JP2018061462A - ヒトの薬物代謝酵素誘導及び薬物動態予測が可能な新規薬物代謝酵素誘導評価方法 - Google Patents
ヒトの薬物代謝酵素誘導及び薬物動態予測が可能な新規薬物代謝酵素誘導評価方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2018061462A JP2018061462A JP2016200468A JP2016200468A JP2018061462A JP 2018061462 A JP2018061462 A JP 2018061462A JP 2016200468 A JP2016200468 A JP 2016200468A JP 2016200468 A JP2016200468 A JP 2016200468A JP 2018061462 A JP2018061462 A JP 2018061462A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- drug
- gene
- small intestine
- human
- administration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 219
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 179
- 230000006698 induction Effects 0.000 title claims abstract description 150
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 title claims abstract description 45
- 230000036267 drug metabolism Effects 0.000 title claims abstract description 30
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 188
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 188
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 claims abstract description 177
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 122
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 122
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims abstract description 112
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 89
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims abstract description 82
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 claims abstract description 54
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 claims abstract description 38
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims abstract description 29
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims abstract description 3
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 claims abstract 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 125
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 120
- 102000004328 Cytochrome P-450 CYP3A Human genes 0.000 claims description 112
- 108010081668 Cytochrome P-450 CYP3A Proteins 0.000 claims description 112
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 88
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 81
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 71
- 108091008053 gene clusters Proteins 0.000 claims description 62
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 claims description 60
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 45
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 41
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 37
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 35
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 29
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 claims description 27
- 108700021672 human CYP3A Proteins 0.000 claims description 25
- 102000054928 human CYP3A Human genes 0.000 claims description 25
- 108020005497 Nuclear hormone receptor Proteins 0.000 claims description 22
- 108020004017 nuclear receptors Proteins 0.000 claims description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 22
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 20
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims description 19
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 15
- 102100038739 Cytochrome P450 2B6 Human genes 0.000 claims description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 13
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 claims description 13
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 claims description 12
- -1 CYP1B Proteins 0.000 claims description 11
- 102100029363 Cytochrome P450 2C19 Human genes 0.000 claims description 11
- 108091006172 SLC21 Proteins 0.000 claims description 11
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 11
- 102000006255 nuclear receptors Human genes 0.000 claims description 10
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 claims description 9
- 102100024889 Cytochrome P450 2E1 Human genes 0.000 claims description 8
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 claims description 8
- 239000002676 xenobiotic agent Substances 0.000 claims description 8
- 230000002034 xenobiotic effect Effects 0.000 claims description 8
- 102100032846 Solute carrier organic anion transporter family member 1A2 Human genes 0.000 claims description 7
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 claims description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 7
- 108010012052 cytochrome P-450 CYP2C subfamily Proteins 0.000 claims description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 6
- 108091008725 peroxisome proliferator-activated receptors alpha Proteins 0.000 claims description 6
- 102100022595 Broad substrate specificity ATP-binding cassette transporter ABCG2 Human genes 0.000 claims description 5
- 102000005297 Cytochrome P-450 CYP4A Human genes 0.000 claims description 5
- 108010081498 Cytochrome P-450 CYP4A Proteins 0.000 claims description 5
- 101000823298 Homo sapiens Broad substrate specificity ATP-binding cassette transporter ABCG2 Proteins 0.000 claims description 5
- 101000957383 Homo sapiens Cytochrome P450 2B6 Proteins 0.000 claims description 5
- 101000896586 Homo sapiens Cytochrome P450 2D6 Proteins 0.000 claims description 5
- 101000909131 Homo sapiens Cytochrome P450 2E1 Proteins 0.000 claims description 5
- 101000896576 Homo sapiens Putative cytochrome P450 2D7 Proteins 0.000 claims description 5
- 102100021702 Putative cytochrome P450 2D7 Human genes 0.000 claims description 5
- 101150055214 cyp1a1 gene Proteins 0.000 claims description 5
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 5
- 108010068815 steroid hormone 7-alpha-hydroxylase Proteins 0.000 claims description 5
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 claims description 4
