JP2018139533A - Plant disease control material using dicyma pulvinata - Google Patents

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JP2018139533A
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dicyma
pulvinata
leaf mold
plant disease
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祐一郎 飯田
Yuichiro Iida
祐一郎 飯田
健太郎 池田
Kentaro Ikeda
健太郎 池田
宏 酒井
Hiroshi Sakai
宏 酒井
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National Agriculture and Food Research Organization
Gunma Prefecture
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National Agriculture and Food Research Organization
Gunma Prefecture
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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a plant disease control material comprising novel microbes that has an excellent effect of controlling tomato leaf mold disease.SOLUTION: A novel Dicyma pulvinata strain 414-3 which is suitable as a plant disease control material excellent for controlling tomato leaf mold disease and a plant disease control method using same are provided.SELECTED DRAWING: Figure 1

Description

本発明は、新規なディシーマ・プルビナータに属する菌株、それを含有する植物病害防除資材および植物病害防除資材を使用する植物病害の防除方法に関する。   The present invention relates to a strain belonging to a novel Decima purbinata, a plant disease control material containing the strain, and a plant disease control method using the plant disease control material.

植物病害防除を目的として販売される農薬は、農薬取締法により規定されており、有効な病害防除能を有する微生物は微生物農薬として、登録され販売されている。
微生物農薬として、登録・販売されているものとして、非病原性エルビニア・カロトボーラ、バチルス・ズブチリス、シュードモナス・フルオレッセンスなどの細菌類や、タラロマイセス・フラバス、トリコデルマ・アトロビリデなどの糸状菌類が挙げられ、これらは野菜、果樹、イネなどを防除対象として、灰色かび病、うどんこ病、炭疽病、軟腐病、イネ種子伝染性病害などの病害防除を目的として使用されている。
Pesticides sold for the purpose of plant disease control are regulated by the Agricultural Chemicals Control Law, and microorganisms having effective disease control ability are registered and sold as microbial pesticides.
Examples of microbial pesticides that have been registered and sold include bacteria such as non-pathogenic Erbinia carotobola, Bacillus subtilis, Pseudomonas fluorescens, and filamentous fungi such as Talalomyces flavus and Trichoderma atrobide. Is used for controlling diseases such as gray mold, powdery mildew, anthrax, soft rot, and rice seed infectious diseases, targeting vegetables, fruit trees and rice.

一方、野菜の中でもトマトは、病害虫による被害の多い作物であることが知られている。トマトの病害として、疫病、葉かび病、灰色かび病、うどんこ病、輪紋病等が知られているが、特に、葉かび病は重要病害の1つであり、世界的に問題となっている。
トマト葉かび病は、葉のみに発生する。初めに、葉の表面に淡黄色の不鮮明な病斑が形成され、裏面に灰黄色〜緑褐色のビロード状の菌叢が密生する。病勢が進むにつれて菌叢の色は褐色〜灰紫色に濃さを増していくとともに、病斑は拡大し、やがて枯死する。発病が激しいと、ほとんどの葉が侵されて多数の病斑を生じ、下位葉から枯れ上がるため、着果不良や果実の肥大不足、早期着色を引き起こし、収穫量が激減する。病原菌は空気伝染性の糸状菌であり、施設栽培等の多湿条件下で多発し、日本では全国的に発生が見られる病害である。
On the other hand, among vegetables, tomato is known to be a crop that is often damaged by pests. As diseases of tomato, plague, leaf mold, gray mold, powdery mildew, ring rot, etc. are known. In particular, leaf mold is one of the important diseases and has become a global problem. ing.
Tomato leaf mold occurs only on leaves. At first, pale yellow and unclear lesions are formed on the surface of the leaf, and a velvety flora of grayish yellow to greenish brown is densely grown on the back surface. As the disease progresses, the color of the flora increases from brown to grayish purple, the lesions expand and eventually die. When the disease is severe, most leaves are affected, causing many lesions and withering from the lower leaves, resulting in poor fruiting, insufficient fruit enlargement, and early coloring, resulting in a drastic decrease in yield. The pathogenic fungus is an airborne fungus that frequently occurs under humid conditions such as institutional cultivation, and is a disease that occurs nationwide in Japan.

微生物農薬は、一般的に環境負荷が少ない、耐性菌の出現リスクがない、使用成分数にカウントされないなどの利点により、減農薬栽培の場面で普及している。また、耐性菌が発生した化学農薬の代替防除方法としても理想的である。
しかしながら、トマト葉かび病を対象として農薬登録されている微生物農薬は非常に少なく、バチルス剤を除けば、特許文献1、2等に報告されているタラロマイセス・フラバス(Talaromyces flavus)のみである。また、微生物農薬は、予防効果、治療効果、さらに病害防除効果の持続性において、未だ満足できる性能を有するものがないという問題もある。
Microbial pesticides are widely used in reduced pesticide cultivation due to advantages such as generally low environmental burden, no risk of appearance of resistant bacteria, and not counted in the number of components used. It is also ideal as an alternative control method for chemical pesticides that have developed resistant bacteria.
However, there are very few microbial pesticides registered for pesticides for tomato leaf mold, and only the Talaromyces flavus reported in Patent Documents 1 and 2, etc., except for the Bacillus agent. In addition, there is a problem that microbial pesticides still have no satisfactory performance in terms of preventive effects, therapeutic effects, and sustainability of disease control effects.

国際公開第2002/035934号International Publication No. 2002/035934 特開2015−093850号公報Japanese Patent Laid-Open No. 2015-093850

トマト葉かび病対策の一環として、病原菌に対する抵抗性遺伝子を持つ品種が市販されている。しかしながら、これら抵抗性品種の抵抗性を打破する、レースと呼ばれる寄生性が分化した系統が現在12種類も出現している。多様化したこれらのレースによって、国内で市販されている抵抗性品種は全て打破され、化学農薬に対する耐性菌の出現も報告される中、生産現場では環境負荷の少ない有効な防除方法が求められている。
そこで、本発明は、トマト葉かび病に対して優れた防除効果を有する、新規な微生物を含有する植物病害防除資材および、この植物病害防除資材を使用する植物病害の防除方法を提供することを課題としている。
As part of the countermeasure against tomato leaf mold, varieties having resistance genes against pathogenic bacteria are commercially available. However, 12 types of parasitically differentiated lines called races have emerged that overcome the resistance of these resistant varieties. With these diversified races, all resistant varieties marketed in Japan have been destroyed, and the emergence of resistant bacteria to chemical pesticides has been reported, and effective control methods with less environmental impact are required at production sites. Yes.
Therefore, the present invention provides a plant disease control material containing a novel microorganism having an excellent control effect against tomato leaf mold, and a plant disease control method using this plant disease control material. It is an issue.

本発明者は上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、トマト葉かび病に対する優れた植物病害防除資材として、新規のディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株を見出し、上記課題を解決するに至ったものである。   As a result of intensive studies to solve the above-mentioned problems, the present inventor has found a novel Dicyma pulvinata 414-3 strain as an excellent plant disease control material against tomato leaf mold disease. It has come to be solved.

