JP2016537011A5 - - Google Patents
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- LG12−系統群の親スブチリシン酵素に対しアミノ酸の変更を含む、LG12−系統群のスブチリシン酵素変異体又はそれらの活性断片であって、前記変更は生産的位置166におけるものであり、前記変異体は、配列番号3のBacillus_sp_LG12sprC_AAC43500;配列番号7のバチルス種(Bacillus sp.)WP010192403 M3−13スブチリシン酵素E(1);配列番号10のバチルス種(Bacillus sp.)DSM 8719スブチリシン酵素Bhon03321;配列番号13のバチルス・ホリコシィ(Bacillus horikoshii)株DSM_9711;配列番号16のバチルス・ホリコシィ(Bacillus horikoshii)株DSM_9712;配列番号19のバチルス・ホリコシィ(Bacillus horikoshii)株DSM_6951;配列番号24のバチルス種(Bacillus sp.)LG12_SprD AAC43581.1;配列番号25のバチルス種(Bacillus sp.)WP010192405 M3−13;配列番号23のバチルス種(Bacillus sp.)KSM−LD1,SB BAD11988;および/または配列番号20のバチルス種(Bacillus sp.)KSM−LD1,SB(BAD21128.1)から選択されたLG12−系統群の親スブチリシン酵素のアミノ酸配列に少なくとも75%の同一性を有し、前記LG12−系統群のスブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号3に示すバチルス種(Bacillus sp.)LG12sprCスブチリシンのアミノ酸配列に対応させて付番される、LG12−系統群のスブチリシン酵素変異体又はそれらの活性断片。
- 前記変更が、前記LG12−系統群のスブチリシン酵素変異体の生産的位置におけるものであり、前記生産的位置において試験した前記変更のうち少なくとも50%が次の基準a)〜c)のうち少なくとも1つを満たし:
a)次の1)〜4)の試験に関し、最小性能指数(PI)がLG12−系統群の親スブチリシン酵素に対し0.9以上であるのに加えて、これらの試験のうちのいずれについてもPIが1.0以上である生産的位置:1)pH9又はpH10下でのPAS−38布見本小片のクリーニング;及びpH6、pH8、又はpH10下でのEMPA−116布見本小片のクリーニングから選択された少なくとも1つのクリーニングアッセイ;2)suc−AAPF−pNAに対する活性;3)タンパク質発現;並びに4)洗剤安定性アッセイ及び熱安定性アッセイから選択される少なくとも1つの安定性アッセイ;
b)次の1)〜4)の試験に関し、最小性能指数(PI)がLG12−系統群の親スブチリシン酵素に対し0.8以上であるのに加えて、これらの試験のうちのいずれについてもPIが1.2以上である生産的位置:1)pH9又はpH10下でのPAS−38布見本小片のクリーニング;及びpH6、pH8、又はpH10下でのEMPA−116布見本小片のクリーニングから選択された少なくとも1つのクリーニングアッセイ;2)suc−AAPF−pNAに対する活性;3)タンパク質発現;並びに4)洗剤安定性アッセイ及び熱安定性アッセイから選択される少なくとも1つの安定性アッセイ;
c)次の1)〜4)の試験に関し、最小性能指数(PI)がLG12−系統群の親スブチリシン酵素に対し0.5以上であるのに加えて、これらの試験のうちのいずれについてもPIが1.5以上である生産的位置:1)pH9又はpH10下でのPAS−38布見本小片のクリーニング;及びpH6、pH8、又はpH10下でのEMPA−116布見本小片のクリーニングから選択された少なくとも1つのクリーニングアッセイ;2)suc−AAPF−pNAに対する活性;3)タンパク質発現;並びに4)洗剤安定性アッセイ及び熱安定性アッセイから選択される少なくとも1つの安定性アッセイ;
ここで、前記生産的位置は、166であり、前記LG12−系統群のスブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号3に示すバチルス種(Bacillus sp.)LG12sprCスブチリシンのアミノ酸配列に対応させて付番される、請求項1に記載のLG12−系統群のスブチリシン酵素変異体又はそれらの活性断片。 - 前記変更が、前記LG12−系統群の酵素変異体の生産的位置におけるものであり、前記生産的位置において試験した前記変更のうち少なくとも60%が次の基準a)〜c)のうち少なくとも1つを満たし:
