JP2017523148A - 骨形成不全症の治療に使用するための抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体 - Google Patents

Abstract

本発明は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその抗原結合断片による骨形成不全症の治療に関する。骨形成不全症ＶＩ型の治療が特に企図される。【選択図】図１

Description

本発明は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその抗原結合断片による骨形成不全症の治療に関する。骨形成不全症ＶＩ型の治療が特に企図される。

骨は、骨の構造的、機械的および生化学的完全性ならびに人体のミネラル恒常性を支えるのに必要とされる、機能的に異なる細胞集団からなる動的な結合組織である。関与する主な細胞の種類には、骨形成および骨量維持を担う骨芽細胞、骨吸収を担う破骨細胞、ならびに骨芽細胞および破骨細胞の活性を調節する機械的センサー細胞と考えられている骨細胞が含まれる。動的プロセスでの骨芽細胞および破骨細胞の機能は、骨リモデリングと呼ばれる。前駆細胞からのこれらの細胞の発生および増殖は、骨の微小環境において産生される増殖因子およびサイトカインのネットワーク、ならびに全身ホルモンにより支配されている。骨リモデリングは個体の生涯にわたって継続し、健康な骨組織およびミネラルの恒常性の維持に必要である。プロセスはおおむね平衡のままであり、全身ホルモン、ペプチドおよび下流のシグナル伝達経路タンパク質、局所転写因子、サイトカイン、増殖因子、ならびにマトリックスリモデリング遺伝子の複雑な相互作用により支配されている。

骨リモデリングプロセスで生じる障害または不均衡は骨格疾患を引き起こす可能性があり、最も一般的な骨格障害は骨量の正味の減少を特徴とする。この骨量低下の主な原因は、破骨細胞の数および／または活性の増加である。

骨リモデリングは骨格全体にわたって個別のパケットで起こるため、局所的に産生されるホルモンおよび酵素が、骨吸収の開始および正常なリモデリングプロセスにとって全身ホルモンより重要となり得る。そのような局所調節は、これらが機能する微小環境において骨芽細胞および破骨細胞により媒介される。例えば、破骨細胞は骨基質に結合し、破骨細胞自体と、波状縁を取り囲むアクチンの環により形成されるシーリングゾーンにより区切られた骨表面との間に別個のコンパートメントを形成する。複数の小さな小胞が酵素を骨基質へ輸送し、部分的に消化された骨基質を自らの中に取り込む。シーリングゾーン内の微小環境はリソソーム酵素の存在が豊富で、身体の正常な生理的ｐＨと比べて高度に酸性である。波状縁膜は、ＲＡＮＫＬの受容体であるＲＡＮＫ、およびマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）受容体（これらは両方とも、破骨細胞分化を担う）、ならびに破骨細胞を迅速に不活性化することが可能であるカルシトニン受容体も発現する（Ｂａｒｏｎ，Ｒ． ２００３）。

故に、これらの特殊化細胞により創出される固有の局所環境が、他の組織では発現されない固有の遺伝子配列ならびに／または他の組織で発現されるポリヌクレオチドおよびポリペプチドのスプライスバリアントのどちらかの発現に起因していることは理にかなっている。

骨リモデリングに関連する多くの疾患はほとんど解明されておらず、一般的に治療不可能であり、または限られた範囲でのみ治療可能である。例えば、骨形成不全症（ＯＩ）の治療に関する選択肢は極めて限られている。

骨形成不全症は、骨折に対する高い感受性を示す骨脆弱性を特徴とし、Ｉ型コラーゲンをコードする遺伝子の変異に起因した結合組織障害の一群を包含する。劣性ＯＩ ＶＩ型は、未石灰化類骨量の増加を特徴とし、これにより明白な疾患機序を示唆する点でＯＩの種類の中でも独特である。色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするＳＥＲＰＩＮＦ１遺伝子における変異が、ＯＩのこの独特の形態をもたらすことが近年示された（Ｈｏｍａｎら、２０１１）。ＯＩ ＶＩ型は非常に稀であるが、重症度は中程度と見なされており、幼年期に骨形成異常および骨折を引き起こし、青年期までに可動性の重度の障害をもたらす。この脆い骨の疾患は、類骨の肥厚および血清アルカリホスファターゼ値の上昇を特徴とする骨の石灰化の遅延に起因する。ＯＩに対する現在の治療には、成長ホルモンおよびビスホスフォネートが含まれるが、ＯＩ ＶＩ型患者はビスホスフォネートに同様にうまく反応しない。ＯＩ ＶＩ型に対する新規の治療がそれ故に必要とされている（Ｈｏｍａｎら ２０１１）。

本出願人は、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン−１５（Ｓｉｇｌｅｃ−１５）が破骨細胞分化に必要とされることを示し、骨疾患の治療および骨吸収の阻害のためのＳｉｇｌｅｃ−１５を標的にする抗体を記載した。

抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体による骨形成不全症ＶＩ型の治療が、本明細書に特に開示される。

本発明は、ＰＥＤＦまたはＰＥＤＦ経路の不均衡または制御異常に関連する骨疾患の治療における抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその抗原結合断片の使用に関する。

より詳細には、本発明は、ＰＥＤＦの不活性化、機能の喪失、発現の喪失、分泌の喪失、または変異に関連する骨疾患の治療に関する。

本発明はまた、ＰＥＤＦの下流のエフェクター（例えば、例えば血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）等の、骨細胞または組織に対するＰＥＤＦ媒介生物学的作用に関与する下流のエフェクター）の不活性化、機能の喪失、発現の喪失、分泌の喪失、または変異に関連する骨疾患の治療にも関する。

さらに、本発明は、ＰＥＤＦの発現または分泌に正に影響する制御因子（例えば、アンジオスタチン、クリングル５ドメイン）の機能の喪失、発現の喪失、分泌の喪失、または変異に関連する骨疾患の治療に関する。

本発明はさらに、ＰＥＤＦの発現または分泌に負に影響する制御因子の機能、発現、分泌の増大に関連する骨疾患の治療に関係する。

治療から恩恵を受け得る個体には、ＳＥＲＰＩＮＦ１遺伝子に変異を有する者が含まれる。そのような個体には特に、ＳＥＲＰＩＮＦ１遺伝子変異がＰＥＤＦタンパク質の不活性化、機能の喪失または発現の喪失をもたらす者が含まれる。そのような個体は、（例えば、インビトロまたはインビボ試験で）ＳＥＲＰＩＮＦ１遺伝子もしくはＰＥＤＦタンパク質における変異について試験することおよび／またはそのような個体から得られたＰＥＤＦタンパク質の活性を試験することにより同定することができる。ＳＥＲＰＩＮＦ１変異の例示的な実施形態については、Ｈｏｍａｎら、２０１１を参照のこと。必要としている個体は、特に小児または幼児を包含する。

本発明は特に、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその抗原結合断片による骨形成不全症ＶＩ型の治療に関する。

本明細書に開示された治療は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−１５（配列番号２）および／またはそのバリアントもしくは天然バリアントに結合することが可能である抗体またはその抗原結合断片の投与を含む。

本発明によれば、適切な抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその抗原結合断片には、破骨細胞分化、形成および／または破骨細胞の活性をインビトロおよび／またはインビボで阻害することが可能であり得るものが含まれてもよい。

ビヒクル（ＰＢＳ）、３ｍｇ／ｋｇ（３）および１０ｍｇ／ｋｇ（１０）抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体で治療されたオスのＳＥＲＰＩＮＦ１ヌルマウスの、二重エネルギーＸ線吸収（ＤＥＸＡ）を用いた大腿骨（Ａ）、脛骨（Ｂ）、および脊椎（Ｃ）の骨塩量（ＢＭＤ）分析を示す図である。＊、ｐ＜０．０５。１０ｍｇ／ｋｇ抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５による治療は、大腿骨（パネルＡ）および脛骨（パネルＢ）におけるＢＭＤの増加をもたらした。脊椎（パネルＣ）において、同じ傾向が観察されたが、効果はより軽度であった。 ビヒクル（ＰＢＳ）、３ｍｇ／ｋｇ（３）および１０ｍｇ／ｋｇ（１０）抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体で治療されたオスのＳＥＲＰＩＮＦ１ヌルマウスの大腿骨遠位における骨体積（ＢＶ／ＴＶ％）および結合密度（Ｃｏｎｎ．Ｄｎ／ｍｍ³）のマイクロＣＴ分析を示す図である。＊、ｐ＜０．０５。大腿骨遠位の代表的なマイクロＣＴ画像（パネルＡ）。骨体積（パネルＢ）は、１０ｍｇ／ｋｇ抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５で治療された動物において増加した。結合密度（パネルＣ）は、３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの両方での抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体治療により増大した。 ビヒクル（ＰＢＳ）、３ｍｇ／ｋｇ（３）および１０ｍｇ／ｋｇ（１０）抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体で治療されたオスのＳＥＲＰＩＮＦ１ヌルマウスの大腿骨遠位における骨梁数（ＴｂＮ １／ｍｍ；パネルＡ）、骨梁間隙（ＴｂＳｐ． ｍｍ；パネルＢ）、および骨梁幅（ＴｂＴｈ ｍｍ；パネルＣ）のマイクロＣＴ分析を示す図である。＊、ｐ＜０．０５。骨梁数は１０ｍｇ／ｋｇの抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５で治療された動物において増加し、骨梁間隙はビヒクル対照と比べてこの群において相応に減少した。骨梁幅は治療により影響されなかった。 ビヒクル（ＰＢＳ）、３ｍｇ／ｋｇ（３）および１０ｍｇ／ｋｇ（１０）抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体で治療されたオスのＳＥＲＰＩＮＦ１ヌルマウスの大腿骨遠位における皮質幅（ＣｔＴｈ ｍｍ；パネルＡ）および皮質骨体積（ＢＶ／ＴＶ％；パネルＢ）のマイクロＣＴ分析を示す図である。皮質幅および骨体積は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５による治療により影響されなかった。

本発明のさらなる範囲、適用性および利点は、以下に示される非限定的な詳細な説明から明らかとなろう。しかし、この詳細な説明は、本発明の例示的な実施形態を示しながら、添付図面を参照して単なる例として示されると理解されるべきである。

本発明は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその抗原結合断片による骨形成不全症の治療に関する。骨形成不全症ＶＩ型の治療が特に企図される。

本発明によれば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその抗原結合断片は、破骨細胞分化、形成および／または破骨細胞の活性をインビトロおよび／またはインビボで阻害することが可能であり得る。

そのような抗体またはその抗原結合断片には、例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−１５（配列番号２）またはそのバリアントもしくは天然バリアントに結合することが可能であるものが含まれてもよい。

そのような抗体またはその抗原結合断片には、Ｓｉｇｌｅｃ−１５（配列番号２）のアミノ酸２０から２５９、および／またはＳｉｇｌｅｃ−１５バリアント（例えば、配列番号４を含む配列番号２と少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアント）の対応する領域に結合することが可能であり得るものも含まれる。より具体的には、本発明の抗体または抗原結合断片は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５（配列番号２）のアミノ酸４９から１６５および／またはＳｉｇｌｅｃ−１５バリアント（例えば、例えば配列番号４を含む配列番号１２と少なくとも８０％の配列同一性を有するバリアント）の対応する領域に結合し得る。本発明の抗体または抗原結合断片には、例えば配列番号２の９９位に位置するアルギニン（Ｒ９９）を含むエピトープを含む、ヒトＳｉｇｌｅｃ−１５に固有のエピトープに結合することが可能であるものも含まれ得る。

マウスＳｉｇｌｅｃ−１５（配列番号４）よりヒトＳｉｇｌｅｃ−１５（配列番号２）に好ましくは結合する抗体は、マウス破骨細胞よりヒト破骨細胞の分化または活性の阻害に効果があり得ると本明細書では理解されるべきである。ヒトＳｉｇｌｅｃ−１５で見出され、マウスＳｉｇｌｅｃ−１５では見出されないエピトープに結合する抗体は、ヒト破骨細胞の分化または活性を阻害し得、マウス破骨細胞の分化または活性は阻害し得ない。故に、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体の効力は、サルにおいて、またはサルから単離された細胞を用いて試験することができる。実際に、カニクイザルおよびアカゲザルのＳｉｇｌｅｃ−１５タンパク質は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−１５アミノ酸配列のそれと極めて類似しており、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体はこれらの動物種において既に試験することができる。したがって、効力アッセイは、（例えば、ヒト、サルおよび／またはマウスＳｉｇｌｅｃ−１５に対する）抗体の特異性に応じて適合され得る。

効力は、以下に示されているようにインビトロで測定することができる。適切な抗体は、その基準で、または適切な動物モデルにおけるその効力に基づき選択することができる（例えば、米国特許第８，５７５，３１６号の実施例１５、またはＳｔｕｉｂｌｅら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ ２８９（１０）、６４９８〜６５１２頁、２０１４を参照のこと）。

例示的な実施形態において、抗体または断片は、破骨細胞の骨分解活性の増加がある状態等の骨疾患に関連する骨量減少において治療的に使用され得る。特定の例において、抗体または抗原結合断片は、配列番号２を発現し、ＡＤＣＣを媒介して免疫学的反応を誘導する細胞と相互作用し得る。他の例において、抗体および断片は、配列番号２とこの天然のリガンドとの相互作用をブロックし得る。さらに他の例において、抗体および断片は、タンパク質の内在化および／またはタンパク質の分解を誘導し得る。さらなる例において、抗体および断片は、配列番号２を標的にして骨細胞に薬物（例えば、毒素）を送達し得る。

本発明の抗体または抗原結合断片は、骨量減少、骨吸収の治療に有用な別の薬物（骨吸収抑制剤）、または骨量減少もしくは骨吸収に関連する疾患の治療に有用な別の薬物と共に（例えば、同時に、連続的に）投与されてもよい。

骨量減少を阻害することが可能である抗体および抗原結合断片は本明細書に記載され、ならびに／またはＷＯ２０１４／０１２１６５の下、２０１４年１月２３日に公開された国際出願ＰＣＴ／ＣＡ２０１３／０００６４６、ＷＯ２０１１／０４１８９４の下、２０１１年４月１４日に公開されたＰＣＴ／ＣＡ２０１０／００１５８６、およびＷＯ２００７／０９３０４２の下、２００７年２月１３日に公開されたＰＣＴ／ＣＡ２００７／０００２１０に記載されており、その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。そのような抗体が、本発明において使用するために特に企図される。特に適切な抗体種には、２５Ｅ９抗体のＣＤＲを有するもの、および特にヒト化フレームワークを有するものが含まれる。他の特定の適切な抗体種には、２５Ｂ８抗体のＣＤＲを有するもの、または＃３２Ａ１抗体のＣＤＲを有するものが含まれる。

したがって、米国特許第８，５７５，３１６号に開示された＃３２Ａ１抗体と同一のＣＤＲ（米国特許第８，５７５，３１６号における配列番号４４、配列番号４５（または配列番号９７）、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、および配列番号４９に対応）を有する抗体（例えば、ラット、キメラまたはヒト化）、または米国特許第８，５４６，５４０号における寄託アクセッション番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９９９もしくはＦＥＲＭ ＢＰ−１１０００を有する抗体と同一のＣＤＲを有する抗体（上記の抗体のヒト化バージョンを含む）の使用も特に企図される。＃３２Ａ１抗体のＣＤＲの配列は、配列番号１０３から１０８に提供され、ＣＤＲＨ２のより短い形態が配列番号１０９に提供されている。Ｈｉｒｕｍａら（米国特許第８，５４６，５４０号）によれば、＃３２Ａ１抗体はヒトおよびマウスＳｉｇｌｅｃ−１５の両方に結合し、マウスおよびヒト破骨細胞の分化を阻害する。

著者らはまた、＃３２Ａ１抗体がマウスにおけるインビボ試験で活性および適切であることも示した（米国特許第８，５７５，３１６号）。他の特定の抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体種は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１０年８月１９日に公開されたＵＳ２０１０／０２０９４２８Ａ１、２０１１年１１月３日に公開されたＵＳ２０１１／０２６８７３３Ａ１、ＷＯ／２０１３／１４７２１２の下、２０１３年１０月１３日に公開されたＰＣＴ／ＪＰ２０１３／０５９６５３、ＷＯ／２０１３／１４７２１３の下、２０１３年１０月１３日に公開されたＰＣＴ／ＪＰ２０１３／０５９６５４、およびＷＯ２０１２／０４５４８１Ａ２の下、２０１２年４月１２日に公開されたＰＣＴ／ＥＰ２０１１／００５２１９に開示されている。

破骨細胞分化、形成および／または活性をインビトロおよび／またはインビボで阻害することが可能であるそれらの抗体およびその抗原結合断片は、療法的治療に適切であり得る。そのため、破骨細胞または破骨細胞前駆細胞に対して望ましい活性を有する抗体および抗体バリアントは、本発明により包含され、特に企図される。

例えば、本発明の抗体または抗原結合断片は、分化した破骨細胞への破骨細胞前駆細胞の分化を妨げる（阻害する）ことが可能であり得る。

本発明によれば、抗体または抗原結合断片は、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ハイブリッド抗体、またはそれらの断片であってもよい。

本発明により包含されるハイブリッド抗体には、他の可変ドメインが非ヒト化（例えば、マウス可変ドメイン）であり得る一方、ヒト化可変ドメインを含む少なくとも１つの免疫グロブリン鎖（軽鎖または重鎖）を有する抗体が含まれる。

定常領域またはその断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４由来、特にヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４由来であってもよい。より具体的な実施形態において、定常領域はＩｇＧ２（例えば、ヒトＩｇＧ２）由来であってもよい。特定の実施形態において、定常領域はＩｇＧ１（例えば、ヒトＩｇＧ１）であってもよい。

軽鎖の定常領域は、ラムダ定常領域またはカッパ定常領域であってもよい。

特に有用となり得る抗原結合断片には、例えば、ＦＶ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’または（Ｆａｂ’）₂が含まれる。

抗体または抗原結合断片は、（ハイブリドーマ細胞以外の）単離哺乳動物細胞からもしくは該細胞において、またはハイブリドーマ細胞において産生されてもよい。単離哺乳動物細胞の例示的な実施形態は、動物細胞（例えば、ＣＨＯ、ＮＳＯ等）ヒト細胞（例えば、ＰＥＲ．Ｃ６（商標）等）である（例えば、Ｌｉ、Ｆ．ら、Ｍａｂｓ ２（５）：４６６〜４７７頁、２０１０を参照のこと）。

本発明の態様において、本発明の抗体または抗原結合断片は、分化したヒト破骨細胞へのヒト破骨細胞前駆細胞の分化を妨げ（阻害し）得る。

用語「抗体」は、インタクトな抗体、モノクローナル、またはポリクローナル抗体を指す。用語「抗体」は、二重特異性抗体等の多特異性抗体も包含する。ヒト抗体は通常、それぞれが可変領域および定常領域を含む２本の軽鎖および２本の重鎖でできている。軽鎖可変領域は、フレームワーク領域に隣接された本明細書でＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３として特定される３つのＣＤＲを含む。重鎖可変領域は、フレームワーク領域に隣接された本明細書でＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３として特定される３つのＣＤＲを含む。

用語「抗原結合断片」は本明細書で使用されるとき、抗原（例えば、配列番号２またはそのバリアント）に結合する能力を保持する抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、インタクトな抗体の断片により果たされ得ることが示されている。抗体の「抗原結合断片」という用語の範囲内に包含される結合断片の例には、（ｉ）Ｖ_L、Ｖ_H、Ｃ_LおよびＣ_H1ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）₂断片、（ｉｉｉ）Ｖ_HおよびＣ_H1ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単腕のＶ_LおよびＶ_HドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）Ｖ_HドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４〜５４６頁）、ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、例えば、Ｖ_H ＣＤＲ３が含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、Ｖ_LおよびＶ_Hは、別個の遺伝子によりコードされているが、これらをＶ_LおよびＶ_H領域が対合して一価の分子を形成する一本のポリペプチド鎖（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる）として作製できるようにする合成リンカーにより、組換え方法を用いてつなぐことができる（例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３〜４２６頁；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：５８７９〜５８８３頁を参照のこと）。そのような一本鎖抗体が、抗体の「抗原結合断片」という用語の範囲内に包含されることも意図される。さらに、抗原結合断片には、（ｉ）免疫グロブリンヒンジ領域ポリペプチドに融合された結合ドメインポリペプチド（重鎖可変領域、軽鎖可変領域、またはリンカーペプチドを介して軽鎖可変領域に融合された重鎖可変領域等）、（ｉｉ）ヒンジ領域に融合された免疫グロブリン重鎖ＣＨ２定常領域、および（ｉｉｉ）ＣＨ２定常領域に融合された免疫グロブリン重鎖ＣＨ３定常領域を含む、結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質が含まれる。ヒンジ領域は、二量体化を防ぐために１つまたは複数のシステイン残基をセリン残基と置き換えることによって修飾することができる。そのような結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質は、ＵＳ２００３／０１１８５９２およびＵＳ２００３／０１３３９３９にさらに開示されている。これらの抗体断片は、当業者に知られている従来技術を用いて得られ、断片はインタクトな抗体と同じように有用性についてスクリーニングされる。

典型的な抗原結合部位は、軽鎖免疫グロブリンおよび重鎖免疫グロブリンの対合により形成される可変領域からなる。抗体可変領域の構造は極めて一致しており、極めて類似した構造を示す。これらの可変領域は典型的には、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つの超可変領域が間を占める比較的相同なフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。抗原結合断片の全体的な結合活性は、多くの場合ＣＤＲの配列により決定される。ＦＲは多くの場合、最適な抗原結合にとってＣＤＲの三次元における適切な位置決めおよびアライメントに役割を果たしている。

本発明の抗体および／または抗原結合断片は、例えばマウス、ラットもしくは任意の他の哺乳動物、または他の供給源が起源であってもよく、組換えＤＮＡ技術を含む種々の手段により製造されてもよい。

抗体または抗原結合断片は、骨量減少の治療において治療的に使用され得る。

例示的なインビトロ効力アッセイ
効力アッセイに使用される細胞培養
破骨細胞分化を誘導するために、１０％ウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ）および１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含有するＤＭＥＭで増殖されたマウスＲＡＷ２６４．７細胞（ＡＴＣＣ、マナッサス、ＶＡ）を擦り取り、ＰＢＳに再懸濁する。細胞を、１００ｎｇ／ｍｌマウスＲＡＮＫＬ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネアポリス、ＭＮ）を含有する培地に２×１０⁴細胞／ｃｍ²で播種する。細胞を（免疫蛍光顕微鏡検査については）３日間、または（全ての他の実験については）４日間分化させる。ヒト破骨細胞前駆細胞（ＣＤ１４＋末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ））を、正常なヒトＰＢＭＣ（ＡｌｌＣｅｌｌｓ、エメリービル、ＣＡ）からＣＤ１４マイクロビーズおよびＭＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、ケルン、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、製造者の指示に従って単離する。細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＨｙＣｌｏｎｅ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（ＨｙＣｌｏｎｅ）、２５ｎｇ／ｍｌヒトＭＣＳＦおよび３０ｎｇ／ｍｌヒトＲＡＮＫＬ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含有するＡｌｐｈａ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）に３．１×１０⁵細胞／ｃｍ²で播種する。培地の半分を４日目に交換して細胞を７日間分化させる。

破骨細胞ＴＲＡＰ染色およびインビトロ機能アッセイ
破骨細胞分化および機能に対する抗体の効果を試験するために、所望の濃度の抗体（例えば、０．０１から１０μｇ／ｍｌ）を含有する培地で上記に記載されている通り、細胞を分化するように誘導する。破骨細胞を４日後に、培養下でＴＲＡＰ染色により可視化する。簡単には、細胞を３．７％ホルムアルデヒドで固定し、０．２％トリトンＸ−１００／ＰＢＳで透過処理し、ＴＲＡＰ染色緩衝液（１００ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．２、５０ｍＭ酒石酸ナトリウム、０．０１％ナフトールＡＳＭＸ、および０．０６％ Ｆａｓｔ Ｒｅｄ Ｖｉｏｌｅｔ）中で、３７℃、約３０分間インキュベートする。ＴＲＡＰ酵素は、破骨細胞中に赤色反応生成物を生成する。破骨細胞吸収活性を試験するために、細胞をリン酸カルシウム基質でコーティングされたウェル（Ｏｓｔｅｏｌｏｇｉｃ、ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓまたはＯｓｔｅｏアッセイ、Ｃｏｒｎｉｎｇ）に播き、分化するように上記の通り誘導する。７日後、ウェルを漂白剤で処理して細胞を除去し、基質吸収の面積を光学顕微鏡検査により観察する。（破骨細胞または破骨細胞前駆細胞における）Ｓｉｇｌｅｃ−１５の活性をブロックすることができる抗体は、対照抗体と比較して、例えば、ＴＲＡＰ陽性多核細胞が少なくなり得、またはＴＲＡＰ陽性多核細胞の形態の変化をもたらし得る。破骨細胞は石灰化基質を積極的に消化することから、（破骨細胞または破骨細胞前駆細胞における）Ｓｉｇｌｅｃ−１５の活性をブロックすることができる抗体は、対照（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に結合しない抗体、抗体がない等）と比較して、例えば、カルシウム基質が消化されている面積（露出面積）が少なくなる。ヒト破骨細胞が、骨様表面として作用するリン酸カルシウム基質において分化される場合、対照抗体で処理された細胞は、通常、広い面積の露出したリン酸カルシウムを生成する。これは、破骨細胞が吸収活性を示したことを示すものである。一方、適切な抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体で処理された細胞は基質を吸収せず、時として未分化前駆細胞に匹敵し得る。

別の手法は、破骨細胞に分化され、ウシ皮質骨スライスに播種されるＣＤ１４＋ ＰＢＭＣを必要とする（分化は播種前、播種時または播種後に行われてもよい）。抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５が添加され、骨スライス表面に生成された吸収窩が反射光顕微鏡検査により観察される。（破骨細胞または破骨細胞前駆細胞における）Ｓｉｇｌｅｃ−１５の活性をブロックすることができる抗体は、例えば、より少ないまたはより小さい吸収窩をもたらし得る。

抗体および抗体バリアント
ＰＥＤＦまたはＰＥＤＦ経路の不均衡または制御異常に関連する骨疾患の治療に適切であり得る抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその抗原結合断片には、破骨細胞分化、形成および／または活性を阻害することが可能であるものが含まれてもよい。阻害抗体の特定の実施形態には、例えば、本明細書に開示されているものが含まれる。阻害抗体の他の特定の実施形態には、国際出願ＰＣＴ／ＣＡ２０１３／０００６４６、ＰＣＴ／ＣＡ２０１０／００１５８６、ＰＣＴ／ＣＡ２００７／０００２１０、ＰＣＴ／ＪＰ２０１３／０５９６５３、ＰＣＴ／ＪＰ２０１３／０５９６５４、ＰＣＴ／ＥＰ２０１１／００５２１９、ＵＳ２０１０／０２０９４２８Ａ１、もしくはＵＳ２０１１／０２６８７３３に開示されているもの、またはそのような抗体に由来する抗体バリアントが含まれる。

特に適切な抗体種には、２５Ｅ９抗体のＣＤＲを有するもの、および特にヒト化フレームワーク領域を有するものが含まれる。他の適切な抗体種には、＃３２Ａ１抗体のＣＤＲを有するもの、および特にヒト化フレームワーク領域を有するものが含まれてもよい。

本発明によれば、適切な抗体またはその抗原結合断片は、特に破骨細胞分化を阻害でき得る。

さらに本発明によれば、適切な抗体またはその抗原結合断片は、破骨細胞形成を阻害でき得る。

また本発明によれば、適切な抗体またはその抗原結合断片は、破骨細胞活性も阻害でき得る。

化合物（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその抗原結合断片）の阻害活性を特徴付けるためのアッセイはＷＯ２００７／０９３０４２に開示されており、および／または当業者に知られている（例えば、Ｂｕｃｋｌｅｙ Ｋ．Ａ．ら ２００５；Ｃｏｌｌｉｎ−Ｏｓｄｏｂｙ Ｐ．ら、２００３）。そのようなアッセイには、例えば、破骨細胞分化プロセス（例えば、ＲＡＮＫＬの存在下）に対する抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体の効果を試験することが含まれる。アッセイには、分化した破骨細胞の数の決定、これらの多核細胞化レベルの決定、分化した破骨細胞の特異的マーカー（例えば、ＴＲＡＰ）の試験、および／または化合物の存在下または非存在下、骨基質における破骨細胞の吸収活性の試験が含まれてもよい。そのような試験の実施に適した破骨細胞前駆細胞は入手可能であり、これらには例えば、ＲＡＷ ２６４．７細胞または末梢血単球から単離されたヒト破骨細胞が含まれる（例えば、Ｂｕｃｋｌｅｙ Ｋ．Ａ．ら ２００５；Ｃｏｌｌｉｎ−Ｏｓｄｏｂｙ Ｐ．ら、２００３）。

さらに本発明によれば、抗体またはその抗原結合断片は、骨吸収（例えば、破骨細胞の骨吸収活性）を阻害でき得る。

したがって、本発明は、１つの態様において、配列番号６と少なくとも８０％同一である軽鎖可変領域、および／または配列番号１２と少なくとも８０％同一である重鎖可変領域を有し得る、Ｓｉｇｌｅｃ−１５との特異的結合が可能である抗体またはその抗原結合断片を提供する。抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６または配列番号１２と比較して少なくとも１個のアミノ酸置換を含むこともできる。

本発明はまた、別の態様において、配列番号２２と少なくとも８０％同一である軽鎖可変領域、および／または配列番号２６と少なくとも８０％同一である重鎖可変領域を有し得る抗体またはその抗原結合断片も提供する。抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２２または配列番号２６と比較して少なくとも１個のアミノ酸置換を含むこともできる。

本発明によれば、アミノ酸置換は、天然のヒト抗体における対応する位置に現れるアミノ酸であってもよい。

本発明の実施形態によれば、アミノ酸置換は、相補性決定領域（ＣＤＲ）の外側であってもよい。

本発明の実施形態によれば、アミノ酸置換は、例えば軽鎖可変領域に位置してもよい。

本発明の追加の実施形態によれば、抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも２個または少なくとも３個のアミノ酸置換を含んでもよい。そのようなアミノ酸置換は、同じ可変領域に位置してもよく、または異なる可変領域に位置してもよい。

さらに本発明によれば、抗体またはその抗原結合断片は、例えば、１から２５個のアミノ酸置換を軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域に含んでもよい。より具体的には、抗体またはその抗原結合断片は、例えば、１から２２個のアミノ酸置換をこの軽鎖可変領域、および１から２５個のアミノ酸置換をこの重鎖可変領域に有してもよい。

配列番号６の相補性決定領域および配列番号１２の相補性決定領域を含む抗体または抗原結合断片が、特に企図される。配列番号６および配列番号１２の相補性決定領域は、配列番号４７から５２に記載されてもよい。

抗体または抗原結合断片の他の例示的な実施形態には、配列番号９５の相補性決定領域および配列番号９６の相補性決定領域を有するものが含まれる。配列番号９５および配列番号９６の相補性決定領域は、配列番号９７から１０２に記載されてもよい。

マウス２５Ｅ９抗体可変ドメインとマウス２５Ｂ８抗体可変ドメインの間の唯一の違いは、ＣＤＲＨ３にあることが特に留意されるべきである。両方の抗体は、破骨細胞分化のインビトロでの阻害に機能的である。したがって、２５Ｅ９ ＣＤＲＨ３は、このインビトロでの活性を喪失することなくある程度のアミノ酸置換（１、２、３または４個の置換）を容認し得るように思われる。置換は、例えば保存的アミノ酸置換であってもよい。

配列番号２２の相補性決定領域および配列番号２６の相補性決定領域を含む抗体または抗原結合断片も企図される。配列番号２２および配列番号２６の相補性決定領域は、配列番号５３から５８に記載されてもよい。

＃３２Ａ１抗体の相補性決定領域を含む抗体または抗原結合断片も企図される（例えば、配列番号１０３〜１０９）。

そのような抗体または抗原結合断片は、ヒト抗体のフレームワークアミノ酸を含んでもよく、故に特に上記抗体のヒト化形態を含んでもよい。

したがって、本発明に適し得る抗体には、
ａ）配列番号４７、配列番号４８、および配列番号４９に記載された相補性決定領域アミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに配列番号５０、配列番号５１および配列番号５２に記載された相補性決定領域アミノ酸配列を含む重鎖、
ｂ）配列番号５３、配列番号５４、および配列番号５５に記載された相補性決定領域アミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに配列番号５６、配列番号５７、および配列番号５８に記載された相補性決定領域アミノ酸配列を含む重鎖、
ｃ）配列番号９７、配列番号９８、および配列番号９９に記載された相補性決定領域アミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに配列番号１００、配列番号１０１、および配列番号１０２に記載された相補性決定領域アミノ酸配列を含む重鎖、または
ｄ）配列番号１０３、配列番号１０４（または配列番号１０９）、および配列番号１０５に記載された相補性決定領域アミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに配列番号１０６、配列番号１０７、および配列番号１０８に記載された相補性決定領域アミノ酸配列を含む重鎖を有するものが含まれる。

本発明の他の例示的な実施形態は、例えば、配列番号３３に記載された軽鎖可変ドメイン（Ｇｅｎｅｒｉｃ ２５Ｅ９軽鎖可変ドメイン（コンセンサス１））を有する抗体またはその抗原結合断片を含む。
DIVMTQXXXSXPVTPGEXXSISCRSTKSLLHSNGNTYLYWXLQXPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTXFTLXISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGGGTKXEIK（配列番号３３）;
ここで、Ｘにより特定されるアミノ酸の少なくとも１個は、配列番号６（マウスＶＬ）に記載されたポリペプチドの対応するアミノ酸と比較して、アミノ酸置換であってもよい。アミノ酸置換は、例えば保存的または非保存的であってもよい。本発明によれば、アミノ酸置換は保存的であってもよい。

本発明の別の例示的な実施形態は、例えば、配列番号３４に記載された軽鎖可変ドメイン（Ｇｅｎｅｒｉｃ ２５Ｅ９軽鎖可変ドメイン（コンセンサス２））を有する抗体またはその抗原結合断片を含む。
DIVMTQX_a1X_a2X_a3SX_a4PVTPGEX_a5X_a6SISCRSTKSLLHSNGNTYLYWX_a7LQX_a8PGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTX_a9FTLX_a10ISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGGGTKX_a11EIK（配列番号３４）;
ここで、Ｘにより特定されるアミノ酸の少なくとも１個は、配列番号６（マウスＶＬ）に記載されたポリペプチドの対応するアミノ酸と比較して、アミノ酸置換であってもよく、
Ｘａ１、Ｘａ４、Ｘａ７、Ｘａ８、Ｘａ１０およびＸａ１１は、配列番号６と比較してそれぞれ独立に保存的アミノ酸置換であってもよく、
Ｘａ２、Ｘａ５、Ｘａ６は、配列番号６と比較してそれぞれ独立に半保存的アミノ酸置換であってもよく、
Ｘａ３は、ＰまたはＬであってもよく、
Ｘａ９は、ＡまたはＤであってもよい。

本発明のさらに別の例示的な実施形態は、例えば、配列番号３５に記載された軽鎖可変ドメイン（Ｇｅｎｅｒｉｃ ２５Ｅ９ 軽鎖可変ドメイン（コンセンサス３））を有する抗体またはその抗原結合断片を含む。
DIVMTQX_a1X_a2X_a3SX_a4PVTPGEX_a5X_a6SISCRSTKSLLHSNGNTYLYWX_a7LQX_a8PGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTX_a9FTLX_a10ISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGGGTKX_a11EIK（配列番号３５）;
ここで、Ｘ（Ｘａ１からＸａ１１を含む）により特定されるアミノ酸の少なくとも１個は、配列番号６（マウスＶＬ）に記載されたポリペプチドの対応するアミノ酸と比較して、アミノ酸置換であってもよく、
Ｘａ１は、ＡまたはＳであってもよく、
Ｘａ２は、ＡまたはＰであってもよく、
Ｘａ３は、ＰまたはＬであってもよく、
Ｘａ４は、疎水性アミノ酸（例えば、ＶまたはＬ）であってもよく、
Ｘａ５は、ＳまたはＰであってもよく、
Ｘａ６は、疎水性アミノ酸（例えば、ＶまたはＡ）であってもよく、
Ｘａ７は、芳香族アミノ酸（例えば、ＦまたはＹ）であってもよく、
Ｘａ８は、塩基性アミノ酸（例えば、ＲまたはＫ）であってもよく、
Ｘａ９は、ＡまたはＤであってもよく、
Ｘａ１０は、塩基性アミノ酸（例えば、ＲまたはＫ）であってもよく、
Ｘａ１１は、疎水性アミノ酸（例えば、ＬまたはＶ）であってもよい。

さらなる実施形態において、本発明は、例えば、配列番号３６に記載された重鎖可変ドメイン（Ｇｅｎｅｒｉｃ ２５Ｅ９重鎖可変ドメイン（コンセンサス１））を有する抗体またはその抗原結合断片を含む。
EIQLQQSGXEXXXPGXSVXXSCKASGYTFTDYDMHWVXQXPXXGLEWXGTIDPETGGTAYNQKFKGXXTXTADXSXXTAYMELSSLXSEDXAVYYCTSFYYTYSNYDVGFAYWGQGTLVTVSX（配列番号３６）;
ここで、Ｘにより特定されるアミノ酸の少なくとも１個は、配列番号１２（マウスＶＨ）に記載されたポリペプチドの対応するアミノ酸と比較して、アミノ酸置換であってもよい。アミノ酸置換は、例えば保存的または非保存的であってもよい。本発明によれば、アミノ酸置換は保存的であってもよい。

本発明のさらなる実施形態は、例えば、配列番号３７に記載された重鎖可変ドメイン（Ｇｅｎｅｒｉｃ ２５Ｅ９重鎖可変ドメイン（コンセンサス２））を有する抗体またはその抗原結合断片を含む。
EIQLQQSGX_b1EX_b2X_b3X_b4PGX_b5SVX_b6X_b7SCKASGYTFTDYDMHWVX_b8QX_b9P_Xb10X_b11GLEWX_b12GTIDPETGGTAYNQKFKGX_b13X_b14TX_b15TADX_b16SX_b17X_b18TAYMELSSLX_b19SEDX_b20AVYYCTSFYYTYSNYDVGFAYWGQGTLVTVSX_b21（配列番号３７）;
ここで、Ｘ（Ｘｂ１からＸｂ２１を含む）により特定されるアミノ酸の少なくとも１個は、配列番号１２（マウスＶＨ）に記載されたポリペプチドの対応するアミノ酸と比較して、アミノ酸置換であってもよく、
Ｘｂ２、Ｘｂ４、Ｘｂ５、Ｘｂ７、Ｘｂ８、Ｘｂ９、Ｘｂ１１、Ｘｂ１２、Ｘｂ１３、Ｘｂ１５、Ｘｂ１６、Ｘｂ１７、Ｘｂ１８、Ｘｂ２０およびＸｂ２１は、配列番号１２と比較してそれぞれ独立に保存的アミノ酸置換であってもよく、
Ｘｂ１、Ｘｂ６、Ｘｂ１４は、配列番号１２（マウスＶＨ）と比較してそれぞれ独立に半保存アミノ酸置換であってもよく、
Ｘｂ３は、ＶまたはＫであってもよく、
Ｘｂ１０は、ＶまたはＧであってもよく、
Ｘｂ１９は、ＴまたはＲであってもよい。

本発明の別の実施形態は、例えば、配列番号３８に記載された重鎖可変ドメイン（Ｇｅｎｅｒｉｃ ２５Ｅ９重鎖可変ドメイン（コンセンサス３））を有する抗体または抗原結合断片を含む。
EIQLQQSGX_b1EX_b2X_b3X_b4PGX_b5SVX_b6X_b7SCKASGYTFTDYDMHWVX_b8QX_b9P_Xb10X_b11GLEWX_b12GTIDPETGGTAYNQKFKGX_b13X_b14TX_b15TADX_b16SX_b17X_b18TAYMELSSLX_b19SEDX_b20AVYYCTSFYYTYSNYDVGFAYWGQGTLVTVSX_b21（配列番号３８）;
ここで、Ｘ（Ｘｂ１からＸｂ２１を含む）により特定されるアミノ酸の少なくとも１個は、配列番号１２（マウスＶＨ）に記載されたポリペプチドの対応するアミノ酸と比較して、アミノ酸置換であってもよく、
Ｘｂ１は、疎水性アミノ酸（例えば、ＶまたはＡ）であってもよく、
Ｘｂ２は、疎水性アミノ酸（例えば、ＬまたはＶ）であってもよく、
Ｘｂ３は、ＶまたはＫであってもよく、
Ｘｂ４は、塩基性アミノ酸（例えば、ＲまたはＫ）であってもよく、
Ｘｂ５は、ＡまたはＳであってもよく、
Ｘｂ６は、ＴまたはＫであってもよく、
Ｘｂ７は、疎水性アミノ酸（例えば、ＬまたはＶ）であってもよく、
Ｘｂ８は、塩基性アミノ酸（例えば、ＫまたはＲ）であってもよく、
Ｘｂ９は、ＴまたはＡであってもよく、
Ｘｂ１０は、ＶまたはＧであってもよく、
Ｘｂ１１は、塩基性アミノ酸（例えば、ＨまたはＱ）であってもよく、
Ｘｂ１２は、疎水性アミノ酸（例えば、ＩまたはＭ）であってもよく、
Ｘｂ１３は、塩基性アミノ酸（例えば、ＫまたはＲ）であってもよく、
Ｘｂ１４は、疎水性アミノ酸（例えば、ＡまたはＶ）であってもよく、
Ｘｂ１５は、疎水性アミノ酸（例えば、ＬまたはＩ）であってもよく、
Ｘｂ１６は、塩基性アミノ酸（例えば、ＲまたはＫ）であってもよく、
Ｘｂ１７は、中性親水性アミノ酸（例えば、ＳまたはＴ）であってもよく、
Ｘｂ１８は、中性親水性アミノ酸（例えば、ＴまたはＳ）であってもよく、
Ｘｂ１９は、ＴまたはＲであってもよく、
Ｘｂ２０は、中性親水性アミノ酸（例えば、ＳまたはＴ）であってもよく、
Ｘｂ２１は、ＡまたはＳであってもよい。

本発明の他の例示的な実施形態は、例えば、配列番号３９に記載された軽鎖可変ドメイン（Ｇｅｎｅｒｉｃ ２５Ｄ８軽鎖可変ドメイン（コンセンサス１））を有する抗体またはその抗原結合断片を含む。
DIVMTQXXXSXPVTXGXXASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSXSGSGTDFTLXISRVEAEDVGVYYCAQNLELPYTFGGGTKXEIK（配列番号３９）;
ここで、Ｘにより特定されるアミノ酸の少なくとも１個は、配列番号２２（マウスＶＬ）に記載されたポリペプチドの対応するアミノ酸と比較して、アミノ酸置換であってもよい。アミノ酸置換は、例えば保存的または非保存的であってもよい。本発明によれば、アミノ酸置換は保存的であってもよい。

本発明のさらに別の例示的な実施形態は、例えば、配列番号４０に記載された軽鎖可変ドメイン（Ｇｅｎｅｒｉｃ ２５Ｄ８軽鎖可変ドメイン（コンセンサス２））を有する抗体またはその抗原結合断片を含む。
DIVMTQX_c1X_c2X_c3SX_c4PVTX_c5GX_c6X_c7ASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSX_c8SGSGTDFTLX_c9ISRVEAEDVGVYYCAQNLELPYTFGGGTKX_c10EIK（配列番号４０）;
ここで、Ｘにより特定されるアミノ酸の少なくとも１個は、配列番号２２（マウスＶＬ）に記載されたポリペプチドの対応するアミノ酸と比較して、アミノ酸置換であってもよく、
Ｘｃ１、Ｘｃ３、Ｘｃ９およびＸｃ１０は、配列番号２２と比較してそれぞれ独立に保存的アミノ酸置換であってもよく、
Ｘｃ２、Ｘｃ７、Ｘｃ８は、配列番号２２と比較してそれぞれ独立に半保存的アミノ酸置換であってもよく、
Ｘｃ４は、ＮまたはＬであってもよく、
Ｘｃ５は、ＬまたはＰであってもよく、
Ｘｃ６は、ＴまたはＥであってもよい。

本発明の追加の実施形態は、例えば、配列番号４１に記載された軽鎖可変ドメイン（Ｇｅｎｅｒｉｃ ２５Ｄ８軽鎖可変ドメイン（コンセンサス３））を有する抗体またはその抗原結合断片を含む。
DIVMTQX_c1X_c2X_c3SX_c4PVTX_c5GX_c6X_c7ASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSX_c8SGSGTDFTLX_c9ISRVEAEDVGVYYCAQNLELPYTFGGGTKX_c10EIK（配列番号４１）;
ここで、Ｘにより特定されるアミノ酸の少なくとも１個は、配列番号２２（マウスＶＬ）に記載されたポリペプチドの対応するアミノ酸と比較して、アミノ酸置換であってもよく、
Ｘｃ１は、ＡまたはＴであってもよく、
Ｘｃ２は、ＡまたはＰであってもよく、
Ｘｃ３は、ＦまたはＬであってもよく、
Ｘｃ４は、ＮまたはＬであってもよく、
Ｘｃ５は、ＬまたはＰであってもよく、
Ｘｃ６は、ＴまたはＥであってもよく、
Ｘｃ７は、ＳまたはＰであってもよく、
Ｘｃ８は、ＳまたはＧであってもよく、
Ｘｃ９は、塩基性アミノ酸（例えば、ＲまたはＫ）であってもよく、
Ｘｃ１０は、疎水性アミノ酸（例えば、ＬまたはＶ）であってもよい。

本発明のさらに追加の実施形態は、例えば、配列番号４２に記載された重鎖可変ドメイン（Ｇｅｎｅｒｉｃ ２５Ｄ８重鎖可変ドメイン（コンセンサス１））を有する抗体またはその抗原結合断片を含む。
QVQXQQXGAEXXKPGXSVKXSCKASGYTFTSYWMHWVXQXPGQGLEWXGLINPSNARTNYNEKFNTXXTXTXDKSXSTAYMXLSSLXSEDXAVYYCARGGDGDYFDYWGQGTTXTVSS（配列番号４２）;
ここで、Ｘにより特定されるアミノ酸の少なくとも１個は、配列番号２６（マウスＶＨ）に記載されたポリペプチドの対応するアミノ酸と比較して、アミノ酸置換であってもよい。アミノ酸置換は、例えば保存的または非保存的であってもよい。本発明によれば、アミノ酸置換は保存的であってもよい。

さらなる実施形態において、本発明は、配列番号４３に記載された重鎖可変ドメイン（Ｇｅｎｅｒｉｃ ２５Ｄ８重鎖可変ドメイン（コンセンサス２））を有する抗体またはその抗原結合断片を含む。
QVQX_d1QQX_d2GAEX_d3X_d4KPGX_d5SVKX_d6SCKASGYTFTSYWMHWVX_d7QX_d8PGQGLEWX_d9GLINPSNARTNYNEKFNTX_d10X_d11TX_d12TX_d13DKSX_d14STAYMX_d15LSSLX_d16SEDX_d17AVYYCARGGDGDYFDYWGQGTTX_d18TVSS（配列番号４３）;
ここで、Ｘにより特定されるアミノ酸の少なくとも１個は、配列番号２６（マウスＶＨ）に記載されたポリペプチドの対応するアミノ酸と比較して、アミノ酸置換であってもよく、
Ｘｄ１、Ｘｄ３、Ｘｄ５、Ｘｄ６、Ｘｄ７、Ｘｄ９、Ｘｄ１０、Ｘｄ１２、Ｘｄ１４、Ｘｄ１５、Ｘｄ１７、Ｘｄ１８は、配列番号２６と比較してそれぞれ独立に保存的アミノ酸置換であってもよく、
Ｘｄ２、Ｘｄ１１、Ｘｄ１３は、配列番号２６と比較してそれぞれ独立に半保存的アミノ酸置換であってもよく、
Ｘｄ４は、ＶまたはＫであってもよく、
Ｘｄ８は、ＲまたはＡであってもよく、
Ｘｄ１６は、ＴまたはＲであってもよい。

さらなる実施形態において、本発明は、例えば、配列番号４４に記載された重鎖可変ドメイン（Ｇｅｎｅｒｉｃ ２５Ｄ８重鎖可変ドメイン（コンセンサス３））を有する抗体またはその抗原結合断片を含む。
QVQX_d1QQX_d2GAEX_d3X_d4KPGX_d5SVKX_d6SCKASGYTFTSYWMHWVX_d7QX_d8PGQGLEWX_d9GLINPSNARTNYNEKFNTX_d10X_d11TX_d12TX_d13DKSX_d14STAYMX_d15LSSLX_d16SEDX_d17AVYYCARGGDGDYFDYWGQGTTX_d18TVSS（配列番号４４）;
ここで、Ｘにより特定されるアミノ酸の少なくとも１個は、配列番号２６（マウスＶＨ）に記載されたポリペプチドの対応するアミノ酸と比較して、アミノ酸置換であってもよく、
Ｘｄ１は、疎水性アミノ酸（例えば、ＶまたはＬ）であってもよく、
Ｘｄ２は、 ＰまたはＳであってもよく、
Ｘｄ３は、疎水性アミノ酸（例えば、ＬまたはＶ）であってもよく、
Ｘｄ４は、ＶまたはＫであってもよく、
Ｘｄ５は、ＡまたはＳであってもよく、
Ｘｄ６は、疎水性アミノ酸（例えば、ＬまたはＶ）であってもよく、
Ｘｄ７は、塩基性アミノ酸（例えば、ＫまたはＲ）であってもよく、
Ｘｄ８は、ＲまたはＡであってもよく、
Ｘｄ９は、疎水性アミノ酸（例えば、ＩまたはＭ）であってもよく、
Ｘｄ１０は、塩基性アミノ酸（例えば、ＫまたはＲ）であってもよく、
Ｘｄ１１は、疎水性アミノ酸（例えば、ＡまたはＶ）であってもよく、
Ｘｄ１２は、疎水性アミノ酸（例えば、ＬまたはＩ）であってもよく、
Ｘｄ１３は、疎水性アミノ酸（ＶまたはＡ）であってもよく、
Ｘｄ１４は、中性親水性アミノ酸（例えば、ＳまたはＴ）であってもよく、
Ｘｄ１５は、ＱまたはＥであってもよく、
Ｘｄ１６は、ＴまたはＲであってもよく、
Ｘｄ１７は、中性親水性アミノ酸（例えば、ＳまたはＴ）であってもよく、
Ｘｄ１８は、疎水性アミノ酸（ＬまたはＶ）であってもよい。

用語「ヒト化抗体」は、完全にヒト化された抗体（すなわち、フレームワークが１００％ヒト化されている）、および部分的にヒト化された抗体（例えば、少なくとも１つの可変ドメインはヒト抗体由来の１つまたは複数のアミノ酸を含有するが、他のアミノ酸は非ヒト親抗体のアミノ酸である）を包含する。典型的には「ヒト化抗体」は、非ヒト親抗体（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類等）のＣＤＲ、および天然のヒト抗体またはヒト抗体コンセンサスのものと同一であるフレームワークを含有する。そのような場合、それらの「ヒト化抗体」は、完全にヒト化されていると特徴付けられる。「ヒト化抗体」は、ヒト抗体またはヒト抗体コンセンサスのものに対応しない、１つまたは複数のアミノ酸置換も含有することができる。そのような置換には、例えば、抗体特性（例えば、親和性、特異性等）を保存し得る復帰変異（例えば、非ヒトアミノ酸の再導入）が含まれる。そのような置換は通常、フレームワーク領域にある。「ヒト化抗体」は場合により、典型的にはヒト抗体のものである定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部も含む。典型的には「ヒト化抗体」の定常領域は、ヒト抗体のものと同一である。

当然ながら、本明細書に記載されたものと同一のアミノ酸配列を有する任意の抗体、その抗原結合断片、または抗体部分（軽鎖または重鎖可変領域）は、これがヒト化技術、ハイブリドーマ技術、トランスジェニックマウス技術（例えば、ヒト免疫グロブリンレパートリーを有する）、またはその他により得られるかどうかに関係なく、本発明により包含される。

本発明の抗体のフレームワークアミノ酸は、天然のヒト抗体のものと８０％から１００％（例えば、８５から１００％、９０から１００％、９５から１００％）同一であってもよいと本明細書では理解されるべきである。通常、フレームワークアミノ酸が、天然の抗体の対応するアミノ酸と同一でない場合、そのようなアミノ酸は元のアミノ酸（例えば、マウスアミノ酸）と同一のままであってもよい。

本明細書で使用されるとき、用語「１から２５」は、例えば、１、２、３、および２５まで；１から２５；１から２４、１から２３、１から２２、１から２１、１から２０、１から１９；１から１８；１から１７；１から１６；１から１５等；２から２５、２から２４、２から２３、２から２２、２から２１、２から２０；２から１９；２から１８；２から１７等；３から２５、３から２４、３から２３、３から２２、３から２１、３から２０；３から１９；３から１８等；４から２５、４から２４、４から２３、４から２２、４から２１、４から２０；４から１９；４から１８；４から１７；４から１６等；５から２５、５から２４、５から２３、５から２２、５から２１、５から２０；５から１９；５から１８；５から１７等のあらゆる個々の値および範囲を含む。

同様に、例えば「１から２２」等の他の範囲は、例えば、１、２、３、および２２まで；１から２２、１から２１、１から２０、１から１９、１から１８、１から１７、１から１６、１から１５；１から１４；１から１３；１から１２；１から１１；１から１０等；２から２２、２から２１、２から２０、２から１９、２から１８、２から１７、２から１６、２から１５；２から１４；２から１３；２から１２等；３から２２、３から２１、３から２０、３から１９、３から１８、３から１７、３から１６、３から１５；３から１４；３から１３等；４から２２、４から２１、４から２０、４から１９、４から１８、４から１７、４から１６、４から１５；４から１４；４から１３；４から１２；４から１１等；５から２２、５から２１、５から２０、５から１９、５から１８、５から１７、５から１６、５から１５；５から１４；５から１３；５から１２等のあらゆる個々の値および範囲を含む。

本発明のより具体的な実施形態において、配列番号６に由来する軽鎖可変領域に作製され得るアミノ酸置換の数は、例えば１から１１個のアミノ酸置換であってもよい。

本発明のさらにより具体的な実施形態において、配列番号１２に由来する重鎖可変領域に作製され得るアミノ酸置換の数は、例えば１から２１個のアミノ酸置換であってもよい。幾つかの例において、配列番号１２を検討する場合、少なくとも３個のアミノ酸置換を有することが有用となり得る。

本発明のさらなるより具体的な実施形態において、配列番号２２に由来する軽鎖可変領域に作製され得るアミノ酸置換の数は、例えば１から１０個のアミノ酸置換であってもよい。

本発明のさらなるより具体的な実施形態において、配列番号２６の重鎖可変領域に作製され得るアミノ酸置換の数は、例えば１から１８個のアミノ酸置換であってもよい。

本発明の実施形態によれば、アミノ酸置換は、例えば軽鎖可変領域にあってもよい。

本発明の実施形態によれば、アミノ酸置換は、例えば重鎖可変領域にあってもよい。

本出願に開示されたシグナルペプチドの配列は、例によってのみ提供されることが特に理解される。そのようなシグナルペプチドは、配列表に示されたものとは異なるアミノ酸または核酸配列を有してもよい。タンパク質を分泌経路に誘導するものを含む適切なシグナルペプチドは、当業者に知られている。

抗体または抗原結合断片は、それ故に、配列番号６または配列番号２２と比較して最大２２個のアミノ酸置換を有する軽鎖可変領域を有してもよく、配列番号１２または配列番号２６と比較して最大２５個のアミノ酸置換を有する重鎖可変領域を有してもよい。抗体または抗原結合断片が２つの軽鎖可変領域および２つの重鎖可変領域を有する場合、軽鎖可変領域の１つ１つは最大２０個のアミノ酸置換を独立に有してもよく、重鎖可変領域の１つ１つは最大２０個のアミノ酸置換を有してもよいと本明細書では理解されるべきである。

本明細書に論じられているように、アミノ酸置換は保存的または非保存的であってもよい。例示的な実施形態において、アミノ酸置換は保存的であってもよい。

本発明の抗体または抗原結合断片は、所望であれば、配列番号６、配列番号１２、配列番号２２および／または配列番号２６に記載された軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域の一部を有していてもよいと本明細書では理解されるべきである。そのような抗体または抗原結合断片は故に、異なる実体（例えば、異なる抗体）が起源である軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域のアミノ末端またはカルボキシ末端に一部を有してもよい。

本発明の抗体または抗原結合断片の別の例示的な実施形態には、例えば、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号８、または配列番号１０のいずれかの少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る軽鎖可変領域を有する抗体または抗原結合断片が含まれる。

本明細書で使用されるとき、用語「配列番号３３の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、用語「少なくとも９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、または少なくとも１１２個の連続したアミノ酸」も含む。用語「配列番号３３の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、配列番号３３に見出される少なくとも９０個の連続したアミノ酸の任意の可能性のある配列、および特に、例えば配列番号３３のアミノ酸６から１０８、５から１０９、１３から１０３、１４から１１１等を含む配列等の、配列番号３３の３つのＣＤＲを含む配列を包含する。

本明細書で使用されるとき、用語「配列番号３４の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、用語「少なくとも９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、または少なくとも１１２個の連続したアミノ酸」も含む。用語「配列番号３４の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、配列番号３４に見出される少なくとも９０個の連続したアミノ酸の任意の可能性のある配列、および特に、例えば配列番号３４のアミノ酸７から１０９、１２から１０４、２２から１１２、１８から１１２等を含む配列等の、配列番号３４の３つのＣＤＲを含む配列を包含する。

用語「配列番号３５の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」、「配列番号８の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」、または「配列番号１０の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、類似した意味を有する。

本発明によれば、本発明の抗体または抗原結合断片は、例えば、配列番号８または配列番号１０に記載された軽鎖可変領域を有してもよい。

本発明の抗体または抗原結合断片は、例えば、配列番号３６、３７、３８、１４、１６、１８または２０のいずれかの少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る重鎖可変領域を含む（またはさらに含む）。

本明細書で使用されるとき、用語「配列番号３６の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、用語「少なくとも９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、または少なくとも１２３個の連続したアミノ酸」も含む。用語「配列番号３６の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、配列番号３６に見出される少なくとも９０個の連続したアミノ酸の任意の可能性のある配列、および特に、例えば配列番号３６のアミノ酸１から１０６、２から１１２、１１から１１３、７から１０２等を含む配列等の、配列番号３６の３つのＣＤＲを含む配列を包含する。

本明細書で使用されるとき、用語「配列番号３７の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、用語「少なくとも９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２または少なくとも１２３個の連続したアミノ酸」も含む。用語「配列番号３７の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、配列番号３７に見出される少なくとも９０個の連続したアミノ酸の任意の可能性のある配列、および特に配列番号３７の３つのＣＤＲを含む配列、例えば配列番号３７のアミノ酸６から１０９、８から１１３、１から１０２、２から１０５等を含む配列を包含する。

用語「配列番号３８の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」、「配列番号１４の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」、「配列番号１６の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」、「配列番号１８の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」または「配列番号２０の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、類似した意味を有する。

本発明によれば、本発明の抗体または抗原結合断片は、例えば、配列番号１４、１６、１８または２０に記載された重鎖可変領域を有してもよい。

本発明によれば、抗体または抗原結合断片は、例えば、
ａ）配列番号３３の少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る軽鎖可変領域、および配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、もしくは配列番号２０のいずれかの少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る重鎖可変領域、
ｂ）配列番号３４の少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る軽鎖可変領域、および配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、もしくは配列番号２０のいずれかの少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る重鎖可変領域、
ｃ）配列番号３５の少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る軽鎖可変領域、および配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、もしくは配列番号２０のいずれかの少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る重鎖可変領域、
ｄ）配列番号８の少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る軽鎖可変領域、および配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、もしくは配列番号２０のいずれかの少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る重鎖可変領域、または
ｅ）配列番号１０の少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る軽鎖可変領域、および配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、もしくは配列番号２０のいずれかの少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る重鎖可変領域を含んでもよい。

本発明のより具体的な実施形態によれば、軽鎖可変領域は、配列番号８または１０の少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含んでもよく、重鎖可変領域は、配列番号１４、１６、１８または２０の少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含んでもよい。

本発明のさらにより具体的な実施形態によれば、軽鎖可変領域は、配列番号８または１０に記載されてもよく、重鎖可変領域は、配列番号１４、１６、１８または２０に記載されてもよい。

より詳細には、配列番号８に記載された軽鎖可変領域、および配列番号１４に記載された重鎖可変領域を含む抗体が企図される。

本発明の抗体または抗原結合断片の他の例示的な実施形態は、配列番号３９、４０、４１、または２４のいずれかの少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る軽鎖可変領域を含み得るものである。

本明細書で使用されるとき、用語「配列番号３９の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、用語「少なくとも９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、または少なくとも１１２個の連続したアミノ酸」も含む。用語「配列番号３９の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、配列番号３９に見出される少なくとも９０個の連続したアミノ酸の任意の可能性のある配列、および特に配列番号３９の３つのＣＤＲを含む配列、例えば配列番号３９のアミノ酸６から１０２、１１から１０６、１から１０６、３から９５、５から９５等を含む配列を包含する。

本明細書で使用されるとき、用語「配列番号４０の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、用語「少なくとも９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、または少なくとも１１２個の連続したアミノ酸」も含む。用語「配列番号４０の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、配列番号４０に見出される少なくとも９０個の連続したアミノ酸の任意の可能性のある配列、および特に配列番号４０の３つのＣＤＲを含む配列、例えば配列番号４０のアミノ酸９から１０６、１０から１０１、１から９８、３から９９、７から１０７等を含む配列を包含する。

用語「配列番号４１の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」または「配列番号２４の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、類似した意味を有する。

本発明によれば、本発明の抗体または抗原結合断片は、例えば、配列番号２４に記載された軽鎖可変領域を有してもよい。

本発明の抗体または抗原結合断片は、例えば、配列番号４２、４３、４４または２６のいずれかの少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る重鎖可変領域を含む（またはさらに含む）。

本明細書で使用されるとき、用語「配列番号４２の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、用語「少なくとも９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、または少なくとも１１８個の連続したアミノ酸」も含む。用語「配列番号４２の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、配列番号４２に見出される少なくとも９０個の連続したアミノ酸の任意の可能性のある配列、および特に、例えば配列番号４２のアミノ酸６から１１１、１から１０６、２から１０４、５から１０６、１０から１０７等を含む配列等の、配列番号４２の３つのＣＤＲを含む配列を包含する。

本明細書で使用されるとき、用語「配列番号４３の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、用語「少なくとも９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、または少なくとも１１８個の連続したアミノ酸」も含む。用語「配列番号４３の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、配列番号４３に見出される少なくとも９０個の連続したアミノ酸の任意の可能性のある配列、および特に、例えば配列番号４３のアミノ酸３から１０７、１から１１５、１から１１０、２２から１１６、２０から１１５等を含む配列等の、配列番号４３の３つのＣＤＲを含む配列を包含する。

用語「配列番号４４の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」または「配列番号２６の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」は、類似した意味を有する。

本発明によれば、本発明の抗体または抗原結合断片は、例えば、配列番号２８に記載された重鎖可変領域を有してもよい。

本発明によれば、抗体または抗原結合断片は、例えば、
ａ）配列番号３９の少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る軽鎖可変領域、および配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、もしくは配列番号２８のいずれかの少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る重鎖可変領域、
ｂ）配列番号４０の少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る軽鎖可変領域、および配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、もしくは配列番号２８のいずれかの少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る重鎖可変領域、
ｃ）配列番号４１のアミノ酸少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る軽鎖可変領域、および配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、もしくは配列番号２８のいずれかの少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る重鎖可変領域、または
ｄ）配列番号２４の少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る軽鎖可変領域、および配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、もしくは配列番号２８のいずれかの少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含み得る重鎖可変領域を含んでもよい。

本発明のより具体的な実施形態によれば、軽鎖可変領域は、配列番号２４の少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含んでもよく、重鎖可変領域は、配列番号２８の少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含んでもよい。

本発明のさらにより具体的な実施形態によれば、軽鎖可変領域は配列番号２４に記載されてもよく、重鎖可変領域は配列番号２８に記載されてもよい。

本発明の実施形態はより具体的には、
ａ．配列番号７に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号１３に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｂ．配列番号７に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号１５に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｃ．配列番号７に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号１７に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｄ．配列番号７に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号１９に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｅ．配列番号７に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号２９に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｆ．配列番号７に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号５９に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｇ．配列番号７に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号６０に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｈ．配列番号７に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号６１に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｉ．配列番号９に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号１３に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｊ．配列番号９に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号１５に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｋ．配列番号９に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号１７に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｌ．配列番号９に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号１９に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｍ．配列番号９に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号２９に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｎ．配列番号９に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号５９に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｏ．配列番号９に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号６０に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｐ．配列番号９に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号６１に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｑ．配列番号２３に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号２７に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、ならびに
ｒ．配列番号２３に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号４６に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片
からなる群から選択される抗体または抗原結合断片を含み、ａ．からｒ．のいずれか１つまたは全ての軽鎖および／または重鎖のシグナルペプチドのアミノ酸配列は存在している、欠如している、または異なっている。

本発明の他の実施形態は、
ａ．配列番号５に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号１３に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｂ．配列番号５に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号１５に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｃ．配列番号５に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号１７に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｄ．配列番号５に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号１９に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｅ．配列番号５に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号２９に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｆ．配列番号５に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号５９に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｇ．配列番号５に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号６０に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｈ．配列番号５に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号６１に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｉ．配列番号７に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号１１に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｊ．配列番号７に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号３０に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｋ．配列番号９に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号１１に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、ならびに
ｌ．配列番号９に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖、および配列番号３０に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体またはその抗原結合断片
からなる群から選択される抗体または抗原結合断片を含み、ａ．からｌ．のいずれか１つまたは全ての軽鎖および／または重鎖のシグナルペプチドのアミノ酸配列は存在している、欠如している、または異なっている。

本発明の抗体または抗原結合断片は、上記に記載された軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域を有してもよく、ならびに例えばヒト抗体の定常領域のアミノ酸等の定常領域のアミノ酸をさらに含んでもよい。

例示的な実施形態において、本発明の抗体または抗原結合断片は、例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域を含んでもよい。

例えば、対応するＩｇＧ２サブタイプまたは他のサブタイプ）と比較して少なくとも１０倍活性が増加する、ＩｇＧ１サブタイプの抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体が特に企図される。

ＩｇＧ１ベースの抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９５、１００倍もしくはこれ以上の効力の増加、または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９５、１００倍もしくはこれ以上の親和性の増加が特に有用となり得る。

効力または親和性の増加は、同一のまたは実質的に同一のＣＤＲまたは可変領域を有する異なる抗体サブタイプと比較して、破骨細胞分化または破骨細胞活性を阻害するＩｇＧ１ベースの抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体の能力により測定することができる。幾つかの状況において、破骨細胞分化および／または骨吸収をインビトロで阻害する試みに対して、１０ｎｇ／ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌと低いＩｇＧ１抗体濃度を用いて検討することが可能であり得る。例えば、対応するＩｇＧ２ベースの抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５と比べた場合、より低い投与量のＩｇＧ１ベースの抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体が所望の治療効果を達成し得ることが本明細書において理解され得る。

特に企図される抗体には、カッパ軽鎖定常領域およびＩｇＧ１重鎖定常領域を有するものが含まれる。

本発明の抗体および抗原結合断片には、本明細書に記載されたアミノ酸配列を有する、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体が含まれる。本明細書に特定されたアミノ酸配列を有するヒト抗体およびヒト化抗体が特に企図される。

ａ）配列番号６に記載された軽鎖可変領域および配列番号１２に記載された重鎖可変領域、またはｂ）配列番号２２に記載された軽鎖可変領域および配列番号２６に記載された重鎖可変領域でできた抗体またはその抗原結合断片の配列は、マウス起源（すなわち、非ヒト抗体）と見なされることが本明細書では理解されるべきである。これらの抗体のヒト化が、それ故に有利となろう。

本明細書に示されているように、非ヒト抗体のヒト化は、例えば、天然のヒト抗体の対応するアミノ酸をフレームワークアミノ酸に置換して行うことができる。置換は通常、抗原結合に負に影響しないように行われる。

本発明の別の例示的な実施形態によれば、抗原結合断片は、例えばｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’または（Ｆａｂ’）₂であってもよい。

本発明により包含されるバリアント抗体または抗原結合断片は、挿入、欠失、またはアミノ酸置換（保存的または非保存的）を含んでもよいが、元の抗体と類似した活性を有するものである。これらのバリアントは、このアミノ酸配列中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、この場所に異なる残基が挿入されてもよい。

置換変異誘発のための目的とする部位は超可変領域（ＣＤＲ）を含むが、フレームワーク領域またはさらには定常領域における修飾も企図される。保存的置換は、以下にリストされた群（群１から６）の１つからのアミノ酸（ＣＤＲ、可変鎖、抗体等の）を同じ群の別のアミノ酸と交換して行うことができる。

一般的に、ＣＤＲの変異は、フレームワーク領域の変異より抗体または抗原結合断片の抗原結合活性に大きな影響を与え得る。フレームワーク領域の変異は、抗体の「ヒトらしさ」を高めるように行われてもよい。本発明により包含されるバリアント抗体または抗原結合断片は、本明細書に示されたものと実質的に同一の抗原結合能力（類似の、同一の、またはわずかに劣った抗原結合能力を含む）を有する、または本明細書に示されたものより優れた抗原結合能力を有するものである。

保存的置換の他の例示的な実施形態は、「好ましい置換」の見出しの下、表１Ａに示されている。そのような置換が望ましくない特性をもたらす場合、アミノ酸クラスに関して表１Ａに「例示的な置換」と表示され、または以下にさらに記載されたより大きな変化が導入され、生成物がスクリーニングされ得る。

バリアントは、置換変異誘発により生成され、本発明のポリペプチドの生物学的活性を保持し得ることが当技術分野において知られている。これらのバリアントは、アミノ酸配列中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、この場所に異なる残基が挿入されてもよい。例えば、置換変異誘発のための目的とする１つの部位は、様々な種から得られた特定の残基が同一である部位を含んでもよい。「保存的置換」として特定される置換の例が表１Ａに示されている。そのような置換が望ましくない変化をもたらす場合、アミノ酸クラスに関して表１Ａに「例示的な置換」と表示され、または本明細書にさらに記載された他のタイプの置換が導入され、生成物がスクリーニングされる。

機能または免疫学的同一性における大幅な修飾は、（ａ）例えばシートもしくはらせん構造のような置換領域のポリペプチド骨格の構造の維持、（ｂ）標的部位の分子の電荷もしくは疎水性の維持、または（ｃ）側鎖のかさの維持に対する影響が著しく異なる置換を選択して達成される。天然残基は、共通する側鎖特性に基づき群に分けられる：
（群１）疎水性：ノルロイシン、メチオニン（Ｍｅｔ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）
（群２）中性親水性：システイン（Ｃｙｓ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）
（群３）酸性：アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）
（群４）塩基性：アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、リジン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）
（群５）鎖配向に影響を与える残基：グリシン（Ｇｌｙ）、プロリン（Ｐｒｏ）、および
（群６）芳香族：トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）
非保存的置換は、これらのクラスの１つの一メンバーと別のメンバーとの交換を伴う。

バリアント抗体または抗原結合断片のアミノ酸配列におけるバリエーションには、アミノ酸の付加、欠失、挿入、置換等、１つもしくは複数のアミノ酸の骨格もしくは側鎖における１つもしくは複数の修飾、または１つもしくは複数のアミノ酸（側鎖または骨格）への基もしくは別の分子の付加が含まれ得る。

バリアント抗体または抗原結合断片は、元の抗体または抗原結合断片アミノ酸配列と比較して、アミノ酸配列における実質的な配列類似性および／または配列同一性を有し得る。２つの配列間の類似性の程度は、同一性（同一のアミノ酸）および保存的置換のパーセンテージに基づく。

一般的に、可変鎖間の類似性および同一性の程度は、Ｂｌａｓｔ２配列プログラム（Ｔａｔｉａｎａ Ａ． Ｔａｔｕｓｏｖａ、Ｔｈｏｍａｓ Ｌ． Ｍａｄｄｅｎ（１９９９）、「Ｂｌａｓｔ ２ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ − ａ ｎｅｗ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」、ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｌｅｔｔ． １７４：２４７〜２５０頁）により、デフォルト設定、すなわち、ｂｌａｓｔｐプログラム、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス（オープンギャップ１１および伸長ギャップペナルティー１；ｇａｐｘドロップオフ５０、期待値１０．０、ワードサイズ３）および活性化フィルターを用いて、本明細書では決定された。

同一性パーセントは、それ故に、元のペプチドと比較して同一であり、および同じまたは類似した位置を占め得るアミノ酸を示すことができる。

類似性パーセントは、同じまたは類似した位置の元のペプチドと比較して同一であるアミノ酸、および保存的アミノ酸置換と置き換えられているものを示すことができる。

本発明のバリアント（すなわち、類似体）（ＶＬバリアント、ＶＨバリアント、ＣＤＲバリアント、抗体バリアント、ポリペプチドバリアント等を含む）は、それ故に、元の配列または元の配列の一部と少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有し得るものを含む。

本発明によれば、配列番号２バリアントは、配列番号２のアミノ酸４９〜１６５またはアミノ酸２０から２５９と少なくとも８０％同一の領域を有するポリペプチドを含む。配列番号２のバリアントは、配列番号２と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドも含む。配列番号２の好ましいバリアントには、破骨細胞分化および／または骨吸収を阻害することができるものが含まれる。そのようなバリアントは、例えば、この破骨細胞分化活性および／または骨吸収活性をインビトロまたはインビボで試験して同定することができる。Ｓｉｇｌｅｃ−１５バリアントの活性を試験するのに使用することができる方法またはアッセイの例は、本明細書に記載されており、および国際出願ＰＣＴ／ＣＡ２００７／００１１３４に示されている。本明細書に記載されたアッセイを行うのに使用される破骨細胞は、例えば、好ましくはヒトが起源であってもよいが、マウス、ラット、またはサル（例えば、カニクイザル）も起源であってもよいことが理解されるべきである。配列番号２の好ましいバリアントには、例えば、配列番号２のアルギニン９９（Ｒ９９）を含むエピトープが保存されているものが含まれ得る。

バリアントの例示的な実施形態は、本明細書に記載された配列に対して少なくとも８１％の配列同一性を、元の配列または元の配列の一部と８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列類似性を有するものである。

バリアントの他の例示的な実施形態は、本明細書に記載された配列に対して少なくとも８２％の配列同一性を、元の配列または元の配列の一部と８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列類似性を有するものである。

バリアントのさらなる例示的な実施形態は、本明細書に記載された配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を、元の配列または元の配列の一部と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列類似性を有するものである。

バリアントの他の例示的な実施形態は、本明細書に記載された配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を、元の配列または元の配列の一部と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列類似性を有するものである。

バリアントの追加の例示的な実施形態は、本明細書に記載された配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を、元の配列または元の配列の一部と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列類似性を有するものである。

バリアントのさらに追加の例示的な実施形態は、本明細書に記載された配列に対して少なくとも９７％の配列同一性を、元の配列または元の配列の一部と９７％、９８％、９９％または１００％の配列類似性を有するものである。

簡潔にするために、本出願人は、本発明により包含される個々のバリアントの例示的な実施形態を示す、ならびに特定の配列同一性％および配列類似性％を含む表１Ｂを本明細書に提供する。各「Ｘ」は、特定のバリアントを定義すると解釈される。

本明細書で使用されるとき、用語「同一」は、配列が別の配列と１００％の配列同一性を共有することを意味する。

本明細書で使用されるとき、用語「実質的に同一」は、配列が別の配列または別の配列の一部と７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を共有することを意味する。

本発明は、本明細書に記載された配列と少なくとも７０％の同一性（７０％から９９％の間のあらゆる範囲を含む）を含むＣＤＲ、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン、軽鎖、重鎖、抗体および／または抗原結合断片を包含する。

抗体コンジュゲート
検出または治療目的では必ずしも必要ではないが、本発明の抗体または抗原結合断片（抗体バリアントを含む）は、検出可能な部分（すなわち、検出または診断目的で）または治療的部分（治療目的で）とコンジュゲートすることができる。

検出目的では、非コンジュゲート抗体（一次抗体）が抗原への結合に使用されてもよく、検出可能な部分を保有し、一次抗体に結合することが可能である二次抗体が付加されてもよい。しかし、上記に示されているように、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体は検出可能な標識とコンジュゲートすることができ、そのため二次抗体は必要でない場合がある。

「検出可能な部分」は、例えば、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、化学的および／または他の物理的手段により検出可能な部分を含むことができる。検出可能な部分は、当技術分野でよく知られた方法を用いて、直接および／または間接的に（例えば、限定するものではないが、ＤＯＴＡまたはＮＨＳ結合等の結合を介して）本発明の抗体およびその抗原結合断片にカップリングすることができる。必要とされる感度、コンジュゲーションの容易さ、安定性要件、および利用可能な器具類に応じた選択により、多種多様の検出可能な部分が使用され得る。適切な検出可能な部分には、蛍光標識、放射性標識（例えば、限定されるものではないが、¹²⁵Ｉ、Ｉｎ¹¹¹、Ｔｃ⁹⁹、Ｉ¹³¹、およびＰＥＴスキャナー用の陽電子放出同位体等を含む）、核磁気共鳴活性標識、発光標識、化学発光標識、発色団標識、酵素標識（例えばおよび限定するものではないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ等）、量子ドットおよび／またはナノ粒子が含まれるが、これらに限定されない。検出可能な部分は、検出可能なシグナルを引き起こすおよび／または生じさせることができ、これにより検出可能な部分からのシグナルが検出されるようにする。

本発明の別の例示的な実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、治療的部分（例えば、薬物、細胞傷害性部分）とカップリング（修飾）されてもよい。

幾つかの例において、治療目的で、非コンジュゲート抗体は、それ自体抗原を隔離することが可能であってもよく、抗原と別の結合パートナーの間の重要な相互作用をブロックしてもよく、エフェクター細胞等を動員してもよい。しかし、上記に示されているように、該抗体は治療的部分とコンジュゲートされてもよい。

例示的な実施形態において、抗体および抗原結合断片は、化学療法剤または細胞傷害剤を含んでもよい。例えば、抗体および抗原結合断片は、化学療法剤または細胞傷害剤にコンジュゲートされてもよい。そのような化学療法剤または細胞傷害剤には、イットリウム９０、スカンジウム４７、レニウム１８６、ヨウ素１３１、ヨウ素１２５、および当業者により認知されている多くの他のもの（例えば、ルテチウム（例えば、Ｌｕ¹⁷⁷）、ビスマス（例えば、Ｂｉ²¹³）、銅（例えば、Ｃｕ⁶⁷））が含まれるが、これらに限定されない。他の例において、化学療法剤または細胞傷害剤は、とりわけ当業者に知られている、５−フルオロウラシル、アドリアマイシン、イリノテカン、オーリスタチン、タキサン、シュードモナス内毒素、リシン、カリケアマイシン、アマトキシン（例えば、アルファ−アマニチン）、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、および他の毒素からなってもよい。例示的な細胞傷害剤は、特に非増殖細胞を死滅させることが可能である薬剤を含んでもよい。

本発明の抗体または抗原結合断片は、特にＤＮＡを標的にする薬剤とコンジュゲートされてもよい。ＤＮＡを標的にする薬剤の例示的な実施形態には、デュオカルマイシン、およびアドゼレシン、ビセレシン、カルゼルシン等のデュオカルマイシン誘導体等のアルキル化剤が含まれる。ＤＮＡを標的にする薬剤の他の例示的な実施形態には、例えば、カリケアマイシン、エスペラマイシンおよび誘導体が含まれる（例えば、米国特許第５，２６４，５８６号、第５，１０８，１９２号、第４，９７０，１９８号、第５，０３７，６５１号、第５，０７９，２３３号、第４，６７５，１８７号、第４，５３９，２０３号、第４，５５４，１６２号、第４，８３７，２０６号、およびＵＳ２００７２１３５１１に開示されている化合物を参照のこと。各文献の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる）。

本発明の特定の実施形態には、例えば、デュオカルマイシンとコンジュゲートされた本明細書に開示されている抗体または抗原結合断片が含まれる。本発明の別の特定の実施形態には、例えば、カリケアマイシンとコンジュゲートされた本明細書に開示されている抗体または抗原結合断片が含まれる。

あるいは、本発明の方法および当技術分野で知られている方法を実施するために、本発明の抗体または抗原結合断片（コンジュゲートされたまたはされていない）は、本発明の抗体または抗原結合断片に特異的に結合することができ、望ましい検出可能な診断的または治療的部分を保有し得る第２の分子（例えば、二次抗体等）と組み合わせて使用されてもよい。

抗体の医薬組成物およびその使用
抗体の医薬組成物もまた、本発明により包含される。医薬組成物は、抗体または抗原結合断片を含むことができ、薬学的に許容可能な担体を含有することもできる。抗体またはその抗原結合断片は、治療剤（例えば、毒素）とコンジュゲートされてもよく、またはコンジュゲートされなくてもよい（例えば、非コンジュゲート）。

本発明の他の態様は、本明細書に記載された抗体または抗原結合断片および担体を含み得る組成物に関する。

活性成分に加えて、医薬組成物は、水、ＰＢＳ、食塩水、ゼラチン、油、アルコール、ならびに薬学的に使用することができる製剤への活性化合物の加工を促進する他の賦形剤および助剤を含む、薬学的に許容可能な担体を含有してもよい。他の例において、そのような製剤は滅菌されてもよい。

本明細書で使用されるとき、「医薬組成物」は通常、薬学的に許容可能な希釈剤、防腐剤、可溶化剤、乳剤、アジュバントおよび／または担体と一緒に治療的に有効な量の薬剤を含む。「治療的に有効な量」は本明細書で使用されるとき、所与の条件および投与計画に関して治療効果をもたらす量を指す。そのような組成物は、液体または凍結乾燥製剤もしくはさもなければ乾燥製剤であり、そのような組成物には、様々な緩衝液内容（例えば、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨ、およびイオン強度の希釈剤、表面への吸着を防ぐアルブミンまたはゼラチン等の添加剤、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ ２０、Ｔｗｅｅｎ ８０、プルロニックＦ６８、胆汁酸塩）が含まれる。可溶化剤（例えば、グリセロール、ポリエチレングリセロール）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、防腐剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン）、増量物質または張度調節剤（例えば、ラクトース、マンニトール）、ポリエチレングリコール等のポリマーのタンパク質との共有結合、金属イオンとの錯体形成、あるいはポリ乳酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲル等のポリマー化合物の粒子状製剤中もしくは上への、またはリポソーム、マイクロエマルジョン、ミセル、単層もしくは多層小胞、赤血球ゴースト、またはスフェロプラスト上への材料の取り込み。そのような組成物は、物理的状態、溶解度、安定性、インビボ放出速度、およびインビボクリアランス速度に影響を与え得る。調節または持続放出組成物には、親油性デポ剤（例えば、脂肪酸、ワックス、油）での製剤が含まれる。本発明により同様に包含されるのは、ポリマー（例えば、ポロキサマーまたはポロキサミン）でコーティングされた粒子状組成物である。本発明の組成物の他の実施形態は、非経口、肺、鼻、経口、膣、直腸経路を含む様々な投与経路のための粒子状形態保護コーティング、プロテアーゼ阻害剤、または透過促進剤を取り込む。１つの実施形態において、医薬組成物は、非経口、癌近傍（ｐａｒａｃａｎｃｅｒａｌｌｙ）、経粘膜、経皮、筋肉内、静脈内、皮内、皮下、腹腔内、脳室内、頭蓋内、および腫瘍内投与される。

