JP2017521424A - ウイルス疾患の治療、改善又は予防におけるジヒドロピリドピラジン−１，８−ジオン及びそれらの使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、下記一般式（Ｖ）で表わされ、任意に、ウイルス疾患の治療、改善又は予防に有用な、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、多形、コドラッグ、共結晶、プロドラッグ、互変異性体、ラセミ体、エナンチオマー若しくはジアステレオマー又はそれらの混合物の形態であってもよい化合物に関する。さらに特定の併用療法を開示する。【選択図】なし

Description

本発明は、ウイルス疾患の治療、改善又は予防に有用な、一般式（Ｖ）：
で表わされ、任意に、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、多形、コドラッグ（codrug）、共結晶、プロドラッグ、互変異性体、ラセミ体、エナンチオマー若しくはジアステレオマー、又はそれらの混合物の形態であってもよい化合物に関する。さらに、具体的な併用療法を開示する。

近年、世界的な公衆衛生へのインフルエンザウイルス感染による深刻な脅威が、第一に高病原性Ａ型鳥インフルエンザウイルスＨ５Ｎ１株の進行中のヒトへの伝播（感染したヒトにおける６３％の死亡率、http://www.who.int/csr/disease/avian_influenza/en/）、第二に２００９年の全世界に急速に蔓延した新規の流行性インフルエンザウイルス株Ａ／Ｈ１Ｎ１の予期せぬ出現（http://www.who.int/csr/disease/swineflu/en/）によって浮き彫りになっている。この新たなウイルス株は感染力が強いが、現在では概して比較的軽度の病気しか生じていないが、このウイルスの将来の進化は予測不可能である。はるかに深刻であるが、極めて説得力のあるシナリオでは、Ｈ５Ｎ１及び関連の高病原性鳥インフルエンザウイルスがヒト間でより容易に伝播し得るような突然変異を獲得するか、又は新たなＡ／Ｈ１Ｎ１が近年の多くの季節性Ｈ１Ｎ１株のように（非特許文献１、非特許文献２）、より病原性が強くなる場合があり、またオセルタミビル耐性を与えるには単一点突然変異のみで十分である（非特許文献３）。この場合、ワクチンの生成及び展開の遅延（Ａ／Ｈ１Ｎ１の比較的有利な場合で約６ヶ月であり、Ｈ５Ｎ１については依然として解決されていない問題である）が人々の生命に破滅的な影響をもたらし、社会的混乱を生じ得る。

新たなワクチンが利用可能となるまでの期間を埋めるため及び重症例を治療するため、並びにウイルス耐性の問題に対応するためには、より幅広い抗インフルエンザ薬の選択肢が必要とされることが広く認められている。したがってこの点からも、ノイラミニダーゼ阻害剤が利用可能となってから大手製薬会社の殆どが断念している新たな抗インフルエンザ薬の開発が最優先となっている。

抗ウイルス薬開発の格好の出発点は、必須ウイルスタンパク質の構造データである。このため、例えばインフルエンザウイルス表面抗原ノイラミニダーゼの結晶構造の決定（非特許文献４）は、ウイルス産生自体ではなく、細胞からのウイルスの放出を妨げる抗ウイルス活性を有するノイラミニダーゼ阻害剤の開発に直結した。これら及びそれらの誘導体は、その後抗インフルエンザ薬であるザナミビル（Glaxo）及びオセルタミビル（Roche）へと開発され、現在では起こり得る大流行に対する防御の第一線として多くの国々が備蓄している。しかしながら、これらの薬剤は臨床疾患の期間の短縮しかもたらさない。代替的には、他の認可された抗インフルエンザ薬群（例えばアマンタジン及びリマンタジン）が、細胞内のウイルス粒子の脱殻を妨げる、ウイルス膜中に位置するウイルスＭ２イオンチャネルタンパク質を標的としている。しかしながら、これらはその副作用及び耐性ウイルス突然変異体の急速な発生のために広くは使用されていない（非特許文献５）。加えて、リバビリン等のより非特異的な抗ウイルス薬が、インフルエンザ及び他のウイルス感染の治療に有効であることが示されている（非特許文献６）。しかしながらリバビリンは、おそらくは重い副作用のために少数の国でしか認可されていない（非特許文献７）。明らかに、好ましくは異なる標的に指向性を有する新たな抗ウイルス化合物が必要とされている。

インフルエンザウイルス及びトゴトウイルス及びイサウイルスはオルトミクソウイルス科に属し、とりわけハンタウイルス、ナイロウイルス、オルトブニヤウイルス及びフレボウイルスを含むブニヤウイルス科と同様にマイナス鎖ＲＮＡウイルスである。それらのゲノムは分節され、（ｉ）一本鎖マイナス鎖ウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）のウイルスｍＲＮＡへの初期コピー（すなわち転写）及び（ｉｉ）ｖＲＮＡ複製を行う、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを含むリボヌクレオタンパク質粒子となる。サブユニットＰＡ、ＰＢ１及びＰＢ２から構成される三量体複合体であるこの酵素は、ウイルスＲＮＡの複製及び転写に関与することから、ウイルスのライフサイクルの中心である。以前の研究では、ポリメラーゼの２つの主要ドメインである、ＰＢ２サブユニット中のｍＲＮＡキャップ結合ドメイン（非特許文献８）及びＰＡサブユニット中にあるエンドヌクレアーゼ活性部位（非特許文献９）の原子構造が同定され、これらの分子構造が特徴付けられた。これら２つの部位は、インフルエンザウイルス及びこの属の或る特定の他のウイルスファミリーによってウイルスｍＲＮＡを生成するために使用されるｍＲＮＡ転写を開始するのに使用される独特の「キャップスナッチング」様式に重要である。５’キャップは、メッセンジャーＲＮＡの５’末端に付加された修飾グアニンヌクレオチドである。５’キャップ（ＲＮＡキャップ又はＲＮＡ ｍ７Ｇキャップとも呼ばれる）は、５’−５’−三リン酸結合により第１の転写ヌクレオチドに連結された末端の７−メチルグアノシン残基からなる。ウイルスポリメラーゼは、細胞ｍＲＮＡ分子の５’ＲＮＡキャップに結合し、１０〜１５ヌクレオチドストレッチと共にそのＲＮＡキャップを切断する。その後、キャップを有するＲＮＡ断片は、ウイルスｍＲＮＡの合成に対するプライマーとして働く（非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２、非特許文献１３）。

ポリメラーゼ複合体は、それがウイルスｍＲＮＡの合成及びウイルス複製に必須であり、宿主細胞タンパク質に見られるものとは顕著に異なる可能性がある幾つかの機能的活性部位を含有することから、適切な抗ウイルス薬の標的であるようである（非特許文献５）。このため、例えば、ＰＢ１中のＰＡ結合ドメインに類似した２５アミノ酸ペプチドによるポリメラーゼサブユニットの集合を妨げることが試みられている（非特許文献１４）。さらに、ポリメラーゼのエンドヌクレアーゼ活性が標的とされ、一連の４−置換２，４−ジオキソブタン酸化合物がインフルエンザウイルスにおけるこの活性の選択的阻害剤として同定された（非特許文献１５）。加えて、真菌種のデリツチア・コンファータスポラ（Delitschia confertaspora）の抽出物において同定された、置換２，６−ジケトピペラジンであるフルチミドは、インフルエンザウイルスのエンドヌクレアーゼを阻害することが示されている（非特許文献１６）。さらに、２’−デオキシ−２’−フルオログアノシン等のヌクレオシド類似体によってウイルス転写を妨げることが試みられている（非特許文献１７）。

特許文献１は、ＨＩＶインテグラーゼを阻害するのに好適であると言われる或る特定のヒドロキシジヒドロピリドピラジン−１，８−ジオンに関する。

特許文献２は、ＨＩＶインテグラーゼ阻害剤として記載されている特定の含窒素縮合環化合物を開示している。

国際公開第２００６／０６６４１４号 欧州特許出願公開第１５４４１９９号

Dharan et al., The Journal of the American Medical Association, 2009 Mar 11; 301 (10), 1034-1041 Moscona et al., The New England Journal of Medicine, 2009 (Mar 5;360(10) pp. 953-956) Neumann et al., Nature, 2009 (18; 459(7249) 931-939) Von Itzstein, M. et al., (1993), Nature, 363, pp. 418-423 Magden, J. et al., (2005), Appl. Microbiol. Biotechnol., 66, pp. 612-621 Eriksson, B. et al., (1977), Antimicrob. Agents Chemother., 11, pp. 946-951 Furuta et al., ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, 2005, p. 981-986 Guilligay et al., Nature Structural & Molecular Biology 2008; May;15(5): 500-506 Dias et al., Nature 2009, 458, 914-918 Plotch, S. J. et al., (1981), Cell, 23, pp. 847-858 Kukkonen, S. K. et al (2005), Arch. Virol., 150, pp. 533-556 Leahy, M. B. et al., (2005), J. Virol., 71, pp. 8347-8351 Noah, D. L. et al., (2005), Adv. Virus Res., 65, pp. 121-145 Ghanem, A. et al., (2007), J. Virol., 81, pp. 7801-7804 Tomassini, J. et al., (1994), Antimicrob. Agents Chemother., 38, pp. 2827-2837 Tomassini, J. et al., (1996), Antimicrob. Agents Chemother., 40, pp. 1189-1193 Tisdale, M. et al., (1995), Antimicrob. Agents Chemother., 39, pp. 2454-2458

本発明の目的は、ウイルス疾患に対して効果的であり、薬理学的特性が改善された更なる化合物を同定することである。

したがって、第１の実施の形態では、本発明は一般式（Ｖ）で表わされる化合物を提供する。

本明細書全体を通して、「一般式（Ｖ）で表わされる化合物」という用語は、他に言及のない限り、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、多形、プロドラッグ、コドラッグ、共結晶、互変異性体、ラセミ体、エナンチオマー若しくはジアステレオマー、又はそれらの混合物を包含することが理解される。

本発明の更なる実施の形態は、一般式（Ｖ）で表わされる化合物と、任意に１種又は複数種の薬学的に許容可能な賦形剤及び／又は担体とを含む医薬組成物に関する。

一般式（Ｖ）で表わされる化合物は、ウイルス疾患の治療、改善又は予防に有用である。

驚いたことに、本発明による化合物は、キャップ結合コア及びエンドヌクレアーゼコアの最適な結合性及び置換パターンを用いた、リンカー系（バタフライ構造）を介したキャップ結合フラグメント及びエンドヌクレアーゼフラグメントの組合せとなることがわかった。このアプローチは、薬剤忍容性のような特性を考慮する中で、化学及び代謝の安定性が得られ、コアフラグメント同士が結合するが、選択的リガンドのそれぞれの関連部分を置き換えることから、リンカー法をハイブリッドアプローチに変換するものである。

現在の化合物において、二環式環系としての二元金属結合頭部基を嵩高い疎水性基と結合させることで、インフルエンザポリメラーゼに対するリガンド効率及び選択性を増大させるのに重要な更なる相互作用がもたらされ、現在利用可能な治療選択肢に対して優れた、選択的及びｉｎ ｖｉｖｏにおける強力な化合物が得られる。疎水性基として、多種多様の様々な芳香族環系は寛容性があり、更なる官能基との結合親和性を最適化する。二元金属の頭部官能基と疎水性置換基との間の結合リンカー基の結合により、フラグメント同士の最適な空間配列が確保され、また細胞透過性を決定する分子の全体の極性に影響を及ぼす。本化合物のキャッププラグメントは最適な平面コアを確保し、平面キャップ結合ポケット（flat cap-binding pocket）内に大きなπスタッキング相互作用をもたらす。

Ｑｕａｎｔｉｇｅｎｅ ＴＡアッセイプローブセット設計に使用された、デノボ合成されたウイルスｍＲＮＡの配列を示す図である：標識伸長剤（ＬＥ）は提供された合成ＲＮＡ基質から得られたキャップされたプライマー配列及びデノボ合成されたウイルスｍＲＮＡの５’末端側の第１の塩基にハイブリダイズし（ＬＥ１）、また３’末端側のポリａ尾部にハイブリダイズする（ＬＥ２）。キャプチャー伸長剤（ＣＥ１〜９）は遺伝子特異的領域に特異的にハイブリダイズし、同時にキャプチャーしたＲＮＡをプレートに固定化する。ブロッキングプローブ（ＢＰ）は、デノボ合成されたウイルスｍＲＮＡの様々な伸長領域（stretches：ストレッチ）にハイブリダイズする。３’末端の斜字で示した配列は３’−ＲＬＭ ＲＡＣＥ法により確かめられた（完全な配列は図示せず）。プローブセットはPanomicsより３つ全てのミックスとして供給されている。

本発明を下記に詳細に説明する前に、本明細書に記載の特定の方法論、プロトコル及び試薬は変更することができるため、本発明がこれらに限定されないことを理解されたい。本明細書で使用される専門用語は特定の実施形態を説明することを目的とするものに過ぎず、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図するものではないことも理解されたい。他に定義のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。

好ましくは、本明細書で使用される用語は、"A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)", Leuenberger, H.G.W, Nagel, B. and Koelbl, H. eds. (1995), Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Switzerlandに記載のように定義される。

本明細書及び添付の特許請求の範囲の全体を通して、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「含む」という語は（the word "comprise", and variations such as "comprises" and "comprising"）、提示の物（integer）若しくは工程又は物（integer）若しくは工程の群を含むが、任意の他の物（integer）若しくは工程又は物（integer）若しくは工程の群を除外しないことを意味するものと理解される。以下の節で本発明の種々の態様をより詳細に規定する。そのように規定される各々の態様は、そうではないという明白な指定のない限り、任意の他の態様（単数又は複数）と組み合わせることができる。特に、好ましい又は有利であることが示される任意の特徴を、好ましい又は有利であることが示される任意の他の特徴（単数又は複数）と組み合わせることができる。

幾つかの文献が本明細書の文章全体を通して引用される。本明細書に引用される各々の文献（特許、特許出願、科学出版物、製造者の仕様書、使用説明書等の全てを含む）は、上記又は下記を問わず、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。本明細書中のいずれの記載も、本発明が従来発明のためにかかる開示に先行する権利がないことを認めるものと解釈されるものではない。

定義
「アルキル」という用語は、飽和した直鎖又は分岐炭化水素鎖を指す。

「アリール」という用語は好ましくは、６個の炭素原子を含有する芳香族単環式環、１０個の炭素原子を含有する芳香族二環式環系又は１４個の炭素原子を含有する芳香族三環式環系を指す。例として、フェニル、ナフチル又はアントラセニル、好ましくはフェニルが挙げられる。

「１０個〜１４個の環原子及び１個〜４個の窒素原子を含む二環式縮合環系」という用語は、少なくとも２つの環が縮合し、すなわち結合を共有する環系を指す。この環系を構成する環は飽和型、不飽和型又は芳香族であってよい。典型的な例として、５個、６個又は７個の環原子を有する２つの環を縮合する環系が挙げられる。本発明の化合物に使用される二環式縮合環系において、１個〜４個の環原子は窒素原子である。さらに、二環式縮合環系をカルボニル基（＝Ｏ）又は添付の特許請求の範囲において定義される他の置換基によって置換することができる。

「シクロアルキル」という用語は「アルキル」の環式のものを表す。「シクロアルキル」という用語もその二環式、三環式及び多環式のものを含むことを意味する。他に明記されない限り、シクロアルキル基は３個〜１２個の炭素原子を有し得る。

「カルボシクリル」という用語は、環中にヘテロ原子を含まない任意の五員又は六員の炭化水素環を包含する。「カルボシクリル環」という用語は、飽和型（シクロアルキル環を含む）、不飽和型環及び芳香族環（アリール環を含む）を包含する。

「Ｈａｌ」又は「ハロゲン」はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩを表す。

「ヘテロアリール」という用語は好ましくは、環中の炭素原子の１つ又は複数が、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される同じ又は異なるヘテロ原子の１つ、２つ、３つ若しくは４つ（五員環の場合）又は１つ、２つ、３つ、４つ若しくは５つ（六員環の場合）によって置き換えられた五員又は六員の芳香族環を指す。ヘテロアリール基の例には、ピロール、ピロリジン、オキソラン、フラン、イミダゾリジン、イミダゾール、ピラゾール、オキサゾリジン、オキサゾール、チアゾール、ピペリジン、ピリジン、モルホリン、ピペラジン及びジオキソランが含まれる。

「ヘテロシクリル」という用語は、環中の炭素原子の少なくとも１つが、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される同じ又は異なるヘテロ原子の１つ、２つ、３つ若しくは４つ（五員環において）又は１つ、２つ、３つ、４つ若しくは５つ（六員環において）によって置き換えられた任意の五員又は六員の環を包含する。「ヘテロシクリル環」という用語は、飽和型、不飽和型の環及び芳香族の環（ヘテロアリール環を含む）を包含する。例として、ピロール、ピロリジン、オキソラン、フラン、イミダゾリジン、イミダゾール、ピラゾール、オキサゾリジン、オキサゾール、チアゾール、ピペリジン、ピリジン、モルホリン、ピペラジン及びジオキソランが挙げられる。

