JP2017512492A - 肺バイオリアクタ - Google Patents
肺バイオリアクタ Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017512492A JP2017512492A JP2016575640A JP2016575640A JP2017512492A JP 2017512492 A JP2017512492 A JP 2017512492A JP 2016575640 A JP2016575640 A JP 2016575640A JP 2016575640 A JP2016575640 A JP 2016575640A JP 2017512492 A JP2017512492 A JP 2017512492A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- pressure
- lung
- line
- tracheal
- chamber
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 title claims description 407
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims abstract description 156
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 87
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 claims description 96
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 94
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 49
- 230000003434 inspiratory effect Effects 0.000 claims description 24
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 claims description 19
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims description 17
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 10
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000032633 organ maturation Effects 0.000 claims description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 139
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 114
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 104
- 210000001147 pulmonary artery Anatomy 0.000 description 73
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 43
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 27
- 230000004872 arterial blood pressure Effects 0.000 description 24
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 24
- 239000003570 air Substances 0.000 description 23
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 21
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 21
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 19
- 244000144985 peep Species 0.000 description 19
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 19
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 18
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 18
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 17
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 16
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 16
- 210000002073 venous valve Anatomy 0.000 description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 15
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 description 15
- 230000036387 respiratory rate Effects 0.000 description 15
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 14
- 230000006870 function Effects 0.000 description 14
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 14
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 13
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 12
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 12
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 12
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 12
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 12
- 230000036593 pulmonary vascular resistance Effects 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 230000008859 change Effects 0.000 description 11
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 11
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 11
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 10
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 10
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 9
- 210000003492 pulmonary vein Anatomy 0.000 description 9
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 9
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 9
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 8
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 8
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 8
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 8
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 7
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 7
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 7
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 102000008790 VE-cadherin Human genes 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 7
- 108010018828 cadherin 5 Proteins 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 7
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 7
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000004199 lung function Effects 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 7
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 6
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 6
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 6
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 5
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 5
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 5
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 5
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 5
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 5
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 5
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 5
- 210000001900 endoderm Anatomy 0.000 description 5
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 5
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 5
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 5
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 210000004879 pulmonary tissue Anatomy 0.000 description 5
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 5
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 5
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000007204 Brain death Diseases 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 238000012288 TUNEL assay Methods 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 4
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 4
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 4
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 4
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 4
- 230000002706 hydrostatic effect Effects 0.000 description 4
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 4
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 4
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 3
- JVTAAEKCZFNVCJ-UWTATZPHSA-N D-lactic acid Chemical compound C[C@@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 3
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 3
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 3
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 3
