JP2018513128A

JP2018513128A - Ｉｓｇ１５及びアジュバントとしてのその使用

Info

Publication number: JP2018513128A
Application number: JP2017548971A
Authority: JP
Inventors: ウェイナーデイビッド; ビラリールダニエル
Original assignee: ザトラスティーズオブザユニバーシティオブペンシルバニア
Priority date: 2015-03-20
Filing date: 2016-03-18
Publication date: 2018-05-24
Also published as: US10792358B2; EP3271024A1; CA2987247A1; WO2016154071A1; AU2016235437B2; US20180078638A1; EP3271024A4; HK1249066A1; AU2019202634A1; CN107530557A; KR20170132202A; AU2016235437A1

Abstract

抗原及びＩＳＧ１５を含むワクチンが本明細書において開示される。免疫応答の増強を必要とする対象にそれを行うための方法も本明細書において開示される。治療を必要とする対象にそれを行うための方法が本明細書において更に開示される。本方法は、対象に本ワクチンを投与することを含み得る。【選択図】なし

Description

本発明は、抗原及びＩＳＧ１５を含むワクチン、ならびにかかるワクチンを投与する方法に関する。

ワクチンは、個体において免疫応答を刺激し、特定の疾患に対する保護及び／または治療を提供するために使用される。いくつかのワクチンは、免疫応答を誘導するための抗原を含む。強い免疫応答を誘発する抗原もあれば、弱い免疫応答を誘発する抗原もある。抗原に対する弱い免疫応答は、ワクチンにアジュバントを含めることにより増強することができる。アジュバントには、例えば、アルミニウム塩、油乳剤、細菌または他の病原体の殺菌成分、サイトカイン等の多くの異なる形態がある。

インターフェロン刺激遺伝子１５（ＩＳＧ１５）は、Ｉ型インターフェロン刺激により誘導される最初のかつ最も豊富なタンパク質の１つである。ＩＳＧ１５は、抗ウイルス防御において主要な役割を担うユビキチン様タンパク質である。そのユビキチン様Ｃ末端（ＬＲＬＲＧＧ）モチーフは、「抱合型」ＩＳＧ１５を産生するＩＳＧｙｌａｔｉｏｎとして知られる過程における様々な細胞内タンパク質へのその抱合に必要である。この抱合形態にない場合、遊離または「未抱合」ＩＳＧ１５は、細胞内にまたは細胞外に存在することができる。長年にわたって、遊離ＩＳＧ１５は、ＩＦＮγの産生に関連付けられてきた。近年、新しい研究が、ＩＳＧ１５欠損がＩＦＮγの損失に関連し、そして次にこれがマウス及びヒトの両方におけるマイコバクテリア症に対する感受性の増強をもたらしたことを示すことによって、ＩＳＧ１５のこのサイトカイン様役割を確認した。これらの研究はＩＳＧ１５が免疫調節分子として機能する能力を確立したが、ＣＤ８Ｔ細胞免疫応答に影響を及ぼし、ワクチンアジュバントとして作用するその能力は未知のままである。

ワクチンはまた、多くの異なる様式（例えば、注射、経口的等）で多くの異なる組織（例えば、筋肉内、経鼻等）に投与される。しかしながら、すべての送達方法が等しいわけではない。個体集団内におけるより高いコンプライアンスを可能にする送達方法がある一方で、ワクチンの免疫原性及び／または安全性に影響を及ぼし得る送達方法もある。したがって、抗原に対する免疫応答を増強する、安全かつより効果的なアジュバントの開発の必要性が、依然として当前記技術分野に存在する。

本発明は、抗原及びＩＳＧ１５を含むワクチンを対象とする。ＩＳＧ１５は、配列番号１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号１に記載のヌクレオチド配列、配列番号３に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号３に記載のヌクレオチド配列、配列番号５に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号５に記載のヌクレオチド配列、配列番号７に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号７に記載のヌクレオチド配列、配列番号９に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、及び配列番号９に記載のヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列によってコードされ得る。ＩＳＧ１５は、配列番号１に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。ＩＳＧ１５は、配列番号３に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。ＩＳＧ１５は、配列番号５に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。ＩＳＧ１５は、配列番号７に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。ＩＳＧ１５は、配列番号９に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。

抗原は、第１の核酸によってコードされ得、ＩＳＧ１５は、第２の核酸によってコードされ得る。第２の核酸は、発現ベクターを更に含み得る。第１の核酸は、発現ベクターを更に含み得る。ワクチンは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、または配列番号９のうちの１つによってコードされる抗原ペプチドを更に含み得る。ワクチンは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、または配列番号１０のうちの１つによってコードされるＩＳＧ１５ペプチドを更に含み得る。ワクチンは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、または配列番号９のうちの１つによってコードされる抗原ペプチド、及び配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、または配列番号１０のうちの１つによってコードされるＩＳＧ１５ペプチドを更に含み得る。

抗原は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原、インフルエンザ抗原、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ抗原、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原、リンパ性脈絡髄膜炎（ＬＣＭＶ）抗原、及びそれらの断片からなる群から選択され得る。ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ１６Ｅ６抗原、ＨＰＶ１６Ｅ７抗原、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。ＨＩＶ抗原は、ＥｎｖＡ、ＥｎｖＢ、ＥｎｖＣ、ＥｎｖＤ、ＢＮｅｆ−Ｒｅｖ、Ｇａｇ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され得る。インフルエンザ抗原は、Ｈ１ＨＡ、Ｈ２ＨＡ、Ｈ３ＨＡ、Ｈ５ＨＡ、ＢＨＡ抗原、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され得る。Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ抗原は、サーカムスポロゾイト（ＣＳ）抗原を含んでもよい。Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原は、Ａｇ８５Ａ、Ａｇ８５Ｂ、ＥｓｘＡ、ＥｓｘＢ、ＥｓｘＣ、ＥｓｘＤ、ＥｓｘＥ、ＥｓｘＦ、ＥｓｘＨ、ＥｓｘＯ、ＥｓｘＱ、ＥｓｘＲ、ＥｓｘＳ、ＥｓｘＴ、ＥｓｘＵ、ＥｓｘＶ、ＥｓｘＷ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され得る。ＬＣＭＶ抗原は、核タンパク質（ＮＰ）、糖タンパク質（ＧＰ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。

ワクチンは、薬学的に許容される賦形剤を更に含み得る。

本発明はまた、免疫応答の増強または誘導を必要とする対象にそれを行うための方法も対象とする。本方法は、抗原及びＩＳＧ１５を含むワクチンを対象に投与することを含み得る。ＩＳＧ１５は、配列番号１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号１に記載のヌクレオチド配列、配列番号３に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号３に記載のヌクレオチド配列、配列番号５に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号５に記載のヌクレオチド配列、配列番号７に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号７に記載のヌクレオチド配列、配列番号９に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、及び配列番号９に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。ＩＳＧ１５は、配列番号１に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。ＩＳＧ１５は、配列番号３に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。ＩＳＧ１５は、配列番号５に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。ＩＳＧ１５は、配列番号７に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。ＩＳＧ１５は、配列番号９に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。

本ワクチンの投与は、電気穿孔を含み得る。対象における免疫応答は、少なくとも約２倍増強され得る。対象における免疫応答は、少なくとも約４倍増強され得る。対象における免疫応答の増強は、対象における細胞性免疫応答の増強を含み得る。

本発明は、癌の治療を必要とする対象にそれを行うための方法を更に対象とする。本方法は、抗原及びＩＳＧ１５を含むワクチンを対象に投与することを含み得る。ＩＳＧ１５は、配列番号１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号１に記載のヌクレオチド配列、配列番号３に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号３に記載のヌクレオチド配列、配列番号５に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号５に記載のヌクレオチド配列、配列番号７に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号７に記載のヌクレオチド配列、配列番号９に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、及び配列番号９に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。ＩＳＧ１５は、配列番号１に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。ＩＳＧ１５は、配列番号３に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。ＩＳＧ１５は、配列番号５に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。ＩＳＧ１５は、配列番号７に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。ＩＳＧ１５は、配列番号９に記載のヌクレオチド配列によってコードされ得る。

癌を治療するための方法は、対象における腫瘍の大きさを減少させることを更に含み得る。腫瘍の大きさは、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、対象において少なくとも１０％減少し得る。癌を治療するための方法は、対象における腫瘍退縮を増強することを更に含み得る。腫瘍退縮は、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、対象において少なくとも１０％増加され得る。癌は、ＨＰＶ関連癌、ＨＢＶ関連癌、卵巣癌、前立腺癌、乳癌、脳癌、頭頸部癌、咽喉癌、肺癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、骨癌、メラノーマ、転移性癌、ｈＴＥＲＴ関連癌、ＦＡＰ抗原関連癌、非小細胞肺癌、血液癌、食道扁平上皮癌、子宮頸癌、膀胱癌、結腸直腸癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、肛門癌、滑膜細胞腫、精巣癌、再発性呼吸器乳頭腫症、皮膚癌、神経膠芽腫、肝細胞癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、急性骨髄性白血病、トリプルネガティブ乳癌、及び原発性皮膚Ｔ細胞リンパ腫からなる群から選択され得る。癌は、ＨＰＶ関連癌であり得る。

本発明は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１と９５％以上同一であるヌクレオチド配列、配列番号３と９５％以上同一であるヌクレオチド配列、配列番号５と９５％以上同一であるヌクレオチド配列、配列番号７と９５％以上同一であるヌクレオチド配列、配列番号９と９５％以上同一であるヌクレオチド配列、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のヌクレオチド配列を含む核酸分子を更に対象とする。核酸分子は、プラスミドであってもよい。核酸分子は、１つ以上のプラスミドであってもよい。

ＤＮＡワクチンプラスミドをコードするＩＳＧ１５の生成及び発現。（Ａ）ＩＳＧ１５タンパク質ならびに野生型ＩＳＧ１５（ｗｔＩＳＧ１５）及び変異ＩＳＧ１５（ｍｕｔＩＳＧ１５）のアミノ酸配列の模式図である。ＩｇＥリーダー配列は下線付きで表示される。Ｃ末端ユビキチン様抱合部位は、太字で下線付きで表示される。ｍｕｔＩＳＧ１５の抱合モチーフ内に導入された変異部位（未抱合形態）は赤色である。（Ｂ）ＩＳＧ１５構築物のマップ。（Ｃ）ウエスタンブロット分析により検査されたＩＳＧ１５構築物の発現。一番下のバンドは遊離ＩＳＧ１５を表す。（Ｄ）トランスフェクトされたＲＤ細胞からの分泌されたｗｔＩＳＧ１５及びｍｕｔＩＳＧ１５の検出はＥＬＩＳＡを介して確認された。データは２つの複製アッセイについてのＳＥＭを伴う平均を表す。ＩＦＮγ産生を分泌するＩＳＧ１５ＤＮＡワクチン接種促進Ｅ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞免疫応答の共送達。（Ａ）ＤＮＡワクチンアジュバント研究の免疫スケジュール。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝４〜５／群）を、２週間間隔で２回、ＩＭ／ＥＰ送達を介して、ｗｔＩＳＧ１５もしくはｍｕｔＩＳＧ１５アジュバント構築物を含む、または含まないＨＰＶ１６構築物で免疫化した。最後のワクチン接種の１週間後、脾臓を採取してＡｇ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答を分析した。（Ｂ）各ワクチン接種後に誘導されたＥ７特異的ＩＦＮγ（スポット形成細胞／１０^６脾細胞）応答の頻度は、特異的ＣＤ８ＨＰＶ１６Ｅ７エピトープを含有するＥ７プールされたペプチド（ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号１１））に応答した、ＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔアッセイにより決定された。データは、１群当たり４〜５匹のマウスを用いた２つの独立した実験を表す。＊，Ｐ＜０．０５；＊＊，Ｐ＜０．０１。誤差棒はＳＥＭを示す。ＩＳＧ１５は多機能性ＨＰＶ１６Ｅ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞を誘導する。（Ａ）Ａｇ特異的ＣＤ８Ｔ細胞集団を特定するために使用されたゲート設定法の模式図である。（Ｂ〜Ｄ）。棒グラフは、Ｄ^ｂＥ７_{４９−５７}特異的ペプチドで刺激した後の全サイトカインＩＦＮγ（Ｂ）、ＴＮＦα（Ｃ）、及びＩＬ−２（Ｄ）を放出するＨＰＶ１６Ｅ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞の割合を示す。（Ｅ）縦棒グラフは、Ｅ７_{４９−５７}特異的刺激に対してエフェクターサイトカイン：ＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ−２を放出するシングル、ダブル、またはトリプルポジティブＣＤ８Ｔ細胞の多機能性亜集団を示す。円グラフは各サイトカイン集団の比率を表す。実験は、１群当たり４〜５匹のマウスを用いて、少なくとも２回行われ、結果は類似した。＊，ＨＰＶ１６群と比較してＰ＜０．０５。誤差棒はＳＥＭを示す。ＩＳＧ１５は、免疫化後に細胞傷害性脱顆粒を経るＨＰＶ１６Ｅ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞を誘導する。Ｄ^ｂＥ７_{４９−５７}制限（ＣＤ８）ペプチドで脾細胞を刺激した後、細胞内サイトカイン及びＣＤ１０７ａ染色により測定されたＥ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答が、最終免疫化１週間後の全動物群において検査された。（Ａ）脱顆粒マーカー発現ＣＤ１０７ａの染色により測定されたＣＤ８Ｔ細胞のＡｇ特異的細胞溶解性脱顆粒。（Ｂ及びＣ）棒グラフは、ＩＦＮγ（Ｂ）のみを同時発現する細胞溶解性ＣＤ８Ｔ細胞の発現頻度、または多機能性サイトカイン産生及び／もしくはＣＤ１０７ａ発現ＣＤ８Ｔ細胞の頻度（Ｃ）を示す。実験は、１群当たり４〜５匹のマウスを用いて、少なくとも２回行われ、結果は類似した。＊，Ｐ＜０．０５；＊＊，ＨＰＶ１６群と比較してＰ＜０．０１。誤差棒はＳＥＭを示す。ＩＳＧ１５はエフェクター−メモリーＥ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞集団の形成を増幅する。Ｂ６群マウス（ｎ＝４〜５）を、２週間間隔で、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１６／ｗｔＩＳＧ１５、またはＨＰＶ１６／ｍｕｔＩＳＧ１５で２回免疫化した。最後の免疫化の１週間後、脾細胞及び末梢血単核細胞の両方は、ＣＤ８、Ｄ^ｂＥ７_{４９−５７}四量体、及びエフェクターメモリーＫＬＲＧ１マーカーについて漉された。（Ａ）最終免疫化の１週間後の脾臓における、または（Ｂ）散布図として提示されるデータにおけるＨ２−Ｄ^ｂ−ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ制限ＨＰＶ１６Ｅ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞を示す代表的なフロープロット。（Ｃ〜Ｄ）Ｅ７四量体特異的メモリー表現型集団の割合の代表的なドットプロット（Ｃ）、または集計データ（Ｄ）。（Ｅ〜Ｆ）末梢血（Ｅ）及び四量体特異的エフェクターメモリーＣＤ８Ｔ細胞（Ｆ）からの全Ｄ^ｂＥ７_{４９−５７}四量体結合ＣＤ８Ｔ細胞の割合。データは、少なくとも２つの実験の代表である。＊，Ｐ＜０．０５；＊＊，Ｐ＜０．０１。誤差棒はＳＥＭを示す。腫瘍保有マウスにおいてＩＳＧ１５により誘導された治療作用。（Ａ）治療研究の略図。（Ｂ）治療用ＤＮＡ／ＥＰワクチン接種後の腫瘍成長測定（ｎ＝１０）。（Ｃ）治療用ワクチン接種によるＣＤ８Ｔ細胞枯渇の略図。（Ｄ）ＣＤ８Ｔ細胞なしのワクチン接種群（ｎ＝５）の腫瘍成長曲線。（Ｅ及びＦ）Ｔ細胞養子移入研究（Ｅ）の略図。ワクチン接種したマウスからの約４×１０^６ＣＤ８Ｔ細胞を脾細胞から精製し、腫瘍保有Ｔ細胞免疫不全Ｂ６Ｒａｇ１ＫＯマウス（ｎ＝５）に養子移入し、腫瘍成長について評価した（Ｆ）。すべての腫瘍保有マウスに５×１０^４ＴＣ−１細胞を皮下注射した。＊，Ｐ＜０．０５；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊＊＊，Ｐ＜０．００１。誤差棒はＳＥＭを示す。ＩＳＧ１５は、ＮＫまたはＣＤ４Ｔ細胞に深遠な影響はなかった。（Ａ）ドットプロットグラフは、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１６／ｗｔＩＳＧ１５、またはＨＰＶ１６／ｍｕｔＩＳＧ１５群での最終免疫化の１週間後の脾臓におけるＮＫ細胞の割合を示す。（Ｂ）ドットグラフは、脾臓においてエクスビボＥ７プールされたペプチド刺激に応答してＩＦＮγを放出するＨＰＶＥ７特異的ＣＤ４Ｔ細胞を示す。データは有意ではなかった。実験は、少なくとも２回行われた（Ｎ＝４〜５匹のマウス／群）。＊，Ｐ＜０．０５；＊＊，Ｐ＜０．０１。誤差棒はＳＥＭを示す。ワクチンアジュバントとしてＩＳＧ１５を含むことにより、腫瘍保有マウスにおいて腫瘍制御及び退縮の両方が改善される。Ｃ５７Ｂｌ／６マウス群（ｎ＝１０／群）に５×１０^４ＴＣ−１細胞を皮下注射した。腫瘍移植後４日目に開始して、全マウス群を免疫化し、その後週間隔で３回ブーストした。ＩＳＧ１５構築物での免疫化は、腫瘍保有マウスにおいて腫瘍成長を遅延したか、または腫瘍退縮をもたらした。各時間点の腫瘍測定値（各個体マウスの平均値）は、生存したマウスに関してのみ示される。腫瘍直径が約１８〜２０ｍｍに達したときにマウスを屠殺した。画像は、腫瘍移植後４２日目の腫瘍の大きさの代表的な例である。

本発明は、ＩＳＧ１５をアジュバントとして使用することによって、対象において抗原に対する免疫応答を増強するように使用することができるワクチンに関する。アジュバントとして使用されるとき、ＩＳＧ１５は、抗ウイルス性サイトカインであるインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）ならびにインターロイキン−２（ＩＬ−２）のレベルを上昇させることができる。したがって、ＩＳＧ１５は、多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞の亜集団を増加させて、細胞性免疫応答を促進することができる。

ＩＳＧ１５は、ウイルス及び細菌抗原、例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原及びリンパ性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）抗原等の抗原に対する細胞性免疫応答を増大させることができる。このように、ＩＳＧ１５は、そのような病原体に対する顕著な保護を促進することができる。

更に、本発明のワクチンは、癌または腫瘍の形成を予防することができる。本ワクチンは、定着癌または腫瘍の退縮を引き起こすことができる。例えば、退縮は、腫瘍の大きさの減少により示されるように、９０％以上であり得る。いくつかの場合では、癌の退縮は、完全なものであり得る。本ワクチンは、ウイルス関連癌、例えばＨＰＶ関連癌を更に予防し、その退縮を引き起こすことができる。したがって、癌の治療を必要とする対象に本ワクチンを投与することによる、癌の治療のための方法も本明細書に提供される。

本ワクチンは、抗原及びＩＳＧ１５を含む。ＩＳＧ１５は、配列番号１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性、配列番号１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９６％の同一性、配列番号１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９７％の同一性、配列番号１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９８％の同一性、配列番号１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９９％の同一性、及び配列番号１に記載のヌクレオチド配列を有するタンパク質配列をコードするヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列によってコードされ得る。

ＩＳＧ１５は、配列番号３に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性、配列番号３に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９６％の同一性、配列番号３に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９７％の同一性、配列番号３に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９８％の同一性、配列番号３に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９９％の同一性、及び配列番号３に記載のヌクレオチド配列を有するタンパク質配列をコードするヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列によってコードされ得る。

ＩＳＧ１５は、配列番号５に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性、配列番号５に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９６％の同一性、配列番号５に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９７％の同一性、配列番号５に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９８％の同一性、配列番号５に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９９％の同一性、及び配列番号５に記載のヌクレオチド配列を有するタンパク質配列をコードするヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列によってコードされ得る。

ＩＳＧ１５は、配列番号７に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性、配列番号７に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９６％の同一性、配列番号７に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９７％の同一性、配列番号７に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９８％の同一性、配列番号１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９９％の同一性、及び配列番号７に記載のヌクレオチド配列を有するタンパク質配列をコードするヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列によってコードされ得る。

ＩＳＧ１５は、配列番号９に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性、配列番号９に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９６％の同一性、配列番号９に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９７％の同一性、配列番号９に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９８％の同一性、配列番号９に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９９％の同一性、及び配列番号９に記載のヌクレオチド配列を有するタンパク質配列をコードするヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列によってコードされ得る。

ＩＳＧ１５は、ウイルス及び細菌抗原、例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原、及びリンパ性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）抗原等の抗原に対する細胞性免疫応答を増大させることができる。このように、ＩＳＧ１５は、そのような病原体に対する顕著な保護を促進することができる。

本発明のワクチンは、癌または腫瘍の形成を予防することができる。本ワクチンはまた、定着癌または腫瘍の退縮を引き起こすこともできる。この退縮は、９０％以上の退縮であり得る。癌の退縮は、完全なものであり得る。本ワクチンは、ウイルス関連癌、例えばＨＰＶ関連癌を更に予防し、その退縮を引き起こすことができる。したがって、癌の治療を必要とする対象に本ワクチンを投与することによる、癌の治療のための方法も本明細書に提供される。

１．定義
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾がある場合には、定義を含む本明細書が優先される。好ましい方法及び材料については後述するが、本明細書に記載されるものと類似するまたは均等な方法及び材料も、本発明の実施または試験に使用することができる。本明細書において言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照により、それらの全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に開示される材料、方法、及び実施例は、単に例示的であり、限定的であることを意図するものではない。

用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「できる（ｃａｎ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」、及びそれらの変形は、本明細書で使用される場合、更なる行為または構造の可能性を排除しない、開放式の移行句、用語、または語句であることが意図される。単数形「ａ」、「ａｎｄ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上、そうではないという明確な指示がない限り、複数の指示対象を含む。本開示はまた、明示的に記載されているかどうかにかかわらず、本明細書に提示される実施形態または要素「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｏｆ）」、及び「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙｏｆ）」他の実施形態も企図する。

本明細書で使用される「アジュバント」は、抗原の免疫原性を高めるために本明細書に記載されるワクチンに添加される任意の分子を意味する。

本明細書で使用される「断片」は、哺乳動物において免疫応答を誘発することができるポリペプチドをコードする核酸配列またはその一部を意味する。断片は、以下に記載するタンパク質断片をコードする様々なヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つから選択されるＤＮＡ断片であってもよい。

本明細書で使用される「免疫応答」は、抗原の導入に応答した、宿主の免疫系、例えば哺乳動物の免疫系の活性化を意味する。免疫応答は、細胞性応答もしくは液性応答、または両方の形態であり得る。

本明細書で使用される「核酸」は、一本鎖もしくは二本鎖であってもよく、または二本鎖及び一本鎖の両方の配列の部分を含有してもよい。核酸は、ゲノム及びｃＤＮＡの両方のＤＮＡ、ＲＮＡ、またはハイブリッドであり得、ここで、核酸は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドの組み合わせ、ならびにウラシル、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、イソシトシン、及びイソグアニンを含む、塩基の組み合わせを含有し得る。核酸は、化学合成法または組み換え法によって、得ることができる。

本明細書で使用される「作動可能に連結された」は、遺伝子の発現が空間的につながったプロモーターの制御下にあることを意味する。プロモーターは、その制御下で遺伝子の５’（上流）または３’（下流）に位置し得る。プロモーターと遺伝子との間の距離は、そのプロモーターと、プロモーターが由来する遺伝子内でそれが制御する遺伝子との間の距離と、ほぼ同一であり得る。当前記技術分野で公知の通り、この距離の変動は、プロモーター機能を喪失せずに適合させることができる。

本明細書で使用される「ペプチド」、「タンパク質」、または「ポリペプチド」は、アミノ酸の連結した配列を意味し得、天然、合成、または天然及び合成の改変もしくは組み合わせであってもよい。

本明細書で使用される「プロモーター」とは、細胞内で核酸の発現をもたらす、活性化する、または強化することが可能な、合成または天然由来の分子を意味する。プロモーターは、更にその発現を強化し、かつ／またはその空間的発現及び／もしくは一時的発現を変化させる、１つ以上の特定の転写調節配列を含み得る。プロモーターは、遠位のエンハンサーまたはリプレッサー要素も含み得、それは転写開始部位から何千もの塩基対に位置し得る。プロモーターは、ウイルス、細菌、真菌、植物、昆虫、及び動物を含む供給源に由来し得る。プロモーターは、発現が生じる細胞、組織、もしくは器官に関して、または発現が生じる発達段階に関して、または生理学的ストレス、病原体、金属イオン、もしくは誘導剤等の外部刺激に応答して、構造的または差次的に遺伝子成分の発現を調節することができる。プロモーターの代表的な例としては、バクテリオファージＴ７プロモーター、バクテリオファージＴ３プロモーター、ＳＰ６プロモーター、ｌａｃオペレーター−プロモーター、ｔａｃプロモーター、ＳＶ４０後期プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ＲＳＶ−ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶＩＥプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーターまたはＳＶ４０後期プロモーター、及びＣＭＶＩＥプロモーターが挙げられる。

本明細書で使用される「治療」または「治療すること」は、疾患を予防する、抑制する、抑圧する、または完全に排除する手段を通した、疾患からの動物の保護を意味し得る。疾患の予防は、疾患の発症前に、本発明のワクチンを動物に投与することを含む。疾患の抑制は、疾患の誘導後ではあるが、その臨床的出現の前に、本発明のワクチンを動物に投与することを含む。疾患の抑圧は、疾患の臨床的出現の後に、本発明のワクチンを動物に投与することを含む。

本明細書で使用される「対象」は、本明細書に記載のワクチンで免疫化されることを望むかまたは必要とする哺乳動物を意味し得る。哺乳動物は、ヒト、チンパンジー、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、マウス、またはラットであってもよい。

核酸に関して本明細書で使用される「変異体」とは、（ｉ）参照ヌクレオチド配列の一部分もしくは断片、（ｉｉ）参照ヌクレオチド配列の補体もしくはその一部分、（ｉｉｉ）参照核酸もしくはその補体と実質的に同一な核酸、または（ｉｖ）参照核酸、その補体、もしくはそれと実質的に同一な配列と、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、核酸を意味する。