化合物又は部分が「任意に置換された」と称される場合、それぞれ、同じであっても又は異なっていてもよい１つ又は複数の指定の置換基を含み得る。

「薬学的に許容可能な塩」という用語は本発明の化合物の塩を指す。好適な薬学的に許容可能な塩としては、例えば本発明の化合物の溶液と、塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸又はリン酸等の薬学的に許容可能な酸の溶液とを混合することによって形成され得る酸付加塩が挙げられる。さらに、化合物が酸性部分を有する場合、その好適な薬学的に許容可能な塩としては、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩又はカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩又はマグネシウム塩）、及び好適な有機リガンドと形成される塩（例えば、ハロゲン化物アニオン、水酸化物アニオン、カルボン酸アニオン、硫酸アニオン、リン酸アニオン、硝酸アニオン、アルキルスルホン酸アニオン及びアリールスルホン酸アニオン等の対アニオンを用いて形成されるアンモニウムカチオン、第四級アンモニウムカチオン及びアミンカチオンの塩）を挙げることができる。薬学的に許容可能な塩の実例としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、酒石酸水素塩、ホウ酸塩、臭化物塩、酪酸塩、エデト酸カルシウム塩、樟脳酸塩（camphorate）、カンファースルホン酸塩、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物塩、クエン酸塩、クラブラン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、二塩酸塩、ドデシル硫酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストール酸塩（estolate）、エシル酸塩（esylate）、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコヘプトン酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリセロリン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩（glycolylarsanilate）、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩（hexylresorcinate）、ヒドラバミン塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メタンスルホン酸塩、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、ペクチン酸塩（pectinate）、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、ポリガラクツロン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオジド（triethiodide）、ウンデカン酸塩、吉草酸塩等が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、S. M. Berge et al., "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci., 66, pp. 1-19 (1977)を参照されたい）。

本発明の化合物を結晶形態で提供する場合、その構造は溶媒分子を含有し得る。溶媒は通常は薬学的に許容可能な溶媒であり、とりわけ水（水和物）又は有機溶媒が含まれる。可能な溶媒和物の例としては、エタノール付加物及びイソプロパノール付加物（iso-propanolates）が挙げられる。

「コドラッグ」という用語は、共有化学結合を介して結合した２つ以上の治療化合物を指す。詳細な定義は、例えばN. Das et al., European Journal of Pharmaceutical Sciences, 41, 2010, 571-588に見ることができる。

「共結晶」という用語は、純粋形態の場合に全成分が周囲条件下で固体である複合成分結晶を指す。これらの成分は、標的分子又はイオン（すなわち本発明の化合物）及び１種又は複数種の中性分子共結晶形成剤（formers）の化学量論比又は非化学量論比で共存する。詳述は例えば、Ning Shan et al., Drug Discovery Today, 13(9/10), 2008, 440-446及びD. J. Good et al., Cryst. Growth Des., 9(5), 2009, 2252-2264に見ることができる。

本発明の化合物はプロドラッグ、すなわちｉｎ ｖｉｖｏで活性代謝産物へと代謝される化合物の形態でも提供され得る。好適なプロドラッグは、例えばエステルである。好適な基のより詳細な例として特に、米国特許出願公開第２００７／００７２８３１号の段落番号［００８２］〜［０１１８］のプロドラッグ及び保護基の見出しに挙げられる。プロドラッグの好ましい例として、Ｒ^５１が−Ｃ（Ｏ）−Ｒ、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ、−ＰＯ（ＯＲ^Ａ）（ＯＲ^Ｂ）又は−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ（Ｒ、Ｒ^Ａ及びＲ^Ｂは独立してＣ_１〜６アルキル、アリール又はヘテロアリールから選択され、アルキル、アリール又はヘテロアリールは任意に例えば、−ＯＨ又はＯ−Ｃ_１〜６アルキルによって置換することができる）から選択される化合物が挙げられる。Ｒの例として、Ｃ_１〜６アルキル（ＣＨ_３、ｔ−ブチル）、フェニル、フェニル−ＯＨ又はフェニル−ＯＣＨ_３が挙げられる。

一般式（Ｖ）で表わされる化合物
本発明は、一般式（Ｖ）で表わされる化合物を提供する。

本発明は、一般式（Ｖ）で表わされる化合物を提供し、式中、以下の定義が適用される。

Ｒ^５１は−Ｈ、−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）及び−Ｃ（Ｏ）−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）から選択され、好ましくはＲ^５１は−Ｈ及び−Ｃ_１〜６アルキルから選択され、より好ましくはＲ^５１は−Ｈである。

Ｒ^５２は−Ｈ、−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）、−（ＣＨ_２）_ｑ−（任意に置換されたヘテロシクリル）、−（ＣＨ_２）_ｑ−（任意に置換されたカルボシクリル）、−（ＣＨ_２）_ｐ−ＯＲ^５５及び−（ＣＨ_２）_ｐ−ＮＲ^５６Ｒ^５７から選択され、好ましくはＲ^５２は−Ｈ及び−Ｃ_１〜６アルキルから選択される。

Ｒ^５３は−Ｒ^５４及び−Ｘ^５１Ｒ^５４から選択され、好ましくはＲ^５３は−Ｘ^５１Ｒ^５４である。

Ｒ^５４は１０個〜１４個の環原子及び環原子として１個〜４個の窒素原子を含む二環式縮合環系であり、この二環式縮合環系を任意に置換することができる。好ましくはＲ^５４は、２つの縮合環を含む二環式縮合環系であり、この縮合環は独立して、五員環、六員環及び七員環から選択される。より好ましくはＲ^５４は２つの縮合環を含む二環式縮合環系であり、この縮合環は独立して五員環及び六員環から選択され、特にＲ^５４は２つの縮合環を含む二環式縮合環系であり、この縮合環は五員環及び六員環である。二環式縮合環系は、１個〜４個の窒素原子、好ましくは２個〜３個の窒素原子を含む。

二環式縮合環系は（＝Ｏ）、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３、−（ＣＨ_２）_ｓ−Ｘ^５２−Ｒ^５８、−Ｃ_１〜６アルキル、−Ｃ_３〜７カルボシクリル、−Ｃ_１〜４アルキル−Ｃ_３〜７カルボシクリル、−（３個〜７個の環原子を有するヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有するヘテロシクリル）から独立して選択される１つ又は複数の（例えば１つ、２つ又は３つの）置換基で任意に置換することができる。この点において好ましい置換基は（＝Ｏ）、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３及び−Ｃ_３〜７カルボシクリル、より好ましくは（＝Ｏ）、ハロゲン及び−Ｃ_３〜７カルボシクリルから選択される１つ又は複数の置換基、更により好ましくは（＝Ｏ）及びハロゲンである。

好ましい実施形態において、Ｒ^５４は、
（式中、
は分子の残りの部分に結合する点を示し、
この基をハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３、−（ＣＨ_２）_ｓ−Ｘ^５２−Ｒ^５８、−Ｃ_１〜６アルキル、−Ｃ_３〜７カルボシクリル、−Ｃ_１〜４アルキル−Ｃ_３〜７カルボシクリル、−（３個〜７個の環原子を有するヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有するヘテロシクリル）から選択される１つ又は複数の置換基、好ましくはハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３及び−Ｃ_３〜７カルボシクリルから選択される１つ又は複数の置換基、より好ましくはハロゲン及び−Ｃ_３〜７カルボシクリルから選択される１つ又は複数の置換基、更により好ましくはハロゲンで任意に置換することができる）からなる群から選択される。

Ｒ^５５は−Ｈ、−Ｃ_１〜６アルキル及び−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｒＨから選択される。

Ｒ^５６は、−Ｈ、−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−Ｃ_１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）、好ましくは−Ｈ及び−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）、より好ましくは−Ｈ及び−Ｃ_１〜６アルキルから選択される。

Ｒ^５７は−Ｈ、−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−Ｃ_１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）、好ましくは−Ｈ及び−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）、より好ましくは−Ｈ及び−Ｃ_１〜６アルキルから選択される。

Ｒ^５８は−Ｈ及び−Ｃ_１〜６アルキルから選択される。

Ｘ^５１は−Ｌ_１−（Ａ−（Ｌ_２）_ｍ）_ｎ−から選択され、好ましくはＸ^５１は−Ｌ_１−及び−Ｌ_１−Ａ−Ｌ_２−から選択される。

Ｘ^５２はＮＲ^５６、Ｎ（Ｒ^５６）Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ^５６、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、Ｎ（Ｒ^５６）ＳＯ_２、ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^５６）、Ｓ、ＳＯ及びＳＯ_２から選択され、好ましくはＸ^５２はＮ（Ｒ^５６）Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ^５６、Ｎ（Ｒ^５６）ＳＯ_２及びＳＯ_２Ｎ（Ｒ^５６）から選択される。

Ｌ_１はＮＲ^５６、Ｎ（Ｒ^５６）Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ^５６、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、Ｎ（Ｒ^５６）ＳＯ_２、ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^５６）、Ｎ（Ｒ^５６）ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^５６）、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ_２及び（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）−ＮＲ^５６から選択され、好ましくはＬ_１はＮＲ^５６、Ｎ（Ｒ^５６）Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ^５６、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、Ｏ及び（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）−ＮＲ^５６から選択される。一例として、
があり、これを例えばＦ等のハロゲンにより任意に置換することができる。

Ｌ_２はＮＲ^５６、Ｎ（Ｒ^５６）Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ^５６、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、Ｎ（Ｒ^５６）ＳＯ_２、ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^５６）、Ｎ（Ｒ^５６）ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^５６）、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ_２及び（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）−ＮＲ^５６から選択され、好ましくはＬ_２はＮＲ^５６、Ｎ（Ｒ^５６）Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ^５６、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、Ｏ及び（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）−ＮＲ^５６から選択される。一例として、
があり、これを例えばＦ等のハロゲンにより任意に置換することができる。

Ａは（ＣＲ^＊Ｒ^＊＊）_ｔ、任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル、３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリルから選択され、カルボシクリル又はヘテロシクリルの環原子の少なくとも１つ（例えば１つ、２つ又は３つ）はそれぞれ部分Ｌ_１及びＬ_２又はＲ^５４と鎖内で結合する。２つ以上の部分Ａの組合せが存在していてもよい。例えば、２つの部分Ａは互いに共有結合し、部分−Ｌ_１−（Ａ−Ａ−（Ｌ_２）_ｍ）_ｎ−となり得る。１つの選択肢において、Ａは（ＣＲ^＊Ｒ^＊＊）_ｔ、シクロヘキシル及びフェニル、並びにそれらの組合せから選択することができる。（ＣＲ^＊Ｒ^＊＊）_ｔの例として、−（ＣＨ_２）_ｔ−及び−（ＣＨＲ^＊）_ｔ−が挙げられる。

Ｒ^＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−Ｃ_１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、好ましくはＲ^＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−Ｃ_１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）、より好ましくは−Ｈ、−（Ｃ_１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）から選択される。

Ｒ^＊＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−Ｃ_１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、好ましくはＲ^＊＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−Ｃ_１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）、より好ましくは−Ｈ、−（Ｃ_１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）から選択される。

代替的な実施形態において、Ｒ^＊及びＲ^＊＊は結合する炭素原子とともに、任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル基又は３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル基、好ましくは任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル基を形成する。

Ｒ^＊＊＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−Ｃ_１〜６アルキル基又は１つ若しくは複数のハロゲン原子により置換される−Ｃ_１〜６アルキル基である。

ｍは０又は１である。

ｎは０又は１である。

ｐは１〜４である。

ｑは０〜４である。

ｒは１〜３である。

ｓは０〜４である。

ｔは０〜６である。

アルキル基は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＲ^５６Ｒ^５７、−ＯＨ、及び−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキルから独立して選択される１つ又は複数の置換基で任意に置換することができる。

炭化水素基、ヘテロシクリル基及び／又はカルボシクリル基をハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３、−（ＣＨ_２）_ｓ−Ｘ^５２−Ｒ^５８、−Ｃ_１〜６アルキル、−Ｃ_３〜７カルボシクリル、−Ｃ_１〜４アルキル−Ｃ_３〜７カルボシクリル、−（３個〜７個の環原子を有するヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有するヘテロシクリル）、好ましくはハロゲン、−ＣＮ、−ＮＲ^５６Ｒ^５７、−ＯＨ及び−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキルから独立して選択される１つ又は複数の置換基で任意に置換することができる。

上記の定義及び好ましい定義の全ての組合せもまた、本発明者らにより想定されるものである。

本発明者らは、驚いたことに、特異的なリンカーである−（ＣＲ^＊＊＊Ｒ^＊＊＊）−Ｒ^５３を有する本発明の化合物がこのようなリンカーを含まない当該化合物に比べ薬理学的特性が改善されていることがわかった。理論に束縛されることを望まないが、本発明の化合物は、二元金属結合だけでなく、リガンドの固有の結合特性に寄与する疎水性の相互作用も有することが仮定される。二元金属の頭部基と嵩高い疎水性の置換基とを組み合わせているより柔軟なリンカーにより、より高い配座柔軟性が得られ、特定の相互作用に適用し、またより高い配座柔軟性によってエントロピーの寄与（１分子）を失うことなく、より最適な方法において結合ポケットの幾つかのアミノ酸に相互作用するベクターが得られる。

本発明の化合物は、任意に１種又は複数種の薬学的に許容可能な賦形剤及び／又は担体を含み得る医薬組成物の形態で患者に投与することができる。

本発明の化合物は、経口投与、直腸投与、胃内投与、頭蓋内投与及び非経口投与、例えば静脈内投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、皮内投与、皮下投与、並びに類似の投与経路を含む様々な既知の経路で投与することができる。経口投与、鼻腔内投与及び非経口投与が特に好ましい。投与経路に応じて異なる医薬配合物が必要とされ、その一部で本発明の化合物の例えば消化管における分解を防ぐ保護コーティングを薬物配合物に施す必要がある場合がある。

このため、本発明の化合物はシロップ、輸液若しくは注射液、噴霧剤、錠剤、カプセル、カプレット、トローチ剤、リポソーム、坐剤、硬膏、絆創膏、徐放性カプセル（retard capsule）、粉末又は持続放出配合物として配合するのが好ましい。希釈剤は好ましくは水、緩衝液、緩衝塩溶液又は塩溶液であり、担体は好ましくはココアバター及びビテベソール（vitebesole）からなる群から選択される。

本発明の化合物の投与に特に好ましい医薬品形態は注射用途に好適な形態であり、滅菌水溶液又は分散液、及び滅菌注射用溶液又は分散液の即時調製用の滅菌粉末が挙げられる。いかなる場合も、最終の溶液又は分散液形態は滅菌され、流体でなくてはならない。通常は、かかる溶液又は分散液としては、例えば水緩衝水溶液、例えば生体適合性緩衝液、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等のポリオール、それらの好適な混合物、界面活性剤又は植物油を含有する溶媒又は分散媒が挙げられる。本発明の化合物は、特に非経口投与用のリポソームへと配合することもできる。リポソームは、遊離薬物と比較して増大した循環血液中での半減期、及び封入された薬物の持続した、より均一な放出という利点をもたらす。

輸液又は注射液の滅菌は、抗菌剤又は抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸又はチメロサールのような防腐剤の添加を含むが、これに限定されない任意の回数の当該技術分野で認められている技法によって行うことができる。さらに、糖又は塩等の等張剤、特に塩化ナトリウムを輸液又は注射液に加えてもよい。

１つ又は幾つかの本発明の化合物を含有する滅菌注射液の作製は、適切な溶媒中の所要量のそれぞれの化合物と、必要に応じて上に列挙した様々な成分とを組み合わせた後、滅菌することによって行われる。滅菌粉末を得るために、上記の溶液を必要に応じて真空乾燥又は凍結乾燥させる。好ましい本発明の希釈剤は水、生理学的に許容可能な緩衝液、生理学的に許容可能な緩衝塩溶液又は塩溶液である。好ましい担体はココアバター及びビテベソールである。本発明の化合物の様々な医薬形態で使用することができる賦形剤は、以下の非限定的なリストから選ぶことができる：
ａ）ラクトース、マンニトール、結晶ソルビトール、第二リン酸塩、リン酸カルシウム、糖、微結晶性セルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤、
ｂ）ステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、硬化植物油、ロイシン、グリセリド及びフマル酸ステアリルナトリウム等の潤滑剤、
ｃ）デンプン、クロスカルメロース、メチルセルロースナトリウム、寒天、ベントナイト、アルギン酸、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等の崩壊剤。

一実施形態では、配合物は経口投与用であり、以下の成分の１種若しくは複数種又は全種を含む：α化デンプン、タルク、ポビドンＫ３０、クロスカルメロースナトリウム、フマル酸ステアリルナトリウム、ゼラチン、二酸化チタン、ソルビトール、クエン酸一ナトリウム、キサンタンガム、二酸化チタン、香料、安息香酸ナトリウム及びサッカリンナトリウム。

本発明の化合物を鼻腔内投与する場合、好ましい実施形態では、化合物は乾燥粉末吸入剤又はエアゾール噴霧剤の形態で加圧容器、ポンプ、スプレー又はネブライザーから好適な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ １３４Ａ（商標））若しくは１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ ２２７ＥＡ（商標））等のハイドロフルオロアルカン、二酸化炭素又は別の好適なガスを用いて投与することができる。加圧容器、ポンプ、スプレー又はネブライザーは、潤滑剤、例えばトリオレイン酸ソルビタンを更に含有し得る溶媒として例えばエタノールと噴射剤との混合物を用いて本発明の化合物の溶液又は懸濁液を含有することができる。

他の好適な賦形剤は、American Pharmaceutical Association から出版されているHandbook of Pharmaceutical Excipients（引用することにより本明細書の一部をなす）に見ることができる。

