JP2017518964A - インペラトリア抽出物を含む組成物 - Google Patents

Abstract

本明細書には、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を有効成分として含む組成物が開示される。本明細書に開示された組成物は、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を含むことにより、エンドセリン１の量の減少、ＮＫ１ＲおよびＥＤＮ１遺伝子の過発現減少効果を示す。したがって、このような効果により、本明細書のインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物は、皮膚恒常性維持および抗ストレス効果を示すことができ、それゆえ、皮膚恒常性維持用組成物として薬学または化粧料の分野で広く使用され得る。

Description

本明細書は、インペラトリア抽出物を含む組成物に関する。

現代病のあらゆる根源といわれているストレスは、生体に及ぼす刺激が一定程度以上となった場合に前記刺激が生体に傷害的に作用するようになり、このとき、生体内において、その刺激の種類に関係なく、一定の脅威への反応として非特異的な汎適応症候群（ｇｅｎｅｒａｌ ａｄａｐｔａｔａｔｉｏｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）を示すことになる現象をいう（非特許文献１）。ストレスの原因には、大きく分けて、（１）身体的要因：過労、睡眠不足、外傷、中毒等；（２）外部的要因：自然環境、文化状況、家庭や職場での人間関係等；（３）内部的要因：性格、現実における心理的葛藤、幼児または小児期の精神的傷等；があり得る。

このようなストレスが長期的に持続されると、心臓病、胃潰瘍、高血圧といった身体的疾患を引き起こしたり、不眠症、ノイローゼ、うつ病といった心理的不適応を示したりもし、身体の生理活性、免疫活性などが低下し、身体の恒常性が弱まって他の病気などが誘発されたりもする。葛藤と競争が熾烈な産業社会においては、社会が構造的または機能的に複雑に変化するにつれ、これに適応しなければならない現代人の大部分は、多くの身体的／心理的ストレスを受けることになる。したがって、こうしたストレスによって免疫活性が減少するようになると、皮膚恒常性の崩壊することがあり得、それによって外部有害因子から皮膚を守る水分保持機能およびバリア機能が弱まることがあり得る。

欧州特許第２１００５９２号明細書 国際公開第２０１０／０５３３４０号

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前述したような問題点を解決するために、本発明においては、優れた皮膚恒常性維持効能を有する組成物を提供することを、その目的とする。

前記したような目的のために、本発明は、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）の一種であるインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を有効成分として含有する皮膚恒常性維持用組成物を提供する。

本明細書におけるインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を有効成分として含有する皮膚恒常性維持用組成物は、ＮＫ１Ｒ（ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎ １ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）とＥＤＮ１（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ １）遺伝子の発現量を減少させ、ＥＤＮ１の量を減少させ、かつサブスタンスＰ（ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ）に対する抗ストレス性を示す。このような特性により、本明細書における組成物は、皮膚恒常性を維持させ、抗ストレス効果を有し、かつ細胞に悪影響を及ぼさない安定性を有するので、皮膚外用剤、化粧料組成物および医薬組成物に広く適用することができる。

本発明の一側面によるインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物に対する、ＮＫ１ＲおよびＥＤＮ１遺伝子発現解析実験の結果を示したグラフである。 本発明の一側面によるインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物に対する、ＥＤＮ１の量を分析した実験の結果を示したグラフである。

２０１４年４月３０日に出願された韓国特許出願番号１０−２０１４−００５２２７３号は、あらゆる目的にてその全体が本明細書に参照として取り込まれる。また、本出願は、その全体が本明細書に参照として取り込まれる韓国特許出願番号１０−２０１４−００５２２７３号の利益を主張する。

以下、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が本発明を容易に実施できるようにするために、本発明の好適な実施形態について詳細に説明する。

本発明の一側面において、神経ペプチドであるサブスタンスＰ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ）は、気分障害、不安、ストレス、苦痛、嘔吐等の調節と関連があるものと知られている。したがって、サブスタンスＰによって誘発された因子を調節することができるならば、ストレスによって発生する免疫活性の低下による皮膚恒常性の低下を防止することができるであろう。また、本発明の一側面において、サブスタンスＰは、以下のようなアミノ酸配列を有するものであって、下記化学式を有するものであってよい。

サブスタンスＰのアミノ酸配列：ＡｒｇＰｒｏＬｙｓＰｒｏＧｌｎＧｌｎＰｈｅＰｈｅＧｌｙＬｅｕＭｅｔ（ＲＰＫＰＱＱＦＦＧＬＭ）。

本明細書においては、サブスタンスＰは、その濃度が高くなると、その受容体であるＮＫ１Ｒ（ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎ １ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、または、ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＳＰＲ）、ｔａｃｈｙｋｉｎｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １（ＴＡＣＲ１）としても知られている）の遺伝子発現およびタンパク質発現を高めるものと知られており、受容体であるＮＫ１Ｒの信号伝達は、その後ＥＣＥ１（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ １）を刺激して、活性化された形態のＥＤＮ１（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ １）の遺伝子およびタンパク質の発現を増加させる。したがって、サブスタンスＰが作用した場合、ＮＫ１ＲおよびＥＤＮ１遺伝子の発現が増加するので、このような二つの遺伝子の発現を阻害し得る素材であれば、サブスタンスＰの活性を阻害し得、それに伴い、ストレス物質による生理学的効果を抑制して、皮膚恒常性維持および抗ストレス効果を示し得る。また、ＮＫ１Ｒの後続信号伝達より活性化されたＥＤＮ１が細胞内で増加した場合、色素細胞のメラニン形成を高めることができる。したがって、ＥＤＮ１の発現を抑制した場合には、細胞内のメラニン形成を阻害および抑制することができ、そのようにすることで皮膚恒常性を維持させることができ、メラニン形成による色素沈着等の疾病を治療、改善または予防するのに効果を示し得る。