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- 206010037423 Pulmonary oedema Diseases 0.000 description 3
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 3
- 230000002497 edematous effect Effects 0.000 description 3
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 3
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 3
- 238000011990 functional testing Methods 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 3
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 3
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 3
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 3
- 239000012092 media component Substances 0.000 description 3
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 239000012120 mounting media Substances 0.000 description 3
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000012349 terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick-end labeling Methods 0.000 description 3
- 238000013042 tunel staining Methods 0.000 description 3
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 208000022211 Arteriovenous Malformations Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100024505 Bone morphogenetic protein 4 Human genes 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 2
- 208000018200 Congenital lobar emphysema Diseases 0.000 description 2
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 2
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 2
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 2
- 108010090254 Growth Differentiation Factor 5 Proteins 0.000 description 2
- 102100035379 Growth/differentiation factor 5 Human genes 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical group OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710114425 Homeobox protein Nkx-2.1 Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000762379 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 4 Proteins 0.000 description 2
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 2
- 102000014429 Insulin-like growth factor Human genes 0.000 description 2
- 108700021430 Kruppel-Like Factor 4 Proteins 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 239000012828 PI3K inhibitor Substances 0.000 description 2
- 101710126211 POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 2
- 101100247004 Rattus norvegicus Qsox1 gene Proteins 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 101710088547 Thyroid transcription factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100031079 Transcription termination factor 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710159262 Transcription termination factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 206010060872 Transplant failure Diseases 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 210000001552 airway epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002821 alveolar epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 230000001857 anti-mycotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002543 antimycotic Substances 0.000 description 2
- 230000005744 arteriovenous malformation Effects 0.000 description 2
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 2
- 210000000233 bronchiolar non-ciliated Anatomy 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 2
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 2
- 230000008497 endothelial barrier function Effects 0.000 description 2
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 2
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 2
- 238000004868 gas analysis Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 2
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 210000004964 innate lymphoid cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000005246 left atrium Anatomy 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 2
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 229940043441 phosphoinositide 3-kinase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 229920001992 poloxamer 407 Polymers 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 2
- 208000005333 pulmonary edema Diseases 0.000 description 2
- 208000002815 pulmonary hypertension Diseases 0.000 description 2
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 2
- 210000000779 thoracic wall Anatomy 0.000 description 2
- 210000001578 tight junction Anatomy 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- 241000321096 Adenoides Species 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 1
- 208000004375 Angiodysplasia Diseases 0.000 description 1
- 206010003598 Atelectasis Diseases 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102100028728 Bone morphogenetic protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000654 Bone morphogenetic protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000000630 Bronchogenic cyst Diseases 0.000 description 1
- 102100039398 C-X-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- AQGNHMOJWBZFQQ-UHFFFAOYSA-N CT 99021 Chemical compound CC1=CNC(C=2C(=NC(NCCNC=3N=CC(=CC=3)C#N)=NC=2)C=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)=N1 AQGNHMOJWBZFQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001631457 Cannula Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- 101710087047 Cytoskeleton-associated protein 4 Proteins 0.000 description 1
- JMIFGARJSWXZSH-UHFFFAOYSA-N DMH1 Chemical compound C1=CC(OC(C)C)=CC=C1C1=CN2N=CC(C=3C4=CC=CC=C4N=CC=3)=C2N=C1 JMIFGARJSWXZSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030012 Deoxyribonuclease-1 Human genes 0.000 description 1
- 101710206036 Deoxyribonuclease-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102100028412 Fibroblast growth factor 10 Human genes 0.000 description 1
- 108090001047 Fibroblast growth factor 10 Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102000019058 Glycogen Synthase Kinase 3 beta Human genes 0.000 description 1
- 108010051975 Glycogen Synthase Kinase 3 beta Proteins 0.000 description 1
- 208000010496 Heart Arrest Diseases 0.000 description 1
- 101000612671 Homo sapiens Pulmonary surfactant-associated protein C Proteins 0.000 description 1
- 101000777301 Homo sapiens Uteroglobin Proteins 0.000 description 1
- 206010058558 Hypoperfusion Diseases 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 208000004852 Lung Injury Diseases 0.000 description 1
- 206010068749 Lung cyst Diseases 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 101150014058 MMP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 description 1
