意の他の成分（複数可）と相互作用することにより、任意の従来の賦形剤媒体または担体が、物質またはその誘導体と不適合である場合を除いて、その使用は本発明の範囲内にあることが企図される。

いくつかの実施形態において、薬学的に許容される賦形剤または担体は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％純粋である。いくつかの実施形態において、賦形剤または担体は、ヒトに対して使用するために、及び獣医学使用のために承認される。いくつかの実施形態において、賦形剤または担体は、米国食品医薬品局に承認される。いくつかの実施形態において、賦形剤及び担体は医薬品グレードである。いくつかの実施形態において、賦形剤または担体は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方及び／または国際薬局方の基準を満たす。

医薬品組成物の製造に使用する薬学的に許容される賦形剤または担体は、不活性希釈剤、分散剤及び／または造粒剤、界面活性剤及び／または乳化剤、崩壊剤、結合剤、防腐剤、緩衝剤、滑沢剤及び／または油を含むが、これらに限定されない。このような賦形剤または担体は所望により、医薬組成物に含まれることができる。賦形剤または担体（例えばカカオバター及び座剤用ワックス、着色剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤及び／または香料）は、配合者の判断に従って組成物中に存在できる。

好適な薬学的に許容される賦形剤または担体には、水、塩溶液（例えばＮａＣｌ）、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、アルコール、グリセロール、エタノール、アラビアゴム、植物油、ベンジルアルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、炭水化物（例えばラクトース、アミロースまたはデンプン）、糖類（例えばマンニトール、スクロースなど）、デキストロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、芳香油、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなど、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。医薬品は所望する場合、活性化合物と有害に反応しない、またはその活性を妨げない補助剤（例えば、滑沢剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響する塩、緩衝剤、着色剤、香味剤及び／または芳香物質など）と混合することができる。好ましい実施形態において、静脈内投与に好適な水溶性担体が使用される。

好適な医薬組成物または薬剤は所望する場合、少量の湿潤剤または乳化剤またはｐＨ緩衝剤も含有できる。組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、丸剤、カプセル、徐放性製剤、または粉剤であり得る。組成物は、トリグリセリドなどの従来の結合剤または担体と共に座剤として調製することもできる。経口製剤は、例えば医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準担体を含むことができる。

医薬組成物または薬剤は、ヒトに投与するのに適合した医薬組成物として常法に従って製剤化することができる。例えばいくつかの実施形態において、静脈内投与用の組成物は通常、無菌の等張性緩衝剤の水溶液である。必要に応じて組成物は更に、可溶化剤及び局所麻酔剤を含んで注射の部位で痛みを緩和し得る。一般的に成分は、別途に供給される、または例えば活性剤の量を示すアンプルもしくはサシェなどの気密封止した容器にて凍結乾燥粉末もしくは水を含まない濃縮物として、単位投与形態で一緒に混合される。組成物が注入により投与される場合、無菌の医薬品グレードの水、生理食塩水またはデキストロース／水を含有する輸液瓶でそれを調剤することができる。組成物が注射で投与される場合、投与する前に成分が混合され得るように無菌の注射用水または生理食塩水のアンプルを提供することができる。

医薬品の配合及び／または製造の一般的事項は、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２１^ｓｔ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５に見出すことができる（参照により本明細書に組み込まれる）。

投与経路
本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片（または本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体もしくは抗原結合断片を含有する組成物もしくは薬剤）は、任意の適切な経路によって投与される。いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体もしくは抗原結合断片タンパク質、またはこれを含有する医薬組成物は、非経口的に投与される。非経口投与は、静脈内投与、皮内投与、髄腔内投与、吸入投与、経皮（局所）投与、眼球内投与、筋肉内投与、皮下投与、筋肉内投与及び／または経粘膜投与であり得る。いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体もしくは抗原結合断片、またはこれを含有する医薬組成物は、皮下に投与される。本明細書で使用する場合「皮下組織」という用語は、皮膚のすぐ下の疎性の不規則な結合組織の層として定義される。例えば皮下投与は、大腿部、腹部、臀部または肩甲骨部を含む領域内に組成物を注射することによって実施することができるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体もしくはその抗原結合断片、またはこれを含有する医薬組成物は、静脈内に投与される。いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体もしくはその抗原結合断片、またはこれを含有する医薬組成物は、動脈内に投与される。いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体もしくは抗原結合断片、またはこれを含有する医薬組成物は、経口投与される。所望する場合、２つ以上の経路を同時に使用することができる。

いくつかの実施形態では、投与は個体に局所的効果のみをもたらすが、他の実施形態では、個体の複数の部分にわたる効果、例えば全身的効果をもたらす。通常投与は、肺及び心臓を含む１つ以上の標的組織に、抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片の送達をもたらすが、これらに限定されない。

投与形態及び投与レジメン
いくつかの実施形態では、組成物は、特定の所望の転帰に（例えば、気管支肺異形成症などの慢性肺疾患治療するまたはそのリスクを減少させることに）相関性がある、治療に有効な量で及び／または投与レジメンに従って投与される。

本発明に従って投与される特定の投与量または量は、例えば所望の転帰の性質及び／または程度に、投与の経路及び／またはタイミングの詳細に、及び／または１つ以上の特性（例えば体重、年齢、既往歴、遺伝的特徴、生活習慣パラメータ、心臓欠陥の重症度及び／または心臓欠陥のリスクのレベルなど、またはこれらの組み合わせ）に依存して変化し得る。このような投与量または量は、当業者によって決定されることができる。いくつかの実施形態では、適切な投与量または量は標準臨床技術に従って決定される。代替的にまたは追加的に、いくつかの実施形態では、適切な投与量または量は、投与される望ましいまたは最適な投与量範囲または量を特定する助けとなるために、１つ以上のｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏアッセイの使用により決定される。

様々な実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片は、治療に有効な量で投与される。一般的に治療に有効な量は、対象にとって意味のある効果（例えば、根底にある疾患または病態を治療すること、調節すること、治癒すること、予防すること及び／または緩和すること）を達成するのに十分である。いくつかの特定の実施形態では、投与される適切な投与量または量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系由来の用量反応曲線から推定され得る。

