JP2018076271A - エストロゲン受容体産生促進組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
このため、皮膚老化を抑制するためにエストロゲンなどのステロイドホルモンやイソフラボンなどの植物性エストロゲンやエストロゲンの受容体のアゴニストを投与することで皮膚老化を抑制しようとする試みがなされている。
特許文献2には、エストロゲン様作用剤であるダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物、レッドクローバー抽出物から選ばれる1種以上を配合した抗老化化粧料が提案されている。
特許文献3には、バラ科アロニア属の植物の果実を搾汁した搾汁液もしくは搾汁残渣に含まれる、筋芽細胞の増殖及び筋管細胞への分化を促進する物質がエストロゲン受容体βアゴニストとして機能しエストロゲン効果を促進することが記載されている。
特許文献4には、バラの子房内から胎座組織を分離して培養することにより得られたバラ胎座組織培養物を水に混合させた後、超音波抽出した後、熱水抽出して得られる、バラ胎座組織培養抽出物が皮膚老化抑制作用を有することが記載されている。
本発明は新たなER産生促進剤を提供することを課題とする。
(1)バラの花弁と胎座を含む雌蕊の抽出物を有効成分として含有する皮膚細胞のエストロゲン受容体産生促進組成物。
(2)バラの花弁と胎座を含む雌蕊の抽出物が、水、アルコール、またはその混合溶媒の抽出物である(1)に記載のエストロゲン受容体産生促進組成物。
(3)アルコールが1,3−ブチレングリコールである(2)に記載のエストロゲン受容体産生促進組成物。
1,3−ブチレングリコールを用いた抽出の場合、抽出液から減圧濃縮などの方法で濃縮した濃縮物を本発明のエストロゲン受容体産生促進組成物とすることができる。
これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。医薬あるいは化粧料用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、アルブミン、水、生理食塩水、油脂等が挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、滑剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤等の慣用の添加剤を適宜添加することができる。
1.試験例1(ヒト皮膚線維芽細胞株を用いた加齢による老化モデル細胞の作成試験)
ヒト皮膚線維芽細胞株(NHDF(NB))を4×105cells/3.5mL dishになるように播種し、37 ℃、5%二酸化炭素、95%雰囲気下にて培養を行った。培地は不活性化したウシ胎児血清(FBS) (Hyclone Laboratories)10%、Penicillin-Streptomycin(Sigma Aldrich)1%を添加したDMEM high glucose, liquid (DMEM) (Life Technologies)を用いた。通常培養には100mmディッシュに細胞を播種し80〜90%コンフルエント時に0.05%Trypsin-EDTA (Sigma Aldrich)にて剥離し継代を行った。この条件で30回継代を繰り返し、加齢による老化細胞を得た。
正常細胞と30代目の老化細胞を同様に4×105cells/3.5mL dishになるように播種し、10時間経過後と40時間経過後の細胞数をカウントした。細胞数の計数はBECKMAN COULTER製のセルカウンターを用いて行った。計数結果を図1に示す。
図1に示すように、30代目の細胞は増殖能が明らかに低下していた。また顕微鏡観察の結果、30代目の細胞の形態は、加齢による老化細胞の典型的な形態を呈していた。
試験例1で作成した加齢による老化細胞及び正常細胞に発現するERを確認した。
なお、以下の試験系において、ERとあるのは、特に断りのない限りERβのことである。
(1)ERの測定
35mmディッシュに正常細胞及び老化細胞を、それぞれ8×105 cells/mL濃度に調整したDMEM 2mLを播種し、24時間培養を行った。培養および細胞はD-PBSにて洗浄の後、TRIzol Reagent (Life Technologies)にて細胞を溶解し回収した。回収した細胞溶液は-80℃で保存した。
溶解した細胞溶液にクロロホルム(和光純薬工業)200μLを加えて15秒間激しく混合、室温で3分間静置の後、4℃、13000rpmにて15分間遠心を行った。上層を回収し、2-プロパノールを500μL添加して15秒間激しく混合し、室温で3分間静置の後、4℃、13000rpmにて10分間遠心を行った。上清を取り除いた後、ペレットに70vol%エタノール(和光純薬工業)1mLを添加し、5秒間激しく混合、室温で3分間静置の後、4℃、10000rpmにて5分間遠心を行った。上清を取り除いた後、RNase-free水20μLにて溶解しtotal RNA溶液とした。