- 101000716993 Mus musculus Suppressor APC domain-containing protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 206010053159 Organ failure Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 229920001363 Polidocanol Polymers 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102000003923 Protein Kinase C Human genes 0.000 description 1
- 108090000315 Protein Kinase C Proteins 0.000 description 1
- 208000007123 Pulmonary Atelectasis Diseases 0.000 description 1
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 1
- 206010073661 Pulmonary lymphangiectasia Diseases 0.000 description 1
- 102100040971 Pulmonary surfactant-associated protein C Human genes 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 102000002938 Thrombospondin Human genes 0.000 description 1
- 108060008245 Thrombospondin Proteins 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000000591 Tight Junction Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010002321 Tight Junction Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 206010069363 Traumatic lung injury Diseases 0.000 description 1
- 102100027881 Tumor protein 63 Human genes 0.000 description 1
- 101710140697 Tumor protein 63 Proteins 0.000 description 1
- 102100031083 Uteroglobin Human genes 0.000 description 1
- 102000013127 Vimentin Human genes 0.000 description 1
- 108010065472 Vimentin Proteins 0.000 description 1
- HGVNLRPZOWWDKD-UHFFFAOYSA-N ZSTK-474 Chemical compound FC(F)C1=NC2=CC=CC=C2N1C(N=1)=NC(N2CCOCC2)=NC=1N1CCOCC1 HGVNLRPZOWWDKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 108010023082 activin A Proteins 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 210000002534 adenoid Anatomy 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 210000005058 airway cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000012080 ambient air Substances 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000006481 angiogenic pathway Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000181 anti-adherent effect Effects 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 238000011861 anti-inflammatory therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000000712 assembly Effects 0.000 description 1
- 238000000429 assembly Methods 0.000 description 1
- 230000001746 atrial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010256 biochemical assay Methods 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 101150067309 bmp4 gene Proteins 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 229940112869 bone morphogenetic protein Drugs 0.000 description 1
- 210000003123 bronchiole Anatomy 0.000 description 1
- 238000013276 bronchoscopy Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N calcein am Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(C)=O)=C(OC(C)=O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(=O)C)C(OC(C)=O)=C1 BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- -1 cells Substances 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 108700004333 collagenase 1 Proteins 0.000 description 1
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 238000011038 discontinuous diafiltration by volume reduction Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 108010007093 dispase Proteins 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000005014 ectopic expression Effects 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009764 endothelial cell sprouting Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000003374 extravascular lung water Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000604 fetal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 102000013370 fibrillin Human genes 0.000 description 1
- 108060002895 fibrillin Proteins 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000010247 heart contraction Effects 0.000 description 1
- 210000003566 hemangioblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 101150111214 lin-28 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000005823 lung abnormality Effects 0.000 description 1
- 231100000515 lung injury Toxicity 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- QTHCAAFKVUWAFI-DJKKODMXSA-N n-[(e)-(6-bromoimidazo[1,2-a]pyridin-3-yl)methylideneamino]-n,2-dimethyl-5-nitrobenzenesulfonamide Chemical compound C=1N=C2C=CC(Br)=CN2C=1/C=N/N(C)S(=O)(=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=CC=C1C QTHCAAFKVUWAFI-DJKKODMXSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000009894 physiological stress Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 210000004224 pleura Anatomy 0.000 description 1
- ONJQDTZCDSESIW-UHFFFAOYSA-N polidocanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO ONJQDTZCDSESIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002226 polidocanol Drugs 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000001023 pro-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000009613 pulmonary function test Methods 0.000 description 1
- 238000007388 punch biopsy Methods 0.000 description 1
- 238000002601 radiography Methods 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 238000011536 re-plating Methods 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 210000001533 respiratory mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 102000000568 rho-Associated Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010041788 rho-Associated Kinases Proteins 0.000 description 1
- 206010051951 scimitar syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000012285 ultrasound imaging Methods 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 210000005048 vimentin Anatomy 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M21/00—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses
- C12M21/08—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses for producing artificial tissue or for ex-vivo cultivation of tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0236—Mechanical aspects
- A01N1/0242—Apparatuses, i.e. devices used in the process of preservation of living parts, such as pumps, refrigeration devices or any other devices featuring moving parts and/or temperature controlling components
- A01N1/0247—Apparatuses, i.e. devices used in the process of preservation of living parts, such as pumps, refrigeration devices or any other devices featuring moving parts and/or temperature controlling components for perfusion, i.e. for circulating fluid through organs, blood vessels or other living parts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/36—Skin; Hair; Nails; Sebaceous glands; Cerumen; Epidermis; Epithelial cells; Keratinocytes; Langerhans cells; Ectodermal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/42—Respiratory system, e.g. lungs, bronchi or lung cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/44—Vessels; Vascular smooth muscle cells; Endothelial cells; Endothelial progenitor cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