障害の重症度及び本発明の化合物の１種を用いて治療可能な特定のタイプ、並びに治療対象のそれぞれの患者、例えば患者の全身健康状態等に応じて、治療効果又は予防効果を発揮するのに異なる用量のそれぞれの化合物が必要とされることを理解されたい。適切な用量の決定は主治医の裁量による。本発明の治療用途又は予防用途における本発明の化合物の投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約１ｇの活性成分（すなわち本発明の化合物）という範囲内にあると考えられる。しかしながら、本発明の好ましい用途では、本発明の化合物は、それを必要とする被験体に１．０ｍｇ／ｋｇ（体重）〜５００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲、好ましくは１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜２００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の量で投与される。本発明の化合物による治療期間は、治療対象の疾患の重症度並びに個々の患者の状態及び特異的な応答に応じて異なる。予防用途又は治療用途の好ましい一実施形態では、疾患の重症度及び／又は保菌者との接触の程度に応じて、１日当たり１０ｍｇ〜２００ｍｇの化合物を成人に経口投与する。

当該技術分野で既知のように、所与の組成物の薬学的有効量も投与経路によって異なる。概して、投与が胃腸管を介する、例えば坐剤、直腸プローブ又は胃内プローブによるものである場合に所要量はより多く、投与経路が非経口経路、例えば静脈内経路である場合に所要量はより少ない。通常、本発明の化合物は、直腸投与又は胃内投与が用いられる場合に５０ｍｇ／ｋｇ（体重）〜１ｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ（体重）〜５００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲で投与され、非経口投与が用いられる場合に１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲で投与される。鼻腔内投与については、１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重）が想定される。

個体が本発明の化合物を用いて治療可能な疾患を発症するリスクがあることが知られる場合、生物学的に活性な血清又は本発明による医薬組成物の予防的投与が可能であり得る。これらの場合、それぞれの本発明の化合物を上に概説した好ましい用量及び特定の好ましい用量で毎日投与するのが好ましい。１日１回０．１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜１ｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ（体重）〜２００ｍｇ／ｋｇ（体重）が好ましい。この投与は、それぞれのウイルス障害を発症するリスクが減少するまで継続することができる。しかしながら、殆どの場合、本発明の化合物は疾患／障害が診断されてから投与される。これらの場合、初回用量の本発明の化合物を１日１回、２回、３回又は４回投与することが好ましい。

本発明の化合物はウイルス疾患の治療、改善又は予防に特に有用である。ウイルス疾患の種類は特に限定されない。考えられるウイルス疾患の例として、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、アデノウイルス、パピローマウイルス、ポリオーマウイルス、パルボウイルス、ヘパドナウイルス、レオウイルス、フィロウイルス、パラミクソウイルス、ラブドウイルス、オルトミクソウイルス、ブンヤウイルス、アレナウイルス、コロナウイルス、ピコルナウイルス、ヘペウイルス、カリシウイルス、アストロウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、デルタウイルス、ボルナウイルス及びプリオンにより引き起こされるウイルス疾患が挙げられるが、それらに限定されない。好ましくはヘルペスウイルス、フィロウイルス、パラミクソウイルス、ラブドウイルス、オルトミクソウイルス、ブンヤウイルス、アレナウイルス、コロナウイルス、ピコルナウイルス、トガウイルス、フラビウイルスにより引き起こされるウイルス疾患、より好ましくはオルトミクソウイルスにより引き起こされるウイルス疾患である。

種々のウイルスの例は以下の表に挙げられる。

本発明の化合物は、インフルエンザを治療するために使用されることが好ましい。本発明は、オルトミクソウイルス科に属する全てのウイルス属、特にＡ型、Ｂ型及びＣ型インフルエンザウイルス、イサウイルス並びにトゴトウイルスを包含する。本発明において、「インフルエンザ」という用語は、それらの様々な系統及び分離株を含むＡ型、Ｂ型及びＣ型のインフルエンザウイルス等の任意のインフルエンザウイルスによって引き起こされるインフルエンザを包含し、また、鳥インフルエンザ及び豚インフルエンザと一般的に呼ばれるＡ型インフルエンザウイルス株を含む。治療される被験体は、特に限定されず、鳥類及び哺乳動物（ヒトを含む）等の任意の脊椎動物であってもよい。

理論に拘束されることを望むものではないが、本発明の化合物は、エンドヌクレアーゼ活性、とりわけインフルエンザウイルスのエンドヌクレアーゼ活性を阻害することができると推測される。より具体的には、本発明の化合物は、エンドヌクレアーゼ活性を持ち、インフルエンザウイルスの複製に必須のインフルエンザウイルスＰＡタンパク質のＮ末端部分に直接干渉すると推測される。インフルエンザウイルスの複製は、細胞内の核内で起こる。そのため、ＰＡエンドヌクレアーゼ活性を阻害するように設計された化合物は、細胞膜及び核膜の両方を越えなければならず、その特性は、上記化合物のデザインされた物理化学的特性に強く依存する。

さらに、理論に束縛されることを望まないが、本発明の化合物は、宿主ｍＲＮＡキャップ構造が、特にインフルエンザウイルスのキャップ結合ドメイン（ＣＢＤ）に結合することを阻害することが可能であることが推測される。より詳細には、本発明の化合物はインフルエンザＰＢ２タンパク質のＣＢＤを直接干渉することが推測される。しかし、化合物の細胞への送達には、例えば化合物の溶解度又は細胞膜を通過する能力による問題が現れる可能性がある。

本発明は、請求する化合物がｉｎ ｖｉｔｒｏのエンドヌクレアーゼ阻害活性及びｉｎ ｖｉｔｒｏのポリメラーゼ阻害活性を有することを示している。

上記式（Ｖ）で表わされる化合物のｉｎ ｖｉｔｒｏでのエンドヌクレアーゼ阻害活性の可能性のある測定は、本明細書で開示されるＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）に基づくエンドヌクレアーゼ活性アッセイである。上記化合物は、ＦＲＥＴアッセイにおいて２５μＭで少なくとも約５０％の％減少を呈するのが好ましい。これに関連して、％減少は、非処理のサンプルと比較した、化合物処理によるインフルエンザウイルスエンドヌクレアーゼサブユニット（ＰＡ−Ｎｔｅｒ）によって切断された二重標識化ＲＮＡ基質の蛍光発光の増加として計測される初期反応速度（ｖ０）の％減少である。上記化合物は、このアッセイにおいて好ましくは約５０μＭ未満、より好ましくは約２０μＭ未満のＩＣ_５０を呈する。半数阻害濃度（ＩＣ_５０）は、生物学的又は生化学的な機能の阻害における化合物の有効性の尺度であり、最大１００μＭ〜少なくとも２ｎＭの範囲の所与の濃度系列での初期反応速度（ｖ０）から算出された。

一般式（Ｖ）で表わされる化合物を、１種又は複数種の他の薬剤と組合せて使用することができる。他の薬剤の種類は特に限定されないが、治療される障害に依存する。好ましくは他の医薬はウイルス疾患の治療、改善又は予防に有用な更なる医薬、より好ましくは、インフルエンザウイルス感染により引き起こされたインフルエンザ及びウイルス性肺炎又は二次細菌性肺炎等のインフルエンザウイルス感染に関連する病態の治療、改善又は予防に有用な更なる医薬、並びに寒気、熱、咽頭痛、筋肉痛、重度の頭痛、咳嗽、脱力感及び疲労感等の症状を治療する医薬である。さらに一般式（Ｖ）で表わされる化合物を抗炎症剤と併用することができる。

以下の組合せの薬剤がとりわけ好適であると予想される。
（ｉ）エンドヌクレアーゼ阻害剤とキャップ結合阻害剤（とりわけインフルエンザを標的とする）との組合せ。エンドヌクレアーゼ阻害剤は特に限定されず、任意のエンドヌクレアーゼ阻害剤、とりわけ、任意のウイルスエンドヌクレアーゼ阻害剤であってもよい。好ましいエンドヌクレアーゼ阻害剤は、米国特許出願公開第２０１３／０１０２６００号、同第２０１３／０３１７０２２号、同第２０１３／０３１７０２１号及び同第２０１４／００３８９９０号に規定のものである。これらの出願の完全な開示は、引用することにより本明細書の一部をなす。とりわけ、これらの米国出願による化合物の一般式、様々な置換基の好ましい実施形態、並びに上記化合物の医学的有用性及び利点に関する全ての記載が引用することにより本明細書の一部をなす。

より好ましいエンドヌクレアーゼ阻害剤は、それらの完全な開示が引用することにより本明細書の一部をなす、米国特許出願第６１／７５０，０２３号（２０１３年１月８日に出願）に規定の一般式（ＩＩ）で表わされる化合物、及び米国特許出願第６１／７５０，０３２号（２０１３年１月８日に出願）に規定の一般式（Ｖ）で表わされる化合物である。特に、これらの化合物の一般式、様々な置換基の好ましい実施形態、また上記化合物の医学的有用性及び利点に関する全ての記載が引用することにより本明細書の一部をなす。これらの化合物は、任意に、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、多形、コドラッグ、共結晶、プロドラッグ、互変異性体、ラセミ体、エナンチオマー、若しくはジアステレオマー、又はそれらの混合物の形態であってもよい。

キャップ結合阻害剤は特に限定されず、任意のキャップ結合阻害剤、特に任意のウイルスキャップ結合阻害剤であり得る。好ましいキャップ結合阻害剤は、米国特許出願公開第２０１３／０１０２６０１号に規定の一般式（ＩＩ）で表わされるもの及び／又は国際公開第２０１１／０００５６６号（その完全な開示が引用することにより本明細書の一部をなす）に開示される化合物である。特に、米国特許出願公開第２０１３−０１０２６０１号又は国際公開第２０１１／０００５６６号による化合物の一般式、様々な置換基の好ましい実施形態、並びに化合物の医学的有用性及び利点に関する全ての記載が引用することにより本明細書の一部をなす。

認可されたインフルエンザ抗ウイルス剤（Ｍ２イオンチャネル阻害剤（アダマンタン）及びノイラミニダーゼ阻害剤（例えばオセルタミビル））の両方のクラスに対する幅広い耐性が、流行性インフルエンザ株及び新たに出現する季節性インフルエンザ株の両方で生じており、これらの薬物の治療法における効用が限定されている。Ｍ２イオンチャネル阻害剤については、ウイルスの耐性頻度は２００３年から増え続けており、季節性インフルエンザＡ／Ｈ３Ｎ２については、アダマンタンは現在無効であるとみなされている。ほぼ全ての２００９ Ｈ１Ｎ１株及び季節性Ｈ３Ｎ２株がアダマンタン（リマンタジン及びアマンタジン）に対して耐性を有し、最も広く処方されているノイラミニダーゼ阻害剤（ＮＡＩ）であるオセルタミビルについては、ＷＨＯは、２００７年／２００８年のインフルエンザ流行期並びに南半球においては２００８年の第２四半期及び第３四半期に端を発するインフルエンザＡ／Ｈ１Ｎ１の耐性の重大な出現について報告している。更により深刻な数が２００８年の第４四半期（北半球）に公表されており、試験した全分離株の９５％がオセルタミビル感受性を示さなかった。現在、大半の国の政府がインフルエンザ大流行に対する対策計画の一環としてＮＡＩを備蓄していることを考えると、新たな有効な薬物に対する需要が著しく増大していることが明らかである。より有効な療法の必要性に取り組むために、作用機構の異なる抗ウイルス薬の二剤併用又は更には三剤併用を用いた予備研究が行われている。アダマンタン及びノイラミニダーゼ阻害剤の組合せがｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで分析され、極めて相乗的に作用することが見出されている。しかしながら、どちらのタイプの抗ウイルス剤についても耐性ウイルスが相当急速に出現し、この問題がこれらの確立された抗ウイルス薬を組み合わせることによっては対処できないことが知られている。

インフルエンザウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ポリメラーゼの転写活性を標的とする新規の薬物である。ウイルスポリメラーゼのキャップ結合部位及びエンドヌクレアーゼ活性部位に対する選択的阻害剤は、ウイルス複製サイクルを停止させることによってウイルス感染を大幅に軽減する。これら２つの標的はポリメラーゼ複合体の異なるサブユニット内に位置するため、独自の薬物標的である。どちらの機能もウイルス転写に必須のいわゆる「キャップスナッチング」機構に必要とされることから、両方の機能の同時阻害が極めて相乗的に作用することが期待される。この高効率の複合薬はより低い物質濃度、したがって向上した用量応答関係及びより良好な副作用プロファイルをもたらし得る。

いずれの活性部位も全てのＡ型インフルエンザ株（例えば、鳥類及びヒト）の間で、またＢ型インフルエンザウイルスの間でも高度に保存され、したがって、この高度な配列保存が、これらの標的が急速な耐性ウイルスの発生を引き起こす可能性が低いという知見を支持する。さらに、宿主タンパク質との密接な相互作用は、これらのウイルスタンパク質に突然変異を起こしにくくする。このため、エンドヌクレアーゼ阻害剤及びキャップ結合阻害剤は単独及び組合せで、ウイルス株に関わらず、季節性インフルエンザ及び流行性インフルエンザの両方に対抗するのに理想的な薬物候補である。

エンドヌクレアーゼ阻害剤とキャップ結合阻害剤との組合せ、又はエンドヌクレアーゼ活性部位及びキャップ結合ドメインの両方を標的とする二重特異性ポリメラーゼ阻害剤は、アダマンタン及びノイラミニダーゼ阻害剤に対して耐性を有するウイルス株に有効であり、さらに耐性株が出現しにくい点と、広範なウイルス株に対する活性という利点を組み合わせたものであり得る。

（ｉｉ）二剤併用療法又は多剤併用療法としての（好ましくはインフルエンザウイルス）ポリメラーゼ阻害剤との組合せに焦点を合わせた種々の抗ウイルス標的の阻害剤（特にインフルエンザウイルスを標的とする）の組合せ。インフルエンザウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ポリメラーゼの転写及び複製活性を標的とする新規の薬物である。ウイルスポリメラーゼに対する選択的阻害剤は、ウイルス複製サイクルを停止させることによってウイルス感染を大幅に軽減する。ウイルス細胞内標的に特異的に対処するポリメラーゼ阻害剤と種々の抗ウイルス標的の阻害剤との組合せは、極めて相乗的に作用することが期待される。これは、これらの異なるタイプの抗ウイルス薬が、組合せの抗ウイルス効果に有利かつ相乗的に作用する異なる薬物動態特性を要求する完全に異なる作用機構を示すということに基づく。

この高効率の複合薬はより低い物質濃度、したがって向上した用量応答関係及びより良好な副作用プロファイルをもたらし得る。さらに、ポリメラーゼ阻害剤について上記された利点は、種々の抗ウイルス標的の阻害剤とポリメラーゼ阻害剤との組合せにも当てはまる。

通常は、ポリメラーゼ阻害剤の第１の群（例えばキャップ結合阻害剤及びエンドヌクレアーゼ阻害剤）から選択される少なくとも１種の化合物と、ポリメラーゼ阻害剤の第２の群から選択される少なくとも１種の化合物とを組み合わせる。

このタイプの併用療法に使用することができるポリメラーゼ阻害剤の第１の群としては、一般式（Ｖ）で表わされる化合物が挙げられるが、これに限定されない。

このタイプの併用療法に使用することができるポリメラーゼ阻害剤の第２の群としては、米国特許出願公開第２０１３／０１０２６００号に規定の一般式（Ｉ）で表わされる化合物、米国特許出願公開第２０１３／０１０２６０１号に規定の一般式（ＩＩ）で表わされる化合物、国際公開第２０１１／０００５６６号、国際公開第２０１０／１１０２３１号、国際公開第２０１０／１１０４０９号、国際公開第２００６／０３０８０７号又は米国特許第５，４７５，１０９号に開示の化合物、並びにフルチミド及び類似体、ファビピラビル及び類似体、没食子酸エピガロカテキン及び類似体、並びにリバビリン等のヌクレオシド類似体が挙げられるが、これらに限定されない。

（ｉｉｉ）ポリメラーゼ阻害剤とノイラミニダーゼ阻害剤との組合せ
インフルエンザウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ポリメラーゼの転写及び複製活性を標的とする新規の薬物である。ウイルス細胞内標的に特異的に対処するポリメラーゼ阻害剤と種々の細胞外抗ウイルス標的、とりわけ（例えばウイルス）ノイラミニダーゼの阻害剤との組合せは、極めて相乗的に作用することが期待される。これは、これらの異なるタイプの抗ウイルス薬が、組合せの抗ウイルス効果に有利かつ相乗的に作用する異なる薬物動態特性を要求する完全に異なる作用機構を示すということに基づく。

この高効率の複合薬はより低い物質濃度、したがって向上した用量応答関係及びより良好な副作用プロファイルをもたらし得る。さらに、ポリメラーゼ阻害剤について上記された利点は、種々の抗ウイルス標的の阻害剤とポリメラーゼ阻害剤との組合せにも当てはまる。

通常は、上述のポリメラーゼ阻害剤の第１の群から選択される少なくとも１種の化合物と、少なくとも１種のノイラミニダーゼ阻害剤とを組み合わせる。

ノイラミニダーゼ阻害剤（特にインフルエンザノイラミニダーゼ阻害剤）は特に限定されない。例としては、ザナミビル、オセルタミビル、ペラミビル、ＫＤＮ、ＤＡＮＡ、ＦＡＮＡ及びシクロペンタン誘導体が挙げられる。

