JP2017055716A - 多剤耐性菌スクリーニング用プレート、多剤耐性菌の検出方法、多剤耐性菌検出キットおよび多剤耐性菌スクリーニング用液体培地 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 液体培地を収容するための複数の収容部を備えた多剤耐性菌スクリーニング用プレートを用いて多剤耐性菌の検出を行う。複数の収容部は、カルバペネム系抗菌薬、アミノ配糖体系抗菌薬、およびフルオロキノロン系抗菌薬を含む第1の液体培地を収容する第1の収容部と、カルバペネム系抗菌薬、アミノ配糖体系抗菌薬、およびフルオロキノロン系抗菌薬のうちの2つを含む1、2、または3種類の第2の液体培地を収容する第2の収容部と、カルバペネム系抗菌薬、アミノ配糖体系抗菌薬、およびフルオロキノロン系抗菌薬のうちの1つを含む1、2、または3種類の第3の液体培地を収容する第3の収容部と、から選ばれる。
【選択図】なし
Description
感染症の予防及び感染症の患者に対する医療に関する法律でも、代表的なイミペネム、アミカシン、およびシプロフロキサシンの最小発育阻止濃度(MIC)が単剤でイミペネム≧16μg/mL、アミカシン≧32μg/mL、シプロフロキサシン≧4μg/mLのすべてを満たす緑膿菌が3剤耐性菌とされるが、本発明のプレートによれば、3剤耐性菌を検出することができる。また、本発明のプレートによれば、3剤耐性菌、2剤耐性菌、単剤耐性菌および感性菌を区別することもできる。
(1)試験菌株
P. aeruginosa 21株を用いた。内訳は、3剤耐性株14株(No.1−14)、2剤耐性株6株(No.15−20)、感性株1株(No.21)である。
(2)試験方法
図1に示す配置でミュラーヒントンブイヨン(MHB)(栄研化学株式会社)にイミペネム(IPM)とシプロフロキサシン(CPFX)とアミカシン(AMK)を96穴マイクロプレートのウエルに分注し、多剤耐性菌スクリーニング用プレートを作製した。なお、作製した多剤耐性菌スクリーニング用プレートは−70℃で保存し、使用時に融解して用いた。薬剤濃度はP. aeruginosaに対する各薬剤のブレイクポイント濃度(IPM2μg/mL、CPFX1μg/mL、AMK16μg/mL)を中心として2段階希釈を行った。多剤耐性菌スクリーニング用プレートの各ウエルに試験菌株を約5×105CFU/mLとなるように接種し、35℃±2℃で18時間培養後の最小発育阻止濃度(MIC)値の判定を行った。
(3)結果
結果を表1に示す。
(1)試験菌株
P. aeruginosa 3剤耐性株10株(表2および表3:No.1−10)と、P. aeruginosa以外の各種耐性菌4株(表4:No.1−4)、CLSI精度管理菌株3株(表4:No.5−7)を用いた。
(2)試験方法
ミュラーヒントンブイヨンのかわりにトリプトソイブイヨン培地(栄研化学株式会社)とNACブイヨン培地(栄研化学株式会社)を用い、図1の薬剤濃度で多剤耐性菌スクリーニング用プレートを作製した。実施例1と同様に、多剤耐性菌スクリーニング用プレートの各ウエルに試験菌株を約5×105CFU/mLとなるよう接種し、35±2℃で18時間培養後の最小発育阻止濃度値の判定を行った。
(3)結果
結果を表2〜4に示す。
(1)試験菌株
P. aeruginosa 3剤耐性株5株(No.1−5)を用いた。
(2)試験方法
実施例1の試験方法において、カルバペネム系薬剤としてメロペネム(MEPM)、フルオロキノロン系薬剤としてレボフロキサシン(LVFX)またはノルフロキサシン(NFLX)、アミノ配糖体系抗菌薬としてゲンタマイシン(GM)を選択し、多剤耐性菌スクリーニング用プレートを作製した。抗菌薬の配置はそれぞれ図2〜5に示す通りとした。実施例1と同様に、多剤耐性菌スクリーニング用プレートの各ウエルに試験菌株を約5×105CFU/mLとなるように接種し、35±2℃で18時間培養後のMIC値の判定を行った。
(3)結果
結果を表5−8に示す。
(1)試験菌株
A.baumannii 7株を用いた。内訳は、3剤耐性株2株(No.1、2)、2剤耐性株3株(No.3、4、および5)、単剤耐性株2株(No.6、7)である。
(2)試験方法
図1に示す配置でミュラーヒントンブイヨン(MHB)(栄研化学株式会社)にイミペネム(IPM)とシプロフロキサシン(CPFX)とアミカシン(AMK)を96穴マイクロプレートのウエルに分注し、多剤耐性菌スクリーニング用プレートを作製した。なお、作製した多剤耐性菌スクリーニング用プレートは−70℃で保存し、使用時に融解して用いた。薬剤濃度はA.baumanniiに対する各薬剤のブレイクポイント濃度(IPM2μg/mL、CPFX1μg/mL、AMK 16μg/mL)を中心として2段階希釈を行った。多剤耐性菌スクリーニング用プレートの各ウエルに試験菌株を約5×105CFU/mLとなるように接種し、35℃±2℃で22時間培養後の最小発育阻止濃度(MIC)値の判定を行った。