a)次の1)〜4)の試験に関し、最小性能指数(PI)がLG12−系統群の親スブチリシン酵素に対し0.9以上であるのに加えて、これらの試験のうちのいずれについてもPIが1.0以上である生産的位置:1)pH9又はpH10下でのPAS−38布見本小片のクリーニング;及びpH6、pH8、又はpH10下でのEMPA−116布見本小片のクリーニングから選択された少なくとも1つのクリーニングアッセイ;2)suc−AAPF−pNAに対する活性;3)タンパク質発現;並びに4)洗剤安定性アッセイ及び熱安定性アッセイから選択される少なくとも1つの安定性アッセイ;
b)次の1)〜4)の試験に関し、最小性能指数(PI)がLG12−系統群の親スブチリシン酵素に対し0.8以上であるのに加えて、これらの試験のうちのいずれについてもPIが1.2以上である生産的位置:1)pH9又はpH10下でのPAS−38布見本小片のクリーニング;及びpH6、pH8、又はpH10下でのEMPA−116布見本小片のクリーニングから選択された少なくとも1つのクリーニングアッセイ;2)suc−AAPF−pNAに対する活性;3)タンパク質発現;並びに4)洗剤安定性アッセイ及び熱安定性アッセイから選択される少なくとも1つの安定性アッセイ;
c)次の1)〜4)の試験に関し、最小性能指数(PI)がLG12−系統群の親スブチリシン酵素に対し0.5以上であるのに加えて、これらの試験のうちのいずれについてもPIが1.5以上である生産的位置:1)pH9又はpH10下でのPAS−38布見本小片のクリーニング;及びpH6、pH8、又はpH10下でのEMPA−116布見本小片のクリーニングから選択された少なくとも1つのクリーニングアッセイ;2)suc−AAPF−pNAに対する活性;3)タンパク質発現;並びに4)洗剤安定性アッセイ及び熱安定性アッセイから選択される少なくとも1つの安定性アッセイ;
ここで、前記変更は、残基166(G,K,W,C,F,I,L,A,D,E,H,M,N,Q,S,TおよびY)におけるものであり、ここで、前記LG12変異体のアミノ酸位置は、配列番号3に示すLG12sprCプロテアーゼのアミノ酸配列に対応させて付番される、請求項1に記載のLG12−系統群のスブチリシン酵素変異体又はそれらの活性断片。 - 前記LG12−系統群のスブチリシン酵素変異体の汚れ除去が、配列番号3、7、10、13、16、19、20、23、24および25から選択された前記LG12−系統群の親スブチリシン酵素と比較して向上されている、請求項1〜3のいずれか一項に記載のLG12−系統群のスブチリシン酵素変異体又はそれらの活性断片。
- 前記LG12−系統群の親スブチリシン酵素が、Ser221、His64、及びAsp32を含む触媒三残機;位置55〜58に由来するP、N/D、A、Lモチーフ;Thr103−Leu104モチーフ;Tyr86−Asn/Asp87モチーフ;Ala16−His17モチーフ;Val21−Thr22モチーフ;位置267〜275のV、I、N/D、V/L、E、X、A、L、Qモチーフ;Tyr86−Asn/Asp87モチーフ、及びVal21−Thr22モチーフ;および/またはTyr86−Asn/Asp87モチーフ、Ala16−His17モチーフ、Val21−Thr22モチーフを含むものであり、ここで、前記アミノ酸位置が、配列番号3に示すLG12sprCプロテアーゼのアミノ酸配列に対応させて付番される、請求項1〜4のいずれか一項に記載のLG12−系統群のスブチリシン酵素変異体又はそれらの活性断片。
- 前記LG12−系統群の親スブチリシン酵素が、配列番号3のBacillus_sp_LG12sprC_AAC43500;配列番号7のバチルス種(Bacillus sp.)WO010192403 M3−13スブチリシン酵素E(1);配列番号10のバチルス種(Bacillus sp.)DSM 8719スブチリシン酵素Bhon03321;配列番号13のバチルス・ホリコシィ(Bacillus horikoshii)株DSM_9711;配列番号16のバチルス・ホリコシィ(Bacillus horikoshii)株DSM_9712;配列番号19のバチルス・ホリコシィ(Bacillus horikoshii)株DSM_6951;配列番号24のバチルス種(Bacillus sp.)LG12_SprD AAC43581.1;配列番号25のバチルス種(Bacillus sp.)WP010192405 M3−13;配列番号23のバチルス種(Bacillus sp.)KSM−LD1,SB BAD11988;および/または配列番号20のバチルス種(Bacillus sp.)KSM−LD1,SB(BAD21128.1)である、請求項1〜5のいずれか一項に記載のLG12−系統群のスブチリシン酵素変異体又はそれらの活性断片。