変異体は、アミノ酸の挿入、欠失、または保存的置換によりアミノ酸配列が異なるが、少なくとも１つの生物学的活性を保持している、ペプチドまたはポリペプチドとして更に定義され得る。「生物学的活性」の代表的な例としては、特異的な抗体によって結合される能力、または免疫応答を促進する能力が挙げられる。変異体はまた、少なくとも１つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有する参照タンパク質と実質的に同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質も意味し得る。アミノ酸の保存的置換、すなわち、１つのアミノ酸を、類似の特性（例えば、親水性、荷電領域の程度及び分布）を有する別のアミノ酸と置き換えることは、典型的に小規模な変更を伴うとして、当前記技術分野で認識されている。これらの小規模な変更は、当前記技術分野において理解されるように、部分的に、アミノ酸の疎水性親水性インデックスを考慮することによって、特定することができる。Ｋｙｔｅｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２（１９８２）。アミノ酸の疎水性親水性インデックスは、その疎水性及び荷電の考慮に基づく。類似の疎水性親水性インデックスのアミノ酸が、置換することができ、タンパク質の機能を依然として保持できることは、当前記技術分野において公知である。一態様において、±２の疎水性親水性インデックスを有するアミノ酸が、置換されている。アミノ酸の親水性を利用して、生物学的機能を保持したタンパク質を生じる置換を明らかにすることもできる。ペプチドにおいてアミノ酸の親水性を考慮することで、そのペプチドの最大の局所的平均親水性、つまり抗原性及び免疫原性と良好に相関することが報告されている有用な指標を計算することができる。当前記技術分野で理解される通り、類似の親水性値を有するアミノ酸の置換により、生物学的活性、例えば免疫原性を保持したペプチドを得ることができる。置換は、互いに±２以内の親水性値を有するアミノ酸を用い行うことができる。アミノ酸の疎水性インデックス及び親水性値の両方が、そのアミノ酸の特定の側鎖により影響を受ける。その観察と一致して、疎水性、親水性、荷電、大きさ、及び他の特性により明らかにされた通り、生物学的機能と適合性のあるアミノ酸置換が、アミノ酸、特にそれらアミノ酸の側鎖の相対的類似性に依存することは理解されている。

変異体は、完全な遺伝子配列の全長またはその断片にわたって実質的に同一である核酸配列であってもよい。核酸配列は、遺伝子配列の全長またはその断片にわたって８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であってもよい。変異体は、アミノ酸配列の全長またはその断片にわたって実質的に同一であるアミノ酸配列であってもよい。アミノ酸配列は、アミノ酸配列の全長またはその断片にわたって８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であってもよい。

本明細書で使用される「ベクター」は、複製起点を含む核酸配列を意味する。ベクターは、ウイルスベクター、バクテリオファージ、細菌人工染色体、または酵母人工染色体であってもよい。ベクターは、ＤＮＡまたはＲＮＡベクターであってもよい。ベクターは、自己複製染色体外ベクターであってもよく、好ましくは、ＤＮＡプラスミドである。

本明細書における数値範囲の列挙に関して、それらの間に介在する同程度の正確さを有する各数値が明示的に企図される。例えば、６〜９の範囲では、６及び９に加えて、数値７及び８が企図され、範囲６．０〜７．０では、数値６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、及び７．０が、明示的に企図される。

２．ワクチン
抗原及びアジュバントを含むワクチンが本明細書に提供される。本ワクチンは、対象における抗原提示及び抗原に対する全体的な免疫応答を増強することができる。抗原及びアジュバントの組み合わせは、抗原を単独で含むワクチンよりも効率的に免疫系を誘導する。本ワクチンは、筋肉及び皮膚等の異なる組織に投与された場合に免疫応答を更に誘導することができる。このより効率的な免疫応答は、後により詳細に記載される癌を含む任意の疾患、病原体、もしくはウイルスの治療及び／または予防における効力の増強をもたらす。

ワクチンはアジュバントを含まないワクチンと比較して、ＩＦＮ−γ産生を少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約８倍、及び少なくとも約１０倍誘導することができる。

本ワクチンは、アジュバントを含まないワクチンと比較して、対象の抗原に対する細胞性及び／または液性免疫応答を増強またはブーストすることができる。本ワクチンは、アジュバントを含まないワクチンと比較して、抗原に対する細胞性免疫応答を約７５％〜約２００％増強することができる。代替えとして、本ワクチンは、アジュバントを含まないワクチンと比較して、抗原に対する細胞性免疫応答を約９０％〜約１３０％増強することができる。本ワクチンは、アジュバントを含まないワクチンと比較して、抗原に対する細胞性免疫応答を約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％、約１０１％、約１０２％、約１０３％、約１０４％、約１０５％、約１０６％、約１０７％、約１０８％、約１０９％、約１１０％、約１１１％、約１１２％、約１１３％、約１１４％、約１１５％、約１１６％、約１１７％、約１１８％、約１１９％、約１２０％、約１２１％、約１２２％、約１２３％、約１２４％、約１２５％、約１２６％、約１２７％、約１２８％、約１２９％、約１３０％、約１３１％、約１３２％、約１３３％、約１３４％、約１３５％、約１３６％、約１３７％、約１３８％、約１３９％、約１４０％、約１４１％、約１４２％、約１４３％、約１４４％、約１４５％、約１４６％、約１４７％、約１４８％、約１４９％、約１５０％、約１５１％、約１５２％、約１５３％、約１５４％、約１５５％、約１５６％、約１５７％、約１５８％、約１５９％、約１６０％、約１６１％、約１６２％、約１６３％、約１６４％、約１６５％、約１６６％、約１６７％、約１６８％、約１６９％、約１７０％、約１７１％、約１７２％、約１７３％、約１７４％、約１７５％、約１７６％、約１７７％、約１７８％、約１７９％、約１８０％、約１８１％、約１８２％、約１８３％、約１８４％、約１８５％、約１８６％、約１８７％、約１８８％、約１８９％、約１９０％、約１９１％、約１９２％、約１９３％、約１９４％、約１９５％、約１９６％、約１９７％、約１９８％、約１９９％、または約２００％増強することができる。

本発明のワクチンは、ワクチン自体が疾病または死亡の原因とならないように安全であること；ウイルスまたは細菌等の生病原体への曝露から生じる疾病に対する保護作用があること；細胞の感染を予防するために中和抗体を誘導すること；細胞内病原体に対する保護Ｔ細胞応答を誘導すること；ならびに投与し易さ、少ない副作用、生物学的安定性、及び用量当たりの低コストを提供すること等の、有効なワクチンに要求される特徴を有し得る。後述のように抗原とアジュバントとを組み合わせることにより、本ワクチンは、これらの特徴の一部またはすべてを達成することができる。

本ワクチンは、抗原を単独で含むワクチンよりも高い抗原に対する免疫応答を誘導するように、抗原内におけるエピトープ提示を更に改変することができる。本ワクチンは、筋肉または皮膚等の異なる組織に投与された場合に免疫応答を更に誘導することができる。

ａ．アジュバント
本ワクチンは、アジュバントを含み得る。アジュバントは、核酸配列、アミノ酸配列、またはそれらの組み合わせであってもよい。核酸配列は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、それらの変異体、それらの断片、またはそれらの組み合わせであってもよい。核酸配列はまた、ペプチド結合によってアジュバントに連結されるリンカーまたはタグ配列をコードする更なる配列も含み得る。アミノ酸配列は、タンパク質、ペプチド、それらの変異体、それらの断片、またはそれらの組み合わせであってもよい。

（１）ＩＳＧ１５
アジュバントは、インターフェロン刺激遺伝子１５（ＩＳＧ１５）、その断片、その変異体、またはそれらの組み合わせであり得る。ＩＳＧ１５は、抱合形態または抱合可能な形態であり得る。ＩＳＧ１５は、未抱合形態または抱合不可能な形態であり得る。例えば、ＩＳＧ１５の抱合形態は、配列番号４または配列番号８に示されるアミノ酸配列を有し得る。ＩＳＧ１５の未抱合形態は、例えば、配列番号２、配列番号６、または配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有し得る。

ＩＳＧ１５は、Ｉ型インターフェロンにより誘導されたユビキチン様タンパク質であり、感染症（すなわち、細菌及びウイルス感染）に関連し、加えて、ＩＳＧ１５が特にインフルエンザ、ＨＩＶ、及びシンドビスウイルス感染に対する保護を媒介することが示された免疫調節分子である。

ＩＳＧ１５の発現は、細胞ストレス、特に細菌及びウイルス感染により誘導されたストレスの後に上方調節される。これらのストレスは、ＩＦＮシグナル伝達における転写因子、主にインターフェロン調節因子３（ＩＲＦ３）及びインターフェロン刺激遺伝子因子３（ＩＳＧＦ３）を活性化し、そして次にこれは、ＩＳＧ１５のプロモーターが２つのＩＦＮ刺激された応答要素（ＩＳＲＥ）を含有する、ＩＳＧ１５の発現を上方調節する。外部侵襲（γ線照射、抗癌薬、またはウイルス感染）及び内部侵襲（疾患及び加齢）の両方がＩＳＧ１５の発現を引き起こすことができる。ＩＳＧ１５がサイトカイン様役割を有し、その欠損がＩＦＮγの喪失に関連し、そして次にこれがマウス及びヒトの両方におけるマイコバクテリア症に対する感受性の増強をもたらしたことが示された。加えて、組み換えヒトＩＳＧ１５は、培養培地に添加された場合にインビトロで白血球を活性化し、炎症促進性サイトカインの産生を誘導することが分かった。

ＩＳＧ１５は２つのユビキチン様ドメインを含み、それをユビキチン様タンパク質の直鎖状二量体にする。感染中に産生されたＩ型インターフェロンは、ＩＳＧ１５の発現を誘導し、その分泌、及びユビキチンと同様、独特な酵素の連鎖反応の作用を通して細胞内基質への抱合をもたらす。簡潔に上述されるように、ＩＳＧ１５は、「抱合」ＩＳＧ１５を産生するＩＳＧｙｌａｔｉｏｎとして知られる過程における様々な細胞内タンパク質へのその抱合を容易にする、ユビキチン様Ｃ末端（ＬＲＬＲＧＧ（配列番号１２））モチーフを有し得る。この抱合形態にない場合、遊離または「未抱合」ＩＳＧ１５は、細胞内にまたは細胞外に存在することができる。

ＩＳＧ１５は、ともに投与された場合、対象の抗原に対する免疫応答を増強またはブーストすることができる。抗原については、後により詳細に論じる。ＩＳＧ１５は、ＩＳＧ１５を含まない抗原を投与したときと比較して、抗原に対する免疫応答を約７５％〜約２００％増強することができる。いくつかの例において、ＩＳＧ１５は、ＩＳＧ１５を含まない抗原を投与したときと比較して、抗原に対する免疫応答を約９０％〜約１５０％増強することができる。いくつかの例において、ＩＳＧ１５は、ＩＳＧ１５を含まないワクチンを投与したときと比較して、免疫応答を約１００％〜約１３０％増強することができる。また他の代替的な実施形態において、ＩＳＧ１５は、ＩＳＧ１５を含まない抗原を投与したときと比較して、抗原に対する免疫応答を約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％、約１０１％、約１０２％、約１０３％、約１０４％、約１０５％、約１０６％、約１０７％、約１０８％、約１０９％、約１１０％、約１１１％、約１１２％、約１１３％、約１１４％、約１１５％、約１１６％、約１１７％、約１１８％、約１１９％、約１２０％、約１２１％、約１２２％、約１２３％、約１２４％、約１２５％、約１２６％、約１２７％、約１２８％、約１２９％、または約１３０％増強することができる。

他の実施形態において、ＩＳＧ１５は、ＩＳＧ１５を含まない抗原を投与したときと比較して、抗原に対する免疫応答を少なくとも１．５倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、もしくは少なくとも１０．０倍増強またはブーストすることができる。

アジュバントとしてのＩＳＧ１５は、対象の抗原に対するＴｈ１または細胞性免疫応答を増強もしくはブーストすることができる。Ｔｈ１免疫応答は、Ｔ細胞応答の活性化を含む。これらのＴ細胞応答は、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞応答、ならびにインターフェロン−γ、腫瘍壊死因子α、及び／またはインターロイキン（ＩＬ−２）の分泌を含み得る。インターフェロン−γ及び腫瘍壊死因子αは、抗ウイルス特性、免疫調節特性、及び抗腫瘍特性を有し、複数の遺伝子において転写を変化させて、様々な生理学的応答及び細胞性応答を生じさせることができる。インターフェロン−γによるいくつかの作用は、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）の活性を促進すること、正常細胞にクラスＩＭＨＣ分子の発現を増加させること、マクロファージにおける抗原提示及びリソソーム活性を増加させること、一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）を誘導すること、ならびに液性（抗体）免疫におけるＴｈ２の分化を抑制しながら、細胞傷害性ＣＤ８^＋Ｔ細胞に関して細胞性免疫におけるＴｈ１の分化を促進することを含む。

細胞傷害性ＣＤ８^＋Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔリンパ細胞（ＣＴＬ））は、ウイルス及び他の病原体に感染した細胞の死を誘導するＴ細胞の亜群である。活性化すると、ＣＴＬは、クローン拡大を経て抗原特異的であるエフェクター細胞を産生する。エフェクターＣＴＬは、感染細胞または標的細胞を死滅させる定方向の開口分泌（すなわち、脱顆粒）分子、例えば、パーフォリン、グラニュライシン、及びグランザイムの過程を通じて放出する。必要でなくなると、多くのエフェクターＣＴＬは死滅するが、いくつかのエフェクター細胞は、抗原に再び接したときにメモリー細胞がエフェクター細胞へと分化して免疫応答をより素早く開始するように、メモリー細胞として保持される。

ＩＳＧ１５がＴｈ１または細胞性免疫応答を増強もしくはブーストするとき、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）レベル（分泌）は上昇する。いくつかの例において、ＩＳＧ１５は、ＩＳＧ１５を含まない抗原を投与したときと比較して、抗原に対するＴｈ１または細胞性免疫応答を約１．５倍〜約１０．０倍、約１．５倍〜約８．０倍、約１．５倍〜約６．０倍、約１．５倍〜約４．０倍、約２．０倍〜約１０．０倍、約２．０倍〜約８．０倍、約２．０倍〜約６．０倍、約２．０倍〜約４．０倍、約２．５倍〜約４．０倍、約４．０倍〜約１０．０倍、約６．０倍〜約１０．０倍、または約８．０倍〜約１０．０倍増強することができる。ＩＳＧ１５はまた、ＩＳＧ１５を含まない抗原を投与したときと比較して、抗原に対するＴｈ１または細胞性免疫応答を少なくとも２．５倍、少なくとも２．６倍、少なくとも２．７倍、少なくとも２．８倍、少なくとも２．９倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．１倍、少なくとも３．２倍、少なくとも３．３倍、少なくとも３．４倍、少なくとも３．５倍、少なくとも３．６倍、少なくとも３．７倍、少なくとも３．８倍、少なくとも３．９倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．１倍、少なくとも４．２倍、少なくとも４．３倍、少なくとも４．４倍、少なくとも４．５倍、少なくとも４．６倍、少なくとも４．７倍、少なくとも４．８倍、少なくとも４．９倍、少なくとも５．０倍、少なくとも６．０倍、少なくとも７．０倍、少なくとも８．０倍、少なくとも９．０倍、または少なくとも１０．０倍増強することもできる。ＩＳＧ１５は、ＩＳＧ１５を含まない抗原を投与したときと比較して、Ｔｈ１または細胞性免疫応答を更に約２．０倍、約２．５倍、約３．０倍、約３．５倍、約４．０倍、または約４．５倍増強することができる。

抗原に対する免疫応答の増強またはブーストは、ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答の増強を更に含み得る。ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答の増強は、対象において、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、またはＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの両方、またはＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、及びＩＬ−２の組み合わせを分泌するＣＤ８^＋Ｔ細胞（例えば、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、及びＩＬ−２を発現するトリプルポジティブ細胞）の集団または発現頻度を増加させることを含み得る。したがって、ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答の増強は、多機能性ＣＤ８^＋Ｔ細胞の亜集団の増加を含み得る。

ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答の増強は、細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔリンパ細胞（ＣＴＬ）応答の増強も含み得る。ＣＴＬ応答の増強は、対象において、脱顆粒を経るＣＤ８^＋Ｔ細胞の集団または発現頻度を増加させることを含み得る。ＣＴＬ応答の増強は、対象において、ＣＤ１０７ａを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞の集団または発現頻度を増加させることを更に含み得る。ＣＴＬ応答の増強は、対象において、ＣＤ１０７ａ及びＩＦＮ−γ、またはＣＤ１０７ａ、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αを同時発現するＣＤ８^＋Ｔ細胞の集団または発現頻度を増加させることを更に含み得る。

抗原に対する免疫応答の増強またはブーストは、対象におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞の拡大及び分化を更に含み得る。そのような拡大は、末梢で起こり得る。加えて、定着したメモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞のリコールが対象において増強される。このように、ＩＳＧ１５は、抗原に対して特異的であるエフェクター及びエフェクター−メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞集団の両方を拡大させることによって、細胞性免疫応答を増強することができる。拡大したエフェクター及びエフェクター−メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞集団は、ＫＬＲＧ１を発現する細胞の増加した発現頻度を有し得る。

抗原（ＩＳＧ１５よって提供される）に対する免疫応答の増強またはブーストは、抗原に関連する疾患に対する保護を更に含み得る。いくつかの実施形態において、抗原に対する免疫応答の増強またはブーストは、抗原に関連する疾患に対する完全な保護を含み得る。いくつかの例において、抗原に対する免疫応答の増強またはブーストは、ＩＳＧ１５がアジュバントではない場合の、抗原に関連する疾患に対する生存率と比較して、抗原に関連する疾患に対して約７０％〜約１００％、約７５％〜約９５％の生存率、または約７５％〜約８５％の生存率を含み得る。他の実施形態において、抗原に対する免疫応答の増強またはブーストは、ＩＳＧ１５がアジュバントではない場合の、抗原に関連する疾患に対する生存率と比較して、抗原に関連する疾患に対して少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％の生存率を含み得る。

ＩＳＧ１５をコードする核酸は、任意の数の生物、例えば、マウス（Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ）、マカク（Ｍａｃａｃａｃｍｕｌａｔｔａ）、及びヒト（Ｈｏｍｏｓａｐｉｅｎｓ）に由来してもよい。好ましい実施形態において、ＩＳＧ１５をコードする核酸は、ヒトＩＳＧ１５核酸である。例えば、ヒトＩＳＧ１５核酸は、配列番号５、配列番号７、または配列番号９であり得る。別の実施形態において、ＩＳＧ１５をコードする核酸は、マウスＩＳＧ１５核酸である。例えば、マウスＩＳＧ１５核酸は、配列番号１または配列番号３であり得る。ＩＳＧ１５をコードする核酸は、コドン使用頻度及び対応するＲＮＡ転写物に関して最適化され得る。ＩＳＧ１５をコードする核酸は、発現のためにコドン最適化及びＲＮＡ最適化され得る。いくつかの実施形態において、ＩＳＧ１５をコードする核酸は、翻訳の効率を高めるためにコザック配列（例えば、ＧＣＣＡＣＣ）を含み得る。ＩＳＧ１５をコードする核酸は、翻訳終結の効率を高めるために複数の終止コドン（例えば、ＴＧＡＴＧＡ）を含み得る。ＩＳＧ１５をコードする核酸は、ＩｇＥリーダー配列をコードするヌクレオチド配列も含み得る。ＩｇＥリーダー配列は、核酸のＩＳＧ１５の５’に位置してもよい。いくつかの実施形態において、ＩＳＧ１５をコードする核酸は、ＩｇＥリーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含まない、または含有しない。

ＩＳＧ１５は、配列番号２をコードする、最適化された配列番号１の核酸配列であってもよい。いくつかの実施形態において、ＩＳＧ１５は、配列番号１に記載の核酸配列の全長にわたって少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の同一性を有する核酸配列であってもよい。他の実施形態において、ＩＳＧ１５は、配列番号２に記載のアミノ酸配列の全長にわたって少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする核酸配列であってもよい。ＩＳＧ１５は、配列番号２に記載のアミノ酸配列の全長にわたって少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。

いくつかの実施形態は、配列番号１の断片に関する。断片は、配列番号１の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列をコードする配列を含み得る。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列をコードするコード配列を含まない。

配列番号１の断片に対して同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸の断片が提供され得る。かかる断片は、配列番号１に対して９５％以上の同一性を有する核酸の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９６％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９７％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９８％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９９％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列をコードする配列を含む。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列をコードするコード配列を含まない。

配列番号２の断片が提供され得る。断片は、配列番号２の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列を含む。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列を含まない。

配列番号２の断片に対して同一性を有するアミノ酸配列を含むタンパク質の断片が提供され得る。かかる断片は、配列番号２に対して９５％以上の同一性を有するタンパク質の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９６％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９７％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９８％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９９％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列を含む。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列を含まない。

ＩＳＧ１５は、配列番号４をコードする、最適化された配列番号３の核酸配列であってもよい。いくつかの実施形態において、ＩＳＧ１５は、配列番号３に記載の核酸配列の全長にわたって少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の同一性を有する核酸配列であってもよい。他の実施形態において、ＩＳＧ１５は、配列番号４に記載のアミノ酸配列の全長にわたって少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする核酸配列であってもよい。ＩＳＧ１５は、配列番号４に記載のアミノ酸配列の全長にわたって少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。

いくつかの実施形態は、配列番号３の断片に関する。断片は、配列番号３の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列をコードする配列を含み得る。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列をコードするコード配列を含まない。

配列番号３の断片に対して同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸の断片が提供され得る。かかる断片は、配列番号３に対して９５％以上の同一性を有する核酸の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９６％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９７％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９８％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９９％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列をコードする配列を含む。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列をコードするコード配列を含まない。

配列番号４の断片が提供され得る。断片は、配列番号４の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列を含む。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列を含まない。

配列番号４の断片に対して同一性を有するアミノ酸配列を含むタンパク質の断片が提供され得る。かかる断片は、配列番号４に対して９５％以上の同一性を有するタンパク質の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９６％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９７％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９８％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９９％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列を含む。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列を含まない。

ＩＳＧ１５は、配列番号６をコードする、最適化された配列番号５の核酸配列であってもよい。いくつかの実施形態において、ＩＳＧ１５は、配列番号５に記載の核酸配列の全長にわたって少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の同一性を有する核酸配列であってもよい。他の実施形態において、ＩＳＧ１５は、配列番号６に記載のアミノ酸配列の全長にわたって少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする核酸配列であってもよい。ＩＳＧ１５は、配列番号６に記載のアミノ酸配列の全長にわたって少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。

いくつかの実施形態は、配列番号５の断片に関する。断片は、配列番号５の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列をコードする配列を含み得る。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列をコードするコード配列を含まない。

配列番号５の断片に対して同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸の断片が提供され得る。かかる断片は、配列番号５に対して９５％以上の同一性を有する核酸の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９６％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９７％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９８％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９９％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列をコードする配列を含む。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列をコードするコード配列を含まない。

配列番号６の断片が提供され得る。断片は、配列番号６の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列を含む。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列を含まない。

配列番号６の断片に対して同一性を有するアミノ酸配列を含むタンパク質の断片が提供され得る。かかる断片は、配列番号６に対して９５％以上の同一性を有するタンパク質の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９６％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９７％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９８％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９９％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列を含む。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列を含まない。

ＩＳＧ１５は、配列番号８をコードする、最適化された配列番号７の核酸配列であってもよい。いくつかの実施形態において、ＩＳＧ１５は、配列番号７に記載の核酸配列の全長にわたって少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の同一性を有する核酸配列であってもよい。他の実施形態において、ＩＳＧ１５は、配列番号８に記載のアミノ酸配列の全長にわたって少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする核酸配列であってもよい。ＩＳＧ１５は、配列番号８に記載のアミノ酸配列の全長にわたって少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。

いくつかの実施形態は、配列番号７の断片に関する。断片は、配列番号７の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列をコードする配列を含み得る。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列をコードするコード配列を含まない。

配列番号７の断片に対して同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸の断片が提供され得る。かかる断片は、配列番号７に対して９５％以上の同一性を有する核酸の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９６％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９７％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９８％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９９％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列をコードする配列を含む。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列をコードするコード配列を含まない。

配列番号８の断片が提供され得る。断片は、配列番号８の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列を含む。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列を含まない。

配列番号８の断片に対して同一性を有するアミノ酸配列を含むタンパク質の断片が提供され得る。かかる断片は、配列番号８に対して９５％以上の同一性を有するタンパク質の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９６％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９７％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９８％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９９％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列を含む。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列を含まない。

ＩＳＧ１５は、配列番号１０をコードする、最適化された配列番号９の核酸配列であってもよい。いくつかの実施形態において、ＩＳＧ１５は、配列番号９に記載の核酸配列の全長にわたって少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の同一性を有する核酸配列であってもよい。他の実施形態において、ＩＳＧ１５は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の全長にわたって少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする核酸配列であってもよい。ＩＳＧ１５は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の全長にわたって少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。

いくつかの実施形態は、配列番号９の断片に関する。断片は、配列番号９の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列をコードする配列を含み得る。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列をコードするコード配列を含まない。

配列番号９の断片に対して同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸の断片が提供され得る。かかる断片は、配列番号９に対して９５％以上の同一性を有する核酸の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９６％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９７％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９８％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５核酸配列の断片に対して９９％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列をコードする配列を含む。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列をコードするコード配列を含まない。

配列番号１０の断片が提供され得る。断片は、配列番号８の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列を含む。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列を含まない。

配列番号１０の断片に対して同一性を有するアミノ酸配列を含むタンパク質の断片が提供され得る。かかる断片は、配列番号１０に対して９５％以上の同一性を有するタンパク質の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を構成し得る。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９６％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９７％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９８％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のＩＳＧ１５タンパク質配列の断片に対して９９％以上の同一性を有する断片に関する。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列、例えば、ＩｇＥリーダー配列等の免疫グロブリンリーダー配列を含む。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列を含まない。

ｂ．抗原
上述のように、本ワクチンはまた、抗原またはその断片もしくは変異体と、アジュバントとを含み得る。抗原は、対象において免疫応答を誘導するものであれば何であってもよい。精製された抗原は、通常、それらだけでは免疫原性が強くないため、上述のようなアジュバントと組み合わされる。抗原によって誘導される免疫応答は、アジュバントと組み合わせた場合にブーストまたは増強することができる。かかる免疫応答は、液性免疫応答及び／または細胞性免疫応答であり得る。いくつかの実施形態において、アジュバントと抗原との組み合わせは、対象において細胞性免疫応答をブーストまたは増強することができる。