（ｉｖ）ポリメラーゼ阻害剤とＭ２チャネル阻害剤との組合せ
インフルエンザウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ポリメラーゼの転写及び複製活性を標的とする新規の薬物である。ウイルス細胞内標的に特異的に対処するポリメラーゼ阻害剤と種々の細胞外抗ウイルス標的及び細胞質抗ウイルス標的、とりわけウイルスＭ２イオンチャネルの阻害剤との組合せは、極めて相乗的に作用することが期待される。これは、これらの異なるタイプの抗ウイルス薬が、組合せの抗ウイルス効果に有利かつ相乗的に作用する異なる薬物動態特性を要求する完全に異なる作用機構を示すということに基づく。

この高効率の複合薬はより低い物質濃度、したがって向上した用量応答関係及びより良好な副作用プロファイルをもたらし得る。さらに、ポリメラーゼ阻害剤について上記された利点は、種々の抗ウイルス標的の阻害剤とポリメラーゼ阻害剤との組合せにも当てはまる。

通常は、上述のポリメラーゼ阻害剤の第１の群から選択される少なくとも１種の化合物と、少なくとも１種のＭ２チャネル阻害剤とを組み合わせる。

Ｍ２チャネル阻害剤（特にインフルエンザＭ２チャネル阻害剤）は特に限定されない。例としては、アマンタジン及びリマンタジンが挙げられる。

（ｖ）ポリメラーゼ阻害剤とαグルコシダーゼ阻害剤との組合せ
インフルエンザウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ポリメラーゼの転写及び複製活性を標的とする新規の薬物である。ウイルス細胞内標的に特異的に対処するポリメラーゼ阻害剤と種々の宿主細胞標的、とりわけαグルコシダーゼの阻害剤との組合せは、極めて相乗的に作用することが期待される。これは、これらの異なるタイプの抗ウイルス薬が、組合せの抗ウイルス効果に有利かつ相乗的に作用する異なる薬物動態特性を要求する完全に異なる作用機構を示すということに基づく。

この高効率の複合薬はより低い物質濃度、したがって向上した用量応答関係及びより良好な副作用プロファイルをもたらし得る。さらに、ポリメラーゼ阻害剤について上記された利点は、ウイルスの複製と相互作用する細胞標的の阻害剤とポリメラーゼ阻害剤との組合せにも当てはまる。

通常は、上述のポリメラーゼ阻害剤の第１の群から選択される少なくとも１種の化合物と、少なくとも１種のαグルコシダーゼ阻害剤とを組み合わせる。

αグルコシダーゼ阻害剤は特に限定されない。例としては、Chang et al., Antiviral Research 2011, 89, 26-34に記載の化合物が挙げられる。

（ｖｉ）ポリメラーゼ阻害剤と他のインフルエンザ標的のリガンドとの組合せ
インフルエンザウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ポリメラーゼの転写及び複製活性を標的とする新規の薬物である。ウイルス細胞内標的に特異的に対処するポリメラーゼ阻害剤と種々の細胞外、細胞質又は核の抗ウイルス標的の阻害剤との組合せは、極めて相乗的に作用することが期待される。これは、これらの異なるタイプの抗ウイルス薬が、組合せの抗ウイルス効果に有利かつ相乗的に作用する異なる薬物動態特性を要求する完全に異なる作用機構を示すということに基づく。

この高効率の複合薬はより低い物質濃度、したがって向上した用量応答関係及びより良好な副作用プロファイルをもたらし得る。さらに、ポリメラーゼ阻害剤について上記された利点は、種々の抗ウイルス標的の阻害剤とポリメラーゼ阻害剤との組合せにも当てはまる。

通常は、上述のポリメラーゼ阻害剤の第１の群から選択される少なくとも１種の化合物と、少なくとも１種の別のインフルエンザ標的のリガンドとを組み合わせる。

別のインフルエンザ標的のリガンドは特に限定されない。例としては、シアリダーゼ融合タンパク質に作用する化合物（例えばＦｌｕｄａｓｅ（ＤＡＳ１８１）、ｓｉＲＮＡ及びホスホロチオエートオリゴヌクレオチド）、シグナル伝達阻害剤（例えば、ＥｒｂＢチロシンキナーゼ、Ａｂｌキナーゼファミリー、ＭＡＰキナーゼ、ＥＲＫシグナリングのＰＫＣａ媒介活性化）、及びインターフェロン（誘導因子）が挙げられる。

（ｖｉｉ）（好ましくはインフルエンザ）ポリメラーゼ阻害剤と、疾患の症状を最小限に抑えるアジュバントとして使用される化合物（抗生物質、ＣＯＸ阻害剤（例えば、ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２阻害剤、選択的ＣＯＸ−２阻害剤）のような抗炎症剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、ＥＰリガンド（特にＥＰ４リガンド）、ブラジキニンリガンド及び／又はカンナビノイドリガンド（例えばＣＢ２アゴニスト））との組合せ。インフルエンザウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ポリメラーゼの転写及び複製活性を標的とする新規の薬物である。ウイルス細胞内標的に特異的に対処するポリメラーゼ阻害剤と、疾患の症状を最小限に抑えるアジュバントとして使用される化合物との組合せは、原因及び兆候となるウイルス感染の病理学的帰結に対処する。これらの異なるタイプの薬物が、組合せの抗ウイルス効果に有利かつ相乗的に作用する異なる薬物動態特性を要求する完全に異なる作用機構を示すため、この組合せは相乗的に作用することが期待される。

この高効率の複合薬はより低い物質濃度、したがって向上した用量応答関係及びより良好な副作用プロファイルをもたらし得る。さらに、ポリメラーゼ阻害剤について上記された利点は、種々の抗ウイルス標的の阻害剤とポリメラーゼ阻害剤との組合せにも当てはまる。

本発明の様々な変更形態及び変形形態が、本発明の範囲を逸脱することなく当業者に明らかである。本発明は具体的な好ましい実施形態に関連して記載されるが、特許請求される本発明は、かかる具体的な実施形態に過度に限定されるものではないことを理解されたい。実際に、関連分野の当業者に明らかな記載の発明を実施する上での形態の様々な変更形態が、本発明に包含されることが意図される。

以下の実施例は本発明の単なる例示であり、添付の特許請求の範囲によって示される本発明の範囲を限定すると何ら解釈されるものではない。

ＦＲＥＴエンドヌクレアーゼ活性アッセイ
インフルエンザエンドヌクレアーゼ活性を有するＡ型インフルエンザウイルス（ＩＡＶ）ＰＡ−Ｎｔｅｒ断片（アミノ酸１〜２０９）を、非特許文献９に記載のように生成及び精製した。タンパク質を、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）、１００ｍＭ ＮａＣｌ及び１０ｍＭ β−メルカプトエタノールを含有する緩衝液に溶解し、アリコートを−２０℃で保管した。

５’−ＦＡＭフルオロフォア及び３’−ＢＨＱ１クエンチャーを有する２０塩基の二重標識ＲＮＡオリゴを、ＰＡ−Ｎｔｅｒのエンドヌクレアーゼ活性によって切断される基質として使用した。ＲＮＡ基質の切断はフルオロフォアをクエンチャーから遊離させ、蛍光シグナルの増大をもたらす。

全てのアッセイ成分を、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＭｎＣｌ_２、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２及び１０ｍＭ β−メルカプトエタノールを含有するアッセイ緩衝液で希釈した。ＰＡ−Ｎｔｅｒの最終濃度は０．５μＭであり、ＲＮＡ基質は１．６μＭであった。試験化合物をＤＭＳＯに溶解し、概して２つの濃度又は０．５％のプレートウェルの最終ＤＭＳＯ濃度をもたらす濃度系列で試験した。化合物がこれらの濃度で溶解しなかった場合、それらを最も溶解度が高い濃度にて試験した。

５μｌの各化合物の希釈物を、白色の３８４ウェルマイクロタイタープレート（PerkinElmer）のウェルに８連で準備した。ＰＡ−Ｎｔｅｒ希釈物を添加した後、プレートを密閉し、室温で３０分間インキュベートし、続いてアッセイ緩衝液で希釈した１．６μＭ ＲＮＡ基質を添加した。続いて、切断されたＲＮＡの蛍光シグナルの増大を、マイクロプレートリーダー（Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴ、Biotek）において励起波長４８５ｎｍ及び発光波長５３５ｎｍで測定した。反応速度読み取り間隔は感度３５で３５秒であった。２０分間にわたる蛍光シグナルデータを用いて、基質切断の初期速度（ｖ０）を算出した。最終の読み取りは非処理サンプルと比較した化合物で処理したサンプルのｖ０の減少％であった。半数阻害濃度（ＩＣ_５０）は、生物学的機能又は生化学的機能の阻害における化合物の有効性の尺度であり、最大１００μＭ〜少なくとも２ｎＭの範囲の所与の濃度系列での初期反応速度（ｖ０）から算出された。

細胞変性効果（ＣＰＥ）アッセイ
Ａ型のインフルエンザウイルス（ＩＡＶ）を米国培養細胞系統保存機関（American Tissue Culture Collection）から得た（Ａ／Ａｉｃｈｉ／２／６８（Ｈ３Ｎ２）；ＶＲ−５４７）。ウイルスストックはメイディン−ダービーイヌ腎臓（ＭＤＣＫ；ＡＴＣＣ ＣＣＬ−３４）細胞上でウイルスを増殖させることによって作製され、ウイルスストックの感染力価は、Reed, L. J., and H. Muench. 1938, Am. J. Hyg. 27:493-497に記載のように５０％組織培養感染量（ＴＣＩＤ_５０）分析により求められた。

ＭＤＣＫ細胞を１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、２ｍＭのＬ−グルタミン及び１％抗生物質（全てPAA製）を含有するＤＭＥＭ／ハムＦ−１２（１：１）培地を用いた９６ウェルプレートに２×１０^４細胞／ウェルにて播種した。感染まで細胞を３７℃、５．０％ＣＯ_２にて５時間インキュベーションすると、ウェルの底部に約８０％コンフルエントな単層が形成された。各試験化合物をＤＭＳＯに溶解させ、概ね２５μＭ及び２５０μＭにて試験した。化合物がこれらの濃度で溶解しなかった場合、それらを最も溶解度が高い濃度にて試験した。化合物を感染培地（５μｇ／ｍｌのトリプシン及び１％の抗生物質を含有するＤＭＥＭ／ハムＦ−１２（１：１））に入れて希釈し、プレートウェルの最終ＤＭＳＯ濃度を１％にした。ウイルスストックを感染培地（５μｇ／ｍｌのトリプシン、１％のＤＭＳＯ及び１％の抗生物質を含有するＤＭＥＭ／ハムＦ−１２（１：１））に入れて希釈し、理論的感染多重度（ＭＯＩ）を０．０５にした。

培養培地を除去し、ＰＢＳを用いて洗浄工程を１回行った後、ウイルス及び化合物を合わせて細胞に添加した。細胞毒性を求めるために使用されるウェル（すなわち、ウイルス感染の非存在下）には、ウイルス懸濁液を添加しなかった。代わりに、感染培地を添加した。各処理を２回繰返し行った。３７℃、５％ＣＯ_２にて４８時間インキュベーションを行った後、各ウェルの明らかな細胞毒性、沈殿物の形成又は他の顕著な異常を顕微鏡により観察した。次いで、細胞生存率をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光細胞生存率アッセイ（Promega）を用いて求めた。上清を注意深く除去し、６５μｌの再構築した試薬を各ウェルに添加し、室温にて１５分間静かにインキュベーションした。その後、６０μｌの溶液を不透明なプレートに移し、発光（ＲＬＵ）をＳｙｎｅｒｇｙ ＨＴプレートリーダー（Biotek）を用いて測定した。

非感染処理細胞と非感染非処理細胞の相対的な細胞生存率の値を用いて、化合物の細胞毒性を評価した。試験濃度での相対的生存率が８０％より低い物質を細胞毒性があると見なし、より低い濃度で再試験を行った。

化合物を用いて処理したウイルス介在性細胞変性効果（ＣＰＥ）の減少を以下のように算出した：感染非処理サンプルの反応（ＲＬＵ）を感染処理サンプルの反応（ＲＬＵ）から減算した後、対応する非感染サンプルの生存率に正規化し、％ＣＰＥ減少を得た。半数阻害濃度（ＩＣ_５０）は、生物学的又は生化学的な機能の阻害における化合物の有効性の尺度であり、最大１００μＭ〜少なくとも１００ｎＭの範囲の一連の所与の濃度系列でのＲＬＵ反応から算出された。

Ｂｉａｃｏｒｅアッセイ
トリＨ５Ｎ１インフルエンザウイルスのＰＢ２キャップ結合ドメイン（ＣＢＤ）を製造業者のプロトコルに従ったアミンカップリングによりＣＭ７センサーチップ（GE Healthcare）の表面に固定化させた。タンパク質をｐＨ６．５の１０ｍＭのリン酸緩衝液で希釈した。固定化のためのランニング緩衝液として、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％のＳｕｒｆａｃｔａｎｔ ｐ２０）を使用した。３０μｇ／ｍｌのタンパク質濃度及び１２分間の接触時間を用いて、およそ８０００ＲＵ（相対反応単位）の固定化レベルを得た。

化合物のスクリーニングに、１０ｍＭのＴＲＩＳ、３ｍＭのＥＤＴＡ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．００５％のＳｕｒｆａｃｔａｎｔ ｐ２０（GE Healthcare/Biacore）、１ｍＭのＤＴＴ、０．５％のＤＭＳＯを含有するランニング緩衝液を使用した。各化合物の２ｍＭのＤＭＳＯストック溶液を、ＤＭＳＯを含まない１．００５×サンプル緩衝液（１．００５× ＴＲＩＳ／ＥＤＴＡ／ＮａＣｌ／ｐ２０／ＤＴＴ；１０×ストックから希釈）で希釈し、化合物の最終濃度を１０μＭ及び０．５％のＤＭＳＯにした。ｍ７ＧＴＰ（Sigma Aldrich）及びＳＡＶ−７１６０：
を参照物質及びチップの安定性の対照としてそれぞれ４ｍＭ及び１０μＭの濃度にて使用した。各参照化合物のストック溶液を作製し、小分けにして−２０℃にて保存した。

緩衝液において、バルク作用（マトリクス）は、リファレンスフローセルＦｃ１に対して得られた反応をアクティブフローセルＦｃ２から減算することで考慮し、化合物のリガンドへの結合を反映する相対反応単位（ＲＵ）を得た。緩衝液中のＤＭＳＯ等の有機溶媒により、高いバルク作用が生じるが、この作用はリガンド固定化によりリファレンスフローセルとアクティブフローセルとでは異なる。これらの違いを考慮するため、較正曲線を作成した。緩衝液中のＤＭＳＯ濃度を０．１％〜１．５％の範囲の８つの濃度にて測定し、Ｆｃ１に対するＦｃ２−Ｆｃ１をプロットすることにより線形較正曲線を算出した。次いで各較正曲線上の各Ｆｃ１の点から得られた溶媒因子及び対応するＦｃ２−Ｆｃ１の差により、各サンプルの相対反応を補正した。化合物の大きさの違いを考慮するため、緩衝液及び溶媒で補正した反応単位を分子量に正規化した。

親和定数（ＫＤ値）は、２００μＭ〜１ｎＭの範囲の濃度に対する分析物のリガンドへの結合親和性を測定することにより求められた。ＫＤ値は結合部位の５０％が飽和している濃度であり、線形曲線適合モデルを用いて算出された。

ＩＣ_５０値の決定−転写アッセイ（ＴＡアッセイ）
ＴＡアッセイの原理
阻害剤の活性を分析するために、放射活性のある標識ヌクレオチドを使用せず、無細胞環境で全ＲＮＰ複合体（whole RNP complex）を用いた転写アッセイ（ＴＡ）を使用した。

ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成されたキャップされたｍＲＮＡオリゴは、ウイルスＲＮＰのキャップスナッチングの基質と同じく、ウイルスｍＲＮＡ合成のプライマーとして作用し、新たに合成されたウイルスｍＲＮＡはＱｕａｎｔｉｇｅｎｅ（商標）２．０技術を用いて検出される。Ｑｕａｎｔｉｇｅｎｅ（商標）（ＱＧ）法は、コーティングした９６ウェルプレートに結合させたＲＮＡハイブリダイゼーションの後に、分岐ＤＮＡ（ｂＤＮＡ）のシグナル増幅を行うことをベースとする。目的の遺伝子に特異的なハイブリダイゼーションには異なる３種のプローブが関与する。キャプチャー伸長剤（ＣＥ）は特定の遺伝子領域にハイブリダイズし、同時にそのＲＮＡをＱＧキャプチャープレートに固定化する。標識伸長剤（ＬＥ）も目的の遺伝子に特異的にハイブリダイズし、プレ増幅剤（preAmplifier）（ＰｒｅＡｍｐ）、増幅剤（Ａｍｐ）及びアルカリホスファターゼ標識プローブの連続ハイブリダイゼーションを介して構築されるシグナル増幅のツリー構造（tree）のための配列を得られる。次いでシグナルを、化学発光基質を添加し、マイクロプレートルミノメーターを用いて読み取ることにより検出する。３つ目のプローブは、非特異的な相互作用をブロックする（ブロッキングプローブ；ＢＰ）。一般に、ＩＡＶ検出用のプローブセットは、翻訳に対して、ｃＲＮＡ又はｍＲＮＡを区別することなくマイナス鎖ゲノムｖＲＮＡ又は合成されたプラス鎖ＲＮＡ（＋ＲＮＡ）のいずれかを検出するように設計される。ＴＡアッセイにおいて、プローブセット及びＱＧ２．０プロトコルを適合させ、無細胞環境における抗ウイルス化合物の試験に適した生化学アッセイ用に改変した。

