JP2018502067A - 生体分子複合体 - Google Patents

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Abstract

本発明は、生体分子を含む生体分子複合体であって、少なくとも１種の非天然型アミノ酸（ＮＮＡＡ）が生体分子の構造に一体化しており、このＮＮＡＡが、低分子医薬、特に細胞傷害薬へのリンカーの結合点である、生体分子複合体に関する。

Description

関連出願の相互参照
２０１４年１２月４日に出願された米国仮特許出願第６２／０８７，３６９号明細書の利益を主張する。
本発明は、生体分子を含む生体分子複合体であって、少なくとも１種の非天然型アミノ酸（ＮＮＡＡ）が生体分子の構造に一体化しており、このＮＮＡＡが、低分子医薬（特に、細胞傷害薬）が結合しているリンカーの結合点である、生体分子複合体に関する。本発明は、細胞結合物質および細胞傷害薬の複合体であって、付加環化反応により生成される複合体にさらに関する。製造方法、医薬組成物および使用方法が提供される。
抗体を構造修飾した次世代抗体（ＮＧＡ）を用いる治療は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）研究開発における重要領域である。その中心は主としてがん領域であり、がん領域のｍＡｂパイプラインの約５０％をＮＧＡが占めている（Ｓｙｅｄ，Ｂ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｘｔ−Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，１３：４１３（２０１４））。
新規な抗体技術プラットフォームの中で最も突出しているのが抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）であり、これは一般に、化学リンカーを介してｍＡｂに結合している細胞傷害薬からなる。ＡＤＣによって化学療法薬を標的であるがん組織に直接送達することができれば、ｍＡｂの臨床的有用性を高めることができ、全身投与するには作用が強力過ぎる細胞毒を戦略的に展開させることが可能になる。最初のＡＤＣ製品であるゲムツズマブオゾガマイシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標）；Ｗｙｅｔｈ）は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）治療用のカリケアミシンにＣＤ３３特異的ｍＡｂを連結させたものであり、２０００年に承認されたが、安全性に対する懸念から２０１０年に承認取り下げとなった。ＡＤＣ開発の新規なプラットフォームとして、標的指向化された抗体低分子医薬プラットフォーム（ＴＡＰ）等が登場した（Ｓｅａｔｔｌｅ ＧｅｎｅｔｉｃｓおよびＩｍｍｕｎｏＧｅｎ）。２０１１年後半、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）の承認を取得した最初の新規ＡＤＣとなったのが、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）治療用抗有糸分裂剤であるモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）にＣＤ３０特異的ｍＡｂを連結させたブレンツキシマブベドチン（ＡＤＣＥＴＲＩＳ（登録商標）；Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）である。２０１３年前半、２番目に承認されたのが、ａｄｏ−トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）である。ａｄｏ−トラスツズマブエムタンシンおよびｍＡｂであるペルツズマブ（ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標）；Ｒｏｃｈｅ（２０１２年承認））は、ＨＥＲ２（ＥＲＢＢ２としても知られる）を標的とするトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）；Ｒｏｃｈｅ）のラインエクステンションとして発展したものであり、作用機序が異なっている。ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標）は、ＨＥＲ２−ＨＥＲ３の二量体化を阻害する。一方、ａｄｏ−トラスツズマブエムタンシンは、細胞傷害性低分子医薬を細胞に送達する。
細胞傷害性分子、放射性核種および特定の化学療法薬を、腫瘍特異細胞表面抗原または腫瘍関連細胞表面抗原に結合するモノクローナル抗体に化学的に連結させることが行われてきた。例えば、国際特許出願（ＰＣＴ）である国際公開第００／０２５８７号パンフレット、国際公開第０２／０６０９５５号パンフレット、国際公開第０２／０９２１２７号パンフレット；ならびに米国特許第８１９８４１７号明細書、米国特許第８０１２４８５号明細書、米国特許第５４７５０９２号明細書、米国特許第６３４０７０１号明細書および米国特許第６１７１５８６号明細書を参照されたい。
現行のｍＡｂ開発プロセスは、ヒンジ領域の設計（ｈｉｎｇｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）および親和性成熟等の技術を利用することが日常化している。しかしながら、免疫複合体治療の効果を改善すると共に望ましくない副作用を最小限にするという課題が残されている。
本発明は、単離された生体分子複合体および本明細書に記載する付加環化により調製される単離された生体分子複合体に関する。
本発明はまた、付加環化によって単離された生体分子複合体を調製する方法であって、
式Ｉ
Figure 2018502067
 の化合物であって、リンカー（スペーサーアーム）（（Ｅ）m）に結合した歪み環状アルキンまたは歪み環状アルケン（Ａ）を含み、このリンカーには低分子医薬（Ｄ）も結合している、式Ｉの化合物を準備することと；
式ＩＩ
Figure 2018502067
 の化合物であって、生体分子（ＣＢ）の構造と一体化した少なくとも１種の天然に存在しないアミノ酸（ＮＮＡＡ）（Ｍ）を含み、ＮＮＡＡがアジド基を有する（例えば、アジド−フェイルアラニン（ｐｈｅｙｌａｌａｎｉｎｅ）またはアジド−パラメチルフェニルアラニン）またはテトラジン基（Ｔ）を有する、式ＩＩの化合物を準備することと；
式Ｉの化合物を式ＩＩの化合物と反応させることにより、式ＩＩＩ、式ＩＩＩ’または式ＩＩＩ”
Figure 2018502067
 の化合物（生体分子複合体）を生成することと
を含む方法に関する。
さらに本発明は、本明細書に記載する付加環化反応によって調製される式ＩＩＩ、式ＩＩＩ’または式ＩＩＩ”の単離された生体分子複合体であって、生体分子と一体化した少なくとも１種の天然に存在しないアミノ酸（ＮＮＡＡ）（Ｍ）
Figure 2018502067
 （式中、ｐおよびｑは、それぞれ０〜１０の整数であり；
Ｒ6は、Ｈ、ポリペプチドに含まれるアミノ酸または結合であり；
Ｒ7は、ＯＨ、ポリペプチドに含まれるアミノ酸または結合であり；
Ｖは、アルキルまたはアリール炭素環、複素環であるかまたは存在せず；および
Ｗは、Ｏ、Ｎ、Ｓであるかまたは存在しない）を含む、生体分子複合体に関する。
したがって、さらに本発明は、本明細書に記載した付加環化反応によって調製される、式ＩＩＩ、式ＩＩＩ’（または式ＩＩＩ”（式ＩＩＩ”も本開示の全範囲に包含されると見なすべきである））の単離された生体分子複合体であって、生体分子複合体が、式
Figure 2018502067
 から基本的になる群から選択される生体分子構造に一体化した少なくとも１種の天然に存在しないアミノ酸（ＮＮＡＡ）（Ｍ）を含む、生体分子複合体に関する。
さらに本発明は、本明細書に記載する付加環化反応によって調製される式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’の単離された生体分子複合体であって、細胞傷害薬である少なくとも１種の低分子医薬（Ｄ）を含む、生体分子複合体に関する。
したがって、さらに本発明は、本明細書に記載する付加環化反応によって調製される式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’の単離された生体分子複合体であって、低分子医薬（Ｄ）として少なくとも１種のメイタンシノイドを含む、生体分子複合体に関する。
したがって、さらに本発明は、本明細書に記載する付加環化反応によって調製される式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’の単離された生体分子複合体であって、構造
Figure 2018502067
 の低分子医薬（Ｄ）としての少なくとも１種の細胞傷害薬を含む、生体分子複合体に関する。
さらに本発明は、治療有効量の本明細書に記載する生体分子複合体および医薬上許容される担体を含む医薬組成物に関する。
さらに本発明は、哺乳動物の異常な生理学的状態を治療する方法であって、有効量の本明細書に記載する生体分子複合体を投与することを含む、方法に関する。
したがって、さらに本発明は、哺乳動物の細胞増殖障害（ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）を治療する方法であって、有効量の本明細書に記載する生体分子複合体を投与することを含む、方法に関する。
したがって、さらに本発明は、哺乳動物の血液腫瘍性疾患（ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｏｎｃｏｌｏｇｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）を治療する方法であって、有効量の本明細書に記載する生体分子複合体を投与することを含む、方法に関する。
本発明はまた、単離された化合物：
Figure 2018502067
 （式中、
Ａは、環が炭素環または複素環である歪み環状アルキンまたは歪み環状アルケンであり、
Ｄは、低分子医薬であり、
各Ｅは、独立に、−ＣＯ−、−ＣＲ1Ｒ2−、−ＮＲ3−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ2−、−Ｏ−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−、−ＣＲ3＝Ｎ−Ｏ−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−ＣＯ−、−Ｎ＝Ｎ−ＣＯ−、アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式、−Ｏ−（ＣＲ1Ｒ2）a−、アリール、−（ＣＲ1Ｒ2）a−アリール、ヘテロアリール、−（ＣＲ1Ｒ2）a−ヘテロアリール、−（ＣＲ1Ｒ2）a−Ｃ３〜Ｃ８炭素環式、複素環式、−（ＣＲ1Ｒ2）a−複素環式、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−（ＣＨ2）b、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）−、アミノ酸およびペプチドからなる群から選択され；
Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ3）2、−Ｎ（Ｒ3）3 +、Ｃ１〜Ｃ８アルキルハライド、カルボキシラート、スルファート、スルファマート、スルホナート、−ＳＯ2Ｒ3、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＳＲ3、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ3）2、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＣＯ2Ｒ3、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＮＯ2、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ポリエチレンオキシ、ホスホナート、ホスファート、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式およびＣ１〜Ｃ２０複素環式からなる群から選択されるか；またはＲ1およびＲ2は、一緒になって、カルボニル（＝Ｏ）もしくは３〜７個の炭素原子のスピロ炭素環を形成し；および
Ｒ3は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ５〜Ｃ２０ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式およびＣ１〜Ｃ２０複素環式からなる群から選択され；
アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、炭素環式および複素環式は、独立に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ3）2、−Ｎ（Ｒ3）3 +、Ｃ１〜Ｃ８アルキルハライド、カルボキシラート、スルファート、スルファマート、スルホナート、Ｃ１〜Ｃ８アルキルスルホナート、Ｃ１〜Ｃ８アルキルアミノ、４−ジアルキルアミノピリジニウム、Ｃ１〜Ｃ８アルキルヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ８アルキルチオール、−ＳＯ2Ｒ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＳＲ3、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ3）2、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＣＯ2Ｒ3、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＮＯ2、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ８トリフルオロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ１２炭素環、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ６〜Ｃ２０ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式、Ｃ２〜Ｃ２０複素環式、ポリエチレンオキシ、ホスホナートおよびホスファートからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
ｍは、１〜１００の整数であり；および
ａおよびｂは、それぞれ１〜１００の整数である）に関する。
さらに本発明は、式Ｉ（式中、各Ｅは、独立に、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）ＮＲ3−、−（ＣＨ2）aＮＲ3Ｃ（Ｏ）−、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2）b−、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）b−、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）b（ＣＨ2）c−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）b−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）b、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2）b−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−（ＣＨ2）b、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−、−ＣＲ3＝Ｎ−Ｏ−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−ＣＯ−、−Ｎ＝Ｎ−ＣＯ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ2−、アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド；
Figure 2018502067
 （式中、Ｇは、アルキル、アリール、炭素環式および複素環式、
Figure 2018502067
 （式中、Ｈ1、Ｈ2およびＨ3は、それぞれ独立に、Ｎまたは式ＣＲ1から選択される）からなる群から選択される）からなる群から選択される）の単離された化合物に関する。
さらに本発明は、式Ｉ（式中、各Ｅは、独立に、
Figure 2018502067
Figure 2018502067
 （式中、
Ｊは、アミノ酸またはペプチドであり；
ｄ、ｅ、ｇ、ｉ、ｊおよびｋは、それぞれ独立に、１〜３０の整数であり；
ｈは、０〜３０の整数であり；
Ｒ3は、上記と同義であり；
各Ｒ4は、独立に、Ｈ、アルキル、−Ｎ（Ｒ3）2、−ＳＲ3およびＣ１〜Ｃ８アルコキシ、アリールからなる群から選択され；および
Ｒ5は、Ｈ、−Ｎ（Ｒ3）2、−ＳＲ3、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、アリールおよびＮＯ2からなる群から選択される）からなる群から選択される）の単離された化合物に関する。
さらに本発明は、次に示す例示的な単離された式Ｉの化合物に加えて、それぞれの類縁体および誘導体に関する。
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
最初にアミド連結基を形成し、続いてリンカーを延長することによる、例示的な式Ｉの化合物の調製例を例示する。 式Ｉの化合物および対応する中間体の調製例を例示する。 歪みアルキンをリンカーの断片に接続させることによる、中間体の調製を示す。 最初にアミド連結基を形成し、続いてリンカーを延長することによる、式Ｉの化合物の調製を説明する。 歪みアルキンをリンカーに接続させることによる、中間体の調製を説明する。 図６Ａは、１，３−双極子付加環化反応を例示する。図６Ｂは、歪みアルケンおよびテトラジンの４＋２シクロアドション（ｃｙｃｌｏａｄｄｔｉｏｎ）反応を例示する。 細胞傷害薬を結合させるために用いられるアミド結合を概略的に例示する。 本発明に用いられるＮＮＡＡを示す。 図９Ａ〜Ｃは、本発明の化合物の幾つかの例を例示する。 本発明の化合物の合成スキームの例を例示する。 本発明の化合物の合成スキームの例を例示する。 本発明の化合物の合成スキームの例を例示する。 本発明の化合物の合成スキームの例を例示する。 本発明の化合物の合成スキームの例を例示する。 本発明の化合物の合成スキームの例を例示する。 本発明の化合物の合成スキームの例を例示する。 本発明の化合物の合成スキームの例を例示する。 本発明の化合物の合成スキームの例を例示する。 本発明の化合物の合成スキームの例を例示する。 本発明の化合物の合成スキームの例を例示する。 本発明の化合物の合成スキームの例を例示する。 本発明の化合物の合成スキームの例を例示する。 本発明の化合物の合成スキームの例を例示する。 本発明の化合物の合成スキームの例を例示する。 本発明の化合物の合成スキームの例を例示する。
他に定義しない限り、本明細書において使用するあらゆる技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されている意味と同じ意味を有する。本明細書において引用する全ての刊行物および特許を、本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。
本明細書に記載する標的化抗がん治療は、従来の化学療法によるがん治療と比較して非特異的毒性を低減すると共に薬効を高めることを目的として設計されたものである。この手法は、非常に効力の高い複合体化した治療薬を、がん特異抗原またはがん関連抗原を表出している細胞に特異的に送達するモノクローナル抗体の高い標的指向性により具体化される。低分子医薬、特に細胞傷害薬が、がん細胞に高い特異性で結合する抗体またはリガンド等の標的指向性分子と対になって化合物を形成しているものは、本明細書において生体分子複合体（複合体）または抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）または免疫複合体と称する。本明細書に記載する複合体は、例えば、特定の細胞表面抗原または受容体を表出または過剰発現している細胞や血液がん細胞に細胞傷害薬を指向するため、毒性がより低くなるはずである。
ここで本発明の特定の実施形態を詳細に参照し、その実施例を添付の構造および式に例示する。本発明を本明細書に開示する実施形態と併せて説明するが、これらは本発明をこれらの実施形態に限定することを意図するものではないことが理解されるであろう。むしろ、本発明は、あらゆる代替形態、変更形態および均等物を網羅することを意図しており、これらは本発明の範囲に包含することができると共に、添付の特許請求の範囲に定義されている。当業者は、本発明の実施に使用することができる本明細書に記載する方法および材料に類似するかまたは均等な多くの方法および材料を認識するであろう。本発明はここに記載する方法および材料に決して限定されない。
以下に示す詳細な説明および添付の特許請求の範囲、使用する略称および命名法は、化学分野において基本的に標準的なものであると理解されるであろう。
特段の指定がない限り、以下に示す本明細書において用いられる語句は以下に定義される。
「アルキル」は、直鎖状、第２級、第３級または環状炭素原子を含むＣ１〜Ｃ１８炭化水素部分である。アルキル基の例としては、Ｃ１〜Ｃ８炭化水素部分、例えば：メチル（Ｍｅ、−ＣＨ3）、エチル（Ｅｔ、−ＣＨ2ＣＨ3）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、ｎ−プロピル、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ3）2）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）2）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ3）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ3）3）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ2ＣＨ3）2）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ3）2ＣＨ2ＣＨ3）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ（ＣＨ3）2）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）2）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ3）、１−ヘキシル（−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ2ＣＨ3）（ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3））、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ3）2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ3）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）2）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ3）（ＣＨ2ＣＨ3）2）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ2ＣＨ3）ＣＨ（ＣＨ3）2）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ3）2ＣＨ（ＣＨ3）2）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ（ＣＨ3）3、１−ヘプチル、１−オクチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルが挙げられる。アルキル基は置換されていても無置換であってもよい。
「アルケニル」は、少なくとも１個の不飽和部位、すなわち炭素−炭素二重結合（ｓｐ2）を有する直鎖状、第２級、第３級または環状炭素原子を含むＣ２〜Ｃ１８炭化水素部分である。アルケニル基の例としては、Ｃ２〜Ｃ８炭化水素部分、例えば、これらに限定されるものではないが、エチレンまたはビニル（−ＣＨ＝ＣＨ2）、アリル（−ＣＨ2ＣＨ＝ＣＨ2）、１−シクロペント−１−エニル、１−シクロペント−２−エニル、１−シクロペント−３−エニル、５−ヘキセニル（−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ＝ＣＨ2）、１−シクロヘキシ−１−エニル、１−シクロヘキシ−２−エニルおよび１−シクロヘキシ−３−エニルが挙げられる。アルケニル基は置換されていても無置換であってもよい。
「アルキニル」は、少なくとも１個の不飽和部位、すなわち炭素−炭素三重結合（ｓｐ）を有する、直鎖状、第２級、第３級または環状炭素原子を含むＣ２〜Ｃ１８炭化水素部分である。アルキニル基の例として、Ｃ２〜Ｃ８炭化水素部分、例えば、これらに限定されるものではないが、アセチレン性基（−Ｃ≡ＣＨ）およびプロパギル基（−ＣＨ2Ｃ≡ＣＨ）が挙げられる。アルキニル基は置換されていても無置換であってもよい。
