JP2017535583A - Ｇｄ−ＤＯＴＡ金属錯体のメグルミン塩を含む製剤 - Google Patents

Abstract

本発明は、小過剰の遊離ＤＯＴＡをさらに含む、メグルミン塩としての大環状キレート剤ＤＯＴＡのガドリニウム金属錯体の製剤の調製方法に関する。本方法は、過剰のガドリニウムが酸化ガドリニウムの沈殿として存在するように制御された条件を、規定の過剰のＤＯＴＡキレート剤を添加する前の、過剰量を除去する濾過と共に使用する。また、提供されるのは、Ｇｄ−ＤＯＴＡに基づくＭＲＩ造影剤の調製方法である。【選択図】なし

Description

本発明は、大環状キレート剤ＤＯＴＡのガドリニウム金属錯体と、小過剰の遊離ＤＯＴＡをさらに含む製剤の調製方法に関する。本方法は、過剰のガドリニウムが酸化ガドリニウムの沈殿として存在するように制御された条件を用いるとともに、濾過によって過剰のガドリニウムを除去してから、所定の過剰のＤＯＴＡキレート剤を添加する。また、Ｇｄ−ＤＯＴＡ系ＭＲＩ造影剤の調製方法も提供する。

ランタニド金属、特にガドリニウムの金属錯体は、インビボ医用イメージング分野でのＭＲＩ造影剤として関心がもたれている。ガドリニウムの金属錯体に基づくＭＲＩ造影剤については詳細な総説がある［例えば、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１２，７５１−７７８（２００５）及びＡｉｍｅ ｅｔ ａｌ，Ａｄｖ．Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５７，１７３−２３７（２００５）参照］。

ただし、遊離ガドリニウムイオンは、インビボで著しい毒性を示す。米国特許第５８７６６９５号では、ガドリニウム金属錯体の製剤に、カルシウムとの錯体のような「弱い金属キレート錯体」である添加剤を配合することにより、この問題に対処している。その思想は、過剰の「弱い金属キレート錯体」が、偶発的に遊離したり、存在するおそれのあるガドリニウムイオンと効率的に錯形成して、ＭＲＩ造影組成物の安全性を向上させるというものである。

欧州特許第２５１３０４３号には、ガドリニウム金属錯体の調製方法であって、ガドリニウムをまず、金属配位基で適宜官能化された陽イオン交換樹脂に錯形成しておく方法が開示されている。固相に結合したガドリニウムを、次いでアミノカルボン酸キレート剤と反応させ、所望のガドリニウム錯体を遊離させる。過剰のガドリニウムは、固相と結合したまま残る。

欧州特許第２２４２５１５号には、大環状キレートとランタニドとの錯体及びｍｏｌ／ｍｏｌ量で０．００２％〜０．４％の遊離大環状キレートを含む液体医薬製剤の調製方法が開示されており、この方法は、以下の一連のステップ：
ｂ）大環状キレートとランタニドとの錯体、遊離大環状キレートであって賦形剤Ｘ［Ｘ’，Ｌ］（式中、Ｌは大環状キレートであり、Ｘ及びＸ’は金属イオンであり、特にカルシウム、ナトリウム、亜鉛及びマグネシウムから独立に選択される。）の形態ではないもの、及び遊離ランタニドを含む液体医薬組成物を、遊離大環状キレートの溶液と遊離ランタニドの溶液を混合して、大環状キレートによるランタニドの錯体を形成することによって調製して、大環状キレートによるランタニドの錯化を得るステップであって、遊離大環状キレートの量及び遊離ランタニドの量が、すべてのランタニドが錯化されるような量ではないステップと、
ｃ）ステップｂ）で得られた医薬製剤中の遊離ランタニドの濃度Ｃ_{lan l}を測定するステップであって、遊離大環状キレートの濃度Ｃ_{ch l}が０に等しいステップと、
ｄ）ステップｂ）で得られた製剤に、まず遊離ランタニドの錯化を完了してＣ_{lan l}＝０とし、次にＣ_{ch l}＝Ｃ_{t ch l}（Ｃ_{t ch l}は最終液体医薬製剤における遊離大環状キレートの目標濃度であり、０．００２％〜０．４％ｍｏｌ／ｍｏｌの範囲内で選択される。）とするのに必要な量の遊離大環状キレートを添加することにより、Ｃ_{ch l}及びＣ_{lan l}を調整するステップと
を含んでおり、最終液体医薬製剤中の遊離大環状キレートの量は、最終液体医薬製剤中の錯化大環状キレートの量に対する遊離大環状キレートの割合に対応する。

欧州特許第２２４２５１５号には、この方法は、好ましくは、最終液体医薬製剤における遊離大環状キレートＣ_{t ch l}の理論目標濃度を求める先行ステップａ）をさらに含むと教示されている。