- C12M25/14—Scaffolds; Matrices
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M29/00—Means for introduction, extraction or recirculation of materials, e.g. pumps
- C12M29/10—Perfusion
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/40—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of pressure
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/44—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of volume or liquid level
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/48—Automatic or computerized control
Abstract
Description
本発明の方法のいくつかの実施形態では、肺組織は脱細胞化マトリックスの上に産生される。脱細胞化肺組織マトリックスを調製する方法および材料は、以下に考察されるように、当該分野において知られている。任意の適切な材料を使用して、かかるマトリックスを調製することができる。好ましい実施形態では、組織マトリックスは、脱細胞化肺組織から生じた無細胞組織骨格であることができる。例えば、ヒト肺などの組織、例えば1つもしくは一対のヒト肺またはその一部、例えばヒト、ブタ、ウシ、霊長目、またはヒツジの死体肺またはその一部は、形態学的完全性および組織もしくは組織部分の血管系を維持するとともに、細胞外マトリックス(ECM)タンパク質を保存しながら天然細胞を組織から除去する、適切な方法によって脱細胞化することができる。哺乳類肺組織を脱細胞化する方法は、例えば、O'Neill JD et al., Decellularization of human and porcine lung tissues for pulmonary tissue engineering, Ann Thorac Surg. 2013 Sep;96(3):1046-55; Nichols JE et al., Production and assessment of dcellularized pig and human lung scaffolds, Tissue Eng Part A. 2013 Sep;19 (17-18):2045-62; Gilpin SE et al., Perfusion Decellularizatoin of human and porcine lungs: Bringing the matrix to clinical scale. Journal of Heart and Lung Transplantation. In press; Song JJ et al., Bioartificial lung engineering. Am J Transplant. 2012 Feb;12(2):283-8、ならびにOtt HC et al., Regeneration and orthotopic transplantation of a bioartificial lung, Nat Med. 2010 Aug;16(8):927-33に記載されている。例示の脱細胞化方法は、組織(例えば、肺組織)を、例えば液体窒素を使用して、繰返し凍結融解サイクルに晒すことを含むことができる。他の例では、組織は、ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)、ポリエチレングリコール(PEG)、またはトリトンXなど、アニオン性またはイオン性細胞破壊媒体に晒すことができる。組織はまた、ヌクレアーゼ溶液(例えば、リボヌクレアーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ)で処理し、滅菌リン酸で緩衝した食塩水中で軽く撹拌して洗うことができる。例示の方法は、当該分野において知られている。例えば、 O'Neill JD et al., Decellularization of human and porcin lung tissues for pulmonary tissue engineering. Ann Thorac Surg. 2013 Sep; 96(3):1046-55を参照のこと。いくつかの例では、脱細胞化は、当該分野で知られている方法および材料を使用して、器官または組織の脈管、管、および/または腔を洗い流すことによって行うことができる。例えば、Maghsoudlou P et al. Preservation of micro-architecture and angiogenic potential in a pulmonary acellular matrix obtained using intermittent intra-tracheal flow of detergent enzymatic treatment. Biomaterials. 2013 Sep; 34(28):6638-48に記載されているようなものである。洗い流すステップに続いて、器官または組織を、上述したような、例えば脱イオン化水中にSDS1%の細胞破壊媒体を用いて、ラインを介して灌流することができる。組織を通る灌流は順行性または逆行性であることができ、灌流効率を改善するために方向を変更することができる。器官または組織のサイズおよび重量、ならびに特定のアニオン性またはイオン性界面活性物質、および細胞破壊媒体中のアニオン性またはイオン性界面活性物質の濃度に応じて、組織は一般に、組織1グラム当たり約2〜約12時間、細胞破壊媒体で灌流される。洗浄を含めて、器官は、組織1グラム当たり最大約12〜約72時間灌流されてもよい。灌流は、一般に、流量および圧力、例えば5〜100mmHgの圧力、および元の生物もしくは個人の生理学的心拍出量の0.1〜10倍の流量を含む、生理学的条件に合わせて調節される。
1.リン酸緩衝生理食塩水(PBS)で10分間の初期順行性洗浄を行う。
2.不透明な半透明マトリックスの可視化(脱細胞化を含む)に要する時間に加えて初期時間に20%を追加した時間(例えば、70分+14分)、界面活性物質の灌流を行う。
3.15分の脱イオン化H2O洗浄を行う。
4.追加の抗生物質および抗真菌剤を用いて、さらに172時間のPBS洗浄を行う。この脱細胞化方法は、例えば、脱イオン化したH2Oに続いて、1%のTriton−Xを用いてさらに洗浄することを含むことができる。SDCプロトコルは、SDCの前に0.1%のTriton−Xで灌流すること、またSDCの後に1mol/リットルのNaClで洗浄することを含むことができる。
本発明の方法のいくつかの実施形態では、肺組織は人工器官マトリックスの上に産生される。人工器官マトリックスを調製する方法および材料は、当該分野において知られている。任意の適切な材料を使用して、かかるマトリックスを調製することができる。好ましい実施形態では、人工器官マトリックスは、例えば、ポリグリコール酸、Pluronic F−127(PF−127)、Gelfoamスポンジ、コラーゲン−グリコサミノグリカン(GAG)、フィブリノゲンーフィブロネクチン−ビトロネクチンヒドロゲル(FFVH)、およびエラスチンなどの多孔質材料から生じた骨格であることができる。例えば、Ingenito et al. J Tissue Eng Regen Med. 2009 Dec 17; Hoganson et al., Pediatric Research, May 2008, 63(5):520-526; Chen et al., Tissue Eng. 2005 Sep-Oct;11(9-10):1436-48を参照のこと。いくつかの例では、人工器官マトリックスは、肺胞単位に類似した多孔質構造を有することができる。Andrade et al., Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2007 Feb;292(2):L510-8を参照のこと。いくつかの例では、移植人工器官マトリックスは、器官特異的なマーカー(例えば、クラーラ細胞、肺細胞、および呼吸上皮に対する肺特異的なマーカー)を発現することができる。いくつかの場合では、移植人工器官マトリックスは、特定可能な構造(例えば、人工肺マトリックス内の肺胞および終末細気管支に類似した構造)を組織することができる。例えば、FFVHを使用して作られた移植人工肺マトリックスは、周囲組織に対する栄養作用を示して、細胞付着、伝播、ならびに細胞外マトリックスの生体外での発現および生体内での見かけ上の生着を促進することができる。上述のIngenito et al.を参照のこと。また、米国特許第7,662,409号明細書および第6,087,552号明細書、米国特許出願公開第2010/0034791号明細書、第2009/0075282号明細書、第2009/0035855号明細書、第2008/0292677号明細書、第2008/0131473号明細書、第2007/0059293号明細書、第2005/0196423号明細書、第2003/0166274号明細書、第2003/0129751号明細書、第2002/0182261号明細書、第2002/0182241号明細書、および第2002/0172705号明細書を参照のこと。
本明細書に記載する方法およびデバイスはまた、移植に使用するために死体肺を維持し調製するのに有用である。
本明細書に記載する方法のいくつかでは、肺組織マトリックス、例えば脱細胞化肺組織マトリックスまたは人工肺マトリックスに、細胞が、例えば分化細胞または再生細胞が播種される。
本書はまた、バイオ人工肺組織を使用する、またいくつかの場合では肺機能を促進する、方法および材料を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供する方法を使用して、肺容量の障害または低下を伴う疾患を有する患者において一部の肺機能を回復することができる(例えば、嚢胞性線維症、COPD、気腫、肺がん、浮腫、肺高血圧症、肺外傷、または他の遺伝性もしくは先天性の肺異常、例えば、気管支嚢胞、肺の発育不全および形成不全、多肺胞葉、肺胞毛細血管異形成、動静脈奇形(AVM)およびシミター症候群を含む隔離、肺リンパ管拡張症、先天性大葉性肺気腫(CLE)、ならびに先天性腺種様奇形(CAM)、および他の肺嚢胞)。本明細書に提供する方法は、また、例えば、肺機能の向上、または肺容量の増加もしくは改善など、特定の規定された治療が必要な場合などに対象が特定されるものを含む。
例示の気道器官バイオリアクタが図1に示される。本明細書全体を通して、肺は気道器官の一例として提示される。他の例は、階層的な血管系構造、例えば葉または節を含む、肺の一部分を含むことができる。生体ドナーまたは死体からの摘出肺に対応する例示のバイオリアクタが、図8および9に示される。本明細書に記載するバイオリアクタのいずれも、仰臥位の肺の培養を可能にするように構成することができる。
Jv=LS[Ρmv−Ρpmv)−σ(Πmv−Πis)]
式中、LS≒0.2mL/分/100g/mmHg(Κfまたは流体濾過係数、流体に対する透過率の測定値、および血管表面積)、Ρmv≒5〜10mmHg(微小血管(≒毛細管)静水圧)、Ρpmv≒−5〜−7mmHg(微小血管周囲または間質静水圧)、σ≒0.5〜0.8(浸透反射係数、正味駆動圧に対する血管系全体の膨張圧較差の相対的寄与を決定、特定の溶質(例えば、アルブミン)に対する特定の膜(例えば、内皮)の透過率の測定値は、膜が全体的に透過性である場合の0から完全に不透過性である場合の1まで変動)、Πmv≒24mmHg(肺の微小血管系内における血液の膨張圧)、およびΠpmv≒14mmHg(微小血管周囲間質における膨張圧)、結果として得られる外向きの圧力≒1.5〜2mmHg、間質空間内への正味の流体フロー約10〜20cc/分である。気管/気道(pt)および胸膜間空間(pp)からの正味圧力は−5mmHgであり、リンパドレナージを容易にする間質およびリンパの陰圧がもたらされる。
背景
肺グラフトは、例えば、Ott HC et al., Regeneration and orthotopic transplantation of a bioartificial lung. Nat Med. 2010 Aug;16(8):927-33、およびSong JJ et al., Enhanced in vivo function of bioartificial lungs in rats. Ann Thorac Surg. 2011 Sep;92(3):998-1005で考察されているように、胎児上皮細胞を使用して産生されてきた。この技術を臨床用途に転用するためには、患者由来の細胞を使用するべきである。これらの細胞は、表現型によってそのように前分化されたIPS細胞由来であることができる。
ラット肺を、成体ルイスラットから心臓および気管と一括して摘出した。ドナー器官を、肺動脈を介した0.1%ドデシル硫酸ナトリウム(「SDS」)灌流およびそれに続く生理食塩水洗浄によって、脱細胞化した。結果として得られた肺骨格を、図2の上述したようなバイオリアクタに入れて、陰圧湿潤換気を可能にした。3000万個のヒト臍帯内皮細胞と、1億個の前分化ヒトiPS細胞(皮膚繊維芽細胞の再プログラムによって派生したBJRiPS細胞)とを、胚体内胚葉段階において、肺動脈および気管それぞれを介して同時に送達した。次に、肺グラフトをバイオリアクタに入れ、静的器官培養下で2時間維持して、細胞生着を可能にした。次に、毎分3mLの速度で媒体灌流を開始した。湿潤換気を、グラフトチャンバ内における−20〜+10cmH2Oの圧力範囲、および8cmH2Oの持続湿潤気道陽圧で開始した。これらの条件下での培養を合計10日間維持した。実験を終了する前に、最高吸気圧35cmH2O、吸気陽圧5cmH2O、ならびに100%および21%のFiO2で、陽圧換気を使用して肺を換気した。血液ガスサンプルは静脈ラインから抜き出した。次に、肺グラフトをバイオリアクタから摘出した。右肺は、組織学的な生化学および遺伝的組織分析に使用した。左肺は、肺グラフトとして使用し、ラットモデルに同所移植した。