本発明は、具体的には次の事項を要旨とする。
1.ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株(受託番号:NITE P−02413)。
2.ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株を含有する植物病害防除資材。
3.植物病害が植物病原性糸状菌に起因する病害であることを特徴とする、2.記載の植物病害防除資材。
4.植物病害が葉から感染することを特徴とする、2.または3.に記載の植物病害防除資材。
5.植物病害がトマト葉かび病であることを特徴とする、2.〜4.いずれかに記載の植物病害防除資材。
6.2.〜5.いずれかに記載の植物病害防除資材を使用する植物病害防除方法。
7.2.〜5.いずれかに記載の植物病害防除資材を、植物に施用することを特徴とする、6.に記載の植物病害防除方法。
The gist of the present invention is specifically as follows.
1. Dicyma pulvinata 414-3 strain (Accession number: NITE P-02413).
2. Plant disease control material containing Dicyma pulvinata 414-3 strain.
3. 1. Plant diseases are diseases caused by phytopathogenic fungi, The plant disease control material as described.
4). 1. Plant diseases are transmitted from leaves. Or 3. Plant disease control material as described in 1.
5. 1. the plant disease is tomato leaf mold ~ 4. The plant disease control material in any one.
6.2. ~ 5. A plant disease control method using the plant disease control material according to any one of the above.
7.2. ~ 5. 5. A plant disease control material according to any one of the above is applied to a plant. A method for controlling plant diseases as described in 1. above.

本発明のディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株は、トマト葉かび病菌に寄生する菌寄生性を示すことが確認され、これによりトマト葉かび病に対して優れた病害防除活性を有する。また、室内におけるポット試験および温室内の圃場試験においても、トマト葉かび病に対して高い病害防除効果を発揮することが確認された。
さらに、ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株は、国内で発生しているトマト葉かび病菌の多様なレース全てに対して寄生するため、 いずれのレースに対しても、有効な防除効果を得ることができる。
本発明のディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株は、高湿度条件下において高い菌寄生性を示すことから、トマト葉かび病が発生しやすい栽培現場において効果的に使用できるほか、発病したトマトに適用することができ、さらに、二次感染を防ぐこともできる。
ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株は、高い分生子(胞子)形成能を有しており、トマト葉かび病に対して有効な防除効果を示す濃度を安価に得られるため、微生物農薬として製造する際にメリットがある。
The Dicyma pulvinata 414-3 strain of the present invention has been confirmed to exhibit fungal infestation parasitic on tomato leaf mold, and thus has excellent disease control activity against tomato leaf mold. In addition, it was confirmed in the pot test in the room and the field test in the greenhouse that a high disease control effect against tomato leaf mold was exhibited.
In addition, the Dicyma pulvinata 414-3 strain is parasitic on all the diverse races of tomato leaf mold that occur in Japan, so it has an effective control effect on any race. Can be obtained.
The Dicyma pulvinata 414-3 strain of the present invention exhibits high fungal parasitism under high humidity conditions, so that it can be used effectively in cultivation sites where tomato leaf mold disease is likely to occur, and has become ill. It can be applied to tomatoes and can also prevent secondary infections.
The Dicyma pulvinata 414-3 strain has a high conidia (spore) forming ability and can be obtained at a low concentration that exhibits an effective control effect against tomato leaf mold. There is merit in manufacturing as.

ITS領域の塩基配列を基にした分子系統樹を示す図である。It is a figure which shows the molecular phylogenetic tree based on the base sequence of an ITS area | region. ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株のITS領域の塩基配列である。It is the nucleotide sequence of the ITS region of Dicyma pulvinata 414-3 strain. 実施例2、手法1によるディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株の寄生性を示す電子顕微鏡写真である。It is an electron micrograph which shows the parasitic nature of Dicyma pulvinata (Dicyma pulvinata) 414-3 stock | strain by Example 2, the method 1. FIG. 実施例2、手法2によるディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株の寄生性を示す光学顕微鏡写真と蛍光顕微鏡写真である。It is the optical micrograph and fluorescence micrograph which show the parasitic nature of the Dicyma pulvinata 414-3 stock | strain by Example 2, the method 2. FIG. 実施例3のディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株の胞子形成能確認試験結果を表すグラフである。なお、上記「ITS」は「Internal transcribed spacer」の略で、「ITSの塩基配列」とは、細菌における16s rDNA配列と同様に、糸状菌において分子系統学的な解析に使用される塩基配列を意味する。It is a graph showing the spore formation capability confirmation test result of the Dicyma pulvinata 414-3 strain | stump | stock of Example 3. “ITS” is an abbreviation of “Internal transcribed spacer”, and “ITS base sequence” refers to the base sequence used for molecular phylogenetic analysis in filamentous fungi, like the 16s rDNA sequence in bacteria. means.

本発明は、トマト葉かび病に対して優れた病害防除効果を有する、ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)に属する菌株に関する。
また本発明は、前記菌株を含有している植物病害防除資材、この植物病害防除資材を使用する植物病害防除方法に関する。
以下、本発明について詳細に説明する。
(新規な菌株)
本発明における新規のディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)に属する菌株は、トマト葉かび病に対して優れた病害防除効果を有するものである。
このディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株は、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センターに寄託されており、その受託番号は、NITE P-02413である。
The present invention relates to a strain belonging to Dicyma pulvinata, which has an excellent disease control effect against tomato leaf mold.
The present invention also relates to a plant disease control material containing the strain and a plant disease control method using the plant disease control material.
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
(New strain)
The novel strain belonging to Dicyma pulvinata in the present invention has an excellent disease control effect against tomato leaf mold.
This Dicyma pulvinata 414-3 strain has been deposited with the Patent Microorganism Depositary Center for Product Evaluation Technology, an independent administrative agency, and the deposit number is NITE P-02413.

ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株の菌学的性質として、「植物病害防除に適した性質」を挙げることができ、具体的には、トマト葉かび病に対して優れた病害防除活性を有するものである。この優れた病害防除活性は、トマト葉かび病菌に対する高い菌寄生性により発揮されるものである。特に、国内で発生しているトマト葉かび病菌の多様なレース全てに対して寄生することが、後述する試験により確認されている。
本発明におけるディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株は、トマト葉かび病が発生した栽培施設内、具体的には、トマト葉かび病の拡散抑制現象がみられた栽培施設内において、トマト葉かび病の菌叢を覆う糸状菌を、素寒天培地に塗布し、単一の分生子(胞子)を複数回に渡って分離培養した後、菌株として単離し、病害抑制能や形態的性質、分子系統学的特性などを調べることで、選抜したものである。また、ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)は、トマト葉かび病菌に対する菌寄生菌として、トマト葉かび病の自然発病葉から稀に分離することができる。
分離したディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)菌株の中から、トマト葉かび病菌に対する寄生能が高く、トマト葉かび病に対する高い防除効果を示す菌株の選抜は、例えば、ポット試験等によって、当業者であれば容易に行うことができる。
本発明のディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株は、高いトマト葉かび病防除効果を有するが、植物体に対しては病原性を示さない菌寄生菌である。
Examples of the bacteriological properties of Dicyma pulvinata 414-3 include "property suitable for controlling plant diseases". Specifically, it has excellent disease control activity against tomato leaf mold. It is what has. This excellent disease control activity is exhibited by the high fungal parasitic property against tomato leaf mold. In particular, it has been confirmed by the test described later that it is parasitic on all the various races of tomato leaf mold occurring in Japan.
In the present invention, the Dicyma pulvinata 414-3 strain is a tomato in a cultivation facility where tomato leaf mold disease has occurred, specifically, in a cultivation facility in which the diffusion suppression phenomenon of tomato leaf mold disease is observed. Filamentous fungi that cover the fungal flora of leaf mold are applied to elementary agar medium, and single conidia (spores) are separated and cultured multiple times, then isolated as a strain, and are capable of controlling disease and morphological properties. They were selected by examining molecular phylogenetic characteristics. Further, Dicyma pulvinata can be rarely isolated from the naturally occurring leaf of tomato leaf mold as a fungal parasitic fungus against tomato leaf mold.
A person skilled in the art can select a strain having a high parasitic ability against tomato leaf mold and exhibiting a high control effect against tomato leaf mold by, for example, pot test, among the isolated strains of Dicyma pulvinata. This can be done easily.
The Dicyma pulvinata 414-3 strain of the present invention is a fungal parasite that has a high tomato leaf mold control effect, but does not show pathogenicity to plants.

ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株の培養方法は、特に限定されず、ディシーマ・プルビナータに属する微生物に一般的に適用されている方法によって培養することができる。
培地としては、例えば、ショ糖加用ジャガイモ煎汁寒天培地(PSA培地)、ブドウ糖加用ジャガイモ煎汁寒天培地(PDA培地)、オートミール寒天培地など糸状菌用一般培地を使用することができる。培養温度は20〜25℃とするのが好ましい。
The culture method of the Dicyma pulvinata 414-3 strain is not particularly limited, and can be cultured by a method generally applied to microorganisms belonging to the Decima purvinata.
As the medium, for example, a general medium for filamentous fungi such as potato squeeze agar medium (PSA medium) with sucrose, potato scent agar medium (PDA medium) with glucose, or oatmeal agar medium can be used. The culture temperature is preferably 20 to 25 ° C.

(植物病害防除資材)
本発明の植物病害防除資材は、このディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株を含有するものであり、その植物病害防除資材について説明する。
植物病害防除資材は、ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株を、製剤化して使用することができる。製剤化の形態としては、ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株を凍結乾燥状態にして粉末状の形態、賦形剤等と混ぜて固形にした形態、カプセルに充填する形態、液体アンプルの形態、さらに、通常の微生物農薬と同様の製剤型、例えば、水和剤、フロアブル剤、乳剤、粉剤、粒剤、培土混合剤等とすることもできる。また、通常の微生物農薬と同様に、製剤化のための製剤助剤を使用してもよい。このような製剤助剤としては、例えば、担体、補助剤、界面活性剤、分散剤などを挙げることができる。
(Plant disease control materials)
The plant disease control material of the present invention contains the Dicyma pulvinata 414-3 strain, and the plant disease control material will be described.
As the plant disease control material, Dicyma pulvinata 414-3 strain can be formulated and used. Formulation forms include lyophilized Dicyma pulvinata 414-3 strain in powder form, solidified with excipients, filled into capsules, liquid ampules Further, it can be in the form of a pharmaceutical preparation similar to that of a normal microbial pesticide, for example, a wettable powder, a flowable agent, an emulsion, a powder, a granule, a soil mixture or the like. Moreover, you may use the formulation adjuvant for formulation like a normal microbial pesticide. Examples of such formulation aids include carriers, adjuvants, surfactants, and dispersants.

担体としては、通常微生物農薬に用いられている無機質あるいは有機質の素材を主材として用いることが可能であり、具体的には、固体担体として、赤玉土、焼成赤玉土、鹿沼土、黒ぼく土、酸性白土、タルク類、粘土、カオリンクレー、パイロフィライトクレー、ベントナイト、モンモリロナイト、珪藻土、合成含水酸化ケイ素、バーミキュライト、パーライト、ゼオライト、アタパルジャイト、大谷石、アンスラ石、石炭灰、石灰、食塩、炭酸塩、硫酸塩、硝酸塩、尿素などの無機質素材、籾殻、フスマ、小麦粉、トウモロコシ穂軸、落花生殻、ピートモス、パルプ、藁、バガス、木粉、米粕、粕粉、油粕、デンプン、魚粕、骨粉、乾燥畜糞、カニがら、エビがら、オキアミ微粉末、木炭、くん炭、バーク炭、籾殻くん炭、草木炭、活性炭、灰、貝化石、ソルビトール、ラクトース、マルチトース、グルコサミン、オリゴ糖類などの有機質素材を用いることができる。液体担体としては、水、植物油、動物油、鉱物油、合成水溶性高分子等を用いることができる。これらの成分は、1種類を単独で、あるいは2種以上の混合物として用いることが可能である。   As the carrier, inorganic or organic materials that are usually used for microbial pesticides can be used as the main material. Specifically, as the solid carrier, red jade earth, calcined red jade earth, Kanuma earth, black meso earth , Acid clay, talc, clay, kaolin clay, pyrophyllite clay, bentonite, montmorillonite, diatomaceous earth, synthetic hydrous silicon oxide, vermiculite, perlite, zeolite, attapulgite, Otani stone, anthracite, coal ash, lime, salt, carbonate Inorganic materials such as salt, sulfate, nitrate, urea, rice husk, bran, wheat flour, corn cobs, peanut husk, peat moss, pulp, straw, bagasse, wood flour, rice bran, rice bran powder, oil cake, starch, fish cake, Bone meal, dried animal dung, crab, shrimp, krill fine powder, charcoal, kun charcoal, bark charcoal, rice husk kun charcoal, grass charcoal, active , Can be used ash, fossil shells, sorbitol, lactose, maltitose, glucosamine, the organic materials such as oligosaccharides. As the liquid carrier, water, vegetable oil, animal oil, mineral oil, synthetic water-soluble polymer and the like can be used. These components can be used alone or as a mixture of two or more.