いくつかの実施形態では、提供される組成物は、医薬製剤として提供される。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、気管支肺異形成症などの慢性肺疾患の発生率またはリスクの低下の達成に相関性がある投与レジメンに従う投与のための単位用量の量である、またはその量を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片を含む製剤は、単回投与量として投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片を含む製剤は、規則的な間隔で投与される。本明細書で使用する場合「間隔」での投与は、治療に有効な量が定期的に（１回投与量とは区別されて）投与されることを示す。間隔は、標準臨床技術によって決定され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片を含む製剤は、隔月、毎月、月２回、３週間毎、隔週、毎週、週２回、週３回、毎日、１日２回、または６時間毎に投与される。１つの個体に対する投与間隔は、一定の間隔である必要はないが、個体の必要性に応じて時間経過とともに変更することができる。

本明細書で使用する場合「隔月」という用語は２か月につき１回（すなわち２か月毎に１回）の投与を意味し、用語「毎月」は１か月につき１回の投与を意味し、用語「３週間毎」は３週間につき１回（すなわち３週間毎に１回）の投与を意味し、用語「隔週」は２週間につき１回（すなわち２週間毎に１回）の投与を意味し、用語「毎週」は１週間につき１回の投与を意味し、用語「毎日」は１日につき１回の投与を意味する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片を含む製剤は、規則的な間隔で無期限に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片を含む製剤は、規則的な間隔で所定の期間、投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片を含む製剤は、出生前に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片を含む製剤は、出生後に投与される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片を含む製剤は、約０．５ｍｇ／体重ｋｇ、約１．０ｍｇ／体重ｋｇ、約１０ｍｇ／体重ｋｇまたは約２０ｍｇ／体重ｋｇの投与量で投与される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片を含む製剤は、約０．５ｍｇ／体重ｋｇ〜約２０ｍｇ／体重ｋｇ、例えば約１ｍｇ／体重ｋｇ〜約１０ｍｇ／体重ｋｇの範囲の投与量で投与される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片を含む製剤は、約３５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７００ｍｇまたは約１４００ｍｇの単位用量で成人に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片を含む製剤は、約３５ｍｇ〜約１４００ｍｇ、例えば約７０ｍｇ〜約７００ｍｇの範囲の投与量で投与される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片を含む製剤は、約２ｍｇ、約４ｍｇ、約４０ｍｇまたは約８０ｍｇの単位用量で乳児に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片を含む製剤は、約２ｍｇ〜約８０ｍｇ、例えば約４ｍｇ〜約４０ｍｇの範囲の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の投与は、少なくとも１つのＢＰＤの徴候もしくは症状の強度、重篤度もしくは頻度を低減する、またはその発症を遅延させる。いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の投与は、肺炎症、肺の瘢痕化、肺の成長の異常、初期の肺損傷、長期の呼吸不全、肺感染症、運動不耐性、及び有害な神経学的転帰からなる群から選択される、少なくとも１つのＢＰＤの徴候もしくは症状の強度、重篤度もしくは頻度を低減する、またはその発症を遅延させる。

併用療法
いくつかの実施形態では、抗Ｆｌｔ−１抗体または抗原結合断片は、筋ジストロフィーの治療用に現在使用されている１つ以上の既知の治療薬（例えば、コルチコステロイド）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、既知の治療薬（複数可）は、その標準的なまたは承認された投与レジメン及び／またはスケジュールに従って投与される。いくつかの実施形態では、既知の治療薬（複数可）は、その標準的なまたは承認された投与レジメン及び／またはスケジュールと比較した場合、変更されているレジメンに従って投与される。いくつかの実施形態では、このような変更されたレジメンは、１つ以上の単位用量が量で変更されている（例えば、減少または増加されている）という点で、及び／または投与が頻度で変更されている点で（例えば、単位投与量間の１つ以上の間隔が広げられ、結果的により低い頻度をもたらす、または間隔が狭められ、結果的により高い頻度をもたらすという点で）、標準的なまたは承認された投与レジメンとは異なる。

実施例１。抗Ｆｌｔ−１抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ有効性
胎児の肺動脈内皮細胞の分離
肺動脈内皮細胞（ＰＡＥＣ）は、１３５日目（期間１４７日）に、妊娠後期の対照ヒツジ胎児の近位肺動脈から採取した。標準内皮マーカーによる免疫組織化学は、細胞表現型を確認する。次に低継代ＰＡＥＣ（ｐ４−５）は、単独でまたは組み合わせて、ＥＴＸ、ＶＥＧＦ、ｓＦｌｔ１または抗Ｆｌｔ１に曝露される。

ＥＴＸ、ＶＥＧＦ、ｓＦｌｔ１及び抗Ｆｌｔ１へ曝露する間のＰＡＥＣの増殖
胎児のＰＡＥＣは、１０％ＦＢＳのＤＭＥＭ中５０，０００細胞／ウェルで３連で１２ウェルプレート内に蒔かれて、２１％酸素中で一晩付着させた。翌日（０日目）、細胞をＰＢＳで２度洗浄した。次にＶＥＧＦ、ＥＴＸ、ｓＦｌｔ１または抗Ｆｌｔ１（単独でまたは組み合わせて）と共に２．５％ＦＢＳのＤＭＥＭを加えて、細胞を２１％酸素でインキュベートした。外因要素の最終濃度は、以下のとおり、ＶＥＧＦ ５０ｎｇ／ｍＬ、ＥＴＸ １ｎｇ／ｍＬ、ｓＦｌｔ１ １１４ｎｇ／ｍＬ及び抗Ｆｌｔ１ １８００ｎｇ／ｍＬである。実験用培地は毎日交換されて、細胞は０．２５％トリプシンで細胞を除去した後、３日目に計数され、細胞計数器（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ、ＣＡ）で計数された。治療による増殖試験を２．５％ＦＢＳのＤＭＥＭ中で実施し、これがいくつかの増殖により胎児のＰＡＥＣ生存を援助する最低血清中濃度であると結論づけた以前の研究に基づく。