「アミノ」は、別段の指定がない限り、置換または無置換である。アミノ基は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル（ａｌｋｉｎｙｌ）、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、無置換もしくは置換アリール、アミノアルキル、アシル、例えば、ホルミル、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルキルスルホニルまたはアリールスルホニルから選択される１個または２個の置換基で置換されていてもよく、好ましくは、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、プロピルアミノ、ベンジルアミノ、ヒドロキシエチル−メチル−アミノ、ジ（ヒドロキシエチル）アミノ、ジメチルアミノエチルアミノ、アセチルアミノ、アセチル−メチル−アミノ、ベンゾイルアミノ、メチルスルホニルアミノまたはフェニルスルホニルアミノ、特に、アミノまたはジメチルアミノである。
「アリール」は、これらに限定されるものではないが、ベンゼン、ナフタレン、フェニル、ビフェニル、フェノキシベンゼン等の任意の炭素系芳香族基を意味する。アリール基は置換されていても無置換であってもよい。「ヘテロアリール」という語は、芳香族基の環内に少なくとも１個のヘテロ原子が組み込まれた芳香族基を含む基として定義される。ヘテロ原子の例としては、これらに限定されるものではないが、窒素、酸素、硫黄、１０およびリンが挙げられる。「アリール」という語に含まれる「非ヘテロアリール」という語は、ヘテロ原子を含まない芳香族基を含む基を定義する。アリール基またはヘテロアリール基は置換されていても無置換であってもよい。アリール基またはヘテロアリール基は、本明細書に記載するように、これらに限定されるものではないが、アルキル、ハロゲン化アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、１５ハライド、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、スルホニル、スルホン、スルホキシド、チオール等の１個以上の基で置換されていてもよい。「ビアリール」という語は、アリール基の特殊な種類であり、アリールの定義に包含される。ビアリールとは、ナフタレンのように、縮合環構造により１つに結合している２個のアリール基、またはビフェニルのように、１個以上の炭素−炭素結合を介して結合している２個のアリール基を指す。
「複素環式（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ、ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｙｌ）」は、４〜１２個の原子を含む飽和、部分飽和または不飽和の単環または二環であり、そのうちの少なくとも１個の原子が窒素、硫黄または酸素から選択され、これらは特段の指定がない限り、炭素または窒素に連結されていてもよく、また、その−ＣＨ2−基が−Ｃ（Ｏ）−に置き換わっていてもよく、また、環員硫黄原子が酸化されてＳ−オキシドを形成していてもよい。複素環式の例としては、これらに限定されるものではないが、ピロリジニル、モルホリノ、ピペリジル、ピリジル、ピラニル、ピロリル、イソチアゾリル、インドリル、キノリル、チエニル、フリル、１，３−ベンゾジオキソリル、チアジアゾリル、ピペラジニル、イソキサゾリル、チアゾリル、チアゾリジニル、ピロリジニル、チオモルホリノ、ピラゾリル、ピロリニル、ホモピペラジニル、テトラヒドロピラニル、イミダゾリル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、イソキサゾリル、４−ピリドン、１−イソキノロン、２−ピロリドン、４−チアゾリドン、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンまたは３−アザ−８−オキサビシクロ［３，２，１］ヘキサンが挙げられる。複素環は、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ Ａ．，“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９６８）、特に第１、３、４、６、７および９章；“Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ”（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９５０〜）、特に、第１３、１４、１６、１９および２８巻；ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載されている。複素環式基は置換されていても無置換であってもよい。
「カルバモイル」は、特に断りのない限り、置換されていても無置換であってもよい。カルバモイル基は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル（ａｌｋｉｎｙｌ）、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、無置換もしくは置換アリールまたはアミノアルキルから選択される１個または２個の置換基で置換されていてもよく、あるいは置換基およびカルバモイル基の窒素原子が、Ｎ、ＯおよびＳから選択される０、１または２個のヘテロ原子をさらに含む５または６員環の複素環式を表し；好ましくは、カルバモイル、メチルカルバモイル、ジメチルカルバモイル、プロピルカルバモイル、ヒドロキシエチル−メチル−カルバモイル、ジ（ヒドロキシエチル）カルバモイル、ジメチルアミノエチルカルバモイルまたはピロリジノカルボニル、ピペリジノカルボニル、Ｎ−メチルピペラジノカルボニルまたはモルホリノカルボニル、特に、カルバモイルまたはジメチルカルバモイルである。
「炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｅ）」および「炭素環式（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｙｌ）」は同義であり、単環としては３〜７個の炭素原子を有し、二環としては７〜１２個の炭素原子を有する飽和または不飽和環を指す。単環の炭素環は３〜６個の環員原子、さらに典型的には５または６個の環員原子を有する。二環の炭素環は、７〜１２個の環員原子が、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］または［６，６］系として配置されているか、または９もしくは１０個の環員原子がビシクロ［５，６］もしくは［６，６］系として配置されている。単環の炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペント−１−エニル、１−シクロペント−２−エニル、１−シクロペント−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキシ−１−エニル、１−シクロヘキシ−２−エニル、１−シクロヘキシ−３−エニル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルが挙げられる。炭素環基は置換されていても無置換であってもよい。
非天然型アミノ酸（ＮＮＡＡ）は、基本的に、天然に存在する２０種類のアミノ酸のうちの１種ではないアミノ酸を指す。この種のＮＮＡＡの例としては、これらに限定されるものではないが、アジド基またはテトラジン基を有するアミノ酸が挙げられる。ＮＮＡＡの例としては、これらに限定されるものではないが、アジド−フェイルアラニン（ｐｈｅｙｌａｌａｎｉｎｅ）またはアジド−パラ−メチル−フェニルアラニンが挙げられる。
本明細書において定義する「連結基（ｌｉｎｋｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）」は、例えば、リンカー（Ｅ）および低分子医薬（Ｄ）間の官能基を指す。連結基の例としては、これらに限定されるものではないが、アミド、エステル、カルバマート、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、ヒドラゾン、オキシム、セミカルバジド、尿素、カルボナート、酸不安定基、光分解性基、ペプチダーゼ分解性基およびエステラーゼ分解性基が挙げられる。例えば、米国特許第５２０８０２０号明細書、米国特許第５４７５０９２号明細書、米国特許第６４４１１６３号明細書、米国特許第６７１６８２１号明細書、米国特許第６９１３７４８号明細書、米国特許第７２７６４９７号明細書、米国特許第７２７６４９９号明細書、米国特許第７３６８５６５号明細書、米国特許第７３８８０２６号明細書および米国特許第７４１４０７３号明細書を参照されたい。
「リンカー」（スペーサーアーム）（Ｅ）とは、２個の連結基間の化学部分を指す。ＣＢ−Ｅ−Ｄである。リンカー（Ｅ）は、細胞結合物質（ＣＢ）に連結している連結基と低分子医薬（Ｄ）に連結している連結基との間の化学部分である。リンカー（Ｅ）は、切断可能であっても切断できなくてもよい。リンカーは、細胞傷害薬を、細胞結合物質に連結させるか、または細胞結合物質にさらに結合することができる化学部分に連結させる。例えば、リンカー（Ｅ）は、メイタンシノイドを歪みアルキン等の化学的部分に連結させる。この歪みアルキン等の化学的部分は、本明細書に記載するように、ヒュスゲン付加環化（Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ「クリック」反応としても知られる）により、アジドで置換された非天然型アミノ酸を含む抗体に接続させることができる。
当業者はリンカーの調製および応用を容易に行うことができる：Ｇｏｌｄｍａｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎｓ：Ｆｒｏｍ Ｐｒｅ−ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ ７，ｉｎ Ｌｉｎｋｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ Ｌｉｎｋｅｒ Ｄｅｓｉｇｎ ｏｎ ＡＤＣ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ＧＬ；Ｅｄ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｍｅｄｉａ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（２０１３）。本発明に使用するためのリンカーの構造は、例えば、米国特許第８１９８４１７、米国特許第８０１２４８５、米国特許第７９８９４３４、米国特許第６３３３４１０、米国特許第５４１６０６４および米国特許第５２０８０２０にも開示されており、これらの開示内容全体を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。
切断可能なリンカー（Ｅ）は、穏和な条件下で切断することが可能なリンカーである。ジスルフィドを含むリンカーは、生理学的条件下で起こるジスルフィド交換により切断可能なリンカーである。酸不安定リンカーは、酸性のｐＨで切断可能なリンカーである。例えば、エンドソームおよびリソソーム等の特定の細胞内区画は酸性のｐＨ（ｐＨ４〜５）を有し、酸不安定リンカーの切断に適した条件を提供する。光分解性リンカーは、光が到達可能な体表面および多くの体腔で有用である。さらに、赤外光は組織を透過する。特定のリンカーはそれ自体のペプチダーゼで切断することが可能である。例えば、Ｔｒｏｕｅｔ，ｅｔ ａｌ．，７９ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，６２６−６２９（１９８２）およびＵｍｅｍｏｔｏ，ｅｔ ａｌ．，４３ Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６７７−６８４（１９８９）を参照されたい。ペプチドは、α−アミノ酸およびペプチド結合（あるアミノ酸のカルボキシラート基と他のアミノ酸のα−アミノ基との間のアミド結合）等から構成される。カルボシラート基とリジンのε−アミノ基との間の結合等の他のアミド結合はペプチド結合ではないと理解されており、切断されないと考えられている。当該技術分野において知られている多くのリンカーはエステラーゼにより切断することができる。当該技術分野において知られている特定のエステルのみが、細胞内または細胞外に存在するエステラーゼで切断することができる。エステルはカルボン酸およびアルコールの縮合により生成する。単純なエステルは、脂肪族アルコール、小さい環状アルコールおよび小さい芳香族アルコール等の単純なアルコールから生成するエステルである。
非切断性リンカー（Ｅ）とは、低分子医薬（例えば、細胞傷害薬）を細胞結合物質に安定な共有結合で連結させることができる任意の化学的部分のうち、切断可能なリンカーとして上に列挙した種類に含まれないものである。したがって、非切断性リンカーは、一般に、酸誘導切断、光誘導切断、ペプチダーゼ誘導切断、エステラーゼ誘導切断およびジスルフィド結合切断に耐性を有する。本明細書において用いられる「医薬上許容される塩」という語は、本発明の化合物（生体分子複合体を含む）の医薬上許容される有機塩または無機塩を指す。塩の例としては、これらに限定されるものではないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩「メシラート」、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸））塩、アルカリ金属（例えば、ナトリウムおよびカリウム）塩、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）塩およびアンモニウム塩が挙げられる。医薬上許容される塩は、酢酸イオン、コハク酸イオンまたは他の対イオン等の他の分子の包接体（ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ）を含むことができる。対イオンは、親化合物の電荷を安定化させる任意の有機または無機部分とすることができる。さらに、医薬上許容される塩は、その構造内に２個以上の帯電した原子を含むことができる。複数の帯電した原子が医薬上許容される塩の一部である例は、複数の対イオンを有することができる。したがって、医薬上許容される塩は、１個以上の帯電した原子および／または１個以上の対イオンを有することができる。
「治療有効量」または「有効量」という語は、被験体において所望の生物学的応答または治療効果を引き出す活性化合物または複合体の量を意味する。この種の応答には、治療される疾患もしくは障害の症状の軽減；疾患の症状もしくは疾患自体の再発の予防、抑制もしくは遅延；治療を施さない被験体と比較した場合の寿命の延長；または疾患の症状もしくは疾患自体の進行の予防、抑制もしくは遅延が含まれる。有効量の決定は、特に、本明細書に提供する詳細な開示内容に照らせば、当業者の能力の範囲内である。毒性および治療効果は、細胞培養および動物試験において標準的な薬学的手順により決定される。被験体に投与される本発明の化合物もしくは複合体または他の治療薬の有効量は、例えば、多発性骨髄腫または白血病のステージ、分類および病態のステータスならびに被験体の特徴（全体的な健康状態、年齢、性別、体重、薬物耐性等）に依存するであろう。また、投与される本発明の化合物もしくは複合体または治療薬の有効量は、投与経路および剤形にも依存するであろう。静脈内（ＩＶ）および皮下（ＳＣ）投与経路が好ましい。投与量および投与間隔は所望の治療効果を維持するのに十分な活性化合物の血漿中濃度が得られるように、個別に調整することができる。
本明細書において使用する立体化学の定義および規則は、一般に Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＥｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，“Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９４に従う。特に指定のない限り、本発明の化合物は、単一の異性体または他の異性体との混合物として存在するあらゆる立体異性体を包含することを意図している。
本発明の式Ｉの化合物において、（Ａ）は歪み環、すなわち歪み環状アルキンまたは歪み環状アルケンである。歪みアルキン（Ａ）または歪みアルケン（Ａ）および細胞傷害薬、例えば（Ｄ）は、リンカー（Ｅ）mを介して接続している。（Ｅ）mの接続点（（Ａ）に接続または（Ｄ）に接続または両方に接続する点）に用いられる様々な連結基の例としては、これらに限定されるものではないが、エステル、アミド、カルバマート、アミン、およびチオエーテルが挙げられる。
式Ｉ
式Ｉの化合物：
Figure 2018502067
 （Ａは環であり、但し、Ａは、点線が結合を表す場合には歪みアルキンを有する環であり、点線が存在しない場合、Ａは歪みアルケンである）。
換言すれば、式Ｉは、次に示す両方の構造を含む：
Figure 2018502067
 （Ｄは、細胞傷害薬であり；
各Ｅは、独立に、−ＣＯ−、−ＣＲ1Ｒ2−、−ＮＲ3−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ2−、−Ｏ−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−、−ＣＲ3＝Ｎ−Ｏ−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−ＣＯ−、−Ｎ＝Ｎ−ＣＯ−、アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式、−Ｏ−（ＣＲ1Ｒ2）a−、アリール、−（ＣＲ1Ｒ2）a−アリール、ヘテロアリール、−（ＣＲ1Ｒ2）a−ヘテロアリール、−（ＣＲ1Ｒ2）a−Ｃ３〜Ｃ８炭素環式、複素環式、−（ＣＲ1Ｒ2）a−複素環式、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−（ＣＨ2）b、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）−、アミノ酸およびペプチドからなる群から選択され；
Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ3）2、−Ｎ（Ｒ3）3 +、Ｃ１〜Ｃ８アルキルハライド、カルボキシラート、スルファート、スルファマート、スルホナート、−ＳＯ2Ｒ3、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＳＲ3、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ3）2、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＣＯ2Ｒ3、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＮＯ2、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ポリエチレンオキシ、ホスホナート、ホスファート、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式およびＣ１〜Ｃ２０複素環式からなる群から選択されるか；またはＲ1およびＲ2は、一緒になって、カルボニル（＝Ｏ）もしくは３〜７個の炭素原子のスピロ炭素環を形成し；および
Ｒ3は、独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ６〜Ｃ２０ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式およびＣ１〜Ｃ２０複素環式からなる群から選択され；
置換されている場合、アルキル、炭素環式、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、炭素環式および複素環式は、独立に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ3）2、−Ｎ（Ｒ3）3 +、Ｃ１〜Ｃ８アルキルハライド、カルボキシラート、スルファート、スルファマート、スルホナート、Ｃ１〜Ｃ８アルキルスルホナート、Ｃ１〜Ｃ８アルキルアミノ、４−ジアルキルアミノピリジニウム、Ｃ１〜Ｃ８アルキルヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ８アルキルチオール、−ＳＯ2Ｒ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＳＲ3、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ3）2、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＣＯ2Ｒ3、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＮＯ2、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ８トリフルオロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ１２炭素環、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ６〜Ｃ２０ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式、Ｃ２〜Ｃ２０複素環式、ポリエチレンオキシ、ホスホナートおよびホスファートからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されており；
ｍは、１〜１００の整数であり；および
ａおよびｂは、それぞれ１〜１００の整数である）。
特定の実施形態において、ｍは１〜３０の整数である。幾つかの実施形態において、ｍは１〜２５の整数である。幾つかの実施形態において、ｍは１〜２０の整数である。幾つかの実施形態において、ｍは１〜１５の整数である。幾つかの実施形態において、ｍは１〜１０の整数である。幾つかの実施形態において、ｍは１〜５の整数である。幾つかの実施形態において、ｍは１〜３の整数である。幾つかの実施形態において、ｍは１〜２の整数である。幾つかの実施形態において、ｍは１である。
特定の実施形態において、ａおよびｂはそれぞれ独立に１〜１００の整数である。幾つかの実施形態において、ａおよびｂはそれぞれ独立に１〜３０の整数である。幾つかの実施形態において、ａおよびｂはそれぞれ独立に１〜２５の整数である。幾つかの実施形態において、ａおよびｂはそれぞれ独立に１〜２０の整数である。幾つかの実施形態において、ａおよびｂはそれぞれ独立に１〜１５の整数である。幾つかの実施形態において、ａおよびｂはそれぞれ独立に１〜１０の整数である。幾つかの実施形態において、ａおよびｂはそれぞれ独立に１〜５の整数である。幾つかの実施形態においてａおよびｂはそれぞれ独立に１〜３の整数である。幾つかの実施形態においてａおよびｂはそれぞれ独立に１〜２の整数である。幾つかの実施形態においてａおよびｂはそれぞれ独立に１である。
−（Ｅ）m−のＥはそれぞれ同一であっても異なっていてもよい。一実施形態において、例えば、アルキルおよび炭素環を組み合わせることにより、一方のＥはアルキルであり、他方のＥは炭素環である−（Ｅ）2−となる。
非限定的な例示的な実施形態において、Ｅはそれぞれ、４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボン酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＭＣＣ）、４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロン酸）Ｎ−スクシンイミジル（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、κ−マレイミドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ−（α−マレイミドアセトキシ）−スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、６−（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサン酸スクシンイミジル（ＳＭＰＨ）、４−（ｐ−マレイミドフェニル）酪酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＭＰＢ）、イソシアン酸Ｎ−（ｐ−マレイミドフェニル）（ＰＭＰＩ）から選択される、マレイミド（ｍａｌｅｉｍｉｄｏ）をベースとする部分から誘導されたものであってもよく、またはそのスルホスクシンイミジル変形体もしくは類縁体であってもよい。他の非限定的な例示的な実施形態において、Ｅはそれぞれ、４−（ヨードアセチル）−アミノ安息香酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＩＡＢ）、ヨード酢酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＩＡ）、ブロモ酢酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＢＡ）、３−（ブロモアセトアミド）プロピオン酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＢＡＰ）から選択される、ハロアセチルをベースとする部分から誘導されたものであってもよく、またはそのスルホスクシンイミジル変形体もしくは類縁体であってもよい。
特定の実施形態において、各Ｅは、独立に、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）ＮＲ3−、−（ＣＨ2）aＮＲ3Ｃ（Ｏ）−、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2）b−、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）b−、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）b（ＣＨ2）c−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）b−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）b、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2）b−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−（ＣＨ2）b、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）−、−−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−、−ＣＲ3＝Ｎ−Ｏ−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−ＣＯ−、−Ｎ＝Ｎ−ＣＯ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ2−、−Ｏ−、アミノ酸、ペプチド、