さらに、本発明の植物病害防除資材は、補助剤として、カゼイン、ゼラチン、アラビアガム、アルギン酸、セルロース類、カルボキシメチルセルロース、キサンタンガム、キチン類、キトサン類等の天然多糖類、ポリビニルアルコール類、ポリアクリル酸類、ベントナイト等を増粘、固着、分散等を目的として、必要に応じて含有させることができる。 また、エチレングリコール、プロピレングリコール等の二価アルコール等を凍結防止の目的として、必要に応じて含有させることができる。さらに、アニオン型、カチオン型、両性型等の界面活性剤を分散安定、凝集防止、乳化等を目的として必要に応じて含有させることができる。
本発明の植物病害防除資材は、施用する際に、殺菌剤、殺虫剤、殺線虫剤、殺ダニ剤、除草剤、植物生長調節剤、肥料、及び土壌改良資材等の少なくとも1種を混合施用あるいは混合せず交互使用、または同時施用することも可能である。
Furthermore, the plant disease control material of the present invention includes, as an adjuvant, natural polysaccharides such as casein, gelatin, gum arabic, alginic acid, celluloses, carboxymethylcellulose, xanthan gum, chitins, chitosans, polyvinyl alcohols, polyacrylic acids, etc. Bentonite and the like can be added as necessary for the purpose of thickening, fixing, dispersing and the like. In addition, dihydric alcohols such as ethylene glycol and propylene glycol can be included as necessary for the purpose of preventing freezing. Furthermore, anionic, cationic and amphoteric surfactants can be included as needed for the purpose of dispersion stability, aggregation prevention, emulsification and the like.
The plant disease control material of the present invention is mixed with at least one of fungicides, insecticides, nematicides, acaricides, herbicides, plant growth regulators, fertilizers, soil improvement materials and the like when applied. Alternate application or simultaneous application without application or mixing is also possible.

本発明の植物病害防除資材における、ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株の濃度は特に限定されないが、分生子(胞子)濃度として0.01〜10×10個/mlとするのが好ましく、0.5〜1.0×10個/mlとすることがより好ましい。
本発明の植物病害防除資材の散布量は、植物の病害を防除できる範囲内であれば特に限定されないが、圃場1m当り、通常、10〜1010cfu、好ましくは、10〜10cfuを散布する。
The concentration of Dicyma pulvinata 414-3 strain in the plant disease control material of the present invention is not particularly limited, but the conidia (spore) concentration is 0.01 to 10 × 10 7 cells / ml. Preferably, it is more preferably 0.5 to 1.0 × 10 7 pieces / ml.
The application amount of the plant disease control material of the present invention is not particularly limited as long as it is within the range in which plant diseases can be controlled, but usually 10 5 to 10 10 cfu, preferably 10 6 to 10 8 per 1 m 2 of the field. Spread cfu.

本発明における植物病害は、本発明のディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株が、防除効果を発揮する植物病害であれば特に制限はないが、病原菌が植物に感染することにより引き起こされる植物病害が好ましい。その中でも、病原菌が、茎、葉、花、果実等の植物の地上部に感染することにより引き起こされる植物の病害が好ましく、特に、病原菌が植物の葉に感染することにより引き起こされる植物の病害がより好ましい。
そのような植物の病害として、具体的には、クラドスポリウム フルバム(Cladosporium fulvum)により引き起こされるトマト葉かび病、ボトリチス シネレア(Botrytis cinerea)により引き起こされるトマト、ナス、ピーマン、イチゴ、キュウリ、レタス、インゲン等の灰色かび病、アルタナリア ブラシッシコーラ(Alternaria brassicicola)により引き起こされるキャベツ黒すす病、フィトフトラ インフェスタンス(Phytophthora infestans)により引き起こされるトマト疫病、サーコスポリディウム ペルソナツム(Cercosporidium personatum)により引き起こされるラッカセイ黒渋病、フザリウム オキシスポラム(Fusarium oxysporum)により引き起こされるトマト萎ちょう病、スファエロテカ フリジネア(Sphaerotheca fuliginea)により引き起こされるキュウリ、メロン等のうどんこ病、レベイルラ・タウリカ(Leveillula taurica)により引き起こされるトウガラシ、ピーマン等のうどんこ病、エリシフェ シコラセアラム(Erysiphe cichoracearum)により引き起こされるトマト、ナス等のうどんこ病、シュードペロノスポラ キュベンシス(Pseudoperonospora cubensis)により引き起こされるキュウリべと病、ピシウム属菌(Pythium sp.)により引き起こされるキュウリ立枯病、パクシニア アリー(Puccinia allii)により引き起こされるネギさび病、スクレロチニア アリー(Sclerotinia allii)により引き起こされるネギ小菌核病、アルタナリア ブラシケ(Alternaria brassicae)により引き起こされるハクサイ黒斑病、アルタナリア ダウシ(Alternaria dauci)により引き起こされるニンジン黒葉枯病、リゾクトニア ソラニ(Rhizoctonia solani)により引き起こされるホウレンソウ株腐病、スクレロチニア スクレロチオラム(Sclerotinia sclerotiorum)により引き起こされるレタス菌核病、バーティシリウム ダーリエ(Verticillium dahliae)により引き起こされるナス半身萎ちょう病、スファエロテカ フムリ(Sphaerotheca humuli)により引き起こされるイチゴうどんこ病、グロメレラ シングラータ(Glomerella cingulata)により引き起こされるイチゴ炭疽病、アスコチータ ピシ(Ascochyta pisi)により引き起こされるエンドウ褐斑病、および、ボトリチス ファバエ(Botrytis fabae)により引き起こされるソラマメ赤色斑点病等の野菜類の病害が挙げられる。また、花卉類の病害としては、ボトリチス シネレア(Botrytis cinerea)により引き起こされるシクラメン、キク、バラ、スターチス等の灰色かび病、スファエロテカ パノッサ(Sphaerotheca pannosa)により引き起こされるバラのうどんこ病、パクシニア ホリアナ(Puccinia horiana)により引き起こされるキク白さび病等が挙げられる。さらに、果樹類の植物の病害としては、ロゼリニア ネカトリックス(Rosellinia necatrix)により引き起こされる果樹類の白紋羽病、ペニシリウム イタリカム(Penicillium italicum)により引き起こされるカンキツ類の青かび病、ディアポルテ シトリ(Diaporthe citri)により引き起こされるカンキツ類の黒点病、ギムノスポランギウム アジアティクム(Gymnosporangium asiaticum)により引き起こされるナシ赤星病、ベンチュリア イネエクアリス(Venturia inaequalis)により引き起こされるリンゴ黒星病、モニリニア フルクチコーラ(Monilinia fructicola)により引き起こされるモモ灰星病等が挙げられる。また、イネ科の植物の病害としては、リゾクトニア ソラニ(Rhizoctonia solani)により引き起こされるイネ紋枯病、ピリキュラリア オリゼー(Pyricularia oryzae)により引き起こされるイネいもち病、エリシフェ グラミニス(Erysiphe graminis)により引き起こされるオオムギうどんこ病、ゲウマノマイセス グラミニス(Gaeumannomyces graminis)により引き起こされるコムギ立枯病等が挙げられる。これらの植物の病害の中でも、葉かび病が、本発明における植物の病害として好ましく挙げられる。
The plant disease in the present invention is not particularly limited as long as the Dicyma pulvinata 414-3 strain of the present invention exhibits a control effect. However, the plant disease is caused by infecting a plant with a pathogenic fungus. Disease is preferred. Among them, plant diseases caused by pathogenic bacteria infecting the above-ground parts of plants such as stems, leaves, flowers, fruits and the like are preferable, and in particular, plant diseases caused by infecting plant leaves with pathogenic bacteria are preferable. More preferred.
Such plant diseases include, specifically, tomato leaf mold caused by Cladosporium fulvum, tomato, eggplant, pepper, strawberry, cucumber, lettuce, caused by Botrytis cinerea. Gray mold such as green beans, cabbage black soot caused by Alternaria brassicicola, tomato plague caused by Phytophthora infestans, peanut black caused by Cercosporidium personatum Astringency, tomato wilt caused by Fusarium oxysporum, cucumber, melon, etc. caused by Sphaerotheca fuliginea Powdery mildew, red pepper caused by Leveillula taurica, powdery mildew such as pepper, tomato, powdery mildew such as eggplant caused by Erysiphe cichoracearum, Pseudoperonospora cubensis Cucumber downy mildew caused by Pythium sp., Cucumber rot caused by Puccinia allii, leek rust caused by Puccinia allii, leeks micronuclei caused by Sclerotinia allii Disease, cabbage black spot caused by Alternaria brassicae, carrot blight caused by Alternaria dauci, caused by Rhizoctonia solani Spinach strain rot, Sclerotinia sclerotiorum caused by Sclerotinia sclerotiorum, lettuce nuclear disease, Verticillium dahliae caused eggplant wilt, Sphaerotheca humuli caused by strawberry noodles Diseases of vegetables such as strawberry anthrax caused by Glomerella cingulata, pea brown spot caused by Ascochyta pisi, and peanut red spot caused by Botrytis fabae Is mentioned. In addition, flower diseases include gray mold diseases such as cyclamen, chrysanthemum, roses, and staticis caused by Botrytis cinerea, rose powdery mildew caused by Sphaerotheca pannosa, and Puccinia horiana (Puccinia). for example, chrysanthemum rust caused by horiana). In addition, the plant diseases of fruit trees include white blight of fruit trees caused by Rosellinia necatrix, blue mold disease of citrus caused by Penicillium italicum, Diaporthe citri Citrus sunspot caused by scab, pear scab caused by Gymnosporangium asiaticum, apple scab caused by Venturia inaequalis, peach ash caused by Monilinia fructicola Etc. The diseases of the grass family include rice blight caused by Rhizoctonia solani, rice blast caused by Pyricularia oryzae, and barley udon caused by Erysiphe graminis. And wheat wilt caused by the disease, Gaeumannomyces graminis. Among these plant diseases, leaf mold disease is preferably mentioned as a plant disease in the present invention.