cDNAの合成はPrimeScriptTM RT Master Mix (Perfect Real Time)(タカラバイオ)を用いて行った。すなわち、5×PrimeScript RT Master mix:total RNA溶液:RNase-free水を1:1:3の割合で混合し、サーマルサイクラー(MJ Research)を用いて逆転写(37℃ 15分)、逆転写酵素の熱失活(85℃ 5秒)を行い合成した。
PCR反応はSYBR(登録商標) Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(タカラバイオ)を用いて行った。
SYBR(登録商標) Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(2X)に、
PCR Forward Primer:TGACCGATGCTTTGGTTTGG (0.4μM)、
PCR Reverse Primer:TACTTGTATACACAGGACCTCGC (0.4μM)、
およびcDNAを混合しRNase-free水を加え調整した。その後、LightCycler 480 System(Roche Diagnostics) にて初期変性(95℃ 30秒)、PCR反応(95℃ 5秒、60℃ 30秒、40サイクル)、融解曲線分析(95℃ 5秒、60℃ 1分)を行い、後冷却(50℃ 30秒)した。増幅効率は、比較Ct法(ΔΔCt法)を用いて算出した。サンプル添加時の遺伝子発現量を、サンプル無添加(control)の遺伝子発現量に対する相対比として算出した。
controlに対する分散性をF検定にて確認後、等分散性と仮定できる場合Student'sのt検定、仮定できない場合にはWelchのt検定を用いて行った。有意水準はp<0.05とした。
結果を図2に示す。
図2に示すように正常細胞と老化モデル細胞間では有意差がなかった。すなわち、ERの発現は、加齢による老化では低下しないことが確認された。
老化因子である活性酸素のERに及ぼす影響を確認した。
(1)試験方法
試験例1と同様に正常ヒト線維芽細胞株(NHDF(NB))を培養し、細胞がコンフルエントに生育した段階で活性酸素に細胞を曝露した。活性酸素による曝露は、過酸化水素水(0.05mM、0.5mM)に1時間処理することで行った。
試験例2と同様に以下の操作を行って測定した。
<total RNAの抽出>
溶解した細胞溶液にクロロホルム(和光純薬工業)200μLを加えて15秒間激しく混合、室温で3分間静置の後、4℃、13000rpmにて15分間遠心を行った。上層を回収し、2-プロパノールを500μL添加して15秒間激しく混合し、室温で3分間静置の後、4℃、13000rpmにて10分間遠心を行った。上清を取り除いた後、ペレットに70vol%エタノール(和光純薬工業)1mLを添加し、5秒間激しく混合、室温で3分間静置の後、4℃、10000rpmにて5分間遠心を行った。上清を取り除いた後、RNase-free水20μLにて溶解しtotal RNA溶液とした。
cDNAの合成はPrimeScriptTM RT Master Mix (Perfect Real Time)(タカラバイオ)を用いて行った。すなわち、5×PrimeScript RT Master mix:total RNA溶液:RNase-free水を1:1:3の割合で混合し、サーマルサイクラー(MJ Research)を用いて逆転写(37℃ 15分)、逆転写酵素の熱失活(85℃ 5秒)を行い合成した。
PCR反応はSYBR(登録商標) Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(タカラバイオ)を用いて行った。
SYBR(登録商標) Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(2X)に、
PCR Forward Primer: TGACCGATGCTTTGGTTTGG (0.4μM)、
PCR Reverse Primer: TACTTGTATACACAGGACCTCGC (0.4μM)、
およびcDNAを混合しRNase-free水を加え調整した。その後、LightCycler 480 System(Roche Diagnostics) にて初期変性(95℃ 30秒)、PCR反応(95℃ 5秒、60℃ 30秒、40サイクル)、融解曲線分析(95℃ 5秒、60℃ 1分)を行い、後冷却(50℃ 30秒)した。増幅効率は、比較Ct法(ΔΔCt法)を用いて算出した。サンプル添加時の遺伝子発現量を、サンプル無添加(control)の遺伝子発現量に対する相対比として算出した。
Controlとして、活性酸素処理なしの細胞を同様に調整し、これに対する分散性をF検定にて確認後、等分散性と仮定できる場合Student'sのt検定、仮定できない場合にはWelchのt検定を用いて行った。有意水準はp<0.05とした。
結果を図3に示す。