Figure 2018502067
 （式中、Ｇは、アルキル、アリールおよび複素環式、ならびに
Figure 2018502067
 （式中、Ｈ1、Ｈ2およびＨ3は、それぞれＮまたはＣＲ1であり；
Ｒ1、Ｒ2、およびＲ3は、上記と同義である）からなる群から選択される）からなる群から選択される。
幾つかの実施形態において、各Ｅは、独立に、
Figure 2018502067
 （式中、Ｊは、アミノ酸またはペプチドであり；
ｄ、ｅ、ｇ、ｉ、ｊおよびｋは、それぞれ独立に１〜３０の整数であり；
ｈは、０〜３０の整数であり；
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、上記と同義であり；
各Ｒ4は、独立に、Ｈ、アルキル、−Ｎ（Ｒ3）2、−ＳＲ3およびＣ１〜Ｃ８アルコキシ、アリールからなる群から選択され；および
Ｒ5は、Ｈ、−Ｎ（Ｒ3）2、−ＳＲ3、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、アリールおよびＮＯ2からなる群から選択される）からなる群から選択される。
特定の実施形態において、ｄ、ｅ、ｇ、ｉ、ｊおよびｋは、それぞれ独立に１〜３０の整数である。幾つかの実施形態において、ｄ、ｅ、ｇ、ｉ、ｊおよびｋは、それぞれ独立に１〜２５の整数である。幾つかの実施形態において、ｄ、ｅ、ｇ、ｉ、ｊおよびｋは、それぞれ独立に１〜２０の整数である。幾つかの実施形態において、ｄ、ｅ、ｇ、ｉ、ｊおよびｋは、それぞれ独立に１〜１５の整数である。幾つかの実施形態において、ｄ、ｅ、ｇ、ｉ、ｊおよびｋは、それぞれ独立に１〜１０の整数である。幾つかの実施形態において、ｄ、ｅ、ｇ、ｉ、ｊおよびｋは、それぞれ独立に１〜５の整数である。幾つかの実施形態において、ａおよびｂは、それぞれ独立に１〜３の整数である。幾つかの実施形態において、ｄ、ｅ、ｇ、ｉ、ｊおよびｋは、それぞれ独立に１〜２の整数である。幾つかの実施形態において、ｄ、ｅ、ｇ、ｉ、ｊおよびｋは、それぞれ独立に１である。
特定の実施形態において、ｈは０〜３０の整数である。幾つかの実施形態において、ｈは０〜２５の整数である。幾つかの実施形態において、ｈは０〜２０の整数である。幾つかの実施形態において、ｈは０〜１５の整数である。幾つかの実施形態において、ｈは０〜１０の整数である。幾つかの実施形態において、ｈは０〜５の整数である。幾つかの実施形態において、ｈは０〜３の整数である。幾つかの実施形態において、ｈは０〜２の整数である。幾つかの実施形態において、ｈは１である。幾つかの実施形態において、ｈは０である。
幾つかの実施形態において、各Ｅは、独立に、
Figure 2018502067
 からなる群から選択される。
非限定的な例示的な実施形態において、Ｅは、次に示す構造のいずれかを有することができる。
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
式Ｉの化合物の合成は当業者の技術範囲内である。何らかの特定の化学的手法に限定するわけではないが、図１および図２に、容易に実施することができる式Ｉの化合物および中間体を合成する例示的な経路を示す。
本明細書において用いられる「歪み環」（Ａ）という語は歪み環状アルキンまたは歪み環状アルケンを指す。
式Ｉの歪み環状アルキン（Ａ）
歪み環状アルキン（Ａ）は、直鎖状アルキンと異なり、ｓｐ混成炭素の結合角が１８０°未満である。歪み環状アルキンは、環上および／またはその側鎖上に置換基を有することができる。本明細書に述べるように、歪みアルキンは、リンカー（Ｅ）を接続するための反応性官能基を有する誘導体も含むことができる。
式Ｉの歪みアルキンＡは、銅触媒を添加することなく穏和な条件下でアジド含有ＮＮＡＡと効果的に反応させすることができる。様々な歪みアルキンの調製およびそのアジド含有化合物との反応は、Ｍａｒｔｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２０１４，１９（２），１３７８−９３；Ｓｌｅｔｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２０１４，１６（６），１６３４−７；Ｄｅｂｅｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．２０１１，４４（９），８０５−１５；Ｊｅｗｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２０１１，１３（２２），５９３７−９；Ｊｅｗｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．２０１０，３９（４），１２７２−９；Ｂｅｒｔｏｚｚｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０１０，１３２，３６８８；Ｊｅｗｅｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｒｅｖ．２０１０ Ａｐｒ；３９（４）：１２７２−９等の文献からよく知られている。
非限定的な例示的な実施形態としては、歪みアルキン試薬であるジベンゾシクロオクチン、シクロオクト−４−インオール、炭酸（１Ｒ，８Ｓ，９Ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノン−４−イン−９−イルメチルＮ−スクシンイミジルに加えて、これらの誘導体および類縁体が挙げられる。
歪みアルキンは、リンカー（Ｅ）に、例えば、アミド結合、アミン結合、エーテル結合またはエステル結合によって接続することができる。
Figure 2018502067
迅速な生体直交型反応の重要な種類として、歪みアルケン（ノルボルネンおよびトランス−シクロオクテンを含む）およびテトラジンの逆電子要請型ディールズ・アルダー反応が登場した。この反応は、多くの場合、非常に穏和な条件下で進行させることができる。歪みアルケンの調製および反応は、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１３，１７（３），４１２−９；Ｓｅｃｋｕｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．２０１３，１７（５），７６１−７；Ｓｅｉｔｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０１２，１３４（６），２８９８−２９０１；Ｔａｙｌｏｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０１１，１３３，９６４６；Ｄｅｖａｒａｊ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２００８，１９，２２９７；Ｄｅｖａｒａｊ，Ｎ．Ｋ．；Ｗｅｉｓｓｌｅｄｅｒ，Ｒ．Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．２０１１，４４，８１６；Ｔａｙｌｏｒ，Ｍ．Ｔ．；ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０１１，１３３，９６４６；Ｂｌａｃｋｍａｎ，Ｍ．Ｌ．；ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００８，１３０，１３５１８等の多くの文献に記載されている。
歪みアルキンは、リンカー（Ｅ）に、例えば、エーテル、アミド、カルバマートまたはエステルによって接続することができる。
式Ｉの歪み環状アルケン（Ａ）の例
Figure 2018502067
非限定的な例示的な実施形態において、本発明に用いられる歪みアルケンは次に示す構造を有することができる。
Figure 2018502067
式Ｉの化学種の例
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
式ＩＩ
本発明は、次に示す式ＩＩの化合物を提供する：
Figure 2018502067
 （式中、ＣＢは、細胞結合物質であり；Ｍは、非天然型アミノ酸であり；およびＴは、アジド基またはテトラジン基である）。
特定の実施形態において、Ｍは、次に示す構造を有する：
Figure 2018502067
 （式中、
ｐおよびｑは、それぞれ独立に０〜１０の整数であり；
Ｒ6は、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチドもしくはアミノ末端修飾基または結合であり；
Ｒ7は、ＯＨ、アミノ酸、ポリペプチドもしくはカルボキシ末端修飾基または結合であり；
Ｖは、アルキル、アリール、炭素環、複素環であるかまたは存在せず；および
Ｗは、Ｏ、Ｎ、Ｓであるかまたは存在せず；
但し、Ｒ6が結合である場合、非天然型アミノ酸はＲ6を介して細胞結合物質に接続しており、Ｒ7が結合である場合、非天然型アミノ酸はＲ7を介して細胞結合物質に接続している）。
幾つかの実施形態において、ｐおよびｑは、それぞれ独立に０〜８の整数である。幾つかの実施形態において、ｐおよびｑは、それぞれ独立に０〜６の整数である。幾つかの実施形態において、ｐおよびｑは、それぞれ独立に０〜４の整数である。幾つかの実施形態において、ｐおよびｑは、それぞれ独立に０〜２の整数である。
非限定的な例示的な実施形態において、Ｍは、次に示す構造式で表すことができる。
Figure 2018502067
非天然型アミノ酸（Ｍ）（リンカー（Ｅ）との結合部分および結合点（Ｔ））
ＮＮＡＡ（Ｍ）は、２０種の天然アミノ酸のいずれかが有する側鎖と異なる任意の置換基すなわち側鎖（Ｔ）を有する。ＮＮＡＡは通常、側鎖の構造のみが天然アミノ酸と異なっているため、ＮＮＡＡは、他のアミノ酸（これらに限定されるものではないが、天然アミノ酸等）と、天然に存在するポリペプチドと同じ形でアミド結合を形成する。非天然型アミノ酸の側鎖は、任意的に、アルキル−、アリール−、アシル−、ケト−、アジド−、ヒドロキシル−、ヒドラジン、シアノ−、ハロ−、ヒロラジド、アルケニル、アルキンル（ａｌｋｙｎｌ）、エーテル、チオール、セレノ−、スルホニル−、ボラート、ボロナート、ホスホ、ホスホノ、ホスフィン、複素環式、エノン、イミン、アルデヒド、エステル、チオ酸、ヒドロキシルアミン、アミノ基、テトラジン等またはこれらの任意の組合せを含む。本発明に使用するのに好適となり得る、他の対象となる非天然型アミノ酸としては、これらに限定されるものではないが、光活性化可能な架橋性部位を含むアミノ酸、スピンラベル化アミノ酸、蛍光性アミノ酸、金属結合性アミノ酸、金属含有アミノ酸、放射性アミノ酸、新規な官能基を有するアミノ酸、他の分子と共有結合的または非共有結合的に相互作用するアミノ酸、光ケージドおよび／または光異性化可能なアミノ酸、ビオチンまたはビオチン類縁体を含むアミノ酸、グリコシル化アミノ酸（糖置換セリン等）、他の糖鎖修飾アミノ酸、ケト含有アミノ酸、ポリエチレングリコールまたはポリエーテルを含むアミノ酸、重原子置換アミノ酸、化学的切断および／または光切断可能なアミノ酸、天然アミノ酸と比較して伸長された側鎖（これらに限定されるものではないが、ポリエーテルまたは長鎖炭化水素（これらに限定されるものではないが、約５個以上または約１０個以上の炭素を有するもの等）等）を有するアミノ酸、炭素に結合した糖を含むアミノ酸、酸化還元活性を有するアミノ酸、アミノチオ酸含有アミノ酸および１つ以上の有毒部分を含むアミノ酸が挙げられる。様々な非天然型アミノ酸およびその合成は、米国特許第７６３２９２４号明細書、米国特許出願公開第２０１４００４６０３０号明細書、米国特許出願公開第２０１４００６６５９８号明細書および米国特許出願公開第２０１４００５１８３６号明細書に記載されており、その開示内容全体を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。図８に、本発明に使用されるＮＮＡＡの例を示す。Ｓｐｉｃｅｒ，ＣＤ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，５：４７４０（２０１４）。
幾つかの実施形態において、天然にコードされないアミノ酸は、２０種の一般的なアミノ酸中に存在しない官能基と効果的かつ選択的に反応して安定な複合体を形成する側鎖官能基（これらに限定されるものではないが、アジド基、ケトン基、アルデヒド基およびアミノオキシ基）を含む。例えば、アジド基を有する天然にコードされないアミノ酸を含む細胞結合物質は、アルキン部分を含む化合物と反応し、アジド基およびアルキン基の選択的反応によってヒュスゲン［３＋２］付加環化生成物を生成することにより、安定な複合体を形成することができる。
細胞結合物質に組み入れるための例示的なアジド含有またはテトラジン含有非天然型アミノ酸は次式で表すことができる：
Figure 2018502067
 （式中、ｐおよびｑは、それぞれ０〜１０であり；Ｒ6は、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチドまたはアミノ末端修飾基であり；Ｒ7は、ＯＨ、アミノ酸、ポリペプチドまたはカルボキシ末端修飾基であり；Ｕは、カルボニル、アミノ−カルボニル−アミノ、カルバモイル、アミノ−カルボニルオキシであるかまたは存在せず；Ｖは、アルキル、アリール、炭素環、複素環であるかまたは存在せず；Ｗは、Ｏ、Ｎ、Ｓであるかまたは存在せず；およびＴは、アジド基またはテトラジン基である）。
幾つかの実施形態では、Ｖはアリールであり、Ｗは存在しない。幾つかの実施形態では、Ｒ6はＨであり、Ｒ7はＯＨである。幾つかの実施形態では、Ｕはカルボニル、アミノ−カルボニル−アミノ、カルバモイルまたはアミノ−カルボニルオキシであり；Ｖは複素環であるかまたは存在せず；Ｗは存在せず；およびＴはアジド基である。本発明があらゆる異性体を想定していることは明らかであり、これらに限定されるものではないが、互変異性体および立体異性体（Ｒ体およびＳ体）（個々の異性体または混合物として）ならびに非天然型アミノ酸のあらゆる塩形態が挙げられる。
．
例示的なアジド含有非天然アミノ酸としては、これらに限定されるものではないが、以下に示すものが挙げられる。
Figure 2018502067
Figure 2018502067
Figure 2018502067
「アジド（ａｚｉｄｏ）」および「アジド（ａｚｉｄｅ）」という語は本発明において互換的に使用され、いずれも−Ｎ3基を指す。多くのアジド含有アミノ酸が商業的な供給元より入手可能である。例えば、４−アジドフェニルアラニンは、Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（Ｗｏｏｄ Ｄａｌｅ，Ｉｌｌ．）から入手することができる。（Ｓ）−５−アジド−２−（Ｆｍｏｃ−アミノ）ペンタン酸、（Ｓ）−（−）−２−アジド−６−（Ｂｏｃ−アミノ）ヘキサン酸（ジシクロヘキシルアンモニウム）塩、（Ｓ）−２−アジド−３−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）プロピオン酸シクロヘキシルアンモニウム塩、（Ｓ）−２−アジド−３−（３−インドリル）プロピオン酸シクロヘキシルアンモニウム塩、（Ｓ）−２−アジド−３−メチル酪酸シクロヘキシルアンモニウム塩、（Ｓ）−２−アジド−４−（メチルチオ）ブタン酸シクロヘキシルアンモニウム塩、（Ｓ）−２−アジド−３−フェニルプロピオン酸（ジシクロヘキシルアンモニウム）塩および（Ｓ）−２−アジド−プロピオン酸シクロヘキシルアンモニウム塩は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから市販されている。市販されていないアジド含有アミノ酸の場合、アジド基は、例えば、好適な脱離基（これらに限定されるものではないが、ハライド、メシラート、トシラート）の置換または適切に保護されたラクトンの開環等の当業者に知られている標準的な方法を用いて比較的容易に調製することができる。例えば、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｂｙ Ｍａｒｃｈ（Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８５，Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照されたい。
例示的なテトラジン含有非天然型アミノ酸としては、これらに限定されるものではないが、次に示すものが挙げられる。
Figure 2018502067
テトラジン含有ＮＮＡＡは、文献において知られている手順を用いて、細胞結合物質のペプチドおよびポリペプチドに一体化するように容易に組み入れることができる。
アジド置換およびテトラジン置換された非天然アミノ酸は、Ｈａｌｌａｍ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．（ＳＵＴＲＯ），Ｆｕｔｕｒｅ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．２０１４ Ｊｕｌ；６（１１）：１３０９−２４およびＢｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ． ２０１４ Ｆｅｂ １９；２５（２）：３５１−６１；Ｌ．Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，（２００１），Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９２：４９８−５００；Ｊ．Ｗ．Ｃｈｉｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０１：９６４−７（２００３））；Ｊ．Ｗ．Ｃｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，（２００２），Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ １２４：９０２６−９０２７；Ｊ．Ｗ．Ｃｈｉｎ，＆Ｐ．Ｇ．Ｓｃｈｕｌｔｚ，（２００２），Ｃｈｅｍ Ｂｉｏ Ｃｈｅｍ １１：１１３５−１１３７；Ｊ．Ｗ．Ｃｈｉｎ，ｅｔ ａｌ．，（２００２），ＰＮＡＳ ９９：１１０２０−１１０２４，Ｌ．Ｗａｎｇ，＆Ｐ．Ｇ．Ｓｃｈｕｌｔｚ，（２００２），Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，１−１０に記載されている方法を用いてタンパク質に部位選択的に組み入れることができる。
生体分子合成およびＮＮＡＡ
部位特異的ＮＮＡＡを含む抗体は、例えば、原核生物由来の無細胞系においてｉｎ ｖｉｔｒｏで生成することができる。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける伸長途中の合成ペプチドへの、例えばアジド−フェニルアラニンまたはアジド−パラ−メチル−フェニルアラニンの部位特異的挿入は、オルソゴナルｔＲＮＡ合成酵素／ｔＲＮＡ対を用いることにより達成される。このチャージされたｔＲＮＡはナンセンスコドンを認識する。
スケーラブルな無細胞タンパク質合成系は、ＮＮＡＡの部位特異的挿入およびジスルフィド結合を含む抗体の全長合成（ｆｕｌｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）の技術分野において知られている（Ｓｗａｒｔｚ，ＪＲ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｉｍｐｌｉｆｙｉｎｇ ａｎｄ Ｓｔｒｅａｍｌｉｎｉｎｇ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ Ｃｏｌｉ−Ｂａｓｅｄ Ｃｅｌｌ−Ｆｒｅｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｐｒｏｇ．２８（２）：４１３（２０１２）ＰＭＩＤ：２２２７５２１７；Ｓｗａｒｔｚ，ＪＲ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ−ｆｒｅｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｆｏｒ Ｅｘ Ｖｉｖｏ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｕｍｏｒ Ｃｅｌｌｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．３９０（３）：９７１（２００９）ＰＭＩＤ：１９８５２９３７；Ｓｗａｒｔｚ，ＪＲ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎ Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｃｅｌｌ−Ｆｒｅｅ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｍｏｌ Ｓｙｓｔ Ｂｉｏｌ．４：２２０（２００８））。例えば、Ｓｗａｒｔｚらによる米国特許第７３３８７８９号明細書および関連出願である米国特許第８７１５９５８号明細書の生体外タンパク質合成方法を参照されたい。米国特許第７３３２５７１号明細書、米国特許第７３８５０２８号明細書、米国特許第７６９６３１２号明細書、米国特許第７９２８１６３号明細書および米国特許第８００８４２８号明細書、Ｓｃｈｕｌｔｚ，ＰＧ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｔＲＮＡｓ ｆｏｒ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｕｎｎａｔｕｒａｌ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ．Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．３（１２）：１０３３（１９９６）；Ｓｃｈｕｌｔｚ，ＰＧ，ｅｔ ａｌ．，Ａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｓｉｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｎｎａｔｕｒａｌ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ ｉｎｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４（４９０１）：１８２（１９８９）；Ｄｉｅｔｅｒ Ｓｏｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｗｈｅｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｃｏｎｆｒｏｎｔｓ ｔｈｅ ｔＲＮＡ Ｗｏｒｌｄ．ＰＮＡＳ ＵＳ ９４（１９）：１０００７（１９９７）；Ｖｏｌｏｓｈｉｎらによる米国特許第８７７８６３１号明細書（Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｎｏｎ−Ｎａｔｉｖｅ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ ｉｎｔｏ Ｐｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ａ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ Ｕｓｉｎｇ ａ Ｃｅｌｌ−Ｆｒｅｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ）も参照されたい。ｉｎ ｖｉｖｏにおける非天然型アミノ酸の部位特異的導入については、例えば、米国特許第７０４５３３７号明細書、米国特許第８１７３３９２号明細書、米国特許第８１１４６４８号明細書、米国特許第８０３００７４号明細書、米国特許第７９１５０２５号明細書、米国特許第７６３８３００号明細書、米国特許第７３６８２７５号明細書、米国特許第８１７３３６４号明細書、米国特許第８１８３０１２号明細書、米国特許第７７１３７２１号明細書、米国特許第７３５４７６１号明細書、米国特許第７０８３９７０号明細書、米国特許第８０１２７３９号明細書、米国特許第７０８３９７０号明細書、米国特許第７４３２０９２号明細書、米国特許第８１１４６２９号明細書、米国特許第８０７１３４４号明細書、米国特許第７９１０３４５号明細書、米国特許第７５２４６４７号明細書、米国特許第７６０８４２３号明細書を参照されたい。
活性を有する放出物
本発明の生体分子複合体は、哺乳動物に、例えば、病態を治療するために投与することが意図されている。本発明の生体分子複合体は生体分子を含み、この生体分子の構造に少なくとも１種の非天然型アミノ酸（ＮＮＡＡ）が一体化されており、このＮＮＡＡはリンカーの結合点となり、リンカーは低分子医薬（特に、細胞傷害薬）に結合している。本発明の生体分子複合体は、一般に、投与後に低分子医薬である細胞傷害薬を含む活性化合物を放出する。
したがって、本発明の他の態様は、本明細書に記載する低分子医薬を含む式Ｉの化合物のそれぞれに対応する放出物である。本発明のさらなる態様は、本明細書に記載するリンカーおよび低分子医薬を含む式Ｉの化合物のそれぞれに対応する放出物である。
活性を有する放出化合物の一実施形態（ＮＮＡＡであるアジド−パラメチルフェニルアラニン（Ｍ２）および本発明の式Ｉ（化合物Ｉ４）を使用したことに相当する）は、一般に、次に示す天然に存在しないアミノ酸、リンカーおよび低分子医薬を含む。
Figure 2018502067