米国特許出願公開第２０１２／００８２６２４号には、医薬製剤が粉末形態で得られる点を除いて、欧州特許第２２４２５１５号と同様の方法が開示されている。

欧州特許第２２４２５１５号及び米国特許出願公開第２０１２／００８２６２４号のいずれにおいても、工業的規模での医薬品製造プロセスについては、秤量だけでは０．１ｍｏｌ％の遊離大環状キレート剤の添加を所要の精度で達成するのは困難であると強調されている。これは、キレート剤の量に１０００倍の差があること、さらにはキレート剤の吸湿性によるとされている。それらの特許請求の範囲に記載された発明は、上述の通り、最初に、過剰のランタニド金属イオンでの金属錯形成反応を実施し、次いで、錯化されていない過剰のランタニドの濃度を精密に測定するというものである。その測定値は、後段で、過剰のランタニドを錯形成させるとともに、所望の０．１％モル過剰の大環状キレートを得るために、どの程度追加のキレート剤を添加しなければならないか正確に算出するのに使用される。

欧州特許第２２４２５１５号の参考例３には、実験室規模での調製例が記載されており、ｐＨ６〜７の水中でＤＯＴＡ（１０ｇ，２５ｍｍｏｌ）と化学量論量の酸化ガドリニウム（Ｇｄ₂Ｏ₃，１２．５ｍｍｏｌ）とを８０℃で反応させてＧｄ−ＤＯＴＡを調製している。次いでｐＨを５に調整し、Ｃｈｅｌｅｘ樹脂と２時間撹拌した後濾過することにより残留遊離ガドリニウムを除去する。欧州特許第２２４２５１５号には、Ｇｄ−ＤＯＴＡ錯体を次いでエタノール水溶液から沈殿させて、白色粉末を８０％の単離収率で得たことが教示されている。欧州特許第２２４２５１５号には、０．００２％〜０．４％ｍｏｌ／ｍｏｌの過剰の大環状キレート剤を有する液体医薬組成物を、特に工業的規模で得るために、参考例３の方法をどのように適合させればよいのかについては教示されていない。

国際公開第２０１４／１１４６６４号は、Ｇｄ−ＤＯＴＡメグルミン（ガドテル酸メグルミン）の調製方法であって、最初にシクレンからのＤＯＴＡの合成と、次いで再結晶と陽イオン及び陰イオン交換クロマトグラフィーの両方による多段階精製とを含む方法が記載されている。精製ＤＯＴＡを次いでＧｄ₂Ｏ₃と反応させてＧｄ−ＤＯＴＡ錯体を得た後、メグルミンを添加して所望の生成物を得る。

国際公開第２０１４／１６１９２５号には、Ｇｄ−ＤＯＴＡ及び同様の錯体を工業的規模で調製する際には、使用前にキレート剤の水分含有量を分析し、それに応じて使用するモル量を補正しておく必要があると教示されている。国際公開第２０１４／１６１９２５号には、ＤＯＴＡの水分含有量が相対湿度条件と共に変化すると記載されている。

過剰の大環状キレート剤が配合された大環状キレート剤のランタニド金属錯体の製剤を調製するための代替方法に対するニーズは依然として存在する。かかる方法は、好ましくは、工業的規模での医薬製造に適しているべきであり、かかる製剤を含むＭＲＩ造影剤の提供にも適しているべきである。

欧州特許出願公開第２７９９０９０号

本発明は、ガドリニウムＤＯＴＡ錯体を、０．００２〜０．４ｍｏｌ／ｍｏｌ％量の未錯化形ＤＯＴＡと共に含む液体医薬製剤の調製方法を提供する。かかる製剤は、ＭＲＩ造影剤の提供に有用である。

本方法は、従来技術の測定ステップ及び調整ステップを必要としないが、これは時間及び労力の両面で有益な簡略化である。

本方法は、過剰のガドリニウムイオンが存在しなくても、最初にＧｄ−ＤＯＴＡ金属錯体が得られる方法を提供する。これは、過剰のガドリニウムが不溶性のＧｄ₂Ｏ₃として存在するように反応条件を制御することにより達成され、過剰のガドリニウムは濾過によって除去することができる。さらに、Ｇｄ−ＤＯＴＡ錯体は水溶液中に維持されるので、錯体の水分含有量に関する補正は不要である。本方法は、遊離ガドリニウムイオンを含まないＧｄ−ＤＯＴＡ金属錯体の中間溶液を与えるので、所定の過剰の遊離キレート剤を有する所望の製剤を得るために添加すべき過剰のＤＯＴＡの量を容易に計算することができる。