本発明の植物病害防除資材は、トマト葉かび病、トマト、ナス、ピーマン、イチゴ、キュウリ、レタス、インゲン等の灰色かび病、キャベツ黒すす病、トマト疫病、ラッカセイ黒渋病、トマト萎ちょう病、キュウリ、メロン、トマト、ナス、トウガラシ、ピーマンのうどんこ病、キュウリべと病、キュウリ立枯病、ネギさび病、ネギ小菌核病、ハクサイ黒斑病、ニンジン黒葉枯病、ホウレンソウ株腐病、レタス菌核病、ナス半身萎ちょう病、イチゴうどんこ病、イチゴ炭疽病、エンドウ褐斑病、および、ソラマメ赤色斑点病等の野菜類の病害や、シクラメン、キク、バラ、スターチス等の灰色かび病、バラうどんこ病、キク白さび病等の花卉類の植物病害、果樹類の白紋羽病、カンキツ類の青かび病、カンキツ類の黒点病、ナシ赤星病、リンゴ黒星病、モモ灰星病等の果樹類の植物病害、イネ紋枯病、イネいもち病、オオムギうどんこ病、コムギ立枯病等のイネ科の病害等の植物病害の防除に用いることができる。   The plant disease control material of the present invention includes tomato leaf mold, tomato, eggplant, bell pepper, strawberry, cucumber, lettuce, green beans, etc., gray mold, cabbage black soot, tomato plague, groundnut black astringency, tomato wilt Cucumber, melon, tomato, eggplant, pepper, pepper powdery mildew, cucumber downy mildew, cucumber blight, leek rust, leek sclerotia, Chinese cabbage black spot, carrot black leaf blight, spinach strain Diseases of vegetables such as rot, lettuce nuclear disease, eggplant half wilt, strawberry powdery mildew, strawberry anthracnose disease, pea brown spot disease, and broad bean red spot disease, cyclamen, chrysanthemum, rose, statice, etc. Plant diseases of flowering plants such as gray mold disease, rose powdery mildew, chrysanthemum rust, fruit tree white spotted feather disease, citrus blue mold disease, citrus black spot disease, pear red star disease, phosphorus It can be used to control plant diseases such as plant diseases of fruit trees such as black star disease and peach ash star disease, rice blight disease, rice blast disease, barley powdery mildew, and wheat disease .

本発明の植物病害防除資材は、上記のような各種栽培植物の各種病害を防除する目的で、栽培植物に施用されるが、その方法は、剤型等の使用形態、作物や病害によって適宜選択され、例えば、地上液剤散布、地上固形散布、空中液剤散布、空中固形散布、液面散布、施設内施用、土壌混和施用、土壌灌注施用、表面処理(種子粉衣、塗布処理等)、育苗箱施用、単花処理、株元処理等の方法を挙げることができる。また、これらの施用方法の中では、栽培植物の茎葉に処理する、地上部病害への施用が好ましい。   The plant disease control material of the present invention is applied to cultivated plants for the purpose of controlling various diseases of various cultivated plants as described above, and the method is appropriately selected depending on the use form such as dosage form, crops and diseases. For example, ground liquid spraying, ground solid spraying, airborne liquid spraying, airborne solid spraying, liquid surface spraying, in-facility application, soil mixing application, soil irrigation application, surface treatment (seed dressing, application treatment, etc.) Examples of the method include application, single flower treatment, and stock treatment. Moreover, in these application methods, the application to the above-ground disease which processes to the foliage of a cultivated plant is preferable.

以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明の技術範囲はこれらにより限定されるものではない。   EXAMPLES Hereinafter, although an Example is given and this invention is demonstrated, the technical scope of this invention is not limited by these.