材料及び方法
化合物
全ての化合物をＤＭＳＯに溶解させ、４℃で保存した。他に明記しない限り、他の試薬は全てSigma-Aldrichから得られた。

ＲＮＡ基質の作製
使用した基質のＲＮＡは、Ｔ７高収率ＲＮＡ合成キット（New England BioLabs Inc.）によって合成され、ｉｎ ｖｉｔｒｏで転写したＲＮＡから得られたものであるが、製造業者のプロトコルにインキュベーション時間を１６時間延長させたものに従って作製した。ＲＮＡ産物を、ｍｉＲＮｅａｓｙミニキット（Qiagen）を用いてゲル精製した。ＲＮＡをＳｃｒｉｐｔＣａｐ ｍ７Ｇキャップ化システム（CellScript、ウィスコンシン州マディソン）を用いて酵素によりキャップした。得られたキャップされたＲＮＡオリゴヌクレオチド（５’−ｍ７ＧｐｐｐＧ−ＧＧＧ ＡＡＵ ＡＣＵ ＣＡＡ ＧＣＵ ＡＵＧ ＣＡＵ ＣＧＣ ＡＵＵ ＡＧＧ ＣＡＣ ＧＵＣ ＧＡＡ ＧＵＡ−３‘；配列番号１）は、インフルエンザウイルスポリメラーゼ用のプライマーとして作用した。

ＲＮＰの作製
全ての実験は、孵化鶏卵において増殖させたか、Charles River Laboratoriesから入手し、精製濃縮させたかのいずれかによるＩＡＶ株Ａ／ＰＲ／８／３４に対して行われた。卵内で増殖させたウイルスを１００ｍＭのＮａＣｌを含有する２ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）緩衝液において４％ｗ／ｖのＰＥＧ８０００を用いてＰＥＧ沈殿させ（４℃、４５分）、４℃、３６００ｇにて４５分間遠心分離させた。ペレットを１００ｍＭのＮａＣｌ及び６％ｗ／ｖのスクロースを含有する１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）緩衝液に懸濁させた後、３０％ｗ／ｖのスクロースクッション法により精製した（１０９０００ｇ、１２０分、４℃）。

ＲＮＰ精製は、これまでに公開されたものに一部変更を加えて行われた（Klumpp et al. 2001. Influenza virus endoribonuclease, p. 451-466, 342 ed.）。ウイルス凍結乾燥物を１×溶解緩衝液（１％ｗ／ｖのトリトンＸ−１００、１ｍｇ／ｍＬのリゾレシチン、２．５ｍＭのＭｇＣｌ_２、１００ｍＭのＫＣｌ、５ｍＭのＤＴＴ、２．５％ｖ／ｖのグリセロール、２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、２０Ｕ／ｍＬのＲＮａｓｅ阻害剤）に溶解させ、最終ウイルスタンパク質濃度を２ｍｇ／ｍＬにした後、３０℃にて６０分間インキュベーションした。得られた３．３ｍＬの溶解物をグリセロール勾配（２ｍＬ ７０％ｖ／ｖ、１．５ｍＬ ５０％ｖ／ｖ、０．７５ｍＬ ４０％ｖ／ｖ及び３．６ｍＬ ３３％ｖ／ｖ−２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＤＴＴ、５ｍＭの２−メルカプトエタノールで緩衝）に充填した。勾配物をＳｏｒｖａｌｌ Ｕｌｔｒａ遠心分離機のＡＨ６４１ローターにおいて４℃、２４００００ｇにて６時間回転させた。画分（０．５ｍＬ）を勾配物の上部から回収した。ＲＮＰ粒子を含有する画分をプールし、１０ｋＤのＶｉｖａＳｐｉｎ２カラムを用いて更に濃縮し、−２０℃で保存した。ＲＮＰ濃度はＯＤ２６０ｎｍの１．０＝６０ｍｇ／ｍＬのＲＮＰを変換因子として用いたＵＶ分光法（Klumpp et al. 2001. Influenza virus endoribonuclease, p. 451-466, 342 ed.）により求められた。

ＲＮＡ分析及び転写アッセイ（ＴＡアッセイ）
全ての種類のウイルスＲＮＡを、マイナス鎖ゲノムｖＲＮＡ（−ＲＮＡ；品番ＳＦ−１０３１８）、新たに合成したプラス鎖ＲＮＡ（＋ＲＮＡ；品番ＳＦ−１００４９）又は新たに合成したウイルスｍＲＮＡ（ＴＡアッセイ；ＳＦ−１０５４２）のいずれかを検出するよう設計した特異的プローブセットを用いて、Ｑｕａｎｔｉｇｅｎｅ（商標）法の間の全てのインキュベーション工程を４９℃で行った以外、製造業者の説明書に従いＱｕａｎｔｉｇｅｎｅ（商標）によって分析した。

標準的な反応として、阻害剤を連続希釈しながら、８０ｐＭのＲＮＰを３０℃にて２時間インキュベーションし、反応緩衝液（５５ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、２０ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＭｇＣｌ_２、０．２％ｖ／ｖのトリトンＸ−１００、０．２５Ｕ／μＬのＲＮａｓｅＯｕｔ、１２．５ｍＭのＮａＣｌ、１．２５ｍＭのＤＴＴ、１．２５ｍＭの２−メルカプトエタノール、１２．５％ｖ／ｖのグリセロール）の最終ＤＭＳＯ濃度を１％ｖ／ｖにした。次いで、２ｎＭのキャップされたＲＮＡ基質を添加後、３０℃にて２時間インキュベーションした。９５℃にて５分間インキュベーションすることで反応を停止させた。

合成したｍＲＮＡの検出に、Ｑｕａｎｔｉｇｅｎｅ（商標）２．０（Panomics. 2007. Ｑｕａｎｔｉｇｅｎｅ２．０試薬システム。使用者マニュアル）を特定のプローブセットとともに用いた。プローブセットはキャプチャー伸長剤（ＣＥ）、標識伸長剤（ＬＥ）及びブロッキングプローブ（ＢＰ）からなり、Affymetrix/Panomicsにより作製され、３つ全てのミックスとして供給された。プローブ配列を配列番号５〜配列番号２０で表し、図１にも示した。

反応値（相対的発光単位）を、ＧｒａｐｈＰａｄプリズムを用いて分析し、４パラメーターロジスティック方程式を用いてＩＣ_５０値及び９５％の信頼区間を求めた。曲線を当てはめるため、陽性及び陰性対照を含めて最大値及び最小値を規定した。

デノボ合成されたウイルスｍＲＮＡは、精製されたＲＮＰと既知の配列のキャップされたＲＮＡ基質とをインキュベーションすることによって作製された。

Ｑｕａｎｔｉｇｅｎｅ（商標）プローブセットの「ＴＡアッセイ」は核タンパク質（ＮＰ）をコードする新たに合成されたウイルスｍＲＮＡを検出し、標識伸長剤（ＬＥ１及びＬＥ２）は４４−ｍｅｒ ＲＮＡ基質から切断された、スナッチングされたキャップ配列５’−ｃａｐ−ＧＧＧＧＧＡＡＵＡＣＵＣＡＡＧ−３’（配列番号２）及びポリＡ配列にそれぞれ特異的にハイブリダイズする。キャプチャー伸長剤（ＣＥ１〜９）はＩＡＶ ＮＰ遺伝子のコード領域内の領域に特異的にハイブリダイズする。プローブセットの「＋ＲＮＡ」は遺伝子内の１０を超える様々な領域に特異的に結合することによってＮＰをコードするプラス鎖ウイルスＲＮＡを検出する。このプローブセットのＬＥ及びＣＥはヌクレオチド１〜１５４０の領域（ＧｅｎＢａｎｋ ＣＹ１４７５０５）にハイブリダイズし、ウイルスｍＲＮＡとウイルスｃＲＮＡとを識別しない。３つ目のプローブセット「−ＲＮＡ」は非構造的タンパク質（ＮＳ）をコードするマイナス鎖ＲＮＡ（ｎｓＲＮＡ）に特異的にハイブリダイズする。

本発明の化合物のＴＡアッセイの結果
上記のＴＡアッセイを使用し、本発明の化合物のＩＣ_５０値を求めた。

合成例
特定の合成方法が示されない限り、以下の一般的なスキームに従い化合物を作製した。

Ｄ−１−０１

Ｄ−０１−０２の合成
ｔｅｒｔ−ブチル ４−クロロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン（３０．６ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）とＥ−００１（６８ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）との混合物を１００℃にて一晩加熱した。ＭｅＯＨ（２ｍＬ）を添加し、得られた溶液を分取ＴＬＣ（酢酸エチル／石油エーテル＝１／１）により精製し、Ｄ−０１−０２（５０ｍｇ、５４．５％）を黄色油として得た。

Ｄ−１−０１の合成：
Ｄ−０１−０２（５０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）溶液にＴＦＡ（２ｍＬ）を添加した。ＬＣＭＳによりＤ−０１−０２が消失するまで室温にて溶液を撹拌した。次いで得られた溶液を減圧下において濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し、生成物Ｄ−１−０１（２４．８ｍｇ、６１％）を淡黄色固体として得た。

６−（（１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−４−イルアミノ）メチル）−９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−１，８（２Ｈ）−ジオン
Ｄ−１−０１を淡黄色固体として得た。
収率：３３％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：３６９（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ ８．６３（ｓ，１Ｈ）、７．６７〜７．６８（ｍ，１Ｈ）、７．２２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．５０（ｓ，１Ｈ）、４．８７（ｓ，２Ｈ）、４．７５〜４．７９（ｍ，１Ｈ）、４．２９（ｓ，２Ｈ）、３．７１（ｓ，２Ｈ）、１．２２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−２−０１：

Ｄ−２−０１の合成：
６−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−３（２Ｈ）−オン（２１．４ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）とＥ−００１（３４ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）との混合物を１００℃にて一晩加熱した。ＭｅＯＨ（２ｍＬ）を添加し、得られた溶液を分取ＴＬＣ（酢酸エチル／石油エーテル＝１／１）により精製し、Ｄ−２−０１（１．５ｍｇ、３．５％）を白色固体として得た。

６−（（６−アミノピリジン−３−イルアミノ）メチル）−９−（ベンジルオキシ）−２−イソプロピル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−１，８（２Ｈ）−ジオン
Ｄ−２−０１を白色固体として得た。
収率：３．５％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：４３２（Ｍ−Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ７．４５〜７．４７（ｍ，２Ｈ）、７．３１〜７．３６（ｍ，６Ｈ）、７．２５〜７．２７（ｍ，１Ｈ）、６．５９（ｓ，１Ｈ）、５．１８（ｓ，２Ｈ）、４．７１〜４．７４（ｍ，１Ｈ）、４．２４〜４．２６（ｍ，２Ｈ）、３．８１（ｓ，２Ｈ）、３．７６（ｓ，２Ｈ）、３．４０〜３．４３（ｍ，２Ｈ）、１．２１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−２−０２：

Ｄ−２−０２−１の合成：
ＤＭＦ（２ｍＬ）中２−（１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−４−イルオキシ）エタノール（３６ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の混合物にＮａＨ（７．６ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）及びＥ−００２（６８ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３０℃にて３時間撹拌した。得られた混合物を分取ＴＬＣ（酢酸エチル／石油エーテル＝１／１）により精製し、Ｄ−２−０２−１（５０ｍｇ、５０％）を黄色油として得た。

Ｄ−２−０２の合成：
Ｄ−１−０１と同様に、分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−２−０２（５．８ｍｇ、１．３％）を褐色油として得た。

６−（（２−（１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−４−イルオキシ）エトキシ）メチル）−９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−１，８（２Ｈ）−ジオン
Ｄ−２−０２を褐色固体として得た。
収率：０．７％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：４１４（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．３５（ｓ，１Ｈ）、７．９８（ｓ，１Ｈ）、７．２７（ｂｒ，１Ｈ）、６．３２（ｓ，１Ｈ）、５．９５（ｓ，２Ｈ）、４．８５〜４．９３（ｍ，１Ｈ）、４．６０〜４．６２（ｍ，４Ｈ）、３．９９（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．８１（ｓ，２Ｈ）、１．３０（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−２−０３：

Ｄ−２−０３−１の合成：
１，４−ジオキサン（３ｍｌ）中Ｅ−００１（６８ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）とｔｅｒｔ−ブチル ５−ブロモ−３−オキソ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−２（３Ｈ）−カルボキシレート（６２．８ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２（５ｍｇ）と、Ｃｓ_２ＣＯ_３（１３０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）との混合物を１５５℃にて５０分撹拌した。得られた混合物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝１／１）により精製し、ＤＵＡＬ−００８−１（３５ｍｇ、１３％）を黄色油として得た。

Ｄ−２−０３の合成：
Ｄ−１−０１と同様に、分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−２−０３（６．９ｍｇ、２９．６％）を褐色固体として得た。

９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−６−（（３−オキソ−２，３−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−５−イルアミノ）メチル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−１，８（２Ｈ）−ジオン
Ｄ−２−０３を褐色固体として得た。
収率：３．８％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：３８５（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ １２．３９（ｓ，１Ｈ）、８．３５（ｓ，１Ｈ）、６．９３〜６．９５（ｍ，１Ｈ）、６．２８〜６．３１（ｍ，２Ｈ）、６．２９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．７２〜４．７５（ｍ，１Ｈ）、４．４９（ｓ，２Ｈ）、４．１９（ｓ，２Ｈ）、３．６４（ｓ，２Ｈ）、１．１９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−２−０４：

Ｄ−２−０４−１の合成：
ＤＭＦ（２ｍＬ）中Ｎ１−（１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−４−イル）エタン−１，２−ジアミン（３５．４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の混合物にＫ_２ＣＯ_３（４０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）及びＥ−００２（６８ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３０℃にて３時間撹拌した。得られた混合物を分取ＴＬＣ（酢酸エチル／石油エーテル＝１／１）により精製し、Ｄ−２−０４−１（５０ｍｇ、５０％）を褐色油として得た。

Ｄ−２−０４の合成：
Ｄ−１−０１と同様に、分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−２−０４（５．８ｍｇ、１．３％）を褐色固体として得た。

６−（（２−（１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−４−イルアミノ）エチルアミノ）メチル）−９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−１，８（２Ｈ）−ジオン
Ｄ−２−０４を褐色固体として得た。
収率：０．７％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：４１２（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．５０（ｓ，１Ｈ）、７．６２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．１２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．８０（ｓ，１Ｈ）、４．５２〜４．６０（ｍ，１Ｈ）、４．４６（ｓ，２Ｈ）、４．２９（ｓ，２Ｈ）、４．０１（ｓ，２Ｈ）、３．７３（ｓ，２Ｈ）、３．５２（ｓ，２Ｈ）、１．２８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−３−０１−２：

Ｄ−３−０１の合成：
３−オキソ−２，３−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−カルボン酸（５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液に、オキサリルジクロリド（７１ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（１滴）を連続して添加した。反応混合物を室温にて３時間撹拌した。減圧下において濃縮し、粗製Ｄ−３−０１（５０ｍｇ、９１％）を得て、これを直接次の工程に使用した。

Ｄ−３−０１−３−３の合成：
エチルメチル３−アミノベンゾエート（３８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（５０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液に、Ｄ−３−０１（５０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を滴加した。溶液を室温にて一晩撹拌した後、濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＝１／１５）により精製し、Ｄ−３−０１−３−３（５９ｍｇ、７６％）を黄色油として得た。

Ｄ−３−０１−３−２の合成：
ＭｅＯＨ（３ｍＬ）中Ｄ−３−０１−３−３（５９ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）とＬｉＯＨ（９ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）との混合物を室温にて一晩撹拌した。溶媒を真空下において除去した。水を添加し、溶液のｐＨを２ＮのＨＣｌを用いて５に調整した。得られた溶液を濾過し、固体を水で洗浄し、Ｄ−３−０１−３−２（４１ｍｇ、７７％）を淡黄色固体として得た。

Ｄ−３−０１−３−１の合成：
ＤＭＦ（３ｍＬ）中Ｄ−３−０１−３−２（４１ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）とＨＡＴＵ（６８ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）との混合物を室温にて０．５時間撹拌した。その後、ＴＥＡ（３０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及びＥ−００１（５１ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温にて一晩撹拌した。得られた混合物を分取ＴＬＣにより精製し、Ｄ−３−０１−３−１（２９．５ｍｇ、３６％）を黄色油として得た。

Ｄ−３−０１−３の合成：
Ｄ−１−０１と同様に、分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−３−０１−１（２．５ｍｇ、１０％）を褐色固体として得た。