ＰＡＥＣ管形成アッセイ
ｉｎ ｖｉｔｒｏ血管新生アッセイのために、０．２％フラビンモノヌクレオチド及びＵＶ Ｓｔｒａｔａｌｉｎｋｅｒ １８００（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用して、ラット尾部コラーゲンを架橋した。ＥＴＸ、ＶＥＧＦ、ｓＦｌｔ１及び抗Ｆｌｔ１（単独でまたは組み合わせて）を補充した無血清ＤＭＥＭ培地中に５０，０００細胞／ウェルを加えて、各条件をそれぞれの動物について３連で試験する。次に、管形成が２１％酸素と比較して３％でより強力であると結論づけた以前の研究に基づいて、ＰＡＥＣを３％酸素条件下で１２〜１８時間インキュベートする。分岐点計数を、ウェル当たり３〜４つの視野で、３つのウェルのそれぞれから１０倍率で盲検的に実施する。ウェルを、Ｏｌｙｍｐｕｓ ＩＸ７１蛍光顕微鏡を使用して撮影する。

統計解析
統計解析を、Ｐｒｉｓｍソフトウェアパッケージ（ｖ．５．０ａ、ＧｒａｐｈＰａｄ）で実施する。Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ事後分析とともに、反復測定一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を実施する。Ｐ値０．０５未満は、有意であるとみなされる。

ｓＦＬＴに曝露したＰＡＥＣに対する、抗Ｆｌｔ−１抗体の投与
組換えヒトＶＥＧＦ（５０ｎｇ／ｍＬ）、組換えヒト可溶性Ｆｌｔ−１（ｓＦＬＴ、１１４ｎｇ／ｍＬ）またはヒト可溶性Ｆｌｔ−１の抗体（ａ−ｓＦＬＴ、１８００ｎｇ／ｍＬ）を単独でまたは組み合わせて、細胞を処置する。ＰＡＥＣ増殖を処置の３日後に測定し、管の分岐点の数を処置の２４時間後に測定する。

結果
ｓＦＬＴ及びＶＥＧＦによる処置は、ＶＥＧＦのみで処置した細胞と比較して、ＰＡＥＣの数を減少させ、ＶＥＧＦが細胞増殖を促進するのをｓＦＬＴは妨げることを示す。ｓＦＬＴ及びａ−ｓＦＬＴの両方がＶＥＧＦと組み合わされる場合、ＰＡＥＣの数は、細胞がＶＥＧＦだけで処置される場合に見られるレベルになり、ｓＦＬＴが誘発する細胞増殖の減少をａ−ｓＦＬＴが阻害することを示す。

ＶＥＧＦ単独による処置は、ＶＥＧＦ及びａ−ｓＦＬＴによる処置と同様に管分岐点の数を増加させる。対照的に、ＶＥＧＦ及びｓＦＬＴによる処置は、ＶＥＧＦ単独で処理した細胞と比較して、分岐点の数を減少させる。ｓＦＬＴ及びａ−ｓＦＬＴの両方がＶＥＧＦと組み合わされる場合、分岐点の数は、ＶＥＧＦだけの群で見られる数と同等であり、ｓＦＬＴが誘発する分岐点の数の減少をａ−ｓＦＬＴが阻害することを示す。

ＥＴＸに曝露したＰＡＥＣに対する、抗Ｆｌｔ−１抗体の投与
ＶＥＧＦ（５０ｎｇ／ｍＬ）、エンドトキシン（ＥＴＸ、１ｎｇ／ｍＬ）、ＶＥＧＦ＋ＥＴＸ、ＥＸＴ＋ａ−ｓＬＦＴ（１８００ｎｇ／ｍＬ）またはＥＸＴ＋ＶＥＧＦ＋ａ−ｓＦＬＴのいずれかで、細胞を処置する。ＰＡＥＣ増殖を処置の３日後に測定し、管の分岐点の数を処置の２４時間後に測定する。

結果
ＰＡＥＣ増殖は、対照（ＣＴＬ）と比較してＶＥＧＦでの処置後に増加し、ＥＴＸだけで処置したＰＡＥＣは、対照と比較して減少した増殖を示す。ＶＥＧＦまたはａ−ｓＦＬＴのいずれかとＥＴＸの組み合わせは、ＥＴＸ、ＶＥＧＦ及びａ−ｓＦＬＴによる処置と同様に、対照群で見られるレベルまで細胞数を増加させて、ＶＥＧＦまたはａ−ｓＦＬＴいずれかによる処置が、ＰＡＥＣ増殖におけるＥＴＸの有害な影響を逆転できることを示す。

分岐点の数は、ＶＥＧＦ単独で処置した後、増加し、ＥＴＸ単独で処置した細胞は、対照及びＶＥＧＦ処置群と比較して、減少した数の分岐点を示す。ＶＥＧＦまたはａ−ｓＦＬＴのいずれかとＥＴＸの組み合わせは、ＥＴＸ、ＶＥＧＦ及びａ−ｓＦＬＴによる処置と同様に、対照群で見られるレベルまで分岐点の数を増加させて、ＶＥＧＦまたはａ−ｓＦＬＴいずれかによる処置が、管の分岐点の数におけるＥＴＸの有害な影響を逆転できることを示す。

実施例２。ＢＰＤのＥＴＸモデルの抗Ｆｌｔ−１抗体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性
動物
すべての手順及びプロトコルは、Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ａｔ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｏｌｏｒａｄｏ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｅｎｔｅｒによって承認されている。定時妊娠Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットは、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から購入し、出産前の少なくとも１週間、Ｄｅｎｖｅｒの高度で室内空気に維持する（１，６００ｍ、気圧６３０ｍｍＨｇ、吸気酸素分圧１２２ｍｍＨｇ）。動物は自由に飼料を与えられて、昼夜サイクルに、交互に１２時間毎に曝露される。ラットは、ペントバルビタールナトリウム（０．３ｍｇ／体重ｇ、Ｆｏｒｔ Ｄｏｄｇｅ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ、Ｆｏｒｔ Ｄｏｄｇｅ、ＩＡ）の腹腔内注射で屠殺される。