さらに、本明細書で使用されるとき「薬学的に許容可能な担体」または「薬学的担体」は当技術分野で知られており、０．０１〜０．１Ｍもしくは０．０５Ｍリン酸緩衝液または０．８％生理食塩水を含むが、これらに限定されない。さらに、そのような薬学的に許容可能な担体は、水溶液または非水溶液、懸濁液、およびエマルジョンであってもよい。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油、およびオレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルである。水性担体には、生理食塩水および緩衝媒体を含む、水、アルコール溶液／水溶液、エマルジョン、または懸濁液が含まれる。非経口ビヒクルには、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲル、または固定油が含まれる。静脈内ビヒクルには、流体および栄養補充液、リンゲルデキストロースに基づくもの等の電解質補充液等が含まれる。例えば、抗菌剤、抗酸化剤、照合剤（ｃｏｌｌａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、不活性ガス等の防腐剤および他の添加剤も存在してもよい。

任意の化合物に関して治療的に有効な用量は、細胞培養アッセイ、またはマウス、ラット、ウサギ、イヌ、もしくはブタ等の動物モデルのどちらかにおいて最初に推定することができる。動物モデルは、濃度範囲および投与経路を決定するのに使用することもできる。そのような情報は、次いでヒトにおける有用な用量および投与経路を決定するのに使用することができる。これらの手法は当業者によく知られており、治療的に有効な用量は、症状または状態を改善する活性成分の量を指す。治療効果および毒性は、ＥＤ₅₀（集団の５０％で治療的に有効な用量）およびＬＤ₅₀（集団の５０％に致死的な用量）統計値を計算および対比することによる等、細胞培養においてまたは実験動物を用いて標準的な薬学的手順により決定することができる。上記に記載された治療的組成物のいずれかが、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ウサギ、サル、およびヒト等の哺乳動物を含むがこれらに限定されない、そのような治療を必要としている任意の被験者に適用され得る。

本発明において利用される医薬組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、脊髄内、髄腔内、脳室内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、経腸、局部、舌下、または直腸手段を含むが、これらに限定されない任意の数の経路により投与することができる。

本発明の医薬組成物は、例えば、ビスホスフォネート、活性ビタミンＤ３、カルシトニンおよびその誘導体、エストラジオール等のホルモン製剤、ＳＥＲＭ（選択的エストロゲン受容体調節因子）、イプリフラボン、ビタミンＫ２（メナテトレノン）、カルシウム製剤、ＰＴＨ（副甲状腺ホルモン）製剤、非ステロイド抗炎症剤、可溶性ＴＮＦ受容体製剤、抗ＴＮＦアルファ抗体または該抗体の機能的断片、抗ＰＴＨｒＰ（副甲状腺ホルモン関連タンパク質）抗体または該抗体の機能的断片、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−６受容体抗体または該抗体の機能的断片、抗ＲＡＮＫＬ抗体または該抗体の機能的断片、およびＯＣＩＦ（破骨細胞形成阻害因子）からなる群から選択される少なくとも１つの薬物メンバーをさらに含んでもよい。

本開示の目的に関して用語「治療」は、目的が、標的にされた病態または障害を防止しまたは遅らせる（軽減する）ことにある、療法的治療および予防または防止対策の両方を指す。治療を必要としている者には、既に障害を有する者のほか、障害を有する傾向がある者、または障害が防止される者が含まれる。

特定の例において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体およびその抗原結合断片は、同じ状態に対して与えられる他の治療と組み合わせて同時に投与されてもよい。そのため、該抗体は、当業者に知られている骨吸収抑制剤（例えば、ビスホスフォネート）と共に投与されさてもよい。他の例において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体およびその免疫学的に機能的な断片は、他の治療的抗体（例えば、抗ＲＡＮＫＬ）と共に投与されてもよい。

抗体は、輸送および／または保管に適したバイアルで提供される、および患者の適切な治療に関する情報を含む添付文書を含むキットで販売することができる。

治療方法
本発明により包含される治療方法は、抗体または抗原結合断片を（例えば、薬学的組成物の形態で）所望の標的集団に投与することを含む。

投与の前に標的集団は、例えば、骨形成不全症ＶＩ型に関連する遺伝子変異または機能障害または表現型の存在に関するスクリーニングにより選択することができる。骨形成不全症ＶＩ型は、以下に概説される臨床基準に基づき他のタイプの骨形成不全症と区別することができる。

標的集団は、主に小児および幼児からなってもよい。これらの小児または幼児は、脆い骨疾患の診断を受けている可能性がある。

幾つかの例において、患者は別の薬物と共に治療することもできる。そのような薬物には、例えば、ビスホスフォネートが含まれ得る。

骨形成不全症財団によれば、ＯＩのＩからＶＩＩＩ型の一般的な特徴は次の通りである：
Ｉ型
・ＯＩの最も一般的な最も軽度のタイプ。
・骨折しやすい。ほとんどの骨折が思春期前に起こる。
・正常なまたは正常に近い身長。
・動揺関節および筋力低下。
・強膜（眼の白い部分）は通常、青色、紫色、または灰色がかっている。
・三角顔。
・脊柱湾曲の傾向。
・骨変形がないまたは最小限。
・脆い歯の可能性。
・２０代前半または３０代前半に始まる場合が多い難聴の可能性。
・コラーゲン構造は正常であるが、量は正常より少ない。
ＩＩ型
・最も重度の形態。
・多くの場合呼吸障害により、出生時または生後すぐにしばしば死に至る。
・非常に多くの骨折および重度の骨変形。
・低身長で肺が未発達。
・色味がかった強膜。
・不適切に形成されたコラーゲン。
ＩＩＩ型
・骨折しやすい。多くの場合、出生時に骨折しており、Ｘ線は出生前に生じた治癒した骨折を明らかにすることがある。
・低身長。
・強膜は青色、紫色、または灰色がかっている。
・動揺関節および四肢の筋肉が未発達。
・樽状胸郭。
・三角顔。
・脊柱湾曲。
・呼吸障害の可能性。
・骨変形、多くの場合に重度。
・脆い歯の可能性。
・難聴の可能性。
・不適切に形成されたコラーゲン。
ＩＶ型
・Ｉ型とＩＩＩ型の間の重症度。
・骨折しやすい。ほとんどの骨折が思春期前に起こる。
・平均身長より低い。
・強膜は白色または白色に近い（すなわち、色は正常）。
・軽度から中程度の骨変形。
・脊柱湾曲の傾向。
・樽状胸郭。
・三角顔。
・脆い歯の可能性。
・難聴の可能性。
・不適切に形成されたコラーゲン。

ＯＩ骨の外観を顕微鏡下で試験することにより、研究者は、臨床的にＩＶ型群にいる人で、骨のパターンが異なる人がいることに気づいた。研究者がこれらの人々の完全な病歴を再調査したところ、その群は他の特徴を共有していることを見出した。研究者は、これらの群をＶおよびＶＩ型ＯＩと命名した。これら２つの群の人々は、Ｉ型コラーゲン遺伝子に変異がないようである。
Ｖ型
・ＯＩの外観および症状がＩＶ型と臨床的に類似。
・Ｘ線で見られる長骨の成長板と隣り合った高密な帯。
・骨折または外科手術の部位における異常に大きな仮骨（肥大仮骨）。（仮骨は、治癒プロセスの一環として骨折部位に沈着する新たな骨の領域である。
・橈骨と尺骨（前腕の骨）の間の膜の石灰化。これは、前腕回転の制限をもたらす。
・白色強膜。
・正常な歯。
・顕微鏡下で見た場合、骨は「網様」外観を有する。
・優性遺伝形式
ＶＩ型
・ＯＩの外観および症状がＩＶ型と臨床的に類似。
・ＯＩ ＶＩ型ではアルカリホスファターゼ（骨形成に関係している酵素）活性レベルがやや高い。これは血液検査により決定することができる。
・顕微鏡下で見た場合、骨は際立った「魚鱗」外観を有する。
・骨生検により診断される。
・この形態が優性または劣性形式で遺伝するかどうかは不明であるが、研究者は、遺伝形式は劣性の可能性が最も高いと考えている。
・ＯＩのこの型を有する８名が同定されている。

ＯＩの劣性形態
研究の数年後、劣性形式で遺伝するＯＩの２つの形態が２００６年に発見された。両方の型はコラーゲン形成に影響を与える遺伝子に起因している。これらの形態は、重度または中程度のＯＩを有するが主要コラーゲン変異がない人に関する情報を提供する。
ＶＩＩ型
・最初に記載された症例は、外観および症状の多くの面でＩＶ型ＯＩと似ている。
・他の症例では外観および症状は、幼児が白色強膜、小頭および丸い顔を有した以外、ＩＩ型致死性ＯＩに類似している。
・低身長。
・短い上腕（腕の骨）および短い大腿骨（太腿の骨）
・内反股が多い（鋭角の大腿骨頭が寛骨臼に影響を与える）。
・ＣＲＴＡＰ（軟骨関連タンパク質）遺伝子に対する変異の劣性遺伝の結果。ＣＲＴＡＰの部分的機能は中程度の症状をもたらすが、ＣＲＴＡＰの完全な欠如は４名の同定された症例全てにおいて致死性であった。
ＶＩＩＩ型
・幼児が白色強膜を有すること以外、外観および症状が致死性ＩＩ型またはＩＩＩ型ＯＩと似ている。
・重度の成長障害。
・石灰化の下、極端な骨格。
・ＬＥＰＲＥ１遺伝子に対する変異によるＰ３Ｈ１（プロリル３−ヒドロキシラーゼ１）の欠乏に起因する。

［実施例１］
この例は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５を標的にする抗体の、骨形成不全症ＶＩ型のマウスモデルにおいて観察される骨量減少を回復させる能力を記載する。近年、マウスにおけるＳＥＲＰＩＮＦ１のノックアウトが記載された。これらの動物で得られた表現型は、ヒトにおける該疾患を著しく模倣するものである（Ｂｏｇａｎら ２０１３）。この報告では、骨格表現型が特徴付けられた。成熟Ｐｅｄｆヌル変異体の大腿骨におけるマイクロコンピューター断層撮影（μＣＴ）および定量的骨組織形態計測は、骨梁骨体積の低下および未石灰化骨基質の蓄積を明らかにした。骨が対照より脆いことも見出された。インビトロではＰｅｄｆヌルマウス由来の骨芽細胞は、アリザリンレッド染色により評価されたミネラル沈着の増大、およびミネラル：基質比の増加を示した。このマウスモデルでの知見は、ＯＩ ＶＩ型を有するヒトにおいて観察される骨の主な構造的および生化学的特徴を模倣しており、結果として推定上の骨標的剤をさらに調べるのに有用なモデルを提供している。

それぞれ８匹のオスからなる３群のＳＥＲＰＩＮＦ１ヌルマウスをこの試験に割り付け、以下のパラグラフおよび表２に記載されているように治療した。群１は、ビヒクルであるＰＢＳの腹腔内（ＩＰ）注射を週２回受けた。群２および３は、マウスＳｉｇｌｅｃ−１５を標的にするマウスＩｇＧ抗体（マウスＳｉｇｌｅｃ−１５に結合し、マウス破骨細胞の分化を阻害することが可能である抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５）のＩＰ注射により、それぞれ３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの用量で週２回治療した。

投与日を１日目と定義し、治療は合計８週間施した。５０日目、試験終了の６日前に、全ての動物はＩＰ投与された骨標識蛍光色素、カルセイン１０ｍｇ／ｋｇの初回投与を受けた。３日後、５３日目に、カルセインの２回目の投与を行った。全ての動物を、カルセインの２回目の注射の３日後、５６日目に屠殺した。左大腿骨、左脛骨およびＬ１〜Ｌ３腰椎を回収し、過ヨード酸塩−リジン−パラホルムアルデヒド溶液（ＰＬＰ）に４℃で２４時間固定し、１×ＰＢＳ ｐＨ７．４で３回すすぎ、ＰＢＳに移し、４℃で保管した。骨をＰＩＸＩｍｕｓ Ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒ（ＧＥ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてスキャンして、大腿骨、脛骨および脊椎の骨塩量（ＢＭＤ）を決定した。骨微細構造の分析および大腿骨遠位の三次元画像を、ＳｋｙＳｃａｎ高解像度マイクロＣＴ（ＳＫｙＳｃａｎ Ｉｎｃ．、コンティフ、べルギー）を用いて生成した。図１に示されているように、１０ｍｇ／ｋｇ抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５で治療した動物は、長骨、すなわち大腿骨（図１Ａ）および脛骨（図１Ｂ）における骨塩量の有意な増加を示したが、腰椎（図１Ｃ）では差は観察されなかった。３ｍｇ／ｋｇ抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５によるＳＥＲＰＩＮＦ１ヌル動物の治療は、分析した部位のいずれにおいてもＢＭＤに対する効果がほとんどなかった。マイクロＣＴ分析は、１０ｍｇ／ｋｇ抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５で治療した動物が、ビヒクル治療動物と比べて大腿骨遠位における骨梁骨体積の増加を示すことを示した（図２Ａ）。しかし、図２Ｂに示されているように、大腿骨遠位における骨梁結合密度は、３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５による治療のいずれによっても増加した。さらに、骨梁数は１０ｍｇ／ｋｇ抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５治療により増加し（図３Ａ）、骨梁間隙はビヒクル治療動物と比べて相応におよび有意に低下した（図３Ｂ）。骨梁幅は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５による治療により影響されなかった（図３Ｃ）。皮質パラメータは全群で類似しており、皮質幅または皮質骨体積に変化は観察されなかった（図４Ｂ）。