<実施例1>ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株の分離と同定
(1)菌株の分離
トマト(Solanum lycopersicum)の葉かび病罹病葉から、病斑上に寄生した白い菌糸(寄生菌株)を素寒天培地上(2%)に分離し、室温で1日間培養した。培地上の発芽した単胞子を、実体顕微鏡下で、PDA培地(ポテトデキストロース寒天)に分離、25℃で培養した。同様の操作をさらに2度行い、414−3株を得た。PDA培地で無菌的に1週間培養し、PDAプレートを滅菌水ですすぐことにより分生子(胞子)を回収した。
<Example 1> Isolation and identification of Dicyma pulvinata 414-3 strain (1) Isolation of strain White hyphae (parasitic strain) parasitic on lesions from leaves affected by leaf mold of tomato (Solanum lycopersicum) ) Was separated on an elementary agar medium (2%) and cultured at room temperature for 1 day. The germinated monospores on the medium were separated into PDA medium (potato dextrose agar) and cultured at 25 ° C. under a stereomicroscope. The same operation was further performed twice to obtain 414-3 strain. Cultured aseptically in PDA medium for 1 week, and conidia (spores) were recovered by rinsing the PDA plate with sterile water.

(2)菌株の性質
上記の培養物から分離した414−3株について、菌学的諸性質を調べた。
414−3株の分生子柄と分生子(胞子)の形態について光学顕微鏡を用いて観察し、これまでに報告されているディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)(Deighton, 1972; Hughes, 1951; Von Arx, 1981)といずれの特徴も一致した。またITS領域の塩基配列の相同性解析においては、オランダ微生物株保存センター(CBS-KNAW Fungal Biodiversity Centre)のディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)株「222.63」と「254.59」およびKACC(Korean Agricultural Culture Collection)の「KACC44498」と「KACC44502」、およびHMQAU130012、LCC11、FMR12706の塩基配列を比較として使用し、高い相同性を示すことが明らかとなった。
図1に、ITS領域の塩基配列を基にした系統樹を、図2および配列表に、本発明の414−3株のITS領域の塩基配列を示す。
(2) Properties of strains The mycological properties of the 414-3 strain isolated from the above culture were examined.
The conidia pattern and conidia (spore) morphology of strain 414-3 were observed using an optical microscope, and the previously reported Dicyma pulvinata (Deighton, 1972; Hughes, 1951; Von Arx , 1981). In the homology analysis of the base sequence of the ITS region, the Dicyma pulvinata strains “222.63” and “254.59” of the Netherlands CBS-KNAW Fungal Biodiversity Center and KACC (Korean Agricultural Culture Collection) Using “KACC44498” and “KACC44502” and the base sequences of HMQAU130012, LCC11, and FMR12706 for comparison, it was revealed that they show high homology.
FIG. 1 shows a phylogenetic tree based on the base sequence of the ITS region, and FIG. 2 and the sequence table show the base sequence of the ITS region of the 414-3 strain of the present invention.

<実施例2>ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株の葉かび病菌に対する寄生性の確認
ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株の寄生性を2つの手法を用いて確認した。
<手法1>
走査型電子顕微鏡を用いて、414−3株がトマト葉上で葉かび病菌の菌糸に巻きつき、寄生することを確認した(図3中の矢印部分を参照)。
<手法2>
緑色蛍光タンパク質(GFP)遺伝子を常時発現する葉かび病菌を作成し、その蛍光強度によって葉かび病菌の生死を判定する実験系を構築した。糸状菌(Aspergillus nidulans)で恒常的に発現するglyceraldehyde-3-phosphatase dehydrogenase遺伝子のプロモーター領域の下流にGFP遺伝子を連結させ、形質転換により葉かび病菌に導入した。生きている限り恒常的にGFPを産生する葉かび病菌と414−3株を、栄養源としての炭素源を含まない最小培地(10g KNO3, 5g KH2PO4, 2.5g MgSO4・7H2O, 0.02g FeCl3, 1リットルあたり)で共培養した。
<Example 2> Confirmation of parasitic nature against leaf mold of Dicyma pulvinata 414-3
The parasitic nature of Dicyma pulvinata strain 414-3 was confirmed using two methods.
<Method 1>
Using a scanning electron microscope, it was confirmed that the 414-3 strain wrapped around the mycelium of the mold of fungi on tomato leaves and was parasitic (see the arrow in FIG. 3).
<Method 2>
A fungal fungus that constantly expresses the green fluorescent protein (GFP) gene was created, and an experimental system was constructed to determine the viability of the fungus using the fluorescence intensity. The GFP gene was ligated downstream of the promoter region of the glyceraldehyde-3-phosphatase dehydrogenase gene that is constitutively expressed in filamentous fungi (Aspergillus nidulans), and introduced into leaf mold by transformation. As long as they are alive, GFP-3 and 414-3 strains that constantly produce GFP are added to a minimal medium that does not contain a carbon source as a nutrient source (10 g KNO 3 , 5 g KH 2 PO 4 , 2.5 g MgSO 4 .7H 2 O, 0.02 g FeCl 3 , per liter).

実施例2、手法2による寄生性の確認結果は、図4に示すように、培養3日目に414−3株が接触した葉かび病菌の菌糸において、GFP蛍光が部分的に弱くなり、培養4日目にはGFP蛍光が完全に消失したことから、414−3株が葉かび病菌に寄生し、栄養源を得ていることを確認した。図4において、左側は光学顕微鏡写真であり、右側が蛍光顕微鏡写真である。
手法1、2の結果から、414−3株は葉かび病菌に菌寄生性を示すことが確認された。
As shown in FIG. 4, the result of confirming the parasitic property by Example 2 and Method 2 is that the GFP fluorescence is partially weakened in the mycelium of the leaf mold fungus contacted with the 414-3 strain on the third day of the culture. On the 4th day, the GFP fluorescence completely disappeared, so it was confirmed that the 414-3 strain was parasitic on the leaf mold and obtained a nutrient source. In FIG. 4, the left side is an optical micrograph and the right side is a fluorescence micrograph.
From the results of Methods 1 and 2, it was confirmed that the strain 414-3 showed fungal parasitic on the fungal fungus.

<実施例3>ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株の胞子形成能の確認
PDA培地上で、ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株、CBS222.63株、CBS254.59株、KACC44498株、KACC44502株を無菌的に1週間培養し、PDAプレートを滅菌水ですすぐことにより分生子(胞子)を回収することで、各菌株の胞子形成能を確認する試験を行った。試験結果を図5に示す。
なお、図5中、「222.63」は「CBS222.63株」を、「254.59」は「CBS254.59株」を、「44498」は「KACC44498株」を、「44502」は「KACC44502株」を、「414-3」は本発明の「414−3株」を意味する。
<Example 3> Confirmation of spore-forming ability of Dicyma pulvinata 414-3 strain On PDA medium, Dicyma pulvinata 414-3 strain, CBS222.63 strain, CBS254.59 strain, KACC44498 The strain, KACC44502 strain, was aseptically cultured for 1 week, and conidia (spores) were collected by rinsing the PDA plate with sterilized water. The test results are shown in FIG.
In FIG. 5, “222.63” is “CBS222.63 stock”, “254.59” is “CBS254.59 stock”, “44498” is “KACC44498 stock”, “44502” is “KACC44502 stock”, “414-3” means “414-3 strain” of the present invention.