本発明は、一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を有効成分として含む組成物に関するものであってよく、具体的に、本発明の一側面において、組成物は、皮膚恒常性維持用組成物であってよい。

本発明の一側面に係る組成物は、薬学、食品または化粧料組成物であってよい。また、具体的には、本発明の一側面による組成物は、皮膚外用剤組成物であってよい。

本発明の一側面において、用語「皮膚恒常性」とは、皮膚のｐＨ、温度、血流量、水分量等といった皮膚環境または皮膚生理状態が正常な状態において、皮膚環境と同一の状態で継続して維持されることを意味してよい。

本発明は、一側面において、皮膚恒常性維持が必要な個体に、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を投与することを含む皮膚恒常性維持方法に関するものであってよい。具体的に、前記投与は、本明細書に記載された投与方法または投与量によるものであってよい。

本発明は、一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物の皮膚恒常性維持用途に関するものであってよい。

本発明は、一側面において、皮膚恒常性維持に使用するためのインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物に関するものであってよい。

本発明は、一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を有効成分として含む、抗ストレス用、またはストレス物質減少用組成物に関するものであってよい。具体的に、本発明の一側面において、ストレス物質は、サブスタンスＰ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ）であってよい。

本発明は、一側面において、抗ストレスまたはストレス物質減少が必要な個体に、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を投与することを含む抗ストレス方法またはストレス物質減少方法に関するものであってよい。具体的に、前記投与は、本明細書に記載された投与方法または投与量によるものであってよい。

本発明は、一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物の抗ストレス用途またはストレス物質減少用途に関するものであってよい。

本発明は、一側面において、抗ストレスまたはストレス物質減少に使用するためのインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物に関するものであってよい。

本発明は、一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を有効成分として含む、皮膚免疫機能、皮膚水分保持機能、または皮膚バリア機能強化用組成物に関するものであってよい。

本発明は、一側面において、皮膚免疫機能、皮膚水分保持機能、または皮膚バリア機能強化が必要な個体に、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を投与することを含む皮膚免疫機能、皮膚の水分保持機能、または皮膚バリア機能強化方法に関するものであってよい。具体的に、前記投与は、本明細書に記載された投与方法または投与量によるものであってよい。

本発明は、一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物の皮膚免疫機能、皮膚水分保持機能、または皮膚バリア機能強化用途に関するものであってよい。

本発明は、一側面において、皮膚免疫機能、皮膚水分保持機能、または皮膚バリア機能強化に使用するためのインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物に関するものであってよい。

本発明は、一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を有効成分として含む、神経ペプチドサブスタンスＰ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ）活性阻害用組成物に関するものであってよい。

本発明は、一側面において、神経ペプチドサブスタンスＰ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ）活性阻害が必要な個体に、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を投与することを含む神経ペプチドサブスタンスＰ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ）活性阻害方法に関するものであってよい。具体的に、前記投与は、本明細書に記載された投与方法または投与量によるものであってよい。

本発明は、一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物の神経ペプチドサブスタンスＰ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ）活性阻害用途に関するものであってよい。

本発明は、一側面において、神経ペプチドサブスタンスＰ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ）活性阻害に使用するためのインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物に関するものであってよい。

本発明は、一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を有効成分として含む、ＮＫ１Ｒ（ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎ １ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、または、ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＳＰＲ）、ｔａｃｈｙｋｉｎｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １（ＴＡＣＲ１）としても知られている）（ＡＣＥＳＳＩＯＮ：ＮＭ＿００１０５８）遺伝子もしくはＥＤＮ１（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ １）（ＡＣＥＳＳＩＯＮ：ＮＭ＿００１１６８３１９）遺伝子発現阻害用、またはＥＤＮ１量減少用組成物に関するものであってよい。

本発明は、一側面において、ＮＫ１Ｒ遺伝子もしくはＥＤＮ１（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ １）遺伝子発現阻害、またはＥＤＮ１量減少が必要な個体に、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を投与することを含むＮＫ１Ｒ遺伝子もしくはＥＤＮ１（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ １）遺伝子発現阻害、抑制、またはＥＤＮ１量減少方法に関するものであってよい。具体的に、前記投与は、本明細書に記載された投与方法または投与量によるものであってよい。

本発明は、一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物のＮＫ１Ｒ遺伝子もしくはＥＤＮ１（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ １）遺伝子発現阻害、またはＥＤＮ１量減少用途に関するものであってよい。

本発明は、一側面において、ＮＫ１Ｒ遺伝子もしくはＥＤＮ１（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ １）遺伝子発現阻害、またはＥＤＮ１の量の減少に使用するためのインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物に関するものであってよい。