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 102000003849 Cytochrome P450 Human genes 0.000 claims 4
- 102100036212 Cytochrome P450 2A7 Human genes 0.000 claims 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 claims 1
- 210000002989 hepatic vein Anatomy 0.000 abstract 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 156
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 88
- 108010001511 Pregnane X Receptor Proteins 0.000 description 81
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 81
- 102000000804 Pregnane X Receptor Human genes 0.000 description 76
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 57
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 54
- JOFWLTCLBGQGBO-UHFFFAOYSA-N triazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1Cl JOFWLTCLBGQGBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- 229960003386 triazolam Drugs 0.000 description 51
- 238000011577 humanized mouse model Methods 0.000 description 44
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 43
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 43
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 38
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 38
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 37
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 32
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 28
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 description 23
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 23
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 22
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 20
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 18
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 18
- 208000000130 Cytochrome P-450 CYP3A Inducers Diseases 0.000 description 15
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 14
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 13
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 13
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 13
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 13
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- DDLIGBOFAVUZHB-UHFFFAOYSA-N midazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NC=C2CN=C1C1=CC=CC=C1F DDLIGBOFAVUZHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229960003793 midazolam Drugs 0.000 description 12
- HYAFETHFCAUJAY-UHFFFAOYSA-N pioglitazone Chemical compound N1=CC(CC)=CC=C1CCOC(C=C1)=CC=C1CC1C(=O)NC(=O)S1 HYAFETHFCAUJAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 12
- 102000034527 Retinoid X Receptors Human genes 0.000 description 11
- 108010038912 Retinoid X Receptors Proteins 0.000 description 11
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 11
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 11
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 11
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 102000016354 Glucuronosyltransferase Human genes 0.000 description 10
- 108010092364 Glucuronosyltransferase Proteins 0.000 description 10
- 102100029152 UDP-glucuronosyltransferase 1A1 Human genes 0.000 description 10
- 210000000688 human artificial chromosome Anatomy 0.000 description 10
- 238000002350 laparotomy Methods 0.000 description 10
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000004044 response Effects 0.000 description 10
- 241000894007 species Species 0.000 description 10
- 108010020070 Cytochrome P-450 CYP2B6 Proteins 0.000 description 9
- 108010061433 diazepam-binding inhibitor receptor Proteins 0.000 description 9
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 9
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 9
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 9
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108010074922 Cytochrome P-450 CYP1A2 Proteins 0.000 description 8
- 102100026533 Cytochrome P450 1A2 Human genes 0.000 description 8
- 210000000692 cap cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 101000640793 Homo sapiens UDP-galactose translocator Proteins 0.000 description 7
- 101000672037 Homo sapiens UDP-glucose:glycoprotein glucosyltransferase 2 Proteins 0.000 description 7
- 101100187479 Mus musculus Nr1i2 gene Proteins 0.000 description 7
- 101710148271 UDP-glucose:glycoprotein glucosyltransferase 1 Proteins 0.000 description 7
- 102100040361 UDP-glucose:glycoprotein glucosyltransferase 2 Human genes 0.000 description 7
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 7
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 7
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 7
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 102100038742 Cytochrome P450 2A13 Human genes 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 6
- FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N carbamazepine Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2N(C(=O)N)C2=CC=CC=C21 FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960000623 carbamazepine Drugs 0.000 description 6
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 6
- 238000010579 first pass effect Methods 0.000 description 6
- 230000004066 metabolic change Effects 0.000 description 6
- 229960005095 pioglitazone Drugs 0.000 description 6
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 6
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101150116544 CYP3A4 gene Proteins 0.000 description 5
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 5
- 108010074918 Cytochrome P-450 CYP1A1 Proteins 0.000 description 5
- 108010026925 Cytochrome P-450 CYP2C19 Proteins 0.000 description 5
- 108010000543 Cytochrome P-450 CYP2C9 Proteins 0.000 description 5
- 102100031476 Cytochrome P450 1A1 Human genes 0.000 description 5
- 102100029368 Cytochrome P450 2C18 Human genes 0.000 description 5
- 102100029358 Cytochrome P450 2C9 Human genes 0.000 description 5
