JP2018514573A - 新規のファージディスプレイライブラリ、そのメンバーおよびその使用 - Google Patents

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Abstract

本発明は、その標的に対してより高い特異性および効力を有する改善されたヒト抗体が作製され得るライブラリ（特に、ファージディスプレイライブラリ）と、このようなヒト抗体を作製する方法とに関する。特に、本発明は、このようなライブラリから得ることができる、挑戦的な標的に対するヒト抗体であって、少なくとも１８アミノ酸長のＨＣＤＲ３を有するヒト抗体に関する。【選択図】図１

Description

本発明は、その標的に対してより高い特異性および効力を有する改善されたヒト抗体が作製され得るライブラリ（特に、ファージディスプレイライブラリ）と、このようなヒト抗体を作製する方法とに関する。特に、本発明は、挑戦的な標的に対するヒト抗体に関する。
ファージディスプレイ技術は当該技術分野においてよく知られており、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３４８（１９９０）：５５２−５５４（参照により本明細書中に援用される）および国際公開第１９９３／１１２３６号パンフレット（参照により本明細書中に援用される）において開示されている。しかしながら、特定の標的に対する機能性ヒト抗体（すなわち、高い特異性および／または効力で結合する抗体）の作製が挑戦的なものであることも当該技術分野で知られている（Ｈｕｔｃｈｉｎｇｓ ｅｔ ａｌ．（２０１０）ＭＡｂｓ ２（６）：５９４−６０６；Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｊ Ｂｉｏｍｏｌ Ｓｃｒｅｅｎ ２０（４）：４５４−４６７；およびＳｍｉｔｈ（２０１５）Ｊ Ｂｉｏｍｏｌ Ｓｃｒｅｅｎ ２０（４）：４３７−４５３を参照；これらはそれぞれ参照により本明細書中に援用される）。このような挑戦的な標的は、従来の可溶性標的および単純な受容体よりも、それに対する機能性抗体を作製するのが困難であると考えられている。挑戦的な標的には、例えば、膜内在性タンパク質（例えば、イオンチャネル、輸送タンパク質、Ｇタンパク質共役受容体またはＧＰＣＲなど）およびウイルスタンパク質（例えば、ウイルスカプシドタンパク質など）が含まれる。
ファージディスプレイライブラリなどの従来のライブラリからこのような標的に対する機能性ヒト抗体を作製するには、適切な機能性を有する２つまたは３つの可能性のある抗体を見出すために、何万もの可能性のある抗体のスクリーニングが必要とされ得る。これは、明らかに時間および他の資源の著しい投資を意味する。現在のところ、ヒト使用のために世界的に現在認可されている抗体（３０を超える）のうち、ＧＰＣＲに対するものは１つのみ（モガムリズマブ、日本で認可された抗ＣＣＲ４ｍＡｂ）であり、ウイルス標的に対するものは１つのみ（パリビズマブ）であり、イオンチャネルまたは輸送体に対するものは存在しない。
このような挑戦的な標的に結合する機能性抗体が必要とされている。このような抗体を得るためにより少ないスクリーニングを必要とする改善されたライブラリが必要とされている。低い資源集約度で実行可能である、このような抗体を作製する改善された方法が必要とされている。
本発明は、ヒトｓｃＦｖを提示するファージライブラリを提供することにより、上記の必要性の１つまたは複数を満たすものであり、ライブラリにより提示されるヒトｓｃＦｖ可変重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ Ｈ３）の少なくとも５０％は、少なくとも１８アミノ酸長である。
少なくとも１８アミノ酸長である、ライブラリにより提示されるヒトｓｃＦｖ可変重鎖ＣＤＲ Ｈ３の割合は、少なくとも６０％であってもよい。少なくとも１８アミノ酸長である、ライブラリにより提示されるヒトｓｃＦｖ可変重鎖ＣＤＲ Ｈ３の割合は、少なくとも７０％であってもよい。少なくとも１８アミノ酸長である、ライブラリにより提示されるヒトｓｃＦｖ可変重鎖ＣＤＲ Ｈ３の割合は、少なくとも８０％であってもよい。少なくとも１８アミノ酸長である、ライブラリにより提示されるヒトｓｃＦｖ可変重鎖ＣＤＲ Ｈ３の割合は、少なくとも９０％であってもよい。
本発明のライブラリにより提示される好ましいＣＤＲ Ｈ３可変重鎖は、少なくとも１８アミノ酸長である。ＣＤＲ Ｈ３可変重鎖は、１８〜３０アミノ酸長であり得る。ＣＤＲ Ｈ３可変重鎖は、２０〜３０アミノ酸長であり得る。ＣＤＲ Ｈ３可変重鎖は、２０〜２４アミノ酸長であり得る。以下に記載されるように、本開示により例示される本発明のＣＤＲ Ｈ３可変重鎖は、２０〜２４アミノ酸長である。
特定のＣＤＲを構成するアミノ酸の定義は、使用される方法に応じて異なり得ることが知られており、例えば、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲは、ＩＭＧＴに従って定義されたときと異なる数のアミノ酸を含み得る。他に特に示されない限り、本明細書に記載されるアミノ酸の長さは、Ｋａｂａｔ番号付けにより定義される通りである。
従来のヒト抗体は、平均約１２〜１３アミノ酸長（この平均を中心として正規分布を有する）である重鎖ＣＤＲ Ｈ３を有する。しかしながら、より長いループ重鎖ＣＤＲ Ｈ３を有するヒト抗体が当該技術分野において知られており、特に、Ｓｐｉｎｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（ＰＬＯＳ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ（２０１４）Ｖｏｌ １０ Ｉｓｓｕｅ １０ ｅ１００４３７７）、Ｂｕｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（ＰＮＡＳ（２００５）Ｖｏｌ １０２Ｎｏ．４２ １４９４３−１４９４８）、Ｃｏｒｔｉ＆Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１３）３１：７０５−７４２）、Ｗｈｉｔｔｌｅ ｅｔ ａｌ．（ＰＮＡＳ（２０１１）Ｖｏｌ １０８ Ｎｏ．３４ １４２１６−１４２２１）およびＣｏｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２００３）３２５，３３７−３５４）において開示されており、これらはそれぞれ参照により本明細書中に援用される。Ｃｏｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．は、標的がウイルスである場合に平均ヒトＣＤＲ Ｈ３の長さが約１６個のアミノ酸である場合を除いて、（正規分布した）ヒトＣＤＲ Ｈ３の平均長さは、１０〜１２個のアミノ酸であることを決定した。
いずれの理論にも束縛されることなく、本発明者らは、従来よりも長いＣＤＲ Ｈ３を有するヒト抗体が、例えば、細孔、疎水性ポケットまたはキャニオン構造を含有する特定の標的に対して高い特異性および／または効力を有する可能性が高いであろうことを提唱する。従って、本発明者らは、Ｖａｕｇｈａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）およびＬｌｏｙｄ ｅｔ ａｌ．，（２００９）に記載されるものなどの現存のファージディスプレイライブラリからこのような抗体を得ることを試みたが、これは、このようなライブラリが２０以上のアミノ酸長を有するヒトＣＤＲ Ｈ３の５％以下を提示するという事実によって妨げられることが分かった。従って、本発明者らは、ライブラリにより提示されるヒトＣＤＲ Ｈ３の大部分が少なくとも１８アミノ酸長である新規のライブラリを作製した。
ライブラリは、最初に、少なくとも１８アミノ酸長であるＣＤＲ Ｈ３を有する抗体のヒト生殖系列配列から作製される。ライブラリは、上記で引用された参考文献に開示される長いＣＤＲ Ｈ３抗体を含む任意の既知のこのような抗体のヒト生殖系列配列から作製され得る。ライブラリは、少なくとも１８アミノ酸長であるＣＤＲ Ｈ３を含有する抗ＦＰＲ１抗体のヒト生殖系列配列から作製され得る。ヒト抗ＦＰＲ１抗体は、２４アミノ酸長であるＣＤＲ Ｈ３を含有し得る。ヒト抗ＦＰＲ１抗体は、Ｄｏｕｔｈｗａｉｔｅ ｅｔ ａｌ．（ＭＡｂｓ（２０１５）７（１）：１５２−１６６；参照により本明細書中に援用される）に記載されるように、ＦＰＲ０１６５であり得る。
本発明者らは、本発明のライブラリから作製されるヒト抗体が困難または挑戦的な標的抗原に結合し、および機能的に影響する（例えば、拮抗または刺激する）可能性が高いであろうことを提唱する。従って、本発明は、挑戦的な標的に対する機能性ヒト抗体（すなわち、高い特異性および／または効力を有するヒト抗体）を作製するための、本発明のライブラリの使用を提供する。本発明は、挑戦的な標的に結合し得るヒト抗体を作製する方法をさらに提供し、本方法は、標的に特異的なヒト抗体を本発明のライブラリから単離するステップを含む。抗体を得るためのファージディスプレイライブラリの使用は、当業者にとって日常的なことである。サンプルプロトコルは以下に例示される。
抗体に対する挑戦的な標的は当該技術分野において知られており、膜内在性タンパク質（例えば、イオンチャネル、輸送タンパク質、ＧＰＣＲなど）およびウイルスカプシドタンパク質（その構造内に疎水性キャニオンを有することが多い）が含まれる。従って、本発明のライブラリから作製されるヒト抗体は、膜タンパク質に対して特異的であり得る。本発明のライブラリから作製されるヒト抗体は、イオンチャネルに対して特異的であり得る。本発明のライブラリから作製されるヒト抗体は、輸送タンパク質に対して特異的であり得る。本発明のライブラリから作製されるヒト抗体は、ＧＰＣＲに対して特異的であり得る。本発明のライブラリから作製されるヒト抗体は、ウイルスカプシドタンパク質に対して特異的であり得る。
本発明は、少なくとも１８アミノ酸長であるＣＤＲ Ｈ３を有するヒト抗体をさらに提供する。本発明のヒト抗体は、本発明のライブラリから得ることができる。従って、ヒト抗体は、上記の本発明の使用または方法によって得ることができる。ＣＤＲ３ Ｈ３は、１８〜３０アミノ酸長であり得る。ＣＤＲ３ Ｈ３は、２０〜３０アミノ酸長であり得る。ＣＤＲ３ Ｈ３は、２０〜２４アミノ酸長であり得る。本発明のヒト抗体は、上記のように、挑戦的な標的に結合し得る。本発明のヒト抗体は、Ｓｐｉｎｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（ＰＬＯＳ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ（２０１４）Ｖｏｌ １０ Ｉｓｓｕｅ １０ ｅ１００４３７７）、Ｂｕｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（ＰＮＡＳ（２００５）Ｖｏｌ １０２ Ｎｏ．４２ １４９４３−１４９４８）、Ｃｏｒｔｉ＆Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１３）３１：７０５−７４２）、Ｗｈｉｔｔｌｅ ｅｔ ａｌ．（ＰＮＡＳ（２０１１）Ｖｏｌ １０８ Ｎｏ．３４ １４２１６−１４２２１）およびＣｏｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２００３）３２５，３３７−３５４）のいずれかに開示されるようなＣＤＲ Ｈ３配列を有さない。
本発明のヒト抗体は、アゴニストまたはアンタゴニストであり得る。本発明のヒト抗体は、その標的に対して５０ナノモル濃度未満の効力（ＩＣ５０）を有し得る。本発明のヒト抗体は、その標的に対して２０ナノモル濃度未満の効力（ＩＣ５０）を有し得る。発明のヒト抗体は、その標的に対して１０ナノモル濃度未満の効力（ＩＣ５０）を有し得る。
本発明のヒト抗体は、モノクローナル抗体であり得る。誤解を避けるために、「抗体」という用語は明確にこのような抗原結合性断片を含む。従って、本発明のヒト抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖなどのその抗原結合性断片であってもよい。
本発明者らは、２０〜２４アミノ酸長であるＣＤＲ Ｈ３を有する本発明のヒト抗体のアミノ酸組成を分析した。結果は、以下の表に記載される通りである。
従って、表において提供される情報に基づいて、本発明のライブラリまたはヒト抗体のＣＤＲ Ｈ３が２０アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列を含み得ることは明白である。
位置１：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
位置２：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置３：Ｒ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
位置４：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置５：Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置６：Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置７：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置８：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置９：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１０：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１１：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１２：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１３：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇからなるリストから選択される
位置１４：Ｒ、Ｋ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置１５：Ｒ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置１６：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
位置１７：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置１８：Ｐ、Ｍ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
位置１９：Ｄ
位置２０：Ｐ、Ｙ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
あるいは、表において提供される情報に基づいて、本発明のライブラリまたはヒト抗体のＣＤＲ Ｈ３が２１アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列を含み得ることは明白である。
位置１：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
