JP2017002028A

JP2017002028A - Ｃｔｉｐ２遺伝子発現増強剤

Info

Publication number: JP2017002028A
Application number: JP2016097556A
Authority: JP
Inventors: 秀須藤; Hide Sudo
Original assignee: Mikimoto Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Mikimoto Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2015-06-11
Filing date: 2016-05-16
Publication date: 2017-01-05
Anticipated expiration: 2036-05-16
Also published as: JP6242939B2

Abstract

【課題】本発明の目的は、Ｃｔｉｐ２遺伝子の遺伝子発現を促進し、セラミド合成を促進し、さらには、アトピー性皮膚炎や乾癬の治療剤として有効な製剤を得ることにある。【解決手段】コーヒーノキの種子抽出物、ウイキョウの抽出物、エキナセア属の植物の抽出物、エンメイシソウの抽出物の１種以上を有効成分として配合すると、上記の目的を達することがわかった。【選択図】図１

Description

本発明は、Ｃｔｉｐ２遺伝子発現増強剤に関し、さらにはセラミド合成促進、アトピー性皮膚炎、乾癬の治療に有効な製剤に関する。

核内受容体は、細胞内タンパク質の一種であり、ホルモンなどが結合することで細胞核内でのＤＮＡ転写を調節する受容体である。発生、恒常性、代謝など、生命維持の根幹に係わる遺伝子転写に関与している。
Ｃｔｉｐ２（COUP (Chicken ovalbumin upstream promoter) - TF (transcription factor) - interaction protein 2）もその１つであるが、その機能については、ほとんど解明されていない。
しかしながら、Ｃｔｉｐ２遺伝子の発現が促進されると、セラミド合成に関わる遺伝子の発現も促進させることがわかり、Ｃｔｉｐ２遺伝子の発現を試験することがセラミド合成促進成分のスクリーニングとして用いることができることがわかった。（特許文献１）

アトピー性皮膚炎は、痒みを伴う慢性の皮膚疾患であり、アレルギー体質の人の罹患が多く見られる。アトピー性皮膚炎患者の皮膚においては、健常皮膚と比べてセラミド量が減少していることが知られており（非特許文献１）、乾癬は、慢性の皮膚角化疾患であり、遺伝的素因が影響すると考えられている。病変部位においては、非病変部位と比べて表皮角化細胞の増殖が亢進しており、バリア機能の低下やセラミド量の減少が見られる（非特許文献２）ので、セラミド合成を促進することによってアトピー性皮膚炎や乾癬の治療に有効なことが分かっている。

コーヒーノキ（Coffee arabica L.又はその他同属植物）は、コーヒーノキ属アカネ科のエチオピア原産の常緑低木で、その抽出物は、美白、皮膚老化防止、毛髪保護等の用途で化粧品に用いられている。（特許文献２〜４）
ウイキョウ（茴香）(Foeniculum vulgare)はフェンネルともいい、若い葉および種子（フェンネルシード、果実）は、甘い香りと苦みが特徴で消化促進・消臭に効果があり、香辛料（スパイス）、ハーブとして、食用、薬用、化粧品用などに古くから用いられている。
また、痩身用皮膚外用剤、コラーゲンゲル収縮促進剤、グルタチオン増強用組成物としても用いられている。（特許文献５〜７）

ムラサキバレンギク（Echinacea purpurea）、エチナシ（ホソバムラサキバレンギク）(Echinacea angustifolia）等のキク科エキナセア属Echinacea（ムラサキバレンギク属ともいう）の植物の葉はハーブティとして飲まれるほか、炎症や傷の治療にも用いられている。
さらに、美白用皮膚外用剤、インボルクリン発現抑制剤、線維芽細胞増殖促進剤、α−グルコシダーゼ活性化剤としても用いられている。（特許文献８〜１１）
エンメイソウ（延命草）はシソ科ヤマハッカ属ヒキオコシ（Isodon japonicus）の全草を乾燥した日本の民間薬で消化不良、食欲不振、腹痛等に用いられてきた。さらに、抗アレルギー剤、抗ヒスタミン剤、抗補体活性剤等、抗肥満化粧料、血小板凝集抑制作用、血管新生抑制剤、タイトジャンクション形成促進剤等の用途が知られている。（特許文献１２〜１７）