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101000919360 Homo sapiens Cytochrome P450 2C18 Proteins 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 5
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 5
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 5
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 5
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 5
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 5
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 5
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 238000013213 extrapolation Methods 0.000 description 5
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 5
- 238000010842 high-capacity cDNA reverse transcription kit Methods 0.000 description 5
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 5
- KQOXLKOJHVFTRN-UHFFFAOYSA-N pleconaril Chemical compound O1N=C(C)C=C1CCCOC1=C(C)C=C(C=2N=C(ON=2)C(F)(F)F)C=C1C KQOXLKOJHVFTRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960000471 pleconaril Drugs 0.000 description 5
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 5
- GXPHKUHSUJUWKP-UHFFFAOYSA-N troglitazone Chemical compound C1CC=2C(C)=C(O)C(C)=C(C)C=2OC1(C)COC(C=C1)=CC=C1CC1SC(=O)NC1=O GXPHKUHSUJUWKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960001641 troglitazone Drugs 0.000 description 5
- GXPHKUHSUJUWKP-NTKDMRAZSA-N troglitazone Natural products C([C@@]1(OC=2C(C)=C(C(=C(C)C=2CC1)O)C)C)OC(C=C1)=CC=C1C[C@H]1SC(=O)NC1=O GXPHKUHSUJUWKP-NTKDMRAZSA-N 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 101100293261 Mus musculus Naa15 gene Proteins 0.000 description 4
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 4
- 101150082943 NAT1 gene Proteins 0.000 description 4
- 102000023984 PPAR alpha Human genes 0.000 description 4
- 101100247004 Rattus norvegicus Qsox1 gene Proteins 0.000 description 4
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 4
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 4
- 108091006731 SLCO1B1 Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 102100027233 Solute carrier organic anion transporter family member 1B1 Human genes 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 4
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 4
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 4
- 210000002230 centromere Anatomy 0.000 description 4
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 4
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 4
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 4
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 4
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 4
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 102100033350 ATP-dependent translocase ABCB1 Human genes 0.000 description 3
- 108010001202 Cytochrome P-450 CYP2E1 Proteins 0.000 description 3
- 102100039203 Cytochrome P450 3A7 Human genes 0.000 description 3
- 206010013710 Drug interaction Diseases 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000009051 Embryonal Carcinoma Diseases 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000745715 Homo sapiens Cytochrome P450 3A7 Proteins 0.000 description 3
- 101000841498 Homo sapiens UDP-glucuronosyltransferase 1A1 Proteins 0.000 description 3
- 108700021430 Kruppel-Like Factor 4 Proteins 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 101150086694 SLC22A3 gene Proteins 0.000 description 3
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 3
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 3
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 3
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 102100029819 UDP-glucuronosyltransferase 2B7 Human genes 0.000 description 3
- 101710200333 UDP-glucuronosyltransferase 2B7 Proteins 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 3
- 101150024767 arnT gene Proteins 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 210000004534 cecum Anatomy 0.000 description 3
- 238000003163 cell fusion method Methods 0.000 description 3
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 3
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 3
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 3
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 3
- 210000001589 microsome Anatomy 0.000 description 3
- 230000005937 nuclear translocation Effects 0.000 description 3
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 3
- IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N (S)-colchicine Chemical compound C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(OC)=CC=C1C1=C2C=C(OC)C(OC)=C1OC IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 102100027950 Bile acid-CoA:amino acid N-acyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 108010001237 Cytochrome P-450 CYP2D6 Proteins 0.000 description 2
- 102100036194 Cytochrome P450 2A6 Human genes 0.000 description 2
- 102100021704 Cytochrome P450 2D6 Human genes 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000957389 Homo sapiens Cytochrome P450 2A13 Proteins 0.000 description 2
- 101000875170 Homo sapiens Cytochrome P450 2A6 Proteins 0.000 description 2
- 101100187477 Homo sapiens NR1I2 gene Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010047230 Member 1 Subfamily B ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 description 2
- 101000819572 Mus musculus Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 2
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- ORNBQBCIOKFOEO-YQUGOWONSA-N Pregnenolone Natural products O=C(C)[C@@H]1[C@@]2(C)[C@H]([C@H]3[C@@H]([C@]4(C)C(=CC3)C[C@@H](O)CC4)CC2)CC1 ORNBQBCIOKFOEO-YQUGOWONSA-N 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 108091006594 SLC15A1 Proteins 0.000 description 2
- 108091006687 SLCO1A2 Proteins 0.000 description 2
- 108091006730 SLCO1B3 Proteins 0.000 description 2