図3に示すように正常細胞は活性酸素処理によってERの発現が有意に低下した。すなわち、ERの低下は、活性酸素曝露によって発生することが確認された。その影響は、過酸化水素濃度が0.05mMの場合、ERの発現は、50%以上低下することが明らかとなった。
老化因子である紫外線のERに及ぼす影響を確認した。
(1)試験方法
試験例1と同様に正常ヒト線維芽細胞株(NHDF(NB))を培養し、細胞がコンフルエントに生育した段階で紫外線に細胞を曝露した。紫外線による曝露は、UVA7.5J/cm2を照射することで行った。
試験例2と同様に以下の操作を行って測定した。
<total RNAの抽出>
溶解した細胞溶液にクロロホルム(和光純薬工業)200μLを加えて15秒間激しく混合、室温で3分間静置の後、4℃、13000rpmにて15分間遠心を行った。上層を回収し、2-プロパノールを500μL添加して15秒間激しく混合し、室温で3分間静置の後、4℃、13000rpmにて10分間遠心を行った。上清を取り除いた後、ペレットに70vol%エタノール(和光純薬工業)1mLを添加し、5秒間激しく混合、室温で3分間静置の後、4℃、10000rpmにて5分間遠心を行った。上清を取り除いた後、RNase-free水20μLにて溶解しtotal RNA溶液とした。
cDNAの合成はPrimeScriptTM RT Master Mix (Perfect Real Time)(タカラバイオ)を用いて行った。すなわち、5×PrimeScript RT Master mix:total RNA溶液:RNase-free水を1:1:3の割合で混合し、サーマルサイクラー(MJ Research)を用いて逆転写(37℃ 15分)、逆転写酵素の熱失活(85℃ 5秒)を行い合成した。
PCR反応はSYBR(登録商標) Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(タカラバイオ)を用いて行った。
SYBR(登録商標) Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(2X)に、
PCR Forward Primer : TGACCGATGCTTTGGTTTGG (0.4μM)、
PCR Reverse Primer : TACTTGTATACACAGGACCTCGC (0.4μM)、
およびcDNAを混合しRNase-free水を加え調整した。その後、LightCycler 480 System(Roche Diagnostics) にて初期変性(95℃ 30秒)、PCR反応(95℃ 5秒、60℃ 30秒、40サイクル)、融解曲線分析(95℃ 5秒、60℃ 1分)を行い、後冷却(50℃ 30秒)した。増幅効率は、比較Ct法(ΔΔCt法)を用いて算出した。サンプル添加時の遺伝子発現量を、サンプル無添加(control)の遺伝子発現量に対する相対比として算出した。
Controlとして、紫外線照射処理なしの細胞を同様に調整し、これに対する分散性をF検定にて確認後、等分散性と仮定できる場合Student'sのt検定、仮定できない場合にはWelchのt検定を用いて行った。有意水準はp<0.05とした。
結果を図4に示す。
図4に示すように正常細胞は老化因子である紫外線照射処理によってERの発現が有意に低下した。すなわち、ERの低下は、環境要因である紫外線曝露によって発生することが確認された。
本発明の組成物である、ダマスクバラの花抽出物を用いて試験を行った。なお、用いたバラの花抽出物は、バラの花弁と胎座を含む雌蕊の水と1,3−ブチレングリコールの混合溶媒の抽出物である(製造例1)。この抽出物は総重量の50%相当が1,3−ブチレングリコールであり、還元糖が0.1%〜0.4%、蒸発残分0.5〜2%を含有する組成物である。
(製造例1)
ダマスクバラの花弁、雌蕊の乾燥物を、その乾燥物の約10〜50倍の50%1,3−ブチレングリコール水溶液を用いて4℃〜室温で抽出し、抽出物を得た。また、ダマスクバラの花100gあたり花弁95g、雌蕊5gとした。特に断りのない限り、当該抽出物を本発明の「バラの花の抽出物」として全ての試験に用いた。
また比較対照として、同様の抽出を行った次のバラ科の植物の花又は葉抽出物を用いた。
ビワリーフB Lot.121009(一丸ファルコス) 以下「ビワ」
セイヨウサンザシB Lot.140588(一丸ファルコス)以下「セイヨウサンザシ」
トウニンB Lot.120940(一丸ファルコス)以下「トウニン」
リンゴ抽出液BG-J Lot.211E412J7(丸善製薬)以下「リンゴ」
試験例1と同様にヒト正常線維芽細胞株(NHDF(NB))を培養し、細胞がコンフルエントに生育した段階で1日間前培養の後、サンプルを0.01%添加して24時間培養した。
試験例2と同様に以下の操作を行って測定した。
<total RNAの抽出>