本発明の一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物は、これを含む組成物の総体積を基準として、０．１ｐｐｍ〜１０ｐｐｍの濃度であってよいが、これに制限されるものではない。具体的に、本発明の一側面において、組成物に含まれるインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物の濃度は、組成物の総体積を基準として、０．０１ｐｐｍ以上、０．１ｐｐｍ以上、０．５ｐｐｍ以上、０．６ｐｐｍ以上、０．７ｐｐｍ以上、０．８ｐｐｍ以上、０．９ｐｐｍ以上、１．０ｐｐｍ以上、１．３ｐｐｍ以上、１．５ｐｐｍ以上、１．７ｐｐｍ以上、２．０ｐｐｍ以上、２．３ｐｐｍ以上、２．５ｐｐｍ以上、２．７ｐｐｍ以上、３．０ｐｐｍ以上、３．５ｐｐｍ以上、４．０ｐｐｍ以上、４．１ｐｐｍ以上、４．２ｐｐｍ以上、４．３ｐｐｍ以上、４．４ｐｐｍ以上、４．５ｐｐｍ以上、４．６ｐｐｍ以上、４．７ｐｐｍ以上、４．８ｐｐｍ以上、４．９ｐｐｍ以上、５．０ｐｐｍ以上、５．２ｐｐｍ以上、５．４ｐｐｍ以上、５．６ｐｐｍ以上、５．８ｐｐｍ以上、６．０ｐｐｍ以上、６．５ｐｐｍ以上、７．０ｐｐｍ以上、７．５ｐｐｍ以上、８．０ｐｐｍ以上、９．０ｐｐｍ以上、１０．０ｐｐｍ以上、１１．０ｐｐｍ以上、１２．０ｐｐｍ以上、５０ｐｐｍ以上、１００ｐｐｍ以上、５００ｐｐｍ以上、または１０００ｐｐｍ以上であってよいが、これに制限されるものではなく、２０００ｐｐｍ以下、１０００ｐｐｍ以下、５００ｐｐｍ以下、１００ｐｐｍ以下、５０ｐｐｍ以下、４０ｐｐｍ以下、３０ｐｐｍ以下、２０ｐｐｍ以下、１５．０ｐｐｍ以下、１０．０ｐｐｍ以下、８．０ｐｐｍ以下、６．０ｐｐｍ以下、５．８ｐｐｍ以下、５．６ｐｐｍ以下、５．４ｐｐｍ以下、５．２ｐｐｍ以下、５．０ｐｐｍ以下、４．８ｐｐｍ以下、４．６ｐｐｍ以下、４．４ｐｐｍ以下、４．２ｐｐｍ以下、４．０ｐｐｍ以下、３．７ｐｐｍ以下、３．５ｐｐｍ以下、３．３ｐｐｍ以下、３．０ｐｐｍ以下、２．８ｐｐｍ以下、２．６ｐｐｍ以下、２．４ｐｐｍ以下、２．２ｐｐｍ以下、２．０ｐｐｍ以下、１．８ｐｐｍ以下、１．６ｐｐｍ以下、１．４ｐｐｍ以下、１．２ｐｐｍ以下、１．０ｐｐｍ以下、０．８ｐｐｍ以下、０．６ｐｐｍ以下、０．３ｐｐｍ以下、または０．１ｐｐｍ以下であってよい。

本発明の一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）は、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）草本の葉、実、花、茎、および根からなる群より選択された一つ以上のものであってよい。具体的に、本発明の一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）は、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）草本の葉であってよい。

本発明の一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物は、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）草本の葉、実、花、茎、および根の抽出物のうちの一つ以上のものであってよく、これらの抽出物の混合物であってよい。より具体的に、本発明の一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物は、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）草本の葉の抽出物であってよい。

本発明の一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物は、
（１）インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）を、水、有機溶媒、またはこれらの組合せにより抽出するステップを含む製造方法によって製造されてよい。

本発明の一側面において、前記方法は、ステップ（１）の前に、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）を加工するステップをさらに含んでよく、具体的に、前記加工は、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）を乾燥した後に粉砕して粉末化することであってよいが、これに限定されるものではなく、抽出を容易に遂行するための加工を含む。具体的に、前記乾燥は、日光乾燥、熱風乾燥、蒸発乾燥、噴霧乾燥、または凍結乾燥であってよく、より具体的には、熱風乾燥であってよい。一方、本発明の一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）は、特別な加工なしに、生のインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）自体をそのまま利用して抽出してもよい。

本発明の一側面において、前記方法は、抽出後、蒸留して溶媒を除去するステップをさらに含んでよく、具体的に、前記蒸留は、真空蒸留であってよい。

本発明の一側面において、前記方法は、蒸留後、濃縮物にグリセリンおよび保存剤のうち一つ以上を添加するステップをさらに含んでよい。

本発明の一側面において、前記方法は、溶媒を除去するステップまたはグリセリンおよび保存剤のうち一つ以上を添加するステップの後に、濾過するステップをさらに含んでよい。

本発明の一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物は、水、有機溶媒、およびこれらの組合せからなる群より選択された一つ以上の抽出物であってよい。具体的に、本発明の一側面において、有機溶媒は、Ｃ_１〜Ｃ_６の低級アルコール、ブチレングリコール、およびプロピレングリコールからなる群より選択された一つ以上であってよく、より具体的に、低級アルコールは、エタノールであってよい。

本明細書において使用されるメラニン形成細胞は、ＰＣＴ／ＫＲ２０１２／００７８１５または大韓民国特許出願１０−２０１１−００９９７２８号に開示されたメラニン形成細胞（Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ‐ａｄａｐｔｅｄ ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ，ＫａＭＣ）に該当するものであってよい。本明細書において使用されるメラニン形成細胞は、前記文献に開示されている方法および手順に従って収得されたものであってよく、また、前記文献に開示されている方法により培養されてよい。このようなメラニン形成細胞は、ブダペスト条約に基づく国際寄託機関である生物資源センター（Ｋｏｒｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ，ＫＣＴＣ）に２０１１年９月１４日に寄託し、寄託番号ＫＣＴＣ １２０１５ＢＰの付与を受けたものに該当する。

本明細書において「皮膚」は、生物の外部を覆っている器官を意味するものであって、表皮、真皮および皮下脂肪層から構成されており、顔または体全体の外側を覆う組織だけでなく、頭皮や毛髪を含む最広義の概念である。

本発明の一側面において、「インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）」は、双子葉植物の繖形花目セリ科の顕花植物を意味する。中部及び南部ヨーロッパの山脈などで多く発見され、多様なリキュールとビターズ（ｂｉｔｔｅｒｓ）で各種の香料として使用されたりもする。