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100021491 Solute carrier family 15 member 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100027239 Solute carrier organic anion transporter family member 1B3 Human genes 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 2
- 102100031358 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 2
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 2
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 2
- 239000012212 insulator Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000010226 intestinal metabolism Effects 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 108020001756 ligand binding domains Proteins 0.000 description 2
- 101150111214 lin-28 gene Proteins 0.000 description 2
- 238000000504 luminescence detection Methods 0.000 description 2
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 2
- 230000003228 microsomal effect Effects 0.000 description 2
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 2
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 2
- 238000011330 nucleic acid test Methods 0.000 description 2
- 229940126701 oral medication Drugs 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 108010082406 peptide permease Proteins 0.000 description 2
- DDBREPKUVSBGFI-UHFFFAOYSA-N phenobarbital Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O DDBREPKUVSBGFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002695 phenobarbital Drugs 0.000 description 2
- ORNBQBCIOKFOEO-QGVNFLHTSA-N pregnenolone Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 ORNBQBCIOKFOEO-QGVNFLHTSA-N 0.000 description 2
- 229960000249 pregnenolone Drugs 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 description 2
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 210000001988 somatic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 2
- NNJPGOLRFBJNIW-HNNXBMFYSA-N (-)-demecolcine Chemical compound C1=C(OC)C(=O)C=C2[C@@H](NC)CCC3=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C3C2=C1 NNJPGOLRFBJNIW-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 108010006533 ATP-Binding Cassette Transporters Proteins 0.000 description 1
- 102000005416 ATP-Binding Cassette Transporters Human genes 0.000 description 1
- 238000009020 BCA Protein Assay Kit Methods 0.000 description 1
- 108030000726 Bile acid-CoA:amino acid N-acyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101150022946 CYP3 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 108010051219 Cre recombinase Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 108010000561 Cytochrome P-450 CYP2C8 Proteins 0.000 description 1
- 102100029359 Cytochrome P450 2C8 Human genes 0.000 description 1
- 102100038696 Cytochrome P450 3A43 Human genes 0.000 description 1
- NNJPGOLRFBJNIW-UHFFFAOYSA-N Demecolcine Natural products C1=C(OC)C(=O)C=C2C(NC)CCC3=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C3C2=C1 NNJPGOLRFBJNIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100137368 Dictyostelium discoideum cypD gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 108010046276 FLP recombinase Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001035782 Gallus gallus Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102100029100 Hematopoietic prostaglandin D synthase Human genes 0.000 description 1
- 101000957698 Homo sapiens Cytochrome P450 3A43 Proteins 0.000 description 1
- 101000899111 Homo sapiens Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 101100298362 Homo sapiens PPIG gene Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000009015 Human TaqMan MicroRNA Assay kit Methods 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102000016397 Methyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 102100021339 Multidrug resistance-associated protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091006688 Organic zwitterions/cation transporters Proteins 0.000 description 1
- 101150009380 PPIF gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 102100034943 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase F, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 208000020584 Polyploidy Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 1
- 108091006275 SLC5A7 Proteins 0.000 description 1
- 101100222691 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) CPR3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100276454 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) CYC7 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N Uridindiphosphoglukose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC1C(O)C(O)C(N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDYANYHVCAPMJV-UHFFFAOYSA-N Uridine diphospho-D-glucuronic acid Natural products O1C(N2C(NC(=O)C=C2)=O)C(O)C(O)C1COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O HDYANYHVCAPMJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-DVKNGEFBSA-N alpha-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-DVKNGEFBSA-N 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960001338 colchicine Drugs 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- JVHIPYJQMFNCEK-UHFFFAOYSA-N cytochalasin Natural products N1C(=O)C2(C(C=CC(C)CC(C)CC=C3)OC(C)=O)C3C(O)C(=C)C(C)C2C1CC1=CC=CC=C1 JVHIPYJQMFNCEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMAODHOXRBLOQO-UHFFFAOYSA-N cytochalasin-A Natural products N1C(=O)C23OC(=O)C=CC(=O)CCCC(C)CC=CC3C(O)C(=C)C(C)C2C1CC1=CC=CC=C1 ZMAODHOXRBLOQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000008406 drug-drug interaction Effects 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004331 embryonal carcinoma stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000001842 enterocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000003028 enzyme activity measurement method Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013210 evaluation model Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000003633 gene expression assay Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 210000002980 germ line cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001368 germline stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000023611 glucuronidation Effects 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 102000056262 human PPIG Human genes 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 210000003405 ileum Anatomy 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 210000001853 liver microsome Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000415 mammalian chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006241 metabolic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 108700028732 mouse CYP3A Proteins 0.000 description 1