溶解した細胞溶液にクロロホルム(和光純薬工業)200μLを加えて15秒間激しく混合、室温で3分間静置の後、4℃、13000rpmにて15分間遠心を行った。上層を回収し、2-プロパノールを500μL添加して15秒間激しく混合し、室温で3分間静置の後、4℃、13000rpmにて10分間遠心を行った。上清を取り除いた後、ペレットに70vol%エタノール(和光純薬工業)1mLを添加し、5秒間激しく混合、室温で3分間静置の後、4℃、10000rpmにて5分間遠心を行った。上清を取り除いた後、RNase-free水20μLにて溶解しtotal RNA溶液とした。
cDNAの合成はPrimeScriptTM RT Master Mix (Perfect Real Time)(タカラバイオ)を用いて行った。すなわち、5×PrimeScript RT Master mix:total RNA溶液:RNase-free水を1:1:3の割合で混合し、サーマルサイクラー(MJ Research)を用いて逆転写(37℃ 15分)、逆転写酵素の熱失活(85℃ 5秒)を行い合成した。
PCR反応はSYBR(登録商標) Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(タカラバイオ)を用いて行った。
SYBR(登録商標) Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(2X)に、
PCR Forward Primer: TGACCGATGCTTTGGTTTGG (0.4μM)、
PCR Reverse Primer: TACTTGTATACACAGGACCTCGC (0.4μM)、
およびcDNAを混合しRNase-free水を加え調整した。その後、LightCycler 480 System(Roche Diagnostics) にて初期変性(95℃ 30秒)、PCR反応(95℃ 5秒、60℃ 30秒、40サイクル)、融解曲線分析(95℃ 5秒、60℃ 1分)を行い、後冷却(50℃ 30秒)した。増幅効率は、比較Ct法(ΔΔCt法)を用いて算出した。サンプル添加時の遺伝子発現量を、サンプル無添加(control)の遺伝子発現量に対する相対比として算出した。
Controlとして、試料無添加の細胞を同様に調整し、これに対する分散性をF検定にて確認後、等分散性と仮定できる場合Student'sのt検定、仮定できない場合にはWelchのt検定を用いて行った。有意水準はp<0.05とした。
結果を図5に示す。
図5に示すように正常細胞は、リンゴ、セイヨウサンザシ、トウニン、ビワ、バラの添加により異なる反応を示す。すなわちリンゴ、ビワは、ER産生に影響を及ぼさなかった。セイヨウサンザシ、トウニンは、ERの産生に抑制作用を示した。一方、バラは顕著な発現亢進を示した。
本発明の組成物である、ダマスクバラの花抽出物について、バラの花弁と胎座を含む雌蕊の抽出物(製造例1)、そして、胎座を含む雌蕊を高含有したバラの花の抽出物(製造例2)それぞれの抽出物を用いてER産生促進効果を確認した。
(製造例2)
ダマスクバラの花弁、胎座を含む雌蕊の乾燥物を、その乾燥物の約10〜50倍の50%1,3−ブチレングリコール水溶液を用いて4℃〜室温で抽出し、抽出物を得た。また、ダマスクバラの花100gあたり花弁2g、胎座を含む雌蕊98gとした。これを胎座高含有の組成物として用いた。
試験例1と同様に正常ヒト線維芽細胞株(NHDF(NB))を培養し、細胞がコンフルエントに生育した段階で1日間前培養の後、サンプルを0.01%添加して24時間培養した。
試験例2と同様に以下の操作を行って測定した。
<total RNAの抽出>
溶解した細胞溶液にクロロホルム(和光純薬工業)200μLを加えて15秒間激しく混合、室温で3分間静置の後、4℃、13000rpmにて15分間遠心を行った。上層を回収し、2-プロパノールを500μL添加して15秒間激しく混合し、室温で3分間静置の後、4℃、13000rpmにて10分間遠心を行った。上清を取り除いた後、ペレットに70vol%エタノール(和光純薬工業)1mLを添加し、5秒間激しく混合、室温で3分間静置の後、4℃、10000rpmにて5分間遠心を行った。上清を取り除いた後、RNase-free水20μLにて溶解しtotal RNA溶液とした。
cDNAの合成はPrimeScriptTM RT Master Mix (Perfect Real Time)(タカラバイオ)を用いて行った。すなわち、5×PrimeScript RT Master mix:total RNA溶液:RNase-free水を1:1:3の割合で混合し、サーマルサイクラー(MJ Research)を用いて逆転写(37℃ 15分)、逆転写酵素の熱失活(85℃ 5秒)を行い合成した。
PCR反応はSYBR(登録商標) Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(タカラバイオ)を用いて行った。
SYBR(登録商標) Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(2X)に、