位置２：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置３：Ｒ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
位置４：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置５：Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置６：Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置７：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置８：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置９：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１０：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１１：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１２：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１３：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１４：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇからなるリストから選択される
位置１５：Ｒ、Ｋ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置１６：Ｒ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置１７：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
位置１８：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置１９：Ｐ、Ｍ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
位置２０：Ｄ
位置２１：Ｐ、Ｙ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
あるいは、表において提供される情報に基づいて、本発明のライブラリまたはヒト抗体のＣＤＲ Ｈ３が２２アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列を含み得ることは明白である。
位置１：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
位置２：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置３：Ｒ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
位置４：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置５：Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置６：Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置７：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置８：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置９：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１０：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１１：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１２：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１３：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１４：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１５：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇからなるリストから選択される
位置１６：Ｒ、Ｋ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置１７：Ｒ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置１８：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
位置１９：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置２０：Ｐ、Ｍ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
位置２１：Ｄ
位置２２：Ｐ、Ｙ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
あるいは、表において提供される情報に基づいて、本発明のライブラリまたはヒト抗体のＣＤＲ Ｈ３が２３アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列を含み得ることは明白である。
位置１：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
位置２：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置３：Ｒ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
位置４：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置５：Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置６：Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置７：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置８：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置９：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１０：Ｒ、Ｄ、Ｑ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置１１：Ｋ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｉからなるリストから選択される
位置１２：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１３：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１４：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１５：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１６：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇからなるリストから選択される
位置１７：Ｒ、Ｋ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置１８：Ｒ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置１９：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
位置２０：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置２１：Ｐ、Ｍ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
位置２２：Ｄ
位置２３：Ｐ、Ｙ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
あるいは、表において提供される情報に基づいて、本発明のライブラリまたはヒト抗体のＣＤＲ Ｈ３が２４アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列を含み得ることは明白である。
位置１：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
位置２：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置３：Ｒ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
位置４：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置５：Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置６：Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置７：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置８：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置９：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１０：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１１：Ｒ、Ｄ、Ｑ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置１２：Ｋ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｉからなるリストから選択される
位置１３：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１４：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１５：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１６：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１７：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇからなるリストから選択される
位置１８：Ｒ、Ｋ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置１９：Ｒ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置２０：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
位置２１：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置２２：Ｐ、Ｍ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
位置２３：Ｄ
位置２４：Ｐ、Ｙ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
あるいは、表において提供される情報に基づいて、本発明のライブラリまたはヒト抗体のＣＤＲ Ｈ３が２４アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列を含み得ることは明白である。
位置１：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
位置２：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置３：Ｒ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
位置４：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置５：Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置６：Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置７：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置８：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置９：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１０：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１１：Ｃ
位置１２：Ｋ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｉからなるリストから選択される
位置１３：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１４：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１５：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置１６：Ｃ
位置１７：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇからなるリストから選択される
位置１８：Ｒ、Ｋ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置１９：Ｒ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置２０：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
位置２１：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置２２：Ｐ、Ｍ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
位置２３：Ｄ
位置２４：Ｐ、Ｙ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