- 108010066052 multidrug resistance-associated protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 210000005088 multinucleated cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003533 narcotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000032696 parturition Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002974 pharmacogenomic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 235000020004 porter Nutrition 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000002363 skeletal muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009044 synergistic interaction Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 108091035539 telomere Proteins 0.000 description 1
- 102000055501 telomere Human genes 0.000 description 1
- 210000003411 telomere Anatomy 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVWQQPYHYQKEIZ-UHFFFAOYSA-K trisodium;2-dodecylbenzenesulfonate;3-dodecylbenzenesulfonate;4-dodecylbenzenesulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].CCCCCCCCCCCCC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1.CCCCCCCCCCCCC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1.CCCCCCCCCCCCC1=CC=CC=C1S([O-])(=O)=O AVWQQPYHYQKEIZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 238000004017 vitrification Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
マウス作製には臓器・細胞移植を行うことで随時作製を行わなければならない。生産コストが高い。マウス肝機能は移植したヒト肝細胞に依存し個体差が多い。移植した組織でのみヒト特異的遺伝子発現を示し、それ以外の組織はマウス由来である。100%置換されるのではなく、マウス由来肝細胞が残存し、マウス遺伝子を発現する。免疫不全マウスを使用しているため系統維持が難しい。
雌雄交配によって、個体を繁殖することが可能であり、半永久的に利用可能なモデルである。そのため臓器移植モデルマウスと比較して生産コストが低い。系統化可能で個体差が少ない。搭載したヒト遺伝子を発現可能な様々な組織でヒト特異的遺伝子発現を示す。中でもヒト肝臓移植ヒト化マウスと比較すると、全ての肝細胞でヒト遺伝子を発現する。ノックアウト動物をコントロールに置くことができる。免疫が損なわれていない。さらに、事業化・産業利用を考える上では、コストが安く、生産性が良く、再現性が高いことから非常に有用なツールとみなすことができる。
従来法による遺伝子導入では複数種類の遺伝子を導入することが難しく、また特定の遺伝子をヒト化するのみであった。またそのため、複数の遺伝子間相互作用を見ることが困難であり、ヒト予測には工夫が必要であり、予測系の開発が困難であった。
2)一定のコピー数で安定に保持される。したがって、発現させたい遺伝子量を厳密に制御可能である。
3)宿主核内に半永久的に保持される。したがって、半永久的に持続利用可能なモデルを作製可能である。
4)宿主染色体に挿入されない。したがって、宿主機能を損なわず遺伝子導入可能である。
(2)上記ヒト薬物代謝酵素遺伝子もしくは遺伝子クラスターが、チトクロムP450(CYP)ファミリーに属する酵素遺伝子もしくは遺伝子クラスターを含む、(1)に記載の方法。
(3)上記ヒト薬物代謝酵素遺伝子もしくは遺伝子クラスターが、ヒトにおける薬物代謝の第二相反応に関わる酵素の遺伝子もしくは遺伝子クラスターを含む、(1)に記載の方法。
(4)上記CYPファミリーに属する酵素遺伝子もしくは遺伝子クラスターが、CYP1A、CYP1B、CYP2A、CYP2B、CYP2C、CYP2D、CYP2E、CYP2J、CYP3A、CYP4A、CYP4B、あるいは、それらのサブファミリーの遺伝子もしくは遺伝子クラスターである、(2)に記載の方法。
(5)上記第二相反応に関わる酵素の遺伝子もしくは遺伝子クラスターが、UGT、あるいは、そのサブファミリーの遺伝子である、(3)に記載の方法。
(6)上記CYPファミリーに属する酵素遺伝子もしくは遺伝子クラスターが、ヒトCYP3A遺伝子クラスターを含む、(2)又は(4)に記載の方法。
(7)上記薬物動態関連遺伝子がヒト化核内受容体(Xenobiotic receptor)遺伝子をさらに含む、(1)〜(6)のいずれかに記載の方法。
(8)上記ヒト化核内受容体遺伝子が、AHR、CAR、CAR/PXR、PXR及びPPARαの遺伝子からなる群から選択される少なくとも1つの遺伝子である、(7)に記載の方法。
(9)上記薬物動態関連遺伝子がヒト化薬物トランスポーター遺伝子をさらに含む、(1)〜(8)のいずれかに記載の方法。
(10)上記ヒト化薬物トランスポーター遺伝子が、MDR、MRP、OAT、OATP、OCT、BCRP、PEPT、及びそれらのサブファミリーからなる群から選択される少なくとも1つの遺伝子である、(9)に記載の方法。
(11)上記薬物動態関連遺伝子が、ヒトCYP3A遺伝子クラスター及びヒト化PXR遺伝子を含む、(1)〜(10)のいずれかに記載の方法。
(12)上記非ヒト哺乳動物がげっ歯類である、(1)〜(11)のいずれかに記載の方法。
(13)上記げっ歯類がマウス又はラットである、(12)に記載の方法。
(14)上記門脈血の採取及び測定を薬物投与後に行う、好ましくは薬物投与後24時間以内に行う、(1)〜(13)のいずれかに記載の方法。
(15)上記門脈血の採取及び測定を、連日の薬物投与後に行う、あるいは連日の薬物投与後試験の24時間以内に追加投与した後に行う、(1)〜(13)のいずれかに記載の方法。
(17)上記動物から小腸組織あるいは細胞を取り出して得られた小腸サンプルを用いて遺伝子発現解析を行う、該小腸サンプルと薬物を共存させることで行われる反応、ならびに、該小腸サンプルを用いた上記薬物の未変化体及び代謝物を測定すること、をさらに含む、(1)〜(15)のいずれかに記載の方法。
(18)上記小腸サンプルが凍結された小腸サンプルである、(16)又は(17)に記載の方法。
(19)上記動物から肝臓組織あるいは細胞を取り出して得られた肝臓サンプルを用いて遺伝子発現解析及び/又はタンパク質発現解析を行う、ならびに、該肝臓サンプルと薬物を共存させることで行われる反応、該肝臓サンプルを用いた上記薬物の未変化体及び代謝物を測定することをさらに含む、(1)〜(15)のいずれかに記載の方法。
(20)上記肝臓サンプルが凍結された肝臓サンプルである、(19)に記載の方法。
(21)上記動物から全身循環血を採取し、該全身循環血を用いて代謝酵素誘導による上記薬物の未変化体及び代謝物の量及び/又は薬物動態を測定し、肝臓及び小腸における代謝酵素誘導を評価すること、ならびに上記薬物の薬物動態パラメーターを算出すること、をさらに含む、(1)〜(20)のいずれかに記載の方法。
(22)上記動物からの小腸サンプルにおいて、上記薬物代謝酵素遺伝子の発現量、タンパク質の発現量又は酵素活性を測定し、小腸及びin vivoにおける代謝酵素誘導を評価することをさらに含む、(1)〜(21)のいずれかに記載の方法。
(23)上記動物からの肝組織又は肝細胞からなる肝サンプルにおいて、上記薬物代謝酵素遺伝子の発現量、タンパク質の発現量又は酵素活性を測定し、肝臓及びin vivoにおける代謝酵素誘導を評価すること、ならびに薬物動態パラメーターを算出することをさらに含む、(1)〜(21)のいずれかに記載の方法。
(24)上記動物からの肝サンプル及び小腸サンプルにおいて、上記薬物代謝酵素遺伝子の発現量、タンパク質の発現量又は酵素活性を測定し、in vivoにおける代謝酵素誘導を評価することをさらに含む、(1)〜(21)のいずれかに記載の方法。
(25)薬物の全身循環血中濃度の時間変化を測定して決定された血中濃度-時間曲線下部面積(AUC)、クリアランス(CL)、平均体内貯留時間(MRT)、半減期(t1/2)、及び分布体積(V)からなる群から選択される少なくとも1つの薬物動態パラメーターを用いてヒトへ外挿し及び評価することをさらに含む、(1)〜(24)のいずれかに記載の方法。
(26)薬物の全身循環血中濃度の時間変化を測定して決定された血中濃度−時間曲線下部面積(AUC)減少率(%)及び上記薬物動態パラメーターの使用を含む薬物動態学的解析を行うことをさらに含む、(1)〜(25)のいずれかに記載の方法。
(27)上記の測定によって得られたデータを、ヒトにおける薬物代謝酵素誘導及び/又は薬物動態との相関性を確認し、ヒト臨床へ外挿することをさらに含む、(1)〜(26)のいずれかに記載の方法。
1.1 薬物動態関連ヒト遺伝子
本発明で使用可能な薬物動態関連ヒト遺伝子は、例えば上記の非特許文献29(Scheer, N. and Wilson, I.D. Drug Discovery Today 21(2), 250-262, 2016)に記載されるものを包含する。
核内受容体は、種々の薬物をリガンドとすることが可能であり、この受容体を介して薬物代謝酵素あるいは薬物トランスポーターが誘導される。また核内受容体の多くはそれ単独で転写活性能を有するのではなく、複数のタンパクと複合体を形成することではじめて転写活性を有するものがある。それゆえ、核内受容体遺伝子及び核内受容体と複合体を形成する遺伝子を薬物代謝酵素遺伝子と組み合わせてヒト化モデル動物の体内で発現させることによって代謝酵素誘導及び薬物動態関連遺伝子誘導が効率化される可能性が高い。
薬物代謝酵素は、第一相反応に関わる酵素と第二相反応に関わる酵素を含む。
第一相反応に関わる酵素は、例えば、CYP1A、CYP1B、CYP2A、CYP2B、CYP2C、CYP2D、CYP2E、CYP2J、CYP3A、CYP4A、CYP4B、これらのサブファミリー、例えばCYP1A1、CYP1A2、CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C18、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4、CYP3A5、CYP3A7など並びに、CESなどであるが、これらに限定されない。