Ｎ−（３−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルカルバモイル）フェニル）−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−カルボキサミド
Ｄ−３−０１−３を褐色固体として得た。
収率：１．６％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５３２（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ １２．７０（ｓ，１Ｈ）、１０．５４（ｓ，１Ｈ）、９．１０（ｓ，１Ｈ）、８．７６（ｓ，１Ｈ）、８．２７（ｓ，１Ｈ）、７．９７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．６０〜７．６７（ｍ，２Ｈ）、７．５０（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．３２（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．４１（ｓ，１Ｈ）、４．７０〜４．７５（ｍ，１Ｈ）、４．５６（ｓ，２Ｈ）、４．２９（ｓ，２Ｈ）、３．７６（ｓ，２Ｈ）、１．１８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−３−０１−４：
Ｄ−３−０１−４をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−３−０１−４（２．２ｍｇ、８％）を褐色固体として得た。

（Ｒ）−Ｎ−（３−（３−クロロフェニル）−１−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−カルボキサミド
Ｄ−３−０１−４を褐色固体として得た。
収率：１．３％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５９４（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ １２．６５（ｂｒ，１Ｈ）、８．９３〜８．９８（ｍ，１Ｈ）、８．７３〜８．７５（ｍ，１Ｈ）、７．３５〜７．５１（ｍ，２Ｈ）、７．２３〜７．２８（ｍ，６Ｈ）、５．３２（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．６６〜４．７３（ｍ，２Ｈ）、４．３７〜４．４６（ｍ，２Ｈ）、４．０３（ｂｒ，１Ｈ）、３．０７〜３．１２（ｍ，２Ｈ）、２．９７〜３．０３（ｍ，２Ｈ）、１．１７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−３−０１−５：
Ｄ−３−０１−５をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−３−０１−５（３．３ｍｇ、１３％）を褐色固体として得た。

（Ｒ）−Ｎ−（２−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）−２−オキソ−１−フェニルエチル）−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−カルボキサミド
Ｄ−３−０１−５を褐色固体として得た。
収率：１．３％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５４６（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．３８（ｂｒ，１Ｈ）、７．４４〜７．５８（ｍ，２Ｈ）、７．２１〜７．３８（ｍ，５Ｈ）、７．０９（ｂｒ，１Ｈ）、５．４２（ｂｒ，１Ｈ）、５．２４（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．４１（ｂｒ，２Ｈ）、４．００〜４．１６（ｍ，２Ｈ）、３．４０〜３．５３（ｍ，２Ｈ）、１．１８〜１．２０（ｍ，６Ｈ）。

Ｄ−３−０２−１：
Ｄ−３−０２−１−１をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−３−０２−１（９．５ｍｇ、３８％）を黄色固体として得た。

Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−カルボキサミド
Ｄ−３−０２−１を黄色固体として得た。
収率：７％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：４１３（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．０９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）７．０２（ｓ，１Ｈ）、６．８５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．９０〜４．９３（ｍ，１Ｈ）、４．８１（ｓ，２Ｈ）、４．５６（ｓ，２Ｈ）、３．８１（ｓ，２Ｈ）、１．３０（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−３−０２−３：

Ｄ−３−０２−３−２の合成：
ＤＭＦ（３ｍＬ）中Ｄ−３−０２−２（６０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）とＨＡＴＵ（１５３ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）との混合物を室温にて０．５時間撹拌した。その後、ＴＥＡ（６７ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）及び１−アミノシクロヘキサンカルボン酸（４７ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を連続して添加した。反応混合物を室温にて３時間撹拌した。得られた混合物を濾過し、濾過物を濃縮し、粗製Ｄ−３−０２−３−１を得た。粗製Ｄ−３−０２−３−１のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液にＴＥＡ（６７ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１５３ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）及びＥ−００１（１１２ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を連続して添加した。混合物を室温にて一晩撹拌した後、濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＝１／１０）により精製し、Ｄ−３−０２−３−２（３０ｍｇ、１４％）を黄色油として得た。

Ｄ−３−０２−３の合成：
Ｄ−１−０１と同様に、分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−３−０２−３（８ｍｇ、３１％）を淡黄色固体として得た。

Ｎ−（１−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルカルバモイル）シクロヘキシル）−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−カルボキサミド
Ｄ−３−０２−３を淡黄色固体として得た。
収率：４％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５１２（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ １２．９３（ｓ，１Ｈ）、８．８５（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．８１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．１０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．９７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．７８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．５１（ｓ，１Ｈ）、４．７０〜４．７３（ｍ，１Ｈ）、４．５３〜４．５６（ｍ，１Ｈ）、４．４３（ｓ，２Ｈ）、４．２４（ｓ，２Ｈ）、３．６３（ｓ，２Ｈ）、２．１５〜２．１６（ｍ，１Ｈ）、１．１３〜１．１８（ｍ，６Ｈ）、０．９５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−３−０２−４：
Ｄ−３−０２−４をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−３−０２−４（６．５ｍｇ、２６％）を黄色固体として得た。

（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−カルボキシレート
Ｄ−３−０２−４を黄色固体として得た。
収率：４．８％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：４１４（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ １２．７２（ｓ，１Ｈ）、１２．６８（ｂｒ，１Ｈ）、８．１２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．０２（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．７０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．４７（ｓ，１Ｈ）、５．３８（ｓ，２Ｈ）、４．７３〜４．７６（ｍ，１Ｈ）、４．２４〜４．２７（ｍ，２Ｈ）、３．６１〜３．６４（ｍ，２Ｈ）、１．１８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−３−０２−５：
Ｄ−３−０２−５をＤ−３−０２−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−３−０２−５（４．１ｍｇ、１６％）を淡黄色固体として得た。

Ｎ−（１−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）−１−オキソブタン−２−イル）−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−カルボキサミド
Ｄ−３−０２−５を淡黄色固体として得た。
収率：２．１％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：４９８（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ ８．８５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．７９（ｓ，１Ｈ）、８．０９（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．９６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．７７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．１８（ｓ，１Ｈ）、４．７１〜４．７４（ｍ，１Ｈ）、４．５７〜４．５９（ｍ，１Ｈ）、４．３５（ｓ，２Ｈ）、４．０９（ｓ，２Ｈ）、３．５８（ｓ，２Ｈ）、３．０９〜３．１１（ｍ，２Ｈ）、１．１６〜１．１９（ｍ，６Ｈ）、０．９１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。

Ｄ−３−０２−６：
Ｄ−３−０２−６をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−３−０２−６（３．２ｍｇ、１３％）を褐色固体として得た。

（Ｒ）−Ｎ−（２−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）−２−オキソ−１−フェニルエチル）−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−カルボキサミド
Ｄ−３−０２−６を褐色固体として得た。
収率：１．３％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５４６（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ １２．９１〜１２．９４（ｍ，１Ｈ）、９．４５〜９．４９（ｍ，１Ｈ）、９．０８（ｂｒ，１Ｈ）、８．０９（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．９４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．３７〜７．４９（ｍ，６Ｈ）、６．７６〜６．７８（ｍ，１Ｈ）、５．６８〜５．７０（ｍ，１Ｈ）、４．６９〜４．７２（ｍ，１Ｈ）、４．４２〜４．４８（ｍ，２Ｈ）、３．９２（ｂｒ，２Ｈ）、３．８２（ｂｒ，２Ｈ）、１．１２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

（Ｒ）−Ｎ−（３−（３−クロロフェニル）−１−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−カルボキサミド
Ｄ−３−０２−７をＤ−３−０１−３と同様に褐色固体として得た。
収率：４．６％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５９４（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ １２．９４（ｓ，１Ｈ）、８．８４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．０８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．９１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２８（ｓ，１Ｈ）、７．２４（ｓ，２Ｈ）、７．１５（ｓ，１Ｈ）、６．７５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．３６（ｓ，１Ｈ）、４．８５〜４．８８（ｍ，１Ｈ）、４．７５〜４．７８（ｍ，１Ｈ）、４．３５（ｓ，２Ｈ）、４．０６（ｓ，２Ｈ）、３．５７（ｓ，２Ｈ）、３．０２〜３．１２（ｍ，２Ｈ）、１．１７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−３−０３−１：

Ｄ−３−０３−１の合成：
４−クロロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン（３０．６ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）と３−アミノ安息香酸メチル（３０．２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）との混合物を１００℃にて一晩加熱した。ＭｅＯＨ（２ｍＬ）を添加し、得られた溶液を分取ＴＬＣ（酢酸エチル／石油エーテル＝１／１）により精製し、Ｄ−３−０３−１−１（３８ｍｇ、７１％）を白色固体として得た。

以下の工程において、Ｄ−３−０３−１をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−３−０３−１（２．８ｍｇ、１３％）を褐色固体として得た。

３−（１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−４−イルアミノ）−Ｎ−（（９−（ベンジルオキシ）−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）ベンズアミド
Ｄ−３−０３−１を褐色固体として得た。
収率：２％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：４８８（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ １４．０８（ｂｒ，１Ｈ）、１１．２５（ｂｒ，１Ｈ）、９．２３（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．４９（ｓ，１Ｈ）、８．１０（ｓ，１Ｈ）、７．９４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．８３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．６４〜７．７１（ｍ，２Ｈ）、７．１８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．５４（ｓ，１Ｈ）、４．７４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．６２（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，２Ｈ）、４．３４（ｓ，２Ｈ）、３．５１（ｓ，２Ｈ）、１．１９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−５−０１：
Ｄ−５−０１をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−５−０１（８．７ｍｇ、６２％）を淡黄色油として得た。

２−（５−フルオロ−２−（５−フルオロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−イル）ピリミジン−４−イルアミノ）−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）ブタンアミド
Ｄ−５−０１を淡黄色油として得た。
収率：２６％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５６８（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．４８（ｓ，１Ｈ）、８．３１（ｓ，１Ｈ）、８．２６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．７２（ｓ，１Ｈ）、５．３６（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．５９〜４．６４（ｍ，３Ｈ）、４．３５〜４．３９（ｍ，１Ｈ）、３．７６〜３．８１（ｍ，１Ｈ）、３．４０〜３．４４（ｍ，２Ｈ）、３．０４〜２．０９（ｍ，２Ｈ）、１．３２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）、１．１２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。

Ｄ−５−０２：
Ｄ−５−０２をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−５−０２（４．５ｍｇ、３２％）を褐色油として得た。

６−（５−フルオロ−２−（５−フルオロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−イル）ピリミジン−４−イルアミノ）−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）ヘキサンアミド
Ｄ−５−０２を褐色油として得た。
収率：１２％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５９６（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．６３（ｓ，１Ｈ）、８．３９（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．２９（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．６５（ｓ，１Ｈ）、４．８０〜４．８５（ｍ，１Ｈ）、４．４７（ｓ，２Ｈ）、４．３５（ｓ，２Ｈ）、３．８２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）、３．７２（ｓ，２Ｈ）、２．３８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．８７〜１．９０（ｍ，２Ｈ）、１．７７〜１．８１（ｍ，２Ｈ）、１．５６〜１．５９（ｍ，２Ｈ）、１．２７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−５−０３：
Ｄ−５−０３をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−５−０３（６．２ｍｇ、４２％）を淡黄色油として得た。

（Ｓ）−２−（５−フルオロ−２−（５−フルオロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−イル）ピリミジン−４−イルアミノ）−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）−３−メチルブタンアミド
Ｄ−５−０３を淡黄色油として得た。
収率：１７％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５８２（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．５２（ｓ，１Ｈ）、８．３７（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．３０（ｄｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．９４（ｓ，１Ｈ）、４．６３〜４．７１（ｍ，１Ｈ）、４．５２〜４．５９（ｍ，３Ｈ）、４．４４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．０６〜４．１０（ｍ，１Ｈ）、３．４７〜３．５７（ｍ，２Ｈ）、２．３７〜２．４２（ｍ，１Ｈ）、１．１７〜１．２２（ｍ，１２Ｈ）。

Ｄ−２−０６：
Ｄ−２−０６をＤ−２−０４と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−２−０６（３．８ｍｇ、１．３％）を白色固体として得た。

６−（（２−（４−クロロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−６−イルアミノ）エチルアミノ）メチル）−９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−１，８（２Ｈ）−ジオン
Ｄ−２−０６を白色固体として得た。
収率：０．７％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：４４６（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．０９（ｓ，１Ｈ）、６．５０（ｓ，１Ｈ）、６．２８（ｓ，１Ｈ）、４．８４〜４．８８（ｍ，１Ｈ）、４．３５〜４．３８（ｍ，２Ｈ）、３．８３（ｓ，２Ｈ）、３．４９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．４２（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．９７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、１．２０（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−４−０１−５：

Ｄ−４−０１−５−１の合成：
ＤＣＭ（３ｍＬ）中Ｄ−４−０１−１（３０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の混合物に、オキサリルジクロリド（２ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温にて３時間撹拌した。溶液を濃縮し、残渣をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解させた。次いでＴＥＡ（３７ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）及び（Ｒ）−２−アミノ−３−（３−クロロフェニル）プロパン酸（３６ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を室温にて一晩撹拌した。得られた溶液を濃縮し、Ｄ−４−０１−５−１（２０ｍｇ、３２％）を得て、これを次の工程に直接使用した。

Ｄ−４−０１−５の合成：
ＤＭＦ（３ｍＬ）中Ｄ−４−０１−５−１（２０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）とＨＡＴＵ（３３ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）との混合物を室温にて０．５時間撹拌した。その後、ＴＥＡ（１４ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）及びＥ−００１（２０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温にて一晩撹拌した。得られた混合物を分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−４−０１−５（１．５ｍｇ、４％）を淡白色固体として得た。

（Ｒ）−Ｎ−（３−（３−クロロフェニル）−１−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド
Ｄ−４−０１−５を淡白色固体として得た。
収率：１％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５７８（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ １４．２２（ｂｒ，１Ｈ）、１２．５６（ｂｒ，１Ｈ）、８．５５〜８．７４（ｍ，２Ｈ）、８．４２〜８．４５（ｍ，１Ｈ）、７．４２（ｓ，１Ｈ）、７．１７〜７．３６（ｍ，４Ｈ）、６．２３（ｓ，１Ｈ）、４．７０〜４．８０（ｍ，２Ｈ）、４．３８〜４．４３（ｍ，１Ｈ）、４．２５〜４．３０（ｍ，１Ｈ）、４．０４（ｓ，２Ｈ）、４．３５（ｓ，２Ｈ）、３．１６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、１．１４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−５−０６：
Ｄ−５−０６をＤ−１−０１と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−５−０６（３．２ｍｇ、１０％）を橙色油として得た。

６−（（５−フルオロ−２−（５−フルオロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−イル）ピリミジン−４−イルアミノ）メチル）−９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−１，８（２Ｈ）−ジオン
Ｄ−５−０６を橙色油として得た。
収率：７％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：４８３（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．５４（ｓ，１Ｈ）、８．３９（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．２９〜８．３１（ｍ，１Ｈ）、７．０４（ｓ，１Ｈ）、５．０８（ｓ，２Ｈ）、４．９３〜４．９８（ｍ，１Ｈ）、４．７１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．８３〜３．８６（ｍ，２Ｈ）、１．３２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−６−０３：
Ｄ−６−０３をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−６−０３（２．２ｍｇ、９％）を褐色油として得た。

２−シクロプロピル−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
Ｄ−６−０３を褐色油として得た。
収率：１５％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：４３８（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．４１（ｂｒ，１Ｈ）、８．２５（ｓ，１Ｈ）、６．７８（ｂｒ，１Ｈ）、５．４４〜５．５１（ｍ，２Ｈ）、５．０６〜５．１０（ｍ，２Ｈ）、４．５０（ｂｒ，１Ｈ）、３．７５（ｂｒ，２Ｈ）、２．２９（ｂｒ，１Ｈ）、１．２８〜１．３５（ｍ，６Ｈ）、１．０４（ｓ，４Ｈ）。

Ｄ−６−０４：
Ｄ−６−０４をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−６−０４（４．０ｍｇ、１０％）を淡白色固体として得た。

２−シクロプロピル−Ｎ−（２−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）−２−オキソエチル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
Ｄ−６−０４を淡白色固体として得た。
収率：４％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：４９４（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ １２．７８（ｂｒ，１Ｈ）、１２．６０（ｓ，１Ｈ）、８．６３〜８．６８（ｍ，２Ｈ）、８．３８（ｓ，１Ｈ）、８．３０（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．４８（ｓ，１Ｈ）、４．７２〜４．７５（ｍ，１Ｈ）、４．４６（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、４．２２〜４．２５（ｍ，２Ｈ）、４．１３〜４．１６（ｍ，２Ｈ）、３．６５（ｓ，２Ｈ）、２．３２〜２．３５（ｍ，１Ｈ）、１．１８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）、１．００〜１．１０（ｍ，４Ｈ）。

Ｄ−２−０５：
Ｄ−２−０５をＤ−１−０１と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−２−０５（１３ｍｇ、７６％）を黄色油として得た。

６−（（４−クロロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−６−イルアミノ）メチル）−９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−１，８（２Ｈ）−ジオン
Ｄ−２−０５を黄色油として得た。
収率：５５％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：４０３（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．８１（ｓ，１Ｈ）、７．２０（ｓ，１Ｈ）、６．８４（ｓ，１Ｈ）、４．９２〜５．１１（ｍ，３Ｈ）、４．７６（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．８６〜３．８９（ｍ，２Ｈ）、１．３２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−３−０１−２：
Ｄ−３−０１−２をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−３−０１−２（５ｍｇ、２５％）を淡黄色油として得た。

Ｎ−（２−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）−２−オキソエチル）−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−カルボキサミド
Ｄ−３−０１−２を淡黄色油として得た。
収率：４％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：４７０（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ １２．６７（ｓ，１Ｈ）、９．０９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．６６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．４９〜８．５２（ｍ，２Ｈ）、７．５４（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．２４〜７．２９（ｍ，１Ｈ）、６．７１（ｓ，１Ｈ）、４．７３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．４１〜４．４６（ｍ，２Ｈ）、４．２３〜４．３２（ｍ，２Ｈ）、３．９０〜３．９６（ｍ，２Ｈ）、３．５２〜３．６８（ｍ，２Ｈ）、１．１３〜１．２４（ｍ，６Ｈ）。

Ｄ−３−０２−８：
Ｄ−３−０２−８をＤ−３−０２−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−３−０２−８（８ｍｇ、３１％）を淡黄色固体として得た。

Ｎ−（１−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルカルバモイル）シクロヘキシル）−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−カルボキサミド
Ｄ−３−０２−８を淡黄色固体として得た。
収率：４％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５３８（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ １２．４１（ｓ，１Ｈ）、８．３３（ｓ，１Ｈ）、８．０９〜８．１４（ｍ，１Ｈ）、７．９４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．７８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．７２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．２１〜４．３５（ｍ，２Ｈ）、４．０６（ｓ，１Ｈ）、３．５１〜３．５４（ｍ，１Ｈ）、３．０７（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，４Ｈ）、２．０６〜２．１４（ｍ，２Ｈ）、１．７３〜１．７９（ｍ，２Ｈ）、１．５７〜１．６３（ｍ，２Ｈ）、１．４５〜１．４７（ｍ，２Ｈ）、１．１６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−３−０２−９：

Ｄ−３−０２−９−１の合成：
ＤＣＭ（５ｍＬ）中Ｄ−３−０２−２（６０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）とＨＡＴＵ（１６５ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）との混合物を室温にて０．５時間撹拌した。その後、ＤＩＥＡ（８４ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ−ブチル ２−ヒドロキシエチルカルバメート（２０４ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温にて一晩撹拌した。得られた混合物を分取ＴＬＣ（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＝１／５）により精製し、Ｄ−３−０２−９−１（６０ｍｇ、５５％）を黄色固体として得た。

Ｄ−３−０２−９−２の合成：
ＭｅＯＨ（３ｍＬ）中Ｄ−３−０２−９−１（６０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の混合物に６ＮのＨＣｌ（６ｍＬ）を添加した。混合物を室温にて０．５時間撹拌した後、濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＝１／２）により精製し、Ｄ−３−０２−９−２（３０ｍｇ、７３％）を黄色油として得た。

Ｄ−３−０２−９−３の合成：
ＤＭＦ（３ｍＬ）中Ｄ−３−０２−９−２（３０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）と、Ｋ_２ＣＯ_３（３７ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）と、Ｅ−００２（４８ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）との混合物を室温にて３時間撹拌した。混合物を濾過し、減圧下において濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＝１／５）により精製し、Ｄ−３−０２−９−３（２０ｍｇ、２７％）を黄色油として得た。

Ｄ−３−０２−９の合成：
Ｄ−１−０１と同様に、分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−３−０２−９（９ｍｇ、５３％）を褐色固体として得た。

２−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）エチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−カルボキシレート
Ｄ−３−０２−９を褐色固体として得た。
収率：６％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：４５７（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ７．９７（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，２Ｈ）、６．９０（ｓ，１Ｈ）、６．７６（ｓ，１Ｈ）、５．３７（ｓ，２Ｈ）、４．７５〜４．８０（ｍ，１Ｈ）、４．５０〜４．５５（ｍ，２Ｈ）、３．７０（ｂｒ，２Ｈ）、３．６１（ｂｒ，２Ｈ）、３．５７（ｂｒ，２Ｈ）、１．１７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−４−０１：
Ｄ−４−０１をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−４−０１（３ｍｇ、１８％）を褐色固体として得た。

Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド
Ｄ−４−０１を褐色固体として得た。
収率：６％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：３９７（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．６０〜８．６３（ｍ，２Ｈ）、７．３８（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．１９（ｓ，１Ｈ）、４．８５〜４．９０（ｍ，３Ｈ）、４．６６（ｓ，２Ｈ）、３．８５（ｓ，２Ｈ）、１．２６〜１．３１（ｍ，６Ｈ）。

Ｄ−４−０１−３：
Ｄ−４−０１−３をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−４−０１−３（１０ｍｇ、２７％）を褐色固体として得た。

Ｎ−（６−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド
Ｄ−４−０１−３を褐色固体として得た。
収率：１０％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５１０（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．５６〜８．６３（ｍ，２Ｈ）、７．３１〜７．３４（ｍ，１Ｈ）、６．５７（ｓ，１Ｈ）、５．０３〜５．０９（ｍ，１Ｈ）、４．４６（ｓ，２Ｈ）、４．３１（ｓ，２Ｈ）、３．６９（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．４０〜３．４６（ｍ，２Ｈ）、２．３０〜２．３４（ｍ，２Ｈ）、１．６６〜１．７２（ｍ，４Ｈ）、１．３９〜１．４６（ｍ，２Ｈ）、１．２１〜１．３１（ｍ，６Ｈ）。

Ｄ−４−０１−４：
Ｄ−４−０１−４をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−４−０１−４（６ｍｇ、３３％）を淡白色固体として得た。

Ｎ−（３−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルカルバモイル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド
Ｄ−４−０１−４を淡白色固体として得た。
収率：６％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５１６（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．７０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、８．４３（ｓ，１Ｈ）、７．９３〜８．００（ｍ，１Ｈ）、７．７０（ｓ，１Ｈ）、７．５５（ｓ，１Ｈ）、７．３４〜７．４０（ｍ，２Ｈ）、４．９０〜５．１２（ｍ，３Ｈ）、４．７４（ｓ，２Ｈ）、３．９０（ｓ，２Ｈ）、１．３２（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，６Ｈ）。

Ｄ−５−０４：
Ｄ−５−０４をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−５−０４（５ｍｇ、７１％）を褐色油として得た。

３−シクロプロピル−３−（５−フルオロ−２−（５−フルオロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−イル）ピリミジン−４−イルアミノ）−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）プロパンアミド
Ｄ−５−０４を褐色油として得た。
収率：２９％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５９４（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．５６〜８．５９（ｍ，２Ｈ）、８．２６（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．６４（ｓ，１Ｈ）、４．７７（ｓ，１Ｈ）、４．５０（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．３６〜４．４６（ｍ，４Ｈ）、３．５４〜３．６３（ｍ，２Ｈ）、２．８８（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ）、１．２８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、１．１９〜１．２４（ｍ，６Ｈ）、０．４３〜０．７９（ｍ，４Ｈ）。

Ｄ−５−０５：
Ｄ−５−０５をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−５−０５（５ｍｇ、１９％）を褐色油として得た。

シス−３−（５−フルオロ−２−（５−フルオロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−イル）ピリミジン−４−イルアミノ）−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド
Ｄ−５−０５を褐色油として得た。
収率：１５％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：６０８（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．６３（ｓ，１Ｈ）、８．３９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．３２（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．７７（ｓ，１Ｈ）、５．０１（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．５４（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，２Ｈ）、４．４１〜４．４７（ｍ，２Ｈ）、３．７３（ｓ，２Ｈ）、２．８３（ｓ，１Ｈ）、２．２３〜２．３１（ｍ，２Ｈ）、１．８１（ｓ，１Ｈ）、１．６８（ｓ，１Ｈ）、１．５５〜１．５８（ｍ，２Ｈ）、１．２８〜１．３２（ｍ，２Ｈ）、１．２０〜１．２６（ｍ，６Ｈ）。

Ｄ−６−０１：

Ｄ−６−０２の合成：
ジオキサン（１００ｍＬ）中Ｃ−００３（３．６０ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）と、シクロプロピルボロン酸（１．３０ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）と、Ｃｓ_２ＣＯ_３（６．６０ｇ、２０．３ｍｍｏｌ）と、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２（０．３７ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）との混合物をＮ_２雰囲気下において５時間還流した。溶媒を減圧によって除去し、残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝１／５０→１／１０）により精製し、Ｄ−６−０２（２．６１ｇ、８１％）を淡黄色固体として得た。

Ｄ−６−０２−１の合成：
ｔｅｒｔ−ブタノール／水（５０ｍＬ／４ｍＬ）中Ｄ−６−０２（３．００ｇ、９．５ｍｍｏｌ）とリン酸二水素ナトリウム（３．９０ｇ、３３．１ｍｍｏｌ）との混合物に２−メチル−２−ブテン（３．３１ｇ、４７．０ｍｍｏｌ）を添加した。続いて水（４ｍＬ）中、亜塩素酸ナトリウム（２．６２ｇ、２８．４ｍｍｏｌ）の混合物を滴加した。混合物を室温にて５時間撹拌した。溶媒を減圧下において除去し、得られた混合物を２ＭのＨＣｌを用いてｐＨ＝６．０に調整した。混合物を、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）を用いて抽出した。有機相を乾燥濃縮し、Ｄ−６−０２−１（２．６１ｇ、８３％）を淡黄色固体として得た。以下の工程において、Ｄ−６−０１をＤ−６−０５と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−６−０１（５．２ｍｇ、２４％）を褐色油として得た。

２−シクロプロピル−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（Ｄ−６−０１）
Ｄ−６−０１を褐色油として得た。
収率：１％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：４３７（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．３５（ｓ，１Ｈ）、８．３０（ｓ，１Ｈ）、７．１７（ｓ，１Ｈ）、４．９５〜５．００（ｍ，３Ｈ）、４．６７（ｂｒ，２Ｈ）、３．８６（ｂｒ，２Ｈ）、２．３４（ｂｒ，１Ｈ）、１．３１（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ）、１．１０〜１．１４（ｍ，４Ｈ）。
^１３ＣＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，３００Ｈｚ）：

Ｄ−６−０５：
Ｄ−６−０５−１をＤ−３−０２−３−２と同様に合成した。Ｄ−６−０５−１（２０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）溶液にＴＦＡ（２ｍＬ）を添加した。溶液を室温にて２時間撹拌した後、濃縮した。残渣をＤＣＭ（５ｍＬ）に再溶解させ、４ＮのＮａＯＨ（５ｍＬ）を添加した。溶液を室温にて一晩撹拌した。溶液のｐＨを２ＮのＨＣｌを用いて７に調整した。得られた溶液を濃縮し、固体をＭｅＯＨ／ＤＣＭ＝１／１０（８ｍＬ×３）により洗浄した。有機相を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し、生成物Ｄ−６−０５（６ｍｇ、４３％）を淡白色固体として得た。

（Ｓ）−２−シクロプロピル−Ｎ−（１−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
Ｄ−６−０５を淡白色固体として得た。
収率：１９％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５３６（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ９．０１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．３８（ｓ，１Ｈ）、８．２３（ｓ，１Ｈ）、７．０７（ｓ，１Ｈ）、４．９０（ｓ，１Ｈ）、４．６８（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．５６〜４．６０（ｍ，１Ｈ）、４．５０（ｓ，３Ｈ）、３．７４〜３．７７（ｍ，２Ｈ）、２．３３〜２．３５（ｍ，２Ｈ）、１．２６〜１．２９（ｍ，４Ｈ）、１．１１〜１．１７（ｍ，１２Ｈ）。

Ｄ−６−０６：
Ｄ−６−０６をＤ−６−０５と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−６−０６（５ｍｇ、３６％）を白色固体として得た。

２−シクロプロピル−Ｎ−（１−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）−１−オキソブタン−２−イル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
Ｄ−６−０６を白色固体として得た。
収率：１６％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５２２（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ １２．６２（ｓ，１Ｈ）、８．８２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．７３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．４１（ｓ，１Ｈ）、８．２９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．５９（ｓ，１Ｈ）、４．７０〜４．７４（ｍ，１Ｈ）、４．６０〜４．６４（ｍ，１Ｈ）、４．４５〜４．４９（ｍ，２Ｈ）、４．２５〜４．３３（ｍ，２Ｈ）、３．６６（ｓ，２Ｈ）、２．３４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、１．７７〜１．８７（ｍ，２Ｈ）、１．１７（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，６Ｈ）、１．０６（ｔ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，４Ｈ）、０．９３〜１．０２（ｍ，３Ｈ）。

Ｄ−６−０７：
Ｄ−６−０７をＤ−６−０５と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−６−０７（３ｍｇ、２１％）を白色固体として得た。

（Ｒ）−２−シクロプロピル−Ｎ−（２−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）−２−オキソ−１−フェニルエチル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
Ｄ−６−０７を白色固体として得た。
収率：９％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５７０（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ １２．６２（ｓ，１Ｈ）、９．３４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、９．０５（ｓ，１Ｈ）、８．４３（ｓ，１Ｈ）、８．３０（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、７．４１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、７．３５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．３６（ｓ，１Ｈ）、５．７３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．６８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．４０〜４．４４（ｍ，１Ｈ）、４．０７〜４．０９（ｍ，２Ｈ）、３．４７〜３．４９（ｍ，２Ｈ）、３．３４〜３．３８（ｍ，２Ｈ）、２．３３（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ）、１．２２〜１．２３（ｍ，６Ｈ）、１．１３〜１．１５（ｍ，４Ｈ）。

Ｄ−６−０８：
Ｄ−６−０８をＤ−６−０５と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−６−０８（１０ｍｇ、７１％）を淡白色固体として得た。

２−シクロプロピル−Ｎ−（６−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）−６−オキソヘキシル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
Ｄ−６−０８を淡白色固体として得た。
収率：３１％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５５０（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．３４（ｓ，１Ｈ）、８．２１（ｓ，１Ｈ）、７．１１（ｓ，１Ｈ）、４．５７〜４．６４（ｍ，４Ｈ）、４．１１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．８１（ｓ，２Ｈ）、３．５３（ｓ，２Ｈ）、２．３３〜２．３９（ｍ，２Ｈ）、２．０４（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）、１．７２〜１．７７（ｍ，４Ｈ）、１．５４（ｓ，２Ｈ）、１．２４〜１．３１（ｍ，６Ｈ）、１．０９〜１．１５（ｍ，４Ｈ）。

Ｄ−６−０９：
Ｄ−６−０９をＤ−３−０２−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−６−０９（５ｍｇ、４２％）を褐色油として得た。

（３Ｒ）−３−（５−フルオロ−２−（３−オキソ−３，８ａ−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）ピリミジン−４−イルアミノ）−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）−４−メチルペンタンアミド
Ｄ−６−０９を褐色油として得た。
収率：１６％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５９４（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．６４（ｓ，１Ｈ）、７．９４〜８．０９（ｍ，２Ｈ）、７．２３（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．５６（ｓ，１Ｈ）、４．９１（ｓ，１Ｈ）、４．７２〜４．８０（ｍ，２Ｈ）、４．５２（ｓ，２Ｈ）、４．３４〜４．３７（ｍ，２Ｈ）、３．６７（ｓ，１Ｈ）、２．７３〜２．８０（ｍ，２Ｈ）、１．９５〜２．００（ｍ，１Ｈ）、１．２０〜１．３２（ｍ，６Ｈ）、１．００〜１．１２（ｍ，６Ｈ）。

Ｄ−６−１０：
Ｄ−６−１０をＤ−６−０５と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−６−１０（１０ｍｇ、７１％）を褐色固体として得た。

２−シクロプロピル−Ｎ−（１−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルカルバモイル）シクロヘキシル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
Ｄ−６−１０を褐色固体として得た。
収率：３１％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５６２（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．９２（ｓ，１Ｈ）、８．３９（ｓ，１Ｈ）、８．２１（ｓ，１Ｈ）、７．０７（ｓ，１Ｈ）、４．９４（ｓ，１Ｈ）、４．４５〜４．４８（ｍ，４Ｈ）、３．７５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．３０〜２．３８（ｍ，４Ｈ）、１．９１〜１．９８（ｍ，１Ｈ）、１．７９〜１．８２（ｍ，４Ｈ）、１．６７〜１．７０（ｍ，２Ｈ）、１．２９〜１．３７（ｍ，６Ｈ）、１．１２〜１．１８（ｍ，４Ｈ）。

Ｄ−６−１１：
Ｄ−６−１１をＤ−３−０２−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−６−１１（５ｍｇ、５５％）を褐色固体として得た。

（２Ｓ）−２−（５−フルオロ−２−（３−オキソ−３，８ａ−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）ピリミジン−４−イルアミノ）−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）−３−メチルブタンアミド
Ｄ−６−１１を褐色固体として得た。
収率：２９％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５８０（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．５０（ｓ，１Ｈ）、８．１８（ｓ，１Ｈ）、８．０１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．１４（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．５９（ｓ，１Ｈ）、４．８５〜４．９０（ｍ，１Ｈ）、４．６８〜４．７１（ｍ，２Ｈ）、４．２９〜４．３３（ｍ，２Ｈ）、４．１７〜４．２６（ｍ，１Ｈ）、３．８０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．４５〜３．５０（ｍ，１Ｈ）、２．２５〜２．２８（ｍ，１Ｈ）、１．０８〜１．１９（ｍ，１２Ｈ）。

Ｄ−６−１２：
Ｄ−６−１２をＤ−３−０２−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−６−１２（３ｍｇ、２３％）を黄色固体として得た。