PCR Forward Primer: TGACCGATGCTTTGGTTTGG (0.4μM)、
PCR Reverse Primer: TACTTGTATACACAGGACCTCGC (0.4μM)、
およびcDNAを混合しRNase-free水を加え調整した。その後、LightCycler 480 System(Roche Diagnostics) にて初期変性(95℃ 30秒)、PCR反応(95℃ 5秒、60℃ 30秒、40サイクル)、融解曲線分析(95℃ 5秒、60℃ 1分)を行い、後冷却(50℃ 30秒)した。増幅効率は、比較Ct法(ΔΔCt法)を用いて算出した。サンプル添加時の遺伝子発現量を、サンプル無添加(control)の遺伝子発現量に対する相対比として算出した。
Controlとして、試料無添加の細胞を同様に調整し、これに対する分散性をF検定にて確認後、等分散性と仮定できる場合Student'sのt検定、仮定できない場合にはWelchのt検定を用いて行った。有意水準はp<0.05とした。
結果を図6に示す。
図6に示すように正常細胞は、バラの花弁と胎座を含む雌蕊の抽出物(製造例1)、そして胎座を含む雌蕊を高含有したバラの花の抽出物(製造例2)とでその効果に差が出現した。すなわち、胎座を含む雌蕊をより多く含むバラの花の抽出物(製造例2)が明らかに高い効果を示した。ERの産生促進効果は、胎座を含む雌蕊の量に依存しているということができる。
本発明の組成物である、ダマスクバラの花抽出物について、活性酸素によるER抑制障害からの予防試験を行った。
ヒト皮膚角化細胞株(HaCaT)を培養し、細胞がサブコンフルエントに生育した段階でバラの花抽出物を0.01%添加し、24時間後に過酸化水素による処理を行った。過酸化水素曝露は、0.5mMを1時間処理することで行った。
試験例2と同様に以下の操作を行って測定した。
<total RNAの抽出>
溶解した細胞溶液にクロロホルム(和光純薬工業)200μLを加えて15秒間激しく混合、室温で3分間静置の後、4℃、13000rpmにて15分間遠心を行った。上層を回収し、2-プロパノールを500μL添加して15秒間激しく混合し、室温で3分間静置の後、4℃、13000rpmにて10分間遠心を行った。上清を取り除いた後、ペレットに70vol%エタノール(和光純薬工業)1mLを添加し、5秒間激しく混合、室温で3分間静置の後、4℃、10000rpmにて5分間遠心を行った。上清を取り除いた後、RNase-free水20μLにて溶解しtotal RNA溶液とした。
cDNAの合成はPrimeScriptTM RT Master Mix (Perfect Real Time)(タカラバイオ)を用いて行った。すなわち、5×PrimeScript RT Master mix:total RNA溶液:RNase-free水を1:1:3の割合で混合し、サーマルサイクラー(MJ Research)を用いて逆転写(37℃ 15分)、逆転写酵素の熱失活(85℃ 5秒)を行い合成した。
PCR反応はSYBR(登録商標) Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(タカラバイオ)を用いて行った。
SYBR(登録商標) Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(2X)に、
PCR Forward Primer: TGACCGATGCTTTGGTTTGG (0.4μM)、
PCR Reverse Primer: TACTTGTATACACAGGACCTCGC (0.4μM)、
およびcDNAを混合しRNase-free水を加え調整した。その後、LightCycler 480 System(Roche Diagnostics) にて初期変性(95℃ 30秒)、PCR反応(95℃ 5秒、60℃ 30秒、40サイクル)、融解曲線分析(95℃ 5秒、60℃ 1分)を行い、後冷却(50℃ 30秒)した。増幅効率は、比較Ct法(ΔΔCt法)を用いて算出した。サンプル添加時の遺伝子発現量を、サンプル無添加(control)の遺伝子発現量に対する相対比として算出した。
Controlとして、過酸化水素無添加及び試料無添加の細胞を同様に調整し、これに対する分散性をF検定にて確認後、等分散性と仮定できる場合Student'sのt検定、仮定できない場合にはWelchのt検定を用いて行った。有意水準はp<0.05とした。
結果を図7に示す。
図7に示すように正常細胞のER産生能は、活性酸素に曝露することにより低下した。しかし、活性酸素によるER産生能の低下は、バラの花抽出物の前処理にて予防した。
本発明の組成物である、ダマスクバラの花抽出物について、紫外線によるER抑制障害予防試験を行った。
ヒト皮膚角化細胞株(HaCaT)を培養し、細胞がサブコンフルエントに生育した段階でバラの花抽出物0.01%を処理し、24時間後に紫外線照射を行った。紫外線による曝露は、UVB100J/mm2照射することで行った。