抗原は、核酸配列、アミノ酸配列、またはそれらの組み合わせであってもよい。核酸配列は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、それらの変異体、それらの断片、またはそれらの組み合わせであってもよい。核酸配列はまた、ペプチド結合によって抗原に連結されるリンカーまたはタグ配列をコードする更なる配列も含み得る。アミノ酸配列は、タンパク質、ペプチド、それらの変異体、それらの断片、またはそれらの組み合わせであってもよい。

抗原は、任意の数の生物、例えば、ウイルス、寄生虫、細菌、真菌、または哺乳動物に由来するタンパク質、核酸、またはその断片、またはその変異体、またはそれらの組み合わせに含有されてもよい。抗原は、自己免疫疾患、アレルギー、または喘息に関連し得る。他の実施形態において、抗原は、癌、ヘルペス、インフルエンザ、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、またはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に関連し得る。好ましくは、抗原はインフルエンザまたはＨＩＶに関連し得る。

ある抗原は、強い免疫応答を誘導することができる。他の抗原は、弱い免疫応答を誘導することができる。抗原は、上述のようにアジュバントと組み合わせた場合により高い免疫応答を誘発することができる。

（１）ウイルス抗原
抗原は、ウイルス抗原、またはその断片、またはその変異体であってもよい。ウイルス抗原は、以下の科のうちの１つからのウイルスに由来してもよい：Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ、Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ、Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ、Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ、Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ、またはＴｏｇａｖｉｒｉｄａｅ。ウイルス抗原は、パピローマウイルス、例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ポリオウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、天然痘ウイルス（大痘瘡及び小痘瘡）、ワクシニアウイルス、インフルエンザウイルス、ライノウイルス、デング熱ウイルス、馬脳炎ウイルス、風疹ウイルス、黄熱病ウイルス、ノーウォークウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ−Ｉ）、ヘアリーセル白血病ウイルス（ＨＴＬＶ−ＩＩ）、カリフォルニア脳炎ウイルス、ハンタウイルス（出血熱）、狂犬病ウイルス、エボラ熱ウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、呼吸器多核体ウイルス（ＲＳＶ）、単純ヘルペスウイルス１型（口腔ヘルペス）、単純ヘルペスウイルス２型（性器ヘルペス）、帯状疱疹（水痘帯状疱疹、別名は水疱）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、例えば、ヒトＣＭＶ、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、フラビウイルス、口蹄疫ウイルス、チクングニアウイルス、ラッサ熱ウイルス、アレナウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、または発癌性ウイルスに由来してもよい。

（ａ）肝炎抗原
ＩＳＧ１５は、肝炎ウイルス抗原（すなわち、肝炎抗原）、またはその断片、またはその変異体と結合させるかまたは組み合わせることができる。肝炎抗原は、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、及び／またはＥ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）に由来する抗原または免疫原であってもよい。いくつかの実施形態において、肝炎抗原は、ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＤＶ、及びＨＥＶに由来する抗原のうちの１つ以上をコードする、プラスミド（複数可）等の異種核酸分子（複数可）であってもよい。肝炎抗原は、全長タンパク質、または全長タンパク質の免疫原性断片であってもよい。

肝炎抗原は、コンセンサス配列及び／または発現の向上のための１つ以上の改変を含むことができる。構築物の免疫原性を増強するためのコドン最適化、ＲＮＡ最適化、及び高効率の免疫グロブリンリーダー配列の付加を含む遺伝的改変が、改変されたコンセンサス配列に含まれてもよい。コンセンサス肝炎抗原は、ＩｇＥまたはＩｇＧシグナルペプチド等の免疫グロブリンシグナルペプチド等のシグナルペプチドを含んでもよく、いくつかの実施形態において、ＨＡタグを含んでもよい。免疫原は、対応するコドン最適化免疫原よりも強く広範な細胞性免疫応答を誘発するように設計することができる。

肝炎抗原は、ＨＡＶ由来の抗原であってもよい。肝炎抗原は、ＨＡＶカプシドタンパク質、ＨＡＶ非構造タンパク質、それらの断片、それらの変異体、またはそれらの組み合わせであってもよい。

肝炎抗原は、ＨＣＶ由来の抗原であってもよい。肝炎抗原は、ＨＣＶヌクレオカプシドタンパク質（すなわち、コアタンパク質）、ＨＣＶエンベロープタンパク質（例えば、Ｅ１及びＥ２）、ＨＣＶ非構造タンパク質（例えば、ＮＳ１、ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂ、ＮＳ５ａ、及びＮＳ５ｂ）、それらの断片、それらの変異体、またはそれらの組み合わせであってもよい。

肝炎抗原は、ＨＤＶ由来の抗原であってもよい。肝炎抗原は、ＨＤＶδ抗原、その断片、またはその変異体であってもよい。

肝炎抗原は、ＨＥＶ由来の抗原であってもよい。肝炎抗原は、ＨＥＶカプシドタンパク質、その断片、またはその変異体であってもよい。

肝炎抗原は、ＨＢＶ由来の抗原であってもよい。肝炎抗原は、ＨＢＶコアタンパク質、ＨＢＶ表面タンパク質、ＨＢＶＤＮＡポリメラーゼ、遺伝子ＸによってコードされるＨＢＶタンパク質、それらの断片、それらの変異体、またはそれらの組み合わせであってもよい。肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型Ａコアタンパク質、ＨＢＶ遺伝子型Ｂコアタンパク質、ＨＢＶ遺伝子型Ｃコアタンパク質、ＨＢＶ遺伝子型Ｄコアタンパク質、ＨＢＶ遺伝子型Ｅコアタンパク質、ＨＢＶ遺伝子型Ｆコアタンパク質、ＨＢＶ遺伝子型Ｇコアタンパク質、ＨＢＶ遺伝子型Ｈコアタンパク質、ＨＢＶ遺伝子型Ａ表面タンパク質、ＨＢＶ遺伝子型Ｂ表面タンパク質、ＨＢＶ遺伝子型Ｃ表面タンパク質、ＨＢＶ遺伝子型Ｄ表面タンパク質、ＨＢＶ遺伝子型Ｅ表面タンパク質、ＨＢＶ遺伝子型Ｆ表面タンパク質、ＨＢＶ遺伝子型Ｇ表面タンパク質、ＨＢＶ遺伝子型Ｈ表面タンパク質、それらの断片、それらの変異体、またはそれらの組み合わせであってもよい。肝炎抗原は、コンセンサスＨＢＶコアタンパク質、またはコンセンサスＨＢＶ表面タンパク質であってもよい。

いくつかの実施形態において、肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型ＡコンセンサスコアＤＮＡ配列構築物、ＨＢＶ遺伝子型Ａコアタンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはＨＢＶ遺伝子型Ａコンセンサスコアタンパク質配列であってもよい。

他の実施形態において、肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型ＢコンセンサスコアＤＮＡ配列構築物、ＨＢＶ遺伝子型Ｂコアタンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはＨＢＶ遺伝子型Ｂコンセンサスコアタンパク質配列であってもよい。

更に他の実施形態において、肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型ＣコンセンサスコアＤＮＡ配列構築物、ＨＢＶ遺伝子型Ｃコアタンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはＨＢＶ遺伝子型Ｃコンセンサスコアタンパク質配列であってもよい。

いくつかの実施形態において、肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型ＤコンセンサスコアＤＮＡ配列構築物、ＨＢＶ遺伝子型Ｄコアタンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはＨＢＶ遺伝子型Ｄコンセンサスコアタンパク質配列であってもよい。

他の実施形態において、肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型ＥコンセンサスコアＤＮＡ配列構築物、ＨＢＶ遺伝子型Ｅコアタンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはＨＢＶ遺伝子型Ｅコンセンサスコアタンパク質配列であってもよい。

いくつかの実施形態において、肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型ＦコンセンサスコアＤＮＡ配列構築物、ＨＢＶ遺伝子型Ｆコアタンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはＨＢＶ遺伝子型Ｆコンセンサスコアタンパク質配列であってもよい。

他の実施形態において、肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型ＧコンセンサスコアＤＮＡ配列構築物、ＨＢＶ遺伝子型Ｇコアタンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはＨＢＶ遺伝子型Ｇコンセンサスコアタンパク質配列であってもよい。

いくつかの実施形態において、肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型ＨコンセンサスコアＤＮＡ配列構築物、ＨＢＶ遺伝子型Ｈコアタンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはＨＢＶ遺伝子型Ｈコンセンサスコアタンパク質配列であってもよい。

更に他の実施形態において、肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型Ａコンセンサス表面ＤＮＡ配列構築物、ＨＢＶ遺伝子型Ａ表面タンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはＨＢＶ遺伝子型Ａコンセンサス表面タンパク質配列であってもよい。

いくつかの実施形態において、肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型Ｂコンセンサス表面ＤＮＡ配列構築物、ＨＢＶ遺伝子型Ｂ表面タンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはＨＢＶ遺伝子型Ｂコンセンサス表面タンパク質配列であってもよい。

他の実施形態において、肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型Ｃコンセンサス配列ＤＮＡ配列構築物、ＨＢＶ遺伝子型Ｃ表面タンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはＨＢＶ遺伝子型Ｃコンセンサス表面タンパク質配列であってもよい。

更に他の実施形態において、肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型Ｄコンセンサス表面ＤＮＡ配列構築物、ＨＢＶ遺伝子型Ｄ表面タンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはＨＢＶ遺伝子型Ｄコンセンサス表面タンパク質配列であってもよい。

いくつかの実施形態において、肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型Ｅコンセンサス表面ＤＮＡ配列構築物、ＨＢＶ遺伝子型Ｅ表面タンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはＨＢＶ遺伝子型Ｅコンセンサス表面タンパク質配列であってもよい。

他の実施形態において、肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型Ｆコンセンサス表面ＤＮＡ配列構築物、ＨＢＶ遺伝子型Ｆ表面タンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはＨＢＶ遺伝子型Ｆコンセンサス表面タンパク質配列であってもよい。

更に他の実施形態において、肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型Ｇコンセンサス表面ＤＮＡ配列構築物、ＨＢＶ遺伝子型Ｇ表面タンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはＨＢＶ遺伝子型Ｇコンセンサス表面タンパク質配列であってもよい。

他の実施形態において、肝炎抗原は、ＨＢＶ遺伝子型Ｈコンセンサス表面ＤＮＡ配列構築物、ＨＢＶ遺伝子型Ｈ表面タンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはＨＢＶ遺伝子型Ｈコンセンサス表面タンパク質配列であってもよい。

（ｂ）ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原
ＩＳＧ１５は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、またはその断片、またはその変異体と結合させるかまたは組み合わせることができる。ＨＰＶ抗原は、子宮頸癌、直腸癌、及び／または他の癌を引き起こす、ＨＰＶ１６、１８、３１、３３、３５、４５、５２、及び５８型に由来してもよい。ＨＰＶ抗原は、性器疣贅を引き起こし、また頭頸部癌の原因として知られる、ＨＰＶ６及び１１型に由来してもよい。

ＨＰＶ抗原は、各ＨＰＶ型のＨＰＶＥ６またはＥ７ドメインであってもよい。例えば、ＨＰＶ１６型（ＨＰＶ１６）の場合、ＨＰＶ１６抗原は、ＨＰＶ１６Ｅ６抗原、ＨＰＶ１６Ｅ７抗原、それらの断片、変異体、または組み合わせを含むことができる。同様に、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ６Ｅ６及び／もしくはＥ７、ＨＰＶ１１Ｅ６及び／もしくはＥ７、ＨＰＶ１８Ｅ６及び／もしくはＥ７、ＨＰＶ３１Ｅ６及び／もしくはＥ７、ＨＰＶ３３Ｅ６及び／もしくはＥ７、ＨＰＶ５２Ｅ６及び／もしくはＥ７、またはＨＰＶ５８Ｅ６及び／もしくはＥ７、それらの断片、変異体、または組み合わせであってもよい。

（ｃ）ＲＳＶ抗原
ＩＳＧ１５は、ＲＳＶ抗原、またはその断片、またはその変異体と結合させるかまたは組み合わせることができる。ＲＳＶ抗原は、ヒトＲＳＶ融合タンパク質（本明細書において「ＲＳＶＦ」、「ＲＳＶＦタンパク質」、及び「Ｆタンパク質」とも称される）、またはその断片もしくは変異体であってもよい。ヒトＲＳＶ融合タンパク質は、ＲＳＶサブタイプＡとＢとの間に保存することができる。ＲＳＶ抗原は、ＲＳＶＬｏｎｇ株（ＧｅｎＢａｎｋＡＡＸ２３９９４．１）からのＲＳＶＦタンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。ＲＳＶ抗原は、ＲＳＶＡ２株（ＧｅｎＢａｎｋＡＡＢ５９８５８．１）からのＲＳＶＦタンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。ＲＳＶ抗原は、ＲＳＶＦタンパク質、またはその断片もしくは変異体の単量体、二量体、または三量体であってもよい。ＲＳＶ抗原は、最適化されたアミノ酸ＲＳＶＦアミノ酸配列、またはその断片もしくは変異体であってもよい。

ＲＳＶＦの融合後形態は、免疫化動物において高力価の中和抗体を誘発し、ＲＳＶへの曝露から動物を保護する。本発明は、特許請求されるワクチンにおいてこの免疫応答を利用する。本発明によれば、ＲＳＶＦタンパク質は、融合前形態または融合後形態であってもよい。

ＲＳＶ抗原はまた、ヒトＲＳＶ付着糖タンパク質（本明細書において「ＲＳＶＧ」、「ＲＳＶＧタンパク質」、及び「Ｇタンパク質」とも称される）、またはその断片もしくは変異体であってもよい。ヒトＲＳＶＧタンパク質は、ＲＳＶサブタイプＡとＢとの間で異なる。抗原は、ＲＳＶＬｏｎｇ株（ＧｅｎＢａｎｋＡＡＸ２３９９３）からのＲＳＶＧタンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。ＲＳＶ抗原は、ＲＳＶサブタイプＢ単離菌Ｈ５６０１、ＲＳＶサブタイプＢ単離菌Ｈ１０６８、ＲＳＶサブタイプＢ単離菌Ｈ５５９８、ＲＳＶサブタイプＢ単離菌Ｈ１１２３、またはそれらの断片もしくは変異体からのＲＳＶＧタンパク質であってもよい。ＲＳＶ抗原は、最適化されたアミノ酸ＲＳＶＧアミノ酸配列、またはその断片もしくは変異体であってもよい。

他の実施形態において、ＲＳＶ抗原は、ヒトＲＳＶ非構造タンパク質１（「ＮＳ１タンパク質」）、またはその断片もしくは変異体であってもよい。例えば、ＲＳＶ抗原は、ＲＳＶＬｏｎｇ株（ＧｅｎＢａｎｋＡＡＸ２３９８７．１）からのＲＳＶＮＳ１タンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。ヒトＲＳＶ抗原はまた、ＲＳＶ非構造タンパク質２（「ＮＳ２タンパク質」）、またはその断片もしくは変異体であってもよい。例えば、ＲＳＶ抗原は、ＲＳＶＬｏｎｇ株（ＧｅｎＢａｎｋＡＡＸ２３９８８．１）からのＲＳＶＮＳ２タンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。ＲＳＶ抗原は更に、ヒトＲＳＶヌクレオカプシド（「Ｎ」）タンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。例えば、ＲＳＶ抗原は、ＲＳＶＬｏｎｇ株（ＧｅｎＢａｎｋＡＡＸ２３９８９．１）からのＲＳＶＮタンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。ＲＳＶ抗原は、ヒトＲＳＶリン酸化タンパク質（「Ｐ」）タンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。例えば、ＲＳＶ抗原は、ＲＳＶＬｏｎｇ株（ＧｅｎＢａｎｋＡＡＸ２３９９０．１）からのＲＳＶＰタンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。ＲＳＶ抗原はまた、ヒトＲＳＶ基質タンパク質（「Ｍ」）タンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。例えば、ＲＳＶ抗原は、ＲＳＶＬｏｎｇ株（ＧｅｎＢａｎｋＡＡＸ２３９９１．１）からのＲＳＶＭタンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。

更に他の実施形態において、ＲＳＶ抗原は、ヒトＲＳＶ小疎水性（「ＳＨ」）タンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。例えば、ＲＳＶ抗原は、ＲＳＶＬｏｎｇ株（ＧｅｎＢａｎｋＡＡＸ２３９９２．１）からのＲＳＶＳＨタンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。ＲＳＶ抗原はまた、ヒトＲＳＶ基質タンパク質２−１（「Ｍ２−１」）タンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。例えば、ＲＳＶ抗原は、ＲＳＶＬｏｎｇ株（ＧｅｎＢａｎｋＡＡＸ２３９９５．１）からのＲＳＶＭ２−１タンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。ＲＳＶ抗原は更に、ヒトＲＳＶ基質タンパク質２−２（「Ｍ２−２」）タンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。例えば、ＲＳＶ抗原は、ＲＳＶＬｏｎｇ株（ＧｅｎＢａｎｋＡＡＸ２３９９７．１）からのＲＳＶＭ２−２タンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。ヒトＲＳＶ抗原は、ＲＳＶポリメラーゼＬ（「Ｌ」）タンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。例えば、ＲＳＶ抗原は、ＲＳＶＬｏｎｇ株（ＧｅｎＢａｎｋＡＡＸ２３９９６．１）からのＲＳＶＬタンパク質、またはその断片もしくは変異体であってもよい。

更なる実施形態において、ＲＳＶ抗原は、ＮＳ１、ＮＳ２、Ｎ、Ｐ、Ｍ、ＳＨ、Ｍ２−１、Ｍ２−２、またはＬタンパク質の最適化されたアミノ酸配列を有することができる。ＲＳＶ抗原は、ヒトＲＳＶゲノムによってコードされるタンパク質のうちのいずれか１つ等の、ヒトＲＳＶタンパク質または組み換え抗原であってもよい。

他の実施形態において、ＲＳＶ抗原は、限定されないが、ＲＳＶＬｏｎｇ株からのＲＳＶＦタンパク質、ＲＳＶＬｏｎｇ株からのＲＳＶＧタンパク質、最適化されたアミノ酸ＲＳＶＧアミノ酸配列、ＲＳＶＬｏｎｇ株のヒトＲＳＶゲノム、最適化されたアミノ酸ＲＳＶＦアミノ酸配列、ＲＳＶＬｏｎｇ株からのＲＳＶＮＳ１タンパク質、ＲＳＶＬｏｎｇ株からのＲＳＶＮＳ２タンパク質、ＲＳＶＬｏｎｇ株からのＲＳＶＮタンパク質、ＲＳＶＬｏｎｇ株からのＲＳＶＰタンパク質、ＲＳＶＬｏｎｇ株からのＲＳＶＭタンパク質、ＲＳＶＬｏｎｇ株からのＲＳＶＳＨタンパク質、ＲＳＶＬｏｎｇ株からのＲＳＶＭ２−１タンパク質、ＲＳＶＬｏｎｇ株からのＲＳＶＭ２−２タンパク質、ＲＳＶＬｏｎｇ株からのＲＳＶＬタンパク質、ＲＳＶサブタイプＢ単離菌Ｈ５６０１からのＲＳＶＧタンパク質、ＲＳＶサブタイプＢ単離菌Ｈ１０６８からのＲＳＶＧタンパク質、ＲＳＶサブタイプＢ単離菌Ｈ５５９８からのＲＳＶＧタンパク質、ＲＳＶサブタイプＢ単離菌Ｈ１１２３からのＲＳＶＧタンパク質、またはそれらの断片、またはそれらの変異体であってもよい。

（ｄ）インフルエンザ抗原
ＩＳＧ１５は、インフルエンザ抗原、またはその断片、またはその変異体と会合させるかまたは組み合わせることができる。インフルエンザ抗原は、哺乳動物において１つ以上のインフルエンザ血清型に対する免疫応答を誘発することができる抗原である。抗原は、全長翻訳産物ＨＡ０、サブユニットＨＡ１、サブユニットＨＡ２、それらの変異体、それらの断片、またはそれらの組み合わせを含むことができる。インフルエンザヘマグルチニン抗原は、インフルエンザＡ血清型Ｈ１の複数の株に由来するコンセンサス配列、インフルエンザＡ血清型Ｈ２の複数の株に由来するコンセンサス配列、インフルエンザＡ血清型Ｈ１の異なるセットの複数の株に由来する２つの異なるコンセンサス配列の一部を含有するハイブリッド配列、またはインフルエンザＢの複数の株に由来するコンセンサス配列であってもよい。インフルエンザヘマグルチニン抗原は、インフルエンザＢに由来してもよい。

インフルエンザ抗原は、免疫応答が誘導され得る特定のインフルエンザ免疫原に対して効果的であり得る少なくとも１つの抗原エピトープを含有することもできる。抗原は、免疫原性部位の全レパートリーと、インタクトなインフルエンザウイルス中に存在するエピトープとを提供することができる。抗原は、血清型Ｈ１または血清型Ｈ２の複数のインフルエンザＡウイルス株等の、１つの血清型の複数のインフルエンザＡウイルス株からのヘマグルチニン抗原配列に由来し得るコンセンサスヘマグルチニン抗原配列であってもよい。抗原は、２つの異なるコンセンサスヘマグルチニン抗原配列またはその一部を組み合わせることによって得ることができる、ハイブリッドコンセンサスヘマグルチニン抗原配列であってもよい。２つの異なるコンセンサスヘマグルチニン抗原配列の各々は、血清型Ｈ１の複数のインフルエンザＡウイルス等の、１つの血清型の異なるセットの複数のインフルエンザＡウイルスに由来してもよい。抗原は、複数のインフルエンザＢウイルス株からのヘマグルチニン抗原配列に由来し得るコンセンサスヘマグルチニン抗原配列であってもよい。

いくつかの実施形態において、インフルエンザ抗原は、Ｈ１ＨＡ、Ｈ２ＨＡ、Ｈ３ＨＡ、Ｈ５ＨＡ、またはＢＨＡ抗原であってもよい。代替として、インフルエンザ抗原は、コンセンサスＨ１アミノ酸配列またはコンセンサスＨ２アミノ酸配列を含むコンセンサスヘマグルチニン抗原であってもよい。コンセンサスヘマグルチニン抗原は、それぞれ、互いとは異なるセットの配列に由来する２つの異なるコンセンサスＨ１配列の部分を含む合成ハイブリッドコンセンサスＨ１配列であってもよい。合成ハイブリッドコンセンサスＨ１タンパク質であるコンセンサスＨＡ抗原の一例は、Ｕ２アミノ酸配列を含むタンパク質である。コンセンサスヘマグルチニン抗原は、コンセンサスＢＨＡアミノ酸配列を含むタンパク質等の、インフルエンザＢ株からのヘマグルチニン配列に由来するコンセンサスヘマグルチニンタンパク質であってもよい。

コンセンサスヘマグルチニン抗原は、１つ以上の更なるアミノ酸配列要素を更に含み得る。コンセンサスヘマグルチニン抗原は、そのＮ末端上にＩｇＥまたはＩｇＧリーダーアミノ酸配列を更に含み得る。コンセンサスヘマグルチニン抗原は、容易に入手可能な抗体によって検出され得る固有の免疫原性エピトープである免疫原性タグを更に含み得る。そのような免疫原性タグの一例は、コンセンサスヘマグルチニンＣ末端上で連結させることができる９アミノ酸インフルエンザＨＡタグである。いくつかの実施形態において、コンセンサスヘマグルチニン抗原は、そのＮ末端上にＩｇＥまたはＩｇＧリーダーアミノ酸配列、そのＣ末端上にＨＡタグを更に含み得る。

コンセンサスヘマグルチニン抗原は、コンセンサスインフルエンザアミノ酸配列またはその断片及び変異体からなるコンセンサスヘマグルチニンタンパク質であってもよい。コンセンサスヘマグルチニン抗原は、非インフルエンザタンパク質配列と、インフルエンザタンパク質配列またはその断片及び変異体とを含む、コンセンサスヘマグルチニンタンパク質であってもよい。

コンセンサスＨ１タンパク質の例として、コンセンサスＨ１アミノ酸配列からなってもよいタンパク質、またはＩｇＥリーダー配列、もしくはＨＡタグ、もしくはＩｇＥリーダー配列及びＨＡタグの両方等の追加の要素を更に含むタンパク質が挙げられる。

コンセンサスＨ２タンパク質の例として、コンセンサスＨ２アミノ酸配列からなってもよいタンパク質、またはＩｇＥリーダー配列もしくはＨＡタグ、もしくはＩｇＥリーダー配列及びＨＡタグの両方を更に含むタンパク質が挙げられる。

ハイブリッドコンセンサスＨ１タンパク質の例として、コンセンサスＵ２アミノ酸配列からなってもよいタンパク質、またはＩｇＥリーダー配列、もしくはＨＡタグ、もしくはＩｇＥリーダー配列及びＨＡタグの両方を更に含むタンパク質が挙げられる。

ハイブリッドコンセンサスインフルエンザＢヘマグルチニンタンパク質の例として、コンセンサスＢＨＡアミノ酸配列からなってもよいタンパク質が挙げられるか、またはそれはＩｇＥリーダー配列、もしくはＨＡタグ、もしくはＩｇＥリーダー配列及びＨＡタグの両方を含み得る。

コンセンサスヘマグルチニンタンパク質は、コンセンサスヘマグルチニン核酸、その変異体、またはその断片によってコードされ得る。異なる株及び変異体からの複数の異なるヘマグルチニン配列に由来するコンセンサス配列であり得るコンセンサスヘマグルチニンタンパク質とは異なり、コンセンサスヘマグルチニン核酸は、コンセンサスタンパク質配列をコードする核酸配列を指し、使用されるコード配列は、コンセンサスヘマグルチニンタンパク質配列が由来する複数の異なるヘマグルチニン配列中の特定のアミノ酸配列をコードするために使用される配列とは異なり得る。コンセンサス核酸配列は、コドン最適化及び／またはＲＮＡ最適化されてもよい。コンセンサスヘマグルチニン核酸配列は、５’非翻訳領域にコザック配列を含み得る。コンセンサスヘマグルチニン核酸配列は、リーダー配列をコードする核酸配列を含み得る。Ｎ末端リーダー配列のコード配列は、ヘマグルチニンコード配列の５’である。Ｎ末端リーダーは、分泌を容易にすることができる。Ｎ末端リーダーは、ＩｇＥリーダーまたはＩｇＧリーダーであってもよい。コンセンサスヘマグルチニン核酸配列は、免疫原性タグをコードする核酸配列を含み得る。免疫原性タグは、タンパク質のＣ末端上にあってもよく、それをコードする配列は、ＨＡコード配列の３’である。免疫原性タグは、容易に入手可能な抗体が存在する固有のエピトープを提供するため、タンパク質の発現を検出及び確認するためのアッセイにおいてかかる抗体を使用することができる。免疫原性タグは、タンパク質のＣ末端のＨＡタグであってもよい。