動物モデル及び試験デザイン
羊水内ＥＴＸ、ビタミンＤ及び抗ｓＦＬＴ投与
絨毛羊膜炎の動物モデルを利用する。妊娠２０日目（期間：２２日）で、妊娠したラットは羊水内（ＩＡ）注入を投与される準備ができている。ラットの肺発生の後期の管状期中の注入のタイミングは、ＢＰＤのリスクが最も高い２４〜２６週の早産の新生児のヒト肺発生の類似の段階に対応するように選択される。ブプレノルフィン（０．０１〜０．０５ｍｇ／ｋｇ、皮下注射）の前投与の後、開腹は、フェイスマスクを通した１〜２％のイソフルラン吸入（麻酔機械：Ｍｉｄｍａｒｋ製Ｍａｔｒｉｘ、モデルＶＩＰ３０００）による全身麻酔下で実施される。麻酔及び開腹中、妊娠ラットは、低体温症を防止するために温熱パッド上に保持される。妊娠ラットは、一試験では生理食塩水の対照（ＣＴＲ）、エンドトキシン（ＥＴＸ）もしくはＥＴＸ＋ビタミンＤ（ｖｉｔ Ｄ）、またはもう一方の試験では生理食塩水の対照（ＣＴＲ）、エンドトキシン（ＥＴＸ）もしくはＥＴＸ＋抗ｓＦＬＴに無作為に割り付けられる。ＣＴＲ群は、羊膜嚢当たり生理食塩水５０μｌを投与され、ＥＴＸ群は、嚢当たり生理食塩水で５０μｌまで希釈したＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ０５５：Ｂ５５ＥＴＸ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）１０μｇを投与され、ＥＴＸ＋ｖｉｔ Ｄ群は、生理食塩水で５０μｌまで希釈したＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ０５５：Ｂ５５ＥＴＸ １０μｇ及び５０ｐｇを投与され、ＥＴＸ＋抗ｓＦＬＴ群は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ０５５：Ｂ５５ＥＴＸ １０μｇ、及び低用量（１×モル当量）または高用量（１０×モル当量）の抗ｓＦｌｔ１抗体を投与される。無菌調製下で、長さ３〜４ｃｍの正中線腹部切開は、ＩＡ注入のために羊膜を曝露させるために行われる。右の卵巣に最も近い羊膜嚢は最初に確認されて注入され、次に反時計回りの順序で、各嚢は確認されて、母動物当たり注入したのは最高１０嚢として注入する。ＩＡ ＥＴＸの蓄積投与量から全身毒性のため、注入は１０嚢に限定して、母体の死亡率を防ぐ。低用量（１〜５μｇ／嚢）のＥＴＸが、日齢１４日目に異常な肺構造を誘発できないことを証明した以前の試験から、ＥＴＸの投与量を設定した。高用量（５００ｎｇ／ｇｍ）のｖｉｔ Ｄが仔ラットで見られる皮下のカルシウム沈着をもたらすことを証明した以前の試験から、再度ｖｉｔ Ｄの投与量を設定した。腹部切開をナイロン縫合糸で閉じる。ブピバカイン（１〜２ｍｇ／ｋｇ、筋肉注射）は、術後疼痛管理のための切創に適用される。妊娠ラットは手術後１０分以内の覚醒を確実にするために慎重に監視されて、ラットはケージへ戻されて、活動について、及び出血または感染の徴候について監視された。

帝王切開
ＩＡ注入の２日後に、帝王切開は、上述のとおり、イソフルラン吸入による全身麻酔下で妊娠ラットに実施する。右の卵巣に最も近い羊膜の胎児が最初に出産されて、続いて反時計回りの順番で残りの胎児が出産されて、ＩＡ注入に曝露した胎児を同定する。帝王切開は、卵巣に対する羊膜嚢の順序及びその解剖学的位置に基づいて、特定のＩＡ注入に曝露した胎児を同定するために、経膣分娩の代わりに実施される。注入された羊膜のすべての仔ラットは、麻酔開始後の５分以内に出産される。次に母ラットを、ペントバルビタールナトリウムで安楽死させる。新生児ラットを直ちに乾燥させて、低体温症を避けるために温熱パッド上に置かれる。仔は、出生時、酸素補給または人工呼吸を受けない。出生後の３０分以内に、仔は計量されて、組織学的検査のために屠殺される、または里親ラットと置かれて１４日間育てられる。ラットの肺は、組織学的評価のための出生時及び日齢１４日目に採取される。乳児ラットの生存は監視されて、試験期間にわたって出生から毎日記録される。生存率は、各同腹仔の羊水内注入を受けた嚢の数で割った、生存する仔の数として算出される。

試験測定値
組織学的分析のための組織
動物は、腹腔内ペントバルビタールナトリウムによって屠殺される。カテーテルを気管内に入れて、肺を４％パラホルムアルデヒドで膨張させ、６０分間、２０ｃｍのＨ_２Ｏ圧で維持する。結紮糸を気管周辺でしっかり締めて圧力を維持し、気管のカニューレを取り外す。肺は、固定のため、室温にて一晩、４％パラホルムアルデヒドに浸漬される。厚さ２ｍｍの横方向切片は、それぞれ、動物当たり固定肺の右下葉及び左葉の中央面からとられる。各動物からの２つの切片を処理して、試験用にパラフィンワックス包埋する。

気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）
気管支肺胞洗浄を標準的な技術に従って出生日（０日目）に実施し、肺のｓＦＬＴレベルを測定した。

肺胞分岐数（ＲＡＣ）
肺胞形成は、記載されているようにＥｍｅｒｙ及びＭｉｔｈａｌのＲＡＣ法によって評価される（Ｃｏｏｎｅｙ ＴＰ，Ｔｈｕｒｌｂｅｃｋ ＷＭ．Ｔｈｅ ｒａｄｉａｌ ａｌｖｅｏｌａｒ ｃｏｕｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｅｍｅｒｙ ａｎｄ Ｍｉｔｈａｌ：ａ ｒｅａｐｐｒａｉｓａｌ １−ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｌｕｎｇ ｇｒｏｗｔｈ．Ｔｈｏｒａｘ ３７：５７２−５７９，１９８２、Ｃｏｏｎｅｙ ＴＰ，Ｔｈｕｒｌｂｅｃｋ ＷＭ．Ｔｈｅ ｒａｄｉａｌ ａｌｖｅｏｌａｒ ｃｏｕｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｅｍｅｒｙ ａｎｄ Ｍｉｔｈａｌ：ａ ｒｅａｐｐｒａｉｓａｌ ２−ｉｎｔｒａｕｔｅｒｉｎｅ ａｎｄ ｅａｒｌｙ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｌｕｎｇ ｇｒｏｗｔｈ．Ｔｈｏｒａｘ ３７：５８０−５８３，１９８２）。呼吸細気管支は、壁の一部の上皮によって内側を覆われる細気管支として確認される。呼吸細気管支の中心から、垂線を腺房結合組織または隔膜または肋膜の端に下ろし、この線に交差する隔膜の数を計数した。