試験例2と同様に以下の操作を行って測定した。
<total RNAの抽出>
溶解した細胞溶液にクロロホルム(和光純薬工業)200μLを加えて15秒間激しく混合、室温で3分間静置の後、4℃、13000rpmにて15分間遠心を行った。上層を回収し、2-プロパノールを500μL添加して15秒間激しく混合し、室温で3分間静置の後、4℃、13000rpmにて10分間遠心を行った。上清を取り除いた後、ペレットに70vol%エタノール(和光純薬工業)1mLを添加し、5秒間激しく混合、室温で3分間静置の後、4℃、10000rpmにて5分間遠心を行った。上清を取り除いた後、RNase-free水20μLにて溶解しtotal RNA溶液とした。
cDNAの合成はPrimeScriptTM RT Master Mix (Perfect Real Time)(タカラバイオ)を用いて行った。すなわち、5×PrimeScript RT Master mix:total RNA溶液:RNase-free水を1:1:3の割合で混合し、サーマルサイクラー(MJ Research)を用いて逆転写(37℃ 15分)、逆転写酵素の熱失活(85℃ 5秒)を行い合成した。
PCR反応はSYBR(登録商標) Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(タカラバイオ)を用いて行った。
SYBR(登録商標) Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(2X)に、
PCR Forward Primer: TGACCGATGCTTTGGTTTGG (0.4μM)、
PCR Reverse Primer: TACTTGTATACACAGGACCTCGC (0.4μM)、
およびcDNAを混合しRNase-free水を加え調整した。その後、LightCycler 480 System(Roche Diagnostics) にて初期変性(95℃ 30秒)、PCR反応(95℃ 5秒、60℃ 30秒、40サイクル)、融解曲線分析(95℃ 5秒、60℃ 1分)を行い、後冷却(50℃ 30秒)した。増幅効率は、比較Ct法(ΔΔCt法)を用いて算出した。サンプル添加時の遺伝子発現量を、サンプル無添加(control)の遺伝子発現量に対する相対比として算出した。
Controlとして、紫外線曝露なし・試料無添加の細胞を同様に調整し、これに対する分散性をF検定にて確認後、等分散性と仮定できる場合Student'sのt検定、仮定できない場合にはWelchのt検定を用いて行った。有意水準はp<0.05とした。
結果を図8に示す。
図8に示すように正常細胞のER産生能は、紫外線曝露により低下した。しかし、紫外線によるER産生能の低下は、バラの花抽出物の前処理にて予防した。
以上の試験結果から、皮膚細胞のER産生能は、紫外線や活性酸素の曝露によって低下し、バラの花の抽出物を前処理することによって予防できることが明らかとなった。すなわちバラの花の抽出物は、皮膚の環境要因によって進行する老化を予防し回復させるということができる。
Claims (3)
- バラの花弁と胎座を含む雌蕊の抽出物を有効成分として含有する皮膚細胞のエストロゲン受容体産生促進組成物。
- バラの花弁と胎座を含む雌蕊の抽出物が、水、アルコール、またはその混合溶媒の抽出物である請求項1に記載のエストロゲン受容体産生促進組成物。
- アルコールが1,3−ブチレングリコールである請求項2に記載のエストロゲン受容体産生促進組成物。
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112006952A (zh) * | 2019-05-30 | 2020-12-01 | 株式会社爱茉莉太平洋 | 将皮肤美容液作为提取溶剂提取的玫瑰花提取物的用途 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004067590A (ja) * | 2002-08-06 | 2004-03-04 | Naris Cosmetics Co Ltd | 女性ホルモン産生促進剤及びこれを含有する皮膚外用剤 |
JP2006273811A (ja) * | 2005-03-30 | 2006-10-12 | Naris Cosmetics Co Ltd | メイラード反応阻害剤 |
JP2013014582A (ja) * | 2011-06-07 | 2013-01-24 | Ginza Tomato:Kk | バラ胎座組織培養物またはその抽出物を含有する皮膚外用剤組成物およびその製造方法、機能性食品、ならびに抗酸化用組成物 |
-
2016
- 2016-11-11 JP JP2016220912A patent/JP2018076271A/ja active Pending
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