（ｅ）ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原
ＩＳＧ１５は、ＨＩＶ抗原、またはその断片、またはその変異体と結合させるかまたは組み合わせることができる。ＨＩＶ抗原は、免疫原について改変されたコンセンサス配列を含むことができる。構築物の免疫原性を増強するためのコドン最適化、ＲＮＡ最適化、及び高効率の免疫グロブリンリーダー配列の付加を含む遺伝的改変が、改変されたコンセンサス配列に含まれてもよい。新規免疫原は、対応するコドン最適化免疫原よりも強く広範な細胞性免疫応答を誘発するように設計することができる。

いくつかの実施形態において、ＨＩＶ抗原は、サブタイプＡコンセンサスエンベロープＤＮＡ配列構築物、サブタイプＡエンベロープタンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはサブタイプＡコンセンサスエンベロープタンパク質配列であってもよい。

他の実施形態において、ＨＩＶ抗原は、サブタイプＢコンセンサスエンベロープＤＮＡ配列構築物、サブタイプＢエンベロープタンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはサブタイプＢコンセンサスエンベロープタンパク質配列であってもよい。

更に他の実施形態において、ＨＩＶ抗原は、サブタイプＣコンセンサスエンベロープＤＮＡ配列構築物、サブタイプＣエンベロープタンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはサブタイプＣコンセンサスエンベロープタンパク質配列であってもよい。

更なる実施形態において、ＨＩＶ抗原は、サブタイプＤコンセンサスエンベロープＤＮＡ配列構築物、サブタイプＤエンベロープタンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはサブタイプＤコンセンサスエンベロープタンパク質配列であってもよい。

いくつかの実施形態において、ＨＩＶ抗原は、サブタイプＢＮｅｆ−ＲｅｖコンセンサスエンベロープＤＮＡ配列構築物、サブタイプＢＮｅｆ−Ｒｅｖタンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはサブタイプＢＮｅｆ−Ｒｅｖコンセンサスタンパク質配列であってもよい。

他の実施形態において、ＨＩＶ抗原は、サブタイプＡ、Ｂ、Ｃ、及びＤＤＮＡ配列構築物のＧａｇコンセンサスＤＮＡ配列、ＧａｇコンセンサスサブタイプＡ、Ｂ、Ｃ、及びＤタンパク質のコンセンサス配列に連結されたＩｇＥリーダー配列、またはコンセンサスＧａｇサブタイプＡ、Ｂ、Ｃ、及びＤタンパク質配列であってもよい。

更に他の実施形態において、ＨＩＶ抗原は、ＭＰｏｌＤＮＡ配列またはＭＰｏｌタンパク質配列であってもよい。ＨＩＶ抗原は、ＥｎｖＡ、ＥｎｖＢ、ＥｎｖＣ、ＥｎｖＤ、ＢＮｅｆ−Ｒｅｖ、Ｇａｇ、もしくはそれらの任意の組み合わせの核酸またはアミノ酸配列であってもよい。

（ｆ）リンパ性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）抗原
ＩＳＧ１５は、ＬＣＭＶ抗原、またはその断片、またはその変異体と結合させるかまたは組み合わせることができる。ＬＣＭＶ抗原は、発現の向上のためにコンセンサス配列及び／または１つ以上の改変を含むことができる。構築物の免疫原性を増強するためのコドン最適化、ＲＮＡ最適化、及び高効率の免疫グロブリンリーダー配列の付加を含む遺伝的改変が、改変された配列に含まれてもよい。ＬＣＭＶ抗原は、免疫グロブリンシグナルペプチド（例えば、ＩｇＥまたはＩｇＧシグナルペプチド）等のシグナルペプチドを含んでもよく、いくつかの実施形態において、ＨＡタグを含んでもよい。この免疫原は、対応するコドン最適化免疫原よりも強く広範な細胞性免疫応答を誘発するように設計することができる。

ＬＣＭＶ抗原は、ＬＣＭＶＡｒｍｓｔｒｏｎｇ由来の抗原であってもよい。ＬＣＭＶ抗原は、ＬＣＭＶクローン１３由来の抗原であってもよい。ＬＣＭＶ抗原は、ＬＣＭＶ由来の核タンパク質（ＮＰ）、ＬＣＭＶ由来の糖タンパク質（ＧＰ；例えば、ＧＰ−１、ＧＰ−２、及びＧＰ−Ｃ）、ＬＣＭＶ由来のＬタンパク質、ＬＣＭＶ由来のＺポリペプチド、それらの断片、それらの変異体、またはそれらの組み合わせであってもよい。

（２）寄生虫抗原
抗原は、寄生虫抗原またはその断片もしくは変異体であってもよい。寄生虫は、原生動物、蠕虫、または外部寄生生物であってもよい。蠕虫（すなわち、虫）は、扁形動物（例えば、吸虫及び条虫）、鉤頭虫、または回虫（例えば、蟯虫）であってもよい。外部寄生生物は、シラミ、ノミ、マダニ、及びコダニであってもよい。

寄生虫は、以下の疾患の原因となる任意の寄生虫であってもよい：アカントアメーバ角膜炎、アメーバ症、回虫症、バベシア症、バランチジウム症、アライグマ回虫症、シャーガス病、肝吸虫症、らせん虫感染症、クリプトスポリジウム症、裂頭条虫症、メジナ虫症、エキノコックス症、象皮症、腸蟯虫症、肝蛭症、肥大吸虫症、フィラリア症、ジアルジア症、顎口虫症、膜様条虫症、イソスポーラ症、片山熱、リーシュマニア症、ライム病、マラリア、横川吸虫症、ハエ幼虫症、オンコセルカ症、シラミ寄生症、疥癬、住血吸虫症、睡眠病、糞線虫症、条虫症、トキソカラ症、トキソプラズマ症、旋毛虫症、及び鞭虫症。

寄生虫は、アカントアメーバ、アニサキス、回虫、ウマバエ、大腸バランチジウム、トコジラミ、サナダムシ（条虫）、ツツガムシ、ラセンウジバエ、赤痢アメーバ、肝蛭、ランブル鞭毛虫、鉤虫、リーシュマニア、鼻腔舌虫、肝吸虫、ロア糸状虫、パラゴニムス−肺吸虫、蟯虫、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、住血吸虫、糞線虫、コダニ、条虫、トキソプラズマ原虫、トリパノソーマ、鞭虫、またはバンクロフト糸状虫であってもよい。

（ａ）マラリア抗原
ＩＳＧ１５は、マラリア抗原（すなわち、ＰＦ抗原またはＰＦ免疫原）、またはその断片、またはその変異体と結合させるかまたは組み合わせることができる。抗原は、マラリアの原因となる寄生虫に由来し得る。マラリアの原因となる寄生虫は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍであってもよい。Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ抗原は、サーカムスポロゾイト（ＣＳ）抗原を含み得る。

いくつかの実施形態において、マラリア抗原は、Ｐ. ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ免疫原ＣＳ、ＬＳＡ１、ＴＲＡＰ、ＣｅｌＴＯＳ、及びＡｍａ１のうちの１つ以上をコードするプラスミド等の核酸分子であってもよい。免疫原は、全長タンパク質、または全長タンパク質の免疫原性断片であってもよい。免疫原は、発現の向上のためにコンセンサス配列及び／または改変を含む。

他の実施形態において、マラリア抗原は、ＧｅｎＢａｎｋデータベース中のすべての全長ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍＴＲＡＰ／ＳＳＰ２配列（合計２８配列）のコンパイルから設計された、ＳＳＰ２とも称されるＴＲＡＰのコンセンサス配列であってもよい。コンセンサスＴＲＡＰ免疫原（すなわち、ＣｏｎＴＲＡＰ免疫原）は、ＩｇＥまたはＩｇＧシグナルペプチド等の免疫グロブリンシグナルペプチド等のシグナルペプチドを含んでもよく、いくつかの実施形態において、ＨＡタグを含んでもよい。

更に他の実施形態において、マラリア抗原は、ＣｅｌＴＯＳであってもよく、これはまたＡｇ２とも称され、高度に保存されたマラリア原虫抗原である。コンセンサスＣｅｌＴＯＳ抗原（すなわち、ＣｏｎＣｅｌＴＯＳ免疫原）は、ＩｇＥまたはＩｇＧシグナルペプチド等の免疫グロブリンシグナルペプチド等のシグナルペプチドを含んでもよく、いくつかの実施形態において、ＨＡタグを含んでもよい。

更なる実施形態において、マラリア抗原は、高度に保存されたマラリア原虫抗原であるＡｍａ１であってもよい。マラリア抗原はまた、いくつかの例において、ＩｇＥまたはＩｇＧシグナルペプチド等の免疫グロブリンシグナルペプチド等のシグナルペプチドを含む、Ａｍａ１（すなわち、ＣｏｎＡｍａＩ免疫原）のコンセンサス配列であってもよく、いくつかの実施形態において、ＨＡタグを含んでもよい。

いくつかの実施形態において、マラリア抗原は、いくつかの例において、ＩｇＥまたはＩｇＧシグナルペプチド等の免疫グロブリンシグナルペプチド等のシグナルペプチドを含む、コンセンサスＣＳ抗原（すなわち、コンセンサスＣＳ免疫原）であってもよく、いくつかの実施形態において、ＨＡタグを含んでもよい。

他の実施形態において、マラリア抗原は、本明細書に記載されるＰＦタンパク質のうちの２つ以上の組み合わせを含む融合タンパク質であってもよい。例えば、融合タンパク質は、コンセンサスＣＳ免疫原、ＣｏｎＬＳＡ１免疫原、ＣｏｎＴＲＡＰ免疫原、ＣｏｎＣｅｌＴＯＳ免疫原、及び互いに直接隣接して連結するか、または間にスペーサーもしくは１つ以上のアミノ酸を伴って連結するＣｏｎＡｍａ１免疫原のうちの２つ以上を含んでもよい。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、２つのＰＦ免疫原を含み、いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、３つのＰＦ免疫原を含み、いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、４つのＰＦ免疫原を含み、いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、５つのＰＦ免疫原を含む。２つのコンセンサスＰＦ免疫原を有する融合タンパク質は、ＣＳ及びＬＳＡ１、ＣＳ及びＴＲＡＰ、ＣＳ及びＣｅｌＴＯＳ、ＣＳ及びＡｍａ１、ＬＳＡ１及びＴＲＡＰ、ＬＳＡ１及びＣｅｌＴＯＳ、ＬＳＡ１及びＡｍａ１、ＴＲＡＰ及びＣｅｌＴＯＳ、ＴＲＡＰ及びＡｍａ１、またはＣｅｌＴＯＳ及びＡｍａ１を含んでもよい。３つのコンセンサスＰＦ免疫原を有する融合タンパク質は、ＣＳ、ＬＳＡ１、及びＴＲＡＰ；ＣＳ、ＬＳＡ１、及びＣｅｌＴＯＳ；ＣＳ、ＬＳＡ１、及びＡｍａ１；ＬＳＡ１、ＴＲＡＰ、及びＣｅｌＴＯＳ；ＬＳＡ１、ＴＲＡＰ、及びＡｍａ１；またはＴＲＡＰ、ＣｅｌＴＯＳ、及びＡｍａ１を含んでもよい。４つのコンセンサスＰＦ免疫原を有する融合タンパク質は、ＣＳ、ＬＳＡ１、ＴＲＡＰ、及びＣｅｌＴＯＳ；ＣＳ、ＬＳＡ１、ＴＲＡＰ、及びＡｍａ１；ＣＳ、ＬＳＡ１、ＣｅｌＴＯＳ、及びＡｍａ１；ＣＳ、ＴＲＡＰ、ＣｅｌＴＯＳ、及びＡｍａ１；またはＬＳＡ１、ＴＲＡＰ、ＣｅｌＴＯＳ、及びＡｍａ１を含んでもよい。５つのコンセンサスＰＦ免疫原を有する融合タンパク質は、ＣＳまたはＣＳ−ａｌｔ、ＬＳＡ１、ＴＲＡＰ、ＣｅｌＴＯＳ、及びＡｍａ１を含んでもよい。

いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、Ｎ末端に連結したシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、各コンセンサスＰＦ免疫原のＮ末端に連結した複数のシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態において、融合タンパク質のＰＦ免疫原の間にスペーサーが含まれてもよい。いくつかの実施形態において、融合タンパク質のＰＦ免疫原の間のスペーサーは、タンパク質分解切断部位であってもよい。いくつかの実施形態において、スペーサーは、ワクチンが投与される及び／または取り込まれることが意図される細胞に見出されるプロテアーゼによって認識されるタンパク質分解切断部位であってもよい。いくつかの実施形態において、スペーサーが融合タンパク質のＰＦ免疫原の間に含まれてもよく、スペーサーは、ワクチンが投与される及び／または取り込まれることが意図される細胞に見出されるプロテアーゼによって認識されるタンパク質分解切断部位であり、切断されると、各コンセンサスＰＦ免疫原のシグナルペプチドが、コンセンサスＰＦ免疫原を細胞外に移動させるように、融合タンパク質は、各コンセンサスＰＦ免疫原のＮ末端に連結された複数のシグナルペプチドを含む。

（３）細菌抗原
抗原は、細菌抗原またはその断片もしくは変異体であってもよい。細菌は、以下の門のうちのいずれか１つからであってもよい：Ａｃｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ａｑｕｉｆｉｃａｅ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ、Ｃａｌｄｉｓｅｒｉｃａ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｅ、Ｃｈｌｏｒｏｂｉ、Ｃｈｌｏｒｏｆｌｅｘｉ、Ｃｈｒｙｓｉｏｇｅｎｅｔｅｓ、Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｄｅｆｅｒｒｉｂａｃｔｅｒｅｓ、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ−Ｔｈｅｒｍｕｓ、Ｄｉｃｔｙｏｇｌｏｍｉ、Ｅｌｕｓｉｍｉｃｒｏｂｉａ、Ｆｉｂｒｏｂａｃｔｅｒｅｓ、Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｇｅｍｍａｔｉｍｏｎａｄｅｔｅｓ、Ｌｅｎｔｉｓｐｈａｅｒａｅ、Ｎｉｔｒｏｓｐｉｒａ、Ｐｌａｎｃｔｏｍｙｃｅｔｅｓ、Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔｅｓ、Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｅｔｅｓ、Ｔｅｎｅｒｉｃｕｔｅｓ、Ｔｈｅｒｍｏｄｅｓｕｌｆｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａｅ、及びＶｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ。

細菌は、グラム陽性細菌またはグラム陰性細菌であってもよい。細菌は、好気性細菌または嫌気性細菌であってもよい。細菌は、独立栄養細菌または従属栄養細菌であってもよい。細菌は、中温菌、好中球菌、好極限性細菌、好酸球菌、好アルカリ菌、好熱菌、低温菌、好塩菌、または好濃菌であってもよい。

細菌は、炭疽菌、抗生物質耐性菌、病原菌、食中毒菌、感染性細菌、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ菌、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌、または破傷風菌であってもよい。細菌は、マイコバクテリア、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｔｅｔａｎｉ、Ｙｅｒｓｉｎｉａｐｅｓｔｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓａｎｔｈｒａｃｉｓ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、またはＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅであってもよい。

（ａ）Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原
ＩＳＧ１５は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原（すなわち、ＴＢ抗原またはＴＢ免疫原）、またはその断片、またはその変異体と結合させるかまたは組み合わせることができる。ＴＢ抗原は、ＴＢ抗原のＡｇ８５ファミリー、例えば、Ａｇ８５Ａ及びＡｇ８５Ｂに由来してもよい。ＴＢ抗原は、ＴＢ抗原のＥｓｘファミリー、例えば、ＥｓｘＡ、ＥｓｘＢ、ＥｓｘＣ、ＥｓｘＤ、ＥｓｘＥ、ＥｓｘＦ、ＥｓｘＨ、ＥｓｘＯ、ＥｓｘＱ、ＥｓｘＲ、ＥｓｘＳ、ＥｓｘＴ、ＥｓｘＵ、ＥｓｘＶ、及びＥｓｘＷに由来してもよい。

いくつかの実施形態において、ＴＢ抗原は、Ａｇ８５ファミリー及びＥｓｘファミリーからのＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ免疫原のうちの１つ以上をコードするプラスミド等の核酸分子であってもよい。免疫原は、全長タンパク質、または全長タンパク質の免疫原性断片であってもよい。免疫原は、発現の向上のためにコンセンサス配列及び／または改変を含むことができる。コンセンサス免疫原は、ＩｇＥまたはＩｇＧシグナルペプチド等の免疫グロブリンシグナルペプチド等のシグナルペプチドを含んでもよく、いくつかの実施形態において、ＨＡタグを含んでもよい。

（４）真菌抗原
抗原は、真菌抗原またはその断片もしくは変異体であってもよい。真菌は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ酵母（例えば、Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ）、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓｇａｔｔｉｉ、皮膚糸状菌、Ｆｕｓａｒｉｕｍ種、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｍｕｃｏｒｏｍｙｃｏｔｉｎａ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、Ｅｘｓｅｒｏｈｉｌｕｍ、またはＣｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍであってもよい。

ｃ．ベクター
本ワクチンは、抗原をコードする核酸を含む１つ以上のベクターと、アジュバントとを含むことができる。１つ以上のベクターは、抗原及びアジュバントを発現することが可能であり得る。１つ以上のベクターは、一般的に、標的細胞に特定の遺伝子を導入するために使用されるプラスミドである、発現構築物であってもよい。一旦、発現ベクターが細胞内に入ると、遺伝子によってコードされるタンパク質が細胞の転写及び翻訳機構であるリボソーム複合体によって産生される。プラスミドは、エンハンサー及びプロモーター領域として作用し、発現ベクター上で行われる遺伝子の効率的な転写をもたらす調節配列を含有するように操作されることが多い。本発明のベクターは、大量の安定なメッセンジャーＲＮＡ、ひいてはタンパク質を発現する。

ベクターは、強力なプロモーター、強力な終止コドン、プロモーターとクローン化遺伝子との間の距離の調節、ならびに転写終結配列及びＰＴＩＳ（ポータブル翻訳開始配列）の挿入等の発現シグナルを有してもよい。

（１）発現ベクター
ベクターは、環状プラスミドまたは線状核酸であってもよい。環状プラスミド及び線状核酸は、適切な対象細胞において特定のヌクレオチド配列の発現を導くことができる。ベクターは、終止シグナルに作動可能に連結されてもよい、抗原をコードするヌクレオチド配列またはアジュバントをコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーターを有することができる。ベクターはまた、ヌクレオチド配列の適切な翻訳に必要な配列を含有することもできる。対象となるヌクレオチド配列を含むベクターは、キメラであってもよく、すなわち、その成分のうちの少なくとも１つが、その他の成分のうちの少なくとも１つに対して異種であることを意味する。発現カセットにおけるヌクレオチド配列の発現は、宿主細胞がある特定の外的刺激に曝露されたときにのみ転写を開始する、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターの制御下にあってもよい。多細胞生物の場合、プロモーターはまた、特定の組織もしくは器官または発達段階に特異的であってもよい。

（２）環状及び線状ベクター
ベクターは、細胞ゲノムへの取り込みによって標的細胞を形質転換することができるか、または染色体外に存在し得る、環状プラスミドであってもよい（例えば、複製起点を有するプラスミドの自律増殖）。

ベクターは、ｐＶＡＸ、ｐｃＤＮＡ３．０、もしくはｐｒｏｖａｘであるか、または抗原もしくはアジュバントをコードするＤＮＡを発現することが可能であり、かつ細胞が配列を免疫系によって認識される抗原もしくはアジュバントに翻訳できるようにする任意の他の発現ベクターであってもよい。

また、電気穿孔を介して対象に効率的に送達され得、１つ以上の所望の抗原または１つ以上の所望のアジュバントを発現することができる、線状核酸ワクチンまたは線状発現カセット（「ＬＥＣ」）も本明細書に提供される。ＬＥＣは、いずれのリン酸主鎖も持たない任意の線状ＤＮＡであってもよい。ＤＮＡは、１つ以上の抗原または１つ以上のアジュバントをコードすることができる。ＬＥＣは、プロモーター、イントロン、終止コドン、及び／またはポリアデニル化シグナルを含有してもよい。抗原またはアジュバントの発現は、プロモーターによって制御されてもよい。ＬＥＣは、いずれの抗生物質耐性遺伝子及び／またはリン酸主鎖も含有しなくてもよい。ＬＥＣは、所望の抗原遺伝子発現または所望のアジュバント発現と無関係の他の核酸配列を含有しなくてもよい。

ＬＥＣは、直線化され得る任意のプラスミドに由来してもよい。プラスミドは、抗原またはアジュバントを発現することが可能であり得る。プラスミドは、アジュバントＩＳＧ１５を発現することが可能であり得る。プラスミドは、ｐＮＰ（ＰｕｅｒｔｏＲｉｃｏ／３４）またはｐＭ２（ＮｅｗＣａｌｅｄｏｎｉａ／９９）であってもよい。プラスミドは、ＷＬＶ００９、ｐＶＡＸ、ｐｃＤＮＡ３．０、もしくはｐｒｏｖａｘであるか、または抗原をコードするかもしくはアジュバントをコードするＤＮＡを発現することが可能であり、かつ細胞が配列を免疫系によって認識される抗原に翻訳できるようにする任意の他の発現ベクターであるか、またはアジュバントであってもよい。

ＬＥＣは、ｐｃｒＭ２であってもよい。ＬＥＣは、ｐｃｒＮＰであってもよい。ｐｃｒＮＰ及びｐｃｒＭＲは、それぞれ、ｐＮＰ（ＰｕｅｒｔｏＲｉｃｏ／３４）及びｐＭ２（ＮｅｗＣａｌｅｄｏｎｉａ／９９）に由来してもよい。

（３）プロモーター、イントロン、終止コドン、及びポリアデニル化シグナル
ベクターは、プロモーターであってもよい。プロモーターは、遺伝子発現を駆動すること及び単離核酸の発現を調節することが可能ないずれのプロモーターであってもよい。かかるプロモーターは、本明細書に記載の抗原配列またはアジュバント配列を転写する、ＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを介した転写に必要なシス作用配列要素である。異種核酸の発現を導くために使用されるプロモーターの選択は、特定の用途に依存する。プロモーターは、その天然環境における転写開始部位からの距離とほぼ同じ距離だけベクターにおける転写開始部位から離れて位置してもよい。しかしながら、この距離の変動は、プロモーター機能を喪失せずに適合させることができる。

プロモーターは、抗原をコードする核酸配列に作動可能に連結されてもよく、転写物の効率的なポリアデニル化、リボソーム結合部位、及び翻訳終結に必要なシグナルであってもよい。プロモーターは、アジュバントをコードする核酸配列に作動可能に連結されてもよく、転写物の効率的なポリアデニル化、リボソーム結合部位、及び翻訳終結に必要なシグナルであってもよい。

プロモーターは、ＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ＳＶ４０後期プロモーター、メタロチオネインプロモーター、マウス乳癌ウイルスプロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ポリヘドリンプロモーター、または真核細胞における発現に効果的であることが示されている別のプロモーターであってもよい。

ベクターは、エンハンサー、ならびに機能的なスプライスドナー部位及びアクセプター部位を有するイントロンを含んでもよい。ベクターは、効率的な終結を提供するために、構造遺伝子の下流に転写終結部位を含有してもよい。終結部位は、プロモーター配列と同じ遺伝子から得られてもよいか、または異なる遺伝子から得られてもよい。

ｄ．ワクチンの賦形剤及び他の成分
ワクチンは、薬学的に許容される賦形剤を更に含み得る。薬学的に許容される賦形剤は、ビヒクル、ＩＳＧ１５以外のアジュバント、担体、または希釈剤等の機能性分子であり得る。薬学的に許容される賦形剤は、トランスフェクション促進剤であってもよく、これには、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）等の界面活性剤、フロイント不完全アジュバント、モノホスホリルリピドＡを含むＬＰＳ類似体、ムラミルペプチド、キノン類似体、スクアレン及びスクアレン等の小胞体、ヒアルロン酸、脂質、リポソーム、カルシウムイオン、ウイルスタンパク質、ポリアニオン、ポリカチオン、もしくはナノ粒子、または他の既知のトランスフェクション促進剤が挙げられる。

トランスフェクション促進剤は、ポリ−Ｌ−グルタマート（ＬＧＳ）を含むポリアニオン、ポリカチオン、または脂質である。トランスフェクション促進剤は、ポリ−Ｌ−グルタマートであり、ポリ−Ｌ−グルタマートは、６ｍｇ／ｍｌ未満の濃度でワクチン中に存在し得る。トランスフェクション促進剤は、界面活性剤、例えば免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）、フロイント不完全アジュバント、モノホスホリル脂質Ａを含むＬＰＳ類似体、ムラミルペプチド、キノン類似体、ならびにスクアレン及びスクアレン等の小胞体も含み得、ヒアルロン酸も、遺伝子構築物とともに使用投与され得る。ＤＮＡプラスミドワクチンは、トランスフェクション促進剤、例えば脂質、レシチンリポソームまたはＤＮＡリポソーム混合物（例えば、Ｗ０９３２４６４０を参照）として当前記技術分野で公知の他のリポソームを含むリポソーム、カルシウムイオン、ウイルスタンパク質、ポリアニオン、ポリカチオン、もしくはナノ粒子、または他の公知のトランスフェクション促進剤を含んでもよい。トランスフェクション促進剤は、ポリ−Ｌ−グルタマート（ＬＧＳ）を含むポリアニオン、ポリカチオン、または脂質である。ワクチン中のトランスフェクション剤の濃度は、４ｍｇ／ｍｌ未満、２ｍｇ／ｍｌ未満、１ｍｇ／ｍｌ未満、０．７５０ｍｇ／ｍｌ未満、０．５００ｍｇ／ｍｌ未満、０．２５０ｍｇ／ｍｌ未満、０．１００ｍｇ／ｍｌ未満、０．０５０ｍｇ／ｍｌ未満、または０．０１０ｍｇ／ｍｌ未満である。