本発明の一側面において、「抽出物」は、抽出方法、抽出溶媒、抽出された成分、または抽出物の形態を問わず、天然物の成分を取り出すことにより得られたあらゆる物質を含むものであり、また、天然物の成分を取り出して得られた物質を、その後、別の方法で加工または処理して得られ得るあらゆる物質を含む広範囲な概念であり、具体的に、前記加工または処理は、抽出物を追加的に発酵または酵素処理することであってよい。したがって、本明細書において、抽出物は、発酵物、濃縮物、乾燥物を含む広範囲な概念であり、具体的に、本明細書において、抽出物は、発酵物であってよい。

本発明の一側面において、「インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物」は、抽出方法、抽出溶媒、抽出された成分、または抽出物の形態を問わず、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）の成分を取り出すことにより得られたあらゆる物質を含むものであり、その成分を取り出す過程において、熱、酸（ａｃｉｄ）、塩基（ｂａｓｅ）、酵素などで処理する工程を含む抽出方法を通じて得られた物質を含み、また、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）の成分を取り出して得られた物質を、その後、別の方法で加工または処理して得られ得るあらゆる物質を含む広範囲な概念である。具体的に、前記加工または処理は、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を追加的に発酵または酵素処理等するものであってよい。したがって、本発明の一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物は、発酵物であってよい。

本発明の一側面において、「インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）」は、抽出物の形態、または、生のインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）、生薬自体の粉砕物、生薬の乾燥物、生薬の乾燥粉砕物、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）の発酵物であってよいが、これらに制限されるものではない。また、本明細書において使用されるインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）は、その入手方法に制限がなく、栽培して、または、市販されたものを購入して使用してもよく、草本の地上部または地下部の一部または全部を使用してよい。より具体的に、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）草本の葉、実、茎、根、および花からなる群より選択された一つ以上が使用されてよく、より具体的に、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）草本の葉が使用されてよい。本発明の一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）の場合、必ずしも乾燥を通じて製造されるものではなく、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）の有効成分を抽出するのに適切な形態の原料であれば制限されない。

本発明の一側面において、水は、蒸留水または精製水を含み、有機溶媒は、Ｃ_１〜Ｃ_５の低級アルコールを例とするアルコール、アセトン、エーテル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、エチルメチルケトンおよびクロロホルムからなる群より選択された一つ以上を含むが、これらに制限されるものではない。

本発明の一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物は、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）‐Ｃ_１〜Ｃ_６アルコール抽出物を含んでよく、具体的に、前記アルコールは、メタノールまたはエタノールであってよい。

本発明の一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物は、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）を水、有機溶媒、またはこれらの混合物で抽出する段階を含む製造方法により収得されてよい。

本発明の一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物は、水、有機溶媒、およびこれらの組合せからなる群より選択された溶媒の粗抽出物であってよい。前記有機溶媒は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコールであってよく、具体的に、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコールは、メタノールまたはエタノールであってよい。本発明の一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）を溶媒で抽出する際、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）の約５〜１５倍程度に該当する溶媒を加えて抽出することが好ましく、具体的に、約１０倍の溶媒を加えて抽出することが好ましいが、これに限定されるものではない。

本発明の一側面において、抽出は、熱水抽出、エタノール抽出、加熱抽出、冷浸抽出、還流抽出、還流冷却抽出、または超音波抽出などが利用されてよく、当業者にとって自明な抽出法であれば制限がなく、具体的に、抽出は、熱水抽出またはエタノール抽出であってよい。

本発明の一側面において、抽出は、常温で遂行することもできるが、より効率的な抽出のためには加温条件下で遂行してよく、好ましくは約４０〜１００℃、より好ましくは約８０℃の温度で抽出してよいが、これに限定されるものではない。抽出時間は、約２時間〜約１４時間、具体的には８時間〜１４時間、より具体的には１１時間〜１３時間、最も具体的には１２時間遂行してよいが、これらに限定されるものではなく、抽出溶媒および抽出温度などの条件に応じて異なってよい。前記抽出は、活性成分をより多量に収得するために、１回以上、複数回抽出してよく、好ましくは１〜５回、より好ましくは３回連続抽出して合わせた抽出液を利用してよい。

本発明の一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物は、上述したようにインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）の粗抽出物を含んでよく、前記粗抽出物を、極性の低い有機溶媒でさらに抽出して得られた有機溶媒の可溶性分画物として含んでもよい。本発明の一側面において、有機溶媒としては、ヘキサン、塩化メチレン、酢酸エチル、ｎ‐ブタノールなどが利用されてよいが、これらに限定されるものではない。前記方法で抽出した抽出物またはその抽出物の可溶性分画物は、そのまま使用してもよいが、濾過後に濃縮してエキス形態で使用してよく、濃縮後に乾燥して乾燥物の形態で使用してよい。

本発明の一側面において、乾燥は、蒸発乾燥、噴霧乾燥、凍結乾燥であってよく、具体的に、凍結乾燥時には、−５０〜−７０℃で３〜４日間凍結乾燥を遂行してよい。

本発明の一側面において、化粧料組成物は、剤形が特に限定されず、目的とするところに応じて適切に選択してよい。たとえば、スキンローション、スキンソフナー、スキントナー、アストリンジェント、ローション、ミルクローション、モイスチャーローション、栄養ローション、マッサージクリーム、栄養クリーム、モイスチャークリーム、ハンドクリーム、ファンデーション、エッセンス、栄養エッセンス、パック、石鹸、クレンジングフォーム、クレンジングローション、クレンジングクリーム、ボディローション、ボディクレンザーからなる群より選択されたいずれか一つ以上の剤形で製造されてよいが、これらに制限されるものではない。