図5に示すとおり、414−3株は、CBS222.63株、CBS254.59株、KACC44498株、KACC44502株に比べて、培地上に形成されたコロニー数あたりの胞子形成量が非常に多いことが明らかとなった。
微生物農薬は人工培養によって微生物を増殖し、製剤として使用することから、一般的な培養法で胞子を形成する能力が高い菌株ほど、安価に製剤化・工業化することが可能である。このことから、本発明の414−3株は、微生物農薬とする際の製造面において、有利であると考えられる。
As shown in FIG. 5, the 414-3 strain has a much larger amount of spore formation per colony formed on the medium than the CBS222.63 strain, the CBS254.59 strain, the KACC44498 strain, and the KACC44502 strain. It became clear.
Since microbial pesticides grow microorganisms by artificial culture and are used as a preparation, a strain having a higher ability to form spores by a general culture method can be formulated and industrialized at a lower cost. From this, it is thought that 414-3 stock | strain of this invention is advantageous in the manufacture surface at the time of setting it as a microbial pesticide.

<実施例4>ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株のトマト葉かび病に対するポット試験
接種試験植物は、トマト葉かび病抵抗性遺伝子を持たないトマト品種「桃太郎」を使用し、ポットに移植した3週齢のトマト幼苗を用いた。トマト葉かび病菌(Cladosporium fulvum)株「CF229」と「CF338」は、PDA培地を用い、25℃で2週間培養し、分生子(胞子)を蒸留水で回収し使用した。
上記試験植物の葉裏に、トマト葉かび病菌(Cladosporium fulvum)の胞子懸濁液(10個の分生子/ml)を約5ml噴霧し、トマト葉かび病に感染させた。湿度100%の湿室内で24時間育成した後、人工気象室(25℃、16時間明期−8時間暗期)に移した。約2週間後に葉かび病の病徴を確認後、下記に示すトマト葉かび病菌に対する分離寄生株の胞子懸濁液を、トマトに噴霧接種(10個/植物)し、さらに12日後トマト葉かび病の病斑におけるコロニー形成を、目視で確認した。
使用したトマト葉かび病菌に対する寄生分離株は、本発明の414−3株と、CBS222.63株、CBS254.59株であり、本発明の414−3株は3回、CBS222.63株とCBS254.59株は2回試験を行った。
試験結果の評価は、表1に示す防除効果(%)と寄生指数により行った。
防除効果は、試験植物における全発病葉数に対する、分離寄生株に寄生された病斑のある発病葉数の比率(%)を表すものである。
寄生指数は、分離寄生株に寄生された病斑のある全発病葉について、分離寄生株による病斑への被覆状態を、下記基準により評価し、その平均値を表すものである。
寄生指数0:寄生糸状菌による葉かび病病斑への被覆なし
寄生指数1:病斑の1/4が被覆された状態
寄生指数2:病斑の1/4〜1/2が被覆された状態
寄生指数3:病斑の1/2〜3/4が被覆された状態
寄生指数4:病斑の3/4以上が被覆された状態
<Example 4> Pot test against tomato leaf mold of Dicyma pulvinata 414-3 strain The inoculation test plant uses a tomato variety "Momotaro" that does not have a tomato leaf mold resistance gene, Transplanted 3-week-old tomato seedlings were used. Tomato leaf mold fungus (Cladosporium fulvum) strains “CF229” and “CF338” were cultured at 25 ° C. for 2 weeks using a PDA medium, and conidia (spores) were collected with distilled water and used.
About 5 ml of a spore suspension (10 4 conidia / ml) of tomato leaf mold (Cladosporium fulvum) was sprayed on the back of the test plant to infect tomato leaf mold. After growing for 24 hours in a 100% humidity chamber, the chamber was moved to an artificial weather chamber (25 ° C., 16 hours light period-8 hours dark period). After confirming symptoms of leaf blight after about 2 weeks, the spore suspension of the separation parasitic strains to tomato leaf mold fungus shown below, spray inoculated into tomato (10 5 cells / plants), and further 12 days after the tomato leaves The colony formation in the fungal lesion was visually confirmed.
The parasitic isolates for tomato leaf mold used were the 414-3 strain of the present invention, the CBS222.63 strain, and the CBS254.59 strain, and the 414-3 strain of the present invention was 3 times, the CBS222.63 strain and the CBS254 strain. The .59 strain was tested twice.
The test results were evaluated based on the control effect (%) and parasitic index shown in Table 1.
The control effect represents the ratio (%) of the number of diseased leaves with lesions parasitic on the isolated parasitic strain to the total number of diseased leaves in the test plant.
The parasitism index represents the average value of all the diseased leaves with lesions parasitic on the isolated parasitic strain, evaluated by the following criteria for the covering state of the lesion by the isolated parasitic strain.
Parasitic index 0: No covering of leaf mold spots by parasitic fungi Parasitic index 1: A state of covering 1/4 of lesions Parasitic index 2: Covering 1/4 to 1/2 of lesions State Parasitic index 3: A state where 1/2 to 3/4 of a lesion is covered Parasitic index 4: A state where 3/4 or more of a lesion is covered

表1に示すとおり、本発明の414−3株は、同じトマト葉かび病菌に対する分離寄生株「CBS222.63株」や「CBS254.59株」に比べて、極めて高いトマト葉かび病に対する防除効果を奏することが明らかとなった。これは、本発明の414−3株が有する、トマト葉かび病菌に対する菌寄生能の高さに由来するものと考えられる。   As shown in Table 1, the 414-3 strain of the present invention has an extremely high control effect against tomato leaf mold disease compared to the isolated parasitic strains “CBS222.63 strain” and “CBS254.59 strain” against the same tomato leaf mold. It became clear to play. This is considered to be derived from the high fungal parasitic ability of the 414-3 strain of the present invention against tomato leaf mold.