(3)結果
結果を表9に示す。
Claims (18)
- 液体培地を収容するための複数の収容部を備えた多剤耐性菌スクリーニング用プレートであって、前記複数の収容部が、
カルバペネム系抗菌薬、アミノ配糖体系抗菌薬、およびフルオロキノロン系抗菌薬を含む第1の液体培地を収容する第1の収容部と、
前記カルバペネム系抗菌薬、前記アミノ配糖体系抗菌薬および前記フルオロキノロン系抗菌薬のうちの2つを含む1、2、または3種類の第2の液体培地を収容する第2の収容部と、
前記カルバペネム系抗菌薬、前記アミノ配糖体系抗菌薬および前記フルオロキノロン系抗菌薬のうちの1つを含む1、2、または3種類の第3の液体培地を収容する第3の収容部と、
から選ばれる収容部を含む、多剤耐性菌スクリーニング用プレート。 - 液体培地を収容するための複数の収容部を備えた多剤耐性菌スクリーニング用プレートであって、前記複数の収容部のうちの少なくとも一つが、カルバペネム系抗菌薬、アミノ配糖体系抗菌薬、およびフルオロキノロン系抗菌薬を含む液体培地を収容する、
多剤耐性菌スクリーニング用プレート。 - 前記液体培地が、ミュラーヒントンブイヨン、NACブイヨン培地、BTB培地、ハートインフュジョンブイヨン培地、普通ブイヨン培地、およびトリプトソイブイヨン培地から選択される請求項1または2に記載の多剤耐性菌スクリーニング用プレート。
- カルバペネム系抗菌薬の濃度が1μg/mL以上、アミノ配糖体系抗菌薬の濃度が2μg/m L以上、およびフルオロキノロン系抗菌薬の濃度が0.5μg/mL以上である請求項3に記載の多剤耐性菌スクリーニング用プレート。
- カルバペネム系抗菌薬がイミペネム、パニペネム、メロペネム、ビアペネム、ドリペネム、テビペネム、およびエルタペネムから選ばれる少なくとも一つである請求項1〜4のいずれか一項に記載の多剤耐性菌スクリーニング用プレート。
- アミノ配糖体系抗菌薬がアミカシン、カナマイシン、ゲンタマイシン、ジベカシン、トブラマイシン、イセパマイシンおよびアルベカシンから選択される少なくとも一つである請求項1〜4のいずれか一項に記載の多剤耐性菌スクリーニング用プレート。
- フルオロキノロン系抗菌薬がシプロフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、ロメフロキサシン、トスフロキサシン、レボフロキサシン、パズフロキサシン、ガチフロキサシン、プルリフロキサシン、モキシフロキサシン、シタフロキサシン、およびガレノキサシンから選択される少なくとも一つである請求項1〜4のいずれか一項に記載の多剤耐性菌スクリーニング用プレート。
- ミュラーヒントンブイヨンに、1μg/mL以上のイミペネム、8μg/mL以上のアミカシン、および0.5μg/mL以上のシプロフロキサシンを含む第1の液体培地を収容する第1の収容部と、
ミュラーヒントンブイヨンに、1μg/mL以上のイミペネム、8μg/mL以上のアミカシン、および0.5μg/mL以上のシプロフロキサシンから選択される2つの抗菌薬を含む1、2、または3種類の第2の液体培地を収容する第2の収容部と、
ミュラーヒントンブイヨンに、1μg/mL以上のイミペネム、8μg/mL以上のアミカシン、および0.5μg/mL以上のシプロフロキサシンから選択される1つの抗菌薬を含む1、2、または3種類の第3の液体培地を収容する第3の収容部と、
から選ばれる収容部を備えた多剤耐性菌スクリーニング用プレート。 - トリプトソイブイヨン培地またはNACブイヨン培地に、1μg/mL以上のイミペネム、8μg/mL以上のアミカシン、および0.5μg/mL以上のシプロフロキサシンを含む第1の液体培地を収容する第1の収容部と、
トリプトソイブイヨン培地またはNACブイヨン培地に、1μg/mL以上のイミペネム、8μg/mL以上のアミカシン、および0.5μg/mL以上のシプロフロキサシンから選択される2つの抗菌薬を含む1、2、または3種類の第2の液体培地を収容する第2の収容部と、
トリプトソイブイヨン培地またはNACブイヨン培地に、1μg/mL以上のイミペネム、8μg/mL以上のアミカシン、および0.5μg/mL以上のシプロフロキサシンから選択される1つの抗菌薬を含む1、2、または3種類の第3の液体培地を収容する第3の収容部と、