統計解析
統計解析を、Ｐｒｉｓｍソフトウェアパッケージ（ｖ．５．０ａ、ＧｒａｐｈＰａｄ）で実施する。Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ事後分析とともに、反復測定一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を実施する。Ｐ値０．０５未満は、有意であるとみなされる。

結果
ｓＦＬＴレベルは、対照群と比較して子宮内においてＥＴＸに曝露されるラットで増加し、ビタミンＤによる処置は、対照群に見られるレベルまでｓＦＬＴレベルを低下させた。ビタミンＤによる治療が、肺のｓＦＬＴレベルに及ぼすビタミンＤの作用を介してＢＰＤを治療する療法として使用することができることを、これは示す。

形態測定解析が示すように、ＲＡＣは、対照群と比較して子宮内においてＥＴＸに曝露されるラットで減少し、ＥＴＸに曝露されるラットにおける抗ｓＦＬＴの子宮内投与は、ＥＴＸに曝露されるだけの群と比較して、ＲＡＣを増加させた。抗ｓＦＬＴによる治療が、ＢＰＤを治療する療法として使用することができることを、これは示す。

実施例４。ＢＰＤのｓＦＬＴモデルにおける、抗Ｆｌｔ−１抗体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性
動物
すべての手順及びプロトコルは、Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ａｔ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｏｌｏｒａｄｏ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｅｎｔｅｒによって承認されている。妊娠Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットは、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から購入し、出産前の少なくとも１週間、Ｄｅｎｖｅｒの高度で室内空気に維持する（１，６００ｍ、気圧６３０ｍｍＨｇ、吸気酸素分圧１２２ｍｍＨｇ）。動物は自由に飼料を与えられて、昼夜サイクルに、交互に１２時間毎に曝露される。ラットは、ペントバルビタールナトリウム（０．３ｍｇ／体重ｇ、Ｆｏｒｔ Ｄｏｄｇｅ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ、Ｆｏｒｔ Ｄｏｄｇｅ、ＩＡ）の腹腔内注射で屠殺される。

試験デザイン
羊水内ｓＦｌｔ−１投与
妊娠２０日目（期間：２２日）で、妊娠したラットは羊水内注入を投与される準備ができている。ラットの肺発生の後期の管状期中の注入のタイミングは、ＢＰＤのリスクが最も高い２４〜２６週の早産の新生児のヒト肺発生の類似の段階に対応するように選択された。ブプレノルフィン（０．０１〜０．０５ｍｇ／ｋｇ、筋肉注射）の前投与の後、妊娠ラットの開腹は、フェイスマスクを通した１〜２％のイソフルラン吸入（麻酔機械：Ｍｉｄｍａｒｋ製Ｍａｔｒｘ、モデルＶＩＰ３０００）による全身麻酔下で実施される。麻酔及び開腹中、妊娠ラットは、低体温症を防止するために温熱パッド上に保持される。妊娠ラットは、生理食塩水対照またはｓＦｌｔ−１群に無作為に割り付けられ、生理食塩水群は、羊膜嚢当たり生理食塩水５０μｌを投与され、ｓＦｌｔ−１群は、嚢当たり生理食塩水で５０μｌまで希釈した組換えヒトｓＦｌｔ−１−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）５０μｇを投与される。１つのｓＦＬＴ群は低用量（１×モル当量）の抗ｓＦＬＴを投与し、もう一方は高用量（１０×モル当量）の抗ｓＦＬＴを投与した。無菌調製下で、長さ３〜４ｃｍの正中線腹部切開は、羊水内注入のために羊膜を露出させるために実行される。右の卵巣に最も近い羊膜嚢は最初に確認されて注入され、次に反時計回りの順序で、各嚢は確認されて、母動物当たり注入したのは最高１０嚢として注入する。妊娠ラット当たりｓＦｌｔ−１注入を１０つの嚢に制限することは、個々の母ラットにおけるｓＦｌｔ−１の均一な総投与量を得るためであり、所与の羊水内ｓＦｌｔ−１は、膜内経路を介して母体循環内に吸収され、それは胎盤の胎児面上の胎児の脈管構造の顕微鏡的なネットワークによって特徴づけられて、羊水内物質の胎児及び母体循環内への移動を介在する。同様に、膜内経路を介した羊膜腔と母体及び胎児循環の間の連絡を考慮して、羊水内食塩水は別々の同腹仔に与えられて、対照として機能する。各母ラットの羊膜嚢の総数は調べられて、開腹中記録される。腹部切開をナイロン縫合糸で閉じる。ブピバカイン（１〜２ｍｇ／ｋｇ、皮下注射）は、術後疼痛管理のための切創に適用される。妊娠ラットは手術後１０分以内の覚醒を確実にするために慎重に監視されて、ラットはケージへ戻されて、活動、飲食能力、及び出血または感染の徴候について監視された。

帝王切開
羊水内注入の２日後に、帝王切開は、上述のとおり、イソフルラン吸入による全身麻酔下で妊娠ラットに実施する。右の卵巣に最も近い羊膜の胎児が最初に出産されて、続いて反時計回りの順番で残りの胎児が出産されて、羊水内注入に曝露した胎児を同定した。各母ラットの羊膜嚢の総数は、出産時に更に検証された。経膣分娩させる代わりに帝王切開を実施する主な理由は、卵巣に対する羊膜嚢の順序及びその解剖学的位置に基づいて、羊水内注入に曝露した胎児を同定するためである。注入された羊膜のすべての仔ラットは、麻酔開始後の５分以内に出産される。次に母ラットを、ペントバルビタールナトリウムで屠殺する。新生児ラットを直ちに、低体温症を避けるために温熱パッド上に置かれて、ガーゼスポンジで手作業にて乾燥させる。仔は、出生時、酸素補給または人工呼吸を受けない。出生時の生存率を記録する。出生後の３０分以内に、仔は計量されて、里親ラット共に通常ケージに入れられる。出生後の最初の２４時間、新生児の仔は、死亡率または呼吸困難の徴候について慎重に監視される。

ラットの肺は、ウエスタンブロット解析のために出生時に、ならびに組織学的評価のために出生時及び日齢１４日目に採取される。心臓は、出生時及び日齢７日目及び１４日目に、解剖されて量られる。３〜９匹のラットは、各時点の測定毎に各群で試験される。乳児ラットの生存は監視されて、試験期間にわたって出生から毎日記録される。生存率は、各同腹仔の羊水内注入を受けた嚢の数で割った、生存する仔の数として算出される。体重は、試験測定値用に、出生時に、及び屠殺される時点で計量される。