本発明の方法は、工業的規模で実施することができるという別の利点を有する。

第１の態様では、本発明は、Ｇｄ−ＤＯＴＡ金属錯体のメグルミン塩を、Ｇｄ−ＤＯＴＡ錯体の０．００２〜０．４ｍｏｌ／ｍｏｌ％量の未錯化形ＤＯＴＡと共に含む液体医薬製剤の調製方法を提供するが、本方法は、
（ｉ）以下の（ａ）〜（ｃ）のいずれかの反応：
（ａ）ＤＯＴＡとメグルミンの１：１モル比の水溶液と過剰のＧｄ₂Ｏ₃との反応であって、すべてのＤＯＴＡが反応してＧｄ−ＤＯＴＡを生じる反応、又は
（ｂ）ｐＨ２．０〜６．０におけるＤＯＴＡの水溶液と不足量のＧｄ₂Ｏ₃との反応であって、すべてのガドリニウムが反応してＧｄ−ＤＯＴＡを生じ、次いでメグルミンを添加してｐＨを６．５〜８．０に上昇させ、次いで過剰のＧｄ₂Ｏ₃を添加する反応、又は
（ｃ）ｐＨ６．５〜８．０におけるＤＯＴＡの水溶液と過剰のメグルミン、過剰のＧｄ₂Ｏ₃との反応であって、すべてのＤＯＴＡが反応してＧｄ−ＤＯＴＡを生じる反応
であって、（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）が、過剰の未溶解Ｇｄ₂Ｏ₃を含有するＧｄ−ＤＯＴＡの第１の溶液を生じるステップと、
（ｉｉ）ステップ（ｉ）で得られた第１の溶液を濾過して過剰の未溶解Ｇｄ₂Ｏ₃を除去し、過剰のＧｄ₂Ｏ₃を含まないＧｄ−ＤＯＴＡを含む第２の溶液を得るステップと、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の第２の溶液に対して０．００２〜０．４ｍｏｌ／ｍｏｌ％の未錯化形ＤＯＴＡを添加して、液体医薬製剤を得るステップと
を含んでおり、未錯化形ＤＯＴＡは配位金属イオンを含まない。

「ＤＯＴＡ」という用語は、大環状キレート剤１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸の慣用略号であり、ＤＯＴＡ自体又はその塩をいう。

生体医用イメージングにおけるＤＯＴＡ及びその金属錯体は、Ｓｔａｓｉｕｋ及びＬｏｎｇ［Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，４９，２７３２−２７４６（２０１３）］に記載されている。

「未錯化形ＤＯＴＡ」という用語は、「遊離キレート剤」、つまり金属イオンが配位していないものをいう。したがって、未錯化形ＤＯＴＡは、配位ランタニドその他の金属イオンをゆうしておらず、後段での金属錯化にすべて利用できる。「未錯化形ＤＯＴＡ」は、カルボン酸金属ドナー基のカルボン酸塩として存在するときのように、イオン形の金属イオンを含んでいてもよい。

「メグルミン」という用語は、その通常の意味を有し、Ｎ−メチルグルカミンをいう。

「含む」という用語は、本願を通してその通常の意味を有し、薬剤又は組成物が、記載された必須の特徴又は成分を有していなければならないが、その他の特徴又は成分も存在していてもよいことを意味する。「含む」という用語は、「から実質的になる」を好ましいサブセットとして包含するが、後者は、組成物が記載された成分を有していて、他の特徴又は成分が存在しないことを意味する。

ステップ（ｉ）の錯化に好適な溶媒は当技術分野で公知であり［Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃｏｎｔｒａｓｔ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｉｍａｇｉｎｇ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｍｅｒｂａｃｈ，Ｌ．Ｈｅｌｍ ＆ Ｅ．Ｔｏｔｈ（Ｅｄｓ），Ｗｉｌｅｙ（２０１３）］、好適には水性である。大環状キレート剤（例えば、ＤＯＴＡ）によるガドリニウムの錯化は、ある程度安定な初期錯体が熱力学的に安定な最終金属錯体へとゆっくりと成長する多段階プロセスである。

ステップ（ｉ）（ａ）のガドリニウムの過剰量又はステップ（ｉ）（ｂ）のＤＯＴＡの過剰量は、ガドリニウムＤＯＴＡ錯体の化学量論が１：１錯体となることが分かっていれば、モル比の計算によって得られる。使用するガドリニウム及びＤＯＴＡの化学的純度％も考慮される。

酸化ガドリニウム（Ｇｄ₂Ｏ₃）は水に不溶性であるが、酸性ｐＨで加水分解して、溶液中で遊離ガドリニウムイオンを生じる。中性ｐＨでは、このような加水分解は存在しないか非常に遅いと報告されている［Ｈｅｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ，Ａｄｖ．Ｍａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｎｇ．，１−１５（２０１２）ｄｏｉ１：０．１１５５／２０１２／７４８０９８）。

ステップ（ｉ）（ａ）では、１：１モル比のＤＯＴＡ及びメグルミンの混合物に過剰の酸化ガドリニウムを添加する。正確なＤＯＴＡ／メグルミン比（１００：９５〜１００：１００モル比のＤＯＴＡ／メグルミン）を使用することによって、ＤＯＴＡは酸化ガドリニウムを消費してＧｄ−ＤＯＴＡを生成し、ｐＨは、錯形成反応の最後に高ｐＨ（ｐＨ６〜８）に近づく。高ｐＨとなると、不溶性の酸化ガドリニウムの加水分解は非常に遅くなり、後段での過剰の酸化ガドリニウムの濾過による除去が可能となる。

ステップ（ｉ）（ｂ）では、酸性ｐＨのＤＯＴＡに、化学量論量未満のＧｄ₂Ｏ₃を添加する。酸化ガドリニウムが完全に消費された後、メグルミンを添加してｐＨを６．５〜８．０まで高めた後、過剰のＧｄ₂Ｏ₃（約１〜５％）を添加する。こうして、すべてのＤＯＴＡの完全な錯形成を促進しつつ、過剰のＧｄ₂Ｏ₃の加水分解が最小限に抑制される（中性ｐＨでの反応速度が遅いため）。このプロセスでは、低ｐＨでの高い錯形成速度及び高ｐＨでの低い加水分解速度が共に利用される。