特願２０１５−１１８２２２号公報特開２００１−３５４５４５号公報特開平０８−３０１７２２号公報特開平０８−０９２０５７号公報特開平０５−２６２６３６号公報特開平１０−０７２３３６号公報特開２００２−２７５０７９号公報特開２０１３−１７３７３５号公報特開２０１１−８８８４５号公報特開２００６−２４１０３４号公報特開２００５−２９５４６号公報特開平０７−１９６５２２号公報特開平０９−０８７１８９号公報特開平１０−２０３９９０号公報特開２００７−１９７３８８号公報特開２０１２−０２５７７７号公報特開２０１３−０５６８４１号公報

芋川玄爾，油化学，４４：７５１−７６６，１９９５ＣｈｏＹ，ＪＫｏｒｅａｎＭｅｄＳｃｉ，１９：８５９−８６３，２００４

本発明の目的はＣｔｉｐ２遺伝子の遺伝子発現を促進することによって、セラミド合成を促進し、さらには、アトピー性皮膚炎や乾癬の治療剤として有効な製剤を得ることにある。

本発明者らが鋭意検討した結果、コーヒーノキの種子抽出物、ウイキョウの抽出物、エキナセア属の植物の抽出物、エンメイシソウの抽出物にＣｔｉｐ２遺伝子の遺伝子発現を促進す作用があることがわかった。
コーヒーノキの種子、ウイキョウ、エキナセア属の植物、エンメイシソウは、乾燥した後、抽出効率を考えると、細切，乾燥，粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。
乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。
前記抽出に用いる溶媒としては、水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合液を用いる。
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
前記親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。
なお、前記水と親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜２０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１〜１５質量部添加することが好ましい。多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜２０質量部添加することが好ましい。
抽出に使用する有機溶媒の量は、原料となる植物に対して望ましくは５〜１００倍量程度、さらに望ましくは１０〜５０倍量程度が良い。さらに抽出効率を上げるため、抽出溶媒中で撹拌やホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
尚、抽出操作は１回のみの操作に限定されるものではない。抽出後の残渣に再度新鮮な溶媒を添加し、抽出操作を施すこともできるし、抽出溶媒を複数回抽出原料に接触させることも可能である。
必要ならば、その効果に影響のない範囲で更に脱臭、脱色等の精製処理を加えても良く、エバポレーターのような減圧濃縮装置や加熱による溶媒除去などにより、濃縮することができる。
また、この抽出物を合成吸着剤（ダイアイオンＨＰ２０やセファビースＳＰ８２５、アンバーライトＸＡＤ４、ＭＣＩｇｅｌＣＨＰ２０Ｐ等）やデキストラン樹脂（セファデックスＬＨ−２０など）、限外濾過等を用いてさらに精製することも可能である。

本発明のＣｔｉｐ２遺伝子発現増強剤は、経口、注射、外用のいずれでも薬効を発現するが、皮膚外用剤として用いるのが好ましい。皮膚外用剤には、皮膚化粧料、外用医薬部外品、医療用皮膚外用剤が含まれる。

また、皮膚外用剤として用いる場合、本発明のＣｔｉｐ２遺伝子発現増強剤の他に医薬品や化粧品の各種製剤において使用されている界面活性剤、油性成分、保湿剤、高分子化合物、紫外線吸収剤、抗炎症剤、殺菌剤、酸化防止剤、金属イオン封鎖剤、防腐剤、ビタミン類、色素、香料、水等を配合することができる。

上記界面活性剤としては、アニオン性、カチオン性、非イオン性、天然、合成のいずれの界面活性剤も使用できるが、皮膚に対する刺激性を考慮すると非イオン性のものを使用することが好ましい。非イオン性界面活性剤としては、例えばグリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、アルキルグリコシド等が挙げられる。