内皮および前分化IPS細胞の細胞生着を観察した。細胞生存度を、TUNEL染色によって確認し、培養の終了時で75%超過であることが見出された。ガス交換を、血液ガス分析による実験の終了時に確認した。左肺の成功した外科的移植は、すべての再生グラフトにおいて達成された。
背景
ドナー肺は、現在、低温虚血状態で輸送されている。通常の温熱灌流および換気の間、体外で肺を保存するための努力がなされてきた。現在最新の機器では、6〜48時間を超えて良好な生存度でドナー器官を維持することができない。組織浮腫および機械的損傷が、この期間の間の組織の損傷およびグラフトの故障に結び付く。すべての現在利用可能なシステムは、陽圧乾燥換気を使用しており、これは保護胸壁がない場合に肺グラフトの機械的損傷に結び付く。陰圧湿潤および乾燥換気バイオリアクタを設計し、長期(>7日間)にわたって肺組織を生存可能に維持する能力を調査した。
肺を、イソフルランを用いて麻酔し、3000単位のヘパリンを全身注射し、その後に、4℃まで冷却した10mlのPBSを用いて肺動脈を洗浄した後に、月齢3か月のSD400ラットから心臓および気管と一括して摘出した。気道、肺動脈(PA)および左房(LA)を滅菌方式で洗浄した。肺を、500mlの器官チャンバ(主要チャンバ)に入れ、37℃のインキュベータ内で培養した。この実験には、図4に示されるようなバイオリアクタを使用した。
安定分離肺培養は、次のような設定で維持された。5%CO2および平衡化空気を用いた15cmH2O PEEP、灌流速度1〜3ml/分、+10mmHg〜−20mmHgの主要チャンバ圧力での陰圧換気、標的陰圧がどの程度早く達成されるかに応じて、呼吸数2〜4。測定された灌流ライン圧力は、8.4〜30mmHgであった。
4歳の小児ドナーからの左肺を除去し、右肺を成功裏にカニューレ挿入し、完全に脱細胞化した。脱細胞化に続いて、上下の右葉を分離し、再細胞化および培養に利用した。
合計500×106個の肺胞上皮細胞(PAEpiC、ScienCell)を、低速シリンジによって気道に送達し、次いで、37度で2時間の静的培養を行った。容量1.5Lの肺胞細胞成長媒体を用いた灌流を、60ml/分の速度で開始して、8〜10mmHg以内の圧力を生成した。灌流および培養は4日間維持し、その後に組織を分析用に摘出した。培養中の汚染は観察されなかった。
肺組織全体にわたるいくつかの範囲の組織学的分析により、異質的な細胞保持が実証されたが、ロバストな再細胞化のいくつかの範囲を含んでいた。細胞分布のまだらな性質は、細胞送達におけるばらつきによる可能性が高い。肺の再細胞化範囲によって、高レベルの細胞付着、および肺骨格の天然構造に沿った伸展が示された。TUNELアッセイによって細胞生存度をさらに分析して、4日間の培養にわたって生じるアポトーシスは非常に低レベルであることが示された。
この実施例は、一組のブタ死体をバイオリアクタに接続し、バイオリアクタの機能を試験した、実証実験について記載する。
一組の死体ブタ肺を試験のために得た。肺動脈および気道にカニューレを挿入し、器官を器官チャンバの内部に置き、カニューレをそれらに対応する入力(それぞれ、灌流ラインおよび換気ライン)に接続した。器官の換気を試みる前に、ヘパリンを含むリン酸緩衝生理食塩水を用いた灌流を開始した。灌流の一定フローおよび一定圧力両方のモードを実現した。
灌流が成功すると、器官チャンバの加圧モードを試験した。両方の加圧モードが器官の換気に成功した。しかしながら、圧力目標による加圧(+20mmHg〜−150mmHg)により、器官容積の目に見える変化がより大きくなった。換気を18時間の期間(終夜)にわたって実施して、バイオリアクタ機能の一貫性を確認した。死体肺に対する第1の試験に使用したバイオリアクタパラメータを、表3に概説する。
この実施例は、隔離されたブタ肺をバイオリアクタに接続して、短期間分離肺培養を介してバイオリアクタの機能を実証した、実証実験について記載する。器官チャンバ圧力(図10A、POC)、PA圧力(PPA)、PV圧力(PPV)、PEEPチャンバ圧力(PPEEP)、および気管圧(PT)を、培養全体を通して監視する。灌流パラメータ、換気パラメータ、およびバイオリアクタイベントのログ収集の制御は、National Instrumentsの小型データ収集(cDAQ)システムを、専用に開発したLabVIEWプログラム(National Instruments、マサチューセッツ州ウーバン)と組み合わせることによって達成される。
ドナー肺を、滅菌技術を使用して取り出し、層流フードに入れた。専用のコネクタ(例えば、様々なホース返し取付け具、Cole−Parmer、イリノイ州ヴァーノンヒルズ)を使用して、気管(T)、肺動脈(PA)、および左房カフ(PV)にカニューレを挿入した。次に、肺を、培養のために器官チャンバ(Instron TERM、マサチューセッツ州ノーウッド)に入れ、PA、PV、および気管カニューレをそれらそれぞれの接続部に取り付けた。臨床スケールのバイオリアクタ(図10A)は、肺グラフトを収容し、流体リザーバとして作用し、生理学的灌流および換気に対する接続を提供する、気密器官チャンバを含む。器官チャンバおよび付属チャンバは、37℃のインキュベータ内に置かれて、分離肺培養の持続時間の間温度を維持する。この設定の重要な特徴は、長時間(場合によっては数週間)にわたって、完全に密封されたシステム内で無菌器官培養を維持することができ、媒体交換、サンプリング、および器官の介入が可能になることである。
灌流液(培地)サンプルを、PAの上流およびPVの下流から抜き取った。灌流液組成を、CG8+カートリッジ(Abbott)とともに、i−STAT 1 Analyzer(Abbott Point of Care Inc.、ニュージャージー州プリンストン)を使用して、培養期間の間に分析して、pH、PO2、PCO2、およびグルコースを測定した。灌流液の乳酸含量は、短期間ILC実験では測定しなかった。媒体成分の変化は、PAおよびPVの測定値間の差として表現される。したがって、負の値は減少を指し、正の値は増加を指す。
組織サンプルを、真空下で10%ホルマリン中で一晩固定し、その後、70%エタノールへと移し、パラフィンに埋め込み、染色のために5μmの薄片にした。ヘマトキシリンおよびエオシン(H&E)染色を使用して、全体的な形態学を評価した。末端デオキシヌクレオチジル転移酵素dUTPのニック末端標識アッセイ(Promega DeadEnd Cluorometric TUNEL System、Promega Corporation、ウィスコンシン州マディソン)を使用して、アポトーシスを評価した。組織サンプル1つ当たり6つの無作為範囲について、20倍範囲(約0.3419mm2)当たりのTUNEL陽性細胞の割合を計算することによって、アポトーシスの定量化を実施した。試験した各肺に対して2つ以上の組織サンプルを定量化に使用した。CellProfiler[19,20]を使用して、画像毎のTUNEL陽性細胞の数を決定した。
経壁圧力(PTM)を、PTM=PT−POCとして計算し、機械的応力を示す測定値として肺に適用して換気を容易にした。正のPTMは吸気に対応し、負のPTMは呼気に対応する。器官重量の百分率変化を、ΔWOrgan=(WFinal−WInitial)/WInitial×100として計算した。グルコースおよび乳酸の質量消費率(ΔグルコースおよびΔ乳酸)を、PAからPVへの濃度変化に灌流流量を掛けたものとして計算した。肺血管抵抗(PVR)を、PVR=(PPA−PPV)/Qとして計算した(式中、Qは灌流流量)。すべてのデータは、平均±標準偏差として、または特段の指示がない限り、ボックスプロットとして提示する。
短期間(24時間)ILC条件を、DMEM中の10% BSA(BSA、n=5)およびDMEMのみ(DMEM、n=3)の灌流液群について、表5に概説している。両方の群の肺は、培養に先立って>24時間の冷虚血時間を有していた。両方の群のPA圧力は、灌流および換気の間、器官チャンバ圧力に対して20〜40mmHgで維持した。PEEP、呼吸数、経壁圧力、およびI:E比を培養の間に調節して、膨張を維持し、目に見える浮腫の蓄積を低減させたが、群同士では類似していた。
この実施例は、隔離されたブタ肺をバイオリアクタに接続して、長期間分離肺培養を介してバイオリアクタの機能を実証した、実証実験について記載する。器官チャンバ圧力(図10A、POC)、PA圧力(PPA)、PV圧力(PPV)、PEEPチャンバ圧力(PPEEP)、および気管圧(PT)を、培養全体を通して監視する。灌流パラメータ、換気パラメータ、およびバイオリアクタイベントのログ収集の制御は、National Instrumentsの小型データ収集(cDAQ)システムを、専用に開発したLabVIEWプログラム(National Instruments、マサチューセッツ州ウーバン)と組み合わせることによって達成される。
長期間ILCを確立するため、冷虚血時間<1時間で、ブタ肺(n=4)を使用した。非コロイド培養媒体を使用したこと以外は上述した手順を使用して、器官を培養用に調製し、器官チャンバに入れた。培養は少なくとも72時間維持し、その間、灌流液をPAおよびPVで周期的にサンプリングした。培地も、短期間ILCに関して記載したのと同じ間隔で変更し、器官チャンバリザーバが低量(<1L)に見えた場合に追加の媒体を添加した。灌流および換気圧力は、培養全体を通して継続的に監視した。酸素交換の機能性試験を、100%O2(FiO2=1.0)を用いて10分間換気し、PV出口で測定されるような、灌流液中におけるO2の分圧の変化を観察することによって実施した。この場合、ΔPV pO2=PV pO2試験後−PV pO2試験前であった。システムは閉ループで媒体を灌流し、PAの上流では灌流液を脱酸素化しないので、機能性試験のこの方法を、PA対PVでのpO2の比較に対して選択した。FiO2=0.21および1.0におけるPV pO2の比較によって、バイオリアクタシステムに関して、換気肺が灌流液を酸素化する能力が分かる。機能性試験の間、灌流で残ったインキュベータ空気を中空繊維のガス交換体に供給した。ILC後、肺をチャンバから除去し、秤量し、組織学のために組織サンプルを取った。
灌流液(培地)サンプルを、PAの上流およびPVの下流から抜き取った。灌流液組成を、CG8+カートリッジ(Abbott)とともに、i−STAT 1 Analyzer(Abbott Point of Care Inc.、ニュージャージー州プリンストン)を使用して、培養期間の間に分析して、pH、PO2、PCO2、およびグルコースを測定した。CG4+カートリッジを使用して、長期間ILC実験における乳酸含量を測定した。媒体成分の変化は、PAおよびPVの測定値間の差として表現され、したがって、負の値は減少を指し、正の値は増加を指す。
組織サンプルを、真空下で10%ホルマリン中で一晩固定し、その後、70%エタノールへと移し、パラフィンに埋め込み、染色のために5μmの薄片にした。ヘマトキシリンおよびエオシン(H&E)染色を使用して、全体的な形態学を評価した。末端デオキシヌクレオチジル転移酵素dUTPのニック末端標識アッセイ(Promega DeadEnd Fluorometric TUNEL System、Promega Corporation、ウィスコンシン州マディソン)を使用して、アポトーシスを評価した。組織サンプル1つ当たり6つの無作為範囲について、20倍範囲(約0.3419mm2)当たりのTUNEL陽性細胞の割合を計算することによって、アポトーシスの定量化を実施した。試験した各肺に対して2つ以上の組織サンプルを定量化に使用した。CellProfiler[19,20]を使用して、画像毎のTUNEL陽性細胞の数を決定した。
経壁圧力(PTM)を、PTM=PT−POCとして計算し、機械的応力を示す測定値として肺に適用して換気を容易にした。正のPTMは吸気に対応し、負のPTMは呼気に対応する。器官重量の百分率変化を、ΔWOrgan=(WFinal−WInitial)/WInitial×100として計算した。グルコースおよび乳酸の質量消費率(ΔグルコースおよびΔ乳酸)を、PAからPVへの濃度変化に灌流流量を掛けたものとして計算した。肺血管抵抗(PVR)を、PVR=(PPA−PPV)/Qとして計算した(式中、Qは灌流流量)。すべてのデータは、平均±標準偏差として、または特段の指示がない限り、ボックスプロットとして提示する。
長期間(72時間)ILC条件および結果を、表7に概説している。肺は、培養に先立って約1時間の冷虚血時間を有していた。長時間ILCの間のPA圧力は、灌流および換気の間、器官チャンバ圧力に対して20mmHg以下で維持した。PEEP、呼吸数、経壁圧力、およびI:E比を培養の間に調節して、膨張を維持し、目に見える浮腫の蓄積を低減させた。
この実施例は、隔離されたヒト肺をバイオリアクタに接続して、長期間分離肺培養を介してバイオリアクタの機能を実証した、実証実験について記載する。器官チャンバ圧力(図10A、POC)、PA圧力(PPA)、PV圧力(PPV)、PEEPチャンバ圧力(PPEEP)、および気管圧(PT)を、培養全体を通して監視する。灌流パラメータ、換気パラメータ、およびバイオリアクタイベントのログ収集の制御は、National Instrumentsの小型データ収集(cDAQ)システムを、専用に開発したLabVIEWプログラム(National Instruments、マサチューセッツ州ウーバン)と組み合わせることによって達成される。
ニューイングランド臓器バンク(NEOB)と連携して、移植に適さないことが分かっている提供ヒト肺を、標準的な手術方式で、心臓が拍動しているドナーから調達した。提供前の胸部X線により、少量の肺底部拡張不全(basilar atelectasis)が示され、動脈酸素張力は100%FiO2で116mmHgであり、ガス交換の損失が示された。肺は、氷に載せて滅菌容器に入れて送達し、到着後すぐにバイオリアクタに載せた。右肺を分離し、PA、PV、および気管にカニューレを挿入し、その後、上述したように72時間の長期間ILC向けに設定した。摘出から再灌流までの冷虚血時間は5.5時間であった。
灌流液(培地)サンプルを、PAの上流およびPVの顆粒から抜き取った。灌流液組成を、CG8+カートリッジ(Abbott)とともに、i−STAT 1 Analyzer(Abbott Point of Care Inc.、ニュージャージー州プリンストン)を使用して、培養期間の間に分析して、pH、PO2、PCO2、およびグルコースを測定した。CG4+カートリッジを使用して、長期間ILC実験における乳酸含量を測定した。媒体成分の変化は、PAおよびPVの測定値間の差として表現される。したがって、負の値は減少を指し、正の値は増加を指す。