ステップ（ｉ）（ｃ）では、過剰のメグルミンを使用してさらに高いｐＨ（約ｐＨ６．５〜８）へと導き、酸化ガドリニウムの加水分解度をさらに低下させる。アルカリ性Ｇｄ−ＤＯＴＡ−メグルミン溶液は、しかる後、ステップ（ｉｉｉ）の０．１ｍｏｌ／％過剰のＤＯＴＡの添加によって（ＤＯＴＡの酸性のため）中和される。

ステップ（ｉｉ）の濾過は、常法によって達成することができる。

ステップ（ｉｉｉ）の添加は、好ましくは、第１又は第２の溶液中の遊離ガドリニウムの濃度／量のインプロセス分析を予め行うことなく実施される。かかるステップは本方法では不要であるからである。すなわち、ステップ（ｉｉ）の濾過で、遊離ガドリニウムの濃度が既知（すなわち、実質上ゼロの）濃度の「第２の溶液」が得られるからである。そのため、ステップ（ｉｉｉ）の添加は、ステップ（ｉ）のＤＯＴＡの出発モル量に基づいて、ステップ（ｉ）の錯形成反応の変換率が１００％と仮定して算出される「未錯化形ＤＯＴＡ」の量に基づいて実施される。１００％変換は、かかる反応の効率について当技術分野で知られているものに一致する。遊離ＤＯＴＡは、固体として又は溶液として添加し得るが、好ましくは溶液として添加される。ステップ（ｉ）を実施するためにＤＯＴＡの溶液を調製する際の最も好ましい方法は、酸化ガドリニウムの添加前に溶液から適切な体積分率を除外しておくことである（例えば、１０００Ｌの反応体積又は等量から約１Ｌを取り除く）。この体積分率は、ステップ（ｉｉｉ）の添加に都合よく用いられる。このアプローチによって、複数の溶液の調製及び／又は純度又は水分の補正のための複数の計算を行う必要がなくなる。

第１の態様の方法は、実験室規模、パイロットプラント規模又は工業生産規模での実施に適している。本方法は、１ｋｇ〜８００ｋｇのキログラム規模、好ましくは１００ｋｇ〜６５０ｋｇ規模での製造に特に適している。

好ましい実施形態
第１の態様の方法では、ステップ（ｉ）の（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）におけるＧｄ₂Ｏ₃の過剰量は、０．００１〜５ｍｏｌ／ｍｏｌ％、さらに好ましくは０．０１〜１ｍｏｌ／ｍｏｌ％、最も好ましくは０．０５〜０．５ｍｏｌ／ｍｏｌ％である。

この範囲内の最小レベル（約０．００１〜０．０１ｍｏｌ％）の過剰のガドリニウム金属は、遊離ガドリニウムイオンの存在に関する試験が陽性となるまで、ガドリニウムのアリコートを漸増的に添加することによって達成することができる。かかる「スポット試験」は、存在／非存在の質問に対して、是／非の答えを与えるが、遊離ガドリニウムの濃度に関する情報はもたらさない。スポット試験は、当技術分野で公知の通り、アルセナゾ色素を用いて行うことができる。別法として、過剰のガドリニウムは、当技術分野で公知の通り、キシレノールオレンジ法又はアルセナゾＩＩ法で測定することができる［それぞれ、Ｂａｒｇｅ ｅｔ ａｌ，Ｃｏｎｔｒａｓｔ Ｍｅｄ．Ｍｏｌ．Ｉｍａｇｉｎｇ，１，１８４−１８８（２００６）及びＨｖａｔｔｕｍ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．，１３（７），９２７−９３２（１９９５）参照］。キシレノールオレンジ及びアルセナゾＩＩＩは市販されている。さらに高レベル（＞０．０１ｍｏｌ％乃至５ｍｏｌ％）の過剰のガドリニウムは、秤量のみで実現することができる。

第１の態様の方法において、ステップ（ｉｉｉ）の未錯化形ＤＯＴＡは、Ｇｄ−ＤＯＴＡ錯体に対して、好ましくは０．０２５〜０．２５ｍｏｌ／ｍｏｌ％、さらに好ましくは０．０８〜０．１２ｍｏｌ／ｍｏｌ％、最も好ましくは０．０９〜０．１１ｍｏｌ／ｍｏｌ％量である。未錯化形ＤＯＴＡは、好適にはガドリニウム金属イオンを含まず、好ましくは、配位したカルシウムイオン、亜鉛イオン及びマグネシウムイオンも含まない。

第１の態様の方法のステップ（ｉｉ）は、好ましくは、濾過後に、
（ａ）濾液を、固相結合スカベンジャーキレート剤と１回以上接触させて、溶液中の過剰のＧｄ³⁺をスカベンジャーキレート剤と錯化させるステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の濾液から固相を分離するステップと
によって、溶液中の過剰のＧｄ³⁺を除去するステップをさらに含む。