以下の表からの情報は合理的に一般化することができ、従って、例えば、位置１のアミノ酸は、ＣＤＲ Ｈ３が２０、２１、２２、２３または２４アミノ酸長であるかどうかに関係なく、Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｓ、Ｇ、ＡおよびＶから選択される。従って、本発明のヒト抗体が、Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｓ、Ｇ、ＡおよびＶから選択される位置１のアミノ酸を有するであろうと推論することは合理的である。位置２（すなわち、アミノ酸は、Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択され得る）；位置３（すなわち、アミノ酸は、Ｒ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択され得る）；位置４（すなわち、アミノ酸は、Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択され得る）；位置５（すなわち、アミノ酸は、Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択され得る）；位置６（すなわち、アミノ酸は、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択され得る）；および位置７（すなわち、アミノ酸は、Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択され得る）について、同じことが推論され得る。
以下の表６〜１１に記載されるように、本発明者らは、本発明のヒト抗体の特定の位置における各アミノ酸の存在についてパーセンテージ数値（±１．５％以内の精度）を割り当てた。１０％以上のカットオフポイントを指定すると、２０アミノ酸長であるＣＤＲ Ｈ３を有する本発明の特定のヒト抗体は、以下のアミノ酸配列を含み得る。
位置１：Ｒ、Ｄ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置２：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌからなるリストから選択される
位置３：Ｒ、Ｐ、Ｙ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
位置４：Ｒ、Ｙ、Ｇ、Ｉからなるリストから選択される
位置５：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｍからなるリストから選択される
位置６：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置７：Ｒ、Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置８：Ｄ、Ｓ、Ｇ、Ｍ、Ｖからなるリストから選択される
位置９：Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置１０：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
位置１１：Ｅ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置１２：Ｙ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置１３：Ｒ、Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
位置１４：Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
位置１５：Ｙからなるリストから選択される
位置１６：Ｄ、Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
位置１７：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置１８：Ｍ、Ｆからなるリストから選択される
位置１９：Ｄ
位置２０：Ｐ、Ｙ、Ｖからなるリストから選択される
あるいは、１０％以上のカットオフポイントを指定すると、本発明のライブラリまたはヒト抗体のＣＤＲ Ｈ３は２１アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列を含み得る。
位置１：Ｒ、Ｄ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置２：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌからなるリストから選択される
位置３：Ｒ、Ｐ、Ｙ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
位置４：Ｒ、Ｙ、Ｇ、Ｉからなるリストから選択される
位置５：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｍからなるリストから選択される
位置６：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置７：Ｒ、Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置８：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置９：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置１０：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置１１：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
位置１２：Ｅ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置１３：Ｙ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置１４：Ｒ、Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
位置１５：Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
位置１６：Ｙ
位置１７：Ｄ、Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
位置１８：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置１９：Ｍ、Ｆからなるリストから選択される
位置２０：Ｄ
位置２１：Ｐ、Ｙ、Ｖからなるリストから選択される
あるいは、１０％以上のカットオフポイントを指定すると、本発明のライブラリまたはヒト抗体のＣＤＲ Ｈ３は２２アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列を含み得る。
位置１：Ｒ、Ｄ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置２：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌからなるリストから選択される
位置３：Ｒ、Ｐ、Ｙ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
位置４：Ｒ、Ｙ、Ｇ、Ｉからなるリストから選択される
位置５：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｍからなるリストから選択される
位置６：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置７：Ｒ、Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置８：Ｄ、Ｓ、Ｇ、Ｍ、Ｖからなるリストから選択される
位置９：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置１０：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置１１：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置１２：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
位置１３：Ｅ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置１４：Ｙ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置１５：Ｒ、Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
位置１６：Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
位置１７：Ｙ
位置１８：Ｄ、Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
位置１９：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置２０：Ｍ、Ｆからなるリストから選択される
位置２１：Ｄ
位置２２：Ｐ、Ｙ、Ｖからなるリストから選択される
あるいは、１０％以上のカットオフポイントを指定すると、本発明のライブラリまたはヒト抗体のＣＤＲ Ｈ３は２３アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列を含み得る。
位置１：Ｒ、Ｄ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置２：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌからなるリストから選択される
位置３：Ｒ、Ｐ、Ｙ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
位置４：Ｒ、Ｙ、Ｇ、Ｉからなるリストから選択される
位置５：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｍからなるリストから選択される
位置６：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置７：Ｒ、Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置８：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置９：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置１０：Ｒ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置１１：Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
位置１２：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置１３：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
位置１４：Ｅ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置１５：Ｙ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置１６：Ｒ、Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
位置１７：Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
位置１８：Ｙ
位置１９：Ｄ、Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
位置２０：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置２１：Ｍ、Ｆからなるリストから選択される
位置２２：Ｄ
位置２３：Ｐ、Ｙ、Ｖからなるリストから選択される
あるいは、１０％以上のカットオフポイントを指定すると、本発明のライブラリまたはヒト抗体のＣＤＲ Ｈ３は２４アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列を含み得る。
位置１：Ｒ、Ｄ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置２：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌからなるリストから選択される
位置３：Ｒ、Ｐ、Ｙ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
位置４：Ｒ、Ｙ、Ｇ、Ｉからなるリストから選択される
位置５：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｍからなるリストから選択される
位置６：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置７：Ｒ、Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置８：Ｄ、Ｓ、Ｇ、Ｍ Ｖからなるリストから選択される
位置９：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置１０：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置１１：Ｒ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置１２：Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
位置１３：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置１４：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
位置１５：Ｅ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置１６：Ｙ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置１７：Ｒ、Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
位置１８：Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
位置１９：Ｙ
位置２０：Ｄ、Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
位置２１：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置２２：Ｍ、Ｆからなるリストから選択される
位置２３：Ｄ
位置２４：Ｐ、Ｙ、Ｖからなるリストから選択される
あるいは、１０％以上のカットオフポイントを指定すると、本発明のライブラリまたはヒト抗体のＣＤＲ Ｈ３は２４アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列を含み得る。
位置１：Ｒ、Ｄ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置２：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌからなるリストから選択される
位置３：Ｒ、Ｐ、Ｙ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