例えば、この活性を有する放出物には位置異性体が存在する。Ｉ４には２種類の位置異性体が存在するため、分解産物も２種の位置異性体として存在する。ここで本開示に照らすと、本明細書に記載する生体分子複合体の投与時／投与後に、非天然型アミノ酸、リンカーおよび低分子医薬を基本的に含む類似の活性を有する放出化合物が生成することが当業者に理解される。したがって、本発明の他の態様（その例がＡＲ４である）は、本明細書に記載する式Ｉの化合物のそれぞれに対応する、本明細書に記載する非天然型アミノ酸、リンカーおよび低分子医薬を含む放出物である。
生体分子複合体の生成
１，３−双極子付加環化反応による式ＩＩＩの複合体
歪みアルキンを含む式Ｉの化合物と少なくとも１個のアジドで置換された非天然型アミノ酸を含む式ＩＩの化合物との付加環化反応は、式ＩＩＩの複合体を製造するための選択的かつ生体適合性のある手法である（アジド＋三重結合［３＋２］型付加環化または「クリック」反応）。
式Ｉの点線（Ａ）は歪みアルキンを表す。式ＩＩの（Ｔ）はＮＮＡＡ（Ｍ）上のアジド基である。他の基および置換基は上に定義した通りである。
Figure 2018502067
アジド基および歪みアルキン基は水性環境において生体分子に対して非常に安定であり、スキームＩに例示するように、本明細書に記載するアジド−アルキン付加環化反応を用いることより、細胞傷害薬（Ｄ）を、例えば細胞結合物質（ＣＢ）と対にすることができる。例えば図６Ａを参照されたい。
結果として得られるトリアゾールは自然界に広く存在するアミド部分に類似しており（但し、アミドと異なる）、加水分解または酵素により触媒される切断を受けにくい。さらにトリアゾールは、生理学的条件下で酸化または還元を受けることはほぼ不可能である。本発明の複合体の組み立てに用いられる付加環化反応（「クリック」ケミストリーとしても知られる）は、１，３−双極子（例えばアジド）と、親双極子（例えば置換アルキン）との反応により５員環を形成する。歪みアルキンによって反応性が増大するため、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との付加環化反応が銅または他の触媒を使用することなく室温で円滑に進行する。銅フリー付加環化反応の手順は化学分野においてよく知られている。例えば、Ｌｕｔｚ，Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ．２００８，４７（１２），２１８２−４；Ｂｅｒｔｏｚｚｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００９，４８，６９７４；Ｂｅｒｔｏｚｚｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０１０，１３２，３６８８；Ｊｅｗｅｔｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｒｅｖ．２０１０，３９（４），１２７２−９，Ｓｃｈｕｌｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２０１０，１２（１０），２３９８−４０１を参照されたい（この文献の内容全体を、本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する）。単純な基質を用いた一般的な銅フリー付加環化の反応条件は当該技術分野において知られている（例えば、室温下、アセトニトリル中）。例えば、図６Ａを参照されたい。
少なくとも１個のアジドで置換されたＮＮＡＡを、好ましくはそれぞれを複数個、例えば、それぞれを２〜５０個、２〜２５個、２〜１５個、２〜１０個または２〜５個含む生体分子の製造方法も、本明細書に記載する本発明の範囲内である。当然の帰結として、例えば、少なくとも１個のアジド＋三重結合の［３＋２］型付加環化により共役結合した低分子医薬種を有する生体分子（例えば、抗体）の製造方法も、本明細書に記載する本発明の範囲に包含される。生体分子、例えば、複数個（例えば、２〜１００個、２〜５０個、２〜２５個、２〜１０個または２〜５個）のアジド＋三重結合（３＋２）型付加環化により共役結合した低分子医薬種を有する抗体種も、本明細書に記載する本発明の範囲に包含される。
４＋２型環化付加反応による式ＩＩＩ’の複合体
アジド＋三重結合の［３＋２］型の付加環化（または「クリック」反応）を行うための代替的な化学反応として、歪みトランス−二重結合（歪みアルケン）とテトラジン部分との反応によって［４＋２］型の付加環化を行い、次いでＮ2を脱離することにより、環状ジアゼンが生成する。例えば、図６Ｂを参照されたい。
アルキンおよびアジドの反応と同様に、歪みアルケンおよびテトラジンの［４＋２］型付加環化は穏和な条件下で進行し、スキームＩＩに示す式ＩＩＩ’の複合体が生成する。式Ｉの（Ａ）の点線が存在せず（すなわち、歪みアルキンではなく歪みアルケンである）、式ＩＩの（Ｔ）はＮＮＡＡ（Ｍ）上のテトラジン基である。
Figure 2018502067
本明細書において述べ、例示する歪みアルケンおよびテトラジン部分の一体化させるための反応条件および手順は当該技術分野においてよく知られている。歪みアルケンおよびテトラジン部分のこのような形の反応は、例えば、Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｈｅｍ．（２０１４）６，３９３−４０３；Ｋｉｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．（２０１３）１７（３），４１２−９；Ｓｅｃｋｕｔｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．（２０１３）１７（５），７６１−７；Ｌａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｈｅｍ．（２０１２）４，２９８−３０４；Ｓｅｉｔｃｈｉｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２０１２）１３４（６），２８９８−２９０１；Ｔａｙｌｏｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２０１１）１３３，９６４６；Ｄｅｖａｒａｊ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．（２００８）１９，２２９７；Ｄｅｖａｒａｊ，ｅｔ ａｌ．，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．（２０１１）４４，８１６；Ｔａｙｌｏｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２０１１）１３３，９６４６；Ｂｌａｃｋｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２００８）１３０，１３５１８に記載されている。これらの内容全体を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。
少なくとも１個のテトラジンで置換されたＮＮＡＡを、好ましくは、それぞれを複数個、例えば、それぞれを２〜５０、２〜２５、２〜１５、２〜１０または２〜５個含む生体分子の製造方法は本明細書に記載する本発明の範囲に包含される。当然の帰結として、生体分子、例えば、少なくとも１個の歪みアルケンとテトラジン部分との［４＋２］型付加環化により共役結合した低分子医薬種を有する抗体種を製造する方法も本明細書に記載する本発明の範囲に包含される。歪みアルケンとテトラジン部分との［４＋２］型付加環化により共役結合した低分子医薬種を、複数個、例えば、２〜１００個、２〜５０個、２〜２５個、２〜１０個または２〜５個有する生体分子（例えば、抗体種）も、本明細書に記載する本発明の範囲に包含される。
２個の非天然型アミノ酸（一方のアミノ酸は、リンカー／低分子医薬を［４＋２］により組み入れるため、もう一方のアミノ酸は、別のリンカーおよび／または低分子医薬を［３＋２］により組み入れるため）を有する生体分子（例えば抗体種）を最初に生成させることにより、異なる低分子医薬（Ｄ）種を同一の生体分子に共役結合させることができる。したがって、異なるＮＮＡＡ（Ｍ）、例えば、（１）アジドで置換されたＮＮＡＡ（Ｍ−Ｔ）および（２）テトラジンで置換されたＮＮＡＡ（Ｍ−Ｔ）を同一の生体分子（ＣＢ）に組み入れることにより（式ＩＩ）、異なる（Ｄ）種を、本明細書で他に記載するように、同一の生体分子（ＣＢ）に共役結合させることができる。本明細書に記載する方法に従い、すなわち式ＩＩＩの複合体を得るための１，３−双極子付加環化反応と、式ＩＩＩ’の複合体を得るための［４＋２］型付加環化反応とを、同一生体分子（ＣＢ）上で行うことができる。少なくとも１個のアジドで置換されたＮＮＡＡおよび少なくとも１個のテトラジンで置換されたＮＮＡＡ（ＮＮＡＡはそれぞれ本明細書に記載したもの）を含む単一の生体分子（例えば、単一の抗体種）も本発明の範囲に包含される。当然の帰結として、２個の異なる共役結合した低分子医薬種（Ｄ）および／またはリンカー（（Ｅ）m）を有する単一の生体分子（例えば、単一の抗体種）も本明細書に記載する本発明の範囲に包含される。少なくとも１個のアジドで置換されたＮＮＡＡおよび少なくとも１個のテトラジンで置換されたＮＮＡＡを、好ましくはそれぞれを複数個、例えば、それぞれを２〜５０個、２〜２５個、２〜１５個、２〜１０個または２〜５個含むこの種の生体分子の製造方法も、本開示により、本発明の範囲に包含される。２個の異なる共役結合した低分子医薬種（Ｄ）および／またはリンカー（（Ｅ）m）を有する単一の生体分子の製造方法もさらに本明細書に記載する本発明の範囲に包含される。
分岐リンカー
本明細書で他に記載するように、例えば、それぞれ２個の低分子医薬が結合できる分岐点を有するリンカーを、抗体１個当たり２個程度結合させる。
Figure 2018502067
 この種の手法の多くの変形形態が存在することは当業者に理解される。
低分子医薬、細胞傷害薬およびメイタンシノイド
本明細書において用いられる「細胞傷害薬」は、特定の種類の細胞の増殖を静止させるか、生存能力を低下させるか、または死を誘導する任意の化合物を指す。好適な低分子医薬である細胞傷害薬としては、例えば、メイタンシノイド類およびメイタンシノイド類縁体、タキソイド類、ＣＣ−１０６５および類縁体、ドラスタチンおよび類縁体、ゼレシンおよび類縁体、ピロロベンゾジアゼピン二量体および類縁体；天然に産生される細胞毒および合成類縁体（クリトフィシンズ（ｃｒｙｔｏｐｈｙｃｉｎｓ）、アマトキシン類、チューブリシン類等）に加えて、他の有効な天然または非天然の低分子薬（ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ａｇｅｎｔ）が挙げられる。モノメチルバリン化合物については、例えば、米国特許第７９９４１３５号明細書、米国特許第７９６４５６７号明細書、米国特許第７９６４５６６号明細書、米国特許第７７４５３９４号明細書、米国特許第７４９８２９８を参照されたい。
メイタンシノイドは、例えば、微小管の形成を抑制するため、哺乳動物の細胞に対する毒性が非常に強い。本発明の好ましい実施形態において、低分子医薬は、メイタンシノイド（メイタンシノール、メイタンシノール類縁体、アンサマイトシン、アンサマイトシン類縁体を含む）である細胞傷害薬である。
メイタンシノイド類
メイタンシノイド類は細胞毒性が非常に強い薬物である。最初にＫｕｐｃｈａｎらによってメイタンシンが東アフリカの低木メイテナス・セラタ（Ｍａｙｔｅｎｕｓ ｓｅｒｒａｔａ）から単離され、これは従来のがん化学療法薬であるメトトレキサート、ダウノルビシン、ビンクリスチン等の１００倍〜１０００倍の細胞毒性を示した（米国特許第３８９６１１１号明細書）。その後、メイタンシノールおよびメイタンシノールＣ−３エステル等のメイタンシノイド類を産生する特定の微生物も発見された（米国特許第４１５１０４２号明細書）。メイタンシノールＣ−３エステルおよびメイタンシノール類縁体の合成も報告されている （Ｋｕｐｃｈａｎ，ｅｔ ａｌ．，２１ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３１−３７（１９７８）；Ｈｉｇａｓｈｉｄｅ，ｅｔ ａｌ．，２７０ Ｎａｔｕｒｅ ７２１−７２２（１９７７）；Ｋａｗａｉ，ｅｔ ａｌ．，３２ Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３４４１−３４５１（１９８４））。Ｃ−３エステルを調製する原料となるメイタンシノール類縁体の例としては、芳香環（例えば、デクロロ）またはＣ−９位、Ｃ−１４位（例えば、メチル基のヒドロキシル化）、Ｃ−１５位、Ｃ−１８位、Ｃ−２０位およびＣ−４，５位が修飾されたメイタンシノールが挙げられる。メイタンシノイドを組み入れた多くの免疫複合体が米国特許第８６８５９２０号明細書、米国特許第８６２４００３号明細書、米国特許第８６１３９３０号明細書、米国特許第８６０３４８３号明細書、米国特許第８５６３５０９号明細書、米国特許第８３３７８５６号明細書、米国特許第８２３６３１９号明細書、米国特許第６３３３４１０号明細書、米国特許第６４４１１６３号明細書、米国特許出願公開第２０１４００２３６６５号明細書等に報告されている（これらの開示内容全体を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する）。
本発明に使用するのに適したメイタンシノイド類は当該技術分野においてよく知られている。好適なメイタンシノール類縁体の例としては、芳香環が修飾されたものおよび／または他の位置が修飾されたものが挙げられる。この種のメイタンシノイド類は、例えば、米国特許第４２５６７４６号明細書、米国特許第４２９４７５７号明細書、米国特許第４３０７０１６号明細書、米国特許第４３１３９４６号明細書、米国特許第４３１５９２９号明細書、米国特許第４３２２３４８号明細書、米国特許第４３３１５９８号明細書、４３６１６５０号明細書、米国特許第４３６２６６３号明細書、米国特許第４３６４８６６号明細書、４４２４２１９号明細書、米国特許第４３７１５３３号明細書、米国特許第４４５０２５４号明細書、米国特許第５４７５０９２号明細書、米国特許第５５８５４９９号明細書、米国特許第５８４６５４５号明細書、米国特許第６３３３４１０号明細書および米国特許出願公開第２０１４００２３６６５号明細書に記載されている（これらの開示内容全体を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する）。
修飾された芳香環を有する好適なメイタンシノール類縁体としては、例えば、次に示すものが挙げられる：
（１）Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４２５６７４６号明細書）（アンサマイトシンＰ２のＬＡＨ還元により調製）；
（２）Ｃ−２０−ヒドロキシ（またはＣ−２０−デメチル）＋／−Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４３６１６５０号明細書および米国特許第４３０７０１６号明細書）（ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）またはアクチノミセス属（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）に属する微生物を用いた脱メチル化またはＬＡＨを用いた脱塩素化により調製）；および
（３）Ｃ−２０−デメトキシ，Ｃ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）＋／−デクロロ（米国特許第４２９４７５７号明細書）（塩化アシルを用いたアシル化により調製）。
他の位置が修飾された好適なメイタンシノール類縁体の具体例としては、次に示すものが挙げられる：
（１）Ｃ−９−ＳＨ（米国特許第４４２４２１９号明細書）（メイタンシノールをＨ2ＳまたはＰ2Ｓ5と反応させることにより調製）；
（２）Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ2ＯＲ）（米国特許第４３３１５９８号明細書）；
（３）Ｃ−１４−ヒドロキシメチルまたはアシルオキシメチル（ＣＨ2ＯＨまたはＣＨ2ＯＡｃ）（米国特許第４４５０２５４号明細書）（ノカルディア属（Ｎｏｃａｒｄｉａ）に属する微生物から調製）；
（４）Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ（米国特許第４３６４８６６号明細書）（ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）に属する微生物によりメイタンシノールを変換することにより調製）；
（５）Ｃ−１５−メトキシ（米国特許第４３１３９４６号明細書および米国特許第４３１５９２９号明細書）（トレビア・ヌードルフロラ（Ｔｒｅｗｉａ ｎｕｄｌｆｌｏｒａ）から単離）；
（６）Ｃ−１８−Ｎ−デメチル（米国特許第４３６２６６３号明細書および米国特許第４３２２３４８号明細書）（メイタンシノールをストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）に属する微生物により脱メチル化することにより調製）；および
（７）４，５−デオキシ（米国特許第４３７１５３３号明細書）（メイタンシノールを三塩化チタン／ＬＡＨで還元することにより調製）。
さらに、米国特許第６３３３４１０号明細書（その開示内容全体を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する）には、細胞結合物質に連結させるのに適したチオール含有メイタンシノイドを調製および精製するための改善されたプロセスが提供されている。
さらにメイタンシノイドの例として、これらに限定されるものではないが、次に示すものが挙げられる。
Figure 2018502067
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これらの幾つかのメイタンシノイドの実施形態において、ｐは１〜８である。幾つかの実施形態において、ｐは１〜６である。幾つかの実施形態において、ｐは１〜４である。幾つかの実施形態において、ｐは１〜２である。幾つかの実施形態において、ｐは１である。
メイタンシノール上の多くの位置が、連結の種類に応じて連結位置として有用であることが知られている。例えば、エステル結合を形成する場合、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位、ヒドロキシル基で修飾されたＣ−１５位およびヒドロキシル基を有するＣ−２０位がいずれも好適である。Ｃ−３位が好ましい。
メイタンシノイドを含む細胞傷害薬およびその治療的使用については米国特許第５２０８０２０号明細書、米国特許第５４１６０６４号明細書、米国特許第７２７６４９７号明細書、米国特許第７８５１４３２号明細書、米国特許第７４７３７９６号明細書、米国特許第７６０１３５４号明細書、米国特許第７３０３７４９号明細書、米国特許第８１９８４１７号明細書、米国特許第８１６３８８８号明細書、米国特許第７９８９５９８号明細書、米国特許第８０８８３８７号明細書を参照されたい。
メイタンシノイドの連結
メイタンシノールのＣ−３位が好ましい。リンカー（Ｅ）とメイタンシノイドとの間の連結基としては、これらに限定されるものではないが、アミド、エステル、カルバマート、カルボナート、エーテル、ヒドラゾン、チオエーテルおよびジスルフィドが挙げられる。幾つかの実施形態において、連結基はアミドである。幾つかの実施形態において、連結基はカルバマートである。幾つかの実施形態において、連結基はエステルである。リンカーおよびメイタンシノイド間に連結基を生成させる化学反応は当該技術分野において一般に知られている。幾つかの実施形態において、メイタンシノイドは、１段階で（Ｅ）に連結させることができる。幾つかの実施形態では、最初にメイタンシノイドとリンカーの一部との間に連結基を形成し、続いてリンカーを伸長することができる。例えば、図１および図２に、最初にアミド連結基を形成し、続いてリンカーを伸長することによる、メイタンシノイドをリンカーに連結させるための非限定的な手法を例示する。
細胞結合物質を含む生体分子
本明細書において用いられる生体分子という語は、一般に、好ましくは生体内で、特定の生物学的標的と親和性を示すか、または結合もしくは相互作用する能力を有する天然由来または合成由来の構造物を指す。本発明に用いられる生体分子は、例えば、第２級、幾つかの実施形態では第３級および／または第４級構造を有する、タンパク質をベースとする化学物質である。生体分子は、例えば、グリコシル化、リン酸化、脱アミドおよび／または酸化等の翻訳後修飾を施されていてもよい。リガンドおよび受容体は、それぞれ、本発明の複合体に用いられる生体分子の種類の例である。例えば、可溶型のリガンドおよび受容体、一般には融合構築体（ｆｕｓｉｏｎ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ）は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域の融合体等、当該技術分野において知られている。例えば、可溶型のリガンドおよび受容体の融合構築体は、本発明の複合体構造に用いるための生体分子の種類の例である。現時点で本発明の薬物複合体に使用するのに好ましい生体分子は、抗体、特にモノクローナル抗体（ｍＡｂ）（二重特異性抗体およびその機能断片を含む）である。抗体の構造修飾も、本発明の複合体に使用される生体分子に関する領域の一例である。Ｎｅｘｔ−Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，１３：４１３（２０１４）を参照されたい。代替的な生体分子手法は、ＤＡＲＰ（設計アンキリン反復タンパク（ｄｅｓｉｇｎｅｄ ａｎｋｙｒｉｎ ｒｅｐｅａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ））実施形態等、抗体様の親和性機能を果たすことができる代替的なリガンドを提供するものである。
本発明の複合体の治療薬としての有効性は、適切な細胞結合物質の慎重な選択にかかっている。細胞結合物質は現時点で知られている任意の種類のものであっても、今後現れるものであってよく、ペプチドおよび非ペプチドが含まれる。一般に、抗体、リガンド融合構築体および二重特異性抗体が最も好ましい。細胞結合物質の例としては、モノクローナル抗体、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ等）、特に二重特異性抗体が挙げられる。
活性および薬効
本発明の細胞結合物質／メイタンシノイド複合体について、様々な細胞株の生体外における成長および／または増殖を抑制する能力を評価することができる。例えば、ヒト大腸がん細胞株ＣＯＬＯ２０５、ヒトメラノーマ細胞株Ａ３７５、ヒト骨髄性白血病細胞株ＨＬ６０、ヒト乳がん細胞株ＳＫＢＲ３、ヒト扁平上皮がん細胞株ＫＢ等の細胞株を上記複合体の細胞毒性の評価に使用することができる。評価に用いる細胞を、例えば、本発明の化合物に２４時間曝露し、細胞生存率を既知の方法で直接評価する。例えば、 Ｇｏｌｄｍａｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，１３５ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６４８−３６５１（１９８５）およびＧｏｌｄｍａｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，１０２ Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１３１２−１３１９（１９８６）を参照されたい。この評価の結果から増殖インビション（ｉｎｂｉｔｉｏｎ）および／または細胞死のＩＣ50値を求める。
使用方法
本明細書に記載する複合体は、選択された細胞集団に細胞傷害薬を標的指向するための方法に使用することができる。この方法は、選択された細胞集団を含むことが疑われる細胞集団または組織に細胞結合物質−細胞傷害薬複合体を接触させることを含み、１つ以上の細胞傷害薬はリンカーを介して共有結合により細胞結合物質に連結している。細胞結合物質は選択された細胞集団の細胞に結合する。本明細書に記載する複合体は、細胞を破壊する方法に用いることもできる。この方法は、細胞に、細胞結合物質−メイタンシノイド複合体を接触させることを含み、例えば、１つ以上のメイタンシノイドは、細胞結合物質に、例えばリンカーを介して共有結合することにより連結しており、細胞結合物質は細胞に結合する。場合により、例えばＣＤ７４が結合した後、複合体全体が標的細胞に取り込まれる。本発明の複合体は、苦痛の治療方法に使用することもできる。苦痛としては、これらに限定されるものではないが、悪性腫瘍、自己免疫疾患、移植片拒絶反応、移植片対宿主病、ウイルス感染、微生物感染および寄生虫感染が挙げられる。この方法は、治療を必要とする被験体に有効量の細胞結合物質／細胞傷害薬複合体を投与することを含む。この細胞結合物質／細胞傷害薬複合体は、１つ以上の細胞傷害薬が細胞結合物質にリンカーを介して共有結合により連結しており、細胞結合物質は苦痛をもたらす異常細胞または感染細胞 に結合する。
本発明の方法に従い治療することができる病状の例としては、これらに限定されるものではないが、任意の種類の悪性腫瘍、例えば、血液学的状態（ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）（血液がん、ＭＤＳ、白血病（Ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）、リンパ腫、骨髄腫等）、肺がん、乳がん、結腸がん、前立腺がん、腎臓がん、膵臓がん、卵巣がんおよびリンパ性器官のがん等；自己免疫疾患、例えば、全身性ループス、関節リウマチおよび多発性硬化症；移植片拒絶反応、例えば、腎移植拒絶反応、肝移植拒絶反応、肺移植拒絶反応、心移植拒絶反応および骨髄移植拒絶反応；移植片対宿主病；ウイルス感染、例えば、サイトメガロウイルス感染、ＨＩＶ感染；ならびに当業者により定められる他の状態が挙げられる。本発明の複合体は、例えば、腫瘍学的状態（ｏｎｃｏｌｏｇｙ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）、腫瘍、血液学的状態、特に、Ｂ細胞悪性腫瘍、多発性骨髄腫およびＢ細胞リンパ腫の治療に使用することができる。