組織サンプルを、真空下で10%ホルマリン中で一晩固定し、その後、70%エタノールへと移し、パラフィンに埋め込み、染色のために5μmの薄片にした。ヘマトキシリンおよびエオシン(H&E)染色を使用して、全体的な形態学を評価した。末端デオキシヌクレオチジル転移酵素dUTPのニック末端標識アッセイ(Promega DeadEnd Fluorometric TUNEL System、Promega Corporation、ウィスコンシン州マディソン)を使用して、アポトーシスを評価した。組織サンプル1つ当たり6つの無作為範囲について、20倍範囲(約0.3419mm2)当たりのTUNEL陽性細胞の割合を計算することによって、アポトーシスの定量化を実施した。試験した各肺に対して2つ以上の組織サンプルを定量化に使用した。CellProfilerを使用して、画像毎のTUNEL陽性細胞の数を決定した。
経壁圧力(PTM)を、PTM=PT−POCとして計算し、機械的応力を示す測定値として肺に適用して換気を容易にした。正のPTMは吸気に対応し、負のPTMは呼気に対応する。器官重量の百分率変化を、ΔWOrgan=(WFinal−WInitial)/WInitial×100として計算した。グルコースおよび乳酸の質量消費率(ΔグルコースおよびΔ乳酸)を、PAからPVへの濃度変化に灌流流量を掛けたものとして計算した。肺血管抵抗(PVR)を、PVR=(PPA−PPV)/Qとして計算した(式中、Qは灌流流量)。すべてのデータは、平均±標準偏差として、または特段の指示がない限り、ボックスプロットとして提示する。
第1の培養ヒト肺は、以前に試験したブタ肺の組と同様に挙動した。培養の間、平均PA圧力は12.10mmHgであり、PEEPは8.38mmHgに設定した。呼吸数は毎分5回に保ち、I:E=1.2、PTMは12.91〜−4.47mmHg(ΔPTM=17.38mmHg)であった。酸素およびグルコースの消費を、比較のスケール上で乳酸の産生と並べて提示した(図13A)。ブタ肺とは異なり、媒体からCO2が除去される傾向が観察された(図13A)。酸素交換機能も培養の持続時間を通して維持された(図13B、左側)。機能静試験後のPAおよびPV pO2値(図13B、右側)は、試験したブタ肺と比較して、PAよりもPVでpO2が大幅に高いこと、また、FiO2=0.21で平衡化したときと比較して、灌流液のpO2が全体的に増加することを明らかにしている(0.21のFiO2に対する平均PA pO2=145.1mmHg)。リザーバが低量(<1L)に見えた場合に新鮮な媒体をバイオリアクタシステムに添加し、その結果、合計媒体量が培養時間とともに増加した(図13C、上)。やはり、一貫したQPAによって、培養期間の持続時間の間、長期間ILC下で肺の安定したPPAおよびPVRが生成された(図13C)。
この実施例は、新しく隔離されたラット肺をバイオリアクタに接続して、バイオリアクタの機能を試験した、実証実験について記載する。
ラット肺を、陰圧換気を使用して熱生理学的条件下で保存した。図14Aに示されるように、主要チャンバ圧力は0〜−8cmH2Oに調節し、呼吸数は20回/分であった。
第1の実験では、5%デキストランを含むKBH(0.6ml/分)を灌流液に添加し(図14B〜Cに示されるように)、その結果、灌流圧力および動的コンプライアンス(Cdyn)が4時間以内で減少し、肺は完全に浮腫状になった。Cdynは、肺の質の機能的パラメータである。それに加えて、灌流圧力および動的コンプライアンス(Cdyn)は、デキストランを含まないKHBを使用した場合(0.6ml/分)も、6時間以内に減少した。
この実施例は、一次ヒト肺上皮を分離し増殖させるプロトコルについて記載する。第1の新生仔ラット組織消化プロトコルの適応(プロトコルA)、および第2の、文献から適応したプロトコル(Karp, P.H. et al.,、プロトコルB)。
プロトコルA−ラット新生仔の肺/腎臓消化に基づく。タイミング=〜3時間
1.消化媒体を調製する。ディスパーゼ1mg/ml(幹細胞技術)にコラゲナーゼ1mg/ml。
2.(a)周囲肺組織、約1.5インチ(3.84cm)の立方体、または(b)主気道(気管支枝)を50mlファルコンチューブに分布させる。
3.20mlの消化媒体を各チューブに添加する。
4.小型の鋭いはさみを使用して、肺を迅速に切断して小さい細片にする。
5.細片にした肺を消化緩衝液中で37℃で90分間インキュベートする。
6.サンプルを37℃から除去し、組織を一時的に沈殿させる。
7.サンプルから流体を分取し、100μmのフィルタに通す。
8.濾過液を遠心沈殿させる−300xg、5分間。
9.赤血球溶解緩衝液中に再懸濁し、RTで5〜10分間インキュベートする。
10.等量のαMEMを添加して洗浄する。
11.遠心沈殿させる−300xg、5分間。
12.細胞を計数し、培養フラスコに直接培養する。
1.解離溶液を調製する。プロナーゼ(Roche/Boehringer Mannheim、カタログ番号165921)およびデオキシリボヌクレアーゼ1(Sigma、カタログ番号DN−25)。100mLに対して、αMEM 100mL中にプロナーゼ140mgおよびDNアーゼ10mgを溶解する。
2.(a)周囲肺組織、約1.5インチ(3.84cm)の立方体、または(b)主気道(気管支枝)を50mlファルコンチューブに分布させる。
3.20mlの消化媒体を各チューブに添加する。
4.小型の鋭いはさみを使用して、肺を迅速に切断して小さい細片にする。
5.細片にした肺を消化緩衝液中で4℃で24時間インキュベートする。解離の間チューブを時々反転させて、細胞凝集塊を撹拌しばらばらにする。気管および気管支組織は、最短で40時間から最長で96時間を要する。
6.解離を終了するため、10%FBEを含むαMEMを解離溶液に添加する。チューブを数回反転させて、細胞懸濁液を撹拌する。細胞ペレットを特定の気道内で再懸濁させ、未コーティングの組織培養皿上に培養する。懸濁液を最短で1時間またはそれ以上インキュベートして、繊維芽細胞を付着させる。気道上皮細胞は、コラーゲンの前処理をしなければプラスチック面に付着しない。
7.付着しなかった細胞懸濁液をインキュベーション皿から回収し、コーティング済みの皿に移す。
24時間の培養における細胞の付着および形態学を評価することによって、プレートのコラーゲンIVコーティングと併せたプロトコルBにより、より上皮様のコロニーがもたらされることが示された。これらの培養を7日間継続することにより、これらそれぞれの培養物の拡張能力が実証された。DMEMで培養した細胞を、繊維芽細胞様の個体群によって迅速に過成長させ、これらの培養物を廃棄した。
本発明の多数の実施形態について記載してきた。それにもかかわらず、本発明の主旨および範囲から逸脱することなく、様々な改変がなされてもよいことが理解されるであろう。
Claims (28)
- 少なくとも1つの流体を灌流させる器官マトリックス骨格または器官を保持するように構成された器官チャンバと、
前記器官チャンバとリザーバシステムとを接続する進入ラインであって、流体ライン、動脈ライン、静脈ライン、気管ライン、または進入ポンプのいずれかを含む進入ラインと、
前記器官チャンバと前記リザーバシステムとを接続する放出ラインであって、放出ポンプを含む放出ラインと、
前記進入ラインおよび前記放出ラインを通した前記器官チャンバと前記リザーバシステムとの間の流体交換を制御するように構成されたコントローラと、
前記器官チャンバに接続されたチャンバ圧力センサであって、チャンバ圧力を記録し前記コントローラに送信するように構成されたチャンバ圧力センサとを備える、気道器官バイオリアクタ装置。 - 前記進入ポンプ、前記放出ポンプ、またはそれら両方が双方向ポンプである、請求項1に記載の装置。
- 前記コントローラは、
前記双方向ポンプの方向を制御すること、または、
前記双方向ポンプのポンプサイクルの持続時間を制御すること
のいずれかによって、前記進入ラインおよび前記放出ラインを通した前記器官チャンバと前記リザーバシステムとの間の流体交換を制御するように構成されている、請求項2に記載の装置。 - 前記コントローラが、前記チャンバ圧力センサから送信されるデータに応答して、前記進入ラインおよび前記放出ラインを通した前記器官チャンバと前記リザーバシステムとの間の流体交換を制御するように構成されている、請求項3に記載の装置。
- 前記進入ラインが、前記動脈ライン、前記静脈ライン、および前記気管ラインを含む、請求項1に記載の装置。
- 前記気管ラインが、前記器官チャンバに接続されるとともに、陽圧マニホルドに接続され、
前記陽圧マニホルドが、
ガス源、
前記ガス源に接続された圧力リザーバ、および、
前記圧力リザーバに接続された圧力解放弁
を含み、
前記陽圧マニホルドが前記コントローラによって制御される、請求項1に記載の装置。 - 前記陽圧マニホルドが、前記気管ラインに沿って持続陽圧を印加するように構成されている、請求項6に記載の装置。
- 前記動脈ラインおよび前記静脈ラインの一方もしくは両方が、圧力センサ、流体ポンプ、または圧力センサと流体ポンプの両方を含む、請求項6に記載の装置。
- 前記動脈ラインが、前記コントローラによってそれぞれ制御される第1の圧力センサおよび第1のポンプを含み、
前記静脈ラインが、前記コントローラによってそれぞれ制御される第2の圧力センサおよび第2のポンプを含み、
前記気管ラインが、前記コントローラによってそれぞれ制御される第3の圧力センサおよび第3のポンプを含む、請求項8に記載の装置。 - 前記第3のポンプが双方向性である、請求項9に記載の装置。
- 前記動脈ラインおよび前記静脈ラインが前記リザーバシステムに接続され、前記気管ラインが換気装置に接続される、請求項5に記載の装置。
- 前記器官チャンバに接続された空気圧制御モジュールをさらに備え、
前記空気圧制御モジュールが、
入口圧力弁、入口圧力リザーバ、および入口圧縮機を含むガス入口ラインと、
出口圧力弁、出口圧力リザーバ、および出口圧縮機を含むガス出口ラインと
を含み、
前記コントローラが、前記入口圧力弁、前記入口圧縮機、前記出口圧力弁、または前記出口圧縮機のいずれかを制御する、請求項1または6に記載の装置。 - 動脈ラインに、静脈ラインに、および気管ラインに接続するように構成された器官チャンバを提供するステップと、
気道および実質的な血管系を含む肺組織マトリックスを提供するステップと、
前記気道を前記気管ラインに接続するステップと、
前記肺組織マトリックスを前記動脈ラインに、および前記静脈ラインに接続するステップと、
前記動脈ライン、前記静脈ライン、または前記気管ラインの少なくとも1つの全体にわたって前記肺組織マトリックスに細胞を播種するステップと、
第1の所望の程度の器官成熟を生じさせて湿潤成熟した器官を生成するのに十分な時間の間、前記肺組織マトリックスに湿潤換気を提供するステップと、
任意選択で、湿潤換気の間、前記器官チャンバ内の実質的に一定の流体レベルを維持するステップとを含む、湿潤成熟した肺器官を提供する方法。 - 前記器官チャンバが、チャンバ圧力センサおよび双方向排液チャンバポンプを含み、前記チャンバ圧力センサおよび双方向排液チャンバポンプが、前記チャンバ圧力センサによって送信されるデータに応答して前記双方向排液ポンプを制御する制御モジュールによってそれぞれ制御される、請求項13に記載の方法。
- 前記静脈ライン内の圧力レベルと前記媒体リザーバ内の圧力レベルとを平衡化することによって、肺内外圧較差を防止するステップをさらに含む、請求項13に記載の方法。
- 前記器官チャンバが、前記器官チャンバに接続された空気圧制御モジュールをさらに備え、
前記空気圧制御モジュールが、
吸気相の間は前記器官チャンバ内で陰圧を発生させ、
安定相では前記器官チャンバ圧力を維持し、
呼気相の間は前記器官チャンバ内で陽圧を発生させる、請求項13に記載の方法。 - 湿潤換気が、
前記コントローラに接続された双方向気管ポンプを含む前記気管ラインを媒体リザーバに接続するステップと、
前記双方向気管ポンプを使用して前記肺組織マトリックスを媒体で膨張させるステップと、
前記双方向気管ポンプを使用して媒体を前記肺組織マトリックスから抜き取って、前記肺組織マトリックスを収縮させるステップと
を含み、
前記媒体が、湿潤換気の間、継続的に入れ替えられる、請求項14に記載の方法。 - 前記湿潤換気が、
前記コントローラにそれぞれ接続された第1のポンプおよび第2のポンプを含む前記気管ラインを媒体リザーバに接続するステップと、
前記第1のポンプを使用して前記肺組織マトリックスを媒体で膨張させるステップと、
前記第2のポンプを使用して媒体を前記肺組織マトリックスから抜き取って、前記肺組織マトリックスを収縮させるステップと
を含み、
前記媒体が、湿潤換気の間、継続的に入れ替えられる、請求項14に記載の方法。 - 前記コントローラが、前記気管ラインに接続された気管圧センサによって送信されるデータに応答して、前記双方向気管ポンプを制御する、請求項17に記載の方法。
- 動脈ラインに、静脈ラインに、および気管ラインに接続するように構成された器官チャンバを提供するステップと、
気道および実質的な血管系を含む、請求項13に記載の湿潤成熟した肺、または摘出した肺を提供するステップと、
前記気道を前記気管ラインに接続するステップと、
前記湿潤成熟した肺または前記摘出した肺を動脈ラインおよび静脈ラインに接続するステップと、
少なくとも前記動脈ラインまたは前記静脈ラインを通して、前記湿潤成熟した肺または前記摘出した肺の前記血管系全体にわたって媒体を灌流させるステップと、
機能する肺器官を生成または維持するのに十分な時間の間、前記湿潤成熟した肺または前記摘出した肺に乾燥換気を提供するステップと、
気管圧の変動を最小限に抑えるステップとを含む、肺器官を保存、修復、および/または改変する方法。 - 気管圧の変動を最小限に抑える前記ステップが、
コントローラにそれぞれ接続された換気装置および気管圧センサを含む、前記気管ラインを媒体リザーバに接続するステップと、
前記換気装置を使用して前記湿潤成熟した肺または前記摘出した肺をガスで膨張させるステップと、
前記換気装置を使用して前記湿潤成熟した肺または前記摘出した肺を収縮させるステップと
を含み、
前記コントローラによって、前記換気装置が、前記湿潤成熟した肺または前記摘出した肺を膨張もしくは収縮させて、前記気管圧センサによって感知される前記気管圧の変動を最小限に抑える、請求項20に記載の方法。 - 気管圧の変動を最小限に抑えるステップが、
前記気管ラインに接続されるとともにコントローラに接続された陽圧マニホルドを提供するステップであって、前記陽圧マニホルドが、圧力リザーバ、前記圧力リザーバに接続されたガス源、および圧力解放弁を含む、ステップと、
前記気管ラインに接続されるとともに前記コントローラに接続された気管圧センサを提供するステップとを含み、
前記コントローラが、前記気管圧センサから送信されるデータに応答して、前記圧縮機または前記圧力解放弁を制御する、請求項20に記載の方法。 - 前記圧力リザーバが、吸気および呼気の間の圧力の変動を最小限に抑えるように、近似的にサイズ決めされた、請求項22に記載の方法。
- 前記器官チャンバが、前記器官チャンバに接続された空気圧制御モジュールをさらに備え、
前記空気圧制御モジュールが、
吸気相の間は前記器官チャンバ内で陰圧を発生させ、
安定相では前記器官チャンバ圧力を維持し、