油性成分としては、油脂類、ロウ類、炭化水素類、高級脂肪酸類、高級アルコール類、エステル類、精油類、シリコーン油類などを挙げることができる。油脂類としては、例えば大豆油、ヌカ油、ホホバ油、アボガド油、アーモンド油、オリーブ油、カカオ油、ゴマ油、パーシック油、ヒマシ油、ヤシ油、ミンク油、牛脂、豚脂等の天然油脂、これらの天然油脂を水素添加して得られる硬化油及びミリスチン酸グリセリド、２−エチルヘキサン酸トリグリセリド等の合成トリグリセリド等が；ロウ類としては、例えばカルナバロウ、鯨ロウ、ミツロウ、ラノリン等が；炭化水素類としては、例えば流動パラフィン、ワセリン、パラフィンマイクロクリスタリンワックス、セレシン、スクワラン、ブリスタン等が；高級脂肪酸類としては、例えばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ラノリン酸、イソステアリン酸等が；高級アルコール類としては、例えばラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、２−ヘキシルデカノール等が；エステル類としては、例えばオクタン酸セチル、オクタン酸トリグリセライド、乳酸ミリスチル、乳酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、アジピン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、オレイン酸デシル、イソステアリン酸コレステロール、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル等が；精油類としては、例えばハッカ油、ジャスミン油、ショウ脳油、ヒノキ油、トウヒ油、リュウ油、テレピン油、ケイ皮油、ベルガモット油、ミカン油、ショウブ油、パイン油、ラベンダー油、ベイ油、クローブ油、ヒバ油、バラ油、ユーカリ油、レモン油、タイム油、ペパーミント油、ローズ油、セージ油、メントール、シネオール、オイゲノール、シトラール、シトロネラール、ボルネオール、リナロール、ゲラニオール、カンファー、チモール、スピラントール、ピネン、リモネン、テルペン系化合物等が；シリコーン油類としては、例えばジメチルポリシロキサン等が挙げられる。これら上述の油性成分は一種又は二種以上を組み合わせて使用することができる。本発明においては、このうち特にミリスチン酸グリセリド、２−エチルヘキサン酸トリグリセリド、ラノリン、流動パラフィン、ワセリン、パラフィンマイクロクリスタリンワックス、スクワラン、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、リノール酸、リノレン酸、イソステアリン酸、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、コレステロール、オクタン酸セチル、オクタン酸トリグリセライド、ミリスチレン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソステアリン酸コレステロール、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル、ハッカ油、トウヒ油、ケイ皮油、ローズ油、メントール、シネオール、オイゲノール、シトラール、シトロネラール、ゲラニオール、ピネン、リモネン、ジメチルポリシロキサンを使用することが好ましい。

本発明のＣｔｉｐ２遺伝子発現増強剤には、さらに下記のような成分を配合することができるが、その成分もこれらに限定されるものではない。
色素類；黄色４号、青色１号、黄色２０２号等の厚生省令に定められたタール色素別表Ｉ及びIIの色素、クロロフィル、リボフラビン、クロシン、紅花、アントラキノン等の食品添加物として認められている天然色素等。
ビタミン類；ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ等。
その他；殺菌剤、防腐剤、その他製剤上必要な成分等。

本発明のＣｔｉｐ２遺伝子発現増強剤には、必要に応じて前記任意成分を加え、常法に従って、クリーム、乳液、化粧水等とすることができる。
コーヒーノキの種子抽出物、ウイキョウの抽出物、エキナセア属の植物の抽出物、エンメイシソウの抽出物のＣｔｉｐ２遺伝子発現増強剤への配合量は固形分として、０．０００００１〜１０．０重量％、好ましくは０．００００１〜３．０重量％、さらに好ましくは０．００００５〜１．０重量％である。

次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。

実施例１
コーヒーノキの種子（乾燥物、細断品）を５０ｇに５０％（Ｖ/Ｖ）エタノール水溶液１リッターを加え、ときどき撹拌しながら、２４時間抽出後、濾過（Ｎｏ５Ｃ）し、これをエバポレートした後、凍結乾燥した。

実施例２
ウイキョウ（Foeniculum vulgare）の果実（乾燥物、細断品）を３０ｇに５０％（Ｖ/Ｖ）エタノール水溶液２リッターを加え、ときどき撹拌しながら、２４時間抽出後、濾過（Ｎｏ５Ｃ）し、これをエバポレートした後、凍結乾燥した。