異物であると認識された薬物が細胞膜を細胞内から細胞外へ、又は細胞外から細胞内へ通過する際に必要な生体内因子が薬物トランスポーターという膜タンパク質である。薬物トランスポーターは、有機薬物トランスポーター(OCT、OCTNなど)ファミリー、ABCトランスポーターファミリー(MDR,MRPなど)、ペプチドトランスポーター(PEP)ファミリー、肝由来有機アニオントランスポーターファミリー(OAT)、アミノ酸・ポリアミン・コリントランスポーター(LAT、BATなど)ファミリーに分類されることが知られている(遠藤仁,日薬理誌,116, 114-124, 2000)。
本発明では、ヒト化モデル動物において薬物代謝を効率的に行うようにするために、ヒト薬物代謝酵素の遺伝子と、ヒト化核内受容体遺伝子及び/又はヒト化薬物トランスポーター遺伝子とを組み合わせて複合型ヒト化遺伝子を発現するモデル動物を作製することができる。そのような複合型モデルは、例えばCYP3A4/PXR、CYP3A4/PXR/CAR、CYP3A4/PXR/PXR、CAR/PXR/CYP3A4/3A7、CYP2C9/CYP2C19/PXR、CYP1A2/AHR、CYP2B6/CAR、CYP3A/PXR/CYP1A2/AHR/CYP2B6/CAR、CYP3A4/MDR、CYP3A4/MDR/PXR、CYP3A4/MDR/PXR/CAR、CYP3A4/MDR/PXR/RXR、CYP3A4/UGT、CYP3A4/UGT/PXR/CAR、CYP3A4/UGT/PXR/RXR、などであるが、これらに限定されない。
上記の薬物動態関連ヒト酵素の遺伝子もしくは遺伝子クラスターをベクターに組み込む工程、該遺伝子もしくは遺伝子クラスターを含むベクターを非ヒト動物のES細胞又はiPS細胞に導入する工程、該ベクターを含む細胞を上記動物と同種のメス動物の受精卵内に顕微注入し、該受精卵を該メス動物の子宮に移植する工程、該メス動物からキメラ動物を出産させ、上記ヒト酵素の遺伝子もしくは遺伝子クラスターを保持する動物を選抜する工程を含む方法によって、上記薬物動態関連ヒト酵素の遺伝子もしくは遺伝子クラスターを保有する非ヒト動物を作製する。この非ヒト動物を、同じ薬物動態関連の対応する非ヒト動物酵素の遺伝子もしくは遺伝子クラスターを欠損する同種の非ヒト動物と交配させて子動物を出産させ、完全ヒト化動物を選抜する。Kazuki Y et al. Hum Mol Genet 22:578-92, 2013及び特許第5557217号参照。
一般にヒトにおける薬物代謝について、例えば経口投与された薬物(すなわち、医薬、食品成分等)が消化管(食道、胃及び小腸)を通って小腸から吸収され、血液を介して門脈、肝臓へと運搬され、そのあと血液によって全身へと送られ、薬効を発揮したのち、水溶性の代謝物等が尿として腎臓から排出される。このとき、肝臓及び小腸は、薬物を代謝するための薬物代謝酵素を発現する。
本発明は、小腸領域における薬物代謝酵素誘導による代謝変動が、門脈血における薬物の未変化体及び代謝物の測定によって解析できるという知見に基づいている。本発明の方法で測定すると、小腸での代謝酵素誘導がない場合、肝臓へ到達する薬物の約50%が小腸で代謝を受ける、一方小腸での代謝酵素誘導が起こる場合、薬物の約70%が代謝を受ける。
第1ステップでは、ヒト化遺伝子改変モデル非ヒト哺乳動物に薬物を経口投与する。
薬物は、経口製剤からなる医薬、食品成分、麻薬等の有害物質、あるいはそれと同様の性質をもつ物質や候補物質であり、既知の物質だけでなく開発中の物質も包含する。薬物は、親水性又は脂溶性のいずれでもよく、また、1種類もしくは2種類以上の薬物を同時に又は間隔をとって投与してもよい。2種類以上の薬剤の投与は、併用投与による薬物間相互作用を予測することができる場合がある。
薬物を含む製剤についても、動物が食べやすいような形態であれば制限はない。
第2ステップでは、上記動物から門脈血サンプルを採取する。
本明細書で使用する「門脈」という用語は、肝門脈を指す。肝臓に流入する血液の70%が門脈血であり、残りが動脈血である。
第3ステップは、上記門脈血を用いて代謝酵素誘導による該薬物の未変化体及び代謝物の量を測定する。
第4ステップは、上記測定値を用いて小腸における代謝酵素の誘導を評価する。
本明細書で使用する「小腸」という組織部位の分類は、本来組織学的に十二指腸・空腸・回腸の3箇所に区分されるが、本明細書では簡便のため小腸は胃直下部から盲腸までを3等分にし、「小腸上部」、「小腸中部」、「小腸下部」と呼称する。また、小腸各部位はさらに10等分にし、上部から順にナンバリングを行った。
本発明の実施形態により、上記方法は、上記ヒト化モデル動物から全身循環血を採取し、該全身循環血を用いて代謝酵素誘導による薬物の未変化体及び代謝物の量及び/又は薬物動態を測定し、肝臓における代謝酵素誘導を評価することをさらに含む。
摂取された薬物は、消化管などから吸収され門脈に入ると、全身を循環する前に肝臓を通過する。このとき、小腸及び肝臓などの代謝酵素によって、服用した薬物が代謝されることを初回通過効果という。この過程は薬物が薬効を示すために末梢血へ移行可能な化合物量を表し、バイオアベイラビリティーを表すための指標として用いられる。従って、小腸全長における薬物代謝酵素誘導による代謝変動及びそれを経由して行われる肝臓における薬物代謝酵素誘導による代謝変動による総合的な代謝変動が、肝静脈血における薬物の未変化体及び代謝物の測定によって解析できる。
薬物代謝とは、体外から取り込んだ、あるいは体内で産生された、からだにとって有害な物質(すなわち異物(Xenobiotic))を分解し排出するための代謝反応の総称である。有害物質を分解し親水性(水溶性)の代謝物に変換することによって腎臓から尿として排出するため、一種の解毒作用も有する。そのため、尿中及び胆汁中における未変化体及びその代謝物を測定することは、化合物の毒性及び安全性評価にも重要な知見を与える。
代謝酵素の発現は肝臓と小腸が中心であるが、全身の細胞に薬物動態関連遺伝子は存在することから、その代謝部位は肝臓及び小腸に制限されない。そのことから、被検物質である薬物の投与方法としても特に制限されず、経口投与以外の投与経路を例示することも可能である。したがって、本発明の方法は、上記動物への薬物の投与方法を経口投与から変更し、静脈内投与、動脈内投与、リンパ管内投与、筋肉内投与、腹腔内投与するなどのステップ、該動物から門脈血、肝静脈血、心血、全身循環血、尿及び胆汁などのサンプルを採取するステップを含み、測定手順は、上記と同様に薬物の未変化体及び代謝物の量を測定することができる。
これまで小腸における代謝酵素誘導を評価系に使用することは提案されたことがないため、ヒト小腸における代謝酵素誘導にかかる時間や影響を解析することができなかった。本発明者らは、小腸における薬物投与のタイミングによる薬物代謝変動への影響を、小腸反転法を用いて解析できることを見出した。このとき小腸を一定間隔で輪切りにし、CYP発現測定により小腸上部、小腸中部、小腸下部での代謝酵素活性を調べた結果、常時高発現する上部では、代謝酵素誘導変化は相対的に小さいが、一方、常時低発現である下部では、代謝酵素誘導変化は相対的に大きいことが分かった(図10)。また、小腸における代謝酵素誘導は、小腸部位によって大きく異なり、全体として均一な発現分布をとる(図8)。
本発明の方法は、上記動物からの腸細胞及び/又は肝細胞の少なくとも1つのサンプルにおいて、上記薬物の代謝酵素遺伝子の発現量を測定し、小腸及び/又は肝臓における代謝酵素誘導を評価することをさらに含むことができる。
本発明の方法は、上記動物からの小腸組織サンプル及び腸細胞を凍結保存することで、in vitroの代謝酵素誘導評価及び薬物動態評価に利用可能な方法を提供することが可能である。凍結保存法の具体的な方法としては、既存のCELLBANKER(日本全薬工業)を用いた凍結保存法及びガラス化凍結法などであるが、これらに限定されない。
薬物動態は、投与された薬物が、吸収、分布、代謝、排泄されるまでの、体内での薬物の動きを指し、通常、最高血中濃度、最高血中濃度到達時間、血中濃度半減期及び血中濃度曲線下部面積から薬物の動態を評価する(実施例の表3、表4参照)。
後述の実施例では、6種類の化合物におけるCYP3A4誘導性化合物のRIS値(in vitro)と臨床におけるミダゾラムのAUC変化(in vivo)についてシグモイドプロットを作成し、ヒト肝細胞でこの近似曲線から未知化合物のRIS値を算出し、臨床におけるAUC変化を非常に高い相関で推定できることを見出した(図6)。
本試験で使用されることが予想される化合物(薬物)は、既知のもの、あるいは新たに見いだされたものなどを含む。既知の化合物の例として、Cytochrome P450 database(URL:http://bioinformatics.charite.de/supercyp/)に記載される化合物が挙げられるが、これに限定しない。
本発明はさらに、上記2に記載した評価法に使用するための評価キットを提供する。
評価キットには、例えば、代謝酵素遺伝子発現量測定用キット、代謝酵素活性測定用キット、薬物動態パラメーター算出用ソフト、使用説明書など、場合によりヒト化遺伝子改変モデル非ヒト動物、を含めることができる。
以下の実施例で用いられたヒト化CYP3Aクラスター/PXRマウスは、マウス内在性Cyp3aクラスターを破壊し、ヒトCYP3Aクラスターをマウス人工染色体ベクターにより導入されたTranschromosomic(Tc)マウス系統(Kazuki Y et al. Hum Mol Genet 22:578-92, 2013及び特許第5557217号参照)と、マウス内在性PXR(pregnane X receptor)のリガンド結合領域をヒト配列に置き換えられたマウス系統(Igarashi et al. J Toxicol Sci 37: 373-380, 2012参照)を交配して樹立した(図1)。
実施例1で作製されたマウスが、種特異的な代謝酵素誘導能を獲得したことを確認するために、ヒト特異的PXRに作用するリファンピシン(RIF)あるいはマウス特異的PXRに作用するpregnenolone 16a-carbonitrile(PCN)を前投与し、それによってCYP3A4発現にどのような影響を与えるか検討した。
100mM Potassium phosphate buffer(pH7.4) 316μL
300mM MgCl2 4μL
5×NADPH regenerating system(XenoTech) 80μL
トリアゾラム(最終濃度200μM) 0.4μL
合計 400.4μL
ヒト化マウス(雄性、10週齢)に、40-50mg/kgペントバルビタール麻酔薬を腹腔内投与し、開腹後、肝静脈を露出させた。あらかじめ37℃に温めた肝細胞調製液I(5g/L NaCl、0.4g/L KCl、0.21g/L MgCl2・6H2O、0.21g/L MgSO4・7H2O、0.08g/L NaH2PO4・2H2O、0.06g/L Na2HPO4、2.88g/L HEPES、0.19g/L EGTA、0.35g/L NaHCO3、0.9g/L D (+)-Glucose、pH7.2)を5-10分間還流することで、肝臓中の血液を置換した。次にあらかじめ37℃に温めた肝細胞調製液II(8g/L NaCl、0.4g/L KCl、0.74g/L CaCl2・2H2O、0.08g/L NaH2PO4・2H2O、0.06g/L Na2HPO4、2.38g/L HEPES、0.35g/L NaHCO3、0.1g/L type I collagenase、0.1g/L trypsin inhibitor、pH7.5)を5-10分間還流した。前述のコラゲナーゼ処理によって肝細胞が軽くほぐれることを確認した後に、マウスから肝臓を摘出した。摘出した肝臓は、あらかじめ肝臓一時保存培地(Williams E medium、10% fetal bovine serum、1% dimethyl sulfoxide、10nM dexamethasone、100IU/mL penicillin、100μg/mL streptomycin)を9mL加えた100mm dishへと移し、ハサミを使い細切した。培地が軽く濁ることを確認した後、培地を40μmフィルターへ通すことで単離した細胞を分取した。その後、細胞は室温にて、500×g、1分間遠心し、上清をアスピレートした。このとき肝細胞播種用培地を適当量加え、懸濁したあと、一部細胞を使いトリパンブルー染色を行った。前述のトリパンブルー染色の結果から求められた細胞数から、細胞が肝細胞播種用培地に対して1×105 cells/mLとなるように濃度を調製した。その後、肝細胞はtype-I collagen-coated 24-well plates (BD Bioscience, San Jose, CA)上に500μLずつ播種し、37℃、4時間、5%CO2インキュベーターにて静置した。4時間後、プレートを取り出し、非接着細胞をアスピレートすることで取り除き、肝細胞培養培地(Williams E medium、10% fetal bovine serum、1% dimethylsulfoxide、100IU/mL penicillin、100μg/mL streptomycin)に培地交換し、試験まで48時間、37℃、5%CO2インキュベーター内に静置した。
CYP3A4_R, TGCATCAATTTCCTCCTGCAG(配列番号2)
Nat1-U283, ATTCTTCGTTGTCAAGCCGCCAAAGTGGAG(配列番号3)