呼気相の間は前記器官チャンバ内で陽圧を発生させる、請求項20に記載の方法。 - 気管圧の変動を最小限に抑えるステップが、
前記気管ラインに接続されるとともにコントローラに接続された陽圧マニホルドを提供するステップであって、前記陽圧マニホルドが、圧力リザーバ、前記圧力リザーバに接続されたガス源、および圧力解放弁を含む、ステップと、
前記気管ラインに接続されるとともに前記コントローラに接続された気管圧センサを提供するステップと
を含み、
前記コントローラが、前記気管圧センサから送信されるデータに応答して、前記圧縮機または前記圧力解放弁を制御し、
前記器官チャンバが、前記器官チャンバに接続された空気圧制御モジュールを備え、
前記空気圧制御モジュールが、
吸気相の間は前記器官チャンバ内で陰圧を発生させ、
安定相では前記器官チャンバ圧力を維持し、
呼気相の間は前記器官チャンバ内で陽圧を発生させる、請求項20に記載の方法。 - 請求項13から25に記載の方法によって生成された機能する肺。
- 前記器官が完全肺またはその血管新生部分である、請求項26に記載の機能する肺。
- 肺容量の障害または低下を有する対象を治療する方法であって、請求項27に記載の前記肺を前記対象に移植するステップを含む、方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201461953191P | 2014-03-14 | 2014-03-14 | |
US61/953,191 | 2014-03-14 | ||
PCT/US2015/020605 WO2015138999A1 (en) | 2014-03-14 | 2015-03-13 | Lung bioreactor |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020119390A Division JP7075446B2 (ja) | 2014-03-14 | 2020-07-10 | 肺バイオリアクタ |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017512492A true JP2017512492A (ja) | 2017-05-25 |
JP6829078B2 JP6829078B2 (ja) | 2021-02-10 |
Family
ID=52780056
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016575640A Active JP6829078B2 (ja) | 2014-03-14 | 2015-03-13 | 肺バイオリアクタ |
JP2020119390A Active JP7075446B2 (ja) | 2014-03-14 | 2020-07-10 | 肺バイオリアクタ |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020119390A Active JP7075446B2 (ja) | 2014-03-14 | 2020-07-10 | 肺バイオリアクタ |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11427797B2 (ja) |
EP (1) | EP3116311B1 (ja) |
JP (2) | JP6829078B2 (ja) |
CN (2) | CN106455541B (ja) |
AU (1) | AU2015229085B2 (ja) |
CA (1) | CA2942714C (ja) |
ES (1) | ES2841142T3 (ja) |
WO (1) | WO2015138999A1 (ja) |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9078428B2 (en) | 2005-06-28 | 2015-07-14 | Transmedics, Inc. | Systems, methods, compositions and solutions for perfusing an organ |
US9457179B2 (en) | 2007-03-20 | 2016-10-04 | Transmedics, Inc. | Systems for monitoring and applying electrical currents in an organ perfusion system |
CN109997836B (zh) | 2011-04-14 | 2022-02-08 | 特兰斯迈迪茨公司 | 用于供体肺的离体机器灌注的器官护理溶液 |
US10076112B2 (en) | 2014-06-02 | 2018-09-18 | Transmedic, Inc. | Ex vivo organ care system |
US11083191B2 (en) * | 2014-12-12 | 2021-08-10 | Tevosol, Inc. | Apparatus and method for organ perfusion |
US10731135B2 (en) * | 2015-09-11 | 2020-08-04 | The General Hospital Corporation | Regeneration of a functional pulmonary vascular bed |
NZ776411A (en) | 2015-10-09 | 2023-09-29 | Deka Products Lp | Fluid pumping and bioreactor system |
US20170369849A1 (en) * | 2016-05-11 | 2017-12-28 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Compositions and methods for bioengineered tissues |
KR102362222B1 (ko) * | 2016-05-16 | 2022-02-11 | 더 제너럴 하스피탈 코포레이션 | 폐 상피 공학에서 인간 기도 줄기 세포 |
US10624992B2 (en) | 2016-05-16 | 2020-04-21 | The General Hospital Corporation | Human airway stem cells in lung epithelial engineering |
BR112018074537B1 (pt) | 2016-05-30 | 2023-04-11 | Tevosol, Inc | Método de ventilar um pulmão extraído |
KR102539584B1 (ko) | 2016-06-15 | 2023-06-02 | 더 제너럴 하스피탈 코포레이션 | 생물직교 반응을 사용하는 생물학적 물질의 대사적 표지화 및 분자적 향상 |
US11299705B2 (en) | 2016-11-07 | 2022-04-12 | Deka Products Limited Partnership | System and method for creating tissue |
DE102016225167B4 (de) * | 2016-12-15 | 2018-10-11 | Otto-Von-Guericke-Universität Magdeburg | Ex vivo-Lungenkreislauf- und Ventilations-Vorrichtung sowie Verfahren zum Training chirurgischer und minimal-invasiver chirurgischer Eingriffe |
LU100595B1 (en) | 2017-12-27 | 2019-06-28 | Luxembourg Inst Science & Tech List | Cell bio-incubator with a variable internal pressure |
CN112395723B (zh) * | 2019-07-30 | 2024-03-29 | 波司登羽绒服装有限公司 | 一种羽绒服适应环境温度的预测方法 |
US20210315200A1 (en) * | 2020-04-14 | 2021-10-14 | Miromatrix Medical Inc. | System for functional testing and transportation of biologically engineered organs |
EP4146313A1 (en) * | 2020-05-05 | 2023-03-15 | Hospitech Respiration Ltd. | Fluid distribution device |
CN113862148A (zh) * | 2020-06-30 | 2021-12-31 | 再心生物科技有限公司 | 包括类器官腔室的设备及其用于培养、维持、监测或测试类器官的用途 |
CN112155841B (zh) * | 2020-09-04 | 2022-03-22 | 深圳市医思美科技有限公司 | 一种热灌注治疗设备的控制系统和控制方法 |
CN112501019B (zh) * | 2020-12-03 | 2023-10-31 | 广州迈普再生医学科技股份有限公司 | 一种多功能生物反应器 |
WO2024052365A1 (en) * | 2022-09-09 | 2024-03-14 | Otto-Von-Guericke-Universität Magdeburg | Ex vivo biophantom for training of surgical and minimally- invasive surgical procedures |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001516768A (ja) * | 1997-09-23 | 2001-10-02 | ハッサネイン,ワリード,エイチ. | 臓器を維持するための組成物、方法及び装置 |
US20030073227A1 (en) * | 2001-09-28 | 2003-04-17 | Hull Harry F. | Simple, fully transportable device for maintaining an excised heart in optimum condition for transplantation |
JP2004350557A (ja) * | 2003-05-28 | 2004-12-16 | Univ Tokyo | ガス透過性バッグを用いた加圧培養装置 |
JP2006000105A (ja) * | 2004-06-16 | 2006-01-05 | Sunao Otake | 拍動流加圧刺激培養装置 |
JP2009505752A (ja) * | 2005-08-26 | 2009-02-12 | リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミネソタ | 臓器および組織の脱細胞化および再細胞化 |
JP2012516699A (ja) * | 2009-02-04 | 2012-07-26 | イエール ユニバーシティ | 肺臓の組織工学 |
JP2012528600A (ja) * | 2009-06-04 | 2012-11-15 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション | バイオ人工肺 |
WO2013071096A1 (en) * | 2011-11-09 | 2013-05-16 | The General Hospital Corporation | Composite tissue graft and materials and methods for its production and use |
JP2016505264A (ja) * | 2013-01-08 | 2016-02-25 | イエール ユニバーシティ | ヒトおよび大型哺乳動物の肺のバイオリアクター |
Family Cites Families (27)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6087552A (en) | 1994-11-15 | 2000-07-11 | Sisters Of Providence Of Oregon | Method of producing fused biomaterials and tissue |
US6953655B1 (en) * | 1997-09-23 | 2005-10-11 | The United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs | Compositions, methods and devices for maintaining an organ |
US8409846B2 (en) * | 1997-09-23 | 2013-04-02 | The United States Of America As Represented By The Department Of Veteran Affairs | Compositions, methods and devices for maintaining an organ |
US6734018B2 (en) | 1999-06-07 | 2004-05-11 | Lifenet | Process for decellularizing soft-tissue engineered medical implants, and decellularized soft-tissue medical implants produced |
US7662409B2 (en) | 1998-09-25 | 2010-02-16 | Gel-Del Technologies, Inc. | Protein matrix materials, devices and methods of making and using thereof |
CN1320014A (zh) * | 1998-09-29 | 2001-10-31 | 器官恢复体系股份有限公司 | 维持和/或恢复器官生存力的装置和方法 |
EP1131410B1 (en) | 1998-11-19 | 2005-10-05 | Organogenesis Inc. | Bioengineered tissue constructs and methods for producing and using them |