６−（５−フルオロ−２−（３−オキソ−３，８ａ−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）ピリミジン−４−イルアミノ）−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）ヘキサンアミド
Ｄ−６−１２を黄色固体として得た。
収率：１９％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５９４（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．７３（ｓ，１Ｈ）、８．０８〜８．１２（ｍ，２Ｈ）、７．２４〜７．２７（ｍ，１Ｈ）、６．７８（ｓ，１Ｈ）、４．５２（ｓ，１Ｈ）、４．４０〜４．４２（ｍ，２Ｈ）、３．７５（ｓ，２Ｈ）、３．６４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）、２．３７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）、１．７７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，４Ｈ）、１．４９〜１．５３（ｍ，２Ｈ）、１．３０〜１．３３（ｍ，２Ｈ）、１．２７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）

Ｄ−６−１３：

Ｄ−６−１３−１の合成：
エタン−１，２−ジアミン（０．５ｍＬ）中Ｅ−００２（３０．００ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の混合物を室温にて０．５時間撹拌した。得られた混合物を分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−６−１３−１（１９．２０ｍｇ、５０％）を白色固体として得た。

Ｄ−６−１３−２の合成：
ＤＭＦ（１ｍＬ）中Ｄ−６−０２−１（１６．６５ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）とＤ−６−１３−１（１９．２０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）との混合物にトリエチルアミン（１０．１０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（２８．５０ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温にて１０時間撹拌した。得られた混合物を分取ＴＬＣにより精製し、Ｄ−６−１３−２（１５．７０ｍｇ、４５％）を白色固体として得た。

Ｄ−６−１３の合成：
Ｄ−６−１３−２（１５．７０ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１ｍＬ）溶液にトリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を２０℃にて添加した。６時間後、混合物を真空下において濃縮した。残渣をＴＨＦ（１ｍＬ）に懸濁させ、２．０ＭのＮａＯＨ水溶液（１ｍＬ）を添加した。混合物を室温にて１５時間撹拌した後、真空下において濃縮した。水（５ｍＬ）を添加し、得られた溶液を、酢酸エチル（２×２ｍＬ）を用いて抽出した。有機相を乾燥させ、真空下において濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−６−１３（４．３ｍｇ、４０％）を淡白色固体として得た。

２−シクロプロピル−Ｎ−（２−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）エチル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（Ｄ−６−１３）
Ｄ−６−１３を淡白色固体として得た。
収率：１％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：４８０（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．１８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．６１（ｓ，１Ｈ）、４．７５（ｓ，１Ｈ）、４．４２（ｓ，２Ｈ）、４．３０〜４．３１（ｍ，２Ｈ）、３．８０〜３．８１（ｍ，２Ｈ）、３．６４〜３．６５（ｍ，２Ｈ）、３．４０〜３．４１（ｍ，２Ｈ）、２．２１（ｓ，１Ｈ）、１．１７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）、０．９４〜０．９６（ｍ，４Ｈ）
^１３Ｃ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，３００Ｈｚ）：

Ｄ−６−１４：
Ｄ−６−１４をＤ−３−０１−３と同様に合成した。分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−６−１４（１０．００ｍｇ、４６％）を淡黄色固体として得た。

（Ｓ）−２−シクロプロピル−Ｎ−（３−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）−３−オキソ−１−フェニルプロピル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（Ｄ−６−１４）
Ｄ−６−１４を淡黄色固体として得た。
収率：１％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５８４（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００Ｈｚ）：
δ ８．３４（ｓ，１Ｈ）、８．１５（ｓ，１Ｈ）、７．４５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、７．３６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、７．２９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．８７（ｓ，１Ｈ）、５．６３（ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．８５〜４．９０（ｍ，１Ｈ）、４．４９（ｓ，２Ｈ）、４．２６（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．５９〜３．６５（ｍ，２Ｈ）、２．９２〜３．００（ｍ，２Ｈ）、２．２８〜２．３３（ｍ，１Ｈ）、１．３０〜１．３２（ｍ，１Ｈ）、１．２７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，７Ｈ）、１．０９〜１．１５（ｍ，２Ｈ）、０．９８〜１．０２（ｍ，１Ｈ）。
^１３Ｃ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，３００Ｈｚ）：

ＤＭＦ（１ｍＬ）中Ｄ−６−０２−１（３３．３０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）と（Ｓ）−メチル ２−アミノ−２−シクロプロピルアセテート−塩酸塩（１６．５１ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）との混合物に、トリエチルアミン（２０．２０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（５７．００ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温にて１０時間撹拌した。得られた混合物を分取ＴＬＣにより精製し、Ｄ−６−１５−１（３０．００ｍｇ、６７％）を白色固体として得た。

Ｄ−６−１５−２の合成：
エタノール（１ｍＬ））中Ｄ−６−１５−１（３０．００ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）と水酸化リチウム水和物（５．４０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）との混合物を室温にて４時間撹拌した。溶媒を真空下において除去し、得られた混合物をｐＨ＝５に調整した。形成した沈殿物を濾去し、真空下において乾燥させ、Ｄ−６−１５−２（２０．００ｍｇ、６９％）を白色固体として得た。

Ｄ−６−１５−３の合成：
ＤＭＦ（１ｍＬ）中Ｄ−６−１５−２（２０．００ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）とＥ−００１（１５．８６ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）との混合物に、Ｋ_２ＣＯ_３（１２．８４ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（２６．５１ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３０℃にて５時間撹拌した。得られた混合物を分取ＴＬＣにより精製し、Ｄ−６−１５−３（２０．００ｍｇ、５７％）を淡黄色固体として得た。

Ｄ−６−１５の合成：
Ｄ−６−１５−３（２０．００ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を２０℃にて添加した。６時間後、混合物を真空下において濃縮した。残渣をＴＨＦ（１ｍＬ）に懸濁し、２．０ＭのＮａＯＨ水溶液（１ｍＬ）を添加した。混合物を室温にて１５時間撹拌した後、真空下において濃縮した。水（５ｍＬ）を添加し、得られた混合物を、酢酸エチル（２×２ｍＬ）を用いて抽出した。有機相を乾燥させ、真空下において濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｄ−６−１５（８．２ｍｇ、５８％）を白色固体として得た。

（Ｒ）−２−シクロプロピル−Ｎ−（１−シクロプロピル−２−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）−２−オキソエチル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（Ｄ−６−１５）
Ｄ−６−１５を淡白色固体として得た。
収率：１％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５３４（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ １２．９７（ｂｒ，ｓ，１Ｈ）、１２．６３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．７７〜８．８５（ｍ，２Ｈ）、８．４９（ｓ，１Ｈ）、８．２８（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．６９（ｓ，１Ｈ）、４．７１〜４．７６（ｍ，１Ｈ）、４．４８〜４．５３（ｍ，２Ｈ）、４．３２〜４．３８（ｍ，２Ｈ）、４．２１〜４．２８（ｍ，１Ｈ）、３．６８（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．３１〜２．３７（ｍ，１Ｈ）、１．１７〜１．２６（ｍ，８Ｈ）、１．０１〜１．１３（ｍ，３Ｈ）、０．５０〜０．５８（ｍ，３Ｈ）、０．４１〜０．４５（ｍ，１Ｈ）。
^１３Ｃ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，３００Ｈｚ）：

２−シクロプロピル−Ｎ−（１−シクロプロピル−３−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチルアミノ）−３−オキソプロピル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（Ｄ−６−１６）
Ｄ−６−１６をＤ−６−１５と同様に淡白色固体として得た。
収率：１％
Ｍｐ：
ＭＳ（ＥＳＩ）：５４８（Ｍ＋Ｈ）^＋
１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：
δ １３．０５（ｂｒ，ｓ，１Ｈ）、１２．５７（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．７１（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．３８（ｓ，１Ｈ）、８．３５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．１９（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．７９（ｓ，１Ｈ）、４．６６−４．７３（ｍ，１Ｈ）、４．４５〜４．４８（ｍ，２Ｈ）、４．２８〜４．３２（ｍ，２Ｈ）、３．９４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．６２（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．５８〜２．６１（ｍ，２Ｈ）、２．２９〜２．３４（ｍ，１Ｈ）、０．９８〜１．１８（ｍ，１１Ｈ）、０．４１〜０．４９（ｍ，２Ｈ）、０．３０〜０．３４（ｍ，１Ｈ）、０．２２〜０．２７（ｍ，１Ｈ）
^１３Ｃ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，３００Ｈｚ）：

Claims (14)

1. 一般式（Ｖ）で表わされ、任意に、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、多形、プロドラッグ、コドラッグ、共結晶、互変異性体、ラセミ体、エナンチオマー若しくはジアステレオマー又はそれらの混合物であってもよい化合物：
   （式中、
   Ｒ^５１は−Ｈ、−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）及び−Ｃ（Ｏ）−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）から選択され、
   Ｒ^５２は−Ｈ、−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）、−（ＣＨ_２）_ｑ−（任意に置換されたヘテロシクリル）、−（ＣＨ_２）_ｑ−（任意に置換されたカルボシクリル）、−（ＣＨ_２）_ｐ−ＯＲ^５５及び−（ＣＨ_２）_ｐ−ＮＲ^５６Ｒ^５７から選択され、
   Ｒ^５３は−Ｒ^５４及び−Ｘ^５１Ｒ^５４から選択され、
   Ｒ^５４は１０個〜１４個の環原子及び環原子として１個〜４個の窒素原子を含む二環式縮合環系であり、該二環式縮合環系を任意に置換することができ、
   Ｒ^５５は−Ｈ、−Ｃ_１〜６アルキル及び−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｒＨから選択され、
   Ｒ^５６は−Ｈ、−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−Ｃ_１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、
   Ｒ^５７は−Ｈ、−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−Ｃ_１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、
   Ｒ^５８は−Ｈ及び−Ｃ_１〜６アルキルから選択され、
   Ｘ^５１は−Ｌ_１−（Ａ−（Ｌ_２）_ｍ）_ｎ−から選択され、
   Ｘ^５２はＮＲ^５６、Ｎ（Ｒ^５６）Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ^５６、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、Ｎ（Ｒ^５６）ＳＯ_２、ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^５６）、Ｓ、ＳＯ及びＳＯ_２から選択され、
   Ｌ_１はＮＲ^５６、Ｎ（Ｒ^５６）Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ^５６、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、Ｎ（Ｒ^５６）ＳＯ_２、ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^５６）、Ｎ（Ｒ^５６）ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^５６）、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ_２及び（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）−ＮＲ^５６から選択され、
   Ｌ_２はＮＲ^５６、Ｎ（Ｒ^５６）Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ^５６、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、Ｎ（Ｒ^５６）ＳＯ_２、ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^５６）、Ｎ（Ｒ^５６）ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^５６）、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ_２及び（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）−ＮＲ^５６から選択され、
   Ａは（ＣＲ^＊Ｒ^＊＊）_ｔ、任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル、３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル及びそれらの組合せから選択され、
   Ｒ^＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−Ｃ_１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、
   Ｒ^＊＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−Ｃ_１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、
   又はＲ^＊及びＲ^＊＊は場合により、任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル基若しくは３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル基を形成することができ、
   Ｒ^＊＊＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−Ｃ_１〜６アルキル基又は１つ若しくは複数のハロゲン原子により置換される−Ｃ_１〜６アルキル基であり、
   ｍは０又は１であり、
   ｎは０又は１であり、
   ｐは１〜４であり、
   ｑは０〜４であり、
   ｒは１〜３であり、
   ｓは０〜４であり、
   ｔは１〜６であり、
   前記アルキル基はハロゲン、−ＣＮ、−ＮＲ^５６Ｒ^５７、−ＯＨ及び−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキルから独立して選択される１つ又は複数の置換基で任意に置換することができ、
   前記二環式縮合環系は（＝Ｏ）、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３、−（ＣＨ_２）_ｓ−Ｘ^５２−Ｒ^５８、−Ｃ_１〜６アルキル、−Ｃ_３〜７カルボシクリル、−Ｃ_１〜４アルキル−Ｃ_３〜７カルボシクリル、−（３個〜７個の環原子を有するヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有するヘテロシクリル）から独立して選択される１つ又は複数の置換基で任意に置換することができ、
   前記炭化水素基、ヘテロシクリル基及び／又はカルボシクリル基はハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３、−（ＣＨ_２）_ｓ−Ｘ^５２−Ｒ^５８、−Ｃ_１〜６アルキル、−Ｃ_３〜７カルボシクリル、−Ｃ_１〜４アルキル−Ｃ_３〜７カルボシクリル、−（３個〜７個の環原子を有するヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有するヘテロシクリル）から独立して選択される１つ又は複数の置換基で任意に置換することができる）。
2. Ｒ^５１が−Ｈ及び−Ｃ_１〜６アルキルから選択される、請求項１に記載の化合物。
3. Ｒ^５２が−Ｈ及び−Ｃ_１〜６アルキルから選択される、請求項１又は２に記載の化合物。
4. Ｒ^５３が−Ｘ^５１Ｒ^５４である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
5. Ｒ^５４が五員環及び六員環及び環原子として１個〜４個の窒素原子を含む二環式縮合環系であり、該二環式縮合環系を任意に置換することができる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
6. Ｒ^５４は下記のものからなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物：
   （式中、
   は前記分子の残りの部分に結合する点を示し、
   前記基をハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３、−（ＣＨ_２）_ｓ−Ｘ^５２−Ｒ^５８、−Ｃ_１〜６アルキル、−Ｃ_３〜７カルボシクリル、−Ｃ_１〜４アルキル−Ｃ_３〜７カルボシクリル、−（３個〜７個の環原子を有するヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有するヘテロシクリル）から選択される１つ又は複数の置換基、好ましくはハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３及び−Ｃ_３〜７カルボシクリルから選択される１つ又は複数の置換基、より好ましくはハロゲン及び−Ｃ_３〜７カルボシクリルから選択される１つ又は複数の置換基で任意に置換することができる）。
7. Ｘ^５１は−Ｌ_１−及び−Ｌ_１−Ａ−Ｌ_２−から選択され、
   Ｌ_１はＮＲ^５６、Ｎ（Ｒ^５６）Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ^５６、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、Ｏ及び（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）−ＮＲ^５６から選択され、
   Ｌ_２はＮＲ^５６、Ｎ（Ｒ^５６）Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ^５６、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、Ｏ及び（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）−ＮＲ^５６から選択され、
   Ａは（ＣＲ^＊Ｒ^＊＊）_ｔ、シクロヘキシル及びフェニルから選択され、
   Ｒ^＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−Ｃ_１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、
   Ｒ^＊＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−（任意に置換されたＣ_１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−Ｃ_１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル）、−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ_１〜４アルキル−（３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、
   又はＲ^＊及びＲ^＊＊は場合により、任意に置換されたＣ_３〜７カルボシクリル基若しくは３個〜７個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル基を形成することができ、
   ｔは１〜６である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
8. 一般式（Ｖ）で表わされ、任意に、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、多形、プロドラッグ、コドラッグ、共結晶、互変異性体、ラセミ体、エナンチオマー、若しくはジアステレオマー、又はそれらの混合物の形態であってもよい、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物と、任意に、１種又は複数種の薬学的に許容可能な賦形剤及び／又は担体と、
   を含む、医薬組成物。
9. 一般式（Ｖ）で表わされる化合物とは異なるポリメラーゼ阻害剤、ノイラミニダーゼ阻害剤、Ｍ２チャネル阻害剤、アルファグルコシダーゼ阻害剤、別のインフルエンザ標的のリガンド、抗生物質、抗炎症剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、ＥＰリガンド、ブラジキニンリガンド、及びカンナビノイドリガンドからなる群から選択される少なくとも１種の更なる薬剤を更に含む、請求項８に記載の医薬組成物。
10. ウイルス疾患の治療、改善又は予防に使用される、一般式（Ｖ）で表わされ、任意に、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、多形、プロドラッグ、コドラッグ、共結晶、互変異性体、ラセミ体、エナンチオマー、若しくはジアステレオマー、又はそれらの混合物の形態であってもよい、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
11. ウイルス疾患を治療、改善又は予防する方法であって、それを必要とする患者に、一般式（Ｖ）で表わされ、任意に、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、多形、プロドラッグ、コドラッグ、共結晶、互変異性体、ラセミ体、エナンチオマー、若しくはジアステレオマー、又はそれらの混合物の形態であってもよい、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物を有効量投与することを含む、方法。
12. 前記ウイルス疾患がヘルペスウイルス、レトロウイルス、フィロウイルス、パラミクソウイルス、ラブドウイルス、オルトミクソウイルス、ブンヤウイルス、アレナウイルス、コロナウイルス、ピコルナウイルス、トガウイルス又はフラビウイルスにより引き起こされ、より詳細には該ウイルス疾患はインフルエンザである、請求項１０に記載の化合物又は請求項１１に記載の方法。
13. 前記一般式（Ｖ）で表わされる化合物とは異なるポリメラーゼ阻害剤、ノイラミニダーゼ阻害剤、Ｍ２チャネル阻害剤、アルファグルコシダーゼ阻害剤、別のインフルエンザ標的のリガンド、抗生物質、抗炎症剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、ＥＰリガンド、ブラジキニンリガンド、及びカンナビノイドリガンドからなる群から選択される少なくとも１種の更なる薬剤を、一般式（Ｖ）で表わされる化合物と同時に、それと順次に又はそれとは別々に投与する、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記一般式（Ｖ）で表わされる化合物が、本明細書に開示のＦＲＥＴエンドヌクレアーゼ活性アッセイ及び／又は転写アッセイにおいて約５０μＭ未満のＩＣ_５０を示す、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物、医薬組成物又は方法。