Nat1-L476: AGTTGTTTGCTGCGGAGTTGTCATCTCGTC(配列番号4)
式中、RISは相対誘導スコアを表し、Ceff・freeは血中有効濃度を表し、Emaxは最大誘導倍率を表し、EC50は50%効果濃度を表す。
試験の結果いずれの化合物においても誘導剤濃度依存的な遺伝子発現の上昇が認められた(表2)。
上記ヒト化マウス(雄性、10週齢)に、組織摘出試験前の72、48、24時間前にCYP3A4誘導剤であるリファンピシンを10mg/kg経口投与した。また、誘導剤を溶解した溶媒(0.5% カルボキシメチルセルロース)のみを経口投与したものをコントロールにおいた。解剖当日、マウスを安楽死処置し、直ちに開腹処置後に小腸を摘出した。さらに小腸は30等分にし、胃直下から順にナンバリングを行った。その後、回収した組織からmRNAの回収はRNA抽出キットRNeasy Mini Kit(Qiagen)のプロトコールに従って行った。次にRNAを2μg用いて、High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA)を用いて逆転写を行い、cDNA合成を行った。Real-time PCR解析はサーマルサイクラーABI 7500 Fast Real-Time PCR SYBR greenを使用し、ΔΔCt法を用いて解析を行った。試験に使用したプライマー配列は次の通りである。
CYP3A4_R, 前述配列番号2
Nat1-U283, 前述配列番号3
Nat1-L476: 前述配列番号4
上記ヒト化マウス(雄性、10週齢)に、採血試験の72、48、24時間前にCYP3A4誘導剤であるリファンピシンを10mg/kg経口投与した。また、誘導剤を溶解した溶媒(0.5%カルボキシメチルセルロース)のみを経口投与したものをコントロールにおいた。試験当日に誘導剤にて処置したヒト化マウスにトリアゾラムを1mg/kg条件にて経口投与した。その12分後にペントバルビタール麻酔薬40-50mg/kg腹腔投与し、開腹後に小腸を腹腔外部へ摘出することで門脈を露出させた。先端をヘパリン充填した24G針にて採血した。血液は、10,000×g、4℃の条件で、10分間の遠心分離を行った。得られた血漿は、別のチューブに移した。その後、血漿と等量のアセトニトリルを添加し、ボルテックス後、再度10,000×g、4℃の条件で、10分間の遠心分離を行った。その後、上清を別のチューブに移し、HPLCによる測定まで-80℃にて保存した。
上記ヒト化マウス(雄性、10週齢)に、組織摘出試験前の72、48、24時間前にヒト臨床にて知られている強さが異なるCYP3A4誘導剤であるプレコナリル、ピオグリタゾン、トログリタゾン、フェノバルビタール、カルバマゼピン、リファンピシンをそれぞれ10mg/kgを経口投与した。また、誘導剤を溶解した溶媒(0.5%カルボキシメチルセルロース)のみを経口投与したものをコントロールにおいた。解剖当日、ヒト化マウスを安楽死処置し、小腸及び肝臓を摘出した。さらに小腸は3等分にし、小腸上部、中部、下部とした。その後、回収した組織からmRNAの回収はRNA抽出キットRNeasy Mini Kit (Qiagen)のプロトコールに従って行った。次にRNAを2μg用いて、High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA)を用いて逆転写を行い、cDNA合成を行った。Real-time PCR解析はサーマルサイクラーABI 7500 Fast Real-Time PCR SYBR greenを使用し、ΔΔCt法を用いて解析を行った。試験に使用したプライマー配列は次の通りである。
CYP3A4_R, 前述配列番号2
Nat1-U283, 前述配列番号3
Nat1-L476: 前述配列番号4
上記のヒト化マウス(雄性、10週齢)に、採血試験の72、48、24時間前にヒト臨床にて知られている強さが異なるCYP3A4誘導剤であるプレコナリル、ピオグリタゾン、トログリタゾン、フェノバルビタール、カルバマゼピン、リファンピシンをそれぞれ10mg/kgを経口投与した。また、誘導剤を溶解した溶媒(0.5%カルボキシメチルセルロース)のみを経口投与したものをコントロールにおいた。試験当日にあらかじめ誘導剤にて処置したヒト化マウスへミダゾラムあるいはトリアゾラムを1mg/kg条件にて経口投与した。その後に、0.5、1、2、4、6時間後にヘパリンナトリウム処理したガラス毛細管(Drummond Scientific. Company, PA, USA)を用いて眼窩静脈叢より採血した。血液は、10,000×g、4℃の条件で、10分間の遠心分離を行った。得られた血漿は、別のチューブに移した。その後、血漿と等量のアセトニトリルを添加し、ボルテックス後、再度10,000×g、4℃の条件で、10分間の遠心分離を行った。その後、上清を別のチューブに移し、HPLCによる測定まで-80℃にて保存した。
上記のヒト化マウス(雄性、10週齢)に、採血試験の72、48、24時間前にCYP3A4誘導剤であるリファンピシンを10、30、あるいは60mg/kgの用量で経口投与した。また、誘導剤を溶解した溶媒のみを経口投与したものをコントロールにおいた。試験当日にトリアゾラムを1mg/kg条件にて経口投与し、0.5、1、2、4、6時間後にヘパリンナトリウム処理したガラス毛細管(Drummond Scientific. Company, PA, USA)を用いて眼窩静脈叢より採血した。血液は、10,000×g、4℃の条件で、10分間の遠心分離を行った。得られた血漿は、別のチューブに移した。その後、血漿と等量のアセトニトリルを添加し、ボルテックス後、再度10,000×g、4℃の条件で、10分間の遠心分離を行った。その後、上清を別のチューブに移し、HPLCによる測定まで-80℃にて保存した。
[1] 小腸におけるCYP3A4発現分布の確認
上記のヒト化マウス(雄性、10週齢)を安楽死処置し、小腸及び肝臓を摘出した。さらに小腸は30等分にし、胃直下から順にナンバリングを行った。その後、回収した組織からmRNAの回収はRNA抽出キットRNeasy Mini Kit (Qiagen)のプロトコールに従って行った。次にRNAを2μg用いて、High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA)を用いて逆転写を行い、cDNA合成を行った。Real-time PCR解析はサーマルサイクラーABI 7500 Fast Real-Time PCR SYBR greenを使用し、ΔΔCt法を用いて解析を行った。試験に使用したプライマー配列は次の通りである。
CYP3A4_R, 前述配列番号2
Nat1-U283, 前述配列番号3
Nat1-L476: 前述配列番号4
上記のヒト化マウス(雄性、10週齢)に、組織摘出試験前の1、2、4、8、12、16あるいは24時間前のいずれかの時間にCYP3A4誘導剤であるリファンピシンを10mg/kg経口投与した。また、また、リファンピシンを投与しないものをコントロールに置き、誘導剤投与0hとした。解剖当日、マウスを安楽死処置し、直ちに開腹処置後に小腸を摘出した。以下の操作は断りが無い限り、すべて氷上で行った。まず小腸は3等分に切断し、上段、中断、下段と分類した。その後、小腸直径に収まる大きさのシリコンチューブを、小腸管腔に挿入し、シリコンチューブを這わせることで反転させた。これを上段、中断、下段すべてに行った。次に反転した小腸サンプルは、それぞれ10等分した。最終的に合計30個の小腸断片を入手し、胃直下部(上部)から順にナンバリングを行い、サンプル回収用エッペンにいれ、液体窒素に急速凍結を行った。サンプルは試験まで液体窒素あるいは-80℃にて保存した。
100mM Potassium phosphate buffer(pH7.4) 316μL
300mM MgCl2 4μL
5×NADPH regenerating system (XenoTech) 80μL
1000×substrate 0.4μL
合計 400.4μL
上記のヒト化マウス(雄性、10週齢)に、組織摘出試験前の1、2、4、8、12、16あるいは24時間前のいずれかの時間にCYP3A4誘導剤であるリファンピシンを10mg/kg経口投与した。また、リファンピシンを投与しないものをコントロールに置き、誘導剤投与0hとした。試験当日にヒト化マウスにトリアゾラムを1mg/kg条件にて経口投与した。その12分後にペントバルビタール麻酔薬40-50mg/kg腹腔投与し、開腹後に小腸を腹腔外部へ摘出することで門脈を露出させた。先端をヘパリン充填した24G針にて門脈より採血した。その後、腹部大静脈より、同様に先端をヘパリン充填した24G針にて門脈より採血した。血液は、10,000×g、4℃の条件で、10分間の遠心分離を行った。得られた血漿は、別のチューブに移した。その後、血漿と等量のアセトニトリルを添加し、ボルテックス後、再度10,000×g、4℃の条件で、10分間の遠心分離を行った。その後、上清を別のチューブに移し、HPLCによる測定まで-80℃にて保存した。
上記のヒト化マウス(雄性、10週齢)に、組織摘出試験前の0、1、2、4、8、12、16あるいは24時間前のいずれかの時間にCYP3A4誘導剤であるリファンピシンを10mg/kg経口投与した。また、リファンピシンを投与しないものをコントロールに置き、誘導剤投与0hと表記した。試験当日にヒト化マウスにトリアゾラムを1mg/kg条件にて経口投与した。その12分後にペントバルビタール麻酔薬40-50mg/kg腹腔投与し、開腹後に小腸を腹腔外部へ露出させた。その後、15分後に小腸各部位(上部、中部、下部)を1 cm程度切り出した。切り出した小腸断片は、冷MilliQを500μL中にて、ホモジナイザーを用いて、組織を完全にすり潰した。その後、4℃、15,000×gの条件にて遠心を10分間行い、上清400μLを回収した。サンプルはHPLC用除タンパク操作あるいはタンパク定量操作まで、-80℃で保存した。
上記のヒト化マウス(雄性、10週齢)に、組織摘出試験前の72、48、24時間及び0、4あるいは24時間前のいずれかの時間にCYP3A4誘導剤であるリファンピシンを10mg/kg経口投与した。また、リファンピシンを溶解した溶媒のみを経口投与したものをコントロールにおいた。解剖当日、マウスを安楽死処置し、直ちに開腹処置後に小腸を摘出した。まず小腸は3等分に切断し、上段、中断、下段と分類した。その後小腸各部位を1 cm程度に輪切りし、10%ホルムアルデヒドに浸し、組織を固定した。固定サンプルはキシレンにて5分間、3回すすぐことで脱パラフィン操作を行った。その後100% エタノール、90% エタノール、80% エタノール、70% エタノール、MilliQの順番にて5分間洗浄した。次に3% Hydrogen Peroxideを10分間、室温にて反応させて、その後MilliQにて5分間洗浄した。次に1% BSA in TPBS(0.1% Tween20)にて25分間、室温にて反応させた。一次抗体CYP3A4(Human),(Rabbit Polyclonal, dilution 1:1500 Diluent: 1%BSA in MilliQ)あるいはPXR (Human)(Rabbit Polyclonal, dilution 1:1500 Diluent: 1%BSA in MilliQ)を室温にて1時間反応させ、その後MilliQにて5分間洗浄した。次に、室温にて10分間DABし、その後MilliQにて簡単に洗浄した。化学染色後のサンプルはHematoxylinに室温で1分間染色し、その後MilliQにてよく洗浄した。最後にサンプルは脱水し、封入操作を行うことで免疫染色標本スライドとした。
本試験では、上述の誘導時間の影響がすでに連続投与された誘導された代謝酵素変動に相加的な上昇を与えるかについて検討した。上記のヒト化マウス(雄性、10週齢)は、組織摘出試験前の3日間(72、48、24時間前)、3日間+4時間前(72、48、24、4時間前)いずれかの条件にてCYP3A4誘導剤であるリファンピシンを10mg/kg経口投与した。また、リファンピシンを溶解した溶媒のみを経口投与したものをコントロールにおいた。試験当日にヒト化マウスにトリアゾラムを1mg/kg条件にて経口投与した。その12分後にペントバルビタール麻酔薬40-50mg/kg腹腔投与し、開腹後に小腸を腹腔外部へ摘出することで門脈を露出させた。先端をヘパリン充填した24G針にて採血した。血液は、10,000×g、4℃の条件で、10分間の遠心分離を行った。得られた血漿は、別のチューブに移した。その後、血漿と等量のアセトニトリルを添加し、ボルテックス後、再度10,000×g、4℃の条件で、10分間の遠心分離を行った。その後、上清を別のチューブに移し、HPLCによる測定まで-80℃にて保存した。
本試験では、前述の相加的代謝変動の影響がin vivo薬物動態に対しても相加的な影響を与えるのかについて検討した。上記のヒト化マウス(雄性、10週齢)は、組織摘出試験前の3日間(72、48、24時間前)、3日間+4時間前(72、48、24、4時間前)いずれかの条件にてCYP3A4誘導剤であるリファンピシンを10mg/kg経口投与した。また、リファンピシンを溶解した溶媒のみを経口投与したものをコントロールにおいた。試験当日にトリアゾラムを1mg/kg条件にて経口投与し、0.5、1、2、4、6時間後にヘパリンナトリウム処理したガラス毛細管(Drummond Scientific. Company, PA, USA)を用いて眼窩静脈叢より採血した。血液は、10,000×g、4℃の条件で、10分間の遠心分離を行った。得られた血漿は、別のチューブに移した。その後、血漿と等量のアセトニトリルを添加し、ボルテックス後、再度10,000×g、4℃の条件で、10分間の遠心分離を行った。その後、上清を別のチューブに移し、HPLCによる測定まで-80℃にて保存した。