WO2002053193A2 (en) | 2001-01-02 | 2002-07-11 | The Charles Stark Draper Laboratory, Inc. | Tissue engineering of three-dimensional vascularized using microfabricated polymer assembly technology |
AU2002367580A1 (en) | 2001-05-16 | 2003-09-22 | Tracy C. Grikscheit | Tissue-engineered organs |
US20020182261A1 (en) | 2001-05-31 | 2002-12-05 | Jianwu Dai | EB matrix production from fetal tissues and its use for tissue repair |
AU2002343738A1 (en) | 2001-11-15 | 2003-05-26 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | A three-dimensional matrix for producing living tissue equivalents |
US20030180268A1 (en) | 2002-02-05 | 2003-09-25 | Anthony Atala | Tissue engineered construct for supplementing or replacing a damaged organ |
EP1649879A3 (en) | 2002-06-28 | 2006-05-03 | Cardio, Inc. | Decellularized tissue |
US20080292677A1 (en) | 2004-12-09 | 2008-11-27 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Engineered lung tissue, hydrogel/somatic lung progenitor cell constructs to support tissue growth, and method for making and using same |
WO2005063314A1 (ja) | 2003-12-26 | 2005-07-14 | Cardio Incorporated | 脱細胞化組織およびその作成方法 |
CN2689225Y (zh) | 2004-01-15 | 2005-03-30 | 华中科技大学同济医学院 | 一种多功能组织与器官灌流装置 |
WO2005087287A1 (en) | 2004-03-05 | 2005-09-22 | University Of Florida Research Foundation Inc. | Novel tissue engineered scaffolds derived from copper capillary alginate gels |
GB0415080D0 (en) | 2004-07-05 | 2004-08-04 | Ucl Biomedica Plc | Methods for preparing tissue equivalent implants and products thereof |
US20090035855A1 (en) | 2005-12-01 | 2009-02-05 | Agency For Science, Technology And Research | Three-dimensional reconstituted extracellular matrices as scaffolds for tissue engineering |
EP1942726B1 (en) * | 2006-04-19 | 2017-01-04 | Transmedics, Inc. | Methods for ex vivo organ care |
US20100034791A1 (en) | 2007-02-14 | 2010-02-11 | Drexel University | Engineered Lung Tissue Construction for High Throughput Toxicity Screening and Drug Discovery |
US8647837B2 (en) | 2007-07-16 | 2014-02-11 | Sanofi Pasteur Vaxdesign Corp. | Artificial tissue constructs comprising alveolar cells and methods for using the same |
MX2010005791A (es) | 2007-11-28 | 2010-08-10 | Organogenesis Inc | Construcciones de tejido hechas mediante bio-ingenieria y metodos para produccion y uso. |
US20090292677A1 (en) | 2008-02-15 | 2009-11-26 | Wordstream, Inc. | Integrated web analytics and actionable workbench tools for search engine optimization and marketing |
US20120183944A1 (en) * | 2009-03-31 | 2012-07-19 | Regents Of The Univeristy Of Minnesota | Decellularization and recellularization of organs and tissues |
EP2809153B8 (en) * | 2012-01-17 | 2023-07-12 | Tevosol, Inc. | Apparatus for testing, assessment, and maintenance of harvested hearts for transplanting |
US9357767B2 (en) * | 2012-07-10 | 2016-06-07 | Lifeline Scientific, Inc. | Organ transporter |
-
2015
- 2015-03-13 CN CN201580026004.XA patent/CN106455541B/zh active Active
- 2015-03-13 CA CA2942714A patent/CA2942714C/en active Active
- 2015-03-13 JP JP2016575640A patent/JP6829078B2/ja active Active
- 2015-03-13 US US15/125,891 patent/US11427797B2/en active Active
- 2015-03-13 CN CN202311483985.3A patent/CN117694335A/zh active Pending
- 2015-03-13 EP EP15713292.9A patent/EP3116311B1/en active Active
- 2015-03-13 WO PCT/US2015/020605 patent/WO2015138999A1/en active Application Filing
- 2015-03-13 AU AU2015229085A patent/AU2015229085B2/en active Active
- 2015-03-13 ES ES15713292T patent/ES2841142T3/es active Active
-
2020
- 2020-07-10 JP JP2020119390A patent/JP7075446B2/ja active Active
-
2022
- 2022-08-29 US US17/897,560 patent/US11891593B2/en active Active
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001516768A (ja) * | 1997-09-23 | 2001-10-02 | ハッサネイン,ワリード,エイチ. | 臓器を維持するための組成物、方法及び装置 |
US20030073227A1 (en) * | 2001-09-28 | 2003-04-17 | Hull Harry F. | Simple, fully transportable device for maintaining an excised heart in optimum condition for transplantation |
JP2004350557A (ja) * | 2003-05-28 | 2004-12-16 | Univ Tokyo | ガス透過性バッグを用いた加圧培養装置 |
JP2006000105A (ja) * | 2004-06-16 | 2006-01-05 | Sunao Otake | 拍動流加圧刺激培養装置 |
JP2009505752A (ja) * | 2005-08-26 | 2009-02-12 | リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミネソタ | 臓器および組織の脱細胞化および再細胞化 |
JP2012516699A (ja) * | 2009-02-04 | 2012-07-26 | イエール ユニバーシティ | 肺臓の組織工学 |
JP2012528600A (ja) * | 2009-06-04 | 2012-11-15 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション | バイオ人工肺 |
WO2013071096A1 (en) * | 2011-11-09 | 2013-05-16 | The General Hospital Corporation | Composite tissue graft and materials and methods for its production and use |
JP2016505264A (ja) * | 2013-01-08 | 2016-02-25 | イエール ユニバーシティ | ヒトおよび大型哺乳動物の肺のバイオリアクター |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
AMERICAN JOURNAL OF TRANSPLANTATION (2012) VOL.12, PP.1839-1847, JPN6019004784, ISSN: 0004190737 * |
ANN THORAC SURG (2011) VOL.92, PP.998-1006, JPN6019004786, ISSN: 0004190736 * |
CELL TRANSPLANTATION (2011) VOL.20, PP.1117-1126, JPN6019004788, ISSN: 0004190738 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP7075446B2 (ja) | 2022-05-25 |
EP3116311B1 (en) | 2020-11-25 |
WO2015138999A1 (en) | 2015-09-17 |
CN106455541A (zh) | 2017-02-22 |
US20230002710A1 (en) | 2023-01-05 |
AU2015229085B2 (en) | 2019-04-04 |
US11427797B2 (en) | 2022-08-30 |
JP6829078B2 (ja) | 2021-02-10 |
ES2841142T3 (es) | 2021-07-07 |
EP3116311A1 (en) | 2017-01-18 |
CA2942714A1 (en) | 2015-09-17 |
US11891593B2 (en) | 2024-02-06 |
US20170015963A1 (en) | 2017-01-19 |
CN106455541B (zh) | 2023-11-28 |
JP2020188780A (ja) | 2020-11-26 |
CA2942714C (en) | 2023-09-05 |
AU2015229085A1 (en) | 2016-09-29 |
CN117694335A (zh) | 2024-03-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7075446B2 (ja) | 肺バイオリアクタ | |
US10059913B2 (en) | Bioartifical lung | |
JP7419299B2 (ja) | 機能的肺血管床の再生 | |
US20240124813A1 (en) | Lung bioreactor |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180302 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20190131 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190219 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190517 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190719 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190819 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200114 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20200413 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200710 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20201222 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210121 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6829078 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |