JP2016529204A - 癌、特に前立腺癌を標的とする合成抗体模倣化合物（ＳｙＡＭ） - Google Patents

癌、特に前立腺癌を標的とする合成抗体模倣化合物（ＳｙＡＭ） Download PDF

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Abstract

本発明は、抗体模倣化合物として機能する化合物に関する。これらの化合物は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に選択的に結合する少なくとも１つの癌細胞結合部分と、ＦＣ免疫受容体、好ましくはＦｃγＲＩ受容体を調節するＦＣ受容体結合部分とを含む二官能性／多官能性の化合物である。本発明の化合物は、ＰＳＭＡを上向き調節する癌細胞に選択的に結合し、そのような相互作用を通じて、化合物のＦｃ受容体結合部分がＦｃ受容体、好ましくはＦｃγＲＩ受容体に近接して位置して、それにより癌細胞に対する患者の体液応答を調節（好ましくは上向き調節）することができる。本発明の化合物のそのような生物学的作用を通じて、転移性癌細胞を含む癌細胞、特に前立腺癌細胞が免疫調節されることができ、患者において好ましい癌の治療をもたらす。癌を治療するため及び／又は癌の転移の可能性を低下させるためのそのような化合物の使用方法が、本発明の更なる態様である。

Description

本発明は、合成抗体模倣化合物として機能する化合物に関する。本発明の化合物は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に選択的に結合する少なくとも１つの癌細胞結合部分と、ＦＣ免疫受容体、好ましくはＦｃγＲＩ受容体を調節するＦＣ受容体結合部分とを含む二官能性／多官能性の化合物である。本発明の化合物は、ＰＳＭＡを上向き調節する癌細胞に選択的に結合し、そのような相互作用を通じて、化合物のＦｃ受容体結合部分がＦｃ受容体、好ましくはＦｃγＲＩ受容体に近接して位置して、それにより癌細胞に対する患者の体液応答を調節（好ましくは上向き調節）することができる。本発明の化合物のそのような生物学的作用を通じて、転移性癌細胞を含む癌細胞、特に前立腺癌細胞が免疫調節されることができ、患者において好ましい癌の治療をもたらす。癌を治療するため及び／又は癌の転移の可能性を低下させるためのそのような化合物の使用方法が、本発明の更なる態様である。
支援金の授与事項
本発明は、アメリカ国立衛生研究所からの補助金Ｎｏ．１ＤＰ２ＯＤ００２９１３−０１として支援を受けた。したがって、政府は、本発明において一定の権利を保有する。
増えている豊富なデータは、目的にする治療法が、従来の化学療法よりも少ない副作用で悪性細胞を破壊するように患者自身の免疫系を動員することができることを示す。２０１１年度に生まれた米国人のうち４１％、ほぼ２人に１人が、生涯中に癌が発生するものと推算されるため、更に有効な癌免疫療法を生み出すことは、最優先の課題である。そのような治療法は、先天的な免疫細胞を腫瘍関連の抗原（ＴＡＡ）に向けるモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）だけでなく、様々な形態（アジュバントと共に腫瘍蛋白質を注入すること又は生体外プライム樹状細胞を注入することを含む）を有しており、長期持続的な抗腫瘍Ｔ細胞を誘導することを意図して設計された癌「ワクチン」を含む。
本発明の発明者らの研究開発の目的は、腫瘍に対する免疫応答を刺激することができる新たな化合物を開発することである。モノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）の導入は、免疫療法、特に癌治療の分野を変革させた。ｍＡｂｓが癌治療の中心になったものの、そこには重大な欠点がある1。ｍＡｂｓは、それらの危険な免疫学的副反応、経口的生物利用能の欠如、そして高い生産及び投与費用によって制限される。抗体の機能を模倣する合成分子の開発が、前述した問題に対する有効な解決策を提供するであろう。
現在の研究開発は、免疫系の自然な反応を利用する新たな治療法の開発を模索している。それらの効能及び応答性を増加させようとする非結合モノクローナル抗体のＦｃ領域の最適化に大きな関心が集められてきた2、3。モノクローナル抗体の最近開発された誘導体のうちの１つである二重特異的抗体は、異なる標的特異性を有している２つのＦａｂをライゲーションしたものである。一方のＦａｂ領域は関心のある標的蛋白質に結合し、他方はＦｃγＲＩ6を含む選択される免疫受容体に結合し4、5、例えばＨＥＲ２及びＦｃγＲＩを標的とする二重特異的抗体6である。別の方法では、本発明の発明者ら及び他の人々は、複合的な免疫学的機能を実行又はテンプレートすることが可能な合成システムを構築する合理的設計を利用する7。
その結果、免疫系を調節することができるいくつかの抗体動員分子（ＡＲＭｓ）8が提供された。ＡＲＭｓは、高い親和性及び特異性を有している病原性の表面蛋白質に結合する標的結合末端（ＴＢＴ）、及び内因性抗体を動員する抗体結合末端（ＡＢＴ）を含有する二官能性の合成分子である。本発明者らは、そのような分子が癌及びウイルス感染細胞の両方に対して選択的に標的免疫応答を引き起こすことができることを示した。このようなテーマが、最近検討されている4。
ＡＲＭｓの開発にも拘わらず、完全な合成分子を用いた免疫系の操作は、まだその初期段階に止まっている9。本発明において、比較的小さい分子量の抗体模倣体が、標的化及び免疫エフェクターの機能の両方を実行することができるが、これは、癌、特に前立腺癌の治療において非常に有望な方法である。そのような完全な合成抗体模倣体の開発について、その方法は、実質的に全ての癌、特に前立腺癌及び転移性前立腺癌を含む、ＰＳＭＡが発現されるあらゆるところにに利用されることができるが、本発明の発明者らは、前立腺癌を本研究の病理学的標的とした。
本発明の開発のための標的として前立腺癌を選択したことは、疾患及び死亡をもたらすその深刻性を反映する。前立腺癌は、アメリカ人男性において癌関連の死亡原因のうち２番目に挙げられるものであるが、現存する治療戦略は、しばしば再発及び好ましくない副作用を起こす10。アメリカ人男性の６人に１人が、彼の生涯中に前立腺癌が発病するものと予測される。現在のところは、前立腺癌を標的とする臨床的に承認されたモノクローナル抗体に基づく薬物はない。明らかに前立腺癌の治療のための免疫学的方法は、大きな潜在性を有した方法であるが、この包括的な方法が成功するためには、現在の免疫学的方法の好ましくない特性が改善されなければならない。本発明は、そのような問題を解決する代わりの方法を提示する。
この方法において示される現在の研究は、モノクローナル抗体の治療の潜在性を制限する短所のうちの一部を克服することができる抗体の完全な合成の官能性模倣体の新たな開発をもたらした。そのような新たな方法は、現在の制限に対処する次世代生物学の利点と共に、従来の小型分子の利点を活用する。本明細書において、本発明者は、いわゆる「前立腺癌を標的とする合成抗体模倣体（ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍｉｍｅｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ）（ＳｙＡＭ−Ｐ）」を報告するが、これは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）を提示する標的に向けてＦｃγＲＩの免疫学的機能を再指向し、それにより前立腺癌細胞（転移性前立腺癌細胞を含む）を含む、ＰＳＭＡを上向き調節する癌細胞を標的にして根絶させることができる。本発明者らは、本明細書において抗体の特性及び機能を提示する合成分子の最初の例を示すが、それは病理学的標的、この場合においては転移性癌細胞を含む癌細胞（特に前立腺癌細胞及び転移性前立腺癌細胞）に対する免疫応答の選択的標的化を引き起こす。
本発明は、特定されたＳｙＡＭ−Ｐの化合物に関する。ＳｙＡＭ−Ｐは、先天的及び後天的な抗腫瘍免疫応答の両方、特にＦｃγＲＩを通じて調節される免疫応答を刺激するように設計された多官能性の小型分子である。本発明者らは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）を発現する前立腺癌細胞に内因性抗体を再指向することができる二官能性の抗体動員分子（ＡＲＭｓ）を以前に開発した。本発明は、ＦｃγＲＩの調節因子（体液応答の強力な調節因子）をＡＲＭスキャフォールドに付着させてＡＲＭｓの免疫刺激特性を増強する。親化合物由来の結合部分は、ＰＳＭＡの上向き調節を示す癌細胞、特に前立腺癌細胞を標的とするのに対し、追加のＦｃγＲＩモチーフは、腫瘍に対する免疫記憶の誘導のための局地的体液応答を活性化させる。その結果、本発明におけるように１つに連結されていない個々の官能性分子の抗癌活性よりも、かなり大きな相乗的抗癌活性を提供する効果がもたらされる。
本発明の目的は、特に前立腺癌及び転移性前立腺癌を含む、実質的にはあらゆる癌（転移性癌を含む）を治療するために用いられ得るキメラ二官能性及び多官能性の化合物を提供することである。
本発明の別の目的は、癌細胞、特に前立腺癌細胞及び転移性前立腺癌細胞の前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に結合する細胞結合部分と、癌細胞死をもたらして癌の治療をするために、Ｆｃ受容体、特にＦｃγＲＩ受容体に結合して、化合物が結合する癌細胞に対する体液／抗体応答を調節するＦｃ受容体結合部分とを含む化合物を提供することである。
本発明の更なる目的は、医薬組成物を提供するために用いられ得るキメラ二官能性及び多官能性の化合物を提供することであり、その医薬組成物は、癌、特に転移性前立腺癌を含む前立腺癌の治療を補助する更なる生物活性剤又は薬剤を含む医薬組成物を含む。
本発明の更に別の目的は、予測できない相乗的な抗癌活性を示す本発明のキメラ二官能性及び多官能性の化合物を用いた癌、特に転移性前立腺癌を含む前立腺癌の治療方法を提供することである。
本発明の更に別の目的は、特に転移性前立腺癌を含む癌の転移を抑制する及び／又は可能性を低下させる方法を提供することである。
本発明のそのような目的及び／又はその他の目的が、本明細書に記載されている本発明の検討によって容易に得られるであろう。
一実施形態において、本発明は、癌細胞上の前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）に結合し、それとは別に［ＩＢＴ］基を介してＦｃ受容体、多くの場合にＦｃγＲＩ受容体に結合する二官能性又は多官能性の化合物を提供する。Ｆｃ受容体（多くの場合にＦｃγ受容体、最も多くの場合にＦｃγＲＩ受容体）の調節を通じて、癌細胞（多くの場合、前立腺癌細胞及び／又は転移性癌細胞）の表面上に位置している化合物が免疫エフェクター細胞を刺激し、それによって免疫信号並びに相乗的に作用する食作用及び／又は細胞傷害反応を増大させて、組織からの癌細胞の除去を補助し、それによって疾患を治療する。
一実施形態において、本発明は、次の一般式による化合物に関する。
Figure 2016529204
 式中、［ＩＢＴ］は、Ｆｃ受容体（多くの場合にＦｃγ受容体、最も多くの場合にＦｃγＲＩ受容体）結合部分であり、
［ＣＢＴ］は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に結合する細胞結合部分であり、
Ｌ1及びＬ2は、リンカー基（その基は、１つ以上の二官能性のコネクタ基［ＣＯＮ］、又は延長されたリンカー基を提供するために２つ以上のリンカーを含むことができる）であり、
［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］は、存在する場合、少なくとも１つの［ＩＢＴ］基を少なくとも１つの［ＣＢＴ］基にリンカーを介して連結する二官能性又は多官能性のコネクタ基（好ましくは多官能性）であり、
ＭＣＯＮは、０〜１０、多くの場合に１〜１０、より多くの場合に１〜５、多くの場合に０、１又は２の整数であり、
ｎ及びｎ’は、それぞれ独立して、１〜１５、多くの場合に２〜１０、多くの場合に２〜５、より多くの場合に２又は３、あるいは２、３、４、５又は６の整数であり、
ＮＬ１及びＮＬ２は、それぞれが０〜１０、多くの場合に１〜１０、多くの場合に２〜５、より多くの場合に２又は３の整数であり、但しｎ≧ＮＬ１かつｎ’≧ＮＬ２である。
別の実施形態において、［ＩＢＴ］は、ＣＰ３３（図２及び図１４を参照）であり、ＦｃγＲＩ受容体の調節因子として優れた活性を示し、癌細胞、特に前立腺癌の、オプソニン化を含む選択的な食作用及び／又は細胞傷害反応をもたらす免疫エフェクター細胞（例えば、マクロファージ及び／又は好酸球）の増強に特に有効である。その結果、癌細胞、したがって癌組織を消去する。更に、本発明の化合物は、患者の癌組織に対して長期間の免疫性を誘導し、よって癌再発の可能性を低下させると思われる。従って、本発明の化合物は、前立腺癌及び転移性前立腺癌を含む癌及び転移性癌の治療及び予防に用いられ得る。本発明の化合物は、多くの場合に少なくとも１つの［ＩＢＴ］基及び少なくとも２つの［ＣＢＴ］基、多くの場合に少なくとも２つの［ＩＢＴ］基及び２つの［ＣＢＴ］基、そして多くの場合に２つ又は３つの［ＩＢＴ］基及び２つ又は３つの［ＣＢＴ］基を含む。
更なる本発明の化合物は、次の化学構造の化合物を含む。
Figure 2016529204
 式中、Ｒ1は［ＩＢＴ］基であり、多くの場合にＣＢ３３であり、
Ｒ2は［ＣＢＴ］基であり、多くの場合に
Figure 2016529204
 であり、ここでｋは４であり、これは、任意でコネクタ基［ＣＯＮ］に（多くの場合に環窒素においてトリアゾールコネクタ基に）直接連結され、
Figure 2016529204
 ここでＣＬは、
Figure 2016529204
 であり、
ｍは、０〜１２の整数、多くの場合に０、１、２、３、４、５、６であり、
ｉＬは、０又は１、多くの場合に１であり、
Ｘは、本明細書において他に記載されているような［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基、多くの場合に次の基であり、
Figure 2016529204
 式中、Ｙ4は、Ｃ−Ｈ又はＮであり、
各Ｘ”は、独立して親電子性又は親核性の基、好ましくは（ＣＨ2）n"Ｏ、（ＣＨ2）n"ＮRCON、（ＣＨ2）n"Ｓ、（ＣＨ2）n"又は（ＣＨ2）n"Ｃ＝Ｏから誘導されるか、又は１つ以上のＸ”が［ＣＯＮ］基、多くの場合にアミンを介して［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］の環構造に連結されている次の基
Figure 2016529204
 であり、ここでＣＬは上記と同様であり、
置換基ＲＣＯＮは、Ｈ又はＣ1−Ｃ3アルキル、好ましくはＨ又はＣＨ3であり、
ｎ”は、０、１、２又は３である。
Ｌは、本明細書において他に記載されているような、多くの場合に次の化学構造の基（［ＣＢＴ］部分を［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］分子に連結する。図２、化合物１、２又は３を参照。）であるリンカー基であり、
Figure 2016529204
 式中、Ｒaは、Ｈ又はＣＨ3であり、最も多くの場合にＨであり、
ｍは、１〜１２の整数、多くの場合に１、２、３、４、５又は６であり、
ｍ”は、１、２、３、４、５又は６の整数、多くの場合に６であり、
ｔは、０、１、２、３、４、５又は６であり、
ｉＬは、０又は１、多くの場合に１であり、ここでＬは、一端において［ＣＯＮ］基及び［ＣＢＴ］基に連結されることができ、他端において［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基に連結されることができる。
あるいは、上記Ｌは、［ＩＢＴ］基を［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］分子に（図２の化合物１におけるように）、直接又は少なくとも１つのアミノ酸（多くの場合に１〜１０のアミノ酸基、多くの場合に図２の化合物１において示されているリジンジ又はグリシンリジンジペプチド）を介して連結する。
あるいは、［ＩＢＴ］を［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基に連結するリンカーＬの場合（図２の化合物２におけるように）、リンカーＬは、１〜１０のペプチド、多くの場合にリジンアミノ酸又はジリジンオリゴペプチド（リジンの遊離したカルボン酸及びアミンは、カルボン酸の場合にはアミンで、又は遊離アミンの場合にはアシル基で、末端キャッピングされ得る）又は更なる反応性を防止する他の基を含む、ペプチドリンカーである。
あるいは、２つ以上の［ＩＢＴ］基を［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基に連結するリンカーＬの場合、多くの場合にＬは、次のアミン基を含むエチレンオキシドで製造される複合リンカー基である（図２の化合物３に示されているように）。
Figure 2016529204
 式中、ｑは、１、２、３又は４であり、ｑ’は、１〜１２、多くの場合に１、２、３、４、５又は６であり、
ケト基は、次のジケト基
Figure 2016529204
 及びアミノ酸、多くの場合にリジン、又はアミノ酸ジペプチド、多くの場合にジリジンを介して［ＩＢＴ］、多くの場合にＣＰ３３に連結されるアミノ酸基に連結される。そのリジンのうちの１つは、直接ＣＰ３３に結合されると共に、上記エチレンオキシドアミン基を［ＣＯＮ］基、最も多くの場合にトリアゾールを介して［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基に連結する別のアミノ酸（多くの場合にリジン）に結合される。
他の実施形態において、本発明の化合物は、次の構造で表され得る化合物、又はその薬学的に許容される塩、立体異性体、溶媒和物若しくは同質異像体である。
Figure 2016529204
 式中、Ｒ1は、［ＩＢＴ］基であり、多くの場合にＣＢ３３であり、
Ｒ2は、［ＣＢＴ］基であり、多くの場合に
Figure 2016529204
 であり、ここでｋは４であり、それは任意でコネクタ基［ＣＯＮ］に（多くの場合に環窒素でトリアゾールコネクタ基に）直接連結され、
Ｘは、本明細書において他に記載されている［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基、多くの場合に次の基であり、
Figure 2016529204
 式中、Ｙ4は、Ｃ−Ｈ又はＮであり、
各Ｘ”は、独立して親電子性又は親核性の基、好ましくは（ＣＨ2）n"Ｏ、（ＣＨ2）n"ＮRCON、（ＣＨ2）n"Ｓ、（ＣＨ2）n"又は（ＣＨ2）n"Ｃ＝Ｏから誘導され、又は１つ以上のＸ”が、次の［ＣＯＮ］基であって、
Figure 2016529204
 アミンを介して［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］の環構造に連結され、
式中、ＣＬは、
Figure 2016529204
 であり、
ＣＬにおいてｍは、０〜１２の整数、多くの場合に０、１、２、３、４、５又は６であり、
ｉＬは、０又は１、多くの場合に１であり、
置換基ＲＣＯＮは、Ｈ又はＣ1−Ｃ3アルキル、好ましくはＨ又はＣＨ3であり、
ｎ”は、０、１、２又は３であり、
Ｚ及びＹは、それぞれ独立して、
Figure 2016529204
 である。
本発明の更なる態様において、医薬組成物は、前述したような二官能性／多官能性の化合物の有効量を、任意であるが好ましくは、薬学的に許容される担体、添加剤又は賦形剤と組み合わせて含有する。別の態様において、医薬の組み合わせ組成物は、本明細書に記載されている二官能性／多官能性の化合物の少なくとも１つの有効量を、前立腺癌、特に転移性前立腺癌を含む癌、又は癌の二次的な状態又は影響（例えば、本明細書において他に記載されているような骨の痛み、過形成、骨粗鬆症など）の治療に用いられる少なくとも１つの更なる薬剤と組み合わせて含有する。
本発明の更なる態様において、本発明の化合物は、必要とする患者における転移性癌を含む癌、特に男性患者における前立腺癌を治療するため又はその癌の可能性を低下させるため、及び癌、特に前立腺癌が転移する可能性又は寛解中の癌が再発する可能性を低下させるために用いられる。癌の治療方法は、必要な患者に本明細書において他に記載されている三官能性のキメラ化合物の有効量を、薬学的に許容される担体、添加剤又は賦形剤と組み合わせ、特に前立腺癌を含む癌、転移性癌又は１つ以上のその二次的な状態又は影響の治療に有効な少なくとも１つの更なる薬剤と任意で更に組み合わせて投与することを含む。
本発明はまた、癌患者の身体の他の組織、その中でも特に骨、リンパ（リンパ節）系、膀胱、輸精管、腎臓、肝、肺及び脳への伝播又は転移を低減又は抑制する前立腺癌の抑制方法に関する。
本発明はまた、ＰＳＭＡを保有している非癌細胞の破壊が、治療用途、特に癌治療における治療用途あり得る場合に関する。例えば、ＰＳＭＡが数多くの非前立腺癌細胞の新生血管上では発見されるが、正常血管ではそうでないことを考慮すると、本発明は、そのような癌の新生血管を標的化し、癌の生長及び伝播を抑制することによって、他の形態の癌の抗血管新生治療のために用いられ得る。
Ａ）は、合成抗体模倣体の作用の提案機序を示し、Ｂ）は、Ｆｃ受容体に結合するＰＳＭＡに対するモノクローナル抗体の間での、相互作用の際の膜の距離及び長さの必要条件のモデリングを示し、Ｃ）は、モノクローナル抗体の鋳型からのＳｙＡＭ−Ｐの設計の発展のスキームを示す。 本発明の化合物及びこれと関連する部分を例示する。ＣＰ３３は、ＦｃγＲＩ標的化モチーフであり、１，ＳｙＡＭ−Ｐ１は、アミノカプロイック部で連結された単一のＦｃγＲＩ及びＰＳＭＡ結合モチーフを提示する第１世代である。２，ＳｙＡｍ−Ｐ２は、単一のＣＰ３３モチーフに連結されている一対のＰＳＭＡ標的化モチーフを提示する第２世代である。３，ＳｙＡＭ−Ｐ３は、単一のＣＰ３３モチーフに連結されている一対のＰＳＭＡ標的化モチーフを提示する第３世代である。ビオチン部分は、本明細書において開示されている実験において、化合物が容易に分離又は同定され得るようにするための手段として示される。実際に、本発明の治療用化合物は、ビオチン分子の含有を避け、その化合物は、図に示されているビオチン部分に結合されているアミン基に水素、アルキル基又はアシル基を含む。３，ＳｙＡＭ−Ｐ３は、一対のＣＰ３３標的化部分／分子に連結された一対のＰＳＭＡ標的化モチーフを提示する第３世代である。 Ａ）ＰＳＭＡを発現するＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞への化合物１の用量に依存した結合を示す。Ｂ）ＦｃγＲＩを発現するＩＩＡ１．６細胞への１（ＳｙＡｍ−Ｐ１）の用量に依存した結合を示す。Ｃ）ＦｃγＲＩを発現するＩＩＡ１．６細胞と可溶性の組換えヒトＰＳＭＡとの間で三重複合体を形成する１の能力を示す。Ｄ）１によって誘発された、ＩＦＮ−γプライムＵ９３７細胞によるＰＳＭＡ標識ビーズに対するスーパーオキシド急増の発生を示す。食作用及びスーパーオキシド急増のデータは、３つの独立した状況において３回ずつ行われた代表的な実験である。Ｅ）用量及びＰＳＭＡに依存する、エフェクターとしてのＩＦＮ−γプライムＵ９３７細胞及び蛍光ポリスチレンＰＳＭＡ標識ビーズを用いた、１によって誘発される食作用を示す。 Ａ）ＰＳＭＡ標識ビーズに対して化合物２（ＳｙＡＭＰ−２）及び３（ＳｙＡＭＰ−３）によって誘発されたＩＦＮ−γプライムＵ９３７細胞による食作用の比較を示す。用量及びＰＳＭＡ依存反応が、化合物２と比べて、化合物３によって有効範囲及び程度の増大で見られる。Ｂ）化合物２及び３による用量に依存するＰＳＭＡ標識ビーズに対するプライムＵ９３７細胞によるスーパーオキシド急増の比較を示す。化合物３の範囲及び量が増大している。Ｃ）ＩＦＮ−γを用いて化合物３によって誘発されたＰＳＭＡ発現のＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞の食作用を示す。Ｄ）食作用カップの形成（ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ｃｕｐ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ）と比較して、完結した食作用の代表画像での食作用のアムニスフローサイトメトリー（ａｍｎｉｓ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）画像を示す。図示されたチャンネルは、明視野、標的（Ｆ１１染料ＤｉＯ染色）、核（ＤＡＰ１染色）、マクロファージ（段階Ｆ１２ ＤＩＤ）、及び重ね合わせ画像である。 表１は、５０ｎＭの化合物２の存在下での、ＰＳＭＡコーティングされた６μｍのビーズのＩＦＮ−γプライムＵ９３７細胞による食作用を示す。表は、８．２ｐｍｏｌ／ビーズによってフィコエリトリン標識された抗ＰＳＭＡ抗体を用いてのμｍ2当たりの測定されたＰＳＭＡ、８．２ｐｍｏｌ／ビーズと比較された積載容量で５．７ｐｍｏｌ／ビーズ及び２．９ｐｍｏｌ／ビーズについてのμｍ2当たりの計算されたＰＳＭＡ、フィコエリトリン抗ＰＳＭＡ抗体を用いてのＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞のＰＳＭＡの測定、プライムＵ９３７細胞及び５０ｎＭの化合物２を用いて行われた標的の食作用を示す。 ＩＦＮ−γプライムＵ９３７細胞による６μｍのＰＳＭＡ標識ビーズの食作用を示す。様々な濃度の化合物１又は化合物２によって誘発された食作用反応の比較。 Ａ）長さ及び疎水性において異なる尿素ＰＳＭＡ結合部分を連結する異なるリガンドの構造を示す。Ｂ）は、ＩＦＮ−γプライムＵ９３７細胞による６μｍのＰＳＭＡ標識ビーズの食作用を示す。様々なリンカーの長さ及び組成を有しているＣＰ３３に連結された一対のＰＳＭＡ結合モチーフを有している様々な濃度のＳｙＡＭによって誘発された食作用反応の比較。 Ａ）過度の濃度がＦｃ受容体ＳｙＡＭ−Ｐ結合の減少を誘発するプロゾーン現象を示す（ＰＳＭＡを有しているＳｙＡＭ−Ｐがそのまま残っているにもかかわらず）。Ｂ）分析用三重複合体モデルに対するデータフィットのオーバーレイを示す。効能及び有効性における増加は、ＳｙＡＭ−Ｐ１からＳｙＡＭ−Ｐ２への標的の親和性についての５増加の要素と一致する。効能及び有効性の観察された増加は、ＳｙＡＭ−２からＳｙＡＭ−Ｐ３への２桁の増加と一致する。弱い結合親和性の改善によるＳｙＡＭ−Ｐ３についての増加は、分析用モデルにおいてより大きな正味の効果を有する。 ５０ｎＭのＳｙＡＭ−Ｐ３の存在下における、ＰＳＭＡによってコーティングされた６μｍのビーズの、ＩＦＮ−γプライムＵ９３７細胞による食作用を示す。Ａ）は、ヒトＩｇＧの濃度（ＮＭ）を増加させることによる食作用の抑制を示し、これはＦｃ受容体を備えた分子の相互作用を抑制する。Ｂ）は、２−ＰＭＰＡの濃度の増加による食作用の抑制を示し、これは分子及びＰＳＭＡの間の相互作用を抑制する。 Ａ）は、様々な濃度のＳｙＡＭ−Ｐ３の存在下での、＋／−標的ＰＳＭＡ＋ビーズを比較してのスーパーオキシド急増の分析曲線（ＡＵＣ）の下側の面積を示す。分析時間の間にスーパーオキシドの蓄積はほとんど示されなかった。Ｂ）は、ピークのスーパーオキシド生成に掛かった時間（分）を示し、ＳｙＡＭ−Ｐ３単独での存在下において、やはりバックグラウンドのスーパーオキシドの検出がほとんどなかった。 ６．２５ｎＭのＳｙＡＭ−Ｐ３の存在下における、ＩＦＮ−γプライムＵ９３７細胞によるＰＳＭＡ発現ＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞の食作用を示す。Ａ）は、ヒトＩｇＧによる濃度の増加（ｎＭ）による食作用の抑制を示すが、これは分子のＦｃ受容体との相互作用を抑制する。Ｂ）は、２−ＰＭＰＡの濃度の増加による食作用の抑制を示すが、これは分子とＰＳＭＡとの間の相互作用を抑制する。 抗ＤＮＰ抗体（１３３ｎＭ）及び様々な濃度の化合物３又はＡｒｍＰ８の存在下での、Ｆｎ−γプライムＵ９３７細胞によるＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞の食作用を示す。分子のないバックグラウンドから差し引かれた食作用。化合物３についてのバーは、ＡｒｍＰ８についてのものよりも顕著に低い濃度での食作用を明示する。 表２は、アムニスの食作用を示す。付着した二重陽性は、標的及びエフェクターが２つの異なる色で染色されている従来のＦＡＣＳにおいてＡＤＣＰとスコアされる全ての事象を示す。次に、アムニスイメージストリームフローサイトメトリーによって収集された全ての焦点が合った事象を「完了した」（標的がマクロファージによって完全に取り囲まれていること）又は「開始された」（マクロファージ及び標的の間に明白な食作用カップ（ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ｃｕｐ）が形成されていること）に分類した。 ＦｃγＲＩの調節因子としての活性を示し、本発明によって［ＩＢＴ］基として用いられることができる多数のＦｃ受容体結合部分を示す。図において、それぞれの化合物は、遊離したヒドロキシル（ＯＨ基）又はアミン（ＮＨ２）における付着結合と共に示される。 ＳｙＡｍ−Ｐ１の化学合成のためのスキームを提供する。この合成は、明細書において化学合成の項で述べられる。 図１５に示されている方法によって合成される最終生成物のＳｙＡＭ−Ｐ１を示す。診断適用において、リジンアミノ酸及びＣＰ３３部分に共有結合しているビオチンが、未反応のアミノ酸側鎖を有している任意の個数のアミノ酸によって容易に置換され得ることに留意されたい。 診断適用のためのビオチン基を含むＳｙＡＭ−Ｐ２の化学合成を示す。 ＳｙＡＭ−Ｐ３の特定の部分に対する化学合成（尿素の形成）及びリンカーの合成を示す。 ［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基を含むＳｙＡＭ−Ｐ３のための第２リンカー合成の化学合成を示す。 ＳｙＡＭ−Ｐ３をもたらす更なる修飾のためのアジドを含む［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基に、ＣＢＴ基を連結する化学合成を示す。アジドは、その後に、２つのＣＰ３３基と縮合されてＳｙＡＭ−Ｐ３を形成する複合体の中間体を形成するために、アセチレン部分がアジド部分と反応するときに形成されるチアゾール基に連結される２つの遊離したアミン基を含む複合体のアセチレン化合物と反応することが示される。 ジケトリンカー基のＣＰ３３−リジン中間体への導入を示し（リジンのカルボン酸基は、アミンによって末端キャッピングされてアミド基を形成する）、そのリンカーは、スクシンイミド脱離基によって末端キャッピングされている。図において、最終中間体は、図２２の最終生成物であるＳｙＡＭ−Ｐ３を提供するために、図２０の中間体の２つの遊離したアミン基と反応することが可能なスクシンイミド脱離基をジケトリンカーの遠位端に含む。 最終生成物のＳｙＡＭ−Ｐ３を示す。 ＳｙＡｍ−Ｐ２化合物の合成のための別のリンカーの戦略を示す。スキームは、アミノヘキサン酸ポリペプチドリンカー、ポリエチレングリコールリンカー、及びアミド基を介して延びるリンカーに更に連結されるポリエチレングリコールリンカーを用いた、ＳｙＡＭ−Ｐ２の合成を示す。 別のリンカーを用いたＳｙＡＭ−Ｐ２についての化学合成のステップを示す。
以下の用語は、本発明を説明するのに用いられる。用語がここで定義されない場合には、その用語は、文脈においてその用語を本発明の説明での使用に適用して、当業者により認識される技術的な意味を有するものである。
本願で用いられる用語「化合物」は、特に示さない限り、本明細書に開示される特定の化合物のいずれか、好ましくは本明細書に開示されるＳｙＡＭを指し、その互変異性体、位置異性体、幾何異性体、及び適用可能である場合には光学異性体（鏡像異性体）、並びにその薬学的に許容される塩及び誘導体（プロドラッグの形態を含む）を含む。文脈中で使用される範囲内では、用語化合物は通常、単一化合物を指すが、立体異性体、位置異性体及び／又は光学異性体（ラセミ混合物を含む）などのその他の化合物、並びに開示の化合物の特定の鏡像異性体又は鏡像異性体が濃縮された混合物を含んでもよい。この用語はまた、文脈において、活性部位への投与及び送達を促進するように変更された化合物のプロドラッグの形態も指す。本発明の化合物の説明では、特に種々の置換体、リンカー及び連結分子、並びにそれに関連する変化体が説明されることが特筆される。本願に記載の分子は、以下で一般的に記述されるように、安定な化合物であることが当業者に理解される。
用語「患者」又は「対象」は、明細書の全体を通じて文脈中で、本発明による組成物で予防的な治療（予防）を含む治療が提供される動物、一般的に哺乳類、好ましくはヒトを述べるために使用される。ヒトの患者などの特定の動物、又はヒトの男性患者などの特定の性別の患者に特異的な感染、状態又は疾病の治療については、用語患者は、特定の動物を指す。本発明による化合物は、特に前立腺癌、とりわけ転移性前立腺癌を含め、癌の治療に有用である。
用語「有効」は、本願において、特に示さない限り、文脈において、意図された結果を生み出すか又はもたらすために使用される化合物又は組成物（単独又は組み合わせでの１つ以上のＳｙＡＭ）の量を述べるのに使用され、その結果は、本願で他に述べるような、癌の抑制、又は癌の二次的な状態、疾病状態若しくは兆候についての対象の治療に関係する。この用語は、本願において他に記載される、その他の全ての有効量又は有効濃度の用語（用語「治療的に有効な」も含む）を包含する。
本願で用いられる用語「治療する」、「治療している」及び「治療」等は、癌、特に前立腺癌、又は前立腺癌の転移の危険にある患者に恩恵を与えるあらゆる行為を指し、特に、癌増殖の抑制、癌細胞又は組織の減少、癌の転移が進行することの予防又は遅延、癌に対して二次的に起こる疾病状態発症の予防又は遅延、又は癌の鎮静若しくは治癒の少なくとも１つの症状の減少又は抑制を通して状態を改善することを含む。本願で用いる治療は、予防的治療及び治癒的治療の両方を包含する。用語「予防」が使用される場合、上記で別に述べられたように、癌の転移を含む癌の治療の文脈中で、発生の可能性又は発生の重症度を低下させることを意味する。
用語「腫瘍の形成」は、正常細胞の増殖を生じさせない又はその中断を生じた状況下で、制御されずに持続的に進められる腫瘍細胞の増殖を示す。腫瘍の形成は、「新生物」をもたらすが、これは組織のあらゆる新たで異常な生長、特に新たな生長を意味するとして本明細書において定義され、ここでの細胞の生長は、制御されずに持続的に進められる。従って、腫瘍の形成は「癌」を含むが、これは本明細書において正常な制御の損失の独特の特性を有する腫瘍細胞の増殖を指し、これは調節されない生長、分化の欠如、局地的組織の浸湿及び／又は転移をもたらす。
本明細書で用いる場合、新生物は、限定ではないが、同種の組織における正常な増殖と比べての、対象又は宿主の組織中の細胞の形態上の異常、及び対象の組織中の細胞の病的増殖を含む。更に、新生物は、浸潤性又は非浸潤性の良性腫瘍及び悪性腫瘍（例えば結腸腫瘍）を含む。悪性新生物は、より高度の異形成、又は細胞の分化及び配向の喪失を示し、更に浸潤及び転移の性質を有する点において、良性新生物と区別される。本発明の標的細胞が生じる新生物又は腫瘍の例は、限定ではないがとりわけ、癌腫（例えば扁平上皮細胞癌、腺癌、肝細胞癌、及び腎細胞癌）、特に膀胱、腸、乳房、子宮頸管、結腸、食道、頭部、腎臓、肝臓、肺、頸部、卵巣、膵臓、前立腺、及び胃の癌腫；白血病；良性及び悪性のリンパ腫、特にバーキットリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫；良性及び悪性の黒色腫；骨髄増殖性疾患；肉腫、特にユーイング肉腫、血管肉腫、カポジ肉腫、脂肪肉腫、筋肉腫、末梢性神経上皮腫、及び滑膜肉腫；中枢神経系の腫瘍（例えば、グリオーマ、星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫、膠芽腫、神経芽細胞腫、神経節神経腫、神経節膠腫、髄芽細胞腫、松果体細胞腫瘍、髄膜腫、髄膜肉腫、神経線維腫、及びシュヴァン鞘腫）；生殖系列腫瘍（例えば、腸癌、乳癌、前立腺癌、子宮頸部癌、子宮癌、肺癌、卵巣癌、精巣癌、甲状腺癌、星状細胞腫、食道癌、膵臓癌、胃癌、肝臓癌、結腸癌、及び黒色腫；混合型の新生物、特に癌肉腫及びホジキン病；並びに混合起源の腫瘍、例えばウィルムス腫瘍や奇形癌腫を含み、これらは、１つ以上の本発明の化合物によって治療され得る。Ｂｅｅｒｓ ａｎｄ Ｂｅｒｋｏｗ（ｅｄｓ．），Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，１７．ｓｕｐ．ｔｈ ｅｄ．（Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ Ｓｔａｔｉｏｎ，Ｎ．Ｊ．：Ｍｅｒｃｋ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，１９９９，９７３−７４，９７６，９８６，９８８，９９１参照。
本発明の化合物の抗血管新生化合物としての活性により、本発明は、実質的にあらゆる癌を治療する包括的な適用の可能性を有しており、よって本発明の化合物、組成物及び方法は、癌の治療に包括的に適用することが可能である。蛋白質の標的がほぼ非前立腺癌細胞の新生血管上で発見されるという点を考慮すると、本発明における化合物はまた、他の癌の種類についての抗血管新生療法としての役割も果たし得る。ほとんどの場合、その化合物は前立腺癌及び転移性前立腺癌の治療に用いられるだけでなく、前立腺癌が転移される可能性を低下させる。
本発明のある特定の態様において、治療される癌は、前立腺癌又は転移性前立腺癌である。別に、転移性前立腺癌は、疾病の末期において、癌患者の実質的に全ての組織で見つかるかもしれず、一般的には、転移性前立腺癌は、精嚢、リンパ系／節（リンパ腫）、骨、膀胱組織、腎組織、肝組織、及び脳（脳の癌／腫瘍）を含めた実質的に全ての組織で見つかる。したがって、本発明は、一般的に適用可能であり、病因にかかわらず、あらゆる組織でのあらゆる癌を治療するのに用いられ得る。
用語「腫瘍」は、悪性又は良性の成長又は腫脹を述べるのに使用される。
用語「前立腺癌」は、男性の生殖器官の腺である前立腺において癌が発症する疾病を述べるのに用いられる。これは、前立腺の細胞が変異し制御不能に増殖を開始する時に発生する。これらの細胞は、前立腺から身体のほぼあらゆる他の部分、特に、その他の組織の中でも骨若しくはリンパ節、腎、膀胱及び脳でさえも転移する可能性がある（転移性前立腺癌）。前立腺癌は、痛み、排尿の困難性、性行での問題、勃起障害を引き起こす可能性がある。その他の症状は、疾病の末期の間に潜在的に進行する可能性がある。
前立腺癌の検出率は、世界中で大きく異なり、南及び東アジアでは、ヨーロッパ、特にアメリカと比較して発見頻度が低い。前立腺癌は、５０歳過ぎの男性で最も頻繁に発症し、男性で最も高頻度に見られる癌の種類の１つである。しかし、前立腺癌の発症する多くの男性は、症状を有さず、治療を受けることなく、最終的にその他の原因で死に至る。これは、前立腺の癌は、多くの場合、進行が遅く、病気になった人の多くは、６０歳を越えているためである。したがって、前立腺癌とは無関係な原因でしばしば死亡する。遺伝及び食事などの多くの因子が、前立腺癌の発症に関係している。前立腺癌の存在は、症状、健康診断、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）又は生検により示される場合がある。ＰＳＡ検査の正確性及びスクリーニングにおけるその有用性については、懸念がある。疑いのある前立腺癌は、前立腺の生検を採取し顕微鏡でこれを検査することにより、通常は確認される。ＣＴスキャン及び骨スキャンなどの更なる検査は、前立腺癌が広がっているかどうかを検討するために行われてもよい。
治癒目的での前立腺癌に対する治療の選択肢は、初めは外科手術及び放射線療法である。ホルモン療法、化学療法、光子治療、凍結外科手術、高密度焦点式超音波（ＨＩＦＵ）などのその他の治療もまた、臨床シナリオ及び所望の結果に応じて存在する。本発明は、これらの治療のいずれか１つ以上を増強するために又はそれらに代わって使われることができる。
男性の年齢及び元の健康状態、転移の程度、顕微鏡での状況、及び初期治療に対する癌の反応性は、疾病の転帰を決定するのに重要である。治癒の意図をもって局部的な前立腺癌（前立腺内に含まれる腫瘍）を治療するかどうかを決定することは、患者の生存及び生活の質の観点における期待される恩恵と弊害との間での患者の妥協である。
前立腺癌を評価する重要な部分は、病期、又は癌が広がっている程度を決定することである。病期を知ることは、予後を定める助けとなり、治療法を選択する際に有用である。最も一般的な分類は、４期のＴＮＭ（腫瘍／節／転移の略称）分類である。この構成要素は、腫瘍の寸法、関与するリンパ節の数、及び他の転移の存在を含む。
いかなる病期分類によってもなされる最も重要な差異は、癌がまだ前立腺内に留まっているか、又は転移性であるかである。ＴＮＭ分類では、臨床のＴ１及びＴ２の癌は、前立腺のみで見つかり、一方Ｔ３及びＴ４の癌は、他の場所に広がっており、その他の組織に転移している。いくつかの検査が、広がりの証拠を探すために使われ得る。これらは、骨盤への広がりを評価するコンピュータ断層撮影、骨への広がりを探索する骨スキャン、並びに前立腺被膜及び精嚢を詳しく評価する直腸コイル磁気共鳴影像法を含む。骨スキャンは、転移する多くのその他の癌に見られるのとは反対に、骨の転移の領域における増加した骨密度による骨芽細胞の外見をしばしば明らかにする。コンピュータ断層撮影（ＣＴ）及び磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）は、現在、メタ分析による前立腺癌を患う患者でのリンパ節転移の可能性の評価において、重要な情報を何も追加しない。
前立腺癌は、早期に発見されれば治療が比較的容易である。前立腺の生検の後、病理医は、顕微鏡で試料を検査する。癌が存在すれば、病理医は、腫瘍の悪性度を報告する。悪性度は、腫瘍組織が通常の前立腺組織と異なる程度を示し、腫瘍の成長の早さを示唆する。グリソン分類は、前立腺の腫瘍を２〜１０に等級付けするのに使用され、グリソンスコアが１０である場合、最も異常の程度が高いことを示す。病理医は、顕微鏡で観察された最も一般的な形態について１〜５の数を割り当て、そして２番目の最も一般的な形態に関して同様に行う。これらの２つの数の合計が、グリソンスコアである。ホイットモア−ジェーエット病期は、時に用いられる別の方法である。腫瘍の悪性度は、治療法の提案を決定するのに使用される主な因子の一つであることから、腫瘍の適切な等級付けは重要である。
早期の前立腺癌は通常、無症状である。しばしば、定期健診で分かったＰＳＡの上昇に関しての検査で診断される。しかし、時に前立腺癌は、良性の前立腺肥大などの疾病の症状としばしば同様の症状を発症する。これらは、頻尿、夜間での排尿増加、尿の安定な流れを開始し維持することの困難性、血尿、及び痛みを伴う排尿を含む。前立腺癌は、前立腺が尿道前立腺部を取り囲んでいることから、泌尿器の機能障害に関係する。したがって、前立腺内部の変化は、泌尿器の機能に直接影響を与える。輸精管は、尿道前立腺部に精液を届け、前立腺自体からの分泌物が精液成分に含まれることから、前立腺癌はまた、勃起障害又は痛みを伴う射精などの性機能及び性的能力での問題をもたらす可能性がある。
進行した前立腺癌は、身体の他の部位に広がることがあり、これは更なる症状をもたらす可能性がある。最も一般的な症状は、しばしば椎骨（脊椎骨）、骨盤又は肋骨で起こる骨痛である。大腿骨などのその他の骨への癌の広がりは、通常、骨の近位部についてである。脊椎における前立腺癌もまた、脊髄を圧迫し、下肢の脱力、尿失禁及び便失禁を起こすことがある。
前立腺癌の具体的な原因は、未だ不明である。前立腺癌を発症する男性の危険性は、その年齢、遺伝子、人種、食事、生活様式、医薬、及びその他の要因に関係する。主な危険要因は、年齢である。前立腺癌は、４５歳未満の男性では一般的ではないが、加齢に伴い一般的となる。診断時の平均年齢は７０である。しかし、多くの男性は、前立腺癌であることを全く分からない。
男性の遺伝的背景は、前立腺癌を発症させる危険の一因となる。このことは、特定の人種集団、前立腺癌を患う男性の一卵性双生児、及び特定の遺伝子を有する男性に見られる前立腺癌の発症率増加により示唆される。前立腺癌を患う兄弟又は父親を有する男性は、前立腺癌発症の通常の危険性の２倍の危険性を有する。スカンジナビアにおける双子の研究で示唆されるように、前立腺癌の危険性の４０％は、遺伝的因子により説明され得る。しかし、前立腺癌の原因である単一の遺伝子は見出されておらず、多くの異なる遺伝子が関与している。女性における卵巣癌及び乳癌の重大な危険因子である２つの遺伝子（ＢＲＣＡ１及びＢＲＣＡ２）もまた、前立腺癌に関与している。
特定の食物、ビタミン及びミネラルの規定量は、前立腺癌の危険の一因となる。前立腺癌の危険を増加させるおそれのある食事要因は、ビタミンＥ、ミネラルのセレン、緑茶及びビタミンＤの摂取量の低さなどである。大規模な研究が、乳製品、特にパルミチン酸ビタミンＡが添加された低脂肪牛乳及びその他の乳製品について行われている。合成ビタミンＡのこの形態は、亜鉛及びタンパク質と反応して非吸収性の複合体を形成することから、前立腺癌に関連している。また、前立腺癌は、特定の乳製品におけるウシ成長ホルモンの含有にも関係している。
また、前立腺癌と、医薬、医療及び医学的状態との間にもいくらかの関係がある。アスピリン、イブプロフェン又はナプロキセンなどの抗炎症剤の日常的な使用は、前立腺癌の危険を減少させるようである。スタチン類として公知のコレステロール降下剤の使用もまた、前立腺癌の危険を減少させるようである。前立腺の感染又は炎症（前立腺炎）は、前立腺癌の可能性を増加させるようであり、またクラミジア、淋病又は梅毒などの性感染症の感染は、危険性を増加させるようである。肥満、及びテストステロンの血中濃度の上昇は、前立腺癌の危険を増大させるようである。
前立腺癌は、通常の精液を分泌する前立腺細胞が癌細胞に変異した場合に開始する、アデノカルシノーマ又は腺癌として分類される。アデノカルシノーマが最も一般的である前立腺の領域は、辺縁部である。病初では、癌細胞の小塊は、他の正常な前立腺に留められており、上皮内癌又は前立腺上皮内腫瘍（ＰＩＮ）として知られる状態である。ＰＩＮが癌の前駆体であるという証明はないが、癌と密接に関連する。時間と共に、これらの癌細胞は増殖し始め、周囲の前立腺組織（間質）に広がり、腫瘍を形成する。最終的には、腫瘍は、精嚢若しくは直腸などのすぐ近くの器官を冒すのに十分大きく成長することがあり、又は腫瘍細胞は、血流やリンパ系を移動する能力を得ることがある。身体の他の部位を冒し得る細胞の塊であることから、前立腺癌は、悪性の腫瘍と考えられる。他の器官へのこの浸潤は、転移と称される。前立腺癌は、骨、リンパ節、直腸及び膀胱に最も一般的に転移する。
前立腺癌において、正常な前立腺の正常な腺は、異常な腺及び細胞の塊に取って代わられる。男性が前立腺の症状を有する場合、又はスクリーニング検査が癌の危険性の増大を示す場合、より浸襲的精査が提供される。前立腺癌の診断を完全に確認し得る唯一の検査は、顕微鏡観察のために前立腺の小片を取る生検である。しかし、生検に先立って、前立腺及び尿路についてのより多くの情報を収集するのに複数の他の手段が用いられる場合がある。膀胱鏡検査法は、尿道の下方から挿入された薄く柔軟性のある撮像管を用いて、膀胱の内部から尿路を見せる。経直腸的超音波断層法は、直腸におけるプローブからの音波を用いて前立腺の像を生成する。
生検の後、組織試料は、次に顕微鏡で検査され、癌細胞が存在するかどうかを明らかにし、そして見られた癌の顕微鏡的特徴（又はグレソンスコア）を評価する。また、組織試料は、転移した悪性細胞の出所を明らかにするために、ＰＳＡの存在及び他の腫瘍のマーカーのために染色されてもよい。早期前立腺抗原−２（ＥＰＣＡ−２）及びプロスタソーム分析など、前立腺癌の診断のための複数の他の可能性のある手法が行われている。
本発明による化合物を用いた治療に加えて、前立腺癌のための治療（予防的治療を含む）は、食事性セレン、ビタミンＥ、リコピン、大豆食品、ビタミンＤ、緑茶、オメガ３脂肪酸及び植物エストロゲンで、前立腺癌を減少させる役割を支持する。選択的エストロゲン受容体モジュレータであるトレミフェンは、初期試験において有望である。テストステロンのジヒドロテストステロンへの変換を抑制する（及び細胞成長傾向を低下させる）２つの医薬、フィナステリド及びデュタステリドは、有用であることが示されている。アブラナ科の野菜（カリフラワー及びブロッコリー）に見られる植物化学物質のインドール−３−カルビノール及びジインドリルメタンは、好ましい抗アンドロゲン特性及び免疫調節特性を有する。前立腺癌の危険性は、菜食主義者の食生活で低下される。
前立腺癌の治療は、ホルモン療法のみならず、積極的監視、外科手術（前立腺切除又は睾丸摘出）、小線源療法（前立腺癌小線源療法）を含む放射線療法及び外部ビーム放射を含んでもよい。下記を含む複数のホルモン療法の形態があり、それぞれが本発明の化合物と組み合わされてもよい。
・前立腺癌細胞内においてテストステロン及びＤＨＴの作用を直接抑制するフルタミド、ビカルタミド、ニルタミド、及び酢酸シプロテロンなどの抗アンドロゲン剤。
・ＤＨＥＡなどの副腎アンドロゲンの産生を抑制するケトコナゾール及びアミノグルテチミドなどの薬剤。これらの薬剤は、精巣において産生される９５％のアンドロゲンを抑制することができる他の方法と組み合わせてのみ一般的に使用される。これらの組み合わされた方法は、完全アンドロゲン除去療法（ＴＡＢ）と呼ばれ、抗アンドロゲン剤を用いても達成され得る。
・作動薬及び拮抗薬を含む、ＧｎＲＨモジュレータ。ＧｎＲＨ拮抗薬は、ＬＨの産生を直接抑制し、一方でＧｎＲＨ作動薬は、初期刺激作用の後に下方制御の過程によってＬＨを抑制する。アバレリックスは、ＧｎＲＨ拮抗薬の例であり、一方でＧｎＲＨ作動薬としては、ロイプロリド、ゴセレリン、トリプトレリン及びブセレリンが挙げられる。
・酢酸アビラテロンは、７０％の患者でＰＳＡ値及び悪性の末期前立腺癌における腫瘍の寸法を減少させるのに使用され得る。ソラフェニブもまた、転移性前立腺癌を治療するのに使用されてもよい。
上記の各治療は、特定の状況においてその使用を制限するという欠点を有する。ＧｎＲＨ作動薬は、最終的に睾丸摘出と同様の副作用を発症するが、治療の初期においてより悪い症状を発症することがある。ＧｎＲＨ作動薬が最初に使用される時、テストステロンの急上昇が転移性癌による骨痛の増加をもたらす可能性があり、そのため抗アンドロゲン剤又はアバレリックスが、これらの副作用を弱めるようにしばしば添加される。エストロゲンは、心臓血管疾患及び血栓に対する危険を増加させることから、一般的に使用されない。抗アンドロゲンは、一般的にインポテンスを発症せず、通常は骨及び筋肉の減少が少ない。ケトコナゾールは、長期使用で肝障害を発症する可能性があり、アミノグルテチミドは、皮膚発疹を発症する可能性がある。
進行した段階の前立腺癌のための緩和ケアは、延命、及び転移性疾患の症状の軽減に重点が置かれる。上述したように、酢酸アビラテロンは、ソラフェニブのように進行した段階の前立腺癌を治療するのに有望である。化学療法は、疾病の進行を遅らせ、かつ症状を先送りするように提供されてもよい。最も一般的に用いられる投薬計画は、化学療法薬のドセタキセルを、プレドニゾンなどの副腎皮質ステロイドと組み合わせる。ゾレドロン酸などのビスホスホネートは、骨折などの骨格合併症、又は耐ホルモン性の転移性前立腺癌を患う患者での放射線療法の必要性を遅らせることが示されている。アルファラジンは、骨の転移を標的にして使用されてもよい。第二相の試験は、患者の生存期間を長期化させ、痛みを減少させ、かつ生活の質を向上させることを示す。
転移性の疾患による骨痛は、モルヒネ及びオキシコドンなどのオピオイド系鎮痛剤で治療される。骨の転移に対する外部ビーム放射線療法は、痛みの緩和をもたらす場合がある。ストロンチウム８９、リン３２又はサマリウム１５３などの特定の放射性同位元素の注射もまた、骨の転移を標的にして、痛みを緩和する一助となる場合がある。
積極的監視及び決定的治療法に対する代わりとして、代替的な治療法もまた、前立腺癌の処置に使用されてもよい。ＰＳＡは、完全菜食主義の食事（魚は許容）、習慣的な運動及びストレスの減少を利用して、明らかな限局性前立腺癌を患う男性において低下されることが示されている。ザクロ果汁や種々のマメ科植物に見られるイソフラボンであるゲニステインなど、多くの他の単剤は、短期試験において、ＰＳＡを減少させ、ＰＳＡの倍加期間を遅延させ、又は短期間の試験において局在化された癌を患う男性における二次的マーカーに対して同様の効果を有することが示されている。
転移性及び進行性の前立腺癌の兆候、二次的状態又は影響は、特に、貧血、骨髄抑制、体重減少、病的骨折、脊髄圧迫、痛み、血尿、尿管及び／又は膀胱出口閉塞、尿閉、慢性腎不全、尿失禁、並びに骨又は軟部組織の転移に関連する症状である。
本発明によるキメラ抗体動員化合物と組み合わせて使用されてもよい追加の前立腺の薬としては、例えば、前立腺肥大用薬／薬剤、並びにエウレキシン、フルタミド、ゴセレリン、ロイプロリド、ルプロン、ニランドロン、ニルタミド、ゾラデックス及びこれらの混合物が挙げられる。上記の前立腺肥大用薬／薬剤としては、例えば、アムベニル、アムボフェン、アムゲナル、アトロセプト、ボロマニル、ブロモジフェンヒドラミン−コデイン、ブロモツス−コデイン、カルデュラ、クロロフェニラミンヒドロコドン、シクロピロックス、クロトリマゾール−ベタメタゾン、ドルセド、デュタセリド、フィナステリド、フロマックス、ゲシル、ヘキサロール、ラミシル、ラナセド、ロプロックス、ロトリゾン、メテナミン、メテン−ベラ−メト Ｂｌ−フェンサル、ｍｅｔｈ−ｈｙｏｓ−ａｔｒｐ−Ｍ Ｂｌｕｅ−ＢＡ−ｐｈｓａｌ、ＭＨＰ−Ａ、ミバニル、プロセド／ＤＳ、Ｒｏ−Ｓｅｄ、Ｓ−Ｔ Ｆｏｒｔｅ、タムスロシン、テルビナフィン、トラク、ツシオネックス、ｔｙ−メテート、ウラミン、ウラチン、ウレトロン、ウリドン、ｕｒｏ−ｖｅｓ、ウルスタット、ウセプト及びこれらの混合物が挙げられる。
用語「免疫結合末端部分」、「免疫結合末端」、又は［ＩＢＴ］は、免疫エフェクター細胞（マクロファージ、好中球、好酸球、樹状細胞など）上のＦｃγＲＩ受容体に結合し、オプソニン作用、食作用、細胞の毒性及び癌細胞の死滅を促進する分子を含む本発明のキメラ化合物のその部分を記載するのに用いられる。本発明に用いるのに好ましいＦｃＲＩ結合部分は、添付の図２に示されているＣＰ３３である。
本発明に用いるための代表的な［ＩＢＴ］基は、添付の図１４に示されるものを含む。それらの化合物のそれぞれが、免疫エフェクター細胞（マクロファージ、好酸球、好中球）と作用して、本明細書において他に記載されている癌細胞に対してこれらのエフェクター細胞による食作用及びその他の活性を誘発するＦｃγＲＩ受容体の調節に用いられ得る。更に、そのような化合物はまた、患者における癌細胞に対する長期間の免疫応答を誘導する能力を提供することができるので、癌の寛解後の再発の可能性を低下させる。
代表的な［ＩＢＴ］基には、例えば、ＣＰ３３（好ましいＩＢＴ）、ＹＵ１５８１４５（４８６１−００６３）、ＹＵ１６０４６９（７１６５−０４０２）、ＹＵ１６０６４２（７５２７−０２３６）、ＹＵ１６０６４５（７５２７−０３１１）、ＹＵ１６０６４７（７５２７−０３２０）、ＹＵ１６４３１３（Ｄ０８６−０５０４）、ＹＵ１６４３４０（Ｄ０８９−０２６７）、ＹＵ１６４３４３（Ｄ０８９−０２８７）、ＹＵ１６４３６７（Ｄ０８９−０３５３）、ＹＵ１６３５１２（Ｃ７６６−０１４０）、ＹＵ１６３５３８（Ｃ７６６−０５７１）、ＹＵ１６３５４０（Ｃ７６６−０５７８）、ＹＵ１６３５１１（Ｃ７６６−０１３５）、ＹＵ１６３５５２（Ｃ７９８−０１４５）、ＹＵ１６３５５４（Ｃ７９８−０１６９）、ＹＵ１６０７９４（７８８９−２４３１）、ＹＵ１６３３８７（Ｃ７２０−０５６２）、ＹＵ１６３３８８（Ｃ７２０−０５６３）、ＹＵ１６２３８４（Ｃ２１８−０１９２）、ＹＵ１６２３８９（Ｃ２１８−０２７１）、ＹＵ１６２３９２（Ｃ２１８−０２８４）、ＹＵ１６２３９３（Ｃ２１８−０２８８）、ＹＵ１６２４０２（Ｃ２１８−０４６０）、ＹＵ１６２４０８（Ｃ２１８−０５２４）、ＹＵ１６５５６８（Ｄ４２０−６０９９）、Ｐ６８０−０１２３（ＹＵ１７０２８６：０１）、ＹＵ１６５５６１（Ｄ４２０−５３４９）、ＹＵ１６５５３１（Ｄ４２０−４９２２）、ＹＵ１６５５５０（Ｄ４２０−５２２０）、ＹＵ１６９５７７（Ｍ０５０−０２９７）、ＹＵ１６２６３６（Ｃ２９１−０１２１）、ＹＵ１６３１００（Ｃ６１１−０４１６）、ＹＵ１６３１０２（Ｃ６１１−０４２１）、ＹＵ１６２２５７（Ｃ２００−０３５７）、ＹＵ１６９１８２（Ｋ８９１−０１４３）、ＹＵ１６９１９７（Ｋ８９１−０２０１）、ＹＵ １６２４１５（Ｃ２１８−０８７０）、ＹＵ １６２４１７（Ｃ２１８−０８７９）、ＹＵ １６２４１３（Ｃ２１８−０８６４）、ＹＵ１６２４１４（Ｃ２１８−０８６８）及びＹＵ１６２７３０（Ｃ３０１−９３４１）が含まれ、それらは、遊離したヒドロキシル又は遊離したアミンにおいて、本発明の化合物の他の構成成分に連結されるように変更される。それぞれのそのような免疫調節化合物は、化合物の遊離したヒドロキシル又は遊離したアミンに表示された結合を備えた、図１４における化学構造のように示される。それぞれのそのような分子上におけるリンカー及び本発明による残りの分子に対する結合は、図１４に示されているように、遊離したヒドロキシル又は遊離したアミン上に存在する（従って、各化合物において、結合がＯ又はＮにおいて別の結合と交差する）。本発明において最も多くの場合に用いられる［ＩＢＴ］はＣＰ３３であるが、これは、それがＦｃγＲＩの調節因子としてより大きな活性を示したためである。ＣＰ３３もまた、図１４に示される。
用語「細胞結合末端部分」、「細胞結合末端」又は「細胞結合部分」は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に特異的に結合できる少なくとも１つの小分子又は部分を含む本発明によるキメラ化合物の部分を述べるのに用いられる。
本発明で用いる好ましいＣＢＴ基は、下に示されるもの、又はその塩若しくは光学異性体である。
Figure 2016529204
 ここで、Ｘ1及びＸ2は、それぞれ独立に、ＣＨ2、Ｏ、ＮＨ又はＳであり、
Ｘ3は、Ｏ、ＣＨ2、ＮＲ1、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）2、−Ｓ（Ｏ）2Ｏ、−ＯＳ（Ｏ）2又はＯＳ（Ｏ）2Ｏであり、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ3のアルキル基、又は−Ｃ（Ｏ）（Ｃ1〜Ｃ3）の基であり、
ｋは、０〜２０、８〜１２、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４、５又は６の整数である。
本発明に用いるのに好ましいＣＢＴ基は、次の基である。
Figure 2016529204
 式中、ｋは２、３又は４、好ましくは３である。ＣＢＴ基及びその他の基が、任意でアルキレン基の遠位端（ｋ）にアミン基又はその他の官能性基を有するようになって、ｋが、例えば、リジンアミノ酸から形成されるようにし、アミン又はその他の官能性基が、本明細書において他に記載されているようなリンカー、トリアゾール又はその他の二官能性のコネクタ基［ＣＯＮ］あるいは多官能性基［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］を形成する追加の反応に参加することができるようにする。
用語「リンカー」は、細胞結合末端部分［ＣＢＴ］又は免疫（Ｆｃ受容体）結合末端［ＩＢＴ］を二官能性のコネクタ部分／分子［ＣＯＮ］及び／又は多官能性のコネクタ部分／分子［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］に連結する化学本体を指す。各リンカーは、本明細書において他において開示されている任意での二官能性のコネクタ分子［ＣＯＮ］を介して［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］に連結され得ることに留意されたい。リンカーは不安定でなく、また１つ以上のリンカー基を含んでなる、本明細書において他に開示されている延びたリンカーを提供する。各リンカーは、特に［ＡＢＴ］部分及び多官能性のコネクタ分子［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］並びに［ＣＢＴ］部分及び多官能性のコネクタ分子［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］の間で、［ＣＢＴ］又は［ＩＢＴ］基に直接連結され得る。特定の例において、ＣＢＴ基は、更にリンカー基及び任意で［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基に連結される二官能性のコネクタ基［ＣＯＮ］に直接連結され得る。分子の２つの活性官能性の部分、すなわち、免疫結合末端［ＩＢＴ］及び細胞結合末端［ＣＢＴ］の間のリンカーは、長さにおいて約５Å〜約５０Å以上、長さにおいて約６Å〜約４５Å、長さにおいて約７Å〜約４０Å、長さにおいて約８Å〜約３５Å、長さにおいて約９Å〜約３０Å、長さにおいて約１０Å〜約２５Å、長さにおいて約７Å〜約２０Å、長さにおいて約５Å〜約１６Å、長さにおいて約５Å〜約１５Å、長さにおいて約６Å〜約１４Å、長さにおいて約１０Å〜約２０Å、長さにおいて約１１Å〜約２５Åなどの範囲である。本明細書において他に記載されている非天然アミノ酸ベースのリンカー（すなわち、アミノ酸単量体単位のアミン及び酸の間に３〜６、好ましくは４又は５のメチレン基が存在するアルキレン基を有する）が多くの場合に用いられる。本明細書に別に開示されている長さのリンカーを有することによって、１つ以上の［ＩＢＴ］部分及び１つ以上の［ＣＢＴ］部分が、［ＣＢＴ］基を介して前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に結合し、［ＣＢＴ］基単位と相乗的に機能する［ＩＢＴ］基を介して免疫エフェクター分子上で調節して免疫エフェクター細胞による腫瘍の解離（例えば、食作用）を調節する本発明の化合物の生物学的活性を利用することができるように位置付けることができ、化合物が結合されている免疫記憶を更によく刺激し、促進することができる。これは、転移性癌細胞、特に前立腺癌細胞及び転移性前立腺癌細胞を含む癌細胞の選択的かつ標的化された（相乗的な）細胞の死滅をもたらすが、ここで、どのような組織であってもそれらが存在し得る。リンカーの構成要素の選別は、それらの生物相容性、水性及び有機性媒質における溶解度及び低い免疫原性／抗原性に基づく。
オリゴアミノ酸単位に基づくか又はそれを含むリンカーが、本発明における使用に好ましい。そのような好ましいリンカーは、２〜１００のアミノ酸単位の長さであるが、２〜１４又は４〜８のアミノ酸単位の長さであることが好ましい。好ましい態様において、各アミノ酸単位は、好ましくは、各アミノ酸単量体単位に３〜６のメチレン基を有している、本明細書において他に記載されているような非天然アミノ酸単位である。各リンカーは、本明細書において他に開示されているような１つ以上の二官能性のコネクタ分子［ＣＯＮ］を介して多官能性のコネクタ分子［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］と連結され得る。
本明細書において他に記載されているように数多くのリンカーが用いられ得るが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）連結、ポリプロピレングリコール連結、又はポリエチレングリコール共（ｃｏ−）ポリプロピレングリコール重合体（例えば、ブロック共重合体であって、そのブロックのポリエチレングリコール部分が１〜１２のポリエチレングリコール単位の長さであり、そのブロックのポリプロピレングリコール部分が１〜１２のポリプロピレングリコール単位の長さである）ベースであって、ポリエチレングリコール単位、ポリプロピレングリコール単位又はポリエチレングリコール共ポリプロピレングリコールブロック共重合体単位の全体個数が１〜１００、１〜７５、１〜、１〜１５、１〜１２、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２、又は多くの場合に約１００以下の単位、約１〜１００、約１〜７５、約１〜６０、約１〜５０、約１〜３５、約１〜２５、約１〜２０、約１〜１５、１〜１０、約８〜１２、約１〜８のリンカー（不安定でない）が、より多くの場合に用いられる。
別の好ましいリンカーには、例えば、以下に示されているポリプロリンリンカー及び／又はコラーゲンリンカーが含まれる（ｎは、約１〜１００、約１〜７５、約１〜６０、約１〜５０、約１〜４５、約１〜３５、約１〜２５、約１〜２０、約１〜１５、２〜１０、約４〜１２、約５〜１０、約４〜６、約１〜８、約１〜６、約１〜５、約１〜４、約１〜３など）。
Figure 2016529204
更なるリンカーは、次の化学構造のものを含む。
Figure 2016529204
 式中、Ｒaは、Ｈ、Ｃ1−Ｃ3アルキル若しくはアルカノールであるか、又はＲ3（プロリン）と環を形成し、Ｒ3は、好ましくはアラニン（メチル）、アルギニン（プロピレングアニジン）、アスパラギン（メチレンカルボキシアミド）、アスパラギン酸（エタン酸）、システイン（チオール、還元又は酸化されたジチオール）、グルタミン（エチルカルボキシアミド）、グルタミン酸（プロパン酸）、グリシン（Ｈ）、ヒスチジン（メチレンイミダゾール）、イソロイシン（１−メチルプロパン）、ロイシン（２−メチルプロパン）、リジン（ブチレンアミン）、メチオニン（エチルメチルチオエーテル）、フェニルアラニン（ベンジル）、プロリン（Ｒ3は、Ｒaと環を形成し、隣接する窒素基とピロリジン基を形成する）、ヒドロキシプロリン、セリン（メタノール）、トレオニン（エタノール、１−ヒドロキシエタン）、トリプトファン（メチレンインドール）、チロシン（メチレンフェノール）又はバリン（イソプロピル）からなる群から選択されるアミノ酸から誘導される側鎖であり、
ｍ”は、０〜２５、好ましくは１〜１０、１〜８、１、２、３、４、５又は６の整数であり、
ｍ（この状況で）は、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４又は５の整数であり、
ｎ（この状況で）は、約１〜１００、約１〜７５、約１〜６０、約１〜５０、約１〜４５、約１〜３５、約１〜２５、約１〜２０、約１〜１５、２〜１０、約４〜１２、約５〜１０、約４〜６、約１〜８、約１〜６、約１〜５、約１〜４、約１〜３などの整数である。
本発明による別のリンカーは、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４又は５の、アミド基（１〜５のメチレン単位を含むアミド基側鎖の片側又は両側にアルキレン基を含む）、ケト基（１〜５のメチレン単位を含むアルキレンケト基を含む）、アミン基（１〜５のメチレン単位を含むアルキレンアミン基を含む）、アルキレン基（１〜５のメチレン単位を含む）、アミノ酸又はポリエチレングリコール基と相溶性のその他の部分、例えば、二官能性の連結基［ＣＯＮ］、［ＣＢＴ］基、［ＩＢＴ］基、［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基、及び他のポリエチレングリコール基（多くの場合、１〜１２（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２）のエチレングリコール単位の間の任意の位置に）を含むその他のリンカー基を介して更に連結され得るエチレングリコール単位を含むポリエチレングリコールリンカーを含む。別の基は、アミノ酸残基（Ｄ又はＬ）のポリペプチドを含む。別の実施形態において、本明細書において他に記載されているように、ポリペプチドは、それぞれどこでも酸基からアミノ基を分離している１〜１５又はそれ以上のメチレン基、多くの場合に３〜６のメチレン基（３、４、５又は６）、及びリンカーを前記部分に提供している１〜１００のペプチド基、好ましくは１〜１２（１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２）のペプチド基を有している不安定でないリンカーの（グリシンを除いた非天然発生）非天然発生のアミノ酸を含むことができる。本発明において同定されるそれぞれのポリペプチドリンカー及びその他のリンカー（不安定性のリンカーを含む）が更に共に又はコネクタ分子／部分［ＣＯＮ］、［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］分子／部分、［ＩＢＴ］基及び／又は［ＣＢＴ］基と共にアミド基（１〜５のメチレン単位を含むアミド基の片側又は両側にアルキレン基を含む）、ケト基（ケト基の片側又は両側の側鎖に１〜５のメチレン単位を含むアルキレンケト基）、アミン基（アミン基の片側又は両側の側鎖に１〜５のメチレン単位を含むアルキレンアミン基を含む）、ウレタン基（ウレタン部分の片側又は両側の側鎖に１〜５のメチレン単位を含むアルキレン基を含む）、アルキレン基（１〜５のメチレン単位を含む）、アミノ酸又はリンカー化学と相溶性のその他の部分を介して連結されることができ、分子の構成要素を連結することに留意されたい。ポリエチレングリコール及びポリペプチドリンカーの場合、更なる基（例えば、前述したようなアルキレンアミン又はその他の基）又は第２リンカー基の利用が、リンカーを分子の別の構成要素に結合させるのに有用であり得るということに留意されたい。更に、本明細書において同定される２つ以上のリンカー基が共に結合され、リンカー化学の安定性と一貫して本発明の化合物に用いられていないリンカー基を形成することができる。そのような延びたリンカーは、多くの場合に［ＣＯＮ］連結基を介して又は本明細書において他に記載されているように連結される。
更なる好ましいリンカーは、次の構造のものを含む。
Figure 2016529204
 式中、Ｒaは、Ｈ又はＣ1−Ｃ3アルキル、好ましくはＣＨ3、最も多くの場合にＨであり、
ｍは、１〜１２の整数、多くの場合に１、２、３、４、５又は６であり、
ｍ”は、１、２、３、４、５又は６の整数、多くの場合に６であり、
ｔは、０、１、２、３、４、５又は６であり、
ｉＬは、０又は１、多くの場合に１であり、ここで、特定の場合において前記リンカーは、好ましくは一端で［ＣＯＮ］基及び［ＣＢＴ］基に、他端で［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基に連結されることができる。
または、更なる好ましいリンカーは、次の構造のリンカーを含む。
Figure 2016529204
 式中、ｑは、０〜１２の整数、好ましくは１、２、３、４、５又は６であり、
ｑ’は、１〜１２、多くの場合に１、２、３、４、５又は６である。
２つの上記リンカーが１つに連結されて、本発明の化合物に多くの場合に用いられる追加のリンカーを提供することができる。
Figure 2016529204
 式中、ｑは、０〜１２の整数、好ましくは０、１、２、３、４、５又は６であり、
ｑ’は、１〜１２、多くの場合に１、２、３、４、５又は６であり、
ｉＬは、０又は１であり、
ＲLは、本明細書において他に記載されているようなアミノ酸又はオリゴペプチド（これは、ジペプチドを含む）であって、特にリジン、ジリジン又はグリシンリジンを含むものである。
本発明による別のリンカーは、次の化学式のスクシンイミドに基づくリンカーを含む。
Figure 2016529204
 式中、各ＸSは、独立してＳ、Ｏ又はＮ−Ｒs、好ましくはＳであり、
ＲSは、Ｈ又はＣ1-3アルキル、好ましくはＨであり、
Ｓcは、ＣＨ2、ＣＨ2Ｏ、又はＣＨ2ＣＨ2Ｏであり、
ｉは、０又は１であり、
ｍSは、０、１、２、３、４、５又は６である。
本発明に用いられ得る他のリンカーは、次の化学式のリンカー又はその薬学的に許容される塩を含む。
Figure 2016529204
 式中、Ｚ及びＺ’は、それぞれ独立して結合、−（ＣＨ2）i−Ｏ、−（ＣＨ2）i−Ｓ、−（ＣＨ2）i−Ｎ−Ｒ、
Figure 2016529204
 であり、ここで、前記Ｚ及びＺ’基は、任意で別のリンカー基、コネクタ［ＣＯＮ］、［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基、ＩＢＴ又はＣＢＴに結合され、
各Ｒは、Ｈ、又はＣ1−Ｃ3アルキル若しくはアルカノール基であり、
各Ｒ2は、独立してＨ又はＣ1−Ｃ3アルキル基であり、
各Ｙは、独立して結合、Ｏ、Ｓ又はＮ−Ｒであり、
各ｉは、独立して０〜１００、好ましくは１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、０、１、２、３、４又は５であり、
Ｄは、
Figure 2016529204
 結合であるか、あるいはＤは、
Figure 2016529204
 又は１〜１００のグリコール単位（１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４又は５２及び５０、３及び４５）を有するポリプロピレングリコール又はポリプロピレン共ポリエチレングリコールリンカーであり、
但し、Ｚ、Ｚ’及びＤは、それぞれ同時に結合でなく、
各ｉは、上記と同じであり、
ｊは、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４又は５であり、
ｍ（この状況で）は、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４又は５の整数であり、
ｎ（この状況で）は、約１〜１００、約１〜７５、約１〜６０、約１〜５０、約１〜４５、約１〜３５、約１〜２５、約１〜２０、約１〜１５、２〜１０、約４〜１２、約５〜１０、約４〜６、約１〜８、約１〜６、約１〜５、約１〜４、約１〜３などの整数であり、
ｍ’は、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４又は５の整数であり、
ｍ”は、０〜２５、好ましくは１〜１０、１〜８、１、２、３、４、５又は６の整数であり、
ｎ’は、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４又は５の整数であり、
Ｘ1は、Ｏ、Ｓ又はＮ−Ｒであり、
Ｒは上記のとおりであり、
Ｒaは、Ｈ、Ｃ1−Ｃ3アルキル若しくはアルカノールであるか、又はＲ3（プロリン）と共に環状基を形成し、Ｒ3は、好ましくはアラニン（メチル）、アルギニン（プロピレングアニジン）、アスパラギン（メチレンカルボキシアミド）、アスパラギン酸（エタン酸）、システイン（チオール、還元又は酸化されたジチオール）、グルタミン（エチルカルボキシアミド）、グルタミン酸（プロパン酸）、グリシン（Ｈ）、ヒスチジン（メチレンイミダゾール）、イソロイシン（１−メチルプロパン）、ロイシン（２−メチルプロパン）、リジン（ブチレンアミン）、メチオニン（エチルメチルチオエーテル）、フェニルアラニン（ベンジル）、プロリン（Ｒ3は、Ｒa及び隣接する窒素基と環状基を形成してピロリジン基を形成する）、ヒドロキシプロリン、セリン（メタノール）、トレオニン（エタノール、１−ヒドロキシエタン）、トリプトファン（メチレンインドール）、チロシン（メチレンフェノール）又はバリン（イソプロピル）からなる群から選択されるアミノ酸から誘導される側鎖であり、ここでそのアミノ酸（多くの場合にリジン）の側鎖は、任意で連結されている。特定の実施形態において、アミノ酸は、アミノ酸の側鎖を介して連結されていることがあり得る。特定の実施形態において、アミノ酸は、多くの場合にリジンであるが、これは、その三官能性のためであり、ここで、側鎖のアミンは、別のリンカー及び／又は分子のその他の構成要素を連結するために用いられる。三官能性を有しており、側鎖がリンカーを作り出すために用いられるアミノ酸において、そのアミノ酸（多くの場合にリジン）は、カルボン酸においてＣ1−Ｃ12アルキル基、好ましくはＣ1−Ｃ3アルキル基で任意に置換されるアミン基によって末端キャッピングされ得るか、又はアミンの末端においてアシル基によって末端キャッピングされ得ることに留意されたい。
各リンカーについて、本明細書に記載されている１つ以上のリンカー基が、以下に更に詳細に記載される１つ以上の二官能性のコネクタ基［ＣＯＮ］との結合を通じて延び得ることに留意されたい。例えば、本発明の更なる実施形態としては、ポリエチレングリコールリンカー（例えば、１〜１２のエチレングリコール単位、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２）が、アミド［ＣＯＮ］基を含む本明細書において他に記載されている１つ以上の［ＣＯＮ］基を介して、１つ以上のポリエチレングリコールリンカー（例えば、各リンカーが１〜１２のエチレングリコール単位、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２である）に延びる。
述べられたように、本発明に用いるための特定の好ましいリンカーは、多くの場合に［ＣＢＴ］部分を次の化学構造の［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］分子に連結する図２の化合物１、２又は３に示されているリンカー基を含み、
Figure 2016529204
 式中、Ｒaは、Ｈ又はＣＨ3、最も多くの場合にＨであり、
ｍは、１〜１２の整数、多くの場合に１、２、３、４、５又は６であり、
ｍ”は、１、２、３、４、５又は６の整数、多くの場合に６であり、
ｔは、０、１、２、３、４、５又は６であり、
ｉＬは、０又は１、多くの場合に１であり、ここでＬは、一端で［ＣＯＮ］基及び［ＣＢＴ］基に、他端で［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基に任意で連結されることができる。
あるいは上述したように、しばしばＬが、次のアミン基を含むエチレンオキシドで製造された複合リンカー基（図２の化合物３に記載されているような）である。
Figure 2016529204
 式中、ｑは、０〜１２、１、２、３、４、５又は６であり、
ｑ’は、１〜１２、多くの場合に１、２、３、４、５又は６であり、
ｉＬは、０又は１であり、ここでケト基は、アミノ酸基に又はオリゴペプチド（ジペプチドを含む）に連結され、アミン基が次のジケト基を介して任意で連結され（多くの場合に［ＩＢＴ］に、より多くの場合にＣＰ３３に）、
Figure 2016529204
 式中、ｑは、上記と同じであり、アミノ酸、多くの場合にリジン、又はアミノ酸ジペプチド、多くの場合にジリジンである。好ましい態様において、ジペプチドのリジンのうちの１つが直接ＣＰ３３に結合され、別のアミノ酸（多くの場合にリジン）が、［ＣＯＮ］基、最も多くの場合にトリアゾールを介して、上記のエチレンオキシドアミン基を［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基に連結する。上述した複合リンカーの化学構造は、次の化学構造で示すことができる。
Figure 2016529204
 式中、ｑは、０〜１２の整数、好ましくは０、１、２、３、４、５又は６であり、
ｑ’は、１〜１２、多くの場合に１、２、３、４、５又は６であり、
ｉＬは、０又は１であり、
ＲLは、特にリジン、ジリジン又はグリシンリジンを含む、本明細書において他に記載されているようなアミノ酸又はオリゴペプチド（その用語は、ジペプチドを含む）である。
特定の更なる実施形態において、リンカー基Ｌは、１〜１２、好ましくは１〜６以上のアミノ酸単量体を含む、アミノ酸、ジペプチド又はオリゴペプチドである。特定の実施形態において、オリゴペプチドはジペプチドであり、ジペプチドはジリジン又はグリシンリジンジペプチドである。リジンがオリゴペプチドリンカーでのアミノ酸として用いられる場合、側鎖のアルキレンアミンは、多くの場合に他のリンカー基又は分子での他の構成要素を連結するために用いられる。
用語「多官能性のコネクタ」は、［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］の記号によって表され、活性化したＩＢＴ−リンカーとＣＢＴ部分（好ましくは活性化している）との反応生成物又はＩＢＴ部分と本明細書において他に記載されている活性化したリンカー−ＣＢＴとの反応生成物を形成するキメラの本発明の化合物に任意に含まれる化学基又は分子を記載するために用いられる。数多くの他の合成方法が可能である。本発明の化合物の合成に用いられる合成化学が、本明細書において詳しく示される。コネクタ基は、キメラの本発明の化合物を提供する本明細書において他に記載されているようなコネクタ基を提供することができる反応性基を含む少なくとも３つの分離した化学フラグメントの容易な縮合から形成される結果物である部分である。多官能性のコネクタ部分又は分子［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］は、多官能性のコネクタが、キメラの本発明の化合物を提供するために用いられる特異的化学の結果物であるという点において、一般のリンカーと容易に区分され得るということに留意されたい。
本発明における連結部分は、少なくとも１つの［ＩＢＴ］基及び少なくとも１つの［ＣＢＴ］基に（好ましくは、リンカーを介して）共有結合するために用いられ得る３つ以上の官能基を含む少なくとも１つの多官能性の部分又は分子［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］を含み、よって、それぞれのそのような官能基を単一の化合物に連結する。本発明に用いるための多官能性のコネクタ基は、本発明によって少なくとも１つ、好ましくは２つ以上の［ＩＢＴ］及び［ＣＢＴ］を含む化合物を提供するために、結合された［ＩＢＴ］及び［ＣＢＴ］基にリンカーに結合することができる少なくとも３つの官能基を有している部分を含む。そのような多官能性のコネクタ部分はまた、本明細書において定義されているような多数の［ＩＢＴ］及び［ＣＢＴ］基を含む化合物を作るために、その他の多官能性のコネクタに結合し得る。
多官能性のコネクタ分子［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］は、［ＩＢＴ］及び［ＣＢＴ］基、リンカー及び／又はその他のコネクタ基（二官能性及び多官能性のコネクタ基を含む）に連結され得る少なくとも３つの基を含むいずれかの分子又は部分を含み、好ましくはそれぞれ本明細書に定義されている３つ以上６つ以下の官能基又はその他の基で置換されたフェニル、ピリジル、ピリミジニル、１，３，５−トリアジニル、１，２，３−トリアジニル、１，２，４−トリアジニル基を含む多官能性、特に三官能性又は四官能性のアリール又はヘテロアリール基として例示される５又は６員環のアリール又はヘテロアリール基（特に、６員環基）を含む。そのような官能基は、例えば、［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］部分に連結され得る基を含む［ＩＢＴ］基及び［ＣＢＴ］基を含むリンカー基上に縮合される多官能性のコネクタ分子前駆体（本発明によって最終の化合物において［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］部分を形成する多官能性のコネクタ分子）上の親核性又は親電子性基から誘導され得る。本発明に用いられる［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基は、好ましくは置換されたフェニル、ピリジル、ピリミジニル及び１，３，５−トリアジニル、１，２，３−トリアジニル、１，２，４−トリアジニル基、特に次の化学構造の基を含む。
Figure 2016529204
 式中、Ｙ4は、Ｃ−Ｈ又はＮであり、
各Ｘ”は、独立して親電子性又は親核性の基、好ましくは（ＣＨ2）n"Ｏ、（ＣＨ2）n"ＮRCON、（ＣＨ2）n"Ｓ、（ＣＨ2）n"又は（ＣＨ2）n"Ｃ＝Ｏから誘導されるか、又は上記［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基が環構造である場合、Ｘ”は、環構造に連結される、多くの場合に環構造に直接連結される任意での［ＣＯＮ］基、多くの場合にトリアゾール基であり、
置換基ＲＣＯＮは、Ｈ又はＣ1−Ｃ3アルキル、好ましくはＨ又はＣＨ3であり、
ｎ”は、０、１、２又は３であり、
ｒは、１〜１２の整数、多くの場合に１、２、３、４、５又は６である。
用語「二官能性のコネクタ基」又は［ＣＯＮ］は、リンカー基の２つ（又はそれ以上）の部分を連結してリンカー基の長さを延長する二官能性基を記載するために用いられる。特定の実施形態において、リンカー基は、別のリンカー基と反応するか又は［ＣＯＮ］基を別のリンカー基と形成して延びたリンカー基を形成する。そのような基の反応生成物は、本明細書において他に記載されているリンカー基とは区分される識別可能なコネクタ基［ＣＯＮ］をもたらす。更に、二官能性のコネクタ基とリンカー基の説明の間には、特に本明細書において他に記載されているアミド基、酸素（エーテル）、硫黄（チオエーテル）又はアミンの連結、尿素又はカーボネート−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−基のような更に一般的なコネクタ基と関連して一部重複があり得ることに留意されたい。以後に用いられる二官能性のコネクタ分子［ＣＯＮ］が、多くの場合に［ＩＢＴ］及び［ＣＢＴ］を多官能性のコネクタ分子［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］に連結するリンカー基の２つの部分に連結されるということに留意されたい。あるいは、［ＣＯＮ］基は、［ＩＢＴ］基に直接連結され得るか、又はより多くの場合に、本明細書に記載されている［ＣＢＴ］基及び［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基に連結され得る。
主にリンカーの一端をリンカーの別の端に連結して更に長いリンカーを提供する、本発明に用いられる一般的な二官能性のコネクタ基［ＣＯＮ］は、次の化学基を含む。
Figure 2016529204
 式中、Ｘ2は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ4、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）2、−Ｓ（Ｏ）2Ｏ、−ＯＳ（Ｏ）2又はＯＳ（Ｏ）2Ｏであり、
Ｘ3は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ4であり、
Ｒ4は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ3アルキル若しくはアルカノール基、又は−Ｃ（Ｏ）（Ｃ1−Ｃ3）基である。
実施形態において、［ＣＯＮ］は、多くの場合に
Figure 2016529204
 であり、式中、ＣＬは、
Figure 2016529204
 であり、ＣＬ中のｍは、０〜１２の整数、多くの場合に０、１、２、３、４、５又は６であり、
ｉＬは、０又は１、多くの場合に１である。
特定の実施形態において、この［ＣＯＮ］基は、多くの場合にトリアゾールのアミンを介して［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］の環構造に連結される。
上述されたように、それぞれの［ＡＢＴ］及び［ＣＢＴ］官能基は、前記コネクタ／多重コネクタ基のうち２つ以上を更に大きな多官能性のコネクタに結合させる部分に更に連結されることができ、多官能性の化合物内に２つ以上の［ＩＢＴ］及び［ＣＢＴ］基を含む複合体の多官能性の化合物を提供するということに留意されたい。
用語「末端キャップ」又は「末端キャッピング」は、本発明の化合物においてリンカーとして多くの場合に用いられるアミノ酸のうちの遊離したカルボン酸基又は遊離したアミン基に結合される非反応性の化学部分を記述するのに用いられる。本発明においてカルボン酸に対する好ましい末端キャッピング基は、Ｃ1−Ｃ12アルキル基、好ましくはＣ1−Ｃ3アルキル基で任意置換されるアミン基である。反応性カルボキシル基とアミドを形成することによって、カルボン酸は、本発明の化合物において安定した非反応性の部分になる。アミン基の場合、それらは、好ましくはアシル基又はウレタン基、好ましくはアシル基で末端キャッピングされて安定した非反応性のアミドを形成する。
用語「アシル」は、ケト基に連結されたＣ1〜Ｃ20、多くの場合にＣ2〜Ｃ20、直鎖、分枝又は環状のアルキル鎖を含み、よって、本発明の化合物において遊離したアミンと非反応性のアミドを形成する化学構造の基を記述するのに用いられる。（多くの場合に本発明の化合物においてリンカーに用いられるアミノ酸の）遊離したアミン上のアシル基が、安定した非反応性のアミドをもたらす（本発明の化合物の投与後にアミドが切断され、特定の場合、本発明の化合物のプロドラッグを提供することもある）。本発明によるアシル基は、次の構造で示すことができる。
Figure 2016529204
 式中、Ｒ4は、Ｃ1〜Ｃ20の直鎖、分枝又は環状のアルキル基、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキル、例えば、他のものの中でも特にフェノキシメチル、アリール、アルコキシである。好ましいアシル基は、Ｒ4がＣ1〜Ｃ10アルキル基のものである。本発明によるアシル基はまた、例えば、安息香酸及びこれと関連した酸から誘導されたアシル基、例えば、数多くの他のものの中でも置換された安息香酸、スクシン、カプリン及びカプロン、ラウリン、ミリスチン、パルミチン、ステアリン及びオレイン基から誘導されたものを含む。当業者は、本発明において有用性があるそのアシル基を、非反応性の安定したアミドをもたらす末端キャップ反応性のアミンとして、又は特定の実施形態において、本発明の化合物のプロドラッグ形態として認識するであろう。
用語「薬学的に許容される塩」又は「塩」は、本明細書を通じて、化合物の溶解及び生物学的利用能を促進するために、非経口投与のための生理食塩水又は患者の胃腸管の胃液において化合物の溶解性を増加させるようにしてある、本願における１つ以上の組成物の塩の形態を述べるのに使用される。薬学的に許容される塩は、医薬的に許容可能な無機又は有機の塩基及び酸に由来するものを含む。適当な塩は、医薬の分野において公知の多数の酸の中でも特に、カリウム及びナトリウムなどのアルカリ金属、カルシウム、マグネシウム及びアンモニウム塩などのアルカリ土類金属に由来するものなどである。ナトリウム塩及びカリウム塩は、本発明での組成物を含むカルボン酸及び遊離リン酸の中和塩として好ましい。用語「塩」は、本発明での化合物の使用と合致するあらゆる塩を意味する。化合物が転移性前立腺癌を含む前立腺癌の治療を含む医薬的適応において使用される場合、用語「塩」は、医薬品としての化合物の使用と合致する、薬学的に許容される塩を意味する。
用語「同時投与」は、２つ以上の化合物のそれぞれの有効量又は有効濃度が、所定の時間において患者に見出されるように、少なくとも２つの化合物又は組成物が同時に患者に投与されることを意味する。本発明による化合物は、同時に患者に同時投与されるであろうが、この用語は、全ての同時投与される化合物又は組成物の有効濃度が所定の時間において対象に見られるならば、２つ以上の薬剤が同時に又は異なった時間に投与されることの両方を含む。本発明によるキメラ抗体動員化合物は、癌、特に転移性前立腺癌を含む前立腺癌の症状を治療し又は改善するのに使用される１つ以上の追加の抗癌剤又はその他の剤と共に投与されてもよい。本発明による１つ以上のキメラ化合物と組み合わせて同時投与できる例示の抗癌剤は、例えば、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼＩ及びＩＩの阻害剤、アルキル化剤、並びに微小管阻害剤（例えば、タキソール）などである。本発明において用いる特定の抗癌化合物は、例えば、特に、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アルトレタミン、アミホスチン、アナストロゾール、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、生ＢＣＧ、ベキサロテンカプセル、ベキサロテンゲル、ブレオマイシン、静注ブスルファン、経口ブスルファン、カルステロン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、ポリフェプロサン２０インプラントを有するカルムスチン、セレコキシブ、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、シクロホスファミド、シタラビン、シタラビンリポソーマル、ダカルバジン、ダクチノマイシン、アクチノマイシンＤ、ダルベポエチンアルファ、ダウノルビシンリポソーマル、ダウノルビシン、ダウノマイシン、デニロイキンディフティトックス、デクスラゾキサン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドキソルビシンリポソーマル、プロピオン酸ドロモスタノロン、エリオットＢ溶液、エピルビシン、エポエチンアルファエストラムスチン、リン酸エトポシド、エトポシド（ＶＰ−１６）、エキセメスタン、フィルグラスチム、フロクスリジン（動脈内）、フルダラビン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルベストラント、ゲムツズマブオゾガマイシン、酢酸ゴセレリン、ヒドロキシウレア、イブリツモマブチウキセタン、イダルビシン、イフォスファミド、メシル酸イマチニブ、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、イリノテカン、レトロゾール、ロイコボリン、レバミソール、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、酢酸メゲストロール、メルファラン（Ｌ−ＰＡＭ）、メルカプトプリン（６−ＭＰ）、メスナ、メトトレキサート、メトクスサレン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、フェンプロピオン酸ナンドロロン、ノフェツモマブ、ＬＯｄｄＣ、オプレルベキン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ミトラマイシン、ポルフィマーナトリウム、プロカルバジン、キナクリン、ラスブリカーゼ、リツキシマブ、サルグラモスチム、ストレプトゾシン、タルブビジン（ＬＤＴ）、タルク、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド（ＶＭ−２６）、テストラクトン、チオグアニン（６−ＴＧ）、チオテパ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン（ＡＴＲＡ）、ウラシルマスタード、バルルビシン、バルトルシタビン（モノバルＬＤＣ）、ビンブラスチン、ビノレルビン、ゾレドロネート、及びこれらの混合物などである。
抗癌剤に加えて、複数の他の剤が、癌、特に転移性前立腺癌を含む前立腺癌の治療に、本発明によるキメラ化合物と同時投与されてもよい。これらは、活性剤、ミネラル、ビタミン及び栄養剤など、前立腺癌組織又はその成長を抑制する一定の有効性を示すもの、又は前立腺癌の治療にその他有用であるものを含む。例えば、食事性セレン、ビタミンＥ、リコピン、大豆食品、ビタミンＤ、緑茶、オメガ３脂肪酸及びベータシトステロールを含む食物エストロゲンの１つ以上が、前立腺癌を治療するために、本発明の化合物と組み合わせて利用されてもよい。
また、これまでの抗癌剤以外の活性剤は、前立腺癌の治療に一定の利用性を示している。選択的なエストロゲン受容体モジュレータであるトレミフェンは、癌、特に転移性前立腺癌を含む前立腺癌を治療するために本発明の化合物と組み合わせて用いられてもよい。さらに、テストステロンのジヒドロテストステロンへの変換を抑制する２つの医薬であるフィナステリド及びデュタステリドもまた、本発明による化合物と同時投与される場合、前立腺癌の治療に有用である。植物化学物質のインドール−３−カルビノール及びジインドリルメタンもまた、前立腺癌を治療するこれらの効果のために本発明の化合物と同時投与されてもよい。本発明による化合物と組み合わされてもよい更なる薬剤は、例えば、フルタミド、ビカルタミド、ニルタミド及び酢酸シプロテロンなどの抗アンドロゲン、並びにケトコナゾール及びアミノグルテチミドなどの副腎アンドロゲン（例えば、ＤＨＥＡ）の産生を減少させる薬剤などである。本発明による化合物と組み合わされてもよいその他の活性剤は、例えば、作動薬及び拮抗薬を含むＧｎＲＨモジュレータなどである。ＧｎＲＨ拮抗薬は、ＬＨの産生を直接抑制し、一方ＧｎＲＨ作動薬は、初期刺激作用の後に下方制御の過程によって、ＬＨを抑制する。アバレリックスは、ＧｎＲＨ拮抗薬の例であり、ＧｎＲＨ作動薬は、特にロイプロリド、ゴセレリン、トリプトレリン及びブセレリンなどである。これらの剤は、有効量の本発明による化合物と組み合わされてもよい。また、酢酸アビラテロンもまた、前立腺癌、特に転移性前立腺癌の治療において、本発明による化合物の１つ以上と組み合わされてもよい。
本発明による１つ以上の化合物と組み合わせることができる他の薬剤は、転移性前立腺癌を有する患者に発症する骨折などの骨格合併症を遅らせるゾレドロン酸などのビスホスホネートなどである。他の薬剤であるアルファラジンは、骨の転移を標的とするように、本発明の化合物と組み合わされてもよい。また、転移性前立腺癌による骨痛は、特に、本発明の化合物と組み合わせることができる、モルヒネ及びオキシコドンなどのオピオイド系の鎮痛剤で治療されてもよい。
本発明は、好ましくは次の一般化学構造の化合物に関する。
Figure 2016529204
 式中、ｎ及びｎ’は、それぞれ独立して１〜１５、多くの場合に２〜１０、多くの場合に２〜５、より多くの場合に２又は３の整数であり、
ＮＬ１及びＮＬ２は、それぞれ０〜１０、多くの場合に１〜１０、多くの場合に２〜５、より多くの場合に２又は３の整数であり、但しｎ≧ＮＬ１かつｎ’≧ＮＬ２であり、
ＭＣＯＮは、０〜１０、多くの場合に１〜１０、より多くの場合に１〜５、多くの場合に０、１又は２の整数であり、
［ＩＢＴ］は、図１４に示される化学式による免疫結合部分であり、好ましくは、［ＩＢＴ］は次の化学構造のＣＰ３３基である。
Figure 2016529204
［ＣＢＴ］は、次の化学式による細胞結合部分である。
Figure 2016529204
 式中、Ｘ1及びＸ2は、それぞれ独立してＣＨ2、Ｏ、ＮＨ又はＳであり、
Ｘ3は、Ｏ、ＣＨ2，ＮＲ1，Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）2、−Ｓ（Ｏ）2Ｏ、−ＯＳ（Ｏ）2又はＯＳ（Ｏ）2Ｏであり、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ3アルキル基又は−Ｃ（Ｏ）（Ｃ1−Ｃ3）基であり、
ｋは、０〜２０、８〜１２、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４、５又は６の整数である。
Ｌ1及びＬ2は、それぞれ独立して次の化学構造のリンカーである。
Figure 2016529204
 式中、Ｒaは、Ｈ又はＣ1−Ｃ3アルキル、好ましくはＣＨ3、最も多くの場合にＨであり、
ｍは、１〜１２の整数、多くの場合に１、２、３、４、５又は６であり、
ｍ”は、１、２、３、４、５又は６の整数、多くの場合に６であり、
ｔは、０、１、２、３、４、５又は６であり、
ｉＬは、０又は１、多くの場合に１であり、ここで、特定の場合において前記リンカーは、好ましくは一端における［ＣＯＮ］基及び別の末端上の［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基、又は次の構造のリンカーに連結され得る。
Figure 2016529204
 式中、ｑは、０〜１２の整数、好ましくは１、２、３、４、５又は６であり、
ｑ’は、１〜１２、多くの場合に１、２、３、４、５又は６であり、
ｉＬは、０又は１、好ましくは１である。
２つの上記リンカーが１つに連結されて、本発明の化合物に多くの場合に用いられる追加のリンカーを提供することができる。
Figure 2016529204
 式中、ｑは、０〜１２の整数、好ましくは０、１、２、３、４、５又は６であり、
ｑ’は、１〜１２、多くの場合に１、２、３、４、５又は６であり、
ｉＬは、０又は１であり、
ＲLは、本明細書において他に記載されているようなアミノ酸又はオリゴペプチド（これは、ジペプチドを含む）であって、特にリジン、ジリジン又はグリシンリジンを含むものである。
特定の更なる実施形態において、リンカー基Ｌは、１〜１２、好ましくは１〜６以上のアミノ酸単量体を含むアミノ酸、ジペプチド又はオリゴペプチドである。特定の実施形態において、オリゴペプチドはジペプチドであり、そのジペプチドはジリジン又はグリシンリジンジペプチドである。リジンがオリゴペプチドリンカーのうちのアミノ酸として用いられる場合、側鎖のアルキレンアミンは、多くの場合にその他のリンカー基又は分子の他の構成要素を連結するために用いられる。
特定の更なる実施形態において、リンカー基Ｌは次の基
Figure 2016529204
 、次の基
Figure 2016529204
 又は１〜１００のグリコール単位（１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４又は５２及び５０、３及び４５）であり、
式中、Ｒaは、Ｈ、Ｃ1−Ｃ3アルキル若しくはアルカノールであるか、又はＲ3（プロリン）と環を形成し、Ｒ3は、好ましくはアラニン（メチル）、アルギニン（プロピレングアニジン）、アスパラギン（メチレンカルボキシアミド）、アスパラギン酸（エタン酸）、システイン（チオール、還元又は酸化されたジチオール）、グルタミン（エチルカルボキシアミド）、グルタミン酸（プロパン酸）、グリシン（Ｈ）、ヒスチジン（メチレンイミダゾール）、イソロイシン（１−メチルプロパン）、ロイシン（２−メチルプロパン）、リジン（ブチレンアミン）、メチオニン（エチルメチルチオエーテル）、フェニルアラニン（ベンジル）、プロリン（Ｒ3は、Ｒaと環を形成し、隣接する窒素基とピロリジン基を形成する）、セリン（メタノール）、トレオニン（エタノール、１−ヒドロキシエタン）、トリプトファン（メチレンインドール）、チロシン（メチレンフェノール）又はバリン（イソプロピル）からなる群から選択されるアミノ酸から誘導される側鎖であり、
ｍ”は、０〜２５、好ましくは１〜１０、１〜８、１、２、３、４、５又は６の整数であり、
ｍは、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４又は５の整数であり、
ｎは、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４又は５の整数である。
または、Ｌは次の化学式によるリンカーである。
Figure 2016529204
 式中、Ｚ及びＺ’は、それぞれ独立して結合、−（ＣＨ2）i−Ｏ、−（ＣＨ2）i−Ｓ、−（ＣＨ2）i−Ｎ−Ｒ、
Figure 2016529204
 であり、式中、上記−（ＣＨ2）i基は、Ｚ又はＺ’に存在するならば、［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］、［ＡＢＴ］、［ＣＢＴ］、［ＴＬＲ］、又は存在するならば、任意の二官能性のコネクタ基［ＣＯＮ］に結合され、
各Ｒは、独立してＨ又はＣ1−Ｃ3アルキル若しくはアルカノール基であり、
各Ｒ2は、独立してＨ又はＣ1−Ｃ3アルキル基であり、
各Ｙは、独立して結合、Ｏ、Ｓ又はＮ−Ｒであり、
各ｉは、独立して０〜１００、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、０、１、２、３、４又は５であり、
Ｄは、
Figure 2016529204
 又は結合であるか、あるいはＤは、
Figure 2016529204
 又は１〜１００のグリコール単位（１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４又は５２及び５０、３及び４５）を有しているポリプロピレングリコール又はポリプロピレン共ポリエチレングリコールリンカーであり、
但し、Ｚ、Ｚ’及びＤは、それぞれ同時に結合でなく、
ｊは、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４又は５であり、
ｍ（この状況で）は、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４又は５の整数であり、
ｎ（この状況で）は、約１〜１００、約１〜７５、約１〜６０、約１〜５０、約１〜４５、約１〜３５、約１〜２５、約１〜２０、約１〜１５、２〜１０、約４〜１２、約５〜１０、約４〜６、約１〜８、約１〜６、約１〜５、約１〜４、約１〜３などの整数であり、
ｍ’は、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４又は５の整数であり、
ｍ”は、０〜２５、好ましくは１〜１０、１〜８、１、２、３、４、５又は６の整数であり、
ｎ’は、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４又は５の整数であり、
Ｘ1は、Ｏ、Ｓ又はＮ−Ｒであり、
Ｒは上記のとおりであり、
Ｒaは、Ｈ、Ｃ1−Ｃ3アルキル若しくはアルカノールであるか、又はＲ3（プロリン）と共に環状基を形成し、Ｒ3は、好ましくはアラニン（メチル）、アルギニン（プロピレングアニジン）、アスパラギン（メチレンカルボキシアミド）、アスパラギン酸（エタン酸）、システイン（チオール、還元又は酸化されたジチオール）、グルタミン（エチルカルボキシアミド）、グルタミン酸（プロパン酸）、グリシン（Ｈ）、ヒスチジン（メチレンイミダゾール）、イソロイシン（１−メチルプロパン）、ロイシン（２−メチルプロパン）、リジン（ブチレンアミン）、メチオニン（エチルメチルチオエーテル）、フェニルアラニン（ベンジル）、プロリン（Ｒ3は、Ｒa及び隣接する窒素基と環状基を形成してピロリジン基を形成する）、セリン（メタノール）、トレオニン（エタノール、１−ヒドロキシエタン）、トリプトファン（メチレンインドール）、チロシン（メチレンフェノール）又はバリン（イソプロピル）からなる群から選択されるアミノ酸から誘導される側鎖である。
［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］は、好ましくは、次の化学構造の多官能性のコネクタ基若しくは分子、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは同質異像体である。
Figure 2016529204
 式中、Ｙ4は、Ｃ−Ｈ又はＮであり、
各Ｘ”は、独立して親電子性又は親核性の基、好ましくは（ＣＨ2）n"Ｏ、（ＣＨ2）n"ＮRCON、（ＣＨ2）n"Ｓ、（ＣＨ2）n"，（ＣＨ2）n"Ｃ＝Ｏ又は［ＣＯＮ］基から誘導され、
置換基ＲＣＯＮは、Ｈ又はＣ1−Ｃ3アルキル、好ましくはＨ又はＣＨ3であり、
ｎ”は、０、１、２又は３である。
任意での二官能性のコネクタ基又は分子［ＣＯＮ］は、存在するならば、次の化学構造による部分であり、
Figure 2016529204
 式中、Ｘ2は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ4、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）2、−Ｓ（Ｏ）2Ｏ、−ＯＳ（Ｏ）2、又はＯＳ（Ｏ）2Ｏであり、
Ｘ3は、ＮＲ4、Ｏ又はＳであり、
Ｒ4は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ3アルキル若しくはアルカノール基、又は−Ｃ（Ｏ）（Ｃ1−Ｃ3）基である。
本発明の好ましい態様において、免疫結合末端［ＩＢＴ］は、前述したＣＰ３３である。
本発明の好ましい態様において、［ＣＢＴ］は、
Figure 2016529204
 である。式中、ｋは、０〜２０、１〜２０、１〜８、２〜６、３〜５、３〜４、１、２、３、４、５又は６の整数である。
特定の好ましい態様において、多官能性のコネクタ部分［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］は、次の構造の１，３，５−トリアジニル基である。
Figure 2016529204
 式中、各Ｘ”は、独立してＯ、Ｓ、Ｃ＝Ｏ又はＮＲCONであり、
ＲCONは、Ｈ又はＣＨ3、好ましくはＨである。
特定の好ましい態様において、化合物は、次の構造の二官能性のコネクタ部分［ＣＯＮ］を含む。
Figure 2016529204
 それは、
Figure 2016529204
 においてＩＢＴ基又はＣＢＴ基と共有結合されることができ、好ましくは２つのリンカー基に結合されて延びたリンカー基を形成するか、又は直接［ＩＢＴ］又は［ＣＢＴ］基に結合する。特定の更なる好ましい態様において、［ＣＯＮ］基は、
特定の実施形態において、［ＣＯＮ］は、多くの場合に
Figure 2016529204
 であり、ここでＣＬは、
Figure 2016529204
 であり、ＣＬ中のｍは、０〜１２の整数、多くの場合に０、１、２、３、４、５又は６であり、
ｉＬは、０又は１、多くの場合に１である。
特定の実施形態において、この［ＣＯＮ］基は、多くの場合にトリアゾールのアミンを介して［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］の環構造に連結される。
更に他の態様において、リンカー基は、次の構造のオリゴ又はポリエチレングリコール部分である。
Figure 2016529204
 式中、ｍは、１〜１００であるか、又は本明細書において他に記載されているように、好ましくは１〜１２、２〜１０、４〜８、２〜６、８〜１２、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２である。ここで、留意すべきことは、ポリプロピレングリコール又はポリエチレングリコール共ポリプロピレングリコールリンカー（ブロック共重合体であって、そのブロックのポリエチレングリコール部分が１〜１２のポリエチレングリコール単位の長さであり、そのブロックのポリプロピレングリコール部分が１〜１２のポリプロピレングリコール単位の長さであり、ブロック共重合体単位の総個数が１〜１００、１〜５０、１〜２５、１〜１５、１〜１２、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２である）が本化合物においてＰＥＧ基で置換され得るということである。この基はまた、２つの更なるリンカー基に結合されて延びたリンカー基を提供することができ、又は直接１つ又は２つの官能基［ＩＢＴ］及び／又は［ＣＢＴ］に結合されることができる。
好ましい本発明の化合物は、添付されている図２に示される。そのような化合物に基づく更に好ましい化合物は、好ましくは、例えば、化合物１の［ＩＢＴ］基をアミノ酸又はジペプチド、例えば、グリシン又はアラニン又はグリシンアラニンに結合させるか、又は化合物２及び３におけるように、リジン基を末端キャッピング（好ましくは、本明細書において他に記載されているように、カルボキシル基をアミドを形成するアミンで、又はやはり本明細書に記載されているようにアミンをアシル基で）することで、図２における化合物のビオチン部分（例示された化合物においてレポーターとして用いるために存在する）を除去する。
本発明の更なる態様としては、本発明の少なくとも１つの三官能性のキメラ化合物であるＳｙＡＭ化合物の有効量と、全てが有効量である本明細書において他に記載されている化合物の１つ以上の組み合わせを、薬学的有効量の担体、添加剤又は賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物である。
本発明の組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体を用いて通常の方法で剤形化されることができ、また、制御放出製剤として投与され得る。そのような医薬組成物に用いられ得る薬学的に許容される担体には、これらに限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ステアリン酸セリウム、レシチン、血清アルブミン、例えば、ヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えば、ホスフェート、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カルシウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩又は電解質、例えば、プロラミンサルフェート、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド性シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸塩、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロック重合体、ポリエチレングリコール及びラノリンが含まれる。
本発明の組成物は、経口的に、非経口的に、吸入スプレーを通じて、局所的に、直腸内に、鼻腔に、頬側に、経膣的に、又は移植貯蔵容器を通じて投与され得る。本明細書で使用された用語「非経口的」は、皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、脳室内、胸骨内、髄腔内、肝臓内、病変内及び頭蓋内注射又は注入技法を含む。好ましくは、組成物は、経口的に、腹腔内に又は静脈内に投与される。
本発明の組成物の滅菌注射の形態は、水性又は油性の懸濁液であり得る。そのような懸濁液は、当業界に公知になった技法によって適合な分散又は湿潤剤及び懸濁化剤を用いて剤形化され得る。滅菌注射製剤はまた、無毒性の非経口的に許容される希釈剤又は溶媒中の滅菌注射溶液又は懸濁液、例えば、１，３−ブタンジオールのうちの溶液として存在することができる。採用され得る許容可能なピヒクル及び溶媒の中には、水、リンゲル液及び等張性の食塩水がある。更に、滅菌固定オイルが溶媒又は懸濁媒質として通常採用される。そのような目的のために、合成モノ−又はジ−グリセリドを含む任意の無菌の固定油（ｂｌａｎｄ ｆｉｘｅｄ ｏｉｌ）が採用され得る。脂肪酸、例えば、オレイン酸及びそのグリセリド誘導体が注射用製剤に有用であり、同様に、天然薬学的に許容されるオイル、例えば、特にそのポリオキシエチル化したバージョンのオリーブ油又はなたね油も採用され得る。そのようなオイル溶液又は懸濁液がまた、ＰＨ．Ｈｅｌｖ又は類似アルコールのような長鎖のアルコール希釈剤又は分散液を含むことができる。
本発明の医薬組成物は、これらに限定されないが、カプセル、錠剤、水性懸濁液又は溶液を含む任意の経口的に許容される投与の形態で経口的に投与され得る。経口用錠剤の場合、通常用いられる担体は、ラクトース及びトウモロコシデンプンを含む。潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムがまた、一般的に添加される。カプセル形態の経口投与のためには、有用な希釈剤は、ラクトース及び乾燥したトウモロコシデンプンを含む。水性懸濁液が経口用として必要な場合、活性成分は、エマルジョン化剤及び懸濁剤と組み合わされる。必要に応じて、特定の糖化剤、風味剤又は着色剤がまた添加され得る。
あるいは、本発明の医薬組成物は、直腸内の投与用として座剤の形態で投与され得る。それらは、薬剤を室温では固体であるが、直腸内の温度では液体であるため、直腸内では溶融して薬物を放出する適合な無刺激性の賦形剤と薬剤とを混合して製造され得る。そのような材料にはココアバター、ミツロウ及びポリエチレングリコールが含まれる。
本発明の医薬組成物はまた、特に皮膚癌、乾癬又は皮膚で又は皮膚上で発生する任意の疾患の治療のために局所的に投与され得る。適合な局所の製剤は、それらの各部位又は臓器用として容易に製造される。下部腸管用の局所的な適用は、直腸内の座剤の製剤（前記を参照）又は適合なかん腸製剤として行われ得る。局所用として許容可能な経皮パッチがまた用いられ得る。
局所的な適用のために、医薬組成物は、１つ以上の担体中に懸濁又は溶解した活性構成成分を含有する適合な軟膏中に剤形化され得る。本発明の化合物の局所投与用担体には、これらに限定されないが、ミネラルオイル、ワセリン、白色のワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、エマルジョン化ワックス及び水を含む。
あるいは、医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体内に懸濁又は溶解した活性構成成分を含有する適合なローション又はクリームに剤形化され得る。適合な担体には、これらに限定されないが、ミネラルオイル、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール及び水が含まれる。
眼科用としては、医薬組成物が等張性の、ｐＨ調整された滅菌食塩水中の未分化された懸濁液として、又は、好ましくは、ｐＨ調整された滅菌食塩水中の塩化ベンザルコニウムのような保存剤の存在又は不存在下の溶液として剤形化され得る。あるいは、眼科用として、医薬組成物が、ワセリンのような軟膏に剤形化され得る。
本発明の医薬組成物はまた、鼻エアロゾル又は吸入によって投与され得る。そのような組成物は、薬学的製剤分野の広く公知になった技法によって製造され、ベンジルアルコール又はその他の好適な保存剤、生物利用能を増強する吸収促進剤、フルオロカーボン、及び／又はその他の通常の可溶化剤又は分散剤を採用して食塩水中の溶液として製造され得る。
単一投与形態の製造のために、担体物質と組み合わせられ得る本発明の医薬組成物中の化合物の量は、治療する宿主及び疾患、特定の投与方式によって変更することができる。好ましくは、組成物は、約０．０５ミリグラム〜約７５０ミリグラム又はそれ以上、更に好ましくは、約１ミリグラム〜約６００ミリグラム、更に好ましくは約１０ミリグラム〜約５００ミリグラムの活性成分を単独で、又は癌、前立腺癌又は転移性前立腺癌又はそれらの二次的な影響又は状態を治療するために用いられ得る少なくとも１つの更なる非抗体動員化合物と組み合わせて含有する。
いずれかの特定の患者のための特定の用量及び治療計画は、用いられる特定の化合物の活性、患者の年齢、体重、一般的な健康、性別、食生活、投与時間、排せつ率、薬物の組み合わせ、及び治療する医者の判断及び治療される特定の疾患又は症状の重症度を含む様々な因子に依存することがまた理解されるであろう。
癌を患う患者又は対象（例えば、男性のヒト）は、患者（対象）に薬学的に許容される担体又は希釈剤中に単独で、又は好ましくは転移性前立腺癌を含む前立腺癌の治療又は前立腺癌と関連した二次的な影響及び状態の緩和を補助することができるその他の公知になった抗癌剤又は薬学的な薬剤と組み合わせて有効量の本発明のキメラ抗体動員化合物、その薬学的に許容される塩、溶媒和物又は同質異像体を投与して治療されることができる。この治療はまた、放射線照射治療又は外科手術のような通常の癌の治療法と併用して投与されることができる。
そのような化合物は、任意の好適な経路、例えば、経口的、非経口的、静脈内、皮膚内、皮下又は局所的に液体、クリーム、ゲル又は固体の形態の中に又はエアゾールの形態で投与されることができる。
活性化合物は、薬学的に許容される担体又は希釈剤中に治療する患者に深刻な毒性の効果を提供しないながら、所望の意図によって患者に治療の有効量を伝達するのに十分な量で含まれる。本明細書において言及された全ての状態に対する好ましい用量は、１日に対して約１０ｎｇ／ｋｇ〜３００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、更に一般的には１日毎に受容者／患者の体重ｋｇ当たり０．５〜約２５ｍｇの範囲である。典型的な局所用量は、好適な担体の中に０．０１〜３％ｗｔ／ｗｔの範囲である。
化合物は、通常、これらに限定されないが、単位投与の形態毎に１ｍｇ未満、１ｍｇ〜３０００ｍｇ、好ましくは５〜５００ｍｇの活性成分を含むことを含む、任意の好適な単位投与の形態で投与される。約２５〜２５０ｍｇの経口投与が多くの場合に便利である。
活性成分は、好ましくは約０．００００１〜３０ｍＭ、好ましくは約０．１〜３０μＭの活性化合物の頂点の血漿濃度の達成のために投与される。これは、例えば、任意で食塩水又は水性媒質中の活性成分の溶液又は製剤の静脈内注射によって達成されるか、又は活性成分のボーラスとして投与され得る。経口投与がまた、活性剤の有効な血漿濃度の生成に適切である。
薬物組成物中の活性化合物の濃度は、薬物の吸収、分布、不活性化及び排せつ率、並びに当業者に公知の他の要因に依存する。用量はまた緩和されるべき状態の重症度によって変わるものであることに留意されたい。更に、いずれかの特定の対象について、特定の投薬計画は、個人の要求及び組成物の投与を管理又は監督する人の専門的な判断によって時間と共に調整されなければならず、本明細書に記載されている濃度範囲は単なる例示であり、本発明の組成物の範囲又は実施を限定する意図ではないことに留意されたい。活性成分は、一度に投与され得るか、又は投与される用量を時間の間隔を異ならせて数回で更に少ない量に分けて投与することができる。
経口用組成物は、一般的に、不活性希釈剤又は食用担体を含む。これらは、ゼラチンカプセルに密閉されるか又は錠剤に打錠され得る。経口治療投与の目的から、活性化合物又はプロドラッグ誘導体は、賦形剤と混入されることができ、錠剤、トローチ又はカプセルの形態で用いられ得る。薬学的に相溶性の結合剤及び／又はアジュバント物質が、組成物の一部として含まれ得る。
錠剤、丸剤（ｐｉｌｌｓ）、カプセル、トローチなどが次の成分のいずれかを含有することができる：結合剤、例えば、微細結晶性セルロース、ドラガカントガム又はゼラチン；賦形剤、例えば、デンプン又はラクトース、崩解剤、例えば、アルギン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）、又はトウモロコシデンプン；潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム又はステロテス（Ｓｔｅｒｏｔｅｓ）；滑剤、例えば、コロイド状二酸化ケイ素；糖化剤、例えば、スクロース又はサッカリン；又は風味剤、例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジ風味剤。用量の単位形態がカプセルである場合、これは、前記類型の材料に加えて、脂肪オイルのような液体の担体を含有することができる。更に、投薬単位形は、投薬単位の物理的形態を改質する様々な他の物質、例えば、糖、セラック又は腸溶剤のコーティングを含むことができる。
活性化合物又はその薬学的に許容される塩は、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウエハース、チューインガムなどの構成成分として投与され得る。シロップは、活性化合物に加えて、糖化剤としてのスクロース及び特定の保存剤、染料及び着色剤、並びに風味剤を含有することができる。
活性化合物又はその薬学的に許容される塩が、更に、所望の作用に不利でないその他の活性物質、又は所望の作用を補充するその他の活性物質、例えば、その他の抗癌剤、抗生剤、抗真菌剤、抗炎剤又は抗ウイルス化合物と混合され得る。本発明の特定の好ましい実施形態において、本発明の１つ以上のキメラ抗体動員化合物が、本明細書において他に記載されている別の抗癌剤及び／又は別の生物活性剤と共投与される。
非経口、皮内、皮下又は局所適用に用いられる溶液又は懸濁液は、次の構成成分を含有することができる：滅菌希釈剤、例えば、注射用水、食塩水溶液、固定されたオイル、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又はその他の合成溶媒；抗バクテリア剤、例えば、ベンジルアルコール又はメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；緩衝剤、例えば、アセテート、クエン酸塩又はホスフェート及び等張性の調整のための薬剤、例えば、塩化ナトリウム又はデキストロース。非経口用製剤は、アンプル、１回用注射器又はガラス又はプラスチック製の多重用量のバイアルに密封され得る。
静脈内に投与される場合、好ましい担体は、生理的食塩水又はホスフェート緩衝食塩水（ＰＢＳ）である。
一実施形態において、活性化合物は、その化合物を身体からの迅速な除去に対して保護する、移植物及びマイクロカプセル化された伝達システムを含んで制御放出製剤のような担体を用いて製造される。生分解性、生物相容性重合体が用いられ得るが、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸がある。そのような製剤の製造方法は、当業者にとって自明である。
リポソーム懸濁液がまた、薬学的に許容される担体であり得る。それらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号（本明細書に全文が参考文献として含まれる）に記載されているような当業者に公知になった方法により製造され得る。例えば、適切な脂質（例えば、ステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ステアロイルホスファチジルコリン、アラカドイルホスファチジルコリン及びコレステロール）を無機性溶媒に溶解させた後、前記溶媒を蒸発させ、容器の表面上に乾燥した脂質の薄膜のみを残して製造され得る。そして、容器に導入される。次に容器は、手で振って脂質物質を容器の側面から遊離させ、脂質の凝塊を分散させることによってリポソーム懸濁液を形成する。
化合物設計の根拠
そのようなＳｙＡＭ−Ｐｓの構築において第一の目標は、ＦｃγＲＩ受容体及びＰＳＭＡの両方に結合することができる適切な二官能性の分子を設計することである。本願の発明者らは、［ＣＢＴ］（すなわち、ＰＳＭＡ結合モチーフ）をＩＢＴ（すなわち、ＦｃγＲＩ結合モチーフ）に連結することが、二官能性の分子（ＳｙＡＭ−Ｐ１）が抗体動員分子を模倣するようにし、よって、細胞表面ＰＳＭＡ及びＦｃγＲＩの間で三重複合体を型板化することができるようにするものと推論した。
ＰＳＭＡ
ＰＳＭＡは、前立腺の正常な細胞に比べて前立腺癌細胞上で高度に過発現される細胞表面蛋白質である。ＰＳＭＡに選択的にかつ高い親和性を有して結合するいくつかの小型分子リガンドが開発されているが、ここには２−ＰＭＰＡ及びグルタメートウレアが含まれる。従って、［ＣＢＴ］（ＰＳＭＡ結合部分）が選択され、本発明に用いられる。
免疫の活性化のために、Ｆｃ受容体ファミリーの免疫の活性化の構成員であるＦｃγＲＩを標的化することと選択したが、これは、免疫系の数多くの細胞において発現される。特に、ＦｃγＲＩは、抗体オプソニン化標的に対する炎症反応の開示に原因を提供する細胞表面免疫受容体である。前記受容体は、ＩｇＧのＦｃ部分に結合し、単核球及びマクロファージを含む数多くの免疫細胞の表面で発現される。そのような受容体のライゲーションは、多様な炎症反応をもたらすが、ここには食作用及び活性酸素種の生成が含まれる。ＦｃγＲＩ結合モチーフの複数の複製物を提示する標的は、受容体の架橋の形成及び後続信号の伝達を誘導し、これは、炎症反応をもたらす11。最近、Ｆｃ−ガンマファミリーにおいて受容体に結合することができるペプチドが報告されている12、13、14。具体的に、ＦｃγＲＩに結合することができるペプチドであるＣＰ３３が、ファージディスプレイを用いて発見された12。従って、本発明の発明者らは、好ましくはＣＰ３３ペプチドを用いてＳｙＡＭのＩＢＴ部分を開発することによって、ＦｃγＲＩを発現するエフェクター細胞の選択的な動員及びその後の活性化を可能にした。
従って、本発明の発明者らは、先ず、２つの部分を連結するＦｍｏｃ固相ペプチドの合成を用いてＳｙＡＭ−Ｐ１分子を合成した（図２）。そのような化学合成の結果として、本発明の発明者らは、前記２つの部分を連結することが、選択的な方式によってそれらのそれぞれの蛋白質の標的に結合するそれらの能力に影響を与えるのか否かを決定することを試みた（図３Ａ、Ｂ）。従って、本発明の発明者らは、ＳｙＡＭ−Ｐ１として識別される、ＳｙＡＭ−Ｐ分子の第１世代のＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞上のＰＳＭＡ（図３Ａ）又はＩＩＡ１．６細胞上のＦｃγＲＩ（図３Ｂ）に結合する能力を評価した。そのような実験は、ビオチンで官能化されたＳｙＡＭ−Ｐ１分子を用いて行われており、結合されたＳｙＡＭ−Ｐ１は、蛍光で標識されたストレプトアビジンを用いてフローサイトメトリーによって検出した。ＳｙＡＭ−Ｐ１は、その各標的に対して結合する能力を証明した。
本発明の発明者らは、次に可溶性のＰＳＭＡ及びＦｃγＲＩ発現細胞（ＩＩＡ１．６細胞）を用いて三重複合体の形成を誘導するＳｙＡＭ−Ｐ１の能力を評価した（図３Ｃ）。ＰＳＭＡの細胞に対する結合は、フィコエリトリン抗ＰＳＭＡ抗体を用いて探針し、フローサイトメトリーを用いて分析した。本発明の発明者らは、ＩＩＡ１．６細胞の表面上で発現されるＦｃγＲＩ及び可溶性の組換え体ＰＳＭＡとの間における三重複合体の形成が、ＳｙＡＭ−Ｐ１を通じて介在されるということを見出した。
総合すると、前記データは、ＳｙＡＭ−Ｐ１がＦｃγＲＩ及びＰＳＭＡの両方と同時に相互作用することができ、よって、細胞の環境で三重複合体を形成することが可能であることを明白に示す。そのような三重複合体の形成は、抗体の標的蛋白質及びＦｃ受容体に結合する抗体の能力を模倣する。そのような結果は、一般的な構造の設計及びそれに基づいた計算モデルのための批判的な評価を提供する。更に、前記２つの結合部分を疎水性リンカーに連結することは、個別の構成要素のそれらの各パートナーに選択的に結合する能力を無力化しない。
ＳｙＡＭ−Ｐ１は、ＰＳＭＡ及びＦｃγＲＩの両方に選択的に結合することができ、よって、ＰＳＭＡを提示する標的とプライムエフェクター細胞との間の三重複合体の形成が、炎症反応を誘発するであろう。次に本発明の発明者らは、ＳｙＡＭ−Ｐ１分子がＦｃγＲＩを架橋し、免疫エフェクター細胞によって免疫の応答を誘導することができるか否かを決定することを試みた。そのような目的から、ＳｙＡＭ分子によって介在される炎症反応を評価するために、本発明の発明者らは、免疫エフェクター細胞のスーパーオキシドの急増及び食作用反応を分析した（図３Ｄ、Ｅ）。本発明の発明者らは、ＳｙＡＭ−Ｐ１介在免疫エフェクターの応答性の評価のために、不滅化した単核球のエフェクター細胞株（Ｕ９３７細胞）を用いた。９３７細胞は、ＩＦＮ−γによってプライムしたが、これは、ＦｃγＲＩの上向き調節を誘導し、細胞を炎症反応（スーパーオキシドの急増及び食作用）に対して細胞をプライムする。スーパーオキシドの急増は、前炎症応答の間に発生し得る反応性酸素種（ＲＯＳ）の放出を特徴とする。そのような応答性の規模は、ルシゲニン分析を用いて測定され得る。食作用は、オプソニン化標的の能動的貪食である。
用いられた食作用の分析は、ＰＳＭＡが標識されたＦｌ１蛍光ビーズをＦｌ４染色されたＩＦＮ−γプライムＵ９３７細胞と共にＳｙＡＭ−Ｐ１の存在下でインキュベーションすることを伴う。食作用は、フローサイトメトリー及び顕微鏡で観察した。結果は、ＳｙＡＭ−Ｐ１がスーパーオキシドの急増（図３Ｄ）、及びＰＳＭＡコーティングされたビーズの食作用（図３Ｅ）が用量に依存して起きるように誘発することを指し示した。特に、ＳｙＡＭ−Ｐ１は、標的に依存して１００ｎＭ及び１μＭの濃度でスーパーオキシドの急増を誘発することができた。食作用の分析において、その化合物のＥＣ50は２６ｎＭであった。ＰＳＭＡ阻害剤（２−ＰＭＰＡ）又はＦｃγＲＩ阻害剤（ＩｇＧ）の存在下で分析が行われたときに、上記で識別された免疫エフェクターの応答性が廃棄された（データは示されない）。
その結果は、三重複合体結合の結果が、能動的免疫学的な応答として解釈され得ることを証明した。ＳｙＡＭ−Ｐ１に対するそのような理論実験の証拠は、完全な合成分子がＰＳＭＡを提示する標的に対するＦｃγＲＩ−依存型免疫応答を誘導することができるという仮設を裏付けた。抗体の標的化及びエフェクター機能の両方が完全な合成の二官能性の分子によって有効に模倣されることができた。
ＳｙＡＭ−Ｐ１は、標的蛋白質コーティングされたビーズに対してエフェクター−細胞介在応答性を誘導することができるので、本発明の発明者らは、分子がＰＳＭＡ発現細胞に対して効果を発揮することができるか否かを評価した。そのような目的のために、本発明の発明者らは、ＰＳＭＡ発現ＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞に対するプライムＵ９３７エフェクター細胞によるＳｙＡＭ−Ｐ１誘導された免疫応答を評価した。彼らは、蛋白質コーティングされたビーズ実験と類似するように、スーパーオキシドの急増及びエフェクター細胞の食作用をいずれも評価することによってＵ９３７介在免疫効果を試験した。前記実験において、ＩＦＮ−γプライムＵ９３７細胞をＰＳＭＡ発現ＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞とインキュベーションし、様々な濃度のＳｙＡＭ−Ｐ１で処理した。得られたスーパーオキシド急増の応答は、ルシゲニン分析を用いて測定した（データは示されない）。更に、プライムＵ９３７細胞（ＦＬ４メンブレン染料であるＤｉＤで染色）を標的ＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞（ＦＬ１メンブレン染料であるＤｉＩで染色）と、様々な濃度のＳｙＡＭ−ＰＩの存在下でインキュベーションした。得られた食作用−ＦＬ１及びＦＬ４の二重の陽性細胞で表示−を２色相のフローサイトメトリーを用いて測定した。陽性の対照群として、ＡＲＭ−Ｐ８を抗ＤＮＰ抗体と組み合わせたことを用いた。ＡＲＭ−Ｐ８が有意な応答性を誘導することができたのに対し、ＳｙＡＭ−Ｐ１は、標的細胞に対しては任意の免疫応答を誘導することができなかった（データは示されない）。Ａｒｍ−Ｐ８を用いて示された陽性応答性は、ＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩＡの両方を免疫エフェクターの細胞上でライゲートする抗体の能力に潜在的に寄与し、免疫信号の伝達及び食作用反応を増加させる。
ＳｙＡＭ−Ｐ１分子がＰＳＭＡ標識ビーズに対してエフェクター細胞介在食作用を誘導することができるが、ＰＳＭＡ発現細胞に対して類似した応答性は導き出せなかったことを考慮して、それが、本出願人は、２つの異なる標的の表面積μｍ2当たりのＰＳＭＡ分子の差別的な程度による結果であり得るという仮設を立てた（図５）。そのような結果は、本発明の発明者にビーズの表面上のＰＳＭＡ標識化をＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞上のものと比較することを促した。
標的細胞のオプソニン化の程度は、観察されたエフェクター細胞介在免疫応答に正比例し、重要なことは、閾値のオプソニン化が、任意の応答性の観測前に到達しなければならないという点である。食作用を介在するＳｙＡＭ−Ｐ１の能力は、様々な量のＰＳＭＡを積載させたビーズを用いて評価した。プライムＵ９３７細胞によるビーズの食作用の程度は、表面上に提示されるＰＳＭＡのレベルと直接の相関関係にある（図５）。ＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞の表面上のＰＳＭＡの発現レベルは、フィコエリトリン抗ＰＳＭＡ抗体を用いて測定しており、フィコエリトリン蛍光補正ビーズを用いて算出した。ＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞は、試験したビーズの最低レベルより更に少ないμｍ当たりのＰＳＭＡ蛋白質を表示する（図５）。ＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞は、約９１８ＰＳＭＡ蛋白質／μｍ2を表示したのに対し、分析に用いられたビーズは、約５５７７ＰＳＭＡ蛋白質／μｍ2を表示した。エフェクターの応答性及びオプソニン化の程度の間の直接的な相関関係を考慮すると、標的細胞の表面上のＰＳＭＡの発現レベルは、ＳｙＡＭ−Ｐ１介在応答性を誘導するには不十分である。表面上のＰＳＭＡのレベルが、ＳｙＡＭ−Ｐ１分子の効能と直接相関することを考慮して、本発明の発明者らは、分子のＴＢＴ領域の親和性を２価表示（ｂｉｖａｌｅｎｔ ｄｉｓｐｌａｙ）を通じて増加させることが、平衡において表面をＰＳＭＡ結合させるＳｙＡＭ−Ｐ１の量を増加させるという仮設を立てた。本発明の発明者らは、ＰＳＭＡ結合部分の局地的濃度を増加させることによって、明らかなＫｄが増加するものと思われ、これは、有効濃度の範囲を増強するものと思われ、平衡において表示される分子のレベルを高めるものと思われる、と推論した。
その仮設によると、ＳｙＡＭ−Ｐ分子は、ＰＳＭＡ標的化モチーフの２価表示を含めるために再度設計され、その効能を増強する（ＳｙＡＭ−Ｐ２）（図２、化合物２）。先ず、それらは、ＳｙＡＭ−Ｐ２のＰＳＭＡコーティングされたビーズに対する結合を確認し、親和性を比較した。以後、プライムＵ９３７細胞のＰＳＭＡコーティングビーズに対するＳｙＡＭ−Ｐ２介在免疫応答を評価した（図４Ａ）。最終的に、本発明の発明者らは、プライムＵ９３７細胞においてＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞に対するスーパーオキシド急増の応答又は食作用の応答を誘導する能力に対するＳｙＡＭ−Ｐ２の有効性を試験した（データは示されない）。ＳｙＡＭ−Ｐ１のＰＳＭＡコーティングされたビーズに対する結合（ＥＣ50＝４０ｎＭ）は、ＳｙＡＭ−Ｐ２（ＥＣ50＝２６ｎＭ）のものより効果が低かった。
ＳｙＡＭ−Ｐ２は、ＳｙＡＭ−Ｐ１に比べて更に広い効能の範囲を有しており、ＰＳＭＡコーティングされたビーズの遥かに更に高い程度の食作用（図２Ａを参照）を誘導することができた。この結果に後押しされて、本発明の発明者らは、ＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞に対して免疫学的有効性を介在するＳｙＡＭ−Ｐ２の能力評価を進めた。不運にもスーパーオキシドの急増又は食作用のある応答性は示されなかった（データは示されない）。しかし、結合モチーフの表示を増加させると、ＰＳＭＡコーティングされたビーズに対してスーパーオキシド急増の応答性及び食作用の度合いが直ぐに増加した。これは、ＰＳＭＡ結合の側面上の結合の増加が明らかなＫｄを増加させるという仮設を立証した（ＳＩ図４）。細胞の存在下でのＦｃγＲＩのＳｙＡＭ−Ｐ２によるライゲーションの程度は、依然としてＰＳＭＡ発現細胞に対して見合う臨床的に適切な免疫応答を誘導するのに依然として不十分である。
本発明の発明者らはまた、ＳｙＡＭ−Ｐ２において表示されるアミノカプロン酸リンカーの利用時に最も剛健な結果を示した、前記第２世代の分子におけるリンカーの長さ及び組成を調べた（ＳＩ図３）。ＳｙＡＭ分子の第２世代は、ＰＳＭＡビーズ実験の効能を増加させたが、依然としてＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞に対して見合う応答性を誘導することはできないものと示された。本発明の発明者らは、それがＦｃ受容体の不十分な架橋によるものであるいう仮設を立てた。これを考慮して、本発明の発明者らは、ＰＳＭＡ標的化モチーフ及びＦｃγＲＩ標的化モチーフの２価表示の全てを通じてその効能を増強するためにＳｙＡＭ−Ｐ２を最適化した。そのような分子をＳｙＡＭ−Ｐ３と名付けた（図１、３）。
次に、本発明の発明者らは、ＰＳＭＡコーティングされたビーズに対してＳｙＡＭ−Ｐ３誘導された免疫有効性（すなわち、Ｕ９３７介在されたスーパーオキシドの急増及び食作用）を試験した（図４Ａ及びＢ）。ＳｙＡＭ−Ｐ３は、スーパーオキシド急増の生成（図４Ａ）及び食作用（図４ｂ）の両方において、ＳｙＡＭ−Ｐ２と比較してＰＳＭＡビーズに対する遥かに大きな免疫応答を誘導することができる。応答性は、食作用の強度及び効力のある範囲の両方において遥かに大きかった。対照実験において、スーパーオキシドの急増は、分子及びビーズのＰＳＭＡ標識化の両方の存否に依存することが示された（ＳＩ図６）。ビーズの食作用は、２−ＰＭＰＡ及びヒトＩｇＧの全てと競争することができる（ＳＩ図５）。最終的に、本発明の発明者らはまた、ＰＳＭＡ発現ＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞のＵ９３７介在食作用の促進においてＳｙＡＭ−Ｐ３の効能を評価した（図４Ｃ）。前記の場合、ＳｙＡＭ−Ｐ３は、ＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞に対して用量に依存してＵ９３７介在食作用を有効に誘導することができた（図４Ｃ）。本発明の発明者らは、画像獲得能力を有しているフローサイトメトリー（アムニス）を用いてＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞の食作用を視覚的に立証することができた（図４Ｄ）。前記方法を用いて、本発明の発明者らは、食作用カップが形成されている食作用の初期段階及び完全に食菌されたＲＭ１．ＰＧＬＳの最終段階の両方を視覚で確認した。前記食作用は、２−ＰＭＰＡ及びヒトＩｇＧの全てと競争することができた（ＳＩ図７）。スーパーオキシドの急増の分析において、ＳｙＡＭ−Ｐ３及びＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞では応答性が示されなかった。
三重複合体モデル、［ｒｅｆ］（ＳＩ図４Ｂ）に基づいて、ＦｃγＲＩライゲーションモチーフの個数を増加させると、ＰＳＭＡコーティングされたビーズに対して標的化された免疫応答を引き起こすＳｙＡＭ−Ｐ分子の強度及び効能の全てを増強した。ＳｙＡＭ−Ｐ３は、ＰＳＭＡ発現細胞の免疫エフェクター細胞介在食作用刺激に有効である。ＳｙＡＭ−Ｐ３を用いると、応答性は、１ＯｎＭ濃度の分子で頂点を示したが、これは、ＡＲＭ−Ｐ８及び抗ＤＮＰ抗体を用いて観察される最大値の応答性の頂点から変動したものである（ＳＩ図８）。三重複合体平の衡最大値におけるそのような変動は、本出願人の分子がある濃度においてＡＲＭ−Ｐ８分子より規模の面において更に良い免疫学的応答性を誘導することができることを示す。
考察
本出願に開示されている化合物は、それらが非常に特異的な方式でＦｃγＲＩを通じて免疫応答を誘導するモノクローナル抗体の能力を直接模倣することができる最初に報告された完全な合成分子であるという点において、優れたものである。本出願のＳｙＡＭｓが免疫細胞に直接結合して免疫応答を引き起こすことができる合成分子であることを考慮すると、それらがＡＲＭ分子とは異なって内因性抗体と独立したそれらの機能を介在することができる8b、c。本発明のＳｙＡＭ分子は、免疫系のその他の経路との交差反応性を制限しつつ単一の活性化受容体、ＦｃγＲＩを通じて機能する。ＦｃγＲＩに対する分子の特異性は、生体内のｍＡｂｓの効能の低減に関与している抑制性のＦｃγＲＩＩｂの交差ライゲーションを防止する。Ｆｃファミリーの受容体を選択的に標的化することによって、抗原配列の交差提示のための潜在力が存在するようになり、更に、適応免疫応答を引き起こす。ＳｙＡＭｓは、具体的には、化学物同種性の欠如、制限された範囲の病院標的、Ｆｃ応答を損傷させる補体沈着の活性化15及び試験管内の作用メカニズムの予測における困難のようなｍＡｂの利用時の不利な側面を解決する。
合成及び精製することが容易であることに加え、本発明のスキャフォールド及び収束合成は、迅速な変更に好適である。これは、その他のＴＢＴを速やかに追加することができるようにして、その手法の利用範囲を拡張する。更に広く見れば、免疫細胞の細胞毒性の機能を転用する小型分子を用いた一般的な戦略が、ウイルス及びバクテリアの感染のような病理生理学的に無関係な広範囲なヒト疾患における適用潜在性を有している。
化学物の合成
本発明の化合物の化学合成は、様々な構成要素のビルブロック（ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｂｌｏｃｋ）を製造した後、そのようなビルブロックを互いに縮合して本発明の化合物を作り出すことによって段階的に進められる。本特許出願において確認された化合物の特定の合成が、個別の構成要素と段階的な方式で進められるのに対し、使用される様々な取り換えが、本発明の全ての化合物を合成するために、類似の化学反応を用いて他の構成要素と容易に取り換えられ得る。以下の合成スキームは、本発明の化合物を製造するために利用される化学の例である。前記化学は、直接又は類似した方式で本発明の化合物の全ての製造に用いられ得る。
ＳｙＡＭ−Ｐ１（ビオチンを備える）
この化合物は、図１５に示されている化学物の合成スキームによって合成され、図１６のＳｙＡＭ−Ｐ１を提供する。図１５に示されているスキームによって、アジド基を含むトリエステルウレアＣＢＴ基（以下、ＳｙＡＭ−Ｐ３についてのスキームにおいて示される）が、アスコルビン酸ナトリウム、硫酸銅、水、ｔｅｒｔ−ブタノールのうちのアセチレンヘキシン酸とマイクロウェーブで反応して［ＣＢＴ］に共有結合されているトリアゾール［ＣＯＮ］基を形成する。中間体の遊離したカルボン酸基が塩化アシル誘導体に変換されるが、次にこれは、前記中間体の遊離したカルボン酸基が塩化アシル誘導体に変換され、これは、ＤＩＰＥＡ中のリジンウレタン誘導体と反応させてウレタン部分を含むＣＢＴ−リジン中間体を提供する。固相ペプチドの合成がグリシン基をリジンのカルボン酸上に位置させ、アミン基は脱保護され、アミノヘキサン酸単位を含むペプチドリンカーで置換される（図２は、５つのアミノヘキサン酸単位を示す）。前記中間体は、更にＣＰ３３連結されたリジン基（ビオチン結合が必要な場合）又はＣＰ３３アミノ酸（アラニン又はグリシン）と反応してＣＰ３３基をＣＢＴ部分分子（ビオチン結合部材）に連結した。あるいは、ＣＰ３３基は、別のアミノ酸、ジペプチドを含むオリゴペプチド（例えば、他のものの中でも、特にグリシンアラニン、グリシングリシン又はアラニンアラニン）と反応してＳｙＡＭ−Ｐ１分子を提供する。
ＳｙＡＭ−Ｐ２
ＳｙＡＭ−Ｐ２の合成は、図１７に示されているスキームによって進められる。前記合成によって、リジンの側鎖上にアジド基を含むアジドブロック形成グルタメート−リジンジペプチドは、アセチレン基を含む末端キャッピングされたポリエチレングリコールと反応して遊離したアミンと中間体ＣＢＴ複合体を形成する（図１７のｓ−２）。遊離したアミンは、［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］部分（図１７のｓ−３）と反応してステップｂで示すように、２つのＣＢＴ基を［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］部分Ｓ−３に縮合させる。得られた中間体は、２つのＣＢＴ基、Ｘ−２の［ＣＯＮ］基を［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基（ｓ−３）に連結するリンカーを含み、ジペプチド又はオリゴペプチドに連結されたＣＰ３３基を含む中間体２−７と縮合され得る中間体Ｓ−４（トリアゾール［ＣＯＮ］基上に結合されているリンカー上の置換基によって可変的であり得る）を提供する。ジペプチド又はオリゴペプチドは、末端キャッピングされて非反応性基を提供するか、又は更に反応して診断／実験適用のためのビオチン部分を提供することができる。図１７におけるＳ−７は、アラニン−リジン−リジントリペプチドを介してＣＰ３３を連結するが、ここで、遠距離のリジンの側鎖は、ビオチン部分に結合するが、Ｓ−７の修飾は容易になり得る。あるいは、ビオチンを回避するＳｙＡＭ−Ｐ２は、化合物をビオチン部分に結合される別のリジンに延長させるよりは単に非反応性基（例えば、アミド）によって先ずリジン末端キャッピングされ得る。図１７の化学物の合成において、［ＩＢＴ］基（中間体Ｓ−７を含むＣＰ３３）は、中間体ｓ−４の活性化したエステルに縮合され、ＣＰ３３を含む構成要素を２つのＣＢＴリンカー基が結合されている［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］（ｓ−２）基に連結する。これは、結果として最終の生成物ＳｙＡＭ−Ｐ２を提供し、これは、診断／分析のためのビオチン又はその他のレポーター構成要素を含むことができるか、又は本明細書において他に記載されているように、前立腺癌の治療において治療剤として用いるためのレポーター構成要素の存在を回避することができる。
ＳｙＡＭ−Ｐ３（ビオチンなし）
これは、本発明によって好ましい化合物である。この化合物は、中央の［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］三官能性の１，３，５−フェニル基を介して連結された２つのＩＢＴ基及び２つのＣＢＴ基を有する。この化合物の合成は、図１７に示されている化学合成スキームによって好ましいＣＢＴ基の製造と共に開始する（前の部分の尿素の形成下に）。ジエステル保護されたグルタメート類似体は、先ず、トリポスゲンと反応した後、二重保護されたリジン化合物（αアミノ基が保護されていないままにある）と反応して、水素添加（ｐｄ／Ｃ）されてリジンの側鎖のアミン位置においてＣｂｚ保護基を除去する四重保護された中間体を形成し、これは、ＴｆＮ3、硫酸銅及び炭酸カリウムを用いてアジド部分に変換されてアジド部分を含む三重保護された尿素を形成する。この化合物は、本発明の化合物の合成のうち多数で用いられるＣＢＴシントン（ｓｙｎｔｈｏｎ）であるが、これは、前記アジドがアセチレン基と縮合され、本発明の化合物において好ましい［ＣＢＴ］部分に結合するようになるトリアゾール［ＣＯＮ］基を容易に形成することができるためである。
同じ図１７において、非天然アミノ酸リンカーが、アミン官能基を保護するＢｏｃ基をジオキサン中の強酸において除去し、次に１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロキシクロライド（ＥＤＣ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾル（ＨＯＢｔ）及びΝ，Ν−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）中でアミン保護されたアミノ基の遊離アミノに縮合させることによってベンジル保護されたトリペプチドを得ることによって、合成の脱保護アミノ酸から製造される。得られたトリペプチドの末端アミン基は保護され（ＦｍｏＣ）、ベンジル基は、水素添加の条件を用いて脱保護され、Ｎ−末端保護されたリンカートリペプチドを得る。これは、第１リンカーである。
第２リンカーは、アセチレンアミン基をＥＤＣ、ＨＯＢｔ及びＤＩＰＥＡの存在下でジ−Ｎ保護された（Ｆｍｏｃ）リジン化合物の遊離したカルボン酸基に縮合して合成される。次に、結果として得られるアセチレン保護されたリジン化合物は脱保護され、前記得られたアミン脱保護された第１リンカーと反応してジリンカー（ｄｉｌｉｎｋｅｒ）置換されたアセチレンリジン中間体を形成し、これは脱保護され（２つのＦｍｏｃ基がジエチレンアミン中に除去される）、次にアジドジカルボン酸ベンゼン類似体と縮合される。ベンゼン類似体は（［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基になり、次にＥＤＣ、ＨＯＢｔ、ＤＩＰＥＡの中でベンジル保護されたトリペプチドリンカーと反応して２つのトリペプチド連結基を含むフェニルアジドを形成する。前記にて製造されたアジドキャッピングされた尿素部分［ＣＢＴ］がアセチレンアミン化合物と縮合され、メチレンアミン基を有しているアジド位置においてトリアゾール［ＣＯＮ］基を形成する。前記中間体は、アミン保護されたトリペプチドリンカーと反応してトリペプチドリンカーをトリアゾール部分の遊離したアミン基に縮合する。トリペプチドリンカーのアミン末端上の保護された基（Ｆｍｏｃ）は、ジエチレンアミンによって除去される。そして、前記中間体は、ジリンカーアジドフェニル［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］中間体に縮合され、アジドフェニル［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］の中間体に縮合された２つのＣＢＴリンカー基を提供する。フェニル中間体上のアジド基は、前記にて製造された第２リンカーのアセチレン部分に縮合され、フェニル［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］部分上の第３の基としてトリアゾール基を形成する。前記中間体は、２つのＣＢＴ−リンカー基をフェニル［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］部分上に、トリアゾール［ＣＯＮ］部分を［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］部分上に含む。トリアゾール［ＣＯＮ］部分はまた、リジンを介して連結されており、ＣＰ３３と縮合されて最終のＳｙＡＭ−Ｐ３化合物を提供することができるアミン基で末端キャッピングされた２つの遊離したアミン−トリエチレングリコールリンカーを含む。
従って、ＣＰ３３は、ＣＢＴ尿素基の製造に用いられたジ−ブロック（ｄｉ−ｂｌｏｃｋｅｄ）リジン中間体をＣＰ３３の遊離したカルボキシ末端と反応させてリジン反応したＣＰ３３中間体を形成するが、これは、アミン化を経てリジン基の未反応のカルボン酸基を有している遊離したアミドを形成する。ＣＰ３３−リジン中間体上のリジンの遊離したアミンは、ジスクシンイミドジケトリンカー前駆体と反応して（脱離基として）スクシンイミド基を含むＣＰ３３−リジン連結された中間体を形成する。これらのＣＰ３３−リジン連結された中間体の２つは、［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］フェニル基を介して連結され、図２３に示されている最終の化合物ＳｙＡＭ−Ｐ３を形成するスクシンイミド活性化したエステル基を含むＣＰ３３−リジン連結された中間体に容易に縮合する２つの遊離したアミン基を含む２つのＣＢＴ基を含有する先に製造された中間体に縮合される。
本発明の化合物の合成に対する別の方法は、図２４に記載されている。図２４は、その他の本発明の化合物に適用され得る、図に提供されている別のリンカーを用いるＳｙＡＭ−Ｐ２の別の合成を示す。すべての反応は真っ直ぐに進み、用いられるリンカーに関して変化が見られ得る数多くの化合物をもたらす。
一般的な情報
合成：全ての出発物質及び試薬は、市販して入手可能な供給先から購入しており、追加の精製なしに用いた。1Ｈ ＮＭＲの変動は、内部標準として溶媒残留の頂点（ＣＤＣＩ3 ｄ ７．２６、ＭｅＯＤ ｄ ３．３１）を用いて測定され、次のように報告される：化学変動、多重度（ｓ＝単一項、ｂｓ＝広幅単一項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｄｄ＝二重項の二重項、ｄｔ＝三重項の二重項、ｑ＝四重項、ｍ＝多重項）、カップリング定数（Ｈｚ）、積分。13Ｃ ＮＭＲの変動は、内部標準として溶媒残留の頂点（ＣＤＣＩ３ ｄ ７７．２０、ＭｅＯＤ ｄ ４９．００又はＤＭＳＯ ｄ ３９．５２）を用いて測定され、化学変動として報告される。赤外線（ＩＲ）スペクトルバンドは、広幅（ｂｒ）、強力（ｓ）、中間（ｍ）、及び微弱（ｗ）と特徴付けられる。
略語
ＡｃＯＨ＝酢酸
Ａｃｎ＝アセトニトリル
Ａｈｘ＝アミノカプロン酸
ＡＭＣ＝７−アミノ−４−メチルクマリン
Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＢＳＡ＝ウシ血清アルブミン
Ｃｂｚ＝ベンジルオキシカルボニル
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
ＤＰＢＳ＝ダルベッコ燐酸緩衝食塩水
ＥＤＣ＝１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＥＤＴＡ＝エチレンジアミン四酢酸、ジナトリウム塩
ＥＧＴＡ＝エチレングリコール−ビス（２−アミノエチル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
Ｆｍｏｃ＝９−フルオレニルメチルオキシカルボニル
ＨＩ−ＦＢＳ＝加熱不活性化したウシ胎児血清
ＨＯＢｔ＝ヒドロキシベンゾトリアゾール
ｉＰｒＯＨ＝イソプロピルアルコール
ＭｅＣＮ＝アセトニトリル
ＭｅＯＨ＝メタノール
ＭＴＴ＝メチル−トリチル
ＮＨＳ＝Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
ＮＭＰ＝Ｎ−メチルピロリジノン
Ｐｂｆ＝２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニ
Ｐｄ／Ｃ＝炭素上の１０％のパラジウム
Ｑｕａｎｔ．＝定量的変換
ＴＢＳ＝トリス−緩衝食塩水
Ｔｂｕ＝ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＥＡ＝トリエチルアミン
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＦＡＡ＝トリフルオロ酢酸無水物
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴｉＰＳ＝トリイソプロピルシラン
Ｔｒｔ＝トリチル
固相ペプチドの合成の一般的な過程
固相ペプチドの合成（ＳＰＰＳ）をＣＥＭ Ｄｉｓｃｏｖｅｒ Ｌｉｂｅｒｔｙ Ｍｉｃｒｏｗａｖｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒで行った。合成に用いられた樹脂、アミノ酸及び試薬の量は、０．１ｍｍｏｌスケールの合成を基準として製造社より提案されたプロトコルを用いて算出された。ＳＰＰＳの完了時に、樹脂を真空ろ過を通じて収集し、ＣＨ2Ｃｌ2を用いて数回洗い流した。開放された空気で乾燥後、樹脂を切断カクテル混合物（ＴＦＡ：ＴＩＰＳ：Ｈ2Ｏの９２：４：４の混合物）を含んでいるフラスコに添加し、以下に説明した時間弱く撹拌した。その後、樹脂を綿栓したピペットを通じてろ過し、白色の沈殿が直ちに形成される３５ｍＬの冷たい（−７８℃）Ｅｔ2Ｏを含む５０ｍＬの円錐型チューブでろ過液を直接収集した。懸濁液を−７８℃で再度冷却した後、４４００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清を注いだ後、残渣ペレットを５０％のＭｅＣＮ／Ｈ2Ｏ中に取り、逆相のＨＰＬＣを用いて６〜７分量に精製した。ＨＰＬＣ画分を組み合わせ、凍結乾燥して該当ペプチドを白色のフワフワした物質として得た。
合成
Figure 2016529204
５−（１−（（Ｒ）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−（３−（Ｓ）−ｌ，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１，５−ジオキソペンタン−２−イル）ウレイド）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−ｌ，２，３−トリアゾール−４−イル）ペンタン酸
Ｓ．１（９８ｍｇ、０．１９１ｍｍｏｌ、１．０当量）及びヘプチン酸（１２０ｍｇ、０．９５４ｍｍｏｌ、５当量）の混合物を、５ｍＬのマイクロ波反応管中でＨ2Ｏ（１．２５ｍＬ）及びｔ−ＢｕＯＨ（１．２５ｍＬ）の混合物に溶解した。この混合物に０．１Ｍのアスコルビン酸ナトリウム（０．０５９ｍｍｏｌ、０．２当量）及び０．１Ｍの硫酸銅（ＩＩ）（０．０１２ｍｍｏｌ、０．０４当量）を添加した。その管に栓をして、１１０℃で１０分間マイクロ波照射に曝した。そして反応物を減圧下で濃縮し、クロマトグラフィー（１×１５ｃｍシリカゲル、ＣＨＣｌ3中の２０％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の２０％ＭｅＯＨ＋１％のＴＦＡ）によって分離して、無色のオイルとしてｓ−ｘを得た。calc'd for C31H53N5O9 (M+H) 640.7806 found。
ＳｙＡＭ−Ｐ１
Figure 2016529204
標準固相ペプチドの合成０．１ｍｍｏｌスケールのＦｍｏｃ−ＶＮＳ（Ｔｂｕ）Ｃ（Ｔｒｔ）ＬＬＬＰＮ（Ｔｒｔ）ＬＬＧＣ（Ｔｒｔ）ＧＤ（Ｔｂｕ）Ｄ（Ｔｂｕ）Ｋ（ビオチン）−Ａｈｘ5−Ｌｙｓ（ＭＴＴ）−Ｇ−樹脂。
樹脂上でＭｔｔ基をＤＣＭの５ｍＬのうちの１％のＴＦＡを用いて脱保護化しつつ、ローテーター上では５分間３回繰り返して黄色の上清を洗浄した。中和した樹脂をＤＭＦの０．１ｍＭのＤＩＰＥＡで洗浄した。Ｓｘ（１６０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ、２．５当量）を３ｍＬのＤＭＦに溶解させ、樹脂にＨＢＴＵ（９５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ、２．５当量）と共に８６μＬのＤＩＰＥＡ（６４ｍｇ、５ｍｍｏｌ、５当量）を添加した。混合物を７５℃で１０分間マイクロ波照射に曝した。樹脂をＤＭＦで３回洗浄し、Ｆｍｏｃ基は、２０分間ＲＴで２０％のピペリジンで脱保護化した。固体の担持体からの全体的な脱保護及び切断は、室温で撹拌し、９０分間ＴＦＡ：Ｈ2Ｏ：ＴＩＰＳの９２：４：４の混合物を用いて行った。その後、樹脂を綿栓したピペットを介してろ過し、ろ過液を白色の沈殿が直ちに形成される３５ｍＬの冷たい（−７８℃）Ｅｔ２Ｏを含む５０ｍＬの円錐型管に直接収集した。懸濁液を−７８℃で再冷却した後、４４００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清を注いだ後、残渣ペレットを２５ｍＬの２０％のＡＣＮ／Ｈ2Ｏに取り、１ｍＬのＤＭＳＯ及び４０ｍｇの炭酸カリウムを添加し、大気中で４８時間撹拌し、ジスルフィドで酸化した。酸化後、ペプチドを逆相のＨＰＬＣを用いて精製した。
HRMS (ES+) calc'd for C142H238N36O41S3 (M+3H) m/z 1601.91 found (M+3H) 1601.53
Figure 2016529204
（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（３−（（Ｓ）−６−（４−（２５−アミノ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３−オクタオキサペンタコシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１−オキソヘキサン−２−イル）ウレイド）ペンタン二酸（ｓ−２）
ｓ−１（１５２ｍｇ、０．２９５ｍｍｏｌ、１．０当量）及び３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサ−２６−イン−１−アミン（１２０ｍｇ、０．２９５ｍｍｏｌ、１．０等量）の混合物を、５ｍＬのマイクロ波反応管中でＨ2Ｏ（１．１ｍＬ）及びｔ−ブタノール（１．１ｍＬ）の混合物に溶解した。この混合物に０．１Ｍのアスコルビン酸ナトリウム（０．６ｍＬ、０．２等量）及び０．１Ｍの硫酸銅（ＩＩ）（０．１２ｍＬ、０．０４等量）を添加した。その管に栓をして、１１０℃で２．５分間マイクロ波放射に曝した。そして反応物を減圧下で濃縮し、クロマトグラフィー（１×１５ｃｍシリカゲル、ＣＨ2Ｃｌ2中の１０％ＭｅＯＨ、次にＣＨ2Ｃｌ2中の１０％ＭｅＯＨ＋２．５％のＥｔ3Ｎ）によって分離して、褐色油としてｓ−２を得た（２５４ｍｇ、８０％）。IR（薄膜） 2869 (m), 1729 (s), 1680 (w), 1534 (m), 1456 (w), 1367 (m), 1252 (w), 1152 (s), 1113 (s) cm-1。1HNMR (400 MHz, CDC13) d 7.71 (s, 1H), 5.32 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.25 (d, J = 8 Hz, 1H), 4.72-4.64 (dd, J = 8 Hz, XX Hz, 2H), 4.38-4.28 (m, 4H), 3.68-3.64 (m, 30 H), 2.98-2.93 (m, 2H), 2.35-2.28 (m, 2H), 2.08-2.05 (m, 1H), 1.97-1.77 (m, 4H), 1.65-1.59 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.43 (s, 18H), 1.49-1.27 (m, 2H). 13CNMR (100 MHz, CDC13) d 172.5, 172.1, 156.9, 145.0, 123.0, 81.9, 81.9, 90.5, 70.6, 70.5, 70.5, 70.5, 70.4, 70.4, 70.4, 70.2, 69.6, 64.6, 53.1, 53.0, 49.9, 32.3, 31.7, 29.6, 28.3, 28.1, 28.1, 28.0, 21.9. HRMS (ES+) calc'd for C43H80N6O15 (M+H) m/z 921.5754。
Figure 2016529204
５−（４−（５−メトキシ−５−オキソペンチル）−１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）イソフタル酸（ｓ−３）
アジドイソフタル酸（１００ｍｇ、０．４８３ｍｍｏｌ、１．０等量）及びメチルヘプト−６−イノアート（１００ｍｇ、０．７１４ｍｍｏｌ、１．４５等量）の混合物を、５ｍＬのマイクロ波反応管中でＨ2Ｏ（１．７ｍＬ）及びｔ−ＢｕＯＨ（１．７ｍＬ）の混合物に溶解した。この混合物に０．１Ｍのアスコルビン酸ナトリウム（０．０５９ｍｍｏｌ、０．２等量）及び０．１Ｍの硫酸銅（ＩＩ）（０．０１２ｍｍｏｌ、０．０４等量）を添加した。その管に栓をして、１１０℃で２．５分間マイクロ波照射に曝した。そして反応物を減圧下で濃縮し、クロマトグラフィー（１×１５ｃｍシリカゲル、ＣＨＣｌ3中の２０％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の２０％ＭｅＯＨ＋１％のＴＦＡ）によって分離して、ベージュ色の固体としてｓ−３を得た。IR（薄膜） 3151 (w), 2951 (w), 1721 (s), 1604 (w), 1463 (w), 1291 (m), 1248 (m), 1071 (m) cm-1。1HNMR (400 MHz, MeOD) d 8.70 (s, 1H), 8.66 (s, 2H), 8.51 (s, 1H), 3.66 (s, 3H), 2.83 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.41 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.81-1.70 (m, 4H). 13CNMR (100 MHz, DMSO-d6) d 173.3, 165.9, 148.3, 137.2, 133.5, 129.1, 123.7, 120.6, 118.0, 51.2, 33.0, 27.9, 24.7, 24.0. HRMS (ES+) calc'd for C16H17N3O6 (M+H) m/z 348.1190 Found 348.1184。
Figure 2016529204
ｓ−４
炎で乾燥した丸底フラスコ内の１ｍＬの乾燥ＣＨ2Ｃｌ2中のｓ−３の溶液（２０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、１等量）に、ＥＤＣ（２９ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、２．５等量）及びＨＯＢｔ（２３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、２．５等量）を添加し、続いて１ｍＬの乾燥ＣＨ2Ｃｌ2及びピリジン（１５ｕＬ、０．１８１ｍｍｏｌ、３等量）中のｓ−２の溶液（１２２ｍｇ、０．１３３ｍｍｏｌ、２．２等量）を添加した。室温で１３時間攪拌して反応させ、その後に３７℃において減圧下で濃縮し、クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、ＣＨＣｌ3中の５％ＭｅＯＨ）によって分離して、薄褐色油としてｓ−４を得た（９０ｍｇ、７３％）。IR（薄膜） 2867 (w), 2405 (br), 1728 (s), 1661 (m), 1456 (s), 1367 (m), 1250 (w), 1149 (s), 1098 (s), 846 (w) cm-1。1HNMR (500 MHz, MeOD) d 8.50 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.42 (t, J = 1.5 Hz, 1H), 7.96 (s, 2H), 6.36-6.33 (dd, J = 4, 4.5 Hz, 3H), 4.60 (s, 4H), 4.40 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 4.22-4.11 (m, 4H), 3.70 (t, J = 5.5 Hz, 4H), 3.67-3.54 (m, 66 H), 2.83 (t, J = 7 Hz, 2H), 2.40 (t, J = 7 Hz, 2H), 2.37-2.27 (m, 4H), 2.07-2.00 (m, 2H), 1.96-1.89 (m, 4H), 1.84-1.70 (m, 8H), 1.69-1.61 (m, 2H), 1.47 (s, 19H), 1.44 (s, 21H), 1.41 (s, 17H), 1.40-1.34 (m, 4H). 13CNMR (100 MHz, MeOD) d 175.6, 173.7, 173,6, 173.4, 167.9, 159.9, 150.1, 146.0, 138.7, 138.0, 127.4, 125.0, 122.8, 121.8, 82.8, 82.6, 81.7, 71.6, 71.6, 71.5, 71.3, 70.8, 70.4, 65.0, 54.7, 54.1, 52.1, 51.1, 41.3, 34.4, 32.9, 32.5, 30.8, 29.8, 29.0, 28.4, 28.3, 26.0, 23.5。HRMS (ES+) calc'd for C102H173N15O34 (M+H) 2153.2369 Found (M+2H) m/z 1077.1271。
Figure 2016529204
ｓ−５
ｓ−４（９０ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ、１等量）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）中に溶解した。この溶液にＨ2Ｏ中の１ＭのＬｉＯＨ（４等量）を添加した。室温で２時間攪拌して反応させ、その後に別のＨ2Ｏ中の１ＭのＬｉＯＨの４等量を添加した。室温で更に２時間攪拌して反応させ、その後にＨ2Ｏ中の１ＭのＨＣｌの６等量で中和した。その反応物を濃縮し、クロマトグラフィー（１×１５ｃｍシリカゲル、ＣＨＣｌ3中の２０％ＭｅＯＨ）によって分離した。生成物を含む画分を濃縮し、Ｈ2Ｏ中の８０％のＭｅＣＮで吸収し、ＨＰＬＣ（Ｃ１８逆相、５ｍＬ／分、Ｈ2Ｏ中の５０％〜７５％のＭｅＣＮ、４０分間）を用いて精製した。生成物を分離及び凍結乾燥して、白色粉末としてｓ−５を得た（１０ｍｇ、１２％）。IR（薄膜） 3341 (br), 3108 (w), 2931 (m), 1729 (s), 1667 (s), 1556 (w), 1457 (w), 1151 (s) cm-1。1HNMR (500 MHz, MeOD) d 8.73 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 8.51 (s, 3H), 8.42 (s, 1H), 7.97 (s, 2H), 4.64 (s, 1H), 4.60 (s, 4H), 4.41 (t, J = 7.2 Hz, 4H), 4.18 (dd, J = 5, 9 Hz, 2H), 4.13 (dd, J = 5, 8 Hz, 2H), 4.06 (s, 1H), 4.01 (s, 1H), 3.99-3.96 (m, 1H), 3.74-3.55 (m, 80H), 3.48-3.44 (m, 1H), 3.17-3.13 (m, 1H), 2.84 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.66 (s, 1H), 2.39-2.29 (m, 6H), 2.07-2.00 (m, 2H), 1.96-1.89 (m, 4H), 1.84-1.76 (m, 6H), 1.75-1.70 (m, 2H), 1.69-1.61 (m, 2H), 1.60-1.52 (m, 2H), 1.48-1.41 (m, 4H), 1.47 (s, 18H), 1.44 (s, 18H), 1.43 (s, 18H), 1.40-1.30 (m, 6H)。13CNMR (125 MHz, MeOD) d 177.2, 173.7, 173.7, 173.4, 168.0, 159.9, 138.8, 138.0, 127.4, 125.0, 122.7, 121.8, 82.8, 81.8, 71.5, 71.4, 71.4, 71.4, 71.3, 70.7, 70.5, 65.0, 54.7, 54.2, 41.3, 34.6, 32.9, 32.5, 30.8, 29.8, 29.0, 28.4, 28.3, 26.1, 25.5, 23.5。HRMS (ES+) calc'd for C101H171N15O34 (M+H) m/z 2139.2213 Found (M+2H) m/z 1070.1426。
ｃｐ３３−ビス（Ｐｅｇ８−尿素）
ｓ−５（４５ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ、１．０等量）をＣＨ2Ｃｌ2中に溶解した。ＥＤＣ、ＨＯＢｔ、及びＮ−ヒドロキシコハク酸イミドを連続して添加し、続けてＤＩＰＥＡを添加し、室温で６時間攪拌して反応させ、その後にＬＣＭＳによって変化を観察した。その反応物を濃縮し、９５％のＴＦＡ、２．５％のＰＢＳ、２．５％のＴＩＰＳの混合物を添加した。３０分間攪拌して反応させ、その後に濃縮した。１ｍＬのＰＢＳ及び１．５ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液をフラスコに速やかに添加し、続いてｃｐ３３ペプチド（１６ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ、０．３等量）を添加した。室温で１２時間攪拌して反応させ、それに続いてＨＰＬＣ（Ｃ１８逆相、５ｍＬ／分、Ｈ2Ｏ中の３０％〜４２％のＭｅＣＮ、６６分間）によって精製した。生成物を含む画分を集めて凍結乾燥し、白色粉末を得た（１．２ｍｇ、１１．２％）。
Figure 2016529204
（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（３−（（Ｓ）−６−（４−（１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−３，３１−ジオキソ−２，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６−ヘプタデカオキサ−４，３２−ジアザヘプタペンタコンタン−５７−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１−オキソヘキサン−２−イル）ウレイド）ペンタン二酸（ｓ−６）
炎で乾燥したフラスコ内の１ｍＬの乾燥ＣＨ2Ｃｌ2中にｓ−２（９０ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ、１等量）を溶解し、ＥＤＣ ＨＣｌ（２９ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、１．１等量）及びＨＯＢｔ Ｈ2Ｏ（２３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、１．１等量）を連続して添加し、続いて１ｍＬの乾燥ＣＨ2Ｃｌ2及びＤＩＰＥＡ（２８ｕＬ、０．１６２ｍｍｏｌ、１．２等量）中のＦｍｏｃ−Ｎ−アミド−ｄＰＥＧ８酸溶液（Ｑｕａｎｔａ Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ社、１３８ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、１．１等量）を添加した。２．５時間攪拌して反応させ、その後に１ｍＬのＭｅＯＨを添加した。そして反応物を減圧下で濃縮し、クロマトグラフィー（シリカゲル、１×１５ｃｍ、ＣＨＣｌ3中の２．５％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の５％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の１０％ＭｅＯＨ）によって分離して、透明な油としてｓ−６を得た（１４９ｍｇ、７０％）。IR（薄膜） 3332 (br), 2868 (m), 1727 (m), 1672 (w), 1547 (m), 1451 (w), 1367 (w), 1251 (m), 1149 (s), 1110 (s) cm-1。1HNMR (500 MHz, CDC13) d 7.75 (d, J = 7.5 Hz, 2H) 7.62 (s, 1H), 7.61 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.39 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.31 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 6.63 (s, 1H), 5.42 (s, 1H), 5.24 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.15 (d, J = 8 Hz, 1H), 4.67 (dd, J = 10 Hz, 25 Hz, 2H), 4.40 (d, J = 7 Hz, 2H), 4.37-4.27 (m, 4H), 4.22 (t, J = 7 Hz, 1H), 3.72 (t, J = 6 Hz, 2H), 3.68-3.55 (m, 66H), 3.54 (t, J = 5 Hz, 2H), 3.43 (dd, J = 5.5, 12 Hz, 2H), 3.39 (dd, J = 5.5, 12 Hz, 2H), 2.46 (t, J = 6 Hz, 2H), 2.37-2.24 (m, 2H) 2.10-2.03 (m, 2H), 1.95-1.76 (m, 5H), 1.64-1.57 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.43 (s, 18H), 1.39-1.29 (m, 2H)。13CNMR (100 MHz, CDC13) d 172.4, 172.1, 172.1, 171.4, 156.8, 145.1, 144.0, 141.3, 127.7, 127.0, 125.1, 122.9, 120.0, 81.9, 81.9, 80.6, 70.6, 70.6, 70.6, 70.5, 70.4, 70.4, 70.3, 70.3. 70.1 , 69.9, 69.6, 67.3, 66.6, 64.6, 53.1, 53.0, 49.9, 47.3, 41.0, 39.2, 37.0, 32.4, 31.7, 29.6, 28.3, 28.1, 28.1, 28.0, 21.8。HRMS (ES+) calc'd for C77H127N7O26 (M+H) m/z 1566.8904 Found 1566.8892。
Figure 2016529204
（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（３−（（Ｓ）−６−（４−（５３−アミノ−２７−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１−ヘキサデカオキサ−２６−アザトリペンタコンチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１−オキソヘキサン−２−イル）ウレイド）ペンタン二酸（ｓ−７）
ｓ−６（１３５ｍｇ）を３ｍＬのＥｔ2Ｃｌ2及び３ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2中に溶解した。室温で３時間攪拌して反応させ、その後に減圧下で濃縮し、クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、ＣＨＣｌ3中の２．５％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の５％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の１０％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の２０％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の５％ＭｅＯＨ＋２．５％Ｅｔ3Ｎ）によって分離して、透明な油としてｓ−７を得た（８６ｍｇ、７５％）。IR（薄膜）。1HNMR (400 MHz, MeOD) d 8.01 (s, 1H), 4.64 (s, 2H), 4.42 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 4.20-4.17 (m, 1H), 4.15-4.11 (m, 1H), 3.77-3.63 (m, 72H), 3.54 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.37 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.14 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.00 (dd, J = 7.2, 15.2 Hz, 1H), 2.61 (t, J = 6 Hz, 1H), 2.48 (t, J = 6 Hz, 2H), 2.38-2.25 (m, 2H), 2.08-2.00 (m, 1H), 1.98-1.90 (m, 2H), 1.85-1.74 (m, 2H), 1.70-1.60 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.44 (s, 18H), 1.40-1.36 (m, 2H), 1.29 (t, J = 7.2 Hz, 2H)。13CNMR (100 MHz, MeOD) d 173.9, 173.8, 173.7, 173.5, 159.9, 146.0, 125.1, 82.8, 82.7, 81.8, 71.6, 71.5, 71.5, 71.4, 71.4, 71.3, 71.3, 71.2, 71.2, 71.1, 71.1, 70.8, 70.7, 70.6, 68.5, 68.3, 67.6, 65.0, 54.7, 54.2, 52.2, 51.1, 43.7, 40.8, 40.5, 37.5, 35.7, 32.9, 32.5, 30.9, 29.0, 28.4, 28.4, 23.5。HRMS (ES+) calc'd for C62H117N7O24 (M+H) m/z 1344.8223 Found 1344.8251。
Figure 2016529204
ｓ−８
ｓ−３（８ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ、１．０等量）をＣＨ2Ｃｌ2（１ｍＬ）中に溶解した。この溶液にＥＤＣ ＨＣｌ（１５ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ、３．３等量）、ＨＯＢｔ Ｈ2Ｏ（１２ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ、３．３等量）、及びＣＨ2Ｃｌ2（４ｍＬ）中のｓ−７の溶液（１０２ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ、３．３等量）を添加した。ピリジン（５．５ｍｇ、５．７μＬ、０．７ｍｍｏｌ、３．０等量）を添加し、室温で１６時間その反応を継続させ、その後に濃縮し、部分的に精製した（１×１５ｃｍシリカゲル、ＣＨＣｌ3中の１０％ＭｅＯＨ）。生成物を含む画分を濃縮して、直ちにＭｅＯＨ（１ｍＬ）で吸収した。Ｈ2Ｏ中の１ＭのＬｉＯＨ（９２μＬ、０．０９２ｍｍｏｌ、４等量）をその溶液に添加し、室温で３時間攪拌して反応させ、その後にＨ2Ｏ中の１ＭのＬｉＯＨ（９２μＬ、０．０９２ｍｍｏｌ、４等量）を添加した。室温で更に２時間攪拌して反応させ、その後にＨ2Ｏ中の１ＭのＬｉＯＨ（１３８ｍＬ、０．１３８ｍｍｏｌ、６．０等量）で中和した。その反応物を濃縮し、Ｈ2Ｏ中の８０％のＭｅＣＮで吸収し、ＨＰＬＣ（Ｃ１８逆相、５ｍＬ／分、Ｈ2Ｏ中の５０％〜７５％のＭｅＣＮ、４０分間）を用いて精製した。生成物を分離及び凍結乾燥して、白色粉末としてｓ−８を得た（８ｍｇ）。IR（薄膜） 2873 (m), 1729 (m), 1666 (s), 1555 (w), 1456 (w), 1368 (w), 1140 (s) 950 (w), 846 (w) cm-1。1HNMR (500 MHz, MeOD) d 8.72 (t, J = 5.2 Ηz, 1Η), 8.51 (s), 3H), 8.42 (s, 1H), 7.99 (s, 2H), 7.90 (s), 3H), 4.62 (s, 4H), 4.41 (t, J = 7 Hz, 4H), 4.18 (dd, J = 5, 7.2 Hz, 2H), 4.13 (dd, J = 5, 6 Hz, 2H), 3.71-3.69 (m, 10H), 3.66-3.57 (m, 118H), 3.52 (t, J = 5.5 Hz, 4H), 3.36-3.34 (m, 8H), 2.84 (t, J = 6 Hz, 2H), 2.44 (t, J = 6.2 Hz, 4H), 2.37 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.33-2.28 (m, 4H), 2.06-2.00 (m, 2H), 1.96-1.90 (m, 4H), 1.83-1.77 (m, 6H), 1.75-1.68 (m, 2H), 1.67-1.63 (m, 2H), 1.46 (s, 18H), 1.44 (s, 18H), 1.43 (s, 18H), 1.39-1.34 (m, 4H)。13CNMR (125 MHz, MeOD) d 177.2, 174.0, 173.7, 173.7, 173.5, 167.9, 159.9, 150.2, 146.0, 138.8, 138.0, 127.4, 125.1, 122.8, 121.8, 82.8, 82.7, 81.8, 79.5, 71.5, 71.5, 71.5, 71.4, 71.4, 71.4, 71.3, 71.3, 71.3, 70.7, 70.6, 70.5, 68.3, 65.0, 54.7, 54.2, 51.1, 41.3, 40.4, 37.5, 34.6, 32.9, 32.5, 30.8, 29.8, 29.0, 28.4, 28.3, 28.3, 26.1, 25.5, 25.3, 23.5。HRMS (ES+) calc'd for C139H245N17O52 (M+H) m/z 2985.7150 Found (M+2H) m/z 1493.3458。
ｓ−９
ｓ−８（２２ｍｇ、０．００７４ｍｍｏｌ、１．０等量）を１ｍＬのＤＭＦに溶解した。この溶液にＥＤＣ（１４．２ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ、１０．０等量）、ＨＯＢｔ（１１．３ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ、１０．０等量）、及びＮＨＳ（８．５ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ、１０．０等量）を連続して添加し、続いてＤＩＰＥＡ（１３．０μＬ、０