本発明の一側面による化粧料組成物の剤形が、ペースト、クリーム、またはゲルである場合には、担体成分として、動物繊維、植物繊維、ワックス、パラフィン、澱粉、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、シリカ、タルク、または酸化亜鉛などが利用されてよい。

本発明の一側面による化粧料組成物の剤形が、パウダーまたはスプレーである場合には、担体成分として、ラクトース、タルク、シリカ、アルミニウムヒドロキシド、カルシウムシリケート、またはポリアミドパウダーが利用されてよく、特にスプレーの場合には、クロロフルオロヒドロカーボン、プロパン／ブタン、またはジメチルエーテルといった推進体をさらに含んでよい。

本発明の一側面による化粧料組成物の剤形が、溶液または乳濁液である場合には、担体成分として、溶媒、溶媒和剤、または乳濁剤が利用されてよく、たとえば、水、エタノール、イソプロパノール、エチルカーボネート、酢酸エチル、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３‐ブチルグリコールオイル、グリセロール脂肪族エステル、ポリエチレングリコール、またはソルビタンの脂肪酸エステルがある。

本発明の一側面による化粧料組成物の剤形が、懸濁液である場合には、担体成分として、水、エタノール、またはプロピレングリコールといった液状希釈剤、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールエステル、およびポリオキシエチレンソルビタンエステルといった懸濁剤、微小結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、アガー、またはトラガカントなどが利用されてよい。

本発明の一側面による化粧料組成物が、界面活性剤含有クレンジングである場合には、担体成分として、脂肪族アルコールスルフェート、脂肪族アルコールエーテルスルフェート、スルホコハク酸モノエステル、イセチオネート、イミダゾリニウム誘導体、メチルタウレート、サルコシネート、脂肪酸アミドエーテルスルフェート、アルキルアミドベタイン、脂肪族アルコール、脂肪酸グリセリド、脂肪酸ジエタノールアミド、植物性油、ラノリン誘導体、またはエトキシ化グリセロール脂肪酸エステルなどが利用されてよい。

本発明の一側面による化粧料組成物には、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物以外に、機能性添加物および一般的な化粧料組成物に含まれる成分がさらに含まれてよい。前記機能性添加物としては、水溶性ビタミン、油溶性ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖、スフィンゴ脂質、および海草エキスからなる群より選択された成分を含んでよい。

本発明の一側面において、化粧料組成物には、さらに、前記機能性添加物に加えて、必要に応じて、一般的な化粧料組成物に含まれる成分を配合してもよい。この他に含まれる配合成分としては、油脂成分、保湿剤、エモリエント剤、界面活性剤、有機および無機顔料、有機粉体、紫外線吸収剤、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、植物抽出物、ｐＨ調整剤、アルコール、色素、香料、血行促進剤、冷感剤、制汗剤、精製水などが挙げられる。

さらに、本発明は、一側面において、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を有効成分として含む皮膚外用剤に関するものであって、前記皮膚外用剤とは、皮膚外部において塗布され得るあらゆるものの総称であり、多様な剤形の化粧料がこれに含まれ得る。

本発明の一側面による薬学組成物は、経口または非経口の様々な剤形であってよい。製剤化する場合には、通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使用して調剤される。経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、軟質または硬質カプセル剤などが含まれ、これらの固形製剤は、一つ以上の化合物に少なくとも一つ以上の賦形剤、たとえば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）またはラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）、ゼラチンなどを混ぜて調剤される。また、単純な賦形剤以外に、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどといった潤滑剤も使用される。経口投与のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが該当するが、よく使用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外に、様々な賦形剤、たとえば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれてよい。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁溶剤としては、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオイルなどの植物油、オレイン酸エチルなどの注射可能なエステルなどが使用されてよい。坐剤の基剤としては、ウィテプゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、トゥイーン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが使用されてよい。

本発明の一側面において、組成物の薬学的投与形態は、それらの薬学的に許容可能な塩の形態で使用されてもよく、また、単独で、または他の薬学的活性化合物との結合だけでなく適切な集合で使用されてよい。前記塩としては、薬学的に許容されるものであれば特に限定されず、たとえば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、フッ化水素酸、臭化水素酸、ギ酸、酢酸、酒石酸、乳酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸などを使用してよい。

本発明の一側面において、組成物は、目的とするところに応じて、非経口投与または経口投与してよく、一日に体重１ｋｇあたり０．１〜５００ｍｇ、好ましくは１〜１００ｍｇの量で投与されるように、１回ないし数回に分けて投与してよい。特定の患者に対する投与量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食事、投与時間、投与方法、排泄率、疾患の重症度等に応じて変化されてよい。

本発明の一側面による薬学組成物は、それぞれ通常の方法に従って、散剤、顆粒剤、錠剤、軟質または硬質カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアロゾルなどの経口型剤形、軟膏、クリームなどの皮膚外用剤、坐剤、注射剤、および滅菌注射溶液などをはじめ、薬剤学的製剤に適合した任意の形態で剤形化して使用してよく、好ましくは、注射剤または皮膚外用剤の形態で剤形化して使用されてよい。

本発明の一側面による組成物は、ラット、マウス、家畜、人間などの哺乳動物に、非経口、経口などの多様な経路で投与されてよく、投与のあらゆる方式が予想されてよいが、たとえば、経口、経皮（ｔｒａｎｄｅｒｍａｌｌｙ）、直腸または静脈、筋肉、皮下、子宮内硬膜、あるいは脳血管内（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）注射によって投与されてよい。

本発明の一側面による組成物は、通常の技術者が容易に適用することのできる多様な経路で投与されてよい。特に、本発明の一側面による薬学組成物は、皮膚外用剤として皮膚表面に塗布される経路で投与されてよい。