まとめると、これらの結果は、患者に選択肢がほとんどない疾患である骨形成不全症ＶＩ型の代表的なモデルにおいて、Ｓｉｇｌｅｃ−１５を標的にする抗体の骨体積を増加させる能力を示すものである。

［参考文献］
本出願にリストされた参考文献の内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
- Stuible M. et al., "Anti-Siglec-15 antibodies" international application No. PCT/CA2013/000646 published on Jan. 23, 2014 under No. WO2014/012165
- Sooknanan, R. R. et al., "Polynucleotides and polypeptide sequences involved in the process of bone remodelling", international application No. PCT/CA2007/000210 (published on Aug. 23, 2007 under No. WO2007/093042).
- Tremblay, G. B. et al."Siglec 15 Antibodies in Treating Bone Loss-Related Disease", international application No. PCT/CA2010/001586 (published on April 14, 2011 under No. WO2011/041894);
- Hiruma Y. et al., "Antibody Targeting Osteoclast-Related Protein Siglec-15"; United States Ser. No. 12/677,621 published on Aug. 19, 2010 under US2010/0209428A1;
- Hiruma Y. et al., "Anti-Siglec-15 Antibody", United States Ser. No. 13/143,253 published on Nov. 3, 2011 under No. US2011/0268733A1;
- Hiruma Y. et al., "Novel Anti-Siglec15 Antibody", international appl. No, PCT/JP2013/059653 published on Oct. 13, 2013 under No. WO/2013/147212.
- Hiruma Y. et al., "Anti-Siglec15 Antibody with modified CDR", international appl. No, PCT/JP2013/059654 published on Oct. 13, 2013 under No. WO/2013/147213.
- Watanabe, I. et al., "Antibody Targeting Osteoclast-Related Protein Siglec-15", international application No. PCT/EP2011/005219 published on April 12, 2012 under No. WO2012045481A2.
Angata, T., T. Hayakawa, M. Yamanaka, A. Varki, and M. Nakamura. 2006. Discovery of Siglec-14, a novel sialic acid receptor undergoing concerted evolution with Siglec-5 in primates. FASEB J 20:1964-1973.
Angata, T., Y. Tabuchi, K. Nakamura, and M. Nakamura. 2007. Siglec-15: an immune system Siglec conserved throughout vertebrate evolution. Glycobiology 17:838-846.
Baron, R., S. Ferrari, and R.G. Russell. 2011. Denosumab and bisphosphonates: different mechanisms of action and effects. Bone 48:677-692.
Blasius, A.L., M. Cella, J. Maldonado, T. Takai, and M. Colonna. 2006. Siglec-H is an IPC-specific receptor that modulates type I IFN secretion through DAP12. Blood 107:2474-2476.
Blasius, A.L., and M. Colonna. 2006. Sampling and signaling in plasmacytoid dendritic cells: the potential roles of Siglec-H. Trends Immunol 27:255-260.
Bogan et al. (2013) A Mouse Model for Human Osteogenesis Imperfecta Type VI. J. Bone Miner. Res. 28:1531-1536
Bonifacino, J.S., and L.M. Traub. 2003. Signals for sorting of transmembrane proteins to endosomes and lysosomes. Annu Rev Biochem 72:395-447.
Boyle, W.J., W.S. Simonet, and D.L. Lacey. 2003. Osteoclast differentiation and activation. Nature 423:337-342.
Buckley, K.A. et al., Human Osteoclast Culture from Peripheral Blood Monocytes: Phenotypica Characterization and Quantitation of Resorption," Methods in Molecular Medicine, vol. 107: Human Cell Culture Protocols, Second edition, 2005.
Collin-Osdoby P. et al., RANKL-Mediated Osteoclast Formation from Murine RAW 264.7 Cells," Methods in Molecular Medicine, Vol. 80: Bone Research Protocols, 2003.
Crocker, P.R., J.C. Paulson, and A. Varki. 2007. Siglecs and their roles in the immune system. Nat Rev Immunol 7:255-266.
Crocker, P.R., and P. Redelinghuys. 2008. Siglecs as positive and negative regulators of the immune system. Biochem Soc Trans 36:1467-1471.
Hiruma, Y., T. Hirai, and E. Tsuda. 2011. Siglec-15, a member of the sialic acid-binding lectin, is a novel regulator for osteoclast differentiation. Biochem Biophys Res Commun 409:424-429.
Homan et al. (2011) Mutations in SERPINF1 Cause Osteogenesis Imperfecta Type VI. J. Bone Miner. Res. 26:2798-2803.
Humphrey, M.B., M.R. Daws, S.C. Spusta, E.C. Niemi, J.A. Torchia, L.L. Lanier, W.E. Seaman, and M.C. Nakamura. 2006. TREM2, a DAP12-associated receptor, regulates osteoclast differentiation and function. J Bone Miner Res 21:237-245.
Ishida-Kitagawa, N., K. Tanaka, X. Bao, T. Kimura, T. Miura, Y. Kitaoka, K. Hayashi, M. Sato, M. Maruoka, T. Ogawa, J. Miyoshi, and T. Takeya. 2012. Siglec-15 regulates the formation of functional osteoclasts in concert with DNAX-activating protein of 12 KDa (DAP12). J Biol Chem
Kaifu, T., J. Nakahara, M. Inui, K. Mishima, T. Momiyama, M. Kaji, A. Sugahara, H. Koito, A. Ujike-Asai, A. Nakamura, K. Kanazawa, K. Tan-Takeuchi, K. Iwasaki, W.M. Yokoyama, A. Kudo, M. Fujiwara, H. Asou, and T. Takai. 2003. Osteopetrosis and thalamic hypomyelinosis with synaptic degeneration in DAP12-deficient mice. J Clin Invest 111:323-332.
Lanier, L.L. 2009. DAP10- and DAP12-associated receptors in innate immunity. Immunol Rev 227:150-160.
Law, C.L., S.P. Sidorenko, K.A. Chandran, Z. Zhao, S.H. Shen, E.H. Fischer, and E.A. Clark. 1996. CD22 associates with protein tyrosine phosphatase 1C, Syk, and phospholipase C-gamma(1) upon B cell activation. J Exp Med 183:547-560.
Liu, Q.Y., R.R. Sooknanan, L.T. Malek, M. Ribecco-Lutkiewicz, J.X. Lei, H. Shen, B. Lach, P.R. Walker, J. Martin, and M. Sikorska. 2006. Novel subtractive transcription-based amplification of mRNA (STAR) method and its application in search of rare and differentially expressed genes in AD brains. BMC Genomics 7:286.
Mao, D., H. Epple, B. Uthgenannt, D.V. Novack, and R. Faccio. 2006. PLCgamma2 regulates osteoclastogenesis via its interaction with ITAM proteins and GAB2. J Clin Invest 116:2869-2879.
Muhlbauer, R.C., F. Bauss, R. Schenk, M. Janner, E. Bosies, K. Strein, and H. Fleisch. 1991. BM 21.0955, a potent new bisphosphonate to inhibit bone resorption. J Bone Miner Res 6:1003-1011.
O'Reilly, M.K., and J.C. Paulson. 2009. Siglecs as targets for therapy in immune-cell-mediated disease. Trends Pharmacol Sci 30:240-248.
Paloneva, J., M. Kestila, J. Wu, A. Salminen, T. Bohling, V. Ruotsalainen, P. Hakola, A.B. Bakker, J.H. Phillips, P. Pekkarinen, L.L. Lanier, T. Timonen, and L. Peltonen. 2000. Loss-of-function mutations in TYROBP (DAP12) result in a presenile dementia with bone cysts. Nat Genet 25:357-361.
Park-Wyllie, L.Y., M.M. Mamdani, D.N. Juurlink, G.A. Hawker, N. Gunraj, P.C. Austin, D.B. Whelan, P.J. Weiler, and A. Laupacis. 2011. Bisphosphonate use and the risk of subtrochanteric or femoral shaft fractures in older women. JAMA 305:783-789.
Raggatt, L.J., and N.C. Partridge. 2010. Cellular and molecular mechanisms of bone remodeling. J Biol Chem 285:25103-25108.
Reid, I.R., and J. Cornish. 2011. Epidemiology and pathogenesis of osteonecrosis of the jaw. Nat Rev Rheumatol 8:90-96.
Roelofs, A.J., K. Thompson, S. Gordon, and M.J. Rogers. 2006. Molecular mechanisms of action of bisphosphonates: current status. Clin Cancer Res 12:6222s-6230s.
Semler, O. et al., 2012. First use of the RANKL antibody denosumab in osteogenesis Imperfecta type VI. J. Musculoskelet Neuronal Interact 12(3):183-188.
Sooknanan, R.R., G.B. Tremblay, and M. Filion. 2011. Polynucleotides and polypeptide sequences involved in the process of bone remodeling. US Patent No. 7,989,160.
Stuible, M et al., 2014. MEchanism and function of monoclonal antibodies targeting siglec-15 for therapeutic inhibition of osteoclastic bone resorption. J. Biol. Chem 289(10):6498-6512.
Takahata, M., N. Iwasaki, H. Nakagawa, Y. Abe, T. Watanabe, M. Ito, T. Majima, and A. Minami. 2007. Sialylation of cell surface glycoconjugates is essential for osteoclastogenesis. Bone 41:77-86.
Taylor, V.C., C.D. Buckley, M. Douglas, A.J. Cody, D.L. Simmons, and S.D. Freeman. 1999. The myeloid-specific sialic acid-binding receptor, CD33, associates with the protein-tyrosine phosphatases, SHP-1 and SHP-2. J Biol Chem 274:11505-11512.
Tomasello, E., and E. Vivier. 2005. KARAP/DAP12/TYROBP: three names and a multiplicity of biological functions. Eur J Immunol 35:1670-1677.
Toyomura, T., Y. Murata, A. Yamamoto, T. Oka, G.H. Sun-Wada, Y. Wada, and M. Futai. 2003. From lysosomes to the plasma membrane: localization of vacuolar-type H+ -ATPase with the a3 isoform during osteoclast differentiation. J Biol Chem 278:22023-22030.
Turnbull, I.R., and M. Colonna. 2007. Activating and inhibitory functions of DAP12. Nat Rev Immunol 7:155-161.
Underhill, D.M., and H.S. Goodridge. 2007. The many faces of ITAMs. Trends Immunol 28:66-73.
Walker, J.A., and K.G. Smith. 2008. CD22: an inhibitory enigma. Immunology 123:314-325.
Walsh, M.C., and Y. Choi. 2003. Biology of the TRANCE axis. Cytokine Growth Factor Rev 14:251-263.

［配列］
注：下線が引かれた配列は定常領域を表し、二重線が引かれた配列は任意のシグナルペプチドを表し、太字の配列は相補性決定領域を表す。

Claims (21)

1. 骨形成不全症ＶＩ型を治療する方法であって、Ｓｉｇｌｅｃ−１５との特異的結合が可能である抗体またはその抗原結合断片を、必要としている個体に投与することを含む方法。
2. ＰＥＤＦのまたはＰＥＤＦ経路における不均衡または制御異常に関連する骨疾患を治療する方法であって、Ｓｉｇｌｅｃ−１５との特異的結合が可能である抗体またはその抗原結合断片を、必要としている個体に投与することを含む方法。
3. 骨疾患がＰＥＤＦの不活性化、機能の喪失、発現の喪失、分泌の喪失、または変異に関連する、請求項１または２に記載の方法。
4. 骨疾患がＰＥＤＦの下流のエフェクターにおける不活性化、機能の喪失、発現の喪失、分泌の喪失、または変異に関連する、請求項１または２に記載の方法。
5. 骨疾患が、ＰＥＤＦの発現または分泌に正に影響する制御因子の機能の喪失、発現の喪失、分泌の喪失、または変異に関連する、請求項１または２に記載の方法。
6. 骨疾患が、ＰＥＤＦの発現または分泌に負に影響する制御因子の機能、発現、分泌の増大に関連する、請求項１または２に記載の方法。
7. 必要としている個体が、骨形成不全症を患っているまたは骨形成不全症を患いやすい、請求項２から６のいずれか一項に記載の方法。
8. 必要としている個体が幼児または小児である、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
9. 必要としている個体がＳＥＲＰＩＮＦ１遺伝子に変異を有する、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
10. 抗体またはその抗原結合断片が、破骨細胞分化、破骨細胞形成、または破骨細胞活性を阻害することが可能である、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
11. 抗体またはその抗原結合断片が、破骨細胞分化、破骨細胞形成、または破骨細胞活性をインビトロまたはインビボアッセイにおいて阻害することが可能である、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
12. 抗体またはその抗原結合断片が、骨吸収を阻害することが可能である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
13. 抗体またはその抗原結合断片が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ハイブリッド抗体、またはそれらの抗原結合断片である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
14. ＰＥＤＦのまたはＰＥＤＦ経路における不均衡または制御異常に関連する骨疾患の治療のための、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその抗原結合断片の使用。
15. 疾患が骨形成不全症である、請求項１４に記載の使用。
16. 疾患が骨形成不全症ＶＩ型である、請求項１４または１５に記載の使用。
17. 抗体またはその抗原結合断片が、破骨細胞分化、破骨細胞形成、または破骨細胞活性を阻害することが可能である、請求項１４から１６のいずれか一項に記載の使用。
18. 抗体またはその抗原結合断片が、破骨細胞分化、破骨細胞形成、または破骨細胞活性をインビトロまたはインビボアッセイにおいて阻害することが可能である、請求項１４から１６のいずれか一項に記載の使用。
19. 抗体またはその抗原結合断片が、骨吸収を阻害することが可能である、請求項１４から１６のいずれか一項に記載の使用。
20. 抗体またはその抗原結合断片が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ハイブリッド抗体、またはそれらの抗原結合断片である、請求項１４から１９のいずれか一項に記載の使用。
21. 骨形成不全症ＶＩ型の治療において使用するための抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体。