「固相結合スカベンジャーキレート剤」という用語は、ランタニド錯形成に使用される溶媒に不溶性の固相材料にキレート剤が共有結合したものをいう。結合したキレート剤は、溶液中の遊離金属イオンと錯形成し、かかる金属イオンを溶液から除去又は「スカベンジ（掃去）」することができる。スカベンジャーキレート剤は、ＤＯＴＡとは異なるものが選択され、好適にはガドリニウム金属の生成定数がＤＯＴＡよりも低く、Ｇｄ−ＤＯＴＡ金属錯体からガドリニウムを置換できないように選択される。スカベンジャーキレート剤は、好ましくは、溶液中の遊離金属イオンを捕捉する反応速度が速いように選択される。この観点から、直鎖状（つまり、非大環状）のスカベンジャーキレート剤が好ましい。固相に結合しているので、スカベンジャーキレート剤は、それと接触する溶液から、濾過及び適宜洗浄によって容易に分離される。好適な固相材料としては、合成ポリマー及びコポリマーが挙げられる。

ステップ（ａ）の接触は、２通りの主要な方法又はそれらの組合せによって行うことができる。第１の選択肢は、固相樹脂を「第１の溶液」と混合することである。別法として、固相をカラムとして準備してもよく、「第１の溶液」はカラムを通して溶出される。ステップ（ｂ）の分離は、ガドリニウム結合樹脂を除去するための溶液の濾過、或いはカラム溶出による溶出液の回収によって達成される。好ましくは、濾過した樹脂又は固相カラムのいずれかを適当な溶媒で洗浄して、「第２の溶液」のより完全な回収を担保することができる。ステップ（ａ）の接触は、好ましくはｐＨ４．０〜６、さらに好ましくは４．５〜５．５で実施され、約ｐＨ５が理想的である。

スカベンジャーキレート剤は、好ましくはイミノ二酢酸（ＩＤＡ）、ＥＤＴＡ又はＤＴＰＡを含み、さらに好ましくはイミノ二酢酸を含む。好ましい固相結合スカベンジャーキレート剤は、Ｃｈｅｌｅｘ（商標）１００であり、これはスチレン−ジビニルベンゼンコポリマーにキレート剤ＩＤＡが結合したものである。Ｃｈｅｌｅｘ（商標）１００は、Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓその他の供給元から、ナトリウム塩又はアンモニウム塩として市販されている。市販業者から、所与の量の金属を除去するための樹脂の適切な使用量に関する情報が提供されている。中性ｐＨでは、Ｃｈｅｌｅｘは陽イオン交換樹脂として機能するため、Ｇｄ（ＤＯＴＡ）^-などの負荷電ガドリニウム金属錯体に対する親和性がない。これは、かかる錯体の固相への非特異的結合が最小限となり、収率への影響が最小限となるという利点がある。

スカベンジャーキレート剤は、好ましくは、スカベンジャーキレート剤のメグルミン塩として存在する。かかる材料は、対イオン（例えば、Ｃｈｅｌｅｘ（商標）−１００のナトリウム塩又はアンモニウム塩）を交換する従来のイオン交換クロマトグラフィー技術、インキュベーション又は過剰のメグルミン溶液による溶出によって調製することができる。固相を適宜使用前に乾燥させてもよい。或いは、プロトン化形の樹脂（例えば、実施例１と同様の手順で、市販のＣｈｅｌｅｘを強酸で洗浄することにより得られる。）を添加して、メグルミニウムスカベンジャー樹脂をその場で生成させることもできる。ヒドロキソニウムＣｈｅｌｅｘ樹脂は、メグルミンを含む錯形成反応のその場で対応メグルミニウム形態を生じる。

かかるメグルミン樹脂は、Ｇｄ−ＤＯＴＡのメグルミン塩を調製するとき、生成物のナトリウムイオン／塩含有量が減少するという特定の利点を有する。したがって、市販のＣｈｅｌｅｘ（商標）樹脂中のスカベンジャーキレート（ＩＤＡ）の対イオンはナトリウムであり、したがって、捕捉されるすべてのガドリニウムイオンについて、３個のナトリウムイオンが反応混合物中に放出される。ナトリウム汚染を避けるために、Ｃｈｅｌｅｘ（商標）樹脂は、すべてのナトリウムイオンがメグルミニウムイオンと交換されるように調製することができる。その結果、スカベンジャー樹脂にガドリニウムイオンが捕捉される際に、３個のメグルミニウムイオンが放出される。

使用後に、結合した金属イオンを有するスカベンジャーキレート樹脂は、適宜、その後で再使用するために、過剰のメグルミンその他の対イオンで処理することにより再生してもよい。Ｃｈｅｌｅｘの場合、標準的な再生方法は、市販業者が提供する取扱説明書に記載されている。ガドリニウムの完全な除去は、樹脂の水性酸洗浄後の溶出液のＩＣＰ−ＡＥＳ又はＩＣＰ−ＭＳにより、或いは上述の「スポット試験」により確認されるであろう。