実施例３
エチナシ（Echinacea angustifolia）の葉（乾燥物、細断品）を３０ｇに３０％（Ｖ/Ｖ）エタノール水溶液２リッターを加え、ときどき撹拌しながら、２４時間抽出後、濾過（Ｎｏ５Ｃ）し、これをエバポレートした後、凍結乾燥した。

実施例４
エンメイソウ（全草、乾燥物、細断品）を３０ｇに５０％（Ｖ/Ｖ）エタノール水溶液２リッターを加え、ときどき撹拌しながら、２４時間抽出後、濾過（Ｎｏ５Ｃ）し、エバポレートしたのち、これを凍結乾燥した。

確認試験
２継代目のヒト包皮由来表皮細胞（クラボウ）を５０−７０％コンフルエントとなるようＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２培地（フェノールレッド不含）で培養後、前日にカルシウム濃度を１．８ｍＭに変更したＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２培地に、実施例１で得た凍結乾燥品を０．２％、０．３％となるように添加し、３７℃、５％ＣＯ2インキュベータ中で２日間培養した。(なお、無添加をコントロールとした。）

＜ＲＮＡの抽出＞
細胞からのＴｏｔａｌＲＮＡの抽出は、トリプシン／ＥＤＴＡで剥離後、ＳＶＴｏｔａｌＲＮＡＩｓｏｌａｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ（プロメガ社）を用い、プロメガ社の添付マニュアル（日本語プロトコールＮｏＴＭ０４８Ｊ２００１年６月作成）に従い調製した。ＲＮＡ濃度は、ＮａｎｏＤｒｏｐ１０００（ＴｈｅｒｍｏＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ）を用い算出した。

＜ＲＴ反応およびリアルタイムＰＣＲ＞
２．５μｇのＴｏｔａｌＲＮＡを使い、ＭＭＬＶＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅＲＮａｓｅＨ−（東洋紡社）を用い、東洋紡社推奨プロトコール（ＴＯＹＯＢＯＢＩＯＣＨＥＭＩＣＡＬＳＦＯＲＬＩＦＥＳＣＩＥＮＣＥ２００８／２００９のページ１−４２）に従いＲＴ反応を行なった。
リアルタイムＰＣＲはＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ７５００リアルタイムＰＣＲＳｙｓｔｅｍを用い、以下のように実施した。ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ法を用い（ＴＨＵＮＤＥＲＢＩＲＤＳＹＢＲｑＰＣＲＭｉｘ，東洋紡社）、７５００リアルタイムＰＣＲＳｙｓｔｅｍの操作マニュアル（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＣＴ（△△ＣＴ）法（ｎ＝３）により遺伝子発現比較を実施した。内部標準としてＧＡＰＤＨを使用した。

結果を図１に示す。
結果を見ると、実施例で得たコーヒーノキの種子抽出物、ウイキョウの抽出物、エキナセア属の植物の抽出物、エンメイシソウの抽出物はＣｔｉｐ２の遺伝子発現量を増加させることが分かった。

実施例１〜４の確認試験（Ｃｔｉｐ２の遺伝子発現量）の結果を示す図である。

Claims

コーヒーノキの種子抽出物、ウイキョウの抽出物、エキナセア属の植物の抽出物、エンメイシソウの抽出物より選ばれる１種又は２種以上の抽出物を有効成分として含有するＣｔｉｐ２遺伝子発現増強剤。
コーヒーノキの種子抽出物、ウイキョウの抽出物、エキナセア属の植物の抽出物、エンメイシソウの抽出物より選ばれる１種又は２種以上の抽出物を有効成分として含有するセラミド合成促進剤。
コーヒーノキの種子抽出物、ウイキョウの抽出物、エキナセア属の植物の抽出物、エンメイシソウの抽出物より選ばれる１種又は２種以上の抽出物を有効成分として含有するアトピー性皮膚炎治療剤。
コーヒーノキの種子抽出物、ウイキョウの抽出物、エキナセア属の植物の抽出物、エンメイシソウの抽出物より選ばれる１種又は２種以上の抽出物を有効成分として含有する乾癬治療剤。