本発明の一側面において、食品組成物は、健康機能食品組成物であってよい。

本発明の一側面による食品組成物の剤形は、特に限定されないが、たとえば、錠剤、顆粒剤、粉末剤、ドリンク剤などの液剤、キャラメル、ゲル、バーなどに剤形化されてよい。各剤形の食品組成物は、有効成分以外に、当該分野において通常的に使用される成分を、剤形または使用目的に応じて、当業者が困難なく適宜選定して配合してよく、他の原料と同時に適用する場合、相乗効果が生じることがある。

本発明の一側面による食品組成物において、前記有効成分の投与量の決定は、当業者の水準内にあり、その１日投与量は、たとえば、０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜５０００ｍｇ／ｋｇ／日、より具体的に、５０ｍｇ／ｋｇ／日〜５００ｍｇ／ｋｇ／日であってよいが、これに限定されるものではなく、投与しようとする対象の年齢、健康状態、合併症などの多様な要因に応じて異なってよい。

本発明の一側面による食品組成物は、たとえば、チューインガム、キャラメル製品、キャンディー類、氷菓類、菓子類などの各種食品類、清涼飲料、ミネラルウォーター、アルコール飲料などの飲料製品、ビタミンやミネラルなどを含む健康機能性食品類であってよい。

前記以外に、本発明の一側面において、食品組成物は、様々な栄養剤、ビタミン、鉱物（電解質）、合成風味剤および天然風味剤などの風味剤、着色剤および増進剤（チーズ、チョコレートなど）、ペクチン酸およびその塩、アルギン酸およびその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤などを含んでよい。その他に、本発明の一側面において、機能性食品組成物は、天然果実ジュース、ならびに果実ジュース飲料および野菜飲料の製造のための果肉を含んでよい。このような成分は、独立的に、または組み合わせて使用してよい。このような添加剤の比率は、さして重要ではないが、本発明の一側面による組成物１００重量部あたり０〜約２０重量部の範囲で含まれるのが一般的である。

以下、実施例および試験例を挙げつつ、本発明の構成および効果についてより具体的に説明する。しかし、これらの実施例および試験例は、本発明に対する理解を助けるために、例示の目的でのみ提供されるものであるに過ぎず、本発明の範疇および範囲が下記例によって制限されるものではない。

［実施例１］インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物の製造
インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）の葉の部分を収穫した後、熱風乾燥し、これを粉砕して粉末化した。このような粉末を、エタノール／水の溶液で抽出した後、真空蒸留（ｖａｃｕｕｍ ｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ）を通じてエタノールを除去した。このような濃縮物に、グリセリンと保存剤を添加し、最終濾過をしてインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を収得した。下記実験においては、前記のような方法で製造されたインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物（ＡＬＰＡＦＬＯＲ（登録商標）ＩＭＰＥＲＡＴＯＲＩＡ ＡＯ）を、ＤＳＭ社（ＤＳＭ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｌｔｄ，４００２ Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から購入して使用した。

［実験例１］遺伝子発現分析
（１）細胞の培養
微生物資源センター（Ｋｏｒｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ，ＫＣＴＣ）に寄託されているメラニン形成細胞（ＫａＭＣ）（ＫＣＴＣ１２０１５ＢＰ）を、６ウェルプレート（ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ）にヒトメラノサイト増殖サプリメント（Ｈｕｍａｎ Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ，ＨＭＧＳ）（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ，ＮＹ，ＵＳＡ）を添加したＭ‐２５４培地（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ，ＮＹ，ＵＳＡ）において、２日間隔で培地を交換し、３７℃、５％ＣＯ_２培養器において、密度がプレート面積の９５％を占めるまで（９５％ ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）細胞を培養した。

（２）抽出物の処理
前記培養されたメラニン形成細胞が６ウェルプレートにおいて８０％程度の密度となった際（約８０％ ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）、ストレス物質であるサブスタンスＰ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ）（Ｂａｃｈｅｍ Ｆｅｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ，Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）２ｎＭと、実施例１によるインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を濃度別（０，０．１，１，２，５ｐｐｍ）に５日間培養した。サブスタンスＰと実施例１によるインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を処理しなかったものを対照群とした。

（３）ＲＮＡの抽出および定量
６ウェルプレートで培養された色素細胞の培地を除去した後、冷却したリン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ，ＰＢＳ）で２回洗浄した後、残っている水分をすべて除去した。細胞にトリゾール試薬（Ｔｒｉｚｏｌ ｒｅａｇｅｎｔ）（Ｉｎｖｉｔｏｇｅｎ，ＣＡ，ＵＳＡ）１ｍｌを入れ、すべての細胞を回収した後、クロロホルム（ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ）２００μｌを入れ、よく混ぜた後、常温で５分間放置した。その後、４℃で１５分間、１２，０００ｒｐｍで遠心分離した後、最も上の透明な上澄み液を新しいチューブに移し、同量のイソプロピルアルコール（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ）（Ｓｉｇｍａ‐Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＵＳＡ）を入れ、よく混ぜた後、常温で１０分間放置した。さらに、４℃で１０分間、１２，０００ｒｐｍで遠心分離した後、上澄み液を除去した。残っている沈殿物に、１００％ＥｔＯＨ（Ｓｉｇｍａ‐Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＵＳＡ）１ｍｌを入れ、軽く洗浄した後、４℃で５分間、１２，０００ｒｐｍで遠心分離した。さらに、７０％ＥｔＯＨ １ｍｌを入れ、洗浄した後、４℃で５分間、１２，０００ｒｐｍで遠心分離し、その後、沈殿物の色が透明になるように乾燥した。乾燥した沈殿物に、３次蒸留水５０μｌを入れてＲＮＡ抽出を完了し、このうち１μｌのＲＮＡをシナジーＩＩ（Ｓｙｎｅｒｇｙ ＩＩ）（Ｂｉｏｔｅｋ，ＵＳＡ）に入れ、定量を実施した。