<実施例5>ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株のトマト葉かび病に対する圃場試験
接種試験植物は、トマト葉かび病抵抗性遺伝子を持たないトマト品種「桃太郎」を使用し、3週齢のトマト幼苗を温室内に移植し、2ヶ月を経過したトマト植物体を用いた。トマト葉かび病菌(Cladosporium fulvum)CF229株は、PDA培地を用い、25℃で2週間培養し、分生子(胞子)を蒸留水で回収し使用した。
上記試験植物の葉裏に、トマト葉かび病菌(Cladosporium fulvum)の胞子懸濁液(10個の分生子/ml)を噴霧し、トマト葉かび病に感染させた。約2週間後に葉かび病の病徴を確認後、分離寄生菌株414−3株の胞子懸濁液(実施例)および分離寄生菌株414−3株の胞子を含有しない蒸留水(比較例)を、トマト葉かび病の病斑に噴霧接種(4×10分生子/葉)し、さらに12日後トマト葉かび病の病徴におけるコロニー形成を、目視で確認した。試験はそれぞれ2回行った。
試験結果の評価は、表2に示す防除効果(%)と寄生指数により行った。
この防除効果と寄生指数は、実施例4と同じ評価内容である。
<Example 5> Field test of Dicyma pulvinata 414-3 strain against tomato leaf mold Inoculation test plant uses tomato variety "Momotaro" which does not have tomato leaf mold resistance gene for 3 weeks Age-old tomato seedlings were transplanted into a greenhouse, and tomato plants that had passed 2 months were used. The tomato leaf mold fungus (Cladosporium fulvum) CF229 strain was cultured at 25 ° C. for 2 weeks using a PDA medium, and conidia (spores) were collected with distilled water and used.
The spore suspension (10 4 conidia / ml) of tomato leaf mold (Cladosporium fulvum) was sprayed on the back of the test plant to infect tomato leaf mold. After confirming the symptom of leaf mold after about 2 weeks, a spore suspension of the isolated parasitic strain 414-3 (Example) and distilled water containing no spores of the isolated parasitic strain 414-3 (Comparative Example) The lesions of tomato leaf mold were spray-inoculated (4 × 10 4 conidia / leaf), and after 12 days, colony formation in the symptoms of tomato leaf mold was visually confirmed. Each test was performed twice.
The evaluation of the test results was performed based on the control effect (%) and the parasitic index shown in Table 2.
This control effect and parasitic index are the same evaluation contents as in Example 4.

表2に示すとおり、本発明の414−3株は、温室内においてもトマト葉かび病に対して高い防除効果を示した。 As shown in Table 2, the 414-3 strain of the present invention showed a high control effect against tomato leaf mold even in the greenhouse.

<実施例6>ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株のトマト葉かび病のレースに対する防除効果の確認
上述のとおり、トマト葉かび病菌は日本国内において12種類のレースが存在することが明らかとなっている。そこで、多様なレースに対するディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株の防除効果を確認した。
接種試験植物は、トマト葉かび病抵抗性遺伝子を持たないトマト品種「桃太郎」を使用し、ポットに移植した3週齢のトマト幼苗を用いた。トマト葉かび病菌(Cladosporium fulvum)株は、PDA培地を用い、25℃で2週間培養し、分生子(胞子)を蒸留水で回収し使用した。
上記試験植物の葉裏に、トマト葉かび病菌(Cladosporium fulvum)の胞子懸濁液(10個の分生子/ml)を約5ml噴霧し、トマト葉かび病に感染させた。湿度100%の湿室内で24時間育成した後、人工気象室(25℃、16時間明期−8時間暗期)に移した。約2週間後に葉かび病の病徴を確認後、414−3株の胞子懸濁液を、トマト葉かび病の病斑に噴霧接種(10個/植物)し、さらに12日後トマト葉かび病の病徴におけるコロニー形成を、目視で確認した。
試験結果の評価は、表3に示す防除活性により行った。
この防除活性は、トマト葉かび病の病斑に対して寄生が50%以上認められた場合に、活性あり「+」と評価した
<Example 6> Confirmation of controlling effect of Dicyma pulvinata 414-3 strain on tomato leaf mold race As described above, it is clear that tomato leaf mold fungus has 12 types of race in Japan. It has become. Therefore, the control effect of Dicyma pulvinata 414-3 strain on various races was confirmed.
As the inoculation test plant, a tomato variety “Momotaro” having no tomato leaf mold resistance gene was used, and a 3-week-old tomato seedling transplanted in a pot was used. Tomato leaf mold (Cladosporium fulvum) strain was cultured at 25 ° C. for 2 weeks using a PDA medium, and conidia (spores) were collected with distilled water and used.
About 5 ml of a spore suspension (10 4 conidia / ml) of tomato leaf mold (Cladosporium fulvum) was sprayed on the back of the test plant to infect tomato leaf mold. After growing for 24 hours in a 100% humidity chamber, the chamber was moved to an artificial weather chamber (25 ° C., 16 hours light period-8 hours dark period). About 2 weeks later, after confirming the symptom of leaf mold disease, the spore suspension of 414-3 strain was spray-inoculated on the lesion of tomato leaf mold disease (10 5 plants / plant). Colony formation in the disease symptoms was confirmed visually.
Evaluation of the test results was carried out by the control activity shown in Table 3.
This control activity was evaluated as “+” when the parasite was found to be 50% or more against the leaf spot of tomato leaf mold.

表3に示すとおり、本発明の414−3株は、トマト葉かび病菌のいずれのレースに対しても同様に高い防除活性を示した。 As shown in Table 3, the 414-3 strain of the present invention showed high control activity similarly to any race of tomato leaf mold.

本発明のディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株は、トマト葉かび病菌に寄生する菌寄生性を示し、室内におけるポット試験および温室内の圃場試験においても、トマト葉かび病に対して高い病害防除効果を発揮し、さらに、国内で発生しているトマト葉かび病菌の多様なレース全てに対しても、高い防除活性を示すので、栽培場面での利用が期待される。
さらに、本発明の414−3株は、高い分生子(胞子)形成能を有しているので、微生物農薬として製造する際に有利である。
The Dicyma pulvinata 414-3 strain of the present invention exhibits fungal parasitism parasitic on tomato leaf mold and is high against tomato leaf mold in both indoor pot tests and greenhouse field tests. It exhibits a disease control effect, and also exhibits high control activity against all the diverse races of tomato leaf mold that occur in Japan, and is expected to be used in cultivation situations.
Furthermore, since the 414-3 strain of the present invention has a high conidia (spore) forming ability, it is advantageous when it is produced as a microbial pesticide.

NITE P−02413 NITE P-02413

Claims (7)

ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株(受託番号:NITE P−02413)。   Dicyma pulvinata 414-3 strain (Accession number: NITE P-02413). ディシーマ・プルビナータ(Dicyma pulvinata)414−3株を含有する植物病害防除資材。   Plant disease control material containing Dicyma pulvinata 414-3 strain. 植物病害が植物病原性糸状菌に起因する病害であることを特徴とする、請求項2記載の植物病害防除資材。   The plant disease control material according to claim 2, wherein the plant disease is a disease caused by a phytopathogenic fungus. 植物病害が葉から感染することを特徴とする、請求項2または3に記載の植物病害防除資材。   The plant disease control material according to claim 2 or 3, wherein the plant disease is infected from a leaf. 植物病害がトマト葉かび病であることを特徴とする、請求項2〜4いずれかに記載の植物病害防除資材。   The plant disease control material according to any one of claims 2 to 4, wherein the plant disease is tomato leaf mold. 請求項2〜5いずれかに記載の植物病害防除資材を使用する植物病害防除方法。   The plant disease control method which uses the plant disease control material in any one of Claims 2-5. 請求項2〜5いずれかに記載の植物病害防除資材を、植物に施用することを特徴とする、請求項6に記載の植物病害防除方法。   The plant disease control method according to claim 6, wherein the plant disease control material according to claim 2 is applied to a plant.
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