- 請求項1〜6のいずれか一項に記載のスブチリシン酵素を少なくとも1種含む、組成物。
- 前記組成物が、顆粒、粉末、固体、棒状物、液体、錠剤、ジェル、単位用量又はペースト組成物である、請求項7に記載の組成物。
- 前記組成物が、クリーニング組成物である、請求項7または8に記載の組成物。
- 前記クリーニング組成物が、洗剤組成物である、請求項9に記載の組成物。
- 前記洗剤組成物が、洗濯洗剤、布地柔軟化洗剤、食器洗浄洗剤、及び硬質表面クリーニング洗剤からなる群から選択される、請求項10に記載の組成物。
- 前記組成物が、界面活性剤を更に含む、請求項7〜11のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記界面活性剤が、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、双性イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、半極性非イオン性界面活性剤、及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、少なくとも1つの安定化剤;前記スブチリシン酵素を約0.001〜約10重量%;少なくとも1種の漂白剤;少なくとも1種の補助成分;および/またはアシルトランスフェラーゼ、α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、α−ガラクトシダーゼ、アラビノシダーゼ、アリールエステラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、カラギナーゼ、カタラーゼ、セロビオヒドロラーゼ、セルラーゼ、コンドロイチナーゼ、クチナーゼ、エンド−β−1、4−グルカナーゼ、エンド−β−マンナナーゼ、エステラーゼ、エキソ−マンナナーゼ、ガラクタナーゼ、グルコアミラーゼ、ヘミセルラーゼ、ヒアルロニダーゼ、ケラチナーゼ、ラッカーゼ、ラクターゼ、リグニナーゼ、リパーゼ、リポキシゲナーゼ、マンナナーゼ、オキシダーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペクチンアセチルエステラーゼ、ペクチナーゼ、ペントサナーゼ、ペルオキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、ホスファターゼ、ホスホリパーゼ、フィターゼ、ポリガラクツロナーゼ、プロテアーゼ、プルラナーゼ、還元酵素、ラムノガラクツロナーゼ、β−グルカナーゼ、タンナーゼ、トランスグルタミナーゼ、キシランアセチル−エステラーゼ、キシラナーゼ、キシログルカナーゼ、及びキシロシダーゼ、その他のメタロプロテアーゼ酵素、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される1種以上の追加の酵素又は酵素誘導体を更に含む、請求項12に記載の組成物。
- 前記組成物が、リン酸塩を含まない、請求項9〜13の何れか一項に記載の組成物。
- 表面又は物品を、請求項1〜6のいずれか一項に記載のスブチリシン酵素を少なくとも1種含むクリーニング組成物または請求項7〜14のいずれか一項に記載の組成物と接触させる工程を含む、クリーニング方法。
- 前記表面又は物品をそれぞれ前記組成物と接触させた後に、前記表面又は物品をすすぎ洗いする工程を更に含む、請求項15に記載の方法。
- 前記物品が食器または布地である、請求項15または16に記載の方法。
- 請求項1〜6のいずれか一項に記載のスブチリシン酵素を含む、地加工組成物、動物飼料組成物、皮革加工組成物、羽毛加工組成物、穀物加工組成物、セルロース由来エタノール加工組成物、レンズクリーニング組成物、組織創傷清拭組成物または組織細胞培養用添加剤組成物。
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