（４）ｃＤＮＡの合成
ｃＡＮＡの合成のために、定量されたＲＮＡ １μｇを０．２ｍｌチューブに入れ、ＲｅｖｅｒｔＡｉｄ Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＵＳＡ）の実験方法に従って試薬をｃＤＮＡの入ったチューブに入れ、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ‐Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ‐ＰＣＲ）をＣ‐１０００ Ｔｈｅｒｍｏ Ｃｙｃｌｅｒ ＰＣＲ ｍａｃｈｉｎｅ（Ｂｉｏ‐ｒａｄ，ＵＳＡ）を利用してｃＤＮＡを合成した。

（５）遺伝子の発現分析（Ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓｓａｙ ｂｙ Ｒｅａｌｔｉｍｅ‐ＰＣＲ）
合成されたｃＤＮＡを、蒸留水を利用して１／２０に希釈した後、希釈されたｃＤＮＡ ９μｌに１０μｌのＴａｑｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＵＳＡ）とＮＫ１Ｒ（ＡＣＥＳＳＩＯＮ：ＮＭ＿００１０５８）およびＥＤＮ１遺伝子（ＡＣＥＳＳＩＯＮ：ＮＭ＿００１１６８３１９）のＡｓｓａｙｓ‐ｏｎ‐ｄｅｍａｎｄ^ＴＭ（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＵＳＡ）１μｌを入れ、７５００ Ｆａｓｔ Ｒｅａｌｔｉｍｅ‐ＰＣＲ（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＵＳＡ）を利用して、遺伝子の発現を対照群遺伝子であるグリセルアルデヒド３‐リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ ３‐ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＧＡＰＤＨ）（ＡＣＥＳＳＩＯＮ：ＮＭ００１２５６７９９）と対比した相対定量法で分析した。すなわち、ＧＡＰＤＨの遺伝子発現量を基準としてＮＫ１ＲおよびＥＤＮ１遺伝子の発現量を比較して分析した。このような分析結果を、図１にグラフで各遺伝子について示した。

図１によると、対照群の発現を１としたとき、対照群と比べてサブスタンスＰを２ｎＭ処理した場合、それぞれ４．２および３．６と、ＮＫ１ＲおよびＥＤＮ１遺伝子の発現が増加した。サブスタンスＰを２ｎＭ処理し、本発明の一側面によるインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を５ｐｐｍ添加した場合には、ＮＫ１ＲおよびＥＤＮ１遺伝子がそれぞれ２．５および１．６に減少したことを確認することができた。このような結果から、本発明の一側面によるインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物は、サブスタンスＰにより誘発される生物学的現象を減少させる効果があることを確認することができ、特に、ＥＤＮ１遺伝子の発現を抑制するのに顕著な効果があることを確認することができた。これは、ストレスによって低下した皮膚恒常性を本来の状態に維持させる効果および抗ストレス効果があるということを示すものである。特に、ＮＫ１Ｒ遺伝子の場合、サブスタンスＰの受容体タンパク質を発現させる遺伝子に関するものであって、このような遺伝子の発現を減少させると、体内におけるサブスタンスＰの受容が低下し、また、サブスタンスＰといったストレス性物質によって誘発され得るものによる皮膚恒常性の低下を防止することができるであろう。

［実験例２］エンドセリン１（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ １）の測定実験
（１）細胞の回収およびタンパク質量の測定
６ウェルプレートで培養されたメラニン形成細胞（ＫａＭＣ）にアクターゼ溶液（Ａｃｃｕｔａｓｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）４００μｌを入れ、１分間攪拌（ａｇｉｔａｔｉｏｎ）した後、Ｍ‐２５４培地６００μｌを追加して、合計１ｍｌの細胞含有培地を回収した。その後、１２，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した後、上澄み液を捨て、ペレット（ｐｅｌｌｅｔ）にＭＣＬライシスバッファー（ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）（Ｓｉｇｍａ‐Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＵＳＡ）２０μｌを入れ、よく混ぜた後、さらに１２，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した後、上澄み液と細胞沈殿物を別個に分離した。

分離された上澄み液１μｌを９６ウェルプレートに入れ、蒸留水を入れて最終容量を２５μｌとした。その後、ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＩＬ，ＵＳＡ）を利用して、５６２ｎｍにおけるタンパク質量を定量した。このようなタンパク質定量結果を、表１に示した。

（２）エンドセリン１のＥＬＩＳＡ検定
実験例１の（２）に従って抽出物を処理した細胞株の培地を回収した。その後、培地に含まれているエンドセリン１（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ １、ＥＤＮ１）の量を、ヒト総エンドセリンＥＬＩＳＡキット（Ｈｕｍａｎ Ｔｏｔａｌ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ Ｅｌｉｓａ Ｋｉｔ）（ＭｙＢｉｏｓｏｕｒｃｅ，ＵＳＡ）を利用して４５０ｎｍで測定し、下記式［数１］で表わされた式を利用して総タンパク質に含有されるタンパク質量に補正して、結果を比率で示し、これを図２に示した。

図２によると、対照群のエンドセリン１の量を１００％としたとき、サブスタンスＰを２ｎＭ添加した場合に、１２４％までエンドセリン１の量が増加した。サブスタンスＰを２ｎＭ添加しつつ、本発明の一側面によるインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を５ｐｐｍ添加した場合、エンドセリン１の量が１００％まで減少したことを確認することができ、このような数字は、対照群とほぼ類似した水準にまで減少したことを示す。したがって、このような結果によると、本発明の一側面によるインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物は、エンドセリン１の量を減少させるにあたって顕著な効果があることを確認することができる。このようなエンドセリン１の量の減少は、サブスタンスＰによって誘発されたものを減少させる効果であって、ストレス物質による生理的効果を抑制するため、それによって著しい皮膚恒常性維持および抗ストレス効果を示すものである。