薬学的に許容される賦形剤は、ＩＳＧ１５のほかに、アジュバントであり得る。追加のアジュバントは、別のプラスミドに発現されるか、またはワクチンにおいて上述のプラスミドと組み合わせたタンパク質として送達される、他の遺伝子であってもよい。アジュバントは、α−インターフェロン（ＩＦＮ−α）、β−インターフェロン（ＩＦＮ−β）、γ−インターフェロン、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦα、ΤΝＦβ、ＧＭ−ＣＳＦ、上皮成長因子（ＥＧＦ）、皮膚Ｔ細胞誘引ケモカイン（ＣＴＡＣＫ）、上皮胸腺発現ケモカイン（ＴＥＣＫ）、粘膜関連上皮ケモカイン（ＭＥＣ）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＭＨＣ、ＣＤ８０、シグナル配列が欠失したＩＬ−１５を含み、かつ任意でＩｇＥ由来のシグナルペプチドを含むＣＤ８６からなる群から選択することができる。アジュバントは、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２８、ＣＴＡＣＫ、ＴＥＣＫ、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＧＭ−ＣＳＦ、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、またはそれらの組み合わせであり得る。

ＩＳＧ１５のほかに、アジュバントとして有用であり得る他の遺伝子としては、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−ｌａ、ＭＩＰ−１ｐ、ＩＬ−８、ＲＡＮＴＥＳ、Ｌ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチン、ＣＤ３４、ＧｌｙＣＡＭ−１、ＭａｄＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１、ＶＬＡ−１、Ｍａｃ−１、ｐｌ５０．９５、ＰＥＣＡＭ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３、ＣＤ２、ＬＦＡ−３、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１８の突然変異体形態、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、血管成長因子、線維芽細胞成長因子、ＩＬ−７、ＩＬ−２２、神経成長因子、血管内皮成長因子、Ｆａｓ、ＴＮＦ受容体、Ｆｌｔ、Ａｐｏ−１、ｐ５５、ＷＳＬ−１、ＤＲ３、ＴＲＡＭＰ、Ａｐｏ−３、ＡＩＲ、ＬＡＲＤ、ＮＧＲＦ、ＤＲ４、ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＩＣＫ２、ＤＲ６、カスパーゼＩＣＥ、Ｆｏｓ、ｃ−ｊｕｎ、Ｓｐ−１、Ａｐ−１、Ａｐ−２、ｐ３８、ｐ６５Ｒｅｌ、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６、ＩｋＢ、不活性ＮＩＫ、ＳＡＰＫ、ＳＡＰ−１、ＪＮＫ、インターフェロン応答遺伝子、ＮＦｋＢ、Ｂａｘ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬｒｅｃ、ＴＲＡＩＬｒｅｃＤＲＣ５、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬＩＧＡＮＤ、Ｏｘ４０、Ｏｘ４０ＬＩＧＡＮＤ、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｂ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｆ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、及びそれらの機能性断片をコードする、遺伝子が挙げられる。

ワクチンは、参照により完全に組み込まれる、１９９４年４月１日出願の米国特許出願第０２１，５７９号に記載されるように遺伝子ワクチン促進剤を更に含み得る。

ワクチンは、用いられる投与様式に従って製剤化され得る。注射可能なワクチン医薬組成物は、滅菌されており、パイロジェンフリー及び微粒子フリーであり得る。等張性製剤または溶液を、用いることができる。等張性のための添加剤として、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、及びラクトースを挙げることができる。本ワクチンは、血管収縮剤を含んでもよい。等張溶液には、リン酸緩衝食塩水を挙げることができる。本ワクチンは、ゼラチン及びアルブミンを含む安定化剤を更に含み得る。ＬＧＳまたはポリカチオンまたはポリアニオン等、安定化剤により、製剤を室温または周囲温度で長時間安定させることができる。

３．ワクチン接種の方法
本発明はまた、対象における免疫応答を増強する方法も対象とする。免疫応答の増強は、対象における疾患、例えば、後により詳細に記載される癌を治療及び／または予防するために使用され得る。本方法は、本明細書に開示されるワクチンを対象に投与することを含み得る。ワクチンを投与された対象は、抗原を単独で投与された対象と比較して、増強またはブーストされた免疫応答を有することができる。いくつかの実施形態において、免疫応答は、約７５％〜約２００％増強され得る。代替として、ワクチンを投与された対象における免疫応答は、約９０％〜約１３０％増強され得る。更に他の代替の実施形態において、ワクチンを投与された対象における免疫応答は、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％、約１０１％、約１０２％、約１０３％、約１０４％、約１０５％、約１０６％、約１０７％、約１０８％、約１０９％、約１１０％、約１１１％、約１１２％、約１１３％、約１１４％、約１１５％、約１１６％、約１１７％、約１１８％、約１１９％、約１２０％、約１２１％、約１２２％、約１２３％、約１２４％、約１２５％、約１２６％、約１２７％、約１２８％、約１２９％、または約１３０％増強され得る。

他の実施形態において、ワクチンを投与された対象における免疫応答は、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２．０倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３．０倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４．０倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５．０倍、少なくとも約５．５倍、少なくとも約６．０倍、少なくとも約６．５倍、少なくとも約７．０倍、少なくとも約７．５倍、少なくとも約８．０倍、少なくとも約８．５倍、少なくとも約９．０倍、少なくとも約９．５倍、または少なくとも約１０．０倍増強され得る。

ワクチンの用量は、１μｇ〜１０ｍｇ活性成分／体重１ｋｇ／時間であってもよく、２０μｇ〜１０ｍｇ成分／体重１ｋｇ／時間であってもよい。本ワクチンは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３１日ごとに投与することができる。効果的な治療のためのワクチン服用回数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回であってもよい。

ａ．癌の治療及び予防
ワクチンを投与された対象は、抗原を単独で投与された対象と比較して、増強またはブーストされた免疫応答を有することができる。免疫応答の増強は、対象における疾患を治療及び／または予防するために使用され得る。疾患は、癌、例えば、ＨＰＶ関連癌、ＨＢＶ関連癌、卵巣癌、前立腺癌、乳癌、脳癌、頭頸部癌、咽喉癌、肺癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、骨癌、メラノーマ、転移性癌、ｈＴＥＲＴ関連癌、ＦＡＰ抗原関連癌、非小細胞肺癌、血液癌、食道扁平上皮癌、子宮頸癌、膀胱癌、結腸直腸癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、肛門癌、滑膜細胞腫、精巣癌、再発性呼吸器乳頭腫症、皮膚癌、神経膠芽腫、肝細胞癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、急性骨髄性白血病、トリプルネガティブ乳癌、及び原発性皮膚Ｔ細胞リンパ腫であり得る。癌は、ＨＰＶ関連癌であり得る。

本方法は、対象における定着腫瘍の大きさまたは病変を減少させることを更に含み得る。腫瘍の大きさは、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、約５０％〜約１００％、約６０％〜約１００％、約７０％〜約１００％、約８０％〜約１００％、約９０％〜約１００％、約５０％〜約９５％、約６０％〜約９５％、約７０％〜約９５％、約８０％〜約９５％、約９０％〜約９５％、約５０％〜約９０％、約６０％〜約９０％、約７０％〜約９０％、または約８０％〜約９０％減少し得る。腫瘍の大きさは、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％減少し得る。

いくつかの実施形態において、ワクチンの投与は、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、腫瘍の大きさを少なくとも１０％、少なくとも，２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％減少し得る。

本方法は、抗原を単独で投与された対象と比較して、対象における腫瘍退縮を増強することを更に含み得る。本ワクチンの投与は、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、腫瘍退縮を約４０％〜約６０％、約４５％〜約５５％、または約５０％増強することができる。本ワクチンの投与は、腫瘍退縮の速度を増加させることもできる。本ワクチンの投与は、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、対象において、約８０％〜約１００％、約８５％〜約１００％、約９０％〜約１００％、約９５％〜約１００％、約８０％〜約９５％、約８５％〜約９５％、約９０％〜約９５％、約８０％〜約９０％、または約８５％〜約９０％の腫瘍退縮を更に達成することができる。腫瘍退縮は、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、ワクチンを投与された対象において、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％であり得る。ワクチンを投与された対象における腫瘍退縮は、更に約９０％または約１００％であり得る。

いくつかの実施形態において、本ワクチンの投与は、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、腫瘍退縮を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％増強し得る。

本方法は、ワクチンを投与された対象における癌または腫瘍の成長を予防することを更に含み得る。この予防により、ワクチンを投与された対象は、将来の癌を克服し得る。換言すると、本ワクチンは、ワクチンを投与された対象に対して、癌からの保護を与える。ワクチンを投与された対象は、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、約９０％〜約１００％の癌生存率を有し得る。ワクチンを投与された対象は、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の癌生存率を有し得る。

ｂ．感染症の治療及び予防
ワクチンを投与された対象は、抗原を単独で投与された対象と比較して、増強またはブーストされた免疫応答を有することができる。免疫応答の増強は、対象における疾患を治療及び／または予防するために使用され得る。疾患は、感染症、例えば、ウイルス及び細菌感染であり得る。細菌感染は、炭疽菌、抗生物質耐性菌、病原菌、食中毒菌、感染性細菌、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｂａｃｔｅｒｉｕｍ、ｏｒｔｅｔａｎｕｓｂａｃｔｅｒｉｕｍであってもよい。細菌は、マイコバクテリア、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｔｅｔａｎｉ、Ｙｅｒｓｉｎｉａｐｅｓｔｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓａｎｔｈｒａｃｉｓ、ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、またはＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅであってもよい。細菌は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、リンパ性脈絡髄膜炎ウイルスであってもよい。

ウイルス感染は、パピローマウイルス、例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ポリオウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、天然痘ウイルス（大痘瘡及び小痘瘡）、ワクシニアウイルス、インフルエンザウイルス、ライノウイルス、デング熱ウイルス、馬脳炎ウイルス、風疹ウイルス、黄熱病ウイルス、ノーウォークウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ−Ｉ）、ヘアリーセル白血病ウイルス（ＨＴＬＶ−ＩＩ）、カリフォルニア脳炎ウイルス、ハンタウイルス（出血熱）、狂犬病ウイルス、エボラ熱ウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、呼吸器多核体ウイルス（ＲＳＶ）、単純ヘルペスウイルス１型（口腔ヘルペス）、単純ヘルペスウイルス２型（性器ヘルペス）、帯状疱疹（水痘帯状疱疹、別名は水疱）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、例えば、ヒトＣＭＶ、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、フラビウイルス、口蹄疫ウイルス、チクングニアウイルス、ラッサ熱ウイルス、アレナウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、または発癌性ウイルスであってもよい。ウイルス感染はＬＣＭＶであり得る。

本方法は、ワクチンを投与された対象における感染症の有害作用を予防することを更に含み得る。この予防により、ワクチンを投与された対象は、感染症を克服し得る。換言すると、本ワクチンは、ワクチンを投与された対象に対して、感染症からの保護を与える。ワクチンを投与された対象は、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、約９０％〜約１００％の感染症生存率を有し得る。ワクチンを投与された対象は、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の感染症生存率を有し得る。

ｃ．投与
本ワクチンは、製薬技術の当業者に周知の標準的技術に従って製剤化することができる。かかる組成物は、特定の対象の年齢、性別、体重、及び状態、ならびに投与経路等の要因を考慮に入れて、医療技術の当業者に周知の投与量で、そのような技術によって投与することができる。対象は、ヒト、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ラット、またはマウス等の哺乳動物であってもよい。

本ワクチンは、予防的にまたは治療的に投与することができる。予防的投与において、本ワクチンは、免疫応答を誘導するのに十分な量で投与することができる。治療的用途において、本ワクチンは、治療作用を誘発するのに十分な量で、それを必要とする対象に投与される。これを達成するための適切な量は、「治療有効用量」として定義される。この使用に効果的な量は、例えば、投与されるワクチンレジメンの特定の組成、投与様式、疾患の段階及び重症度、患者の一般的健康状態、ならびに処方医師の判断に依存する。

本ワクチンは、Ｄｏｎｎｅｌｌｙｅｔａｌ．（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：６１７−６４８（１９９７））、Ｆｅｌｇｎｅｒｅｔａｌ．（米国特許第５，５８０，８５９号、１９９６年１２月３日発行）、Ｆｅｌｇｎｅｒ（米国特許第５，７０３，０５５号、１９９７年１２月３０日発行）、及びＣａｒｓｏｎｅｔａｌ．（米国特許第５，６７９，６４７号、１９９７年１０月２１日発行）（これらすべての内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるような当前記技術分野で周知の方法によって投与することができる。本ワクチンのＤＮＡは、例えば、ワクチン銃を使用して個体に投与することができる粒子またはビーズに複合化することができる。当業者は、生理学的に許容される化合物を含む薬学的に許容される担体の選択が、例えば、発現ベクターの投与経路に依存することを知っている。

本ワクチンは、様々な経路を介して送達することができる。典型的な送達経路は、非経口投与、例えば、皮内、筋肉内、または皮下送達を含む。他の経路は、経口投与、鼻腔内、及び膣内経路を含む。特定のワクチンのＤＮＡについて、ワクチンは、個体の組織の間質空間に送達することができる（Ｆｅｌｇｎｅｒｅｔａｌ．、米国特許第５，５８０，８５９号及び第５，７０３，０５５号）（これらすべての内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。本ワクチンはまた、筋肉に投与することができるか、または皮内もしくは皮下注射を介して、もしくは経皮的に投与することができる（イオン導入法による等）ことができる。また、本ワクチンの表皮投与も用いることができる。表皮投与は、刺激物質に対する免疫応答を刺激するために表皮の最外層を機械的または化学的に刺激することを含み得る（Ｃａｒｓｏｎｅｔａｌ．、米国特許第５，６７９，６４７号、その内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。

本ワクチンはまた、鼻腔を介した投与用にも製剤化することができる。担体が固体である場合、経鼻投与に好適な製剤は、鼻から吸い込む様式で、すなわち、鼻の近くに維持された粉末の容器から鼻腔を通して急速に吸入することによって投与される、例えば約１０〜約５００ミクロンの範囲の粒径を有する粗粉末を含み得る。製剤は、鼻腔スプレー、点鼻薬、または噴霧器によるエアロゾル投与によるものであってもよい。製剤は、ワクチンの水性または油性溶液を含み得る。

本ワクチンは、懸濁液、シロップ剤、またはエリキシル剤等の液体調製物であってもよい。本ワクチンはまた、滅菌懸濁液または乳濁液等の、非経口、皮下、皮内、筋肉内、または静脈内投与（例えば、注射剤の投与）のための製剤であってもよい。

本ワクチンは、リポソーム、微粒子、または他のポリマー基質に組み込むことができる（Ｆｅｌｇｎｅｒｅｔａｌ．、米国特許第５，７０３，０５５号、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，ＬｉｐｏｓｏｍｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．ＩｔｏＩＩＩ（２ｎｄｅｄ．１９９３）（これらの内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。リポソームは、リン脂質または他の脂質からなってもよく、比較的単純に作製及び投与される、無毒性の、生理学的に許容される、代謝可能な担体であり得る。

本ワクチンは、米国特許第７，６６４，５４５号（その内容は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載される方法等を用いて、電気穿孔により投与することができる。電気穿孔は、米国特許第６，３０２，８７４号、第５，６７６，６４６号、第６，２４１，７０１号、第６，２３３，４８２号、第６，２１６，０３４号、第６，２０８，８９３号、第６，１９２，２７０号、第６，１８１，９６４号、第６，１５０，１４８号、第６，１２０，４９３号、第６，０９６，０２０号、第６，０６８，６５０号、及び第５，７０２，３５９号（その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載される方法及び／または装置によるものであってもよい。電気穿孔は、低侵襲性デバイスによって実行されてもよい。

低侵襲性電気穿孔デバイス（「ＭＩＤ」）は、上述のワクチン及び関連する流体を体組織に注入するための装置であってもよい。デバイスは、中空針、ＤＮＡカセット、及び流体送達手段を備えてもよく、デバイスは、体組織に針を挿入している間に同時に（例えば、自動的に）ＤＮＡを前記体組織に注入するために流体送達手段を作動させて使用するように構成される。これは、針が挿入されている間にＤＮＡ及び関連する流体を徐々に注入する能力によって、体組織中に流体のより均一な分布をもたらすという利点を有する。注入中に経験される疼痛は、注入されるＤＮＡがより広い領域にわたって分布されるために軽減され得る。

ＭＩＤは、針を使用することなく、ワクチンを組織に注入することができる。ＭＩＤは、ワクチンを小さな流れまたは噴流として注入することができ、かかる力を用いると、ワクチンは、組織表面を貫通して下層の組織及び／または筋肉に進入する。小さな流れまたは噴流の原動力は、一瞬のうちに微小開口部を通る二酸化炭素等の圧縮ガスの膨脹によって提供されてもよい。低侵襲性電気穿孔デバイス、及びそれらの使用方法の例として、公開されている米国特許出願第２００８０２３４６５５号、米国特許第６，５２０，９５０号、米国特許第７，１７１，２６４号、米国特許第６，２０８，８９３号、米国特許第６，００９，３４７号、米国特許第６，１２０，４９３号、米国特許第７，２４５，９６３号、米国特許第７，３２８，０６４号、及び米国特許第６，７６３，２６４号に記載されており、これらのそれぞれの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

ＭＩＤは、疼痛を伴わずに組織を貫通する液体の高速噴流を形成する注射器を備えてもよい。かかる無針注射器は市販されている。本明細書で利用され得る無針注射器の例は、米国特許第３，８０５，７８３号、第４，４４７，２２３号、第５，５０５，６９７号、及び第４，３４２，３１０号に記載されているものを含み、これらのそれぞれの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

直接的または間接的な電気輸送に好適な形態の所望のワクチンは、ワクチンを組織内に浸透させるのに十分な力を用いて薬剤の噴流の送達を作動させるために、通常、組織表面に注射器を接触させることによって無針注射器を使用して治療されるべき組織内に導入（例えば、注入）することができる。例えば、治療されるべき組織が粘膜、皮膚、または筋肉である場合、薬剤は、角質層を通って真皮層内にまたは下層の組織及び筋肉に浸透させるのに十分な力で、それぞれ、粘膜表面または皮膚表面に向けて発射される。

無針注射器は、すべての種類の組織、特に皮膚及び粘膜にワクチンを送達するのに非常に適している。いくつかの実施形態において、無針注射器は、表面及び対象の皮膚または粘膜内にワクチンを含有する液体を推進するために使用されてもよい。本発明の方法を使用して治療することができる様々な種類の組織の代表的な例は、膵臓、喉頭、鼻咽頭、下咽頭、中咽頭、唇、喉、肺、心臓、腎臓、筋肉、乳房、結腸、前立腺、胸腺、睾丸、皮膚、粘膜組織、卵巣、血管、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

ＭＩＤは、組織を電気穿孔する針電極を有してもよい。例えば、長方形または正方形のパターンに設定された複数電極アレイにおいて複数対の電極間でパルスを発生させることにより、一対の電極間のパルシングよりも改善された結果を提供する。例えば、米国特許第５，７０２，３５９号、標題「ＮｅｅｄｌｅＥｌｅｃｔｒｏｄｅｓｆｏｒＭｅｄｉａｔｅｄＤｅｌｉｖｅｒｙｏｆＤｒｕｇｓａｎｄＧｅｎｅｓ」に、治療的処置の間に複数対の針にパルスを発生させることができる針のアレイが開示されている。参照により完全に記載されるように本明細書に組み込まれるその用途において、針は、環状アレイに配置されるが、対向する対の針電極間でパルシングを可能にするコネクタ及び切替装置を有する。組み換え発現ベクターを細胞に送達するための一対の針電極が使用されてもよい。かかるデバイス及びシステムは、米国特許第６，７６３，２６４号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。代替として、通常の注射針に似た単一針を用いてＤＮＡの注入及び電気穿孔を可能にし、現在使用されているデバイスによって送達されるよりも低い電圧のパルスを印加し、そのため患者が経験する電気刺激を軽減する、単一針デバイスが使用されてもよい。

ＭＩＤは、１つ以上の電極アレイを備えてもよい。アレイは、同じ直径または異なる直径の２本以上の針を備えてもよい。針は、均一または不均一に離間されてもよい。針は、０．００５インチ〜０．０３インチ、０．０１インチ〜０．０２５インチ、または０．０１５インチ〜０．０２０インチであってもよい。針は、０．０１７５インチの直径であってもよい。針は、０．５ｍｍ、１．０ｍｍ、１．５ｍｍ、２．０ｍｍ、２．５ｍｍ、３．０ｍｍ、３．５ｍｍ、４．０ｍｍ、またはそれ以上離間されてもよい。

ＭＩＤは、パルス発生器と、ワクチン及び電気穿孔パルスを単一ステップで送達する、２本以上の針を有するワクチン注射器とからなってもよい。パルス発生器は、フラッシュカードで操作されるパーソナルコンピュータを介したパルス及び注入パラメータの柔軟なプログラミング、ならびに電気穿孔及び患者データの包括的な記録及び格納を可能にし得る。パルス発生器は、短期間の間に様々な電圧パルスを送達することができる。例えば、パルス発生器は、１００ミリ秒の期間に１５電圧パルスを３回送達することができる。そのようなＭＩＤの一例は、ＩｎｏｖｉｏＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによるＥｌｇｅｎ１０００システムであり、米国特許第７，３２８，０６４号に記載されている（その内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。

ＭＩＤは、体内または植物内の選択された組織の細胞へのＤＮＡ等の高分子の導入を容易にするモジュール電極システムである、ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（ＩｎｏｖｉｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＰｌｙｍｏｕｔｈＭｅｅｔｉｎｇＰＡ）デバイス及びシステムであってもよい。モジュール電極システムは、複数の針電極、皮下注射針、プログラム可能な定電流パルス制御器から複数の針電極に導電性接続を提供する電気コネクタ、及び電源を備えてもよい。操作者は、支持構造体に載置された複数の針電極を把持し、それらを体内または植物内の選択された組織へしっかりと挿入することができる。次いで、選択された組織への皮下注射針により高分子が送達される。プログラム可能な定電流パルス制御器が作動し、定電流電気パルスを複数の針電極に印加する。印加された定電流電気パルスは、複数の電極間における高分子の細胞内への導入を容易にする。定電流パルスにより組織内の電力散逸を制限することによって、細胞の過熱による細胞死が最小限に抑えられる。Ｃｅｌｌｅｃｔｒａデバイス及びシステムは、米国特許第７，２４５，９６３号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

ＭＩＤは、Ｅｌｇｅｎ１０００システム（ＩｎｏｖｉｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）であってもよい。Ｅｌｇｅｎ１０００システムは、中空針及び流体送達手段を提供するデバイスを備えてもよく、前記装置は、体組織に針を挿入している間に同時に（例えば、自動的に）本明細書に記載のワクチンを前記体組織に注入するために流体送達手段を作動させて使用するように構成される。針が挿入されている間に流体を徐々に注入する能力によって、体組織を通して流体のより均一な分布がもたらされることは利点である。また、注入中に経験される疼痛は、注入される流体の体積がより広い領域にわたって分布されるために軽減されると考えられる。

加えて、流体の自動注入が、注入される流体の実際量の自動監視及び登録を容易にする。このデータは、必要に応じて文書化の目的で制御装置によって格納されてもよい。

注入の速度は、直線的または非直線的のいずれかであってもよく、注入は、治療されるべき対象の皮膚を通して針が挿入された後、及びそれらが体組織内に更に挿入されている間に実行され得ることを理解されたい。

本発明の装置によって流体を注入することができる好適な組織は、腫瘍組織、皮膚または肝組織を含むが筋組織であってもよい。

装置は更に、体組織への針の挿入を誘導するための針挿入手段を備える。流体注入の速度は、針の挿入速度によって制御される。これは、挿入の速度が所望の注入の速度と一致し得るように針の挿入と流体の注入の両方を制御することができるという利点を有する。これにより、ユーザが装置を操作し易くなる。必要に応じて、体組織に自動的に針を挿入するための手段が提供されてもよい。

ユーザは、流体の注入を開始する時を選択することができる。しかしながら、理想的には、針の先端が筋組織に到達したときに注入が開始され、装置は、流体の注入を開始するのに十分な深さまで針が挿入された場合に感知するための手段を含んでもよい。これは、針が所望の深さ（通常、筋組織が始まる深さ）に到達したときに流体の注入が自動的に開始するよう促すことができることを意味する。筋組織が始まる深さは、例えば、４ｍｍの値等の予め設定された針の挿入深さであると解釈されてもよく、それは針が皮膚層を通過するのに十分であると見なされる。

感知手段は、超音波プローブを備えてもよい。感知手段は、インピーダンスまたは抵抗の変化を感知するための手段を備えてもよい。この場合、前記手段は、それ自体では体組織内の針の深さを記録することはできないかもしれないが、むしろ、針が異なる種類の体組織から筋肉内へと移動した場合にインピーダンスまたは抵抗の変化を感知するように構成される。これらの代替手段のいずれも、注入が開始し得ることを感知する比較的正確で操作が単純な手段を提供する。針の挿入の深さは、必要に応じて更に記録されてもよく、針挿入の深さが記録されると注入される流体の体積が決定されるように流体の注入を制御するために使用することができる。

装置は、針を支持するための基部と、その中に基部を受容するための筐体とを更に備えてもよく、基部が筐体に対して第１の後方位置にある場合、筐体内で針が後退し、基部が筐体内で第２の前方位置にある場合、針が筐体から伸長するように、基部は筐体に対して移動可能である。筐体は、患者の皮膚上に並べることができ、次いで、筐体を基部に対して移動させることによって針を患者の皮膚内に挿入することができるため、これはユーザにとって有利である。

上述のように、針が皮膚に挿入されるにつれて、流体が針の長さにわたって均一に分布されるように、制御された流体の注入速度を達成することが望ましい。流体送達手段は、制御された速度で流体を注入するように構成されるピストン駆動手段を備えてもよい。ピストン駆動手段は、例えば、サーボモータによって作動させることができる。しかしながら、ピストン駆動手段は、筐体に対して軸方向に移動させられる基部によって作動されてもよい。流体送達の代替手段が提供されてもよいことを理解されたい。したがって、例えば、制御されたまたは制御されない速度での流体送達のために圧搾できる密封容器が、シリンジ及びピストンシステムの代わりに提供されてもよい。

上述の装置は、あらゆる種類の注入に使用することができる。しかしながら、電気穿孔の分野において特に有用であることが想定されるため、針に電圧を印加するための手段を更に備えてもよい。これは、注入のためだけではなく、電気穿孔中の電極としても針が使用されることを可能にする。このことは、注入される流体と同じ領域に電場が印加されることを意味するため、これは特に有利である。従来、電気穿孔には、以前に注入された流体と電極を正確に位置合わせすることが非常に困難であるため、ユーザがより広い領域にわたって必要とされるよりも多くの体積の流体を注入し、注入された物質と電場との重複を確実にするためにより高い領域にわたって電場を印加する傾向があるという問題があった。本発明を使用すると、電場と流体との間の良好な適合を達成しながら、注入される流体の体積及び印加される電場の大きさの両方を減少させることができる。

本発明は、以下の非限定的な実施例によって示される複数の態様を有する。

４．実施例
実施例１
実施例２〜６の材料及び方法
ＤＮＡ構築及び発現：マウスＩＳＧ１５のＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｑ６４３３９を使用して、野生型ＩＳＧ１５（ｗｔＩＳＧ１５）をコードするＤＮＡ構築物を合成した。変異ＩＳＧ１５（ｍｕｔＩＳＧ１５）は、そのＣ末端抱合部位に点変異（ＬＲＬＲＧＧ（配列番号１２）からＡＡＡＡＧＧ（配列番号１３）に）を有するｗｔＩＳＧ１５の変異体である。すべての構築物が、遺伝子の５′末端に挿入された高効率の免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）リーダー配列を含有した。ＶｉｌｌａｒｒｅａｌＤＯ，ＷｉｓｅＭＣ，ＷａｌｔｅｒｓＪＮ，ＲｅｕｓｃｈｅｌＥＬ，ＣｈｏｉＭＪＯｂｅｎｇ−ＡｄｊｅｉＮ，ｅｔａｌ．ＡｌａｒｍｉｎＩＬ−３３ａｃｔｓａｓａｎｉｍｍｕｎｏａｄｊｕｖａｎｔｔｏｅｎｈａｎｃｅａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｉｔｙ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ２０１４；７４：１７８９−８００（Ｖｉｌｌａｒｒｅａｌｅｔａｌ．）及びＳｈｅｄｌｏｃｋＤＪ，ＡｖｉｌｅｓＪ，ＴａｌｂｏｔｔＫＴ，ＷｏｎｇＧ，ＷｕＳＪ，ＶｉｌｌａｒｒｅａｌＤＯ，ｅｔａｌ．ＩｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｂｒｏａｄｃｙｔｏｔｏｘｉｃＴｃｅｌｌｓｂｙｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅＤＮＡｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔｍａｒｂｕｒｇａｎｄｅｂｏｌａ．ＭｏｌＴｈｅｒ２０１３；２１：１４３２（Ｓｈｅｄｌｏｃｋｅｔａｌ．）（それらの全体が参照により組み込まれる）において前に記載されたように、構築物は商業的に合成及び最適化された。Ｅ６及びＥ７抗原を含有するＨＰＶ１６プラスミドは、ＹａｎＪ，ＲｅｉｃｈｅｎＢａｃｈＤＫ，ＣｏｒｂｉｔｔＮ，ＨｏｋｅｙＤＡ，ＲａｍａｎａｎｔｈａｎＭＰ，ＭｃＫｉｎｎｅｙＫＡ，ｅｔａｌ．，ＩｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｉｔｙｉｎｖｉｖｏｆｏｌｌｏｗｉｎｇｄｅｌｉｖｅｒｙｏｆａｎｏｖｅｌＨＰＶ−１６ＤＮＡｖａｃｃｉｎｅｅｎｃｏｄｉｎｇａｎＥ６／Ｅ７ｆｕｓｉｏｎａｎｔｉｇｅｎ（Ｙａｎｅｔａｌ．）．Ｖａｃｃｉｎｅ２００９；２７：４３１−４０（参照によりその全体が組み込まれる）において前に記載されたように調製された。ウエスタンブロット（ＷＢ）分析を使用することにより、両方のＩＳＧ１５構築物のインビトロ発現が確認された。ヒト横紋筋肉腫（ＲＤ）細胞をダルベッコ改変イーグル培地（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＧｒａｎｄＩｓｌａｎｄＮＹＵＳＡ）中で維持し、１０％熱不活性化胎仔血清ならびにペニシリン及びストレプトマイシンで補足した。ウェル当たり３．０×１０^５細胞を播いた後、製造業者のプロトコルに従って、Ｎｅｏｆｅｃｔｉｎ（ＮｅｏＢｉｏｌａｂＣａｍｂｒｉｄｇｅＭＡ）を用いてトランスフェクションを行った。陰性対照として細胞にｐＶＡＸ１空ベクター主鎖を含む２ｕｇの各ＤＮＡ構築物をトランスフェクトした。４８時間インキュベートした後、細胞の上清を回収し、細胞を冷ＰＢＳで洗浄した。遠心分離後、細胞溶解緩衝液（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＤａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）及びＥＤＴＡフリープロテアーゼインヒビターカクテル（Ｓｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈＳｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用して、細胞を溶解した。ＭＥＳ緩衝液（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＧｒａｎｄＩｓｌａｎｄＮＹＵＳＡ）を含む１０％トリス−アセテートゲル上で細胞可溶化物を泳動し、ＰＶＤＦ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）上に移した。Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝液（Ｌｉｃｏｒ，Ｌｉｎｃｏｌｎ，Ｎｅｂｒａｓｋａ）を使用して膜を室温で３時間ブロックし、続いて４℃で一晩、装填制御としてウサギ抗マウスＩＳＧ１５（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＤａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）及びマウス抗ヒトβ−アクチン（Ｓｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈＳｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用いてプロービングした。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで洗浄した後、二次ヤギ抗マウスＩＲＤｙｅ６８０ＲＤ及びヤギ抗ウサギＩＲＤｙｅ８００ＣＷ（Ｌｉ−ｃｏｒ，Ｌｉｎｃｏｌｎ，Ｎｅｂｒａｓｋａ）を室温で１時間にわたって添加した。次いで、膜を洗浄し、ＯｄｙｓｓｅｙＣＬＸ（Ｌｉｃｏｒ，Ｌｉｎｃｏｌｎ，Ｎｅｂｒａｓｋａ）に映像化した。加えて、トランスフェクションの４８時間後に上清も回収し、製造業者のプロトコルに従って、ＣｉｒｃｕＬｅｘマウスＩＳＧ１５ＥＬＩＳＡキット（ＭＢＬＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を使用してサイトカインの分泌を検査した。ＢｉｏｔｅｃｋＥＬ３１２ｅＢｉｏ−Ｋｉｎｅｔｉｃｓリーダー（ＢｉｏｔｅｋＵＳ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）を使用して、４５０ｎｍで光学密度を測定した。プラスミド当たり２つの別個の上清試料を用いて、すべての上清を２つ組で試験した。

動物：すべての動物は、ＮＩＨ及びＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＰｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌＡｎｉｍａｌＣａｒｅａｎｄＵｓｅＣｏｍｍｉｔｔｅｅのガイドラインに従って行われ、維持された。雌の８週齢のＣ５７ＢＬ／６（Ｈ−２^ｂ）マウス及びＨ２^ｂＢ６．１２９Ｓ７−Ｒａｇ１^{ｔｍ１Ｍｏｍ}／Ｊマウス（Ｒａｇ１ＫＯ）をＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。

動物の免疫化：すべてのマウスを前脛骨筋の筋肉内注射（ｉ．ｍ．）により免疫化した。Ｓｈｅｄｌｏｃｋらにおいて前に記載されたように、免疫化の直後、同じ部位でＣＥＬＬＥＣＴＲＡ適応性定電流電気穿孔デバイス（ＩｎｏｖｉｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を用いてインビボ電気穿孔（ＥＰ）を行った。１１μｇのｗｔＩＳＧ１５及びｍｕｔＩＳＧ１５を含む、または含まない５μｇのｐＶＡＸ１及び５μｇのＨＰＶ１６構築物のいずれかでマウスを免疫化した。すべての研究を少なくとも２回繰り返した。

ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ：Ｖｉｌｌａｒｒｅａｌら及びＳｈｅｄｌｏｃｋらにおいて前に記載されたように、最終免疫化の７日後に脾臓を採取し、加工した。Ｖｉｌｌａｒｒｅａｌら、Ｓｈｅｄｌｏｃｋら、及びＹａｎらにおいて前に記載されたように、脾臓を採取し加工した後、ＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを行って、免疫化マウスからの抗原特異的サイトカイン分泌を決定した。Ｅ６またはＥ７プールされたペプチド（２．５μｇ／ｍｌ最終濃度のペプチド）で脾細胞を刺激することによって、ＨＰＶ１６Ａｇ特異的Ｔ細胞応答を測定した。Ｅ７プールされたペプチドは、Ｈ−２^ｂバックグラウンドからのＣＤ８Ｔ細胞免疫優性ＨＰＶ１６Ｄ^ｂＥ７_{４９−５７}エピトープ（ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ）を含有した。

フローサイトメトリー：Ｖｉｌｌａｒｒｅａｌら、Ｓｈｅｄｌｏｃｋら、及びＡｎｇｅｌｏｓｎａｔｏＪＭ，ＢｌａｃｋｂｕｒｎＳＤ，ＣｒａｗｆｏｒｄＡ，ＷｈｅｒｒｙＥＪ．ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｌｏｓｓｏｆｍｅｍｏｒｙＴｃｅｌｌｐｏｔｅｎｔｉａｌａｎｄｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔｔｏｅｘｈａｕｓｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｃｈｒｏｎｉｃｖｉｒａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．ＪＶｉｒｏｌ２０１２；８６：８１６１−７０（参照によりその全体が組み込まれる）に前に記載されたように、脾臓及び末梢血からリンパ細胞を単離し加工した。Ｖｉｌｌａｒｒｅａｌら、及びＤｕｉｋｅｒｅｎＳ，ＦｒａｎｓｅｎＭＦ，ＲｅｄｅｋｅｒＡ，ＷｉｅｌｅｓＢ，ＰｌａｔｅｎｂｕｒｇＧ，ＫｒｅｂｂｅｒＷＪ，ｅｔａｌ．Ｖａｃｃｉｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄｅｆｆｅｃｔｏｒ−ｍｅｍｏｒｙＣＤ８^＋Ｔｃｅｌｌｒｅｓｐｏｎｓｅｓｐｒｅｄｉｃｔｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｉｃａｃｙａｇａｉｎｓｔｔｕｍｏｒｓ．ＪＩｍｍｕｎｏｌ２０１２；１８９：３３９７−４０３（参照によりその全体が組み込まれる）に前に記載されたように、ＨＰＶ１６Ｈ−２Ｄ^ｂＥ７_{４９−５７}（ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ）（ＭＢＬＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）に対してＣＤ８、ＫＬＲＧ１、及びＭＨＣクラスＩペプチド四量体でリンパ細胞を染色した。ＨＰＶ１６Ｅ７ペプチドＤ^ｂＥ７（ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ）（２．５μｇ／ｍｌ最終濃度のペプチド）またはＥ７プールされたペプチドによるエクスビボ刺激の５時間後に細胞内サイトカイン染色を行い、ＣＤ４Ｔ応答を評価した。脱顆粒を測定するために使用した培養物中に、抗ＣＤ１０７ａ（ＦＩＴＣ；クローン１Ｄ４Ｂ；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を刺激時に添加して、Ａｇ特異的細胞による刺激への曝露によって誘導された脱顆粒を捕捉した。次いで、Ｖｉｌｌａｒｒｅａｌら及びＶｉｌｌａｒｒｅａｌＤＯ，ＷａｌｔｅｒｓＪ，ＬａｄｄｙＤＪ，ＹａｎＪ，ＷｅｉｎｅｒＤＢ．ＭｕｌｔｉｖａｌｅｎｔＴＢｖａｃｃｉｎｅｓｔａｒｇｅｔｉｎｇｔｈｅｅｓｘｇｅｎｅｆａｍｉｌｙｇｅｎｅｒａｔｅｐｏｔｅｎｔａｎｄｂｒｏａｄｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓｓｕｐｅｒｉｏｒｔｏＢＣＧ．ＨｕｍＶａｃｃｉｎＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ２０１４；１０：２１８８−９８（参照によりその全体が組み込まれる）において別の箇所に記載されるように、細胞を固定及び染色した。以下の抗体を表面染色に使用した：ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤＦｉｘａｂｌｅＶｉｏｌｅｔ死細胞染色キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＣＤ４（ＦＩＴＣ；クローンＲＭ４−５；ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ８（ＡＰＣ−Ｃｙ７；クローン５３−６．７；ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＮＫ１．１（ＦＩＴＣ；クローンＰＫ１３６；ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ４９ｂ（ＦＩＴＣ；クローンＤＸ５；ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。細胞内染色には、以下の抗体を使用した：ＩＦＮγ（ＡＰＣ；クローンＸＭＧ１．２；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＴＮＦα（ＰＥ；クローンＭＰ６−ＸＴ２２；ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ３（ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５；クローン１４５−２Ｃ１１；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＩＬ−２（ＰｅＣｙ７；クローンＪＥＳ６−ＳＨ４；ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。すべてのデータはＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して収集し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）及びＳＰＩＣＥｖ５．３（ｈｔｔｐ：／／ｅｘｏｎ．ｎｉａｉｄ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｓｐｉｃｅ／から無料で入手可能）を使用して分析した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してＢｏｏｌｅａｎゲーティングを行い、ワクチン接種した動物のＴ細胞の多機能性を検査した。

腫瘍細胞系：ＴＣ−１細胞系は、ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＰｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡのＤｒ．ＹｖｏｎｎｅＰａｔｅｒｓｏｎから寛大に贈られたギフトであった。ＴＣ−１細胞系は十分に特徴付けされた肺上皮不死化細胞系であり、Ｅ６及びＥ７を構造的に発現し、高度に腫瘍原性である。簡潔に、ＴＣ−１細胞をＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎから購入し、前述のように培養した。

インビボ治療研究：Ｂ６マウスを各群マウス１０匹の４つの群に分け、５×１０^４ＴＣ−１細胞を各マウスの右側腹部の皮下に移植した。腫瘍移植後４日目に、各群のマウスをそれぞれｐＶＡＸ１、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１６／ｗｔＩＳｇ１５、ＨＰＶ１６／ｍｕｔＩＳＧ１５で筋肉内／電気穿孔で免疫化し、１１日目、１８日目、及び２５日目にブーストした。電子ノギスを用いて腫瘍の大きさを測定した［腫瘍体積＝１／２（長さ×幅^２）］。腫瘍の成長についてマウスを週に２回監視し、Ｖｉｌｌａｒｒｅａｌら及びＹａｎらにおいて前に記載されたように、測定した。ＰｅｎｎＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌＡｎｉｍａｌＣａｒｅガイドラインに基づき、腫瘍の大きさが１８〜２０ｍｍに達したときにマウスを屠殺した。

インビボＣＤ８Ｔ細胞枯渇研究：治療用ワクチン接種中、腫瘍接種１日前にＢ６マウスに２００μｇの抗ＣＤ８（５３−６．７２，ＢｉｏＸ細胞）を腹腔内注入し、腫瘍接種後３日ごとに繰り返した。良好なＴ細胞枯渇は末梢血単核細胞のフローサイトメトリー分析により確認された。

Ｔ細胞精製及び養子移入：ＣＤ８Ｔ細胞を、非保有腫瘍マウスの最終免疫化の１週間後、ワクチン接種したＢ６マウスの脾細胞から単離した（図２Ａ）。養子移入について、２００μｌのＰＢＳ中約４×１０^６ＣＤ８Ｔ細胞を、尾静脈を介して各Ｈ２^ｂＢ６．１２９Ｓ７−Ｒａｇ１^{ｔｍ１Ｍｏｍ}／Ｊマウスに静脈内注入した。

統計分析：対応のあるｔ検定、両側ｔ検定、対応のないｔ検定によって群分析を完了し、この研究で生成されたすべての定量的データの統計的有意性を分析した。Ｐ＜０．０５を統計的に有意と見なした。誤差棒はＳＥＭを示し、すべての試験はＰｒｉｓｍＳｏｆｔｗａｒｅを使用して行った（ＨＰＶ１６免疫化と比較して、＊，Ｐ＜０．０５；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊＊＊，Ｐ＜０．００１）。

実施例２
ＩＳＧ１５構築物の設計及び発現。
いくつかの改変を伴うＧｅｎＢａｎｋ（受入番号：Ｑ６４３３９）から取得したマウスＩＳＧ１５配列を使用して、野生型ＩＳＧ１５（ｗｔＩＳＧ１５）アジュバント構築物を生成した（図１Ａ）。ＩＳＧ１５は、ＩＳＧｙｌａｔｉｏｎと称される過程における様々な標的タンパク質へのその抱合に必要であるＣ末端ＬＲＬＲＧＧモチーフを含有する。したがって、ＩＳＧ１５抱合配列部位を変異させ（ＬＲＬＲＧＧからＡＡＡＡＧＧに）、抱合が不可能な変異体ＩＳＧ１５（ｍｕｔＩＳＧ１５）を生成した（図１Ａ）。この変異は、ＩＳＧｙｌａｔｉｏｎに依存しないワクチン誘導性免疫を増大させる遊離ＩＳＧ１５能力を評価する。両ＩＳＧ１５構築物は遺伝子的に最適化され、改変ｐＶＡＸ１哺乳類発現ベクターにサブクローン化された（図１Ｂ）。構築物をコードする両方のＩＳＧ１５の発現を確認するために、ヒト横紋筋肉腫（ＲＤ）細胞に各ベクターを別個にトランスフェクトし、ＷＢにより検査した。図１Ｃに示されるように、検出のために抗ＩＳＧ１５モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を使用して、トランスフェクションの４８時間後に採取した細胞可溶化物において、約１５ｋＤａの遊離ＩＳＧ１５をそれぞれについて観察した。陰性対照として、ＩＳＧ１５発現はｐＶＡＸ１群において検出されない。次に、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を介して、ＲＤ細胞のトランスフェクションの４８時間後に得た細胞上清から遊離ＩＳＧ１５の分泌を監視した。予想通り、ｍｕｔＩＳＧ１５トランスフェクトされたＲＤ細胞からの上清は、ｗｔＩＳＧ１５（４．４ｎｇ／ｍｌ）と比較して、高濃度の検出可能な分泌された遊離ＩＳＧ１５（７．２ｎｇ／ｍｌ）を有した（図１Ｄ）。これは、ＩＳＧ１５の抱合モチーフを変異させることにより、より多くの未抱合ＩＳＧ１５が得られ、細胞外環境に分泌されるであろうという見解を支持した。

実施例３
ＩＳＧ１５アジュバントによる免疫化は強いＨＰＶＥ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞免疫応答を誘導した。
ＩＳＧ１５の免疫原性の特性を評価するために、ＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを使用して、ＣＤ８免疫優性エピトープＨ−２−Ｄ^ｂＥ７_{４９−５７}（Ｅ７）を含有するＥ７プールされたペプチドに応答してワクチン誘導性Ｅ７特異的ＩＦＮγを分泌する細胞の数を決定した。免疫化レジメンは図２Ａに示される。簡潔に、Ｂ６マウス群（ｎ＝４〜５／群）は、次のように２週間間隔で２回ワクチン接種を受けた：（ｉ）ＨＰＶ１６ＤＮＡ／ＥＰ、（ｉｉ）ＨＰＶ１６／ｗｔＩＳＧ１５ＤＮＡ／ＥＰ、（ｉｉｉ）ＨＰＶ１６／ｍｕｔＩＳＧ１５ＤＮＡ／ＥＰ、及び（ｉｖ）ｐＶＡＸ１／ＥＰ。ｗｔＩＳＧ１５とのＨＰＶ１６の同時投与は、ＨＰＶ１６単独で免疫化された群（約６６ＳＦＣ／１００万個の脾細胞）と比較して、Ｅ７特異的ＩＦＮγ応答（約２３０ＳＦＣ／１００万個の脾細胞）において３．５倍の増強をもたらした。ＩＳＧ１５は、標的タンパク質と抱合するユビキチン様タンパク質であり、ある特定のウイルス及び細菌感染の制御に重要である。ＩＳＧ１５の抱合形態に加えて、ＩＳＧ１５が未抱合形態（遊離ＩＳＧ１５）で存在し、また免疫調節または感染中に重要な役割を果たし得ることが知られている。よって、同じ実験において、我々は、抱合されていない変異形態のＩＳＧ１５でマウスを免疫化することにより、ワクチン誘導性応答が抱合とは無関係であるかを検査した。興味深いことに、ｗｔＩＳＧ１５と同様、ｍｕｔＩＳＧ１５ワクチン接種群は、ＨＰＶ１６のみの群と比較して、全Ｅ７特異的応答において類似する（約４倍）増強を示し、ＩＳＧ１５が依然として抱合とは関係なくその作用を誘導できることを示唆する。Ｅ６特異的ワクチン誘導性応答の比較的高い誘導レベルは見出されなかった。総合して、サイトカイン様分子ＩＳＧ１５は、Ｅ７特異的Ｔｈ１媒介ＣＤ８Ｔ細胞応答を強化及び刺激するためのアジュバントとして作用し得る。更に、このデータは、抗原（Ａｇ）特異的応答が遊離ＩＳＧ１５に起因した可能性が高いことを示した。

実施例４
ＩＳＧ１５アジュバントは堅固な多機能性ＨＰＶＥ７特異的細胞媒介応答を誘導した
ＣＤ８^＋Ｔ細胞免疫応答が腫瘍の制御及び排除を容易にするために必須であると考えられることを考慮して、我々は、Ｄ^ｂＥ７_{４９−５７}ペプチド刺激に応答してＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ−２を分泌するワクチン接種したマウスからのＥ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞集団の機能性プロファイルを更に検査した。細胞内サイトカインマルチパラメータフローサイトメトリー分析のためのゲーティング設定法を図３Ａに示す。最終ワクチン接種の１週間後、すべての試験したワクチン接種レジメンは、３つすべてのエフェクターサイトカインを産生する検出可能なＣＤ８Ｔ細胞応答を誘導した（図３）。非アジュバント群と比較して、両ＩＳＧ１５ワクチンレジメンは、全ＩＦＮγ（ｗｔＩＳＧ１５、０．６８％；ｍｕｔＩＳＧ１５、０．９２％）（図３Ｂ）及び全ＴＮＦα（ｗｔＩＳＧ１５、０．４２％；ｍｕｔＩＳＧ１５、０．５４％）（図３Ｃ）のいずれかを産生する、実質的なＥ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞を誘導した。しかしながら、ＩＳＧ１５は、ＩＬ−２を分泌するＡｇ特異的ＣＤ８Ｔ細胞の小規模な増強しか誘導しなかった（図３Ｄ）。重要なことには、顕著な数のＥ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞が多機能性であり、ＩＳＧ１５免疫化群は、ワクチン接種７日後の脾臓においてＩＦＮγ単独または２重ＩＦＮγ^＋ＴＮＦα^＋のいずれかを産生するＣＤ８Ｔ細胞の大幅に高い発現頻度を誘発した（図３Ｅ）。ＩＳＧ１５処置群のトリプルポジティブＩＦＮγ^＋ＴＮＦα^＋ＩＬ−２^＋ＣＤ８分泌細胞において軽度の増強もあった。ＩＳＧ１５はＮＫ細胞に対して作用を有し得るため、我々はワクチン誘導性ＮＫ応答を監視した。ＩＳＧ１５によるワクチン接種後に大幅な変化は見られなかった（図７Ａ）。更に、ＩＳＧ１５の投与は、エクスビボＥ７プールされたペプチド刺激後、ワクチン誘導性ＣＤ４Ｔ細胞応答を増強しなかった（図７Ｂ）。

細胞傷害性ＣＤ８Ｔリンパ細胞（ＣＴＬ）が保護に重要な成分であることを考慮して、脱顆粒を経て、同時にエフェクターサイトカインを分泌するアジュバント誘導性ＣＴＬ応答の細胞溶解性特性が評価された（図５）。免疫アジュバントＩＳＧ１５をワクチン接種された群は、ＨＰＶ１６単独群と比較して、より高い割合の脱顆粒マーカーであるＣＤ１０７ａ（ｗｔＩＳＧ１５、２．４％；ｍｕｔＩＳＧ１５、３．１％）を示した（図４Ａ）。更に興味深いことに、ＨＰＶ１６アジュバントワクチンは、多機能性ＣＴＬの実質的により高い発現頻度を誘発し、１つ、２つ、及び３つの免疫学的機能を示す細胞を実質的に表す（図４Ｂ〜Ｃ）。特に、単独で投与されたＨＰＶ１６と比較して、ＩＳＧ１５処置群は、ＣＤ１０７ａ^＋ＩＦＮγ^＋ＴＮＦα^＋を同時発現するＣＤ８Ｔ細胞の大幅により高い発現頻度を示した（ｗｔＩＳＧ１５、０．３５％；ｍｕｔＩＳＧ１５，０．４３％）（図４Ｃ）。総合すると、抗ウイルスサイトカインを分泌するエフェクター細胞の高い発現頻度は、ＩＳＧ１５の（１）サイトカイン様特性、（２）ワクチン効力を強化するアジュバント作用、及び（３）機能性エフェクターＣＴＬ免疫を誘導するその可能性を示す。全体として、ここでの重要な観察は、抱合不可能なｍｕｔＩＳＧ１５を発現するＤＮＡプラスミドがｗｔ形態で提示されたアジュバント作用を維持したことであり、ＩＳＧｙｌａｔｉｏｎがＣＤ８Ｔ細胞の免疫調節に必要ではない可能性があることを示唆する。

実施例５
ＩＳＧ１５アジュバントは堅固なＡｇ特異的エフェクター−メモリーＣＤ８Ｔ細胞応答を増幅する
ワクチン誘導性ＨＰＶ腫瘍制御と相関し得る四量体特異的ＣＤ８Ｔ応答も検証した。この目的のため、非腫瘍保有Ｂ６マウスに、前述のワクチン製剤及び図２Ａのスケジュールで免疫化した。最終免疫化の１週間後、脾臓及び血液において、ＨＰＶ１６Ｅ７_{４９−５７}Ｈ２−Ｄ^ｂ−ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ四量体のＣＤ８エピトープ特異性を使用して、Ａｇ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答の規模及びサブセット分化を検査した（図５）。ｗｔＩＳＧ１５及びｍｕｔＩＳＧ１５構築物の両方が、ＨＰＶ１６群単独と比較して、脾臓においてＤ^ｂＥ７四量体特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答を際立って増強することができた（図５Ａ及びＢ）。加えて、両ＩＳＧ１５プラスミドの送達は、末梢血においてＤ^ｂＥ７四量体特異的ＣＤ８Ｔ細胞の数も顕著に増幅し、腫瘍標的特異的ＣＴＬの腫瘍輸送を示唆する（図５Ｅ）。ｗｔＩＳＧ１５及びｍｕｔＩＳＧ１５群内の血液におけるＥ７四量体Ｔ細胞の発現頻度は、それぞれ、非アジュバント群と比較して、４〜５．５倍高かった。このデータにより免疫アジュバントＩＳＧ１５がＡｇ特異的ＣＤ８Ｔ細胞を増幅できることが確認された。

エフェクター−メモリーＣＤ８Ｔ細胞が保護免疫の最適なサブセットであり、腫瘍に対する治療効力を予測し得ることを示唆してきた。エフェクターメモリーＴ細胞は、迅速にエフェクター機能を開始し、感染部位または腫瘍部位に素早く移動できるため、癌ワクチンの焦点である。この研究において、ＫＬＲＧ１の発現マーカーに基づいたＤ^ｂＥ７ＭＨＣクラスＩ四量体ワクチン誘導性エフェクター／エフェクター−メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞サブセット（エフェクターメモリー−Ｔ_ｅｆｆ）が測定された（図５）。ｗｔＩＳＧ１５の投与は、ＨＰＶ１６単独ワクチン接種群と比較して、脾臓中のＴ_ｅｆｆ細胞の割合において３倍の増強をもたらした（図５Ｃ及びＤ）。同様に、ｍｕｔＩＳＧ１５の包含も脾臓においてＴ_ｅｆｆ応答を際立って強化した（図５Ｄ）。加えて、５Ｆに示されるように、血液中のＴ_ｅｆｆ細胞の割合は、アジュバント群において顕著により高かった。これらのデータは、免疫アジュバントＩＳＧ１５がＥ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答の規模及び質を強化できることを示唆する。

実施例６
ＩＳＧ１５は、抗腫瘍免疫を誘導する効果的なＣＤ８Ｔ細胞免疫アジュバントとして作用した
ＴＣ−１腫瘍保有マウスモデルにおけるＩＳＧ１５の治療効力が次に検証された。未感作レシピエントＢ６マウス（ｎ＝１０／群）に、最初にＴＣ−１腫瘍（５×１０^４）細胞を皮下接種し、次いで腫瘍移植の４日後にＨＰＶ１６、ＨＰＶ１６／ｗｔＩＳＧ１５、ＨＰＶ１６／ｍｕｔＩＳＧ１５、またはｐＶＡＸ１のワクチン接種を行い（腫瘍は２ｍｍの平均的な大きさに達した）、その後１週間間隔で３回ブーストした（図６Ａ）。ＨＰＶ１６／ｗｔＩＳＧ１５の混合物で免疫化されたマウスの腫瘍はＨＰＶ１６ワクチン接種単独群よりも大幅に緩徐に成長した（図６Ｂ）。対照的に、ｐＶＡＸ１対照群はいずれの治療作用も示すことができず、３５日目までにすべてのマウスが死亡した。興味深いことに、ＨＰＶ１６／ｍｕｔＩＳＧ１５を与えられたマウスは、ＨＰＶ１６／ｗｔＩＳＧ１５を与えられたマウスよりも良好な腫瘍制御を顕著に誘導し、より高いＣＴＬ応答の誘導による可能性が高い。加えて、ＨＰＶ１６／ｗｔＩＳＧ１５と比較して、ＨＰＶ１６／ｍｕｔＩＳＧ１５の組み合わせはより定着したＴＣ−１腫瘍の退縮を迅速に誘導した（図８）。腫瘍移植後の４２日目に、ＨＰＶ１６（１／１０）またはＨＰＶ１６−ｗｔＩＳＧ１５（２／１０）のいずれかと比較して、ＨＰＶ１６−ｍｕｔＩＳＧ１５の６／１０匹のマウスに腫瘍はなかった（図８）。総合すると、ＩＳＧ１５のアジュバント特性は、効果的な制御及びＨＰＶ腫瘍保有マウスの治療治癒を示した。

定着した既存のＨＰＶ感染を標的とするために必須であるＥ７特異的ＣＴＬ応答を強化するＩＳＧ１５アジュバント特性を考慮して、ＨＰＶＴＣ−１腫瘍を排除するためのＩＳＧ１５誘発性ＣＤ８Ｔ細胞の重要な役割が検証された。したがって、治療設定において、腫瘍接種１日前に開始し、腫瘍移植後３日ごとに繰り返される、市販の抗ＣＤ８抗体を腹腔内注入することにより、ＣＤ８Ｔ細胞を枯渇した（図６Ｃ）。結果は、ＣＤ８の枯渇がＩＳＧ１５アジュバントの治療作用を大幅に阻害し、≦３０日ですべてのマウスが死亡したことを明らかにした（図６Ｄ）。これらの知見を確認するために、Ｔ細胞免疫不全Ｂ６Ｒａｇ１ＫＯマウスにおいて、ＣＤ８Ｔ細胞養子移入実験を行った。ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１６／ｗｔＩＳＧ１５、及びＨＰＶ１６／ｍｕｔＩＳＧ１５免疫化マウスからの脾細胞から精製した４×１０^６ＣＤ８Ｔ細胞（図２Ａ）を、ＴＣ−１細胞の接種後４日目に静脈内注入した（図６Ｅ）。ＨＰＶ１６及び非処置対照と比較して、ｗｔＩＳＧ１５またはｍｕｔＩＳＧ１５ワクチン誘導性ＣＤ８Ｔ細胞のいずれかを受容したマウスは、実質的により緩徐な腫瘍成長をもたらし（図６Ｆ）、それらの機能性ＣＴＬ表現型による可能性が高い（図３及び４）。総合すると、ＩＳＧ１５誘発性ＣＤ８Ｔ細胞は、ＨＰＶＴＣ−１治療モデルにおいて、長期生存及び腫瘍成長の制御に必須であることが証明された。

実施例１〜６は、Ａｇ特異的ＣＤ８Ｔ細胞腫瘍免疫を増大するＩＳＧ１５免疫アジュバント特性の治療効力を示す。前臨床ＨＰＶ治療曝露モデルは、ＤＮＡワクチン設定においてＩＳＧ１５のアジュバント作用を試験するために使用された。この研究の主な結果は、ＩＳＧ１５の包含が、（ｉ）多機能性Ａｇ特異的ＣＴＬ応答を増強できる、（ｉｉ）エフェクター様メモリーＣＤ８Ｔ細胞サブセット分化を誘導できる、（ｉｉｉ）抗腫瘍治療作用を有し得る、及び（ｉｖ）抱合とは関係なくワクチン誘導性保護免疫を誘発し、更に遊離ＩＳＧ１５サイトカイン様特性を確立できることである。

実施例７
実施例８〜１０の材料及び方法
マウス：ＩＳＧ１５−／−マウス及びそれらの同系野生型株Ｃ５７ＢＬ／６ＪをＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＢａｒＨａｒｂｏｒ，ＭＥ）から得て、ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＰｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａＨｉｌｌＰａｖｉｌｉｏｎＡｎｉｍａｌＦａｃｉｌｉｔｙ及びＴＴＵＨＳＣＡｂｉｌｅｎｅＬＡＲＣで繁殖し、収容した。マウスを、減菌水及びＵＶ処理または加圧殺菌した標準的なゲッパ類用飼料で１２時の明暗周期に維持した。すべてのマウス実験は、ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｅａｌｔｈのガイドラインに従い、ＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌＡｎｉｍａｌＣａｒｅａｎｄＵｓｅＣｏｍｍｉｔｔｅｅｏｆｔｈｅＴＴＵＨＳＣ及びＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＰｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａの規則に従って行われた。

細菌株：ＬＭ株１０４０３Ｓを、５０ｕｇ／ｍＬのストレプトマイシンで補足したＢＨＩ（ブレインハートインフュージョン、ＣＭ１１３５，ＯｘｏｉｄＬＴＤ，Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）培地中で培養し、中対数成長期で採取し（Ｏ．Ｄ．６００で０．６〜０．８）、液体Ｎ_２中でアリコート瞬時凍結し、−８０℃で保管した。ＬＭストック力価は、解凍したストックバイアルを系列希釈し、希釈物をＢＨＩストレプトマイシン寒天プレート上に播き、３７℃で１８〜２４時間後にコロニー形成単位（ＣＦＵ）を数えることにより決定した。各感染実験に関して、凍結ストックバイアルは新たに解凍され、遠心分離により細菌をペレット化し、ペレットを１×リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄した。

インビトロＬＭ感染：骨髄由来マクロファージ（ＢＭＭ）の感染は、Ｓｉｎｇｈ，Ｒ．，Ａ．Ｊａｍｉｅｓｏｎ，ａｎｄＰ．Ｃｒｅｓｓｗｅｌｌ，ＧＩＬＴｉｓａｃｒｉｔｉｃａｌｈｏｓｔｆａｃｔｏｒｆｏｒＬｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ，２００８．４５５（７２１７）：ｐ．１２４４−７（Ｓｉｎｇｈｅｔａｌ．）（それらの全体が参照により組み込まれる）において前に記載されたように行われた。ｍＲＮＡ分析に関して、ＢＭＭを、組織培養処理された皿に播種し、一晩インキュベートし、１０の感染多重度（ＭＯＩ）でＬＭに感染させた。感染細胞を洗浄し、感染の３０分後にゲンタマイシンを添加し、製造業者の指示に従ってＲＮｅａｓｙＭｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ＲＮＡ単離のために細胞を加工した。

インビボＬＭ感染：ｑＰＣＲ及びＥＬＩＳＡによるサイトカイン応答を決定するための一次感染研究に関して、６〜８週齢のＣ５７ＢＬ／６及びＩＳＧ１５−／−マウスを、２００μｌの減菌１×ＰＢＳ中１０^５ＣＦＵのＬＭの腹腔内（ｉ．ｐ．）注入の３日後に安楽死させた。ポリ（Ｉ：Ｃ）悪化させたリステリア症におけるＩＳＧ１５の役割を決定するために、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ及びＩＳＧ１５^−／−マウスは、１０^４ＣＦＵのＬＭ単独でｉ．ｐ．感染されるか、またはＬＭ感染の２日後に１５０μｇのポリ（Ｉ：Ｃ）をｉ．ｐ．投与された。すべてのマウスを感染後４日目に安楽死させ、脾臓を摘出した。脾臓を単一細胞懸濁液に加工し、系列希釈し、５０ｕｇ／ｍＬのストレプトマイシンで補足したＢＨＩ寒天プレート上に播き、３７℃で一晩成長させた後、コロニー形成単位を数えた。長手方向感染研究に関して、６〜８週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ及びＩＳＧ１５^−／−マウスを、２００μｌの減菌１×ＰＢＳ中１０^４ＣＦＵのＬＭでｉ．ｐ．感染させた。実験の最後に、マウスを安楽死させ、細菌負荷のために加工された。脾臓及び肝臓中のＬＭＣＦＵは、Ｓｉｎｇｈらにおいて以前に記載されたように決定された。図１において、マウスに２００μｌの１ｘＰＢＳ中１０^３、１０^４、及び１０^５ＣＦＵＬＭでｉ．ｐ．注入し、感染後の４日目に安楽死させた。感染マウスの脾臓及び肝臓を採取し、ＬＭ細菌負荷を単一細胞懸濁液の系列希釈により決定し、５０ｕｇ／ｍＬのストレプトマイシンで補足したＢＨＩ寒天上で一晩成長させた後、コロニー形成単位を数えた。図２において、６〜８週齢のＣ５７ＢＬ／６及びＩＳＧ１５−／−マウスを１０^３ＣＦＵの弱毒化ΔａｃｔａＬＭ株であるＤＰＬ−４０２９に感染させた。続いて、未感作ＷＴ及びＩＳＧ１５−／−マウスとともにこれらのマウスを１０^５ＣＦＵのＬＭの腹腔内注入により曝露した。曝露の５日後、マウスを安楽死させ、フローサイトメトリー分析及び細菌負荷決定のために器官を加工した。

定量的ＰＣＲ：ＲＮｅａｓｙｐｌｕｓｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ＲＮＡを、脾細胞及び骨髄由来マクロファージから単離した。Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度計を使用してＲＮＡを定量化し、ＨｉｇｈＣａｐａｃｉｔｙｃＤＮＡＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して１ｕｇのＲＮＡをｃＤＮＡに変換した。ＦＡＳＴＳＹＢＲＧｒｅｅｎ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）と組み合わせて、ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓＲｅａｌＴｉｍｅシステムをｑＰＣＲ分析に使用した。群間の標的遺伝子の相対量を決定するために、参照として１８ＳｒＲＮＡを使用した。

ＥＬＩＳＡ：安楽死後心臓穿刺出血により血清を回収し、４℃で３０分間インキュベートし、続いて遠心分離した後、血餅を除去した。血清試料を１：４０希釈し、製造業者の指示に従ってマウスＥＬＩＳＡＲｅａｄｙ−ＳＥＴ−Ｇｏ！キット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して、ＩＦＮ−γのレベルについてアッセイした。マイクロプレートリーダー（ＳｙｎｅｒｇｙＨＴ，ＢｉｏＴｅｋ）を使用して、Ｏ．Ｄ．４５０で結果を得、Ｇｅｎ５（Ｖｅｒ１．０８）で分析した。

フローサイトメトリー分析：図１〜２において、脾臓をマウスから摘出し、５ｍＬの完全培地（ＣｏｒｎｉｎｇＣｅｌｌｇｒｏ；ＤＭＥＭ１Ｘ；Ｃａｔｎｏ．１５−０１３−ＣＭ）に設置した。脾臓を機械により細断し、４０ｕｍのセルストレーナー（Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号２２３６３５４９，２２３６３５４７）を通して単一細胞懸濁液を得た。ＡＣＫ溶解緩衝液で３〜５分間、室温で細胞を処理し，１×ＰＢＳ中で３回洗浄した。細胞を完全培地に懸濁し、ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒＶｉ−ＣｅｌｌＸＲを使用して、細胞数を決定した。Ｔ細胞刺激に関して、２×１０^６細胞を９６ウェル丸底プレートに設置し、モネンシンの存在下で、３７℃、５％のＣＯ_２で６時間、５ｕｇ／ｍＬのペプチドまたはＰＭＡ／イオノマイシンで刺激した。細胞表面染色に関して、蛍光色素標識ｍＡｂを使用して、抗ＣＤ１６／ＣＤ３２（Ｃｌｏｎｅ９３；１４−０１６１−８５）でのＦｃ遮断後に脾細胞を様々な細胞表面マーカーで染色した。ＬＳＲＩＩまたはＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＳａｎＪｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）ですべての試料を取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ｖ１０，ＴｒｅｅＳｔａｒ）を使用してデータを分析した。図３において、脾細胞を９６ウェルプレート（１×１０^６／ウェル）に添加し、製造業者の指示に従って、タンパク質輸送阻害剤カクテル（ブレフェルジンＡ及びモネンシン）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の存在下で、３７℃／５％のＣＯ_２で５〜６時間、Ｈ−２^ｂバックグラウンド（Ｄ^ｂＮＰ_{３９６−４０４}（ＮＰ３９６））（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からのＬＣＭＶ免疫優性ＬＣＭＶエピトープで刺激した。細胞刺激カクテル（加えてタンパク質輸送阻害剤）（ホルボール１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）、イオノマイシン、ブレフェルジンＡ、及びモネンシン）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を陽性対照として、Ｒ１０培地を陰性対照として使用した。次いで、すべての細胞を、製造業者の指示（ＢＤ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）により説明されるように、表面及び細胞内タンパク質について染色した。簡潔に、蛍光色素共役抗体を用いた表面染色の前に、ＦＡＣＳ緩衝液（０．１％のアジ化ナトリウム及び１％のＦＣＳを含有するＰＢＳ）で細胞を洗浄した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、製造業者のプロトコルに従ってＢＤＣｙｔｏｆｉｘ／ＣｙｔｏｐｅｒｍＴＭ（ＢＤ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して、固定及び浸透させ、続いて細胞内染色した。すべてのデータはＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して収集し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）及びＳＰＩＣＥｖ５．２（ｈｔｔｐ：／／ｅｘｏｎ．ｎｉａｉｄ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｓｐｉｃｅ／から無料で入手可能）を使用して分析した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してＢｏｏｌｅａｎゲーティングを行い、ワクチン接種した動物のＴ細胞の多機能性を検査した。前方散乱（ＦＳＣ−Ａ）に対するＬＩＶＥ／ＤＥＡＤｆｉｘａｂｌｅｖｉｏｌｅｔ死細胞染色キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でのゲーティングによって死細胞を除去した。

プラスミド構築：マウスＩＳＧ１５のＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｑ６４３３９．４を使用して、ＩＳＧ１５プラスミドＤＮＡ構築物を合成した。ＩＳＧ１５プラスミドＤＮＡ構築物が、遺伝子の５’末端に挿入された高効率の免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）リーダー配列を有した。構築物は、商業的に合成され、マウスにおける発現のために遺伝子的に最適化され（コドン及びＲＮＡ最適化）、次いで改変ｐＶＡＸ１哺乳類発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）にサブクローン化された（すべてＧｅｎＳｃｒｉｐｔ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪによる）。ｐＬＣＭＶ−ＮＰ（ＮＰ）を発現するプラスミドは、Ｓｈｅｄｌｏｃｋ，Ｄ．Ｊ．，ｅｔａｌ．，ＡｈｉｇｈｌｙｏｐｔｉｍｉｚｅｄＤＮＡｖａｃｃｉｎｅｃｏｎｆｅｒｓｃｏｍｐｌｅｔｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｉｍｍｕｎｉｔｙａｇａｉｎｓｔｈｉｇｈ−ｄｏｓｅｌｅｔｈａｌｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃｃｈｏｒｉｏｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓｖｉｒｕｓｃｈａｌｌｅｎｇｅ．Ｖａｃｃｉｎｅ，２０１１．２９（３９）：ｐ．６７５５−６２（Ｓｈｅｄｌｏｃｋ２０１３ｅｔａｌ．）（その全体が参照により組み込まれる）において前に記載されたように調製された。

プラスミドのトランスフェクション及び発現：インビトロＩＳＧ１５はウエスタンブロット（ＷＢ）分析により確認された。２９３Ｔ細胞を６ウェルプレート内で培養し、製造業者のプロトコルに従ってＮｅｏｆｅｃｔｉｎトランスフェクション試薬（ＮｅｏＢｉｏｌａｂ）を使用して、構築物をトランスフェクトした。４８時間後、完全プロテアーゼ阻害剤カクテル錠剤（Ｒｏｃｈｅ）を含む修正済み細胞溶解緩衝液（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ）を使用して細胞を溶解し、細胞可溶化物を回収した。ＷＢ分析を、抗ＩＳＧ１５抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ）を用いて行い、Ｏｄｙｓｓｅｙイメージングシステム（Ｌｉ−Ｃｏｒ）を使用して、ＩＲＤｙｅ８００ＣＷヤギ抗ウサギ抗体（Ｌｉ−Ｃｏｒ）を用いて可視化した。β−アクチンは、装填制御として機能し、ＩＲＤｙｅ６８０ヤギ抗マウス抗体（Ｌｉ−Ｃｏｒ）を用いて可視化された。加えて、間接免疫蛍光顕微鏡アッセイもＩＳＧ１５ＤＮＡ構築物の発現を確認するために実施された。横紋筋肉腫（ＲＤ）細胞を２ウェルチャンバスライド（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上に播き、５％のＣＯ_２を用いて３７のインキュベーターで７０％コンフルエンスまで一晩成長させた。製造業者の指示に従ってＴｕｒｂｏＦｅｃｔｉｎＴＭ８．０トランスフェクション試薬（ＯｒｉＧｅｎｅ）を使用して、１μｇのＩＬ−３３構築物及び対照プラスミドｐＶＡＸ（１μｇ／ウェル）を細胞にトランスフェクトした。４８時間後、１０分間氷冷メタノールを使用してスライド上に細胞を固定した。細胞を抗ＩＳＧ１５マウスモノクローナル抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ）で染色し、その後、Ａｌｅｘａ５５５共役抗ラット二次抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ）とともにインキュベートした。ＤＡＰＩを有するＦｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔＧ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して、スライドを載置した。蛍光顕微鏡（ＬｅｉｃａＤＭ４０００Ｂ，ＬｅｉｃａＭｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓＩｎｃ，ＵＳＡ）によって画像を分析し、ＳＰＯＴＡｄｖａｎｃｅｄソフトウェアプログラム（ＳＰＯＴＴＭＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ）を使用して定量化を行った。

ワクチン接種及びＬＣＭＶ曝露：Ｖｉｌｌａｒｒｅａｌら及びＳｈｅｄｌｏｃｋらにおいて前に記載されたように、マウスを、前脛骨筋の筋肉内注射（ｉ．ｍ．）により１回免疫化した。ワクチン接種の直後に同じ部位でＣＥＬＬＥＣＴＲＡ適応性定電流電気穿孔デバイス（ＩｎｏｖｉｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を用いてインビボ電気穿孔を行った。マウス（ｎ＝５）を、１１μｇのＩＳＧ１５構築物を含む、もしくは含まない１０μｇのｐＶＡＸ１または１０μｇのｐＬＣＭＶ−ＮＰのいずれかで免疫化した。すべての研究を少なくとも３回繰り返した。致死的曝露研究に関して、Ｓｈｅｄｌｏｃｋ２０１３らにおいて前に記載されたように、マウスを３０μｌのウイルス希釈剤（２０％ＦＢＳ及び１×Ａｎｔｉ−Ａｎｔｉ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を含むＰＢＳ中４０×ＬＤ_５０のＬＣＭＶＡｒｍｓｔｒｏｎｇにｉ．ｃ．曝露した。ＬＣＭＶに曝露されたすべてのマウスをＢＳＬ−２施設に収容し、２１日間毎日観察した。

ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ：Ｖｉｌｌａｒｒｅａｌら及びＳｈｅｄｌｏｃｋらにおいて前に記載されたように、ワクチン誘導性応答を監視するために、免疫化の２１日後に脾臓を採取した。Ｖｉｌｌａｒｒｅａｌら及びＳｈｅｄｌｏｃｋらにおいて前に記載されたように、脾臓を採取し加工した後、ＩＦＮ−γ ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを行って、免疫化マウスからの抗原特異的サイトカイン分泌を決定した。

統計分析：感染またはワクチン接種により誘導された細胞性免疫応答の定量的データの比較のために、スチューデントｔ検定を適用した。統計的に有意な外れ値は、ＲＯＵＴ方法を適用することによりデータセットから除かれた。誤差棒はＳＥＭを示し、すべての試験はＰｒｉｓｍＳｏｆｔｗａｒｅ（ＬａＪｏｌｌａ，ＣＡ）を使用して行った（ＮＰと比較して、＊，Ｐ＜０．０５；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊＊＊，Ｐ＜０．００１）。ログランク（マンテル−コックス）検定によって生存曲線を分析した。

実施例８
自然免疫応答に対するＩＳＧ１５の作用
モデル病原体であるＬｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ（ＬＭ）に対する自然免疫応答におけるＩＳＧ１５の関連性を決定するために、野生型Ｃ５７／ＢＬ６マウスにおけるＬＭ感染後にＩＳＧ１５遺伝子発現を検査した。マウスを１０^５ＬＭＣＦＵに感染させ感染させ、未感染マウスの群とともに、３日目の感染のピークで安楽死させた。脾臓を切除し、単一細胞懸濁液に加工し、ＲＮＡを抽出した。ｃＤＮＡに変換した後、ｑＰＣＲ分析により、Ｉｓｇ１５の発現について脾臓を評価した。骨髄由来マクロファージ（ＢＭＭ）をＭ−ＣＳＦで分化し、ＬＭに感染させた（ｎ＝３／群）。未感染対照とともに、感染後８時間後及び１６時間後にＢＭＭを溶解し、ＲＮＡ抽出のために加工した。ｃＤＮＡ変換後、ＢＭＭを、Ｉｓｇ１５遺伝子発現についてそのＥ１活性化酵素であるＵｂｅｌ１ｌの遺伝子とともに評価した。１０^５ＬＭＣＦＵに感染させた野生型（ｎ＝４）及びＩＳＧ１５−／−マウス（ｎ＝５）を感染後の３日目に安楽死させ、血清を回収して、ＩＳＧ１５ＥＬＩＳＡにより分泌されたＩＳＧ１５タンパク質のレベルを評価した。ＢＭＭをＬＭに感染させ、続いて感染の１時間後にイソ型対照またはＩＦＮ−β遮断抗体で処理した（ｎ＝３／群）。実験の終わりに、ＢＭＭを溶解し、ｍＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡに変換し、ｑＰＣＲ分析によりＩｓｇ１５遺伝子発現を評価した。野生型（ｎ＝４）及びＩＳＧ１５−／−（ｎ＝５）マウスは、１０^４ＣＦＵのＬＭ単独でｉ．ｐ．感染されるか、またはＬＭ感染の２日後に１５０μｇのポリ（Ｉ：Ｃ）をｉ．ｐ．投与された（ｎ＝３／群）。すべてのマウスを感染の４日後に安楽死させ、脾臓を切除し、単一細胞懸濁液に加工した。懸濁液を系列希釈し、脾臓当たりのコロニー形成単位（ＣＦＵ）を決定するために、ＢＨＩストレプトマイシン寒天プレート上に播いた。野生型及びＩＳＧ１５−／−マウス（ｎ＝３／群）を１０^４ＣＦＵのＬＭでｉ．ｐ．感染させ、感染後の１日目、３日目、及び５日目に安楽死させた。感染マウスから脾臓及び肝臓を切除し、単一細胞懸濁液に加工した。懸濁液を系列希釈し、器官当たりのコロニー形成単位（ＣＦＵ）を決定するために、ＢＨＩストレプトマイシン寒天プレート上に播いた。各マウスの脾臓及び肝臓からのＬＭＣＦＵを付加することにより、全細菌負荷を決定した。ＬＭ感染の感受性が用量依存性であるかを決定するために、ＷＴ及びＩＳＧ１５−／−マウス（ｎ＝５／群）をＬＭＣＦＵの対数範囲の用量でｉ．ｐ．感染させた。感染後の４日目に、脾臓及び肝臓を摘出し、単一細胞懸濁液に加工し、系列希釈し、ＢＨＩストレプトマイシン寒天プレート上に播いた。対数範囲の用量で感染させた後のＷＴ及びＩＳＧ１５−／−の脾臓におけるＬＭＣＦＵを描写する散布図を準備した。対数範囲の用量で感染させた後のＷＴ及びＩＳＧ１５−／−の肝臓におけるＬＭＣＦＵを描写する散布図も準備した。野生型（ｎ＝５／群）及びＩＳＧ１５−／−マウス（ｎ＝３／群）を１０^５ＣＦＵのＬＭでｉ．ｐ．感染させ、感染後の３日目の感染のピークで安楽死させた。脾臓を切除し、単一細胞懸濁液に加工し、ＲＮＡを抽出した。ｃＤＮＡに変換した後、炎症促進性サイトカイン遺伝子Ｉｆｎｇの発現について脾臓を評価した。ＩＦＮ−γの産生及び分泌は、感染後の３日目の感染のピークで１０^５ＣＦＵのＬＭに感染させたＷＴ及びＩＳＧ１５−／−マウス（ｎ＝５／群）からの血清のＥＬＩＳＡ分析により確認された。血清中のＩＦＮ−γタンパク質の量はタンパク質標品を用いて計算された。＊，Ｐ＜０．０５；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊＊＊，Ｐ＜０．００１。

Ｉｓｇ１５ｍＲＮＡ発現は、３日目の感染のピークで顕著に誘導され、未感染対照マウスと比較して、感染の主要部位である脾臓において１００倍高いＩｓｇ１５の発現を有した。ＬＭによる骨髄由来マクロファージ（ＢＭＭ）の感染もＩｓｇ１５及びＩＳＧ１５Ｅ１抱合酵素Ｕｂｅ１Ｌをコードする遺伝子の一時的な誘導をもたらした。更に、分泌されたＩＳＧ１５タンパク質がＬＭ感染のピークで感染ＷＴマウスの血清において検出されたが、ＩＳＧ１５−／−対照において検出されなかった。ＩＦＮ−βの抗体媒介遮断はＬＭ感染ＢＭＭにおいてＩｓｇ１５誘導を顕著に弱めたため、ＬＭ感染中のＩｓｇ１５の発現はＩ型ＩＦＮ依存であった（図１Ｄ）。これらのデータは、ＩＳＧ１５経路がＬＭ感染中に誘導され、Ｉ型ＩＦＮの産生に依存することを示唆する。ウイルス感染とは対照的に、Ｉ型ＩＦＮは、ＬＭに対する自然及び獲得応答の両方を損なうことによって、リステリア症を含むある特定の細菌感染を悪化させる。ＩＳＧ１５がリステリア症のＩ型ＩＦＮ悪化を媒介するかを決定するために、ＩＳＧ１５−／−マウスをＬＭに感染させ、ｄｓＲＮＡ模倣分子ポリ（Ｉ：Ｃ）を投与することによりＩ型ＩＦＮを誘導した。意外にも、ＩＳＧ１５はリステリア症のＩ型ＩＦＮ媒介悪化に必要ではなく、２つの独立した実験は、ＩＳＧ１５−／−マウスがＬＭ感染に更により感受性であり得ることを示唆した。ＬＭに対する自然免疫におけるＩＳＧ１５の役割が経時変化感染で更に探求された。感染後の１日目に、ＩＳＧ１５−／−マウスは、大幅に減少した細菌負荷により示されるように、ＬＭでの急性感染により耐性であった。しかしながら、細菌負荷は３日目の感染のピークでＩＳＧ１５−／−マウスにおいて大幅に上昇し、それらの野生型対応物とは対照的に、続いて上がり続けた。以前の研究がＬＭに対して用量依存性感受性を示したように、この結果が初期の感染用量にのみ関連性があるかどうか、次に１０^４ＣＦＵを調べた。ＷＴ及びＩＳＧ１５−／−マウスを１０^３ＣＦＵ〜１０^５ＣＦＵのＬＭの対数範囲の感染用量で感染させた。最低用量のＬＭ（１０^３ＣＦＵ）を受容したＷＴマウスの脾臓において、４０％のみのマウスにリステリア症の兆候があった。しかしながら、８０％のＩＳＧ１５^−／−マウスがそれらの脾臓において検出可能なレベルのＬＭを有した。類似する結果が最低用量を受容した後のＷＴ及びＩＳＧ１５−／−の肝臓において観察され、それぞれ２０％及び１００％のマウスがリステリア症を示した。ＩＳＧ１５−／−マウスの脾臓及び肝臓の両方において、リステリア症の大幅な増加がより高い開始用量でも観察された。ＮＫ細胞数は類似したが（図１Ｉ）、ＩＳＧ１５−／−マウスにおける急性ＬＭ感染に対する感受性の増加は、大幅に低下した脾臓ｉｆｎｇの発現及びＩＦＮ−γ（ＬＭ感染のクリアランスにおける必須炎症促進性サイトカイン）の血清レベルと相関した。

実施例９
獲得免疫応答に対するＩＳＧ１５の作用
ＬＭ病原性はＬＭに対する獲得免疫と逆相関することが前に報告されたため、ＩＳＧ１５欠損がＬＭに対する獲得免疫応答を損なうかどうかを調べた。野生型（ＷＴ）及びＩＳＧ１５−／−マウスを、１０^３ＣＦＵの弱毒化ＬＭ株ＤＰＬ−４０２９で前感染させて、または前感染させずに、１０^５ＣＦＵのＬＭにｉ．ｐ．感染させた。ホルボール１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）（５０ｎｇ／ｍＬ）及びイオノマイシン（８００ｎｇ／ｍＬ）で刺激した、または刺激しないＬＭ感染ＷＴ及びＩＳＧ１５−／−マウスからのＬＬＯ特異的ＩＦＮγ産生脾臓ＣＤ４^＋Ｔ細胞を特定し分析した。ＬＭに対する自然応答及び獲得応答中の脾臓ＣＤ８＋Ｔ細胞数及び脾臓ＣＤ４^＋Ｔ細胞を特定し分析した。ＷＴ及びＩＳＧ１５−／−マウスのマウス、脾臓、及び肝臓における全ＬＭ細菌負荷を分析した。ＬＭに対する自然応答及び獲得応答中の脾臓骨髄細胞を特定し分析した。骨髄細胞の割合はＣＤ１１ｃ^ｈｉであり、脾細胞の全体的な割合はＬＭ感染中従来のＤＣである。ＷＴ及びＩＳＧ１５−／−脾臓は１ｕｇのＬＰＳで６時間刺激され、ＤＣ成熟に関連するマーカーの表面発現は、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ならびにＣＤ８０及びＣＤ８６の同時発現の発現に関してフローサイトメトリーにより評価された。＊，Ｐ＜０．０５；＊＊，Ｐ＜０．０１；＊＊＊，Ｐ＜０．００１，＊＊＊＊，Ｐ＜０．０００１。

ＬＭの高度に弱毒化した株（ＤＰＬ−４０２９）で前感染した後、ＷＴ及びＩＳＧ１５−／−マウスをＬＭの病原性１０４０３Ｓ株に曝露し、感染後の５日目に獲得免疫の発達を評価した。ＩＳＧ１５−／−マウスは、ＬＭ曝露後、類似する数のＬＬＯ特異的脾臓ＣＤ４＋Ｔ細胞を生成した。加えて、脾臓ＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞の全体的な数は、ＷＴとＩＳＧ１５−／−マウスとの間で比較可能であった。しかしながら、ＩＳＧ１５−／−マウスは、全体的な細菌負荷が評価されたとき、ＬＭに対する応答に対してあまり効果的でない獲得免疫を開始するように見えた。興味深いことに、脾臓Ｔ細胞数に一致して、前に感染させたマウスにおける脾臓ＬＭ細菌負荷はＩＳＧ１５−／−とＷＴマウスとの間で比較可能であったため、これらの欠損は組織特異的であった。しかしながら、前に感染させたＩＳＧ１５−／−マウスにおける肝臓細菌負荷は、前に感染させたＷＴマウスよりも約１００倍大きかった（図２Ｇ）。この結果は、ＩＳＧ１５が肝臓免疫特権に関与する可能性があることを示唆するが、他の要因も作用している可能性がある。より多くの数の骨髄細胞がＩＳＧ１５−／−マウスの脾臓において観察されたが、肝臓に対する堅固なＴ細胞応答の誘導を容易する通常の樹状細胞が大幅に少なかったため、ＬＭに対する獲得免疫応答の変化は、骨髄コンパートメントにおいて観察された欠損によるものであり得る。更に、ＬＰＳによる脾臓樹状細胞の刺激は、共刺激分子ＣＤ８０及びＣＤ８６の表面レベルの低下により示されるように、ＩＳＧ１５の欠損が樹状細胞の成熟を損なうことを明らかにした。これらの結果は、ＩＳＧ１５が抗原提示細胞数及び機能を増大させることにより、Ｔ細胞媒介獲得免疫を促進する祭に重要であり得ることを示唆する。

実施例１０
免疫応答を増大するアジュバントとしてのＩＳＧ１５の作用
これらの観察されたＩＳＧ１５の免疫調節特性が免疫特権部位に対する応答を強化するように治療に活用できるかを決定するために、Ｔ細胞媒介免疫を増大するＤＮＡワクチンアジュバントとしてそれを送達することにより、野生型マウスにおいてＩＳＧ１５の過剰発現を誘導した。２９３Ｔ細胞におけるＩＳＧ１５の発現はウエスタンブロット分析により検査された。タンパク質は抗ＩＳＧ１５ｍＡｂにより検出され、ＩＳＧ１５の発現は免疫蛍光顕微鏡を介して検出された。３Ｔ３細胞における空ｐＶＡＸ及びｐＶＡＸ−ｍＩＳＧ１５のトランスフェクション後のＩＳＧ１５の分泌は、馴化培地のＥＬＩＳＡを介して確認された。Ｂ６マウス（ｎ＝５／群）をＩＳＧ１５で、またはそれなしで１回免疫化した。２１日後、マウスを屠殺し、ワクチン誘導性免疫応答を監視するために、脾臓を加工した。電気穿孔を介したＩＭ免疫化に使用されるとき、ＩＳＧ１５と組み合わせて、ＬＣＭＶＤｂＮＰ３９６−４０４抗原（ＮＰ３９６）に対する抗原特異的免疫応答を検出するために、ＩＦＮ−γ ＥＬＩＳｐｏｔを行った。多機能性ＣＤ８^＋Ｔ細胞サイトカインプロファイルの割合を決定するために、マルチパラメータフローサイトメトリーを使用した。ＮＰ特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合は、サイトカインを分泌する、シングルポジティブＣＤ８^＋Ｔ細胞のトリプル、ダブルとして表された。円グラフが生成され、各サイトカイン亜集団の相対的比率を示す。マウス（ｎ＝１０／群）を、ＩＳＧ１５アジュバントを含む、もしくは含まない、１０ｕｇの空ベクター対照プラスミド（ｐＶＡＸ）または１０ｕｇのＬＣＭＶ−ＮＰを用いて、ＥＰを使用してＩＭで１回免疫化した。ワクチン接種後の２１日目に、４０×ＬＤ５０ＬＣＭＶでマウスを頭蓋内曝露し、動物の生存を分析した。独立した実験において少なくとも３回実験を行った。＊，Ｐ＜０．０５；＊＊，Ｐ＜０．０１，＊＊＊＊，Ｐ＜０．０００１。

インビボ哺乳類ＩＳＧ１５発現ＤＮＡプラスミドを開発した。簡潔に、ＣＭＶプロモーターの制御下で、及びＩｇＥリーダー配列とともに、マウスＩＳＧ１５遺伝子をｐＶＡＸ哺乳類発現ベクターにクローン化して、分泌させた。２９３Ｔ細胞にｐＶＡＸ−ｍＩＳＧ１５をトランスフェクトした後、ウエスタンブロット分析及び蛍光顕微鏡により決定されるように、細胞は細胞内マウスＩＳＧ１５を良好に発現した。前に記載したように、ＩＳＧ１５タンパク質は、核染色ＤＡＰＩによる共局在により決定されたように、細胞質及び核の両方に見られた（図３Ｃ）。ＩｇＥリーダー配列の包含により、ｐＶＡＸ−ｍＩＳＧ１５を用いたトランスフェクションは、空ベクターをトランスフェクトされた細胞と比較して、ｐＶＡＸ−ｍＩＳＧ１５トランスフェクトされた３Ｔ３細胞からのマウスＩＳＧ１５の培養上清内への良好な分泌ももたらした。ＩＳＧ１５がＣＤ８^＋Ｔ細胞媒介免疫を増大するように治療に活用できるかを決定するために、ＩＳＧ１５に関連性がない、頭蓋内（ｉ．ｃ．）リンパ性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＭＣＶ）感染モデルである感染モデルで更なる研究を行った。ＬＣＭＶ感染モデルは、感染マウスの脳に対するＣＤ８^＋Ｔ細胞応答を研究するための確立されたモデルである。したがって、ＩＳＧ１５により駆動されたＣＤ８＋Ｔ細胞応答を特徴付けるために、ｍＩＳＧ１５を発現するプラスミドとともに、またはそれなしで、ＬＣＭＶ構造タンパク質ＮＰを発現するプラスミドをマウス群に筋肉内投与した。ｍＩＳＧ１５とともに投与されたＮＰワクチンを受容したマウスは、ｐＶＡＸ−ＮＰまたは空ｐＶＡＸプラスミド単独を受容したマウスよりも大幅に多いＤ^ｂＮＰ_{３９６−４０}（ＮＰ３９６）特異的ＩＦＮ−γスポット形成細胞（ＳＦＣ）を生成した。更に、ｍＩＳＧ１５とともに投与されたＮＰワクチンは、抗原のみを発現するベクターを受容したマウスと比較して、大幅に高い割合のＮＰ特異的多機能性ＣＤ８^＋Ｔ細胞を誘導した。観察したｍＩＳＧ１５のアジュバンド作用が生存に影響を及ぼしたかを決定するために、ワクチン接種した２１日後に、致死頭蓋内用量（４０×ＬＤ_５０）のＬＣＭＶＡｒｍｓｔｒｏｎｇ株にマウスを曝露した。致死ＬＣＭＶ感染に対する劇的な生存の増加が、ＮＰ抗原のみを受容した群と比較して、ｍＩＳＧ１５及びＮＰワクチン群において観察された（図３Ｇ）。総合すると、これらのデータは、ｍＩＳＧ１５が免疫特権部位に対してさえも高度に効果的な抗原特異ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答を活性化する免疫アジュバントとして作用し得ることを示す。

実施例７〜１０の研究は、ＩＳＧ１５が細菌病原体ＬＭに対する自然免疫に関与することが見出されたため、免疫におけるＩＳＧ１５の拡大した役割を支持する。更に、ＩＳＧ１５の欠損は脾臓ＬＭ特異的Ｔ細胞応答の形成を妨害しないが、保護性獲得免疫は、後のＬＭ曝露後のＩＳＧ１５−／−マウスの肝臓においては明らかではない。加えて、ＩＳＧ１５−／−マウスからの脾臓ＤＣは成熟マーカーの発現を低下させ、ＷＴマウスによるＩＳＧ１５の過剰発現は、病原体特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答を増大し、致死頭蓋内ＬＣＭＶ曝露に対する生存を増加させることができた。実施例７〜１０は、自然抗細菌免疫の重要なメディエータ及び獲得免疫の強力なアクティベータとしてのＩＳＧ１５を示す。

上記の詳細な説明及び付随する実施例は、単に例示であり、添付の特許請求の範囲及びそれらの均等物によってのみ定義される本発明の範囲に対する制限であると解釈されるべきではないことを理解されたい。

開示される実施形態に対する様々な変更及び修正は、当業者には明白であろう。限定されないが、本発明の化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成、組成物、製剤、または使用方法に関連するものを含むかかる変更及び修正は、その主旨及び範囲から逸脱することなく行うことができる。

完全性の理由から、本発明の様々な態様を以下の番号を付けた条項に記載する。

条項１．抗原及びＩＳＧ１５を含む、ワクチン。

条項２．ＩＳＧ１５が、配列番号１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号１に記載のヌクレオチド配列、配列番号３に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号３に記載のヌクレオチド配列、配列番号５に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号５に記載のヌクレオチド配列、配列番号７に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号７に記載のヌクレオチド配列、配列番号９に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、及び配列番号９に記載のヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列によってコードされる、条項１に記載のワクチン。

条項３．ＩＳＧ１５が、配列番号１に記載のヌクレオチド配列によってコードされる、条項２に記載のワクチン。

条項４．ＩＳＧ１５が、配列番号３に記載のヌクレオチド配列によってコードされる、条項２に記載のワクチン。

条項５．ＩＳＧ１５が、配列番号５に記載のヌクレオチド配列によってコードされる、条項２に記載のワクチン。

条項６．ＩＳＧ１５が、配列番号７に記載のヌクレオチド配列によってコードされる、条項２に記載のワクチン。

条項７．ＩＳＧ１５が、配列番号９に記載のヌクレオチド配列によってコードされる、条項２に記載のワクチン。

条項８．前記抗原が、第１の核酸によってコードされ、ＩＳＧ１５が、第２の核酸によってコードされる、条項１に記載のワクチン。

条項９．前記抗原が、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原、インフルエンザ抗原、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ抗原、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原、リンパ性脈絡髄膜炎（ＬＣＭＶ）抗原、及びこれらの断片からなる群から選択される、条項１に記載のワクチン。

条項１０．前記ＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ１６Ｅ６抗原、ＨＰＶ１６Ｅ７抗原、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、条項９に記載のワクチン。

条項１１．前記ＨＩＶ抗原が、ＥｎｖＡ、ＥｎｖＢ、ＥｎｖＣ、ＥｎｖＤ、ＢＮｅｆ−Ｒｅｖ、Ｇａｇ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、条項９に記載のワクチン。

条項１２．前記インフルエンザ抗原が、Ｈ１ＨＡ、Ｈ２ＨＡ、Ｈ３ＨＡ、Ｈ５ＨＡ、ＢＨＡ抗原、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、条項９に記載のワクチン。

条項１３．前記Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ抗原が、サーカムスポロゾイト（ＣＳ）抗原を含む、条項９に記載のワクチン。

条項１４．前記Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原が、Ａｇ８５Ａ、Ａｇ８５Ｂ、ＥｓｘＡ、ＥｓｘＢ、ＥｓｘＣ、ＥｓｘＤ、ＥｓｘＥ、ＥｓｘＦ、ＥｓｘＨ、ＥｓｘＯ、ＥｓｘＱ、ＥｓｘＲ、ＥｓｘＳ、ＥｓｘＴ、ＥｓｘＵ、ＥｓｘＶ、ＥｓｘＷ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、条項９に記載のワクチン。

条項１５．前記ＬＣＭＶ抗原が、核タンパク質（ＮＰ）、糖タンパク質（ＧＰ）、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、条項９に記載のワクチン。

条項１６．薬学的に許容される賦形剤を更に含む、条項１に記載のワクチン。

条項１７．前記第２の核酸が、発現ベクターを更に含む、条項８に記載のワクチン。

条項１８．免疫応答の増強を必要とする対象にそれを行うための方法であって、条項１または２に記載のワクチンを前記対象に投与することを含む、前記方法。

条項１９．前記ワクチンの投与が、電気穿孔を含む、条項１８に記載の方法。

条項２０．前記対象における前記免疫応答が、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、少なくとも約２倍増強される、条項１８に記載の方法。

条項２１．前記対象における前記免疫応答が、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、少なくとも約４倍増強される、条項２０に記載の方法。

条項２２．前記対象における前記免疫応答を増強することは、前記対象における細胞性免疫応答を増強することを含む、条項２１に記載の方法。

条項２３．癌の治療を必要とする対象にそれを行うための方法であって、条項１または２に記載のワクチンを前記対象に投与することを含む、前記方法。

条項２４．ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、前記対象における腫瘍サイズを少なくとも１０％縮小させることを更に含む、条項２３に記載の方法。

条項２５．ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、前記対象における腫瘍退縮を少なくとも１０％増加させることを更に含む、条項２３に記載の方法。

条項２６．前記癌が、ＨＰＶ関連癌、ＨＢＶ関連癌、卵巣癌、前立腺癌、乳癌、脳癌、頭頸部癌、咽喉癌、肺癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、骨癌、メラノーマ、転移性癌、ｈＴＥＲＴ関連癌、ＦＡＰ抗原関連癌、非小細胞肺癌、血液癌、食道扁平上皮癌、子宮頸癌、膀胱癌、結腸直腸癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、肛門癌、滑膜細胞腫、精巣癌、再発性呼吸器乳頭腫症、皮膚癌、神経膠芽腫、肝細胞癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、急性骨髄性白血病、トリプルネガティブ乳癌、及び原発性皮膚Ｔ細胞リンパ腫からなる群から選択される、条項２３に記載の方法。

条項２７．前記癌が、前記ＨＰＶ関連癌である、条項２３に記載の方法。

条項２８．配列番号１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号１に記載のヌクレオチド配列、配列番号３に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号３に記載のヌクレオチド配列、配列番号５に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号５に記載のヌクレオチド配列、配列番号７に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号７に記載のヌクレオチド配列、配列番号９に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号９に記載のヌクレオチド配列、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のヌクレオチド配列を含む、核酸分子。

条項２９．前記核酸分子が、プラスミドである、条項２８に記載の核酸分子。

条項３０．前記核酸分子が、１つ以上のプラスミドである、条項２８に記載の核酸分子。

条項３１．配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、または配列番号９のうちの１つによってコードされる抗原ペプチドを更に含む、条項８に記載のワクチン。

条項３２．配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、または配列番号１０のうちの１つによってコードされるＩＳＧ１５ペプチドを更に含む、条項３１に記載のワクチン。

Claims

抗原及びＩＳＧ１５を含む、ワクチン。
ＩＳＧ１５が、配列番号１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号１に記載のヌクレオチド配列、配列番号３に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号３に記載のヌクレオチド配列、配列番号５に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号５に記載のヌクレオチド配列、配列番号７に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号７に記載のヌクレオチド配列、配列番号９に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、及び配列番号９に記載のヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列によってコードされる、請求項１に記載のワクチン。
ＩＳＧ１５が、配列番号１に記載のヌクレオチド配列によってコードされる、請求項２に記載のワクチン。
ＩＳＧ１５が、配列番号３に記載のヌクレオチド配列によってコードされる、請求項２に記載のワクチン。
ＩＳＧ１５が、配列番号５に記載のヌクレオチド配列によってコードされる、請求項２に記載のワクチン。
ＩＳＧ１５が、配列番号７に記載のヌクレオチド配列によってコードされる、請求項２に記載のワクチン。
ＩＳＧ１５が、配列番号９に記載のヌクレオチド配列によってコードされる、請求項２に記載のワクチン。
前記抗原が、第１の核酸によってコードされ、ＩＳＧ１５が、第２の核酸によってコードされる、請求項１に記載のワクチン。
前記抗原が、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原、インフルエンザ抗原、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ抗原、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原、リンパ性脈絡髄膜炎（ＬＣＭＶ）抗原、及びこれらの断片からなる群から選択される、請求項１に記載のワクチン。
前記ＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ１６Ｅ６抗原、ＨＰＶ１６Ｅ７抗原、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項９に記載のワクチン。
前記ＨＩＶ抗原が、ＥｎｖＡ、ＥｎｖＢ、ＥｎｖＣ、ＥｎｖＤ、ＢＮｅｆ−Ｒｅｖ、Ｇａｇ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項９に記載のワクチン。
前記インフルエンザ抗原が、Ｈ１ＨＡ、Ｈ２ＨＡ、Ｈ３ＨＡ、Ｈ５ＨＡ、ＢＨＡ抗原、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項９に記載のワクチン。
前記Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ抗原が、サーカムスポロゾイト（ＣＳ）抗原を含む、請求項９に記載のワクチン。
前記Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原が、Ａｇ８５Ａ、Ａｇ８５Ｂ、ＥｓｘＡ、ＥｓｘＢ、ＥｓｘＣ、ＥｓｘＤ、ＥｓｘＥ、ＥｓｘＦ、ＥｓｘＨ、ＥｓｘＯ、ＥｓｘＱ、ＥｓｘＲ、ＥｓｘＳ、ＥｓｘＴ、ＥｓｘＵ、ＥｓｘＶ、ＥｓｘＷ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項９に記載のワクチン。
前記ＬＣＭＶ抗原が、核タンパク質（ＮＰ）、糖タンパク質（ＧＰ）、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項９に記載のワクチン。
薬学的に許容される賦形剤を更に含む、請求項１に記載のワクチン。
前記第２の核酸が、発現ベクターを更に含む、請求項８に記載のワクチン。
免疫応答の増強を必要とする対象にそれを行うための方法であって、請求項１または２に記載のワクチンを前記対象に投与することを含む、前記方法。
前記ワクチンの投与が、電気穿孔を含む、請求項１８に記載の方法。
前記対象における前記免疫応答が、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、少なくとも約２倍増強される、請求項１８に記載の方法。
前記対象における前記免疫応答が、ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、少なくとも約４倍増強される、請求項２０に記載の方法。
前記対象における前記免疫応答を増強することは、前記対象における細胞性免疫応答を増強することを含む、請求項２１に記載の方法。
癌の治療を必要とする対象にそれを行うための方法であって、請求項１または２に記載のワクチンを前記対象に投与することを含む、前記方法。
ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、前記対象における腫瘍サイズを少なくとも１０％縮小させることを更に含む、請求項２３に記載の方法。
ＩＳＧ１５を含まないワクチンの投与と比較して、前記対象における腫瘍退縮を少なくとも１０％増加させることを更に含む、請求項２３に記載の方法。
前記癌が、ＨＰＶ関連癌、ＨＢＶ関連癌、卵巣癌、前立腺癌、乳癌、脳癌、頭頸部癌、咽喉癌、肺癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、骨癌、メラノーマ、転移性癌、ｈＴＥＲＴ関連癌、ＦＡＰ抗原関連癌、非小細胞肺癌、血液癌、食道扁平上皮癌、子宮頸癌、膀胱癌、結腸直腸癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、肛門癌、滑膜細胞腫、精巣癌、再発性呼吸器乳頭腫症、皮膚癌、神経膠芽腫、肝細胞癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、急性骨髄性白血病、トリプルネガティブ乳癌、及び原発性皮膚Ｔ細胞リンパ腫からなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
前記癌が、前記ＨＰＶ関連癌である、請求項２３に記載の方法。
配列番号１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号１に記載のヌクレオチド配列、配列番号３に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号３に記載のヌクレオチド配列、配列番号５に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号５に記載のヌクレオチド配列、配列番号７に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号７に記載のヌクレオチド配列、配列番号９に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも約９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、配列番号９に記載のヌクレオチド配列、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
前記核酸分子が、プラスミドである、請求項２８に記載の核酸分子。
前記核酸分子が、１つ以上のプラスミドである、請求項２８に記載の核酸分子。
配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、または配列番号９のうちの１つによってコードされる抗原ペプチドを更に含む、請求項８に記載のワクチン。
配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、または配列番号１０のうちの１つによってコードされるＩＳＧ１５ペプチドを更に含む、請求項３１に記載のワクチン。