試験測定値
組織学的分析のための組織
動物は、腹腔内ペントバルビタールナトリウムによって屠殺される。カテーテルを気管内に入れて、肺を４％パラホルムアルデヒドで膨張させ、６０分間、２０ｃｍのＨ_２Ｏ圧で維持する。結紮糸を気管周辺でしっかり締めて圧力を維持し、それから気管のカニューレを取り外す。次に肺は、固定のため、室温にて２４時間、４％パラホルムアルデヒドに浸漬される。厚さ２ｍｍの横方向切片は、それぞれ、動物当たり固定肺の右下葉及び左葉の中央面からとられて、処理されて試験用にパラフィンワックス包埋される。

免疫組織化学
５μｍパラフィン切片入りのスライドは、肺胞構造を評価するためにヘマトキシリン及びエオシンによって、ならびに血管密度を定量化するためにフォンビルブランド因子（ｖＷＦ）、内皮細胞特異的マーカーによって染色される。

肺の血管密度
肺の血管密度は、高倍率視野当たり５０μｍ以下の外径を有する、ｖＷＦで染色した血管を計数することによって測定される。外径＞５０μｍの大きな気道または血管を含む場所は、選択しない。

肺胞分岐数（ＲＡＣ）
肺胞形成は、記載されているようにＥｍｅｒｙ及びＭｉｔｈａｌのＲＡＣ法によって評価される（Ｃｏｏｎｅｙ ＴＰ，Ｔｈｕｒｌｂｅｃｋ ＷＭ．Ｔｈｅ ｒａｄｉａｌ ａｌｖｅｏｌａｒ ｃｏｕｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｅｍｅｒｙ ａｎｄ Ｍｉｔｈａｌ：ａ ｒｅａｐｐｒａｉｓａｌ １−ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｌｕｎｇ ｇｒｏｗｔｈ．Ｔｈｏｒａｘ ３７：５７２−５７９，１９８２、Ｃｏｏｎｅｙ ＴＰ，Ｔｈｕｒｌｂｅｃｋ ＷＭ．Ｔｈｅ ｒａｄｉａｌ ａｌｖｅｏｌａｒ ｃｏｕｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｅｍｅｒｙ ａｎｄ Ｍｉｔｈａｌ：ａ ｒｅａｐｐｒａｉｓａｌ ２−ｉｎｔｒａｕｔｅｒｉｎｅ ａｎｄ ｅａｒｌｙ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｌｕｎｇ ｇｒｏｗｔｈ．Ｔｈｏｒａｘ ３７：５８０−５８３，１９８２）。呼吸細気管支は、壁の一部の上皮によって内側を覆われる細気管支として確認される。呼吸細気管支の中心から、垂線を腺房結合組織または隔膜または肋膜の端に下ろし、この線に交差する隔膜の数を計数する。

右心室肥大の指標
右心室（ＲＶ）及び左心室と隔膜（ＬＶ＋Ｓ）は、解剖して量られる。ＲＶ対ＬＶ＋Ｓ重量（ＲＶ／ＬＶ＋Ｓ％）及びＲＶ／体重（ＲＶ／ＢＷ％）の比は、右心室肥大（ＲＶＨ）を評価するために測定される。

統計解析
統計解析を、ＩｎＳｔａｔ３．０ソフトウェアパッケージ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）で実施する。統計比較は、有意性についてニューマン−コイルス事後解析とともにｔ検定または分散分析を使用して、群の間で行われる。Ｐ＜０．０５は有意とみなされる。

結果
肺の血管密度は、ｓＦＬＴのみで処置したものと比較して、ｓＦＬＴ＋抗ｓＦＬＴで処置した動物で増加する。

肺胞形成は、肺胞分岐数（ＲＡＣ）法によって評価される。形態測定解析で分析する場合、ｓＦＬＴラットは、対照群（ＣＴＬ）と比較して、著しく減少したＲＡＣ（Ｐ＜０．００１）を有する。低用量のａ−ｓＦＬＴによる処置は、ｓＦＬＴ群と比較して、著しくＲＡＣ（Ｐ＜０．０１）を増加させる。ａ−ｓＦＬＴによる処置が、ｓＦＬＴによって生じる肺胞形成の減少を逆転させ得ることを、これは示す。

右心室肥大は、右心室（ＲＶ）及び左心室と隔膜（ＬＶ＋Ｓ）を計量し、その比を計算することによって評価される。ｓＦＬＴに曝露された動物は、対照群と比較して増加したＲＶ／（ＬＶ＋Ｓ）比を有する。低用量のａ−ｓＦＬＴによる処置は、ｓＦＬＴ群と比較して、ＲＶ／（ＬＶ＋Ｓ）比を減少させる。ａ−ｓＦＬＴによる処置が、ｓＦＬＴによって生じる右心室肥大を逆転させ得ることを、これは示す。

右心室（ＲＶ）対体重の比は、右心室肥大を評価するために測定される。ｓＦＬＴに曝露された動物は、対照群と比較して増加したＲＶ／体重比を有する。低用量のａ−ｓＦＬＴによる処置は、ｓＦＬＴ群と比較して、ＲＶ／体重比を著しく減少させる。ａ−ｓＦＬＴによる処置が、ｓＦＬＴによって生じる右心室肥大を逆転させ得ることを、これは示す。

実施例５。ＢＰＤのエンドトキシン（ＥＴＸ）誘発モデルにおける、抗Ｆｌｔ−１抗体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性
試験デザイン
羊水内ｓＦＬＴ−１及びＥＴＸの投与
妊娠２０日目（期間：２２日）で、妊娠したラットは羊水内注入を投与される準備ができている。妊娠ラットは、生理食塩水対照群またはＥＴＸ（エンドトキシン）群に無作為に割り付けられ、生理食塩水群は生理食塩水注入を羊膜嚢内に投与され、ＥＴＸ群は、嚢当たり１０μｇのエンドトキシンを投与される。羊水内投与の後、腹部切開は閉じられて、ラットは手術後の覚醒を確実にするために慎重に監視される。