本発明の一側面による組成物の剤形例を以下において説明するが、他の様々な剤形にも応用可能であり、これらは、本発明を限定しようとするものではなく、単に具体的に説明しようとするものである。

［剤形例１］軟質カプセル
実施例１のインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物８ｍｇ、ビタミンＥ９ｍｇ、ビタミンＣ９ｍｇ、パーム油２ｍｇ、植物性硬化油８ｍｇ、黄蝋４ｍｇ、およびレシチン９ｍｇを通常の方法に従って混合し、軟質カプセル充填液を製造する。１カプセルあたり４００ｍｇずつ充填して、軟質カプセルを製造する。そして、これとは別に、ゼラチン６６重量部、グリセリン２４重量部、およびソルビトール液１０重量部の比率で軟質カプセルシートを製造して、前記充填液を充填させて、本発明の一側面による組成物４００ｍｇが含有された軟質カプセルを製造する。

［剤形例２］錠剤
実施例１のインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物８ｍｇ、ビタミンＥ９ｍｇ、ビタミンＣ９ｍｇ、ガラクトオリゴ糖２００ｍｇ、乳糖６０ｍｇ、および麦芽糖１４０ｍｇを混合し、流動層乾燥機を利用して顆粒化した後、糖エステル（ｓｕｇａｒ ｅｓｔｅｒ）６ｍｇを添加する。これらの組成物５００ｍｇを通常の方法で打錠して、錠剤を製造する。

［剤形例３］ドリンク剤
実施例１のインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物８ｍｇ、ビタミンＥ９ｍｇ、ビタミンＣ９ｍｇ、ブドウ糖１０ｇ、クエン酸０．６ｇ、および液状オリゴ糖２５ｇを混合した後、精製水３００ｍｌを加えて、各瓶に２００ｍｌずつになるように充填する。瓶に充填した後、１３０℃で４〜５秒間殺菌して、ドリンク剤を製造する。

［剤形例４］顆粒剤
実施例１のインペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物８ｍｇ、ビタミンＥ９ｍｇ、ビタミンＣ９ｍｇ、無水結晶ブドウ糖２５０ｍｇ、および澱粉５５０ｍｇを混合し、流動層造粒機を使用して顆粒に成形した後、包に充填して顆粒剤を製造する。

［剤形例５］注射剤
下記表２に記載された組成に従い、通常の方法で注射剤を製造した。

［剤形例６］健康機能食品
下記表３に記載された組成に従い、通常の方法で健康機能食品を製造した。

前記ビタミンおよびミネラルの混合物の組成比は、健康機能食品に比較的適合した成分を、好適な実施例として混合組成したものであるが、その配合比を任意に変形実施しても差し支えない。

［剤形例７］健康飲料
下記表４に記載された組成に従い、通常の方法で健康飲料を製造した。

通常の健康飲料の製造方法に従って前記成分を混合した後、約１時間、８５℃で攪拌加熱した後、製造された溶液を濾過して滅菌する。

［剤形例８］柔軟化粧水（スキンローション）
下記表５に記載された組成に従い、通常の方法で柔軟化粧水を製造した。

［剤形例９］栄養化粧水（ミルクローション）
下記表６に記載された組成に従い、通常の方法で栄養化粧水を製造した。

［剤形例１０］栄養クリーム
下記表７に記載された組成に従い、通常の方法で栄養クリームを製造した。

［剤形例１１］マッサージクリーム
下記表８に記載された組成に従い、通常の方法でマッサージクリームを製造した。

［剤形例１２］パック
下記表９に記載された組成に従い、通常の方法でパックを製造した。

以上、本発明の特定の部分を詳細に記述したところ、当業界の通常の知識を有する者にとって、このような具体的な技術は単に好ましい具現例であるに過ぎず、これらによって本発明の範囲が制限されるものでないことは明白である。したがって、本発明の実質的な範囲は、添付された請求項とその等価物によって定義されると言えよう。

Claims (13)

1. インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を有効成分として含む、皮膚恒常性維持用組成物。
2. インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を有効成分として含む、抗ストレス用組成物。
3. インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を有効成分として含む、神経ペプチドサブスタンスＰ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ）活性阻害用組成物。
4. インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を有効成分として含む、ＮＫ１Ｒ遺伝子またはＥＤＮ１遺伝子発現阻害用組成物。
5. インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を有効成分として含む、皮膚免疫機能、皮膚水分保持機能、または皮膚バリア機能強化用組成物。
6. インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物を有効成分として含む、皮膚外用剤組成物。
7. インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）は、インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）草本の葉、実、花、茎、および根からなる群より選択された一つ以上である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
8. インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物は、組成物の総体積を基準として１ｐｐｍ〜５０ｐｐｍの濃度である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
9. インペラトリア（Ｍａｓｔｅｒｗｏｒｔ）（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ Ｏｓｔｒｕｔｈｉｕｍ）抽出物は、水、有機溶媒、およびこれらの組合せからなる群より選択された一つ以上の抽出物である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
10. 有機溶媒は、Ｃ_１〜Ｃ_６の低級アルコール、ブチレングリコール、およびプロピレングリコールからなる群より選択された一つ以上である、請求項９に記載の組成物。
11. 低級アルコールは、エタノールである、請求項１０に記載の組成物。
12. 組成物は、薬学、食品または化粧料組成物である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
13. 前記組成物は、薬学または化粧料組成物である、請求項６に記載の組成物。

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