から選ばれる収容部を備えた多剤耐性菌スクリーニング用プレート。 - ミュラーヒントンブイヨンに、1μg/mL以上のメロペネム、8μg/mL以上のアミカシン、および0.5μg/mL以上のシプロフロキサシンを含む第1の液体培地を収容する第1の収容部と、
ミュラーヒントンブイヨンに、1μg/mL以上のメロペネム、8μg/mL以上のアミカシン、および0.5μg/mL以上のシプロフロキサシンから選択される2つの抗菌薬を含む1、2、または3種類の第2の液体培地を収容する第2の収容部と、
ミュラーヒントンブイヨンに、1μg/mL以上のメロペネム、8μg/mL以上のアミカシン、および0.5μg/mL以上のシプロフロキサシンから選択される1つの抗菌薬を含む1、2、または3種類の第3の液体培地を収容する第3の収容部と、
から選ばれる収容部を備えた多剤耐性菌スクリーニング用プレート。 - ミュラーヒントンブイヨンに、1μg/mL以上のイミペネム、8μg/mL以上のアミカシン、および1μg/mL以上のレボフロキサシンを含む第1の液体培地を収容する第1の収容部と、
ミュラーヒントンブイヨンに、1μg/mL以上のイミペネム、8μg/mL以上のアミカシン、および1μg/mL以上のレボフロキサシンから選択される2つの抗菌薬を含む1、2、または3種類の第2の液体培地を収容する第2の収容部と、
ミュラーヒントンブイヨンに、1μg/mL以上のイミペネム、8μg/mL以上のアミカシン、および1μg/mL以上のレボフロキサシンから選択される1つの抗菌薬を含む1、2、または3種類の第3の液体培地を収容する第3の収容部と、
から選ばれる収容部を備えた多剤耐性菌スクリーニング用プレート。 - ミュラーヒントンブイヨンに、1μg/mL以上のイミペネム、8μg/mL以上のアミカシン、および2μg/mL以上のノルフロキサシンを含む第1の液体培地を収容する第1の収容部と、
ミュラーヒントンブイヨンに、1μg/mL以上のイミペネム、8μg/mL以上のアミカシン、および2μg/mL以上のノルフロキサシンから選択される2つの抗菌薬を含む1、2、または3種類の第2の液体培地を収容する第2の収容部と、
ミュラーヒントンブイヨンに、1μg/mL以上のイミペネム、8μg/mL以上のアミカシン、および2μg/mL以上のノルフロキサシンから選択される1つの抗菌薬を含む1、2、または3種類の第3の液体培地を収容する第3の収容部と、
から選ばれる収容部を備えた多剤耐性菌スクリーニング用プレート。 - ミュラーヒントンブイヨンに、1μg/mL以上のイミペネム、2μg/mL以上のゲンタマイシン、および0.5μg/mL以上のシプロフロキサシンを含む第1の液体培地を収容する第1の収容部と、
ミュラーヒントンブイヨンに、1μg/mL以上のイミペネム、2μg/mL以上のゲンタマイシン、および0.5μg/mL以上のシプロフロキサシンから選択される2つの抗菌薬を含む1、2、または3種類の第2の液体培地を収容する第2の収容部と、
ミュラーヒントンブイヨンに、1μg/mL以上のイミペネム、2μg/mL以上のゲンタマイシン、および0.5μg/mL以上のシプロフロキサシンから選択される1つの抗菌薬を含む1、2、または3種類の第3の液体培地を収容する第3の収容部と、
から選ばれる収容部を備えた多剤耐性菌スクリーニング用プレート。 - 請求項1〜13のいずれか一項に記載の多剤耐性菌スクリーニング用プレートを用いた多剤耐性菌の検出方法。
- 検出する多剤耐性菌が多剤耐性緑膿菌、多剤耐性アシネトバクターおよび薬剤耐性腸内細菌から選択される少なくとも一つである請求項14に記載の多剤耐性菌の検出方法。
- 請求項1〜13のいずれか一項に記載の多剤耐性菌スクリーニング用プレートを備えた多剤耐性菌検出キット。
- カルバペネム系抗菌薬、アミノ配糖体系抗菌薬、およびフルオロキノロン系抗菌薬を含む第1の液体培地、
前記カルバペネム系抗菌薬、前記アミノ配糖体系抗菌薬、および前記フルオロキノロン系抗菌薬のうちの2つを含む1、2または3種類の第2の液体培地、および
前記カルバペネム系抗菌薬、前記アミノ配糖体系抗菌薬、および前記フルオロキノロン系抗菌薬のうちの1つを含む1、2または3種類の第3の液体培地
から選ばれる複数の液体培地と、
前記複数の液体培地の各々を収容する収容部を備えた多剤耐性菌スクリーニング用プレートと、を備える多剤耐性菌検出キット。 - 検出する多剤耐性菌が多剤耐性緑膿菌、多剤耐性アシネトバクターおよび薬剤耐性腸内細菌から選択される請求項16または17に記載の多剤耐性菌検出キット。
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