帝王切開及び処置
羊水内注入の２日後に、帝王切開は、上述のとおり全身麻酔下で妊娠ラットに実施する。仔は、週２回２週間、１ｍｇ／ｋｇの抗ｓＦＬＴモノクローナル抗体、１０ｍｇ／ｋｇの抗ｓＦＬＴモノクローナル抗体、または１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ対照（マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照）により処置される。

試験測定値
１４日目、ラット肺は、形態測定解析及び組織学的評価のために採取される。動物の体重は、出生時に及び屠殺される時点で測定される。肺は、４％のパラホルムアルデヒドによる膨張後、２０ｃｍのＨ_２Ｏに固定する。末梢気腔構造は、肺胞分岐数（ＲＡＣ）法によって評価される。心臓は、右室肥大（ＲＶ／ＬＳ＋Ｓ重量）を測定するために採取される。

体重
出生前のＥＴＸ処置に続いて、出生後の抗Ｆｌｔ−１モノクローナル抗体処置が体重を改善するか判断するために、動物の体重は測定される。子宮内でＥＴＸを投与され、続いて出生後のＩｇＧ（対照）または抗Ｆｌｔ−１ ｍＡｂ（１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ）による処置を受けた動物を、計量する。ＥＴＸだけまたはＥＴＸ＋ＩｇＧを投与された動物は、対照動物より体重が著しく下回った。ＥＴＸ＋抗Ｆｌｔ−１ ｍＡｂのいずれかの投与量を投与された動物の重量は、対照動物の重量と著しくは異ならない。出生後の抗Ｆｌｔ−１ ｍＡｂを与えられた動物は、ＢＰＤのエンドトキシン誘発モデルの成長優位があり得ることを、これらのデータは示す。

肺胞分岐数（ＲＡＣ）
出生前のＥＴＸ処置の後、出生後の抗Ｆｌｔ−１モノクローナル抗体処置が肺胞の増殖を改善するか判断するために、肺胞分岐数は測定される。子宮内でＥＴＸを投与され、続いて出生後のＩｇＧ（対照処置）または抗Ｆｌｔ−１モノクローナル抗体（１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ）による処置を受けた動物の肺を、試験する。ＥＴＸだけまたはＥＴＸ＋ＩｇＧを投与された動物は、対照動物と比べて、著しく低下した肺胞の増殖を示す。ＥＴＸ＋１０ｍｇ／ｋｇの抗Ｆｌｔ−１モノクローナル抗体を投与された動物の肺胞の増殖は、ＥＴＸだけを投与された動物の肺胞増殖より著しく良好である。出生後の抗Ｆｌｔ−１モノクローナル抗体を与えられた動物は、ＢＰＤのエンドトキシン誘発モデルにおいて改善した肺構造を有し得ることを、これらのデータは示す。

右心室肥大の指標
出生前のＥＴＸ処置の後、出生後の抗Ｆｌｔ−１モノクローナル抗体処置が右心室肥大（ＲＶＨ）を防ぐか判断するために、右心室は測定される。子宮内でＥＴＸを投与され、続いて出生後のＩｇＧ（対照処置）または抗Ｆｌｔ−１モノクローナル抗体（１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ）による処置を受けた動物の心臓を、試験する。ＥＴＸだけまたはＥＴＸ＋ＩｇＧを投与された動物は、対照動物と比べて、著しく増加した右心室比を示す。ＥＴＸ＋抗Ｆｌｔ−１モノクローナル抗体のいずれかの投与量を投与された動物の右心室比は、対照動物の右心室比と著しくは異ならない。ＥＴＸ＋抗Ｆｌｔ−１モノクローナル抗体のいずれかの投与量を投与された動物の右心室比は、ＥＴＸを投与された動物の右心室比とは著しく異なる。出生後の抗Ｆｌｔ−１モノクローナル抗体を与えられた動物は、ＢＰＤのエンドトキシン誘発モデルにおいて減少した肺高血圧症を有し得ることを、これらのデータは示す。

肺の構造
出生前のＥＴＸ処置の後、出生後の抗Ｆｌｔ−１モノクローナル抗体処置が肺の構造を修復するか判断するために、肺の構造及び肺の血管密度は評価される。子宮内でＥＴＸを投与され、続いて出生後のＩｇＧ（対照処置）または抗Ｆｌｔ−１モノクローナル抗体（１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ）による処置を受けた動物の肺を、試験する。出生後の抗ｓＦｌｔ−１モノクローナル抗体が実験の絨毛羊膜炎における肺の構造を修復できることを、これらのデータは示す。

等価物及び範囲
当業者は、一般的な実験のみを使用して、本明細書に記載の本発明の具体的な実施形態の多数の等価物を認識する、または確認することができる。本発明の範囲は、上述の発明の詳細な説明に限定することを意図するものではなく、むしろ以下の特許請求の範囲に記載されているものである。

Claims (44)

1. 治療を必要とする個人に、有効量の抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）を治療する方法であって、
   前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、
   配列番号１９〜配列番号２１のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義される可変軽（ＶＬ）鎖ＣＤＲ１、
   配列番号２２〜配列番号２４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ２、
   配列番号２５〜配列番号３４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＬ ＣＤＲ３、
   配列番号１〜配列番号４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義される可変重（ＶＨ）鎖ＣＤＲ１、
   配列番号５〜配列番号１４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ２、
   配列番号１５〜配列番号１８のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列によって定義されるＶＨ ＣＤＲ３からなる群から選択される、１つ以上の相補的決定領域（ＣＤＲ）を含む、前記方法。
2. 前記１つ以上のＣＤＲが、配列番号２５〜配列番号３４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有する前記アミノ酸配列によって定義される前記ＶＬ ＣＤＲ３、及び配列番号１５〜配列番号１８のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有する前記アミノ酸配列によって定義される前記ＶＨ ＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の方法。
3. 前記１つ以上のＣＤＲが、配列番号１９〜配列番号２１のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有する前記アミノ酸配列によって定義される前記ＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２２〜配列番号２４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有する前記アミノ酸配列によって定義される前記ＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号２５〜配列番号３４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有する前記アミノ酸配列によって定義される前記ＶＬ ＣＤＲ３を含む、請求項１または２に記載の方法。
4. 前記１つ以上のＣＤＲが、配列番号１〜配列番号４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有する前記アミノ酸配列によって定義される前記ＶＨ ＣＤＲ１、配列番号５〜配列番号１４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有する前記アミノ酸配列によって定義される前記ＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１５〜配列番号１８のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有する前記アミノ酸配列によって定義される前記ＶＨ ＣＤＲ３を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
5. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号１９、配列番号２２及び配列番号２５のアミノ酸配列によって定義される前記ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２ならびにＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬ鎖を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号２０、配列番号２３及び配列番号２５のアミノ酸配列によって定義される前記ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２ならびにＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬ鎖を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
7. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号２１及び配列番号２４のアミノ酸配列によって定義される前記ＶＬ ＣＤＲ１ならびにＶＬ ＣＤＲ２、ならびに配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３または配列番号３４のアミノ酸配列によって定義される前記ＶＬ ＣＤＲ３を含む、ＶＬ鎖を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記ＶＬ鎖が、それぞれ配列番号２１、配列番号２４及び配列番号３２のアミノ酸配列によって定義される前記ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２ならびにＶＬ ＣＤＲ３を含む、請求項７に記載の方法。
9. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号１、配列番号５及び配列番号１５のアミノ酸配列によって定義される前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２ならびにＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨ鎖を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号２、配列番号６及び配列番号１６のアミノ酸配列によって定義される前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２ならびにＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨ鎖を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
11. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号２、配列番号１０及び配列番号１８のアミノ酸配列によって定義される前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２ならびにＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨ鎖を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号２及び配列番号１７のアミノ酸配列によって定義される前記ＶＨ ＣＤＲ１ならびに前記ＶＨ ＣＤＲ３、ならびに配列番号７、配列番号８、配列番号１３または配列番号１４のアミノ酸配列によって定義される前記ＶＨ ＣＤＲ２を含む、ＶＨ鎖を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号３及び配列番号１７のアミノ酸配列によって定義される前記ＶＨ ＣＤＲ１ならびに前記ＶＨ ＣＤＲ３、ならびに配列番号９、配列番号１１または配列番号１２のアミノ酸配列によって定義される前記ＶＨ ＣＤＲ２を含む、ＶＨ鎖を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号４、配列番号９及び配列番号１７のアミノ酸配列によって定義される前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２ならびにＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨ鎖を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号３、配列番号１２及び配列番号１７のアミノ酸配列によって定義される前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２ならびにＶＨ ＣＤＲ３を含む、ＶＨ鎖を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
16. 治療を必要とする個人に、有効量の抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）を治療する方法であって、
    前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、（ｉ）配列番号４９〜配列番号６１のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）領域、及び／または（ｉｉ）配列番号３５〜配列番号４８のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）領域、を含む、前記方法。
17. 前記ＶＬ領域が配列番号６０のアミノ酸配列を含み、及び前記ＶＨ領域が配列番号４５のアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の方法。
18. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、配列番号８７〜配列番号８９のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖定常領域を更に含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
19. 治療を必要とする個人に、有効量の抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）を治療する方法であって、
    前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、（ｉ）配列番号７５〜配列番号８６のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び／または（ｉｉ）配列番号６２〜配列番号７４のいずれか一つに少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、を含む、前記方法。
20. 前記軽鎖が配列番号７６のアミノ酸配列を含み、及び前記重鎖が配列番号７１のアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載の方法。
21. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ）_２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、二重特異性抗体、三重特異性抗体及び四重特異性抗体からなる群から選択される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
22. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片がＩｇＧである、請求項２１に記載の方法。
23. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片がＩｇＧ１である、請求項２２に記載の方法。
24. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片がモノクローナル抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
25. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片がヒト化モノクローナル抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
26. 前記ヒト化モノクローナル抗体がヒトＦｃ領域を含有する、請求項２５に記載の方法。
27. 前記抗体のｉｎ ｖｉｖｏ半減期が長くなるように、前記Ｆｃ領域とＦｃＲｎ受容体の間の結合親和性を強化する１つ以上の突然変異を、前記Ｆｃ領域が含む、請求項２６に記載の方法。
28. 前記Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１のＬｅｕ２３４、Ｌｅｕ２３５及び／またはＧｌｙ２３７に対応する位置において、１つ以上の突然変異を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
29. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片がＶＥＧＦＲ２及び／またはＶＥＧＦＲ３と結合しない、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
30. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片がマウスまたはサルＦｌｔ−１と結合しない、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
31. 治療を必要とする個人に、有効量の抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）を治療する方法であって、
    前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、配列番号９０の位置１３９〜１４８、位置１３９〜１５３、位置１７８〜２０６、位置１９９〜２０４及び位置１２８〜１３８に対応するアミノ酸配列を含む、ペプチドもしくはその断片を認識する、前記方法。
32. 前記ペプチドが、配列番号９０の位置１３０〜１３８、位置１４１〜１４８、位置１４１〜１５３及び位置１９３〜２０６に対応する前記アミノ酸配列からなる、請求項３１に記載の方法。
33. 前記個体がＢＰＤを患うまたはそれを患いやすい乳児である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
34. 前記個体がＢＰＤを患うまたはそれを患いやすい胎児を妊娠している、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
35. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が非経口的に投与される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
36. 前記非経口投与が、静脈内、皮内、髄腔内、吸入、経皮（局所）、眼球内、筋肉内、皮下、肺送達、及び／または経粘膜投与から選択される、請求項３５に記載の方法。
37. 前記非経口投与が静脈内投与である、請求項３７に記載の方法。
38. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が経口投与される、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
39. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、隔月、毎月、３週間毎、隔週、毎週、毎日、または不定間隔で投与される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
40. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が、肺または心臓から選択される１つ以上の標的組織に送達される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
41. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が肺に送達される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
42. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片が心臓に送達される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
43. 前記抗Ｆｌｔ−１抗体またはその抗原結合断片の前記投与が、健康な肺組織の増殖、肺炎症の減少、肺胞形成の増加、血管新生の増加、肺血管床構造の改善、肺の瘢痕化の減少、肺の成長の改善、呼吸不全の減少、運動耐性の改善、有害な神経学的転帰の減少、及び／または対照と比較した肺機能の改善をもたらす、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
44. サーファクタント、酸素療法、人工呼吸療法、ステロイド、ビタミンＡ、一酸化窒素吸入、高カロリー栄養剤、利尿薬及び／または気管支拡張薬から選択される、少なくとも１つの追加の薬剤または治療を併用投与することを更に含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。