Claims (27)
- 少なくとも1つのヒト薬物代謝酵素遺伝子もしくは遺伝子クラスターを含む薬物動態関連遺伝子を含み、かつ対応する内在性の薬物代謝酵素遺伝子もしくは遺伝子クラスターを欠損するヒト化遺伝子改変モデル非ヒト哺乳動物に少なくとも1つの薬物を経口投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、又はリンパ管投与するステップ、該動物から門脈血、肝静脈血、全身循環血、尿及び胆汁からなる群から選択される少なくとも1つのサンプルを採取するステップ、該サンプルを用いて代謝酵素誘導による該薬物の未変化体及び代謝物の量及び/又は薬物動態を測定するステップ、ならびに、その測定値を用いて小腸及び肝臓における代謝酵素の誘導を評価するステップを含むことを特徴とする、ヒトにおける薬物代謝酵素誘導及び/又は薬物動態予測が可能である薬物代謝酵素誘導評価方法。
- 前記ヒト薬物代謝酵素遺伝子もしくは遺伝子クラスターが、チトクロムP450(CYP)ファミリーに属する酵素遺伝子もしくは遺伝子クラスターを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記ヒト薬物代謝酵素遺伝子もしくは遺伝子クラスターが、ヒトにおける薬物代謝の第二相反応に関わる酵素の遺伝子もしくは遺伝子クラスターを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記CYPファミリーに属する酵素遺伝子もしくは遺伝子クラスターが、CYP1A、CYP1B、CYP2A、CYP2B、CYP2C、CYP2D、CYP2E、CYP2J、CYP3A、CYP4A、CYP4B、あるいは、それらのサブファミリーの遺伝子もしくは遺伝子クラスターである、請求項2に記載の方法。
- 前記第二相反応に関わる酵素の遺伝子もしくは遺伝子クラスターが、UGT、あるいは、そのサブファミリーの遺伝子である、請求項3に記載の方法。
- 前記CYPファミリーに属する酵素遺伝子もしくは遺伝子クラスターが、ヒトCYP3A遺伝子クラスターを含む、請求項2又は4に記載の方法。
- 前記薬物動態関連遺伝子がヒト化核内受容体(Xenobiotic receptor)遺伝子をさらに含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ヒト化核内受容体遺伝子が、AHR、CAR、CAR/PXR、PXR及びPPARαの遺伝子からなる群から選択される少なくとも1つの遺伝子である、請求項7に記載の方法。
- 前記薬物動態関連遺伝子がヒト化薬物トランスポーター遺伝子をさらに含む、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ヒト化薬物トランスポーター遺伝子が、MDR、MRP、OAT、OATP、OCT、BCRP、PEPT、及びそれらのサブファミリーからなる群から選択される少なくとも1つの遺伝子である、請求項9に記載の方法。
- 前記薬物動態関連遺伝子が、ヒトCYP3A遺伝子クラスター及びヒト化PXR遺伝子を含む、請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。
- 前記非ヒト哺乳動物がげっ歯類である、請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 前記げっ歯類がマウス又はラットである、請求項12に記載の方法。
- 前記門脈血の採取及び測定を薬物投与後に行う、好ましくは薬物投与後24時間以内に行う、請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法。
- 前記門脈血の採取及び測定を、連日の薬物投与後に行う、あるいは連日の薬物投与後試験の24時間以内に追加投与した後に行う、請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法。
- 前記動物から小腸を切り出し、該小腸の内側と外側を反転させたのち切断して得られた断片化サンプル中の遺伝子発現解析、タンパク質解析、該小腸サンプルと薬物を共存させることで行われる反応、ならびに/あるいは、前記薬物の未変化体及び代謝物を測定すること、をさらに含む、請求項1〜15のいずれか1項に記載の方法。
- 前記動物から小腸組織あるいは細胞を取り出して得られた小腸サンプルを用いて遺伝子発現解析を行う、該小腸サンプルと薬物を共存させることで行われる反応、ならびに、該小腸サンプルを用いた前記薬物の未変化体及び代謝物を測定すること、をさらに含む、請求項1〜15のいずれか1項に記載の方法。
- 前記小腸サンプルが凍結された小腸サンプルである、請求項16又は17に記載の方法。
- 前記動物から肝臓組織あるいは細胞を取り出して得られた肝臓サンプルを用いて遺伝子発現解析及び/又はタンパク質発現解析を行う、ならびに、該肝臓サンプルと薬物を共存させることで行われる反応、該肝臓サンプルを用いた前記薬物の未変化体及び代謝物を測定することをさらに含む、請求項1〜15のいずれか1項に記載の方法。
- 前記肝臓サンプルが凍結された肝臓サンプルである、請求項19に記載の方法。
- 前記動物から全身循環血を採取し、該全身循環血を用いて代謝酵素誘導による前記薬物の未変化体及び代謝物の量及び/又は薬物動態を測定し、肝臓及び小腸における代謝酵素誘導を評価すること、ならびに前記薬物の薬物動態パラメーターを算出すること、をさらに含む、請求項1〜20のいずれか1項に記載の方法。
- 前記動物からの小腸サンプルにおいて、前記薬物代謝酵素遺伝子の発現量、タンパク質の発現量又は酵素活性を測定し、小腸及びin vivoにおける代謝酵素誘導を評価することをさらに含む、請求項1〜21のいずれか1項に記載の方法。
- 前記動物からの肝組織又は肝細胞からなる肝サンプルにおいて、前記薬物代謝酵素遺伝子の発現量、タンパク質の発現量又は酵素活性を測定し、肝臓及びin vivoにおける代謝酵素誘導を評価すること、ならびに薬物動態パラメーターを算出することをさらに含む、請求項1〜21のいずれか1項に記載の方法。
- 前記動物からの肝サンプル及び小腸サンプルにおいて、前記薬物代謝酵素遺伝子の発現量、タンパク質の発現量又は酵素活性を測定し、in vivoにおける代謝酵素誘導を評価することをさらに含む、請求項1〜21のいずれか1項に記載の方法。
- 薬物の全身循環血中濃度の時間変化を測定して決定された血中濃度-時間曲線下部面積(AUC)、クリアランス(CL)、平均体内貯留時間(MRT)、半減期(t1/2)、及び分布体積(V)からなる群から選択される少なくとも1つの薬物動態パラメーターを用いてヒトへ外挿し及び評価することをさらに含む、請求項1〜24のいずれか1項に記載の方法。
- 薬物の全身循環血中濃度の時間変化を測定して決定された血中濃度−時間曲線下部面積(AUC)減少率(%)及び前記薬物動態パラメーターの使用を含む薬物動態学的解析を行うことをさらに含む、請求項1〜25のいずれか1項に記載の方法。
- 前記の測定によって得られたデータを、ヒトにおける薬物代謝酵素誘導及び/又は薬物動態との相関性を確認し、ヒト臨床へ外挿することをさらに含む、請求項1〜26のいずれか1項に記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2016200468A JP6868237B2 (ja) | 2016-10-11 | 2016-10-11 | ヒトの薬物代謝酵素誘導及び薬物動態予測が可能な新規薬物代謝酵素誘導評価方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2016200468A JP6868237B2 (ja) | 2016-10-11 | 2016-10-11 | ヒトの薬物代謝酵素誘導及び薬物動態予測が可能な新規薬物代謝酵素誘導評価方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018061462A true JP2018061462A (ja) | 2018-04-19 |
JP6868237B2 JP6868237B2 (ja) | 2021-05-12 |
Family
ID=61966126
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016200468A Active JP6868237B2 (ja) | 2016-10-11 | 2016-10-11 | ヒトの薬物代謝酵素誘導及び薬物動態予測が可能な新規薬物代謝酵素誘導評価方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6868237B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114646718A (zh) * | 2022-04-07 | 2022-06-21 | 国家烟草质量监督检验中心 | 一种人群使用口含烟产品时经口腔途径、消化道途径吸收的烟碱代谢动力学评价方法 |
-
2016
- 2016-10-11 JP JP2016200468A patent/JP6868237B2/ja active Active
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114646718A (zh) * | 2022-04-07 | 2022-06-21 | 国家烟草质量监督检验中心 | 一种人群使用口含烟产品时经口腔途径、消化道途径吸收的烟碱代谢动力学评价方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6868237B2 (ja) | 2021-05-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11793178B2 (en) | Fumarylacetoacetate hydrolase (FAH)-deficient and immunodeficient rats and uses thereof | |
JP4855433B2 (ja) | グリシンメチルトランスフェラーゼ(gnmt)動物モデル及びその使用 | |
Gall et al. | Targeted inactivation of dipeptidyl peptidase 9 enzymatic activity causes mouse neonate lethality | |
US20230337643A1 (en) | Human liver chimeric non-human animal with deficient p450 oxidoreductase and methods of using same | |
JP2011223976A (ja) | フマリルアセト酢酸ヒドロラーゼ(fah)欠損性ブタおよびその使用 | |
US9420769B2 (en) | Chimeric non-human animal carrying human hepatocyte | |
JP6868237B2 (ja) | ヒトの薬物代謝酵素誘導及び薬物動態予測が可能な新規薬物代謝酵素誘導評価方法 | |
ZAMEK-GLISZCZYNSKI | Knockout and Humanised Animal Models to Study Membrane Transporters in Drug Development | |
WO2024052686A1 (en) | Immunodeficient non-human animals for assessing drug metabolism and toxicity | |
JP6315478B2 (ja) | 薬物代謝酵素誘導および細胞毒性の評価方法、ならびにそのためのベクターおよび細胞 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190912 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20201013 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201214 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210316 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210402 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6868237 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |