JP2016534747A5 - - Google Patents

Claims (15)

1. Ｍｆｓｄ２ａタンパク質を介した輸送を判定する１以上の化合物のスクリーニング方法であって、
   （ａ）そのゲノムにてＭｆｓｄ２ａ遺伝子のホモ接合性の破壊を含む遺伝子操作されたマウス（ＫＯマウス）及び野生型マウスに前記１以上の化合物を含む生物学的混合物を接触させることと、
   （ｂ）ＫＯマウス及び野生型マウスの組織または体液にて前記１以上の化合物の量を測定することと、
   （ｃ）ＫＯマウス及び野生型マウスの組織または体液にて前記１以上の化合物の量を比較することとを含み、
   ＫＯマウスに比べて野生型マウスにおいて前記１以上の化合物の量がより多いことがＭｆｓｄ２ａタンパク質を介した前記化合物の輸送の指標である、前記スクリーニング方法。
2. （ｉ）ＫＯマウスが機能的なＭｆｓｄ２ａタンパク質を発現しない；
   （ｉｉ）生物学的混合物が乳、魚油抽出物、またはＬＰＣ製剤に由来する；
   （ｉｉｉ）組織または体液が脳、眼、肝臓、心臓、または母乳である；
   （ｉｖ）接触が経口投与または静脈内投与を介する；および／または
   （ｖ）前記１以上の化合物が栄養補給剤であり、任意で、栄養補給剤がＬＰＣ製剤である、
   請求項１に記載の方法。
3. Ｍｆｓｄ２ａタンパク質を介した輸送を判定する１以上の化合物のインビトロのスクリーニング方法であって、
   （ａ）ヒトの野生型のＭｆｓｄ２ａのｃＤＮＡもしくはヒトの変異Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを含む細胞株またはモックで形質移入した細胞に前記１以上の化合物を含む生物学的混合物を接触させることと、
   （ｂ）ヒトの野生型のＭｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを含む細胞及びヒトの変異Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを含む細胞またはモックで形質移入した細胞にて前記１以上の化合物の量を測定することと、
   （ｃ）野生型のＭｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを含む細胞及びヒトの変異Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを含む細胞またはモックで形質移入した細胞にて前記１以上の化合物の量を比較することとを含み、
   ヒトの変異Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを含む細胞またはモックで形質移入した細胞に比べて野生型のＭｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを含む細胞において前記１以上の化合物の量がより多いことがＭｆｓｄ２ａタンパク質を介した前記化合物の輸送の指標である、前記スクリーニング方法。
4. Ｍｆｓｄ２ａタンパク質による輸送を調節する化合物のインビトロのスクリーニング方法であって、
   （ａ）ヒトの野生型のＭｆｓｄ２ａのｃＤＮＡもしくはヒトの変異Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを含む細胞株またはモックで形質移入した細胞をＬＰＣ−パルミチン酸、ＬＰＣ−オレイン酸、ＬＰＣ−ステアリン酸、ＬＰＣ−リノール酸、ＬＰＣ−リノレン酸、ＬＰＣ−アラキドン酸、ＬＰＣ−ドコサヘキサエン酸、または誘導体に接触させることと、
   （ｂ）ヒトの野生型のＭｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを含む細胞及びヒトの変異Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを含む細胞またはモックで形質移入した細胞にて、試験化合物の存在下及び非存在下で、ＬＰＣ−パルミチン酸、ＬＰＣ−オレイン酸、ＬＰＣ−ステアリン酸、ＬＰＣ−リノール酸、ＬＰＣ−リノレン酸、ＬＰＣ−アラキドン酸、ＬＰＣ−ドコサヘキサエン酸、または誘導体の取り込みを測定することとを含み、
   試験化合物の非存在下に比べて試験化合物の存在下で、ヒトの野生型のＭｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを含む細胞へのＬＰＣ−パルミチン酸、ＬＰＣ−オレイン酸、ＬＰＣ−ステアリン酸、ＬＰＣ−リノール酸、ＬＰＣ−リノレン酸、ＬＰＣ−アラキドン酸、ＬＰＣ−ドコサヘキサエン酸、または誘導体の取り込みの増加したレベルまたは低下したレベルが、Ｍｆｓｄ２ａタンパク質による輸送の調節因子としての化合物を示し、任意で、試験化合物がＭｆｓｄ２ａタンパク質により直接輸送される、前記スクリーニング方法。
5. （ｉ）細胞がＨＥＫ２９３である、および／または
   （ｉｉ）ヒトの変異Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡがヒトのＭｆｓｄ２ａタンパク質配列におけるＤ９３またはＤ９７に相当する位置で変異を含む、
   請求項３または４に記載のインビトロの方法。
6. ＬＰＣ−１６：０、ＬＰＣ−１８：０、ＬＰＣ−１８：１、ＬＰＣ−１８：２ ｎ−６、ＬＰＣ−２０：４ ｎ−６、ＬＰＣ−２２：６ ｎ−３、ＬＰＣ−２０：５ ｎ−３から成る群から選択される１以上のＬＰＣ成分を含む栄養補給剤であって、任意で、それぞれ３７ｍＭ、１４ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、４ｍＭ、２５ｍＭ、及び０．５ｍＭの濃度であり、任意で、
   （ｉ）ヒトのアルブミン；および／または
   （ｉｉ）イントラリピッド（商標）、ＳＭＯＦＫａｂｉｖｅｎ（商標）、オメガベン（商標）、リポフンジン（商標）、ＣｌｉｎＯｌｅｉｃ（商標）、及びリポシン（商標）から成る群から選択される追加の脂質剤
   をさらに含む、前記栄養補給剤。
7. ＰＣ−１６：０、ＰＣ−１８：０、ＰＣ−１８：１、ＰＣ−１８：２ ｎ−６、ＰＣ−２０：４ ｎ−６、ＰＣ−２２：６ ｎ−３、ＰＣ−２０：５ ｎ−３から成る群から選択される１以上のＰＣ成分を含む栄養補給剤であって、任意で、それぞれ３７ｍＭ、１４ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、４ｍＭ、２５ｍＭ、及び０．５ｍＭの濃度であり、
   （ｉ）ヒトのアルブミン；および／または
   （ｉｉ）イントラリピッド（商標）、ＳＭＯＦＫａｂｉｖｅｎ（商標）、オメガベン（商標）、リポフンジン（商標）、ＣｌｉｎＯｌｅｉｃ（商標）、及びリポシン（商標）から成る群から選択される追加の脂質剤
   をさらに含む、前記栄養補給剤。
8. 神経学的疾患のインビボでの診断方法に使用するための標識した足場またはコンジュゲートであって、前記標識した足場またはコンジュゲートが、対象臓器においてＭｆｓｄ２ａタンパク質と相互作用する、前記標識した足場またはコンジュゲート。
9. （ｉ）足場がＬＰＣである；
   （ｉｉ）標識が蛍光である；
   （ｉｉｉ）標識がフッ素化される；
   （ｉｖ）臓器が脳または眼である；
   （ｖ）標識された足場がＴｏｐ−Ｆｌｕｏｒ−ＬＰＣまたはＮＢＤ−ＬＰＣである；
   （ｖｉ）コンジュゲートが化合物とＬＰＣの間にあり、化合物がＬＰＣのω炭素を介してＬＰＣにコンジュゲートされる；
   （ｖｉｉ）足場またはコンジュゲートがＢＢＢを越えるまたはＢＢＢで蓄積する；および／または
   （ｖｉｉｉ）足場またはコンジュゲートが脳または眼にて蓄積する、
   請求項８に記載の使用のための足場またはコンジュゲート。
10. 化合物にコンジュゲートされた足場を含む組成物であって、足場またはコンジュゲートが、対象臓器においてＭｆｓｄ２ａタンパク質と相互作用する、前記組成物。
11. （ｉ）足場がＬＰＣであり、任意で、化合物がＬＰＣのω炭素を介してＬＰＣにコンジュゲートされる；
    （ｉｉ）化合物が医薬剤である；および／または
    （ｉｉｉ）化合物が造影剤である、
    請求項１０に記載の組成物。
12. 対象における神経学的欠損に対する増加した易罹患性のインビトロの評価方法であって、
    （ａ）Ｍｆｓｄ２ａ遺伝子の全部または一部を含む、対象から得られた生物試料を提供することと；
