JP2017048151A - コラーゲンゲル収縮促進剤、抗糖化剤及び皮膚外用剤 - Google Patents
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Abstract
Description
線維芽細胞を包埋したコラーゲンゲルの収縮率を本発明の被験物質の添加時と非添加時で比較し、コラーゲンゲル収縮促進作用を評価した。氷冷下で、コラーゲンI−PC溶液(高研株式会社)を終濃度1mg/ml、3×DMEM培地を終濃度1倍、1×DMEM培地で調製した正常ヒト皮膚線維芽細胞の細胞懸濁液1.0×105cells/ml(終濃度)を泡立てないように穏やかに混合した後、24ウェルプレートの各ウェルに0.8mlずつ注入し、直ちに37℃でゲル化させた。その後、異なる濃度のプロテオグリカン(添加濃度0、200、400、600、800μg/ml)を含有するDMEM培地を加え、ウェル壁面からゲルを剥離しコラーゲンゲル収縮を行った。48時間培養後、コラーゲンゲルの写真を撮影し、画像解析ソフトImageJによって画像解析してサンプル添加培養後のコラーゲンゲルの面積を測定した。ゲルの収縮状態を撮影した画像を図1に示す。無添加時のゲル収縮率を対照として、Dunnettの検定により5%有意水準で各サンプルのゲル収縮率を比較した。ゲルの収縮率を評価した結果を図2に示す。
ゲル収縮率(%)=100−サンプル添加48時間培養後のゲル面積/サンプル添加前のゲル面積×100
サンプル添加前のコラーゲンゲル面積を1.9cm2(ウェル底の直径:15.6mm)とした。
コラーゲン抗糖化アッセイキット(コスモ・バイオ)を用い、本発明に係るプロテオグリカン添加時と非添加時を比較検討することで、抗糖化作用を評価した。氷冷下、96ウェルプレートに中和したコラーゲン溶液を50μl/ウェルに分注し、37℃インキュベーターで一晩静置しゲル化させた。コラーゲンゲル上に緩衝液もしくはフルクトース溶液を50μl/ウェル重層した。その後、アミノグアニジン溶液(22μg/ml)を陽性コントロールとして、異なる濃度のプロテオグリカン(0、160、400、800μg/ml)を添加し、プレートミキサーで攪拌後、37℃インキュベーターで30日間静置した後、蛍光強度(励起波長370nm、蛍光波長440nm)を測定し、各蛍光強度から糖化コラーゲン生成率を求めた。
Claims (3)
- グルクロン酸とN−アセチルガラクトサミンを含む分子量20万〜200万のアグリカンタイプのプロテオグリカンを0.01質量%〜1質量%含むコラーゲンゲル収縮促進剤。
- グルクロン酸とN−アセチルガラクトサミンを含む分子量20万〜200万のアグリカンタイプのプロテオグリカンを0.01質量%〜1質量%含む抗糖化剤。
- 0.01質量%〜1質量%のプロテオグリカンと、
20質量%〜99質量%の水性成分(水、エタノール、グリセリン、ブチレングリコール等)と、
0質量%〜80質量%の油性成分(ワセリン、スクワラン、ロウ等)と、
0質量%〜20質量%の界面活性剤(アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤)と、
を含み、前記プロテオグリカンが、グルクロン酸とN−アセチルガラクトサミンを含む分子量20万〜200万のアグリカンタイプである皮膚外用剤。
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