本発明の複合体を生体内で臨床的に使用する場合、無菌性および毒素量が検査された溶液または凍結乾燥粉末として提供することができる。複合体を、例えば、４週間に亘り、週１回、静脈内ボーラス投与することができる。ボーラス投与は、例えば生理食塩水５０〜５００ｍＬ（ヒト血清アルブミン５〜１０ｍＬを添加してもよい）中で行うことができる。投与量は、単回投与当たり１０ｍｇ〜２０００ｍｇ、１日当たり、例えば、１００ｎｇ〜２００ｍｇ／ｋｇの範囲として静注することができる。治療から、例えば１〜６週間後、例えば２〜４週間後、患者は週単位で治療を継続することができる。
臨床的および非臨床的に使用する条件は当業者により容易に決定される。投与経路、賦形剤、希釈剤、用量、時間等に関する具体的なｉｎ ｖｉｖｏ臨床プロトコールは、その臨床的状況が保証されるのであれば、当業者により決定することができる。
他の活性剤を本発明の複合体と一緒に投与することもできる。
実施例Ｉ
抗体−薬物複合体
１．保存
タンパク質は−８０℃で保存することができ、薬物リンカーは４℃または−２０℃で長期間保存することができる。
２．算出
タンパク質および薬物リンカーの量を計算する。タンパク質原液濃度Ｘ１（ｍｇ／ｍＬ）、所望のタンパク質最終濃度Ｘ２（ｍｇ／ｍＬ）、薬物原液濃度Ｘ３（ｍＭ）、共役結合させるＣＢタンパク質Ｘ４（ｍｇ）。推奨されるタンパク質対薬物のモル比は１０：１であるが、例えば、５：１程度まで低くてもよい。タンパク質のＭＷが１５０Ｋでない場合、計算により調整することができる。
Figure 2018502067
３．共役反応
適量のタンパク質および薬物リンカーを室温で調製し、共役反応させるために混合する。
実施例１：［タンパク質原液濃度］＝４．５ｍｇ／ｍＬ、［所望のタンパク質最終濃度］＝３ｍｇ／ｍＬ、［薬物原液濃度］＝５ｍＭ、共役結合させるためのタンパク質０．１ｍｇ。
マイクロチューブ内でＰＢＳバッファー（９．８μＬ）および薬物（１．３μＬ）をタンパク質（２２．２μＬ）に加える。チューブを室温（約２２℃）で１６時間チューブローテーターにかける。通常、この抗体−薬物複合体の量は、ＤＡＲ解析、細胞結合および細胞死アッセイに十分な量である。
実施例２：［タンパク質原液濃度］＝４．５ｍｇ／ｍＬ、［所望のタンパク質最終濃度］＝３ｍｇ／ｍＬ、［薬物原液濃度］＝５ｍＭ、共役結合させるためのタンパク質１０ｍｇ。
１５ｍＬ容の遠心管内でＰＢＳバッファー（９７７．８μＬ）および薬物（１３３．３μＬ）をタンパク質（２２２２．２μＬ）に加える。チューブを室温（約２２℃）で１６時間チューブローテーターにかける。
共役結合させる時間および温度は、各種抗体に応じて変化させることができる。室温および１６時間が推奨される。
４．遊離薬物の除去
Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｚｅｂａスピン７Ｋ ＭＷＣＯデサルティング（ｄｅｓｌａｔｉｎｇ）カラムを用いて複合体混合物を脱塩することによって遊離薬物を除去することができる。試料体積に応じてカラムサイズを選択する。
Figure 2018502067
実施例ＩＩ
細胞死アッセイ
共役結合した生体分子の標的陽性細胞に対する細胞毒性を、細胞増殖アッセイを用いて測定した。標的陽性細胞および標的陰性細胞をＡＴＣＣより入手し、非働化処理済みウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）（２０％）、ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）（２ｍＭ）およびペニシリン／ストレプトマイシン（Ｃｅｌｌｇｒｏ−Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ；Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）（１×）を添加したＲＰＭＩ／高グルコース培地（Ｃｅｌｌｇｒｏ−Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ；Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）で培養した。計２０，０００個の細胞を含む培地４０μＬを９６ウェルハーフエリア平底白色ポリスチレンプレートにアッセイ開始日に播種した。共役結合したリード（ｌｅａｄ）を２×濃度でＲＰＭＩ培地に配合し、ＭｕＬｔｉＳｃｒｅｅｎ ＨＴＳ ９６ウェルフィルタープレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）で濾過した。フィルター滅菌した共役結合したリードを処理ウェルに添加し、プレートを３７℃のインキュベーターにおいてＣＯ2下で７２時間培養した。細胞生存率測定を行うために、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．；Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）（８０μＬ）を各ウェルに添加し、製品の指示書に従いプレートを処理した。相対発光強度をＥＮＶＩＳＩＯＮ（登録商標）プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ；Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）で測定した。未処理の細胞を対照とし、相対発光強度の測定値を生存率（％）に変換した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ ｖ ５．００，Ｓｏｆｔｗａｒｅ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用し、ｌｏｇ（阻害物質）ｖｓ．応答について、非線形回帰分析を行い、可変勾配（ｖａｒｉａｂｌｅ ｓｌｏｐｅ）、４パラメータ回帰式を用いてデータのフィッティングを行った。データを、相対細胞生存率（％）ｖｓ．ＡＤＣ投与量（ｎＭ）として表した。
実施例ＩＩＩ
Ｉ１の合成
Ａ．Ｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−ＡｌａからのＭａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−Ａｌａグルタル酸の合成
Ｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−Ａｌａ（２５０ｍｇ、０．３８５ｍｍｏｌ）（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００６，４９，４３９２に記載されている手順に従い調製）、無水グルタル酸（４４０ｍｇ、３．８５ｍｍｏｌ）および飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（１ｍｌ）をＴＨＦ（１０ｍｌ）に溶解する。反応混合物をアルゴン中、室温で２時間撹拌する。反応混合物を水で希釈し、濃ギ酸でｐＨ２に調整する。得られた反応混合物を酢酸エチルで２回抽出する。有機層を合一し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過する。粗製残渣をＣ１８カラム（２０〜４０ミクロン）（５０ｇ）を用いて逆相クロマトグラフィーに付し、水（０．１％ＡｃＯＨ）中アセトニトリル（０．１％ＡｃＯＨ）でグラジエント溶出（１０〜９５％、１８分間）させることにより精製し、凍結乾燥させることにより、ｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−Ａｌａグルタル酸３２（２０５ｍｇ、０．２６８ｍｍｏｌ、収率７０％）を白色固体として得る。ＭＳｍ／ｚ：７６４．７［ＭＨ＋］，７４７．１［Ｍ−１８］，７８６．７［Ｍ＋ Ｎａ］；1ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：０．７４（３Ｈ，Ｓ），１．１９−１．２７（８Ｈ，ｍ），１．３８−１．４２（１Ｈ，ｍ），１．６２（３Ｈ，Ｓ），１．８０−１．８５（１Ｈ，ｍ），１．９１−１．９６（２Ｈ，ｍ），２．１２−２．１８（１Ｈ，ｍ），２．３０−２．４５（５Ｈ，ｍ），２．５５（１Ｈ，ｔ），２．７９（３Ｈ，ｓ），２．９５（１Ｈ，ｄ），３．０５（１Ｈ，ｄ），３．１５（３Ｈ，ｓ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．４４（１Ｈ，ｄ），３．５８（１Ｈ，ｄ），３．９３（３Ｈ，ｓ），４．２４（１Ｈ，ｔ），４．６８−４．７２（１Ｈ，ｍ），５．３２（１Ｈ，ｂｓ），５．５８−５．６３（１Ｈ，ｍ），６．３４−６．３９（１Ｈ，ｍ），６．５８−６．６５（２Ｈ，ｍ），６．７８（１Ｈ，ｓ）．
Ｂ．Ｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−Ａｌａグルタル酸からのＭａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−Ａｌａグルタル酸ＮＨＳエステルの合成
ｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−Ａｌａグルタル酸（２０５ｍｇ、０．２６８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍｌ）に溶解した溶液をＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ、６２ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）および１−［３−（ジメチアミノ（ｄｉｍｅｔｈｙａｍｉｎｏ））プロピル］−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ、１２８ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）で処理する。反応混合物をアルゴン中、室温で一晩撹拌する。反応混合物を水、次いで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過する。溶媒を減圧下で蒸発させることにより粗製残渣を得る。粗製残渣をＣ１８カラム（２０〜４０ミクロン）（５０ｇ）を使用して逆相クロマトグラフィーに付し、水（０．１％ＡｃＯＨ）中アセトニトリル（０．１％ＡｃＯＨ）でグラジエント溶出（１０〜９５％、１８分間）させることにより精製し、凍結乾燥させることによりｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−Ａｌａグルタル酸ＮＨＳエステル３３（１９０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、収率８２％）を白色固体として得る。ＭＳ ｍ／ｚ：８６２．０［ＭＨ＋］，８４４．６［Ｍ−１８］，８８４．０［Ｍ＋ Ｎａ］；1ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：０．７３（３Ｈ，ｓ），１．１６−１．２４（８Ｈ，ｍ），１．３５−１．４２（１Ｈ，ｍ），１．４５−１．５４（４Ｈ，ｍ），１．５８（３Ｈ，ｓ），１．８５−１．９１（１Ｈ，ｍ），２．０１−２．１２（２Ｈ，ｍ），２．２９−２．３６（１Ｈ，ｍ），２．４２−２．５７（３Ｈ，ｍ），２．６２（２Ｈ，ｔ），２．７８（３Ｈ，ｓ），２．９８（１Ｈ，ｄ），３．０５（１Ｈ，ｄ），３．１２（３Ｈ，ｓ），３．２１（１Ｈ，ｂｓ），３．２９（３Ｈ，ｓ），３．４３（１Ｈ，ｄ），３．５６（１Ｈ，ｄ），３．９２（３Ｈ，ｓ），４．２１（１Ｈ，ｔ），４．７１（１Ｈ，ｄｄ），５．２８−５．３４（１Ｈ，ｍ），５．５７−５．６３（１Ｈ，ｍ），６．１５（１Ｈ，ｓ），６．３３−６．３８（１Ｈ，ｍ），６．５８（１Ｈ，ｓ），６．６７（１Ｈ，ｄ），６．７５（１Ｈ，ｓ）．
Ｃ．Ｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−Ａｌａグルタル酸ＮＨＳエステルからのＭａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−ＡｌａグルタルＰＥＧ４酸（ｇｌｕｔａｒｉｃ ＰＥＧ４−ａｃｉｄ）の合成
ｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−Ａｌａグルタル酸ＮＨＳエステル（１９０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）およびアミノ−ＰＥＧ４−酸（１３３ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２５ｍｌ）および水（８ｍｌ）の混合物に溶解した溶液を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（６ｍｌ）で処理する。反応混合物をアルゴン中、室温で一晩撹拌し、減圧下で濃縮する。粗製残渣を、Ｃ１８カラム（２０〜４０ミクロン）（５０ｇ）を使用して逆相クロマトグラフィーに付し、水（０．１％ＡｃＯＨ）中アセトニトリル（０．１％ＡｃＯＨ）でグラジエント溶出（１０〜９５％、１８分間）させることにより精製し、凍結乾燥させることによりｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−ＡｌａグルタルＰＥＧ４酸（１７０ｍｇ、０．１６８ｍｍｏｌ、収率７６％）を白色固体として得る。ＭＳ ｍ／ｚ：１０１２．７［ＭＨ＋］，９９５．４［Ｍ−１８］，１０３４．２［Ｍ＋ Ｎａ］；1ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：０．７３（３Ｈ，ｓ），１．１３−１．２８（８Ｈ，ｍ），１．３２−１．４２（１Ｈ，ｍ），１．５３−１．６１（５Ｈ，ｍ），１．７８−１．８５（１Ｈ，ｍ），１．８９−１．９５（１Ｈ，ｍ），２．０８−２．１３（１Ｈ，ｍ），２．１５−２．２８（３Ｈ，ｍ），２．３９−２．４７（１Ｈ，ｍ），２．４９−２．５５（２Ｈ，ｍ），２．８２（３Ｈ，ｓ），２．９３（１Ｈ，ｄ），３．０５（１Ｈ，ｄ），３．１２（３Ｈ，ｓ），３．２９−３．３８（５Ｈ，ｍ），３．４２（１Ｈ，ｄ），３．５０−３．６１（１６Ｈ，ｍ），３．６６−３．７２（２Ｈ，ｍ），３．９５（３Ｈ，ｓ），４．２３（１Ｈ，ｔ），４．７１−４．７７（１Ｈ，ｍ），５．１３−５−１９（１Ｈ，ｂｓ），５．５７−５．６２（１Ｈ，ｍ），６．３２−６．３８（２Ｈ，ｍ），６．５１−６．５９（２Ｈ，ｍ），６．７５（１Ｈ，ｓ）．
Ｄ．ｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−ＡｌａグルタルＰＥＧ４−酸からのＭａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−ＡｌａグルタルＰＥＧ４−酸ＮＨＳエステルの合成
ｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−ＡｌａグルタルＰＥＧ４酸（１７０ｍｇ、０．１６８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍｌ）に溶解した溶液をＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ、３９ｍｇ、０．３３６ｍｍｏｌ）および１−［３−（ジメチアミノ（ｄｉｍｅｔｈｙａｍｉｎｏ））プロピル］−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ、８１ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）で処理する。反応混合物をアルゴン中、室温で一晩撹拌し、減圧下で濃縮する。粗製残渣をＣ１８カラム（２０〜４０ミクロン）（５０ｇ）を使用して逆相クロマトグラフィーに付し、水（０．１％ＡｃＯＨ）中アセトニトリル（０．１％ＡｃＯＨ）でグラジエント溶出（１０〜９５％、１８分間）させることにより精製し、凍結乾燥させることによりｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−ＡｌａグルタルＰＥＧ４−酸ＮＨＳエステル（１５０ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ、８０％）を白色固体として得る。ＭＳ ｍ／ｚ：１１０９．６［ＭＨ＋］，１０９２．５［Ｍ−１８］，１１３１．３［Ｍ＋ Ｎａ］；1ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：０．７４（３Ｈ，ｓ），１．１４−１．２７（８Ｈ，ｍ），１．３４−１．４２（１Ｈ，ｍ），１．４３−１．５２（４Ｈ，ｍ），１．５９（３Ｈ，ｓ），１．７７−１．８４（１Ｈ，ｍ），１．８８−１．９６（１Ｈ，ｍ），２．１０−２．１８（３Ｈ，ｍ），２．２１−２．２８（１Ｈ，ｍ），２．３７−２．４３（１Ｈ，ｍ），２．５３（１Ｈ，ｔ），２．８２−２．８８（４Ｈ，ｍ），２．９６（１Ｈ，ｄ），３．０５（１Ｈ，ｄ），３．１５（３Ｈ，ｓ），３．２９−３．３６（５Ｈ，ｍ），３．４２−３．４９（４Ｈ，ｍ），３．５２−３．６１（１６Ｈ，ｍ），３．７８（１Ｈ，ｔ），３．９２（３Ｈ，ｓ），４．２０（１Ｈ，ｔ），４．６９−４．７３（１Ｈ，ｍ），５．２８（１Ｈ，ｂｓ），５．５５−５．６３（１Ｈ，ｍ），６．１８（１Ｈ，ｓ），６．３２−６．４０（１Ｈ，ｍ），６．６０−６．６８（２Ｈ，ｍ），６．７５（１Ｈ，ｓ）．
Ｅ．Ｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−ＡｌａグルタルＰＥＧ４酸ＮＨＳエステルからのＭａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−ＡｌａグルタルＰＥＧ４−ＤＩＢＣＯ（Ｉ１）の合成
ｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−ＡｌａグルタルＰＥＧ４酸ＮＨＳエステル（１５０ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）および三環系アミン（５５ｍｇ、０．１７３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１２ｍｌ）および水（４ｍｌ）の混合物に溶解した溶液を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（３ｍｌ）で処理する。反応混合物をアルゴン中、室温で一晩撹拌し、減圧下で濃縮する。粗製残渣をＣ１８カラム（２０〜４０ミクロン）（５０ｇ）を使用して逆相クロマトグラフィーに付し、水（０．１％ＡｃＯＨ）中アセトニトリル（０．１％ＡｃＯＨ）でグラジエント溶出（１０〜９５％、１８分間）させることにより精製し、凍結乾燥させることにより、ｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−ＡｌａグルタルＰＥＧ４−ＤＩＢＣＯ（１０５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ、収率６０％）を白色固体として得る。ＭＳ ｍ／ｚ：１３１２．９［ＭＨ＋］，１２９５．４［Ｍ−１８］，１３３４．６［Ｍ＋Ｎａ］；1ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：０．８２（３Ｈ，ｓ），１．０１−１．０８（２Ｈ，ｍ），１．２３−１．３２（８Ｈ，ｍ），１．３９−１．５１（３Ｈ，ｍ），１．５８−１．６６（４Ｈ，ｍ），１．８８−１．９６（２Ｈ，ｍ），１．９８−２．０３（１Ｈ，ｍ），２．１９−２．２６（４Ｈ，ｍ），２．３０−２．３６（１Ｈ，ｍ），２．４２（２Ｈ，ｔ），２．４７−２．５２（１Ｈ，ｍ），２．５９−２．６５（１Ｈ，ｍ），２．８８（３Ｈ，ｓ），３．０２−３．１４（４Ｈ，ｍ），３．２１（３Ｈ，ｓ），３．３５−３．４３（５Ｈ，ｍ），３．４９−３．５２（３Ｈ，ｍ），３．５８−３．７０（１８Ｈ，ｍ），４．００（３Ｈ，ｓ），４．３１（１Ｈ，ｔ），４．７９−４．８２（１Ｈ，ｍ），５．１７（１Ｈ，ｄ），５．３３（１Ｈ，ｂｓ），５．６５−５．７０（１Ｈ，ｍ），６．１９（１Ｈ，ｄｄ），６．２６（１Ｈ，ｄ），６．３２（１Ｈ，ｄｄ），６．４１−６．４７（１Ｈ，ｍ），６．６８−６．７１（２Ｈ，ｍ），６．８４（１Ｈ，ｓ），７．３１−７．４４（７Ｈ，ｍ），７．７０−７．７２（１Ｈ，ｍ）．
Ｆ．６−アミノヘキサン酸からの６−（２，２，２−トリフルオロアセチルアミノ）ヘキサン酸の合成
トリフルオロ酢酸エチル（５．７ｍＬ、６．８ｇ、４８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５．４ｍＬ、３．９ｇ、３９ｍｍｏｌ）を、６−アミノヘキサン酸（５．００ｇ、３８．１ｍｍｏｌ）を無水メタノール（１９ｍＬ）中に懸濁させた懸濁液に添加する。反応混合物をアルゴン中、室温で１７時間撹拌する。次いでエーテル（１００ｍＬ）を加え、２ＭのＨＣｌ水溶液１００ｍＬで洗浄する。水層をエーテル（１００ｍＬ）で２回抽出する。有機層を合一し、飽和食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させる。これを濾過して濃縮し、真空乾燥させることにより生成物（８．６６ｇ、１００％、３８．１ｍｍｏｌ）をオフホワイト色の固体として得る。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：２２８［Ｍ+＋Ｈ+］；ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ：２２６［Ｍ-−Ｈ-］；1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：１．２１−１．２９（２Ｈ，ｍ），１．４１−１．５３（４Ｈ，ｍ），２．１６−２．２１（２Ｈ，ｔ），３．１２−３．１８（２Ｈ，ｑ），９．３９（１Ｈ，ｓ，ｂｒ），１１．９９（１Ｈ，ｓ）．
Ｇ．６−（２，２，２−トリフルオロアセチルアミノ）ヘキサン酸からの６−（２，２，２−トリフルオロ−アセチルアミノ）−ヘキサノイルクロリドの合成
Ｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−ＡｌａグルタルＰＥＧ４−ＤＩＢＣＯ（８．６６ｇ、３８．１ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（１９０ｍＬ）中に懸濁させた懸濁液を０℃に冷却する。塩化オキサリル（１６．１ｍＬ、２４．２ｇ、１９０ｍｍｏｌ）を６分間かけて滴下する。次いでＤＭＦ（８滴）を加える。反応混合物を０℃で１時間撹拌した後、室温で２．５時間撹拌する。次いでこれを濃縮し、真空乾燥させることにより生成物（９．３６ｇ、１００％、３８．１ｍｍｏｌ）を薄い琥珀色のシロップ状物として得る。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：１．３６−１．４６（２Ｈ，ｍ），１．５７−１．６７（２Ｈ，ｍ），１．７０−１．８０（２Ｈ，ｍ），２．８９−２．９４（２Ｈ，ｔ），３．３４−３．４１（２Ｈ，ｑ），６．４０（１Ｈ，ｂｒ）．
Ｈ．ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−オンからのジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−オンオキシムの合成
ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−オン（２５．０ｇ、１２１ｍｍｏｌ）およびヒドロキシルアミンＨＣｌ（１２．６ｇ，１８１ｍｍｏｌ）のピリジン（７０ｍＬ）溶液を１５．５時間還流する。反応混合物を室温まで放冷し、真空下で濃縮する。残渣を５％ＨＣｌ水溶液／氷（３００ｍＬ）および酢酸エチル（２００ｍＬ）で分液する。水層を酢酸エチル（１５０ｍＬ）で２回抽出する。有機層を合一して飽和食塩水（２５０ｍＬ）で洗浄する。無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して濃縮および乾燥させることにより、生成物（２６．８ｇ、１２１ｍｍｏｌ）を淡い黄色〜ベージュ色の固体として得る。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：２２２［Ｍ＋＋Ｈ＋］；ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ：２２０［Ｍ−−Ｈ−］；1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）６．９１−６．９２（２Ｈ，ｄ），７．３３−７．４３（６Ｈ，ｍ），７．５６−７．６１（１Ｈ，ｍ），７．６５−７．６８（１Ｈ，ｍ），８．５５（１Ｈ，ｓ）．
Ｉ．ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−オキシムから５，６−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン
水素化ジイソブチルアルミニウムのジクロロメタン溶液（１．０Ｍ、１９２ｍＬ）を水浴で冷却し、固体ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−オンオキシム（８．４８ｇ、３８．３ｍｍｏｌ）を、温度が１５℃〜２７℃に維持される速度で少量ずつ加える。水浴を取り除き、得られた溶液を室温で３日間撹拌する。溶液を水浴で冷却し、固体硫酸ナトリウム十水和物（２０．４ｇ、６３．３ｍｍｏｌ）を、温度が１２℃〜３０℃に維持される速度で少量ずつ加える。セライトを加え、混合物を室温で１時間撹拌する。無機物を濾過して分離し、酢酸エチルで十分に洗浄する。有機溶液を合一し、溶媒を真空下で蒸発させる。残渣をシリカゲルカラム（１５０ｇ）にかけ、ヘキサン中ジクロロメタン（２０％〜１００％）でグラジエント溶出させることにより生成物（５．０ｇ、６３％）を黄色固体として得る。ＭＳ ｍ／ｚ：２０８．４ ＭＨ+；1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：４．２９（１Ｈ，ｂｒ ｓ），４．５９（２Ｈ，ｓ），６．３９（１Ｈ，ｄ），６．５０（１Ｈ，ｄのｄ），６．５８（１Ｈ，ｄ），６．６１−６．６６（１Ｈ，ｍ），６．８９−６．９５（１Ｈ，ｍ），７．００（１Ｈ，ｄのｄ），７．１９−７．３２（４Ｈ，ｍ）．
Ｊ．５，６−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシンおよび６−（２，２，２−トリフルオロ−アセチルアミノ）−ヘキサノイルクロリドからのＮ−［６−（６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミド（２６）の合成
ピリジン（８．５ｍＬ、８．３ｇ、１１０ｍｍｏｌ）を、５，６−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン（７．２９ｇ、３５．２ｍｍｏｌ）の無水塩化メチレン（７２ｍＬ）溶液に加える。次いで塩化メチレン（２５ｍＬ）中６−（２，２，２−トリフルオロ−アセチルアミノ）−ヘキサノイルクロリド（１０．７ｇ、４５．６ｍｍｏｌ）を４分間かけて加える。反応混合物を室温で約２時間撹拌した後、塩化メチレン（１８０ｍＬ）で希釈し、水（３×１５０ｍＬ）で洗浄する。有機層を飽和食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮する。粗生成物をシリカゲルカートリッジ（Ｉｓｃｏ）（３３０ｇ）を用いて酢酸エチル（０〜５０％）／ヘキサンでフラッシュクロマトグラフィーに付す。濃縮および乾燥後、純粋な生成物（１４．０ｇ、９５．９％、３３．６ｍｍｏｌ）を非常に淡い琥珀色の透明なガム状物として得る。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：４１７［Ｍ+＋Ｈ+］，ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ：４１５［Ｍ-−Ｈ-］；1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ ０．９５−１．０３（２Ｈ，ｍ），１．２２−１．３７（４Ｈ，ｍ），１．６９−１．７９（１Ｈ，ｍ），１．８７−１．９７（１Ｈ，ｍ），３．００−３．０６（２Ｈ，ｑ），４．１４−４．１９（１Ｈ，ｄ），５．３４−５．３９（１Ｈ，ｄ），６．６１−６．６５（１Ｈ，ｄ），６．７４−６．７８（１Ｈ，ｄ），７．１５−７．１９（３Ｈ，ｍ），７．２７−７．３８（５Ｈ，ｍ），９．３１（１Ｈ，ｂｒ）．
Ｋ．Ｎ−［６−（６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミドからのＮ−［６−（１１，１２−ジブロモ−１１，１２−ジヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミドの合成
三臭化ピリジニウム（８．４８ｇ、２６．５ｍｍｏｌ）をＮ−［６−（６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミド（９．９５ｇ、２３．９ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（２００ｍＬ）溶液に加える。反応混合物をアルゴン中、室温で４．５時間撹拌した後、１）０．５ＭのＨＣｌ水溶液（２×１２０ｍＬ）、２）水（１２０ｍＬ）および３）飽和食塩水（１２０ｍＬ）で洗浄する。無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた後、濾過して濃縮し、粗生成物をシリカゲルカートリッジ（Ｉｓｃｏ）（３３０ｇ）を用いて酢酸エチル（０〜５０％）／ヘキサンでフラッシュクロマトグラフィーに付す。濃縮および乾燥後、生成物を塩化メチレン（１５０ｍＬ）に２回溶解し、濃縮する。真空乾燥させることにより生成物（１０．５ｇ、７６．１％、１８．２ｍｍｏｌ）を非常に淡いスレートグレー色の泡状物として得る。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：５７７［Ｍ+＋Ｈ+］；ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ：５７５［Ｍ-−Ｈ-］；1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：１．１３−１．２０（２Ｈ，ｍ），１．３５−１．５９（４Ｈ，ｍ），１．９５−２．２９（２Ｈ，ｍ），３．０７−３．１３（２Ｈ，ｑ），４．１７−５．０８（１Ｈ，ｍ），５．６９−５．８７（２Ｈ，ｍ），６．９７−７．３１（７Ｈ，ｍ），７．５５−７．６５（１Ｈ，ｍ），９．３３（１Ｈ，ｓ）．
Ｌ．Ｎ−［６−（１１，１２−ジブロモ−１１，１２−ジヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミドからのＮ−（６−トリフルオロアセトアミドヘキサノイル）−５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシンの合成
Ｎ−［６−（１１，１２−ジブロモ−１１，１２−ジヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミド（６．７６ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（３１ｍＬ）溶液を１Ｍのカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド／ＴＨＦ溶液（３５ｍＬ、３５ｍｍｏｌ）に加える。反応混合物をアルゴン中、室温で２時間撹拌する。水（約８．５ｍＬ）をゆっくりと加えることにより反応を停止し、酢酸エチル（約１８０ｍＬ）で希釈する。次いでこれを１％のＨＣｌ水溶液（２００ｍＬ）、水（２００ｍＬ）および食塩水（２００ｍＬ）で洗浄する。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮する。粗生成物をシリカゲルカートリッジ（Ｉｓｃｏ）（１２０ｇ）を用いて酢酸エチル（０〜１０％）／塩化メチレンでフラッシュクロマトグラフィーに付すことにより精製する。濃縮および乾燥後、生成物（３．０５ｇ、６２．８％、７．３６ｍｍｏｌ）をサンゴ色のガム状物／泡状物として得る。ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ：４１３［Ｍ-−Ｈ-］；1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ ０．９６−１．１５（２Ｈ，ｍ），１．２３−１．４９（４Ｈ，ｍ），１．８８−１．９８（１Ｈ，ｍ），２．０４−２．２６（１Ｈ，ｍ），３．０２−３．２７（２Ｈ，ｍ），３．６４−３．６９（１Ｈ，ｄ），５．１４−５．１８（１Ｈ，ｄ），６．５８（１Ｈ，ｂｒ），７．２４−７．４４（７Ｈ，ｍ），７．６８−７．７０（１Ｈ，ｄ）．
Ｍ．Ｎ−（６−トリフルオロアセトアミドヘキサノイル）−５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシンからのＮ−（６−アミノヘキサノイル）−５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシンの合成
炭酸カリウム（１．００ｇ、７．２４ｍｍｏｌ）の水（７．５ｍＬ）溶液をＮ−（６−トリフルオロアセトアミドヘキサノイル）−５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン（１．０４ｇ、２．５１ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液にゆっくりと加える。反応混合物を室温で４９時間撹拌する。これを濃縮してクロロホルム（４０ｍＬ）／飽和食塩水（４０ｍＬ）で分液する。水層をクロロホルム（４０ｍＬ）で抽出する。有機層を合一し、溶解を助けるために酢酸エチル（４０ｍＬ）を加える。無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた後、濾過して濃縮し、粗生成物をＣ１８カラム（２０〜４０ミクロン）（Ｉｓｃｏ）（２７５ｇ）を使用して２回注入を行うことにより逆相フラッシュクロマトグラフィーに付し、５〜９５％アセトニトリル（０．１％ＡｃＯＨ）／水（０．１％ＡｃＯＨ）で溶出させることにより精製する。凍結乾燥させることにより生成物（淡い黄色〜ベージュ色の泡状物：０．５７７ｇ、６０．７％、１．５２ｍｍｏｌ）を酢酸塩として得る。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：３１９［Ｍ+＋Ｈ+］．1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ ０．９８−１．０７（２Ｈ，ｍ），１．２７−１．４４（４Ｈ，ｍ），１．８５−１．９５（４Ｈ，ｍ），２．１４−２．２３（１Ｈ，ｍ），２．５４−２．５９（２Ｈ，ｔ），３．６２−３．６７（２Ｈ，ｄ），５．１３−５．１７（１Ｈ，ｄ），６．２０（３Ｈ，ｂｒ），７．２３−７．４２（７Ｈ，ｍ），７．６７−７．７０（１Ｈ，ｄ）．
実施例ＩＶ
Ｉ４の合成
Ａ．Ｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−Ａｌａグルタル酸ＮＨＳエステルおよびＤＩＢＣＯ−ジメチル−ＰＥＧ４−アミンからのＭａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−ＡｌａグルタルＮ−Ｍｅ−ＰＥＧ４−Ｎ−Ｍｅ−ＤＩＢＣＯ（Ｉ４）の合成
ｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−Ａｌａグルタル酸ＮＨＳエステル（１６０ｍｇ、０．１８６ｍｍｏｌ）およびＤＩＢＣＯ−ジメチル−ＰＥＧ４−アミン（２１０ｍｇ、０．３５４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（５ｍｌ）および水（１ｍｌ）の混合物に溶解した溶液を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（０．５ｍｌ）で処理する。反応混合物をアルゴン中、室温で一晩撹拌した後、減圧下で濃縮する。粗製残渣をＣ１８カラム（２０〜４０ミクロン）（５０ｇ）を用いて逆相クロマトグラフィーに付し、水（０．１％ＡｃＯＨ）中アセトニトリル（０．１％ＡｃＯＨ）でグラジエント溶出（１０〜９５％、１８分間）させることにより精製し、凍結乾燥させることによりｍａｙｔａｎ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−ＡｌａグルタルＮ−Ｍｅ−ＰＥＧ４−Ｎ−Ｍｅ−ＤＩＢＣＯ（Ｉ４）（１３５ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、収率５４％）を白色固体として得る。ＭＳｍ／ｚ：１３４０．９［ＭＨ＋］，１３２３．４［Ｍ−１８］，１３６２．６［Ｍ＋ Ｎａ］；1ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：０．８２（３Ｈ，ｓ），０．９９−１．０１（２Ｈ，ｍ），１．２６−１．３３（８Ｈ，ｍ），１．４２−１．４８（３Ｈ，ｍ），１．６０−１．６７（４Ｈ，ｍ），１．８８−１．９６（２Ｈ，ｍ），１．９８−２．０３（１Ｈ，ｍ），２．１１（３Ｈ，ｓ），２．１９−２．２１（２Ｈ，ｍ），２．３６−２．３８（２Ｈ，ｍ），２．４２−２．４４（１Ｈ，ｍ），２．５３−２．６４（５Ｈ，ｍ），２．８２−２．９０（６Ｈ，ｍ），３．００−３．１４（５Ｈ，ｍ），３．１９−３．２２（４Ｈ，ｍ），３．３８（３Ｈ，ｓ），３．４７−３．７０（１７Ｈ，ｍ），３．７８（２Ｈ，ｍ），４．００（３Ｈ，ｓ），４．３１（１Ｈ，ｔ），４．７８−４．８１（１Ｈ，ｍ），５．１９（１Ｈ，ｄ），５．４０（１Ｈ，ｂｓ），５．６７−５．７２（１Ｈ，ｍ），６．３５（１Ｈ，ｓ），６．４２−６．４８（１Ｈ，ｍ），６．７０−６．７６（２Ｈ，ｍ），６．８５（１Ｈ，ｓ），７．２９−７．４４（８Ｈ，ｍ），７．７２−７．７４（１Ｈ，ｍ）．
Ｂ．３−（２−｛２−［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸およびトリフルオロ酢酸エチルからの３−［２−（２−｛２−［２−（２，２，２−トリフルオロ−アセチルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオン酸の合成
トリフルオロ酢酸エチル（１．４ｍＬ、１．７ｇ、１２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．３ｍＬ、０．９４ｇ、９．３ｍｍｏｌ）を３−（２−｛２−［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸（２．４３ｇ、９．１６ｍｍｏｌ）のメタノール（８．０ｍＬ）溶液に加える。反応混合物をアルゴン中、室温で１７．５時間撹拌した後、濃縮する。次いで粗生成物をＣ１８ Ｉｓｃｏゴールドカラム（２７５ｇ）を用いて逆相フラッシュクロマトグラフィーにかけ、５〜９５％アセトニトリル／水（０．１％酢酸を含む）で精製する。凍結乾燥させることにより、生成物（１．７９ｇ、５４．１％、４．９５ｍｍｏｌ）を淡黄色のシロップ状物として得る。
ＭＳ ｍ／ｚ ＭＨ＋ ３６２；1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：２．４０−２．４５（２Ｈ，ｔ），３．３２−３．３６（２Ｈ，ｍ），３．４７−３．５１（１４Ｈ，ｍ），３．５６−３．６０（２Ｈ，ｍ），９．４７（１Ｈ，ｂｒ），１２．１５（１Ｈ，ｂｒ）．
Ｃ．３−［２−（２−｛２−［２−（２，２，２−トリフルオロ−アセチルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオン酸からの３−［２−（２−｛２−［２−（２，２，２−トリフルオロ−アセチルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオン酸メチルエステルの合成
３−［２−（２−｛２−［２−（２，２，２−トリフルオロ−アセチルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオン酸（０．５２０ｇ、１．４３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）およびメタノール（５ｍＬ）に溶解した溶液を２Ｍの（トリメチルシリル）ジアゾメタンをジエチルエーテル（１ｍＬ、２ｍｍｏｌ）溶液で処理し、室温で１時間撹拌する。２Ｍの（トリメチルシリル）ジアゾメタンのジエチルエーテル（１ｍＬ、２ｍｍｏｌ）溶液を追加し、溶液を室温で１日間撹拌する。溶媒を真空下で蒸発させる。生成物をシリカゲルカラム（４０ｇ）にかけて、ジクロロメタン中（１〜１０％）メタノールでグラジエント溶出させることにより最終生成物（０．５３６ｇ、１００％）を淡黄色油状物として得る。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：３７６．０［ＭＨ+］．1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：２．６０（２Ｈ，ｔ），３．５１−３．５６（２Ｈ，ｍ），３．６０−３．６４（１４Ｈ，ｍ），３．６６（３Ｈ，ｓ），３．７３（２Ｈ，ｔ）および７．８６（１Ｈ，ｂｒ ｓ）．
Ｄ．３−［２−（２−｛２−［２−（２，２，２−トリフルオロ−アセチルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオン酸メチルエステルからの３−｛２−［２−（２−｛２−［メチル−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−アミノ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオン酸メチルエステルの合成
３−［２−（２−｛２−［２−（２，２，２−トリフルオロ−アセチルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオン酸メチルエステル１７５（０．２９０ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）溶液を炭酸カリウム（０．３２０ｇ、２．３１ｍｍｏｌ）およびヨウ化メチル（０．２８７ｍＬ、４．６３ｍｍｏｌ）で処理し、得られた混合物を室温で１日間撹拌する。混合物を氷浴で冷却し、冷１Ｎ塩酸（１ｍＬ）で処理する。得られた溶液を逆相Ｃ１８カラム（２０〜４０ミクロン）（５０ｇ）にかけ、水（０．１％ＡｃＯＨ）中アセトニトリル（０．１％ＡｃＯＨ）でグラジエント溶出（５〜９５％）させ、凍結乾燥させることにより、生成物（０．２１７ｇ、７２％）を無色油状物（０．２９ｇ、６４％）として得る。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：３９０．０［ＭＨ＋］．1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：２．６０（２Ｈ，ｔ），３．２１（２Ｈ，ｑ），３．５８−３．７０（１７Ｈ，ｍ），３．６８（３Ｈ，ｓ）および３．７５（２Ｈ，ｔ）に重畳．
Ｅ．３−｛２−［２−（２−｛２−［メチル−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−アミノ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオン酸メチルエステルからの３−（２−｛２−［２−（２−メチルアミノ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸ナトリウム塩の合成
３−｛２−［２−（２−｛２−［メチル−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−アミノ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオン酸メチルエステル（０．４３３ｇ、１．１ｍｍｏｌ）のメタノール（１ｍＬ）溶液を１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液（２．９ｍＬ、２．９ｍｍｏｌ）で処理し、６０℃で２時間加熱する。この溶液を室温に冷却し、溶媒を真空下で除去する。この物質をアセトニトリルに溶解し、溶媒を真空下で除去する（２回繰り返す）。得られた残渣を真空乾燥させ、さらなる精製を行うことなく次のステップに使用する。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：２８０．４［ＭＨ+］．1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：１．８９（２Ｈ，ｔ），１．９４−１．９９（６Ｈ，ｍ），２．９９−３．１４（１０Ｈ，ｍ），２．９５（６Ｈ，ｄ）および８．９０（１Ｈ，ｂｒ ｓ）．
Ｆ．３−（２−｛２−［２−（２−メチルアミノ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸ナトリウム塩からの３−｛２−［２−（２−｛２−［メチル−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−アミノ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオン酸の合成
無水トリフルオロ酢酸（６ｍＬ）を３−（２−｛２−［２−（２−メチルアミノ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸ナトリウム塩に加え、この混合物を室温で３時間撹拌する。溶媒を真空下で蒸発させる。残渣をアセトニトリル：水（１：１）に溶解し、逆相Ｃ１８カラム（２０〜４０ミクロン）（１５０ｇ）にかけ、水（０．１％ＡｃＯＨ）中アセトニトリル（０．１％ＡｃＯＨ）でグラジエント溶出（５〜９５％）させ、凍結乾燥させることにより、生成物（０．３８３ｇ、９２％、２段階）を無色油状物として得る。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：３７６．０［ＭＨ+］．ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ：３７４．０［Ｍ−Ｈ］-．1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：２．５８−２．７１（２Ｈ，ｍ），３．１３および３．２２（３Ｈ，それぞれ ｓ），３．６３（１６Ｈ，ｍ）および３．７６（２Ｈ，ｔ）．
Ｇ．１−（５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−メチルアミノ−ヘキサン−１−オン酢酸塩および３−｛２−［２−（２−｛２−［メチル−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−アミノ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオン酸からのＮ−［６−（５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−Ｎ−メチル−３−｛２−［２−（２−｛２−［メチル−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−アミノ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオンアミドの合成
１−（５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−メチルアミノ−ヘキサン−１−オン酢酸塩（０．２８３ｇ、０．７２１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させる。溶媒を真空下で蒸発させることにより、１−（５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−メチルアミノ−ヘキサン−１−オンの遊離塩基（０．２２ｇ、９２％）を得る。これを次のステップに使用する。
３−｛２−［２−（２−｛２−［メチル−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−アミノ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオン酸（０．２４８ｇ、０．６６０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）溶液をジフェニルホスフィン酸ペンタフルオロフェニル（０．３０５ｇ、０．７９４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンで処理する。得られた溶液を１−（５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−メチルアミノ−ヘキサン−１−オンの遊離塩基（０．２２ｇ、０．６６２ｍｍｏｌ）に加え、室温で２０時間撹拌する。水（１ｍＬ）を加えて溶液を逆相Ｃ１８カラム（２０〜４０ミクロン）（１５０ｇ）にかけ、水（０．１％ＡｃＯＨ）中アセトニトリル（０．１％ＡｃＯＨ）でグラジエント溶出（３０〜９５％）させ、凍結乾燥させることにより、生成物（０．３２２ｇ、７１％）を無色油状物として得る。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：６９０．０［ＭＨ+］および７１２．０［ＭＮａ+］．1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：０．９２−１．０３（２Ｈ，ｍ），１．２６−１．３４（２Ｈ，ｍ），１．３５−１．４６（２Ｈ，ｍ），１．８７−１．９７（１Ｈ，ｍ），２．１５−２．２１（１Ｈ，ｍ），２．５０−２．５７（２Ｈ，ｍ），２．７９および２．８９（合計で３Ｈ，それぞれｓ），３．０４−３．０７（１Ｈ，ｍ），３．１０および３．２１（合計で３Ｈ，それぞれｓ），３．１４−３．１９（１Ｈ，ｍ），３．６１−３．６９（１７Ｈ，ｍ），３．７３−３．７７（２Ｈ，ｍ），５．１６（１Ｈ，ｄのｄ），７．２２−７．４３（７Ｈ，ｍ）および７．７０（１Ｈ，ｄ）．
Ｈ．Ｎ−［６−（５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−Ｎ−メチル−３−｛２−［２−（２−｛２−［メチル−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−アミノ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオンアミドからのＮ−［６−（５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−Ｎ−メチル−３−（２−｛２−［２−（２−メチルアミノ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオンアミドの合成
Ｎ−［６−（５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−Ｎ−メチル−３−｛２−［２−（２−｛２−［メチル−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−アミノ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオンアミド（０．３２２ｇ、０．４６７ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液を炭酸カリウム（０．３２３ｇ、２．３３ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を１日間撹拌する。追加の炭酸カリウム（０．３２３ｇ、２．３３ｍｍｏｌ）を加えてさらに１日間撹拌を継続する。無機物を濾過して除去し、溶媒を真空下で蒸発させる。残渣をアセトニトリル／水（１／１）に溶解し、逆相Ｃ１８カラム（２０〜４０ミクロン）（１５０ｇ）にかけ、水（０．１％ＡｃＯＨ）中アセトニトリル（０．１％ＡｃＯＨ）でグラジエント溶出（５〜９５％）させ、凍結乾燥させることにより、Ｎ−［６−（５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−Ｎ−メチル−３−｛２−［２−（２−｛２−［メチル−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−アミノ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオンアミド（０．２１８ｇ、７１％）および若干の不純物（０．０４８ｇ、１６％）を得る。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：５９４．０［ＭＨ+］．1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：０．８５−０．９０（２Ｈ，ｍ），１．１１−１．２９（４Ｈ，ｍ），１．７５−１．８６（１Ｈ，ｍ），２．１２−２．１７（１Ｈ，ｍ），２．２７（３Ｈ，ｍ），２．４０（１Ｈ，ｔ），２．４６（１Ｈ，ｔ），２．５９（２Ｈ，ｔ），２．６６および２．８０（合計で３Ｈ，それぞれｓ），２．９８−３．０９（２Ｈ，ｍ），３．４２−３．６３（１７Ｈ，ｍ），５．０４（１Ｈ，ｄ），７．３０−７．４９（６Ｈ，ｍ），７．５７（１Ｈ，ｄ）および７．６３（１Ｈ，ｄ）．
Ｉ．Ｎ−メチルカプロラクタムからの６−メチルアミノヘキサン酸塩酸塩の合成
Ｎ−メチルカプロラクタム（１．１２ｇ、８．８１ｍｍｏｌ）を濃ＨＣｌ水溶液（５．３ｍＬ）および水（６．７ｍＬ）に溶解した溶液を１９．５時間還流する。反応混合物を室温に冷却し、水（２０ｍＬ）を加える。次いでこれを濃縮する。水（１０ｍＬ）を加え、混合物を再び濃縮する。次いで次の操作：アセトン（５ｍＬ）を加え、混合物を濃縮することを２回繰り返す。真空乾燥することにより生成物（１．５７ｇ、９８．１％、８．６４ｍｍｏｌ）をクリーム色の半固体として得る（４５−１４９）。
ＭＳ ｍ／ｚ ＭＨ＋ １４６；1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：１．２４−１．３４（２Ｈ，ｍ），１．４４−１．６２（４Ｈ，ｍ），２．１８−２．２３（２Ｈ，ｔ），２．７７−２．８６（２Ｈ，ｍ），８．７０（２Ｈ，ｂｒ），１２．０５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ）．（４５−１４９−１ ＮＭＲ）
Ｊ．６−メチルアミノヘキサン酸塩酸塩からの６−［メチル−（２，２，２−トリフルオロアセチル）−アミノ］−ヘキサン酸の合成
６−メチルアミノヘキサン酸塩酸塩（５．３８ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸エチル（４．４ｍＬ、５．３ｇ、３７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（８．３ｍＬ、６．０ｇ、６０ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物をアルゴン中、室温で１９．５時間撹拌する。２ＭのＨＣｌ水溶液（８０ｍｌ）を加え、混合物をエーテル（３×６０ｍＬ）で抽出する。有機層を合一し、次いで飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮し、真空乾燥させることにより生成物（６．８６ｇ、９６．１％、２８．４ｍｍｏｌ）を透明な淡黄色シロップ状物として得る（５３−１５）。
ＭＳ ｍ／ｚ ＭＨ＋ ２４２；1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：１．１６−１．２８（２Ｈ，ｍ），１．４５−１．６０（４Ｈ，ｍ），２．１７−２．２４（２Ｈ，ｍ），２．９４（１Ｈ，ｓ），３．０６−３．０７（２Ｈ，ｑ），３．３２−３．３９（２Ｈ，ｍ）．（４５−１５０−１ ＮＭＲ）
Ｋ．６−［メチル−（２，２，２−トリフルオロアセチル）−アミノ］−ヘキサン酸からの６−［メチル−（２，２，２−トリフルオロアセチル）−アミノ］−ヘキサノイルクロリドの合成
６−［メチル−（２，２，２−トリフルオロアセチル）−アミノ］−ヘキサン酸（６．８４ｇ、２８．４ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１４０ｍＬ）溶液をアルゴン中、０℃に冷却する。塩化オキサリル（１２ｍＬ、１８ｇ、１４２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた後、ＤＭＦ（６滴）を加える。混合物を０℃で１時間および室温で１．５時間撹拌する。次いでこれを濃縮および真空乾燥させることにより生成物（６．５４ｇ、８８．９％、２５．２ｍｍｏｌ）を淡い琥珀色の油状物として得る（５３−１６）。
1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：１．３５−１．４３（２Ｈ，ｍ），１．５７−１．８１（４Ｈ，ｍ），２．８９−２．９４（２Ｈ，ｍ），３．０２（１Ｈ，ｓ），３．１１−３．１３（２Ｈ，ｑ），３．３７−３．４６（２Ｈ，ｍ）．（ＮＭＲの場合には４５−１５２−１）．
Ｌ．ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−オンからのジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−オンオキシムの合成
ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−オン（２５．０ｇ、１２１ｍｍｏｌ）およびヒドロキシルアミンＨＣｌ（１２．６ｇ、１８１ｍｍｏｌ）をピリジン（７０ｍＬ）に溶解した溶液を１５．５時間還流する。反応混合物を室温に放冷し、減圧下で濃縮する。残渣を５％ＨＣｌ水溶液／氷（３００ｍＬ）および酢酸エチル（２００ｍＬ）で分液する。水層を酢酸エチル（１５０ｍＬ）で２回抽出する。有機層を合一して飽和食塩水（２５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させる。溶媒を真空下で蒸発させることにより、生成物（２６．８ｇ、１００％）を淡い黄色〜ベージュ色の固体として得る。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：２２２［ＭＨ+］；ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ：２２０［Ｍ−Ｈ-］；1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：６．９１−６．９２（２Ｈ，ｄ），７．３３−７．４３（６Ｈ，ｍ），７．５６−７．６１（１Ｈ，ｍ），７．６５−７．６８（１Ｈ，ｍ），８．５５（１Ｈ，ｓ）．
Ｍ．ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−オンオキシムからの５，６−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシンの合成
水素化ジイソブチルアルミニウムのジクロロメタン溶液（１．０Ｍ、１９２ｍＬ）を水浴で冷却し、固体ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−オンオキシム（８．４８ｇ、３８．３ｍｍｏｌ）を、温度が１５〜２７℃に維持される速度で少量ずつ加える。水浴を取り除き、得られた溶液を３日間撹拌する。溶液を水浴で冷却し、固体硫酸ナトリウム十水和物（２０．４ｇ、６３．３ｍｍｏｌ）を温度が１２〜３０℃に維持される速度で少量ずつ加える。セライトを添加し、混合物を室温で１時間撹拌する。無機物を濾過して分離し、酢酸エチルで十分に洗浄する。有機溶液を合一して溶媒を真空下で蒸発させる。残渣をシリカゲルカラム（１５０ｇ）にかけ、ヘキサン中ジクロロメタンでグラジエント溶出（２０〜１００％）させることにより生成物５．０ｇ（６３％）を黄色固体として得る。ＭＳ ｍ／ｚ：２０８．４［ＭＨ+］；1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：４．２９（１Ｈ，ｂｒ ｓ），４．５９（２Ｈ，ｓ），６．３９（１Ｈ，ｄ），６．５０（１Ｈ，ｄのｄ），６．５８（１Ｈ，ｄ），６．６１−６．６６（１Ｈ，ｍ），６．８９−６．９５（１Ｈ，ｍ），７．００（１Ｈ，ｄのｄ），７．１９−７．３２（４Ｈ，ｍ）．
Ｎ．５，６−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン（２４）および６−［メチル−（２，２，２−トリフルオロアセチル）−アミノ］−ヘキサノイルクロリドからのＮ−［６−（６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−メチル−アセトアミドの合成
塩化メチレン（８ｍＬ）中ピリジン（３．６ｍＬ、３．５ｇ、４５ｍｍｏｌ）および６−［メチル−（２，２，２−トリフルオロアセチル）−アミノ］−ヘキサノイルクロリド（４．６４ｇ、１７．９ｍｍｏｌ）を、５，６−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン（３．１１ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）からのＮ−［６−（６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−メチル−アセトアミド（２６ａ）の塩化メチレン（４０ｍＬ）溶液に加える。反応混合物をアルゴン中、室温で２．５時間撹拌する。次いでこれを塩化メチレン（１５０ｍＬ）で希釈し、水（１５０ｍＬ）で洗浄する。水層を塩化メチレン（１５０ｍＬ）で抽出する。有機層を合一し、飽和食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮する。粗生成物をシリカゲルカートリッジ（Ｉｓｃｏ）（２２０ｇ）を用いて酢酸エチル（０〜５０％）／ヘキサンでフラッシュクロマトグラフィーにかける。濃縮および真空乾燥させることにより生成物（５．６４ｇ、８７．４％、１３．１ｍｍｏｌ）を濃厚な黄色シロップ状物として得る（５３−３６）。
ＭＳ ｍ／ｚ ＭＨ＋ ４３１；1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：０．９０−１．００（２Ｈ，ｍ），１．２６−１．４０（４Ｈ，ｍ），１．７０−１．８２（１Ｈ，ｍ），１．８８−１．９８（１Ｈ，ｍ），２．８６（１Ｈ，ｓ），２．９９−３．０１（２Ｈ，ｑ），３．１８−３．２６（２Ｈ，ｍ），４．１２−４．１８（１Ｈ，ｄｄ），５．３２−５．３９（１Ｈ，ｄｄ），６．６１−６．６６（１Ｈ，ｄｄ），６．７３−６．７９（１Ｈ，ｄｄ），７．１３−７．２０（３Ｈ，ｍ），７．２５−７．３８（５Ｈ，ｍ）．（ＮＭＲの場合には５３−６−１）．
Ｏ．Ｎ−［６−（６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−メチル−アセトアミドからのＮ−［６−（１１，１２−ジブロモ−１１，１２−ジヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−メチル−アセトアミドの合成
三臭化ピリジニウム（１．４７ｇ、４．６０ｍｍｏｌ）をＮ−［６−（６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−メチル−アセトアミド（１．８０ｇ、４．１８ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（７．８ｍＬ）溶液に加える。反応混合物を約３時間撹拌する。塩化メチレン（１００ｍＬ）で希釈し、５％ＨＣｌ水溶液（２×５５ｍＬ）で洗浄する。次いで有機層を飽和食塩水（５５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して濃縮する。粗生成物をシリカカートリッジ（Ｉｓｃｏ Ｇｏｌｄ）（１２０ｇ）を使用し酢酸エチル（０〜５０％）／ヘキサンを用いてフラッシュクロマトグラフィーに付す。濃縮および真空乾燥することにより、生成物（１．９３ｇ、７８．１％、３．２７ｍｍｏｌ）を白色泡状物として得る（５３−２１）。
ＭＳ ｍ／ｚ ＭＨ＋ ５９１；1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：１．１０−１．１９（２Ｈ，ｍ），１．３８−１．６３（４Ｈ，ｍ），２．０２−２．３３（２Ｈ，ｍ），２．９０（１Ｈ，ｓ），３．０２−３．０３（２Ｈ，ｄ），３．２８−３．３４（２Ｈ，ｍ），４．１８−５．０９（１Ｈ，ｍ），５．６９−５．７５（１Ｈ，ｍ），５．８１−５．８７（１Ｈ，ｔ），６．９７−７．３１（７Ｈ，ｍ），７．５５−７．６５（１Ｈ，ｍ）．（４５−１６２−１ ＮＭＲ）
Ｐ．Ｎ−［６−（１１，１２−ジブロモ−１１，１２−ジヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−メチル−アセトアミドからのＮ−［６−（５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−メチル−アセトアミドの合成
カリウムｔ−ブトキシドのＴＨＦ溶液（１．０Ｍ、５．３ｍＬ、５．３ｍｍｏｌ）をＮ−［６−（１１，１２−ジブロモ−１１，１２−ジヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソ−ヘキシル］−２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−メチル−アセトアミド（１．２ｇ、２．０３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液に滴下し、氷浴で冷却し、１時間撹拌する。溶液を酢酸エチルで希釈し、氷浴で冷却して１ＮのＨＣｌを激しく撹拌しながらゆっくりと注ぐ。有機層を分離して水層を酢酸エチルで抽出する。有機相を合一し、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させる。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣をシリカゲルカラム（４０ｇ）にかけ、ヘキサン中酢酸エチルでグラジエント溶出（２０〜８０％）させることにより生成物（０．６８１ｇ、８０％）を琥珀色の油状物として得る。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：４２９．２［ＭＨ+］．1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：０．９３−１．０５（２Ｈ，ｍ），１．３１−１．４８（４Ｈ，ｍ），１．８７−１．９９（１Ｈ，ｍ），２．１５−２．２４（１Ｈ，ｍ），２．９４（３Ｈ，ｄ），３．１４−３．２７（２Ｈ，ｍ），３．６６（１Ｈ，ｄのｄ），５．１６（１Ｈ，ｄのｄ），７．２４−７．４３１（７Ｈ，ｍ）および７．７０（１Ｈ，ｄ）．
Ｑ．Ｎ−［６−（５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン）−６−オキソ−ヘキシル］−２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−メチル−アセトアミド（２８ａ）からの１−（５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−イル）−６−メチルアミノ−ヘキサン−１−オン酢酸塩（２９ａ）の合成
Ｎ−［６−（５，６−ジヒドロ−１１，１２−ジデヒドロベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン）−６−オキソ−ヘキシル］−２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−メチル−アセトアミド（０．６８１ｇ、１．６１ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液を炭酸カリウム（０．６７ｇ、４．８５ｍｍｏｌ）および水（１ｍＬ）で処理し、室温で１８時間撹拌する。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣をジクロロメタンに溶解させ、水で洗浄する。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣を逆相Ｃ１８カラム（２０〜４０ミクロン）（１５０ｇ）にかけ、水（０．１％ＡｃＯＨ）中アセトニトリル（０．１％ＡｃＯＨ）でグラジエント溶出（５〜９５％）させる。溶媒を除去し、凍結乾燥させることにより生成物（０．５３３ｇ、８４％）である酢酸塩を粘着性褐色固体として得る。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：３３３．２［ＭＨ+］．1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：０．８８−０．９６（２Ｈ，ｍ），１．１１−１．２８（４Ｈ，ｍ），１．７５−１．８５（１Ｈ，ｍ），１．８０（３Ｈ，ｓ），２．０７−２．１８（１Ｈ，ｍ），２．２２（３Ｈ，ｓ），２．３１（２Ｈ，ｔ），３．６１（１Ｈ，ｄ），５．０４（１Ｈ，ｄ）および７．２８−７．６４（８Ｈ，ｍ）に重畳．
本明細書において引用した全ての刊行物および特許を、本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。ここに記載した組成および方法の、本開示の範囲および趣旨を逸脱しない修正形態および変形形態は当業者に既に明らかである。特定の実施形態に関連して本発明を説明してきたが、特許請求される本発明は特定の実施形態に限定されないことを理解すべきである。実際、本発明を実施するためのここに記載した組成および態様の修正形態は、本開示に照らすことにより既に当業者に明らかであるが、特許請求した主題の範囲に包含されることが意図されている。

Claims (20)

  1. 式Ｉ
    Figure 2018502067
     （式中、
    Ａは、環が炭素環式または複素環式である歪み環状アルキンまたは歪み環状アルケンであり；
    Ｄは、低分子医薬であり；
    各Ｅは、独立に、−ＣＯ−、−ＣＲ1Ｒ2−、−ＮＲ3−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ2−、−Ｏ−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−、−ＣＲ3＝Ｎ−Ｏ−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−ＣＯ−、−Ｎ＝Ｎ−ＣＯ−、アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式、−Ｏ−（ＣＲ1Ｒ2）a−、アリール、−（ＣＲ1Ｒ2）a−アリール、ヘテロアリール、−（ＣＲ1Ｒ2）a−ヘテロアリール、−（ＣＲ1Ｒ2）a−Ｃ３〜Ｃ８炭素環式、複素環式、−（ＣＲ1Ｒ2）a−複素環式、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−（ＣＨ2）b、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）−、アミノ酸およびペプチドからなる群から選択され；
    Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ3）2、−Ｎ（Ｒ3）3 +、Ｃ１〜Ｃ８アルキルハライド、カルボキシラート、スルファート、スルファマート、スルホナート、−ＳＯ2Ｒ3、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＳＲ3、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ3）2、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＣＯ2Ｒ3、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＮＯ2、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ポリエチレンオキシ、ホスホナート、ホスファート、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式およびＣ１〜Ｃ２０複素環式からなる群から選択されるか；またはＲ1およびＲ2は、一緒になって、カルボニル（＝Ｏ）もしくは３〜７個の炭素原子のスピロ炭素環を形成し；および
    Ｒ3は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ６〜Ｃ２０ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式およびＣ１〜Ｃ２０複素環式からなる群から選択され；
    アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、炭素環式および複素環式は、独立に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ3）2、−Ｎ（Ｒ3）3 +、Ｃ１〜Ｃ８アルキルハライド、カルボキシラート、スルファート、スルファマート、スルホナート、Ｃ１〜Ｃ８アルキルスルホナート、Ｃ１〜Ｃ８アルキルアミノ、４−ジアルキルアミノピリジニウム、Ｃ１〜Ｃ８アルキルヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ８アルキルチオール、−ＳＯ2Ｒ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＳＲ3、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ3）2、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＣＯ2Ｒ3、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＮＯ2、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ８トリフルオロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ１２炭素環、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ６〜Ｃ２０ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式、Ｃ２〜Ｃ２０複素環式、ポリエチレンオキシ、ホスホナートおよびホスファートからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
    ｍは、１〜１００の整数であり；および
    ａおよびｂは、それぞれ１〜１００の整数である）の単離された化合物。
  2. 各Ｅは、独立に、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）ＮＲ3−、−（ＣＨ2）aＮＲ3Ｃ（Ｏ）−、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2）b−、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）b−、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）b（ＣＨ2）c−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）b−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）b、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2）b−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−（ＣＨ2）b、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−、−ＣＲ3＝Ｎ−Ｏ−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−ＣＯ−、−Ｎ＝Ｎ−ＣＯ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ2−、ジペプチド、トリペプチド；
    Figure 2018502067
     （式中、Ｇは、アルキル、アリール、炭素環式および複素環式、ならびに
    Figure 2018502067
     （式中、Ｈ1、Ｈ2およびＨ3は、それぞれ独立に、ＮまたはＣＲ1から選択される）からなる群から選択される）からなる群から選択される、請求項１に記載の式Ｉの単離された化合物。
  3. 各Ｅは、独立に、
    Figure 2018502067
    Figure 2018502067
     （式中、
    Ｊは、アミノ酸またはペプチドであり；
    ｄ、ｅ、ｇ、ｉ、ｊおよびｋは、それぞれ独立に、１〜３０の整数であり；
    ｈは、０〜３０の整数であり；
    各Ｒ4は、独立に、Ｈ、アルキル、−Ｎ（Ｒ3）2、−ＳＲ3およびＣ１〜Ｃ８アルコキシ、アリールからなる群から選択され；および
    Ｒ5は、Ｈ、−Ｎ（Ｒ3）2、−ＳＲ3、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、アリールおよびＮＯ2からなる群から選択される）からなる群から選択される、請求項１に記載の式Ｉの単離された化合物。
  4. Figure 2018502067
    Figure 2018502067
    Figure 2018502067
    Figure 2018502067
    Figure 2018502067
     から基本的になる群から選択される、請求項１に記載の式Ｉの単離された化合物。
  5. 式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’
    Figure 2018502067
     （式中、
    ＣＢは、細胞結合物質であり；
    Ｍは、非天然型アミノ酸であり；
    Ａ’は、炭素環式または複素環式であり；
    Ｄは、低分子医薬であり；
    各Ｅは、独立に、−ＣＯ−、−ＣＲ1Ｒ2−、−ＮＲ3−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ2−、−Ｏ−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−、−ＣＲ3＝Ｎ−Ｏ−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−ＣＯ−、−Ｎ＝Ｎ−ＣＯ−、アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式、−Ｏ−（ＣＲ1Ｒ2）a−、アリール、−（ＣＲ1Ｒ2）a−アリール、ヘテロアリール、−（ＣＲ1Ｒ2）a−ヘテロアリール、−（ＣＲ1Ｒ2）a−Ｃ３〜Ｃ８炭素環式、複素環式、−（ＣＲ1Ｒ2）a−複素環式、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−（ＣＨ2）b、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）−、アミノ酸およびペプチドからなる群から選択され；
    Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ3）2、−Ｎ（Ｒ3）3 +、Ｃ１〜Ｃ８アルキルハライド、カルボキシラート、スルファート、スルファマート、スルホナート、−ＳＯ2Ｒ3、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＳＲ3、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ3）2、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＣＯ2Ｒ3、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＮＯ2、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ポリエチレンオキシ、ホスホナート、ホスファート、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式およびＣ１〜Ｃ２０複素環式からなる群から選択されるか；またはＲ1およびＲ2は、一緒になって、カルボニル（＝Ｏ）もしくは３〜７個の炭素原子のスピロ炭素環を形成し；および
    Ｒ3は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ６〜Ｃ２０ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式およびＣ１〜Ｃ２０複素環式からなる群から選択され；
    アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、炭素環式および複素環式は、独立に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ3）2、−Ｎ（Ｒ3）3 +、Ｃ１〜Ｃ８アルキルハライド、カルボキシラート、スルファート、スルファマート、スルホナート、Ｃ１〜Ｃ８アルキルスルホナート、Ｃ１〜Ｃ８アルキルアミノ、４−ジアルキルアミノピリジニウム、Ｃ１〜Ｃ８アルキルヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ８アルキルチオール、−ＳＯ2Ｒ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＳＲ3、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ3）2、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＣＯ2Ｒ3、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＮＯ2、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ８トリフルオロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ１２炭素環、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ６〜Ｃ２０ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式、Ｃ２〜Ｃ２０複素環式、ポリエチレンオキシ、ホスホナートおよびホスファートからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
    ｍは、１〜１００の整数であり；および
    ａおよびｂは、それぞれ１〜１００の整数である）の単離された複合体。
  6. 各Ｅは、独立に、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）ＮＲ3−、−（ＣＨ2）aＮＲ3Ｃ（Ｏ）−、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2）b−、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）b−、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）b（ＣＨ2）c−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）b−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）b、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）aＣ（Ｏ）ＮＲ3（ＣＨ2）b−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−（ＣＨ2）b、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−、−ＣＲ3＝Ｎ−Ｏ−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−ＣＯ−、−Ｎ＝Ｎ−ＣＯ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ2−、ジペプチド、トリペプチド；
    Figure 2018502067
     （式中、Ｇは、アルキル、アリール、炭素環式および複素環式、ならびに
    Figure 2018502067
     （式中、Ｈ1、Ｈ2およびＨ3は、それぞれ独立に、ＮまたはＣＲ1から選択される）からなる群から選択される）からなる群から選択される、請求項５に記載の単離された複合体。
  7. 各Ｅは、独立に、
    Figure 2018502067
    Figure 2018502067
     （式中、
    Ｊは、アミノ酸またはペプチドであり；
    ｄ、ｅ、ｇ、ｉ、ｊおよびｋは、それぞれ独立に、１〜３０の整数であり；
    ｈは、０〜３０の整数であり；
    各Ｒ4は、独立に、Ｈ、アルキル、−Ｎ（Ｒ3）2、−ＳＲ3およびＣ１〜Ｃ８アルコキシ、アリールからなる群から選択され；および
    Ｒ5は、Ｈ、−Ｎ（Ｒ3）2、−ＳＲ3、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、アリールおよびＮＯ2からなる群から選択される）からなる群から選択される、請求項５に記載の単離された複合体。
  8. Ｍは、構造
    Figure 2018502067
     （式中、ｐおよびｑは、それぞれ０〜１０の整数であり；
    Ｒ6は、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチドまたは結合であり；
    Ｒ7は、ＯＨ、アミノ酸、ポリペプチドまたは結合であり；
    Ｖは、アルキル、アリール、炭素環、複素環であるかまたは存在せず；および
    Ｗは、Ｏ、Ｎ、Ｓであるかまたは存在しない）を表す、請求項５に記載の単離された複合体。
  9. Ｍは、
    Figure 2018502067
     から基本的になる群から選択される、請求項８に記載の単離された複合体。
  10. 式Ｉの化合物を式ＩＩの化合物と反応させるプロセスにより製造される、式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’
    Figure 2018502067
     （式中、式Ｉを参照して、
    Ａは、環が炭素環式または複素環式である歪み環状アルキンまたは歪み環状アルケンであり；
    Ｄは、低分子医薬であり；
    各Ｅは、独立に、−ＣＯ−、−ＣＲ1Ｒ2−、−ＮＲ3−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ2−、−Ｏ−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−、−ＣＲ3＝Ｎ−Ｏ−、−ＣＲ3＝Ｎ−ＮＲ3−ＣＯ−、−Ｎ＝Ｎ−ＣＯ−、アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、−Ｏ−（ＣＲ1Ｒ2）a−、アリール、−（ＣＲ1Ｒ2）a−アリール、ヘテロアリール、−（ＣＲ1Ｒ2）a−ヘテロアリール、−（ＣＲ1Ｒ2）a−Ｃ３〜Ｃ８炭素環式、複素環式、−（ＣＲ1Ｒ2）a−複素環式、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）a−（ＣＨ2）b、−（ＣＨ2）aＣ（Ｏ）−、アミノ酸およびペプチドからなる群から選択され；
    Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ3）2、−Ｎ（Ｒ3）3 +、Ｃ１〜Ｃ８アルキルハライド、カルボキシラート、スルファート、スルファマート、スルホナート、−ＳＯ2Ｒ3、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＳＲ3、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ3）2、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＣＯ2Ｒ3、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＮＯ2、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、ポリエチレンオキシ、ホスホナート、ホスファート、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式およびＣ１〜Ｃ２０複素環式からなる群から選択されるか；またはＲ1およびＲ2は、一緒になって、カルボニル（＝Ｏ）を形成するか、または３〜７個の炭素原子のスピロ炭素環を形成し；および
    Ｒ3は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ６〜Ｃ２０ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式およびＣ１〜Ｃ２０複素環式からなる群から選択され；
    アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、炭素環式および複素環式は、独立に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ3）2、−Ｎ（Ｒ3）3 +、Ｃ１〜Ｃ８アルキルハライド、カルボキシラート、スルファート、スルファマート、スルホナート、Ｃ１〜Ｃ８アルキルスルホナート、Ｃ１〜Ｃ８アルキルアミノ、４−ジアルキルアミノピリジニウム、Ｃ１〜Ｃ８アルキルヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ８アルキルチオール、−ＳＯ2Ｒ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＳＲ3、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ3）2、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、−ＣＯ2Ｒ3、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＮＯ2、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ８トリフルオロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ１２炭素環、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ６〜Ｃ２０ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８炭素環式、Ｃ２〜Ｃ２０複素環式、ポリエチレンオキシ、ホスホナートおよびホスファートからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
    ｍは、１〜１００の整数であり；
    ａおよびｂは、それぞれ１〜１００の整数であり；および
    式ＩＩを参照して、
    ＣＢは、細胞結合物質であり；Ｍは、非天然型アミノ酸であり；Ｔは、アジド基またはテトラジン基であり；および
    式ＩＩＩおよび式ＩＩＩ’を参照して、
    Ａ’は、炭素環式または複素環式である）の単離された複合体。
  11. 式Ｉを参照して、各Ｅは、独立に、
    Figure 2018502067
    Figure 2018502067
     （式中、Ｊは、アミノ酸またはペプチドであり；
    ｄ、ｅ、ｇ、ｉ、ｊおよびｋは、それぞれ独立に、１〜３０の整数であり；
    ｈは、０〜３０の整数であり；
    各Ｒ4は、独立に、Ｈ、アルキル、−Ｎ（Ｒ3）2、−ＳＲ3およびＣ１〜Ｃ８アルコキシ、アリールからなる群から選択され；および
    Ｒ5は、Ｈ、−Ｎ（Ｒ3）2、−ＳＲ3、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、アリールおよびＮＯ2からなる群から選択される）からなる群から選択される、請求項１０に記載のプロセスにより製造される、式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’の単離された複合体。
  12. 式Ｉの各化合物は、独立に、
    Figure 2018502067
    Figure 2018502067
    Figure 2018502067
    Figure 2018502067
    Figure 2018502067
     からなる群から選択される、請求項１０に記載のプロセスにより製造される、式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ’の単離された複合体。
  13. Ｄは、メイタンシノイドである、請求項１に記載の単離された化合物。
  14. 前記メイタンシノイドは、構造
    Figure 2018502067
     のものである、請求項１３に記載の化合物。
  15. Ｄは、メイタンシノイドである、請求項５に記載の単離された複合体。
  16. 前記メイタンシノイドは、構造
    Figure 2018502067
     のものである、請求項１５に記載の単離された複合体。
  17. 有効量の請求項５に記載の複合体と、少なくとも１種の医薬上許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
  18. 有効量の請求項１５に記載の複合体と、少なくとも１種の医薬上許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
  19. 哺乳動物の障害を治療する方法であって、有効量の請求項５に記載の複合体を投与することを含む、方法。
  20. 哺乳動物の障害を治療する方法であって、有効量の請求項１５に記載の複合体を投与することを含む、方法。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7128121B2 (ja) 2016-06-28 2022-08-30 ヴェンタナ メディカル システムズ， インク． Ｉｈｃ及びｉｓｈアッセイにおけるシグナル増幅のためのクリックケミストリーの応用
JP2020507584A (ja) 2017-02-10 2020-03-12 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ ユニヴァーシティ オブ イリノイＴｈｅ Ｂｏａｒｄ Ｏｆ Ｔｒｕｓｔｅｅｓ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｉｌｌｉｎｏｉｓ 癌選択的標識および標的化のためのトリガー活性化可能な糖コンジュゲート
CN107080751A (zh) * 2017-04-27 2017-08-22 皖西学院 一种治疗增生性骨关节病的西药组合物及其应用
WO2019118314A2 (en) * 2017-12-13 2019-06-20 Merck Sharp & Dohme Corp. Scintillation proximity assay system comprising mutant dehalogenase
WO2020245229A1 (en) * 2019-06-03 2020-12-10 Synaffix B.V. Acetal-based cleavable linkers
MX2023001466A (es) 2020-08-03 2023-03-03 Bicycletx Ltd Enlazadores de base peptidica.

Family Cites Families (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3896111A (en) 1973-02-20 1975-07-22 Research Corp Ansa macrolides
US4151042A (en) 1977-03-31 1979-04-24 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for producing maytansinol and its derivatives
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2076465C (en) 1992-03-25 2002-11-26 Ravi V. J. Chari Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of cc-1065
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
CA2331789C (en) 1998-07-13 2013-09-10 Board Of Regents, The University Of Texas System Cancer treatment methods using therapeutic conjugates that bind to aminophospholipids
US7303749B1 (en) 1999-10-01 2007-12-04 Immunogen Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
EP1229934B1 (en) 1999-10-01 2014-03-05 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
DE60032633T2 (de) 1999-11-24 2007-10-04 Immunogen Inc., Cambridge Zytotoxische mittel, die taxane enthalten und ihre therapeutische anwendung
US7097840B2 (en) 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
EA007388B1 (ru) 2001-01-29 2006-10-27 Идек Фармасьютикалз Корпорейшн Модифицированные антитела и способы применения
DK1456360T3 (en) 2001-04-19 2015-08-31 Scripps Research Inst Methods and Composition for Preparation of Orthogonal TRNA-Aminoacyl-TRNA Synthetase Pairs
CN101172158A (zh) 2001-05-11 2008-05-07 得克萨斯州立大学董事会 抗cd26单克隆抗体作为对与表达cd26的细胞相关疾病的治疗
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
US6756397B2 (en) 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
MXPA05001390A (es) 2002-08-02 2005-07-29 Immunogen Inc Agentes citotoxicos que contienen taxanos potentes novedosos y su uso terapeutico.
JP2006500364A (ja) 2002-08-16 2006-01-05 イムノージェン インコーポレーテッド 高い反応性と溶解度を有する架橋剤および小分子薬物の標的化送達用コンジュゲートの調製におけるそれらの使用
SI1539948T1 (sl) 2002-08-19 2010-02-26 Univ Leland Stanford Junior Izboljšani postopki sinteze proteinov in vitro
DE60327369D1 (de) 2002-10-16 2009-06-04 Scripps Research Inst Stellenspezifischer einbau von ketoaminosäuren in proteine
WO2004094593A2 (en) 2003-04-17 2004-11-04 The Scripps Research Institute Expanding the eukaryotic genetic code
WO2004110498A2 (en) 2003-05-14 2004-12-23 Immunogen, Inc. Drug conjugate composition
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
EP2322569B1 (en) 2003-10-09 2020-08-26 Ambrx, Inc. Polymer derivatives for the selective modification of proteins
KR101192496B1 (ko) 2003-11-06 2012-10-18 시애틀 지네틱스, 인크. 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물
JP5064037B2 (ja) 2004-02-23 2012-10-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド 複素環式自壊的リンカーおよび結合体
JP2008503217A (ja) 2004-06-18 2008-02-07 アンブレツクス・インコーポレイテツド 新規抗原結合ポリペプチド及びそれらの使用
AU2005314392B2 (en) 2004-12-09 2011-04-14 Centocor, Inc. Anti-integrin immunoconjugates, methods and uses
US7638491B2 (en) 2004-12-22 2009-12-29 Ambrx, Inc. Therapies using non-natural amino acids and polypeptides
AU2007325952B8 (en) 2006-06-29 2013-06-27 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Cell-free synthesis of proteins containing unnatural amino acids
AU2009243010B2 (en) 2008-04-30 2015-02-05 Immunogen, Inc. Cross-linkers and their uses
HUE043645T2 (hu) 2009-06-03 2019-08-28 Immunogen Inc Konjugációs módszerek
US9156854B2 (en) 2011-04-18 2015-10-13 Immunogen, Inc. Maytansinoid derivatives with sulfoxide linker
US9738724B2 (en) 2012-06-08 2017-08-22 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
WO2014004639A1 (en) * 2012-06-26 2014-01-03 Sutro Biopharma, Inc. Modified fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use
WO2014036492A1 (en) 2012-08-31 2014-03-06 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising an azido group
EP3912642B1 (en) * 2012-10-23 2023-04-12 Synaffix B.V. Modified antibody, antibody-conjugate and process for the preparation thereof
US9999680B2 (en) * 2013-02-28 2018-06-19 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and maytansinoids as cytotoxic agents

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