    （ｂ）試料におけるＭｆｓｄ２ａ遺伝子またはその一部にて変異または多型の存在を検出することと、
    （ｃ）Ｍｆｓｄ２ａ遺伝子またはその一部における変異または多型の存在に基づいて、対象が神経学的欠損に対する増加した易罹患性を有することを評価することとを含む、前記評価方法。
13. （ｉ）変異がＴｈｒ１５９ＭｅｔまたはＳｅｒ１６６Ｌｅｕである；
    （ｉｉ）多型が表４、７、または８にて列記される単一ヌクレオチド多型の１以上である；
    （ｉｉｉ）変異が機能の喪失を生じる；
    （ｉｖ）変異がＭｆｓｄ２ａの低次形態対立遺伝子である；
    （ｖ）神経学的欠損が記憶及び学習における欠損または不安である；
    （ｖｉ）対象が受胎前のまたは妊娠中の女性であり、任意で、女性が、Ｍｆｓｄ２ａ遺伝子またはその一部において変異または多型が存在するならば、高ＤＨＡ食またはＬＰＣを用いた静脈内処置若しくは腸内処置を投与され；任意で、ＬＰＣがＬＰＣ−ＤＨＡを含む；
    （ｖｉｉ）対象が認知機能に関する問題があると診断された小児または成人であり、任意で、認知機能が学習障害または不安であり、任意で、小児または成人が、Ｍｆｓｄ２ａ遺伝子またはその一部において変異または多型が存在するならば、高ＤＨＡ食またはＬＰＣを用いた静脈内処置若しくは腸内処置を投与され、任意で、ＬＰＣがＬＰＣ−ＤＨＡを含む；
    （ｖｉｉｉ）検出することが、Ｍｆｓｄ２ａ遺伝子またはその一部と優先的にハイブリッド形成するオリゴヌクレオチドプローブに試料を接触させることを含み；
    （ｉｘ）検出することが、Ｍｆｓｄ２ａ遺伝子またはその一部をＰＣＲによって増幅することを含む；および／または
    （ｘ）検出することが、Ｍｆｓｄ２ａ遺伝子、その一部、または相当するＭｆｓｄ２ａのｃＤＮＡもしくはその一部の配列を決定することを含む、
    請求項１２に記載のインビトロの方法。
14. 対象に由来するＭｆｓｄ２ａタンパク質の輸送機能のインビトロの評価方法であって、
    （ａ）第１の細胞にて試験Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを、第２の細胞にて野生型Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを発現させることと、
    （ｂ）試験Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを発現する第１の細胞及び野生型Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを発現する第２の細胞をＬＰＣ−ＤＨＡまたはＬＰＣ−ω３脂肪酸に接触させることと、
    （ｃ）試験Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを発現する第１の細胞及び野生型Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを発現する第２の細胞へのＬＰＣ−ＤＨＡまたはＬＰＣ−ω３脂肪酸の取り込みを測定することとを含み、
    野生型Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを発現する第２の細胞に比べて試験Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡを発現する第１の細胞へのＬＰＣ−ＤＨＡまたはＬＰＣ−ω３脂肪酸の取り込みの低下したレベルが、試験Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡが輸送に不十分なタンパク質をコードすることを示す、前記評価方法。
15. （ｉ）試験Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡが、Ｔｈｒ１５９ＭｅｔまたはＳｅｒ１６６Ｌｅｕの変異をコードする；および／または
    （ｉｉ）試験Ｍｆｓｄ２ａのｃＤＮＡが、表４、７、または８に列記される多型の１以上をコードする、
    請求項１４に記載のインビトロの方法。