ステップ（ｉ）のガドリニウム錯形成プロセスは、通常、本質的に多段階である。錯形成反応は広いｐＨ範囲で起こるが、多段階プロセスの各ステップは、最適なｐＨ範囲を有する。ｐＨを含む反応条件の制御は、ステップ（ｉ）の選択肢（ａ）、（ｂ）、（ｃ）で使用される。すべてのＧｄ₂Ｏ₃を溶解して、溶液中に遊離ガドリニウムイオンを与えるためには、低ｐＨ（ｐＨ約２）が最適である。しかし、この低ｐＨでは、カルボキシレート基が部分的にプロトン化されているので、ＤＯＴＡのカルボキシレート基は、すべてのガドリニウムイオンを完全に錯化できない。さらに幾分高いｐＨ（約ｐＨ４〜５）では、カルボン酸陰イオンの生成が促進され、これは金属錯化を促進する。生成した初期のＧｄ−ＤＯＴＡ錯体は、実際にはビス−プロトン化され、ゆっくりと成長して、熱力学的（及び動力学的）に安定な最終Ｇｄ−ＤＯＴＡ錯体を与える［Ｍｏｒｅａｕ ｅｔ ａｌ，Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．，１０（２０），５２１８−３２（２００４）］。成長プロセスは、高いｐＨ及び加熱により促進される（通常、約ｐＨ５で数時間加熱）。

ステップ（ｉｉｉ）の添加は、好ましくは、過剰のＤＯＴＡを添加する前に、まず中性ｐＨ（約ｐＨ７．０〜７．４）に中和しておくことによって実施される。中和は、好ましくは、メグルミンを用いて実施される。

ＤＯＴＡは様々な供給元から市販されている。ＤＯＴＡは、Ｄｅｓｒｅｕｘ［Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９，１３１９−１３２４（１９８０）］の方法又はＴｏｔｈ ｅｔ ａｌ［Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，３３，４０７０−４０７６（１９９４）］の方法で合成することもできる。大環状キレート剤の合成の詳細については、Ｋｏｔｅｌ ｅｔ ａｌ［Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃｏｎｔｒａｓｔ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｉｍａｇｉｎｇ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｍｅｒｂａｃｈ，Ｌ．Ｈｅｌｍ ＆ Ｅ．Ｔｏｔｈ（Ｅｄｓ），Ｗｉｌｅｙ（２０１３）の第３章、８３−１５５頁］に記載されている。

メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）は様々な供給元から市販されている。好ましくは、医薬グレードの材料が使用される。

第２の態様では、本発明は、ＭＲＩ造影剤の調製方法であって、
（ａ）第１の態様の方法を実施して、第１の態様に記載の液体医薬製剤を得るステップと、
（ｂ）適宜、ステップ（ａ）の液体医薬製剤を生体適合性担体で希釈するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の製剤を薬学的に許容される容器又はシリンジに分注して、分注容器又はシリンジを得るステップと、
（ｄ）ステップ（ａ）〜（ｃ）を無菌製造条件下で実施するか、或いはステップ（ｃ）の分注容器又はシリンジの最終滅菌を実施して、薬学的に許容される容器又はシリンジ内の哺乳類への投与に適した形態のＭＲＩ造影剤を得るステップと
を含む方法を提供する。

液体医薬製剤及び第２の態様におけるステップ（ａ）の方法の好ましい実施形態は、（上述の）第１の態様に記載の通りである。

「造影剤」という用語は、インビボ医用イメージング分野での通常の意味を有し、哺乳類への投与に適した形態の薬剤であって、被験体だけの撮像によって得られるよりも、鮮明な関心領域又は臓器の画像を与えるのに役立つものをいう。「ＭＲＩ造影剤」は、通例、哺乳類の投与に適した常磁性又は強磁性物質であり、被験体内のイメージングのための関心領域における関連核種（例えば、¹Ｈ ＮＭＲでは¹Ｈ）のＴ１及び／又はＴ２緩和時間を短縮する。

「被験体」という用語は、哺乳類の生体、好ましくはインタクトな哺乳類の生体、さらに好ましくはヒトの生体を意味する。「哺乳類への投与に適した形態」という用語は、無菌でパイロジェンフリーであり、毒性又は有害作用を生じる化合物を含まず、生体適合性ｐＨ（約ｐＨ４．０〜１０．５）で製剤化される組成物を意味する。かかる組成物は、インビボで塞栓を生じる危険性のある粒状物質を含んでおらず、しかも体液（例えば、血液）と接触しても沈殿を生じないように製剤化される。かかる組成物は、生物学的に適合性の賦形剤しか含んでおらず、好ましくは等張性である。

他のインビボイメージング剤と同様に、造影剤は、撮像すべき哺乳類被験体に対する薬理学的効果が最小限となるように設計される。好ましくは、造影剤は哺乳類の身体に最小限の侵襲的方法で（つまり、医療専門技術の下で実施したときに哺乳類被験体に対して実質的な健康リスクを伴わずに）投与することができる。かかる最小限の侵襲的投与は、好ましくは被験体の末梢静脈への静脈内投与であり、局所又は全身麻酔を必要としない。

「生体適合性担体」という用語は、流体、特に液体であって、組成物が生理学的に認容できるもの、つまり毒性も耐え難い不快感も伴わずに哺乳類の身体に投与することができるようなものである。生体適合性担体は好適には注射可能な担体液であり、例えば、発熱物質を含まない注射用の滅菌水、食塩液のような水溶液（好適には注射用の最終製剤が等張性となるように調整される）、１種以上の張度調節物質（例えば血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えばグルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）その他の非イオン性ポリオール材料（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液である。好ましくは、生体適合性担体は発熱物質を含まない（パイロジェンフリーの）注射用水（ＷＦＩ）、等張食塩水又はリン酸緩衝液である。

「無菌製造」という用語は、関連プロセスステップを無菌製造（すなわち非発熱性）条件下、例えばクリーンルーム環境で実施することをいう。「滅菌」という用語は、その通常の意味を有し、微生物を破壊して無菌でパイロジェンフリーの組成物を得るプロセスをいう。「最終滅菌」という用語は、その通常の意味を有し、先行ステップをＧＭＰ（Good Manufacturing Practice）に即して実施するが、滅菌ステップはプロセス全体のできるだけ遅く実施することをいう。成分及び試薬は、無菌濾過、例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は化学的処理（例えばエチレンオキサイド処理）などを用いる最終滅菌を始めとする当技術分野で公知の方法で滅菌することができる。「オートクレーブ処理」という用語は、その通常の意味を有し、過熱蒸気を利用して滅菌する滅菌法をいう。オートクレーブ処理その他の滅菌方法については、Ａｃｈｉｅｖｉｎｇ Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｎ．Ｈａｌｌｓ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９４）に記載されている。第２の態様の方法では、最終滅菌が好ましい。最終滅菌の好ましい方法はオートクレーブ処理である。

「分注容器又はシリンジ」という用語は、充填容器、すなわち、組成物のアリコートを分注しておいた容器、つまり分注バイアルをいう。

第２の態様の方法での使用に適した容器、バイアル、蓋及びシリンジは医薬グレードであり、広く市販されている。

本発明を以下に詳述する非限定的な実施例によって例示する。実施例１は、メグルミンスカベンジャーキレート剤樹脂の調製について例示する。実施例２は、成分混合物中のＧｄ−ＤＯＴＡ、遊離ＤＯＴＡ及びメグルミンを分析することのできるＨＰＬＣ−ＣＡＤ法について例示する。

実施例３は、本発明の方法によるＧｄ−ＤＯＴＡ錯体の調製と過剰のガドリニウムの除去について例示する。

略号
ＤＯＴＡ：１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸
ＤＴＰＡ：ジエチレントリアミン五酢酸
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸
ＧＭＰ：適正製造規範（Good Manufacturing Practice）
ＨＰＬＣ：高性能液体クロマトグラフィー
ＨＰＬＣ−ＣＡＤ：ＨＰＬＣ荷電化粒子検出器
ＩＣＰ−ＡＥＳ：誘導結合プラズマ原子発光分光法
ＩＣＰ−ＭＳ：誘導結合プラズマ質量分析法
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
Ｍｉｎ：分
ＭＲＩ：磁気共鳴イメージング
ＷＦＩ：注射用水。

実施例１：メグルミン化Ｃｈｅｌｅｘ（商標）樹脂（「Ｍ ^eg −Ｃｈｅｌｅｘ」）の調製
焼結ガラスフィルター上のＣｈｅｌｅｘ−１００樹脂（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製；１００ｇ）を１Ｍ ＨＣｌ（１Ｌ）で４回に分けて４時間処理した。次いで溶出液がｐＨ６．５になるまで樹脂を水洗し、水（４００ｍＬ）中のメグルミン（１０ｇ）の溶液を樹脂と１時間平衡化させた。ｐＨ８になるまで樹脂を再度水洗し、濾過して１分間真空乾燥して湿性樹脂を得て、その形態（「Ｍ^eg−Ｃｈｅｌｅｘ」）で使用した。

実施例２：ＨＰＬＣ−ＣＡＤ法：ＧｄＤＯＴＡ−メグルミン溶液中のＤＯＴＡ測定
検出器：ＥＳＡ Ｃｏｒｏｎａ荷電化粒子検出器；
カラム：ＳｅＱｕａｎｔ ＺＩＣ−ｐＨＩＬＩＣ（５μｍ、１５０×４．６ｍｍ）。

サンプル調製：２０μＬ（約０．５Ｍ）の反応混合物に、Ｚｎ（ＯＡｃ）₂（１０μＬ、１０ｍｇ／ｍＬ）、水（２７０μＬ）、ＭｅＣＮ（７００μＬ）を順次添加した。

注入量：２０μＬ；
移動相：１００ｍＭ酢酸アンモニウム（Ａ）、アセトニトリル（Ｂ）。

サンプル注入前に、カラムを流速１ｍＬ／ｍｉｎの初期組成物（１５：８５ Ａ：Ｂ）で少なくとも５分間コンディショニングした。

実施例３：Ｇｄ−ＤＯＴＡ−メグルミン溶液の調製とガドリニウムイオンの除去
メグルミン（０．７４９ｇ、４．００ｍｍｏｌ）、ＤＯＴＡ（１．６１５ｇ ４．００ｍｍｏｌ）、酸化ガドリニウム（０．７４９ｇ ２．０４ｍｍｏｌ）及び水（８．０ｇ）をフラスコ内で混合し、６０℃で一晩撹拌した。

こうして得られた混合物は、明らかに濁った溶液であった。混合物をシリンジフィルター（０．４５μ ＰＶＤＦ膜を装着したＰａｌｌ Ａｃｒｏｄｉｓｃ ２５ｍｍ）で濾過し、ｐＨ〜９の透明溶液を得た。アルセナゾ指示薬［Ｈｖａｔｔｕｍ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．，１３（７），９２７−９３２（１９９５）］を用いて遊離ガドリニウムは検出されなかった。検出限界は＜９．４μｇ／ｍＬすなわち＜０．０６ｍＭである。アルセナゾＩＩＩ色素は市販されている。

Claims (10)

1. Ｇｄ−ＤＯＴＡ金属錯体のメグルミン塩を、Ｇｄ−ＤＯＴＡ錯体の０．００２〜０．４ｍｏｌ／ｍｏｌ％量の未錯化形ＤＯＴＡと共に含む液体医薬製剤の調製方法であって、
   （ｉ）以下の（ａ）〜（ｃ）のいずれかの反応：
   （ａ）ＤＯＴＡとメグルミンの１：１モル比の水溶液と過剰のＧｄ₂Ｏ₃との反応であって、すべてのＤＯＴＡが反応してＧｄ−ＤＯＴＡを生じる反応、又は
   （ｂ）ｐＨ２．０〜６．０におけるＤＯＴＡの水溶液と不足量のＧｄ₂Ｏ₃との反応であって、すべてのガドリニウムが反応してＧｄ−ＤＯＴＡを生じ、次いでメグルミンを添加してｐＨを６．５〜８．０に上昇させ、次いで過剰のＧｄ₂Ｏ₃を添加する反応、又は
   （ｃ）ｐＨ６．５〜８．０におけるＤＯＴＡの水溶液と過剰のメグルミン、過剰のＧｄ₂Ｏ₃との反応であって、すべてのＤＯＴＡが反応してＧｄ−ＤＯＴＡを生じる反応
   であって、（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）が、過剰の未溶解Ｇｄ₂Ｏ₃を含有するＧｄ−ＤＯＴＡの第１の溶液を生じるステップと、
   （ｉｉ）ステップ（ｉ）で得られた第１の溶液を濾過して過剰の未溶解Ｇｄ₂Ｏ₃を除去し、過剰のＧｄ₂Ｏ₃を含まないＧｄ−ＤＯＴＡを含む第２の溶液を得るステップと、
   （ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の第２の溶液に対して０．００２〜０．４ｍｏｌ／ｍｏｌ％の未錯化形ＤＯＴＡを添加して、液体医薬製剤を得るステップと
   を含んでおり、未錯化形ＤＯＴＡが配位金属イオンを含まない、方法。
2. ステップ（ｉ）（ａ）（ｂ）（ｃ）のＧｄ₂Ｏ₃の過剰量が０．０５〜５ｍｏｌ／ｍｏｌ％である、請求項１に記載の方法。
3. ステップ（ｉｉｉ）の未錯化形ＤＯＴＡが、０．０２５〜０．２５ｍｏｌ／ｍｏｌ％量である、請求項１又は請求項２に記載の方法。
4. 未錯化形ＤＯＴＡが、ランタニドイオン、カルシウムイオン、ナトリウムイオン、亜鉛イオン及びマグネシウムイオンを含まない、請求項１乃至請求項３のいずれか１項に記載の方法。
5. ステップ（ｉｉ）が、濾過後に、
   （ａ）濾液を、固相結合スカベンジャーキレート剤と１回以上接触させて、溶液中の過剰のＧｄ³⁺をスカベンジャーキレート剤と錯化させるステップと、
   （ｂ）ステップ（ａ）の濾液から固相を分離するステップと
   によって、溶液中の過剰のＧｄ³⁺を除去するステップをさらに含む、請求項１乃至請求項４のいずれか１項に記載の方法。
6. 固相結合スカベンジャーキレート剤が、スカベンジャーキレート剤のメグルミン塩として存在する、請求項５に記載の方法。
7. スカベンジャーキレート剤がイミノ二酢酸を含む、請求項５又は請求項６に記載の方法。
8. ステップ（ｉ）（ａ）又は（ｂ）のガドリニウム錯形成反応が５０〜８０℃で実施される、請求項１乃至請求項７のいずれか１項に記載の方法。
9. ＭＲＩ造影剤の調製方法であって、
   （ａ）請求項１乃至請求項８のいずれか１項に記載の方法を実施して、請求項１乃至請求項８のいずれか１項に記載の液体医薬製剤を得るステップと、
   （ｂ）適宜、ステップ（ａ）の液体医薬製剤を生体適合性媒体で希釈するステップと、
   （ｃ）ステップ（ｂ）の製剤を薬学的に許容される容器又はシリンジに分注して、分注容器又はシリンジを得るステップと、
   （ｄ）ステップ（ａ）〜（ｃ）を無菌製造条件下で実施するか、或いはステップ（ｃ）の分注容器又はシリンジの最終滅菌を実施して、薬学的に許容される容器又はシリンジ内の哺乳類への投与に適した形態のＭＲＩ造影剤を得るステップと
   を含む方法。
10. 最終滅菌が用いられる、請求項９に記載の方法。