位置４：Ｒ、Ｙ、Ｇ、Ｉからなるリストから選択される
位置５：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｍからなるリストから選択される
位置６：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
位置７：Ｒ、Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置８：Ｄ、Ｓ、Ｇ、Ｍ Ｖからなるリストから選択される
位置９：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置１０：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置１１：Ｃ
位置１２：Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
位置１３：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
位置１４：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
位置１５：Ｅ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
位置１６：Ｃ
位置１７：Ｒ、Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
位置１８：Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
位置１９：Ｙ
位置２０：Ｄ、Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
位置２１：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
位置２２：Ｍ、Ｆからなるリストから選択される
位置２３：Ｄ
位置２４：Ｐ、Ｙ、Ｖからなるリストから選択される
本発明は、ここで、例として以下の図面を参照して記載される。
ファージディスプレイライブラリが基づく抗ＦＰＲ抗体のＦａｂ断片（ＦＰＲ０１６５）のＸ線結晶構造であり、長いＶＨ ＣＤＲループが構造の解明のために十分に安定していることを示す。 長いＶＨ ＣＤＲ３ライブラリのためのＶＨインサート設計の概略図である。ループ位置１１および１６にシステインをコードする２４アミノ酸長の構築物を加えて、ＶＨ ＣＤＲ長さ２０〜２４を表す６つの構築物を合成した。表６〜１１に定義されるアミノ酸組成を有する６つの異なるＣＤＲ３インサートを設計した。 ６つの長いＶＨ ＣＤＲ３レパートリーのクローニング効率の分析である。各サブライブラリからの２６４〜５２８の個々のクローンのｓｃＦｖ遺伝子を配列決定して、ＨＣＤＲ３多様性およびライブラリ品質の評価を決定した。この分析は、ライブラリが高度に多様性（配列決定したクローン間でＨＣＤＲ３配列の１００％の多様性）であり、各サブライブラリ内のクローンの約７０％が全長インフレームｓｃＦｖをコードすることを示した。 抗体軽鎖レパートリーを含有するファージミドベクターへのクローニング後の実際のＶＨ ＣＤＲ３ループ長さのディープシーケンシング分析である。１つのサブライブラリにつき１２０〜１６０万の個々の読取りデータから、ＮＧＳ（次世代シーケンシング）は、各サブライブラリ内の６０〜７０％のクローンが予想される長さのＶＨＣＤＲ３を含有することを示す。また、この分析は、各サブライブラリ内の位置の大部分について、最終ライブラリ内のアミノ酸使用がライブラリ設計と一致する（観察／設計されたアミノ酸の頻度＝０．１〜２）ことも確認した。 ６つのＶＨレパートリーインサートのクローニング後の軽鎖生殖系列使用の多様性である。１つのサブライブラリにつき１０００００のランダムに選択した個々の読取りデータを用いて、ＶＬ生殖系列の多様性についての情報を作成した。３つの最も頻繁に使用されるＶＬ生殖系列はＩＧＬＶ１−４４＊０１、ＩＧＶ３−１９＊０１およびＩＧＬＶ１−４０＊０１であり、それぞれ各サブライブラリの７〜１０％に相当する。最も一般的なカッパ生殖系列はＩＧＫＶ３−２０＊０１であり、各サブライブラリの４〜５％に相当する。 本発明のファージディスプレイライブラリから得られた４つの抗Ｐ２Ｘ４抗体（抗体１〜４）のＶＨ（６ａ、６ｂ）およびＶＬ（６ｃ、６ｄ）配列である。
実施例１：長いＶＨ ＣＤＲ３（ＣＤＲ Ｈ３）ライブラリの設計
異常に長いＶＨ ＣＤＲ３を含有する抗ＦＰＲ１抗体が記載されている（Ｋａｂａｔ定義により２４個のアミノ酸；ＩＭＧＴ定義により２６個；Ｄｏｕｔｈｗａｉｔｅ，ＪＡ ｅｔ ａｌ．，２０１５；ＭＡｂｓ：７（１）：１５２−１６６；参照により本明細書中に援用される）。この抗体のＦａｂ断片（ＦＰＲ０１６５）のＸ線結晶構造は、長いＶＨ ＣＤＲループが構造の解明のために十分に安定していることを示した（図１）。ＦＰＲ０１６５の重鎖配列はＶＨ３−１５＊０７遺伝子に最も密接に適合し、これは、ＶＨ ＣＤＲ３の最初の共通配列がシステイン、それに続くアラニン、およびその次のアルギニンまたはリジン（ＣＡＲ／Ｋ）である代わりに、遺伝子がシステインおよびそれに続く２つのスレオニンをコードする（ＣＴＴ）という点で異常である。いずれの理論にも束縛されることなく、本発明者らは、この長いＶＨ ＣＤＲ３ループのベースにあるこの異常な構造的特徴がいくらかの構造的安定性を提供し得ることを提唱する。従って、長いＶＨ ＣＤＲ３ループを有する抗体ライブラリの重鎖レパートリーの基礎として、生殖系列遺伝子ＶＨ３−１５＊０７を使用することが決定された。
２０、２１、２２、２３および２４アミノ酸長である５つのＶＨ ＣＤＲ３ループ長さを最初に設計した（Ｋａｂａｔ番号付けにより定義される、すなわち、ＣＤＲ３ループはＶＨ生殖系列配列内のＣＴＴモチーフ（Ｋａｂａｔ番号付け９２〜９４）の直前のアミノ酸から始まるとして定義され、ＶＨ ＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔ位置９５から始まる）。ループ内に多様性を設計するために、所与のループ長さにおける既知のヒト抗体配列の分析を使用した（Ｚｅｍｌｉｎ Ｍ ｅｔ ａｌ．，２００３；Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３４（４）：７３３−７４９）。所与のループ長さのＶＨ ＣＤＲ３に沿った各位置について、各アミノ酸の（ヒトにおける）平均使用率を決定した（表１〜５）。
周期的な酵素的単一コドン合成（ｃｙｃｌｉｃａｌ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｓｉｎｇｌｅ ｃｏｄｏｎ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）を用いて、ＶＨライブラリレパートリーを合成した（ＣｏｌｉｂｒａＴＭ，Ｉｓｏｇｅｎｉｃａ Ｌｔｄ，Ｌｉｔｔｌｅ Ｃｈｅｓｔｅｒｆｏｒｄ，ＵＫ；欧州特許第１９０７５４８号明細書、欧州特許第２２３６６１２号明細書および米国特許第８３５７６３８Ｂ２号明細書およびＡｓｈｒａｆ ＭＡ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．４１：１１８９−１１９４）。この方法論の技術的な限界には、成功的に合成され得る特定の位置における各アミノ酸の最低使用％が５％であることが含まれた。従って、ライブラリのＶＨレパートリーは、２０〜２４アミノ酸長のループ長さについてＺｅｍｌｉｎ ｅｔ ａｌ．に記載されるアミノ酸組成の修正バージョンに基づいて設計した（表６〜１０）。位置１１および１６において固定されたシステイン対を含有する２４アミノ酸の付加的なＶＨレパートリーも設計した。いくつかのヒト抗体Ｄ遺伝子は、その中にコードされたシステインアミノ酸対を含有する。いずれの理論にも束縛されることなく、本発明者らは、これらの位置における２つのシステインのジスルフィド対形成がＶＨ ＣＤＲ３ループの構造的安定性の増大をもたらし得ることを提唱し、従って、このレパートリーの設計に包含させた（表１１）。ＶＨ ＣＤＲ３の直接下流のＣ末端フレームワーク４領域は、通常、ヒトＶＨＪセグメントによってコードされる。ライブラリ設計の場合、これはライブラリの設計の基礎として使用されるＦＰＲ０１６５抗体において使用されたため、これはＶＨＪセグメントに由来する単一配列ＩＧＨＪ６＊０１に限定された。従って、異なるループ長さのそれぞれについて合成されたＶＨ構築物全体は、生殖系列ＶＨ３−１５＊０７に由来するＶＨフレームワーク１（ＦＷ１）−ＣＤＲ１−ＦＷ２−ＣＤＲ２−ＦＷ３−と、その後の設計されたＣＤＲ３配列（表６〜１１）と、その後のＩＧＨＪ６＊０１遺伝子に由来する単一のＦＷ４領域（Ｋａｂａｔ定義による位置１０３におけるトリプトファンから始まる）とから構成された。ファージミドベクターへのインサートのクローニングを促進するために、制限エンドヌクレアーゼＮｃｏＩおよびＸｈｏＩの制限部位をそれぞれ上流側および下流側で構築物に設計した。ライブラリの設計全体は図２に要約される。
Figure 2018514573
Figure 2018514573
Figure 2018514573
Figure 2018514573
Figure 2018514573
Figure 2018514573
Figure 2018514573
Figure 2018514573
Figure 2018514573
Figure 2018514573
Figure 2018514573
実施例２：ＶＨレパートリーのクローニングおよびＥＧ３ライブラリの作製
最終ライブラリの多様性を最大限にするために、ヒト抗体ＶラムダおよびＶカッパ遺伝子を含有するファージミドベクターに６つのＶＨレパートリーをクローン化した（Ｌｌｏｙｄ Ｃ ｅｔ ａｌ．，２００９；Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ ２２（３）：１５９−１６８）。このアクセプターフレームワークライブラリ（ｐＣａｎｔａｂ６ベクター内）を一晩成長させ、Ｍａｘｉｐｒｅｐ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ，ＵＫ）によりＤＮＡを抽出した。３７℃において制限酵素ＮｃｏＩおよびＸｈｏＩ（ＮＥＢ，Ｈｉｔｃｈｉｎ，ＵＫ）により精製ＤＮＡを順次消化した後、２０分間にわたる８０℃の熱不活性化ステップを行なった。Ｐｈａｓｅ Ｌｏｃｋ Ｇｅｌ（５Ｐｒｉｍｅ ＧｍｂＨ，Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いたフェノール：クロロホルム抽出と、その後のエタノール沈殿とにより、二重消化されたベクターを精製した。Ｃｈｒｏｍｏｓｐｉｎ＋ＴＥ−１０００カラム（Ｔａｋａｒａ Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｓａｉｎｔ−Ｇｅｒｍａｉｎ−ｅｎ−Ｌａｙｅ，Ｆｒａｎｃｅ）におけるベクターＤＮＡの精製により、ＤＮＡ詰め物（ｓｔｕｆｆｅｒ）断片を除去した。６つのＶＨレパートリーインサートを３７℃で４時間、制限酵素ＮｃｏＩおよびＸｈｏＩ（ＮＥＢ）により同時に消化した後、２０分間の８０℃の熱不活性化ステップを行い、関連のオーバーハングを生成した。
様々な比率（３：１、６：１および１２：１のインサート：ベクター）においてＴ４リガーゼキット（ＮＥＢ）を用いて試験ライゲーションを実施した後、フェノール：クロロホルム抽出し、エタノール沈殿させた。次に、ライゲーションを新たに作ったエレクトロコンピテントＴＧ１細胞に電気穿孔した後、３７℃で回収した。関連の抗生物質を含有する寒天上に細胞を蒔き、３０℃で一晩インキュベートした。コロニーにおいてコロニーＰＣＲを実施し、ベクターおよびインサートの正しいライゲーションを確認した。インサート：ベクター比が選択されたら、サブライブラリのそれぞれについて既に記載したように大規模のライゲーションを実施した。連続希釈を実施して、既に記載されたように、ライブラリサイズの評価を提供した（Ｍａｒｋｓ ＪＤ，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７１）。各サブライブラリからの２６４〜５２８の個々のクローンのｓｃＦｖ遺伝子を配列決定して、ＨＣＤＲ３多様性およびライブラリ品質の評価を決定した。この分析は、ライブラリが高度に多様性（配列決定したクローン間でＨＣＤＲ３配列の１００％の多様性）であり、各サブライブラリ内のクローンの約７０％が全長インフレームｓｃＦｖをコードすることを示した（図３）。
６つの個々のサブライブラリの成功的なクローニング後、標準技術を用いて個々のサブライブラリのファージアリコートを調製した（Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ，ｅｔ ａｌ，（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ−Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｐｐｒｏａｃｈ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ．）。次に、これらを当量比で組み合わせた。組み合わせた最終的なｓｃＦｖライブラリは、７．５ｘ１０９の個々の組換え体のサイズを有すると推定されたレパートリーを有し、これをＥＧ３ライブラリと名付けた。
各サブライブラリ内のＶＨＣＤＲ３長さ分布およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸使用を決定するために、新しく構築されたライブラリからのＤＮＡを作製し、次世代シーケンシングによる配列決定のために提出した（ＭｉＳｅｑ−Ｉｌｌｕｍｉｎａ，Ｌｉｔｔｌｅ Ｃｈｅｓｔｅｒｆｏｒｄ，ＵＫ）。ＶＨは固定フレームワークを有するため、ＶＬ生殖系列の多様性の評価も得た。
１つのサブライブラリにつき１２０〜１６０万の個々の読取りデータから、ＮＧＳ（次世代シーケンシング、すなわちＩｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑ（登録商標）を用いて実行される）は、各サブライブラリ内の６０〜７０％のクローンが予想される長さのＶＨＣＤＲ３を含有することを示す（図４）。また、この分析は、各サブライブラリ内の位置の大部分について、最終ライブラリ内のアミノ酸使用がライブラリ設計と一致する（観察／設計されたアミノ酸の頻度＝０．１〜２）ことも確認した。アミノ酸使用が予想される範囲内に含まれなかった場合、それぞれの場合のアミノ酸をその位置において１０％未満で生じるように設計した。例えば、各ライブラリにおいて、イソロイシンはＫａｂａｔ位置９８においてわずかに過剰に表示され（観察＝０．１２対設計０．０５）、チロシンはＫａｂａｔ位置１０２においていくらか過剰に表示された（観察＝０．２１対設計０．１）。１つのサブライブラリにつき１０００００のランダムに選択した個々の読取りデータを用いて、ＶＬ生殖系列の多様性についての情報を作成した（図５）。３つの最も頻繁に使用されるＶＬ生殖系列はＩＧＬＶ１−４４＊０１、ＩＧＶ３−１９＊０１およびＩＧＬＶ１−４０＊０１であり、それぞれ各サブライブラリの７〜１０％に相当する。最も一般的なカッパ生殖系列はＩＧＫＶ３−２０＊０１であり、各サブライブラリの４〜５％に相当する。
実施例３：モデル抗原ＳＣＦおよびインスリンに対するＥＧ３ライブラリからのｓｃＦｖの単離
通常の可溶性抗原に対するＥＧ３ライブラリの性能を試験するために、２つのモデル抗原、ヒトインスリンおよびヒト幹細胞因子（ＳＣＦ）に対して選択を実施した。本質的にＶａｕｇｈａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４、３０９−３１４（１９９６）およびＨａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６、８８９−８９６（１９９２）に記載されるように、ビオチン化組換えヒトＳＣＦ ＥＣＤ（残基１〜２１４；ＨＥＫ２９３ＥＢＮＡ細胞内で産生）、またはビオチン化ウシインスリン（ＳｉｇｍａカタログＩ５５００、ＥＺ ｌｉｎｋ Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＬＣ−Ｂｉｏｔｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ／Ｐｉｅｒｃｅ，２１３３５）を用いて遊離アミンを介してビオチン化）に対する可溶性選択により、ＳＣＦまたはインスリンに特異的なｓｃＦｖ抗体をＥＧ３ライブラリから単離し、２つのこれまでに記載されたヒトｓｃＦｖ抗体ライブラリ（Ｇｒｏｖｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，３１３：１２９−１３９（２００６）；Ｌｌｏｙｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２２（３）：１５９−６８（２００９））に対して比較した。簡単には、１０９〜１０１２のｓｃＦｖ−ファージ粒子をＭＰＢＳ（ＰＢＳ＋３％（ｗ／ｖ）Ｍａｒｖｅｌスキムミルク粉末）中、室温で１時間ブロックした。５０μｌのストレプトアビジンコートした常磁性ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）、Ｍ−２８０）を、ブロックしたファージに添加した後、１時間インキュベーションを行なった。ストレプトアビジンビーズを磁石で捕捉し、ビオチン化ＳＣＦまたはインスリンを１００ｎＭ（ラウンド１）または５０ｎＭ（ラウンド２）の最終濃度になるまで添加した。室温で１時間のインキュベーション後、次に抗原に結合したｓｃＦｖを、ストレプトアビジンコートした常磁性ビーズ上に捕捉した。ＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０）でビーズを十分に洗浄することにより、非結合ファージを除去した。５μｇ／ｍｌのトリプシンの添加により、抗原上に保持されたファージ粒子を溶出させ、その後、３７℃で３０分間のインキュベーションを行なった。ビーズを磁石上に捕捉し、上清を使用して対数期のＴＧ１大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を感染させた後、次の選択ラウンドのためにファージの救済を行なった。２つの選択ラウンドをこのようにして実施した。
上記の２つの選択ラウンド後の選択出力からの９６の個々のクローン（対照クローンを含む）を９６ウェルプレートにおいて成長させた。一本鎖Ｆｖ断片をファージ粒子上に提示させ、結合アッセイで試験して関連の選択抗原に対する特異性を決定した。ファージ提示されたｓｃＦｖ上清サンプルは、９６ウェルのディープウェルプレートにおいて以下のように生成させた。９６ウェルのマスタープレートの各ウェルからの５μｌの培養物を、５００μｌの２ＴＹＡＧ（２ＴＹ＋１００μｇ／ｍｌのアンピシリン＋２％のグルコース）培地を含有するＧｒｅｉｎｅｒディープウェル培養プレートに移し、３７℃、２８０ｒｐｍで５時間インキュベートした。次に、Ｋ０７Ｍ１３ヘルパーファージ（２ＴＹＡＧ中１．５ｘ１０１１ｐｆｕ／ｍｌに希釈）を１００μｌ／ウェルで添加し、プレートを３７℃、１５０ｒｐｍでインキュベートして感染させた。３２００ｒｐｍで１０分間、プレートを遠心沈殿させて上清を除去した。５００μｌ／ウェルの２ＴＹＡＫ（２ＴＹ＋１００μｇ／ｍｌのアンピシリン＋５０μｇ／ｍｌのカナマイシン）中に細菌ペレットを再懸濁させ、プレートを２５℃、２８０ｒｐｍで一晩インキュベートした。朝に５００μｌの２ｘＰＢＳ中６％（ｗ／ｖ）のスキムミルク粉末を各ウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。次に、プレートを３２００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、ブロックされたファージ提示ｓｃＦｖ上清をＥＬＩＳＡ実験に直接使用した。
ストレプトアビジンプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ，６５５９９０）を、ＰＢＳ中２．５μｇ／ｍｌのビオチン化抗原でコートし、４℃で一晩インキュベートした。プレートをＰＢＳで３回洗浄し、３００μｌ／ウェルのＭＰＢＳにより室温で１時間ブロックした。プレートをＰＢＳで１回洗浄し、ブロックされたファージサンプルを添加した（５０μｌ／ウェル、室温で１時間）。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ファージ提示ｓｃＦｖの検出のために、５０μｌ／ウェルのＭＰＢＳ中１：５０００希釈の抗Ｍ１３−ＨＲＰ抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ，２７−９４２１−０１）を各ウェルに添加し、その後、室温で１時間のインキュベーションを行なった。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＴＭＢ、５０μｌ／ウェル（Ｓｉｇｍａ，Ｔ０４４０）で現像した。５０μｌ／ウェルの０．１ＭのＨ２ＳＯ４により反応を停止させた後、４５０ｎｍにおいてＥｎＶｉｓｉｏｎＴＭプレートリーダーの読取りを行なった。４５０ｎｍにおける吸光度が０．５よりも大きく、無関係の抗原に対する同じサンプルの吸光度が０．１よりも小さければ、ファージ提示ｓｃＦｖは選択抗原に結合すると考えられた。ＳＣＦまたはインスリン結合クローンのｓｃＦｖ遺伝子の配列決定を実行して、選択されたクローンのＶＨＣＤＲ３多様性を評価した。２つの可溶性選択ラウンド後の３つのファージライブラリの全てから、両方の抗原について特異的なバインダーの多様なパネルを同定した。
Figure 2018514573
実施例４：ファージディスプレイ選択を用いて単離されたイオンチャネルに対する抑制抗体の同定および特徴付け
ＥＧ３ライブラリがイオンチャネルなどのより挑戦的な種類の標的に対する抗体を同定するために十分に適しているかどうかを決定するために、イオンチャネルＰ２Ｘ４において選択を実施した。本明細書に記載されるファージディスプレイを用いて例示的なＰ２Ｘ４抑制抗体１〜４を得た。ナイーブなヒト一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）ファージディスプレイライブラリを糸状ファージＭ１３に基づくファージミドベクターにクローン化し、選択のために使用した（Ｌｌｏｙｄ（２００９）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ ２２，１５９−１６８；Ｖａｕｇｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，３０９−３１４，１９９６）。本質的にＶａｕｇｈａｎ ｅｔ ａｌ（Ｖａｕｇｈａｎ ｅｔ ａｌ．，上記）によって既に記載されたように、組換えヒトＰ２Ｘ４（ｈｕ Ｐ２Ｘ４）における一連の選択サイクルを用いて、ＥＧ３ライブラリ、またはこれまでに記載されたナイーブファージディスプレイライブラリ（集合的にＣＡＴ２．０ライブラリと称される）から抗Ｐ２Ｘ４特異的抗体を単離した。簡単には、ＰＢＳ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ＰＢＳ、ｐＨ７．４）中のヒトＰ２Ｘ４をＭａｘｉＳｏｒｐ（登録商標）マイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ）のウェルに４℃で一晩固定化した。ウェルをＰＢＳで洗浄してから、ＰＢＳ−Ｍａｒｖｅｌ乾燥スキンミルク（３％ｗ／ｖ）により１時間ブロックした。ＰＢＳ−Ｍａｒｖｅｌ（３％ｗ／ｖ）中の精製ファージをウェルに添加し、コートされた抗原と室温で１時間結合させた。ＰＢＳを用いる一連の洗浄サイクルにより、非結合ファージを除去した。３７℃で３０分間、トリプシンを用いて結合ファージ粒子を溶出させ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＧ１細菌に感染させ、次の選択ラウンドのために救済した。
ファージディスプレイ選択からのヒトＰ２Ｘ４抗体の同定
記載（上記）されたファージディスプレイ法から同定されたＳｃＦｖ抗体を細菌内で発現させ、０．２ＭのＨＥＰＥＳ緩衝液ｐＨ７．４、０．５ｍＭのＥＤＴＡおよび０．５Ｍのスクロース中で調製した未精製細菌ペリプラズム抽出物（ｓｃＦｖを含有する）としてスクリーニングした。あるいは、重鎖および軽鎖可変領域をＰＣＲにより増幅し、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞においてヒトＩｇＧ１抗体として発現させるためにベクターにクローン化した。細菌ｓｃＦｖサンプルのスクリーニングのために、３８４ウェルのアッセイプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ ３６５５）に５μｌの細菌抽出物を添加した。アッセイ緩衝液を以下のように調製し、細菌ｓｃＦｖ抽出物を含むアッセイプレートに５μｌを添加した：１Ｘ Ｈａｎｋｓ平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）（Ｓｉｇｍａ Ｈ８２６４）、０．１％（ｖ／ｖ）ＢＳＡ（ＰＡＡ Ｋ０５−０１３）、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ １５６３０）および１Ｕ／ｍｌのアピラーゼ（Ｓｉｇｍａ Ａ６５３５）。抗ｍｙｃ検出（Ｓｅｒｏｔｅｃ ＭＣＡ２２０）および抗マウスＤｙＬｉｇｈｔ６４９（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ １１５−４９５−０７１）をアッセイ緩衝液中で同じ溶液にそれぞれ１５．６ｎＭおよび２４ｎＭに希釈し、ｓｃＦｖサンプルを含むアッセイプレートに５ｕｌを添加した。ヒトＰ２Ｘ４（ｈｕＰ２Ｘ４）を発現するＨＥＫ２９３Ｆ細胞（Ｑ９９５７１、ＥＮＳＰ０００００３３６６０７）をアッセイ緩衝液中で２．６ｅ５細胞／ｍｌに希釈し、１５μｌをアッセイプレートに添加した。並行して、ｈｕＰ２Ｘ４を発現しないＨＥＫ２９３Ｆ細胞への結合についてもｓｃＦｖサンプルを試験した。
ＨＥＫ２９３Ｆ発現ＩｇＧサンプルのスクリーニングのために、２．５μｌの細胞培養上清を３８４ウェルのアッセイプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ ３６５５）に添加した。アッセイ緩衝液を上記のように調製し、ＩｇＧサンプルを含むアッセイプレートに７．５μｌを添加した。抗ヒトＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ６４７（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ａ２１４４５）をアッセイ緩衝液中で６ｎＭに希釈し、ＩｇＧサンプルを含むアッセイプレートに１０ ｌを添加した。ｈｕＰ２Ｘ４を発現するＨＥＫ２９３Ｆ細胞（Ｑ９９５７１、ＥＮＳＰ０００００３３６６０７）をアッセイ緩衝液中で４ｅ５細胞／ｍｌに希釈し、１０ ｌをアッセイプレートに添加した。並行して、ｈｕＰ２Ｘ４を発現しないＨＥＫ２９３Ｆ細胞への結合についてもＩｇＧサンプルを試験した。両方のタイプのサンプルをスクリーニングするためにセットアップしたアッセイプレートをＴｏｐｓｅａｌプレートシーラー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ６００５２５０）により密封し、室温で少なくとも４時間インキュベートした後、マイクロウェルの底に定着したビーズまたは細胞に局在化された蛍光を検出する蛍光ベースのプラットフォームである蛍光微量アッセイ技術（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｍｉｃｒｏｖｏｌｕｍｅ Ａｓｓａｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）（ＦＭＡＴ）において読取りを行なった（Ｄｉｅｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ２３：１７７−１８６（１９９６）、Ｍｉｒａｇｌｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ４：１９３−２０４（１９９９））。ＦＭＡＴ分析ソフトウェアを用いてデータを分析し、０〜１０，０００ＦＬ１カウントの蛍光、通常、０．１５〜０．４０の色および１０〜６０のサイズに基づいて事象をゲーティングした。２０の事象の最小カウントを閾値として設定した後、各ウェルについてのデータを報告した。ｈｕＰ２Ｘ４細胞においてＦＬ１カウントが１０００を超えるかどうかをさらに試験するために、ＨＥＫ２９３Ｆ ｈｕＰ２Ｘ４細胞への結合を示すが、対照ＨＥＫ２９３Ｆ細胞への結合は示さないＳｃＦｖを選択した。２００よりも大きいＦＬ１カウントを有する特異的なｈｕＰ２Ｘ４結合シグナルを示すＩｇＧサンプルをヒットとして同定し、さらに特徴付けた。
未精製サンプルとしてＨＥＫ２９３Ｆ ｈｕＰ２Ｘ４細胞への特異的な結合シグナルを示すｓｃＦｖまたはＩｇＧサンプルにＤＮＡシーケンシングを行なった（Ｖａｕｇｈａｎ ｅｔ ａｌ．上記、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：３０９−３１４）、（Ｏｓｂｏｕｒｎ １９９６；Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２，１８１−１９６）。特有のｓｃＦｖを細菌内で発現させ、アフィニティクロマトグラフィにより精製した（Ｂａｎｎｉｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ（２００６）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，９４．９３１−９３７によって記載される通り）。電気生理学において精製抗体を機能活性について試験した。
Figure 2018514573
Ｐ２Ｘ４に対するモノクローナル抗体の電気生理学的な特徴付け
ヒトＰ２Ｘ４を安定して発現するＨＥＫ ２９３Ｆ細胞を、アキュターゼ（ａｃｃｕｔａｓｅ）を用いて５０％の集密度で回収した。次に、ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）＋アピラーゼ（１Ｕ／ｍｌ、ＡＴＰアーゼ／ＡＤＰアーゼ活性＝１）を補充した１０ｍｌのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ ２９３Ｆ培地中に２〜３ｅ６細胞／ｍｌの密度で細胞を再懸濁させた。集団パッチ（ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｐａｔｃｈ）配置の自動化電気生理学プラットフォームＱＰａｔｃｈ １６Ｘ（Ｓｏｐｈｉｏｎ）を用いてＰ２Ｘ４の機能をアッセイした。ＱＰａｔｃｈ細胞外緩衝液（ＱＥＢ）の組成は、（ｍＭ単位で）ＮａＣｌ（１４０）、ＫＣｌ（２）、ＭｇＣｌ２（１）ＣａＣｌ２（２）、ＨＥＰＥＳ（１０）であった。コンパウンドプレート細胞外緩衝液（ＣＰＥＢ１）の最終組成は、ＮａＣｌ（１３７．６）、ＫＣｌ（２．２）、ＭｇＣｌ２（０．６６）、ＣａＣｌ２（１．３）、ＨＥＰＥＳ（６．６）、ＫＨ２ＰＯ４（０．４９）、ＮａＨ２ＰＯ４（２．６６）であった。細胞外緩衝液のｐＨをＮａＯＨ（１Ｍ）により７．４に調整し、モル浸透圧濃度をスクロースにより３００ｍＯｓｍに調整し、溶液を０．２μｍでろ過した。コンパウンドプレート細胞外緩衝液に０．１％ウシ血清アルブミンを補充した。ＱＰａｔｃｈ細胞内緩衝液は、（ｍＭ単位で）ＣｓＦ（１４０）、ＮａＣｌ（１０）、ＥＧＴＡ（１）、ＨＥＰＥＳ（１０）を含有した。細胞内緩衝液のｐＨをＣｓＯＨ（１Ｍ）により７．３に調整し、溶液を０．２μｍでろ過した。ＩｇＧをＮａＯＨ（１Ｍ）によりｐＨ７．４に滴定した。
全細胞配置を得た後、７０％直列抵抗補償を用いて細胞を−５０ｍＶで電圧固定した。ＣＰＥＢ１中のリガンドアゴニストのアデノシン５’−三リン酸二ナトリウム塩（ＡＴＰ、３μＭ）を２０分間、５分毎に３秒間適用し、４つの対照アゴニスト応答を得た。各アゴニスト応答は、ＣＰＥＢ１＋アピラーゼ（１Ｕ／ｍｌ）で洗い落とした。次に、試験ＩｇＧまたはアイソタイプ対照ＩｇＧ（ＮＩＰ２２８）の持続的な存在下で４つの付加的なアゴニスト応答を５分毎に測定した。
４つのＩｇＧはヒトＰ２Ｘ４電流を有意に抑制し（抗体番号１、２、３および４）、そのうちの２つの抗体１および４は完全に抑制し、それぞれＩＣ５０が１９．６および３．８ｎＭであることが分かった。Ｐ２Ｘ４電流の抑制は急速であり、ＩｇＧ添加後の最初の時点で生じたが、アイソタイプ対照ＩｇＧ ＮＩＰ ２２８ ＣＭＣは有意な効果を示さなかった。比較すると、ＣＡＴ ２．０ライブラリからの３３０００のｓｃＦｖの全スクリーニングからは、ヒトＰ２Ｘ４電流を完全に抑制する１つのみの抗体が単離された（Ｌｌｏｙｄ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ２２（３）１５９−１６８）。
Figure 2018514573
Figure 2018514573

Claims (45)

  1. ヒトｓｃＦｖを提示するファージライブラリであって、前記ライブラリにより提示されるヒトｓｃＦｖ可変重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ Ｈ３）の少なくとも５０％が少なくとも１８アミノ酸長である、ファージライブラリ。
  2. 前記ライブラリにより提示される前記ヒトｓｃＦｖ可変重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ Ｈ３）の少なくとも６０％が少なくとも１８アミノ酸長である、請求項１に記載のファージライブラリ。
  3. 前記ライブラリにより提示される前記ヒトｓｃＦｖ可変重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ Ｈ３）の少なくとも７０％が少なくとも１８アミノ酸長である、請求項１に記載のファージライブラリ。
  4. 前記ライブラリにより提示される前記ヒトｓｃＦｖ可変重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ Ｈ３）の少なくとも８０％が少なくとも１８アミノ酸長である、請求項１に記載のファージライブラリ。
  5. 前記ライブラリにより提示される前記ヒトｓｃＦｖ可変重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ Ｈ３）の少なくとも９０％が少なくとも１８アミノ酸長である、請求項１に記載のファージライブラリ。
  6. 前記ＣＤＲ Ｈ３可変重鎖が１８〜３０アミノ酸長である、請求項１〜５のいずれか一項に記載のファージライブラリ。
  7. 前記ＣＤＲ Ｈ３可変重鎖が２０〜３０アミノ酸長である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のファージライブラリ。
  8. 前記ＣＤＲ Ｈ３可変重鎖が２０〜２４アミノ酸長である、請求項１〜７のいずれか一項に記載のファージライブラリ。
  9. 少なくとも１８アミノ酸長であるＣＤＲ Ｈ３を有する抗体のヒト生殖系列配列から作製される、請求項１〜８のいずれか一項に記載のファージライブラリ。
  10. 少なくとも１８アミノ酸長であるＣＤＲ Ｈ３を有する抗ＦＰＲ１抗体のヒト生殖系列配列から作製される、請求項１〜９のいずれか一項に記載のファージライブラリ。
  11. 前記抗ＦＰＲ１抗体が、２４アミノ酸長であるＣＤＲ Ｈ３を有する、請求項１０に記載のファージライブラリ。
  12. 前記抗ＦＰＲ−１抗体がＦＰＲ０１６５である、請求項１１に記載のファージライブラリ。
  13. 標的抗原に対する機能性ヒト抗体またはその抗原結合性断片を作製するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のライブラリの使用。
  14. 標的抗原に対する機能性ヒト抗体またはその抗原結合性断片を作製する方法であって、前記標的抗原に対して特異的なヒト抗体を、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のライブラリから単離することを含む方法。
  15. 前記ヒト抗体がその標的抗原に特異的に結合し、かつ少なくとも１８アミノ酸長であるＣＤＲ Ｈ３を有する、請求項１３に記載の使用または請求項１４に記載の方法によって得ることができるヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  16. ヒト抗体またはその抗原結合性断片であって、その標的抗原に特異的に結合し、かつ少なくとも１８アミノ酸長であるＣＤＲ Ｈ３を有するヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  17. 前記ＣＤＲ Ｈ３可変重鎖が１８〜３０アミノ酸長である、請求項１５または１６に記載のヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  18. 前記ＣＤＲ Ｈ３可変重鎖が２０〜３０アミノ酸長である、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載のヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  19. 前記ＣＤＲ Ｈ３可変重鎖が２０〜２４アミノ酸長である、請求項１５〜１８のいずれか一項に記載のヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  20. 膜内在性タンパク質に特異的に結合する、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載のヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  21. 前記膜内在性タンパク質が、
    （ｉ）イオンチャネル、
    （ｉｉ）輸送タンパク質、または
    （ｉｉｉ）ＧＰＣＲ
    である、請求項２０に記載のヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  22. 前記膜内在性タンパク質が２つ以上の膜貫通ドメインを含む、請求項２０に記載のヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  23. ２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５またはそれを超える膜貫通ドメインを含む、請求項２０に記載のヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  24. 前記抗体がウイルスカプシドタンパク質に特異的に結合する、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載のヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  25. 前記抗体がアンタゴニストである、請求項１５〜２４のいずれか一項に記載のヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  26. 前記抗体がアゴニストである、請求項１５〜２４のいずれか一項に記載のヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  27. 前記抗体またはその抗原結合性断片の標的抗原に対して５０ナノモル濃度未満のＩＣ５０を有する、請求項１５〜２６のいずれか一項に記載のヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  28. 前記抗体またはその抗原結合性断片の標的抗原に対して２０ナノモル濃度未満のＩＣ５０を有する、請求項１５〜２６のいずれか一項に記載のヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  29. 前記抗体またはその抗原結合性断片の標的抗原に対して１０ナノモル濃度未満のＩＣ５０を有する、請求項１５〜２６のいずれか一項に記載のヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  30. モノクローナルである、請求項１５〜２９のいずれか一項に記載のヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  31. Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖ断片である、請求項１５〜３０のいずれか一項に記載の抗体の抗原結合性断片。
  32. 前記ＣＤＲ Ｈ３が２０アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列：
    位置１：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
    位置２：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置３：Ｒ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
    位置４：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置５：Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置６：Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置７：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置８：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置９：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１０：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１１：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１２：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１３：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１４：Ｒ、Ｋ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置１５：Ｒ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１６：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
    位置１７：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置１８：Ｐ、Ｍ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
    位置１９：Ｄ
    位置２０：Ｐ、Ｙ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のライブラリまたは請求項１５〜３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片。
  33. 前記ＣＤＲ Ｈ３が２１アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列：
    位置１：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
    位置２：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置３：Ｒ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
    位置４：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置５：Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置６：Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置７：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置８：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置９：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１０：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１１：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１２：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１３：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１４：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１５：Ｒ、Ｋ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置１６：Ｒ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１７：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
    位置１８：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置１９：Ｐ、Ｍ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
    位置２０：Ｄ
    位置２１：Ｐ、Ｙ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のライブラリまたは請求項１５〜３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片。
  34. 前記ＣＤＲ Ｈ３が２２アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列：
    位置１：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
    位置２：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置３：Ｒ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
    位置４：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置５：Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置６：Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置７：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置８：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置９：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１０：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１１：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１２：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１３：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１４：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１５：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１６：Ｒ、Ｋ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置１７：Ｒ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１８：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
    位置１９：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置２０：Ｐ、Ｍ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
    位置２１：Ｄ
    位置２２：Ｐ、Ｙ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のライブラリまたは請求項１５〜３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片。
  35. 前記ＣＤＲ Ｈ３が２３アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列：
    位置１：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
    位置２：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置３：Ｒ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
    位置４：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置５：Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置６：Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置７：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置８：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置９：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１０：Ｒ、Ｄ、Ｑ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置１１：Ｋ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１２：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１３：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１４：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１５：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１６：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１７：Ｒ、Ｋ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置１８：Ｒ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１９：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
    位置２０：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置２１：Ｐ、Ｍ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
    位置２２：Ｄ
    位置２３：Ｐ、Ｙ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のライブラリまたは請求項１５〜３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片。
  36. 前記ＣＤＲ Ｈ３が２４アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列：
    位置１：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
    位置２：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置３：Ｒ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
    位置４：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置５：Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置６：Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置７：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置８：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置９：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１０：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１１：Ｒ、Ｄ、Ｑ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置１２：Ｋ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１３：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１４：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１５：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１６：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１７：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１８：Ｒ、Ｋ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置１９：Ｒ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置２０：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
    位置２１：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置２２：Ｐ、Ｍ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
    位置２３：Ｄ
    位置２４：Ｐ、Ｙ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のライブラリまたは請求項１５〜３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片。
  37. 前記ＣＤＲ Ｈ３が２４アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列：
    位置１：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
    位置２：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置３：Ｒ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
    位置４：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置５：Ｋ、Ｄ、Ｈ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置６：Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置７：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置８：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置９：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１０：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１１：Ｃ
    位置１２：Ｋ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１３：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１４：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１５：Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置１６：Ｃ
    位置１７：Ｒ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１８：Ｒ、Ｋ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置１９：Ｒ、Ｅ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置２０：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
    位置２１：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置２２：Ｐ、Ｍ、Ｆ、Ｌからなるリストから選択される
    位置２３：Ｄ
    位置２４：Ｐ、Ｙ、Ｌ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のライブラリまたは請求項１５〜３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片。
  38. 前記ＣＤＲ Ｈ３が２０アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列：
    位置１：Ｒ、Ｄ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置２：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌからなるリストから選択される
    位置３：Ｒ、Ｐ、Ｙ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
    位置４：Ｒ、Ｙ、Ｇ、Ｉからなるリストから選択される
    位置５：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｍからなるリストから選択される
    位置６：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置７：Ｒ、Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置８：Ｄ、Ｓ、Ｇ、Ｍ、Ｖからなるリストから選択される
    位置９：Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１０：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１１：Ｅ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１２：Ｙ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１３：Ｒ、Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１４：Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１５：Ｙからなるリストから選択される
    位置１６：Ｄ、Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１７：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置１８：Ｍ、Ｆからなるリストから選択される
    位置１９：Ｄ
    位置２０：Ｐ、Ｙ、Ｖからなるリストから選択される
    を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のライブラリまたは請求項１５〜３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片。
  39. 前記ＣＤＲ Ｈ３が２１アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列：
    位置１：Ｒ、Ｄ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置２：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌからなるリストから選択される
    位置３：Ｒ、Ｐ、Ｙ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
    位置４：Ｒ、Ｙ、Ｇ、Ｉからなるリストから選択される
    位置５：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｍからなるリストから選択される
    位置６：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置７：Ｒ、Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置８：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置９：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１０：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１１：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１２：Ｅ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１３：Ｙ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１４：Ｒ、Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１５：Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１６：Ｙ
    位置１７：Ｄ、Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１８：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置１９：Ｍ、Ｆからなるリストから選択される
    位置２０：Ｄ
    位置２１：Ｐ、Ｙ、Ｖからなるリストから選択される
    を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のライブラリまたは請求項１５〜３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片。
  40. 前記ＣＤＲ Ｈ３が２２アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列：
    位置１：Ｒ、Ｄ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置２：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌからなるリストから選択される
    位置３：Ｒ、Ｐ、Ｙ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
    位置４：Ｒ、Ｙ、Ｇ、Ｉからなるリストから選択される
    位置５：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｍからなるリストから選択される
    位置６：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置７：Ｒ、Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置８：Ｄ、Ｓ、Ｇ、Ｍ、Ｖからなるリストから選択される
    位置９：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１０：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１１：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１２：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１３：Ｅ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１４：Ｙ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１５：Ｒ、Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１６：Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１７：Ｙ
    位置１８：Ｄ、Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１９：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置２０：Ｍ、Ｆからなるリストから選択される
    位置２１：Ｄ
    位置２２：Ｐ、Ｙ、Ｖからなるリストから選択される
    を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のライブラリまたは請求項１５〜３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片。
  41. 前記ＣＤＲ Ｈ３が２３アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列：
    位置１：Ｒ、Ｄ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置２：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌからなるリストから選択される
    位置３：Ｒ、Ｐ、Ｙ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
    位置４：Ｒ、Ｙ、Ｇ、Ｉからなるリストから選択される
    位置５：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｍからなるリストから選択される
    位置６：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置７：Ｒ、Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置８：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置９：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１０：Ｒ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置１１：Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１２：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１３：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１４：Ｅ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１５：Ｙ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１６：Ｒ、Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１７：Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１８：Ｙ
    位置１９：Ｄ、Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
    位置２０：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置２１：Ｍ、Ｆからなるリストから選択される
    位置２２：Ｄ
    位置２３：Ｐ、Ｙ、Ｖからなるリストから選択される
    を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のライブラリまたは請求項１５〜３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片。
  42. 前記ＣＤＲ Ｈ３が２４アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列：
    位置１：Ｒ、Ｄ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置２：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌからなるリストから選択される
    位置３：Ｒ、Ｐ、Ｙ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
    位置４：Ｒ、Ｙ、Ｇ、Ｉからなるリストから選択される
    位置５：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｍからなるリストから選択される
    位置６：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置７：Ｒ、Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置８：Ｄ、Ｓ、Ｇ、Ｍ Ｖからなるリストから選択される
    位置９：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１０：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１１：Ｒ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置１２：Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１３：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１４：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１５：Ｅ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１６：Ｙ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１７：Ｒ、Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１８：Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１９：Ｙ
    位置２０：Ｄ、Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
    位置２１：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置２２：Ｍ、Ｆからなるリストから選択される
    位置２３：Ｄ
    位置２４：Ｐ、Ｙ、Ｖからなるリストから選択される
    を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のライブラリまたは請求項１５〜３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片。
  43. 前記ＣＤＲ Ｈ３が２４アミノ酸長であり、かつ以下のアミノ酸配列：
    位置１：Ｒ、Ｄ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置２：Ｒ、Ｄ、Ｐ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌからなるリストから選択される
    位置３：Ｒ、Ｐ、Ｙ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｆ、Ｖからなるリストから選択される
    位置４：Ｒ、Ｙ、Ｇ、Ｉからなるリストから選択される
    位置５：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｍからなるリストから選択される
    位置６：Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖ、Ｉからなるリストから選択される
    位置７：Ｒ、Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置８：Ｄ、Ｓ、Ｇ、Ｍ Ｖからなるリストから選択される
    位置９：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１０：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１１：Ｃ
    位置１２：Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１３：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１４：Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１５：Ｅ、Ｙ、Ｓ、Ｇ、Ｖからなるリストから選択される
    位置１６：Ｃ
    位置１７：Ｒ、Ｙ、Ｓ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１８：Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
    位置１９：Ｙ
    位置２０：Ｄ、Ｙ、Ｇからなるリストから選択される
    位置２１：Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａからなるリストから選択される
    位置２２：Ｍ、Ｆからなるリストから選択される
    位置２３：Ｄ
    位置２４：Ｐ、Ｙ、Ｖからなるリストから選択される
    を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のライブラリまたは請求項１５〜３１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片。
  44. 前記ＣＤＲ Ｈ３可変重鎖が１８〜３０、２０〜３０、または２０〜２４アミノ酸長である、請求項３２〜４３のいずれか一項に記載のライブラリから得ることができるヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  45. 請求項３２〜４３のいずれか一項に記載のライブラリから得られる、請求項４４に記載のヒト抗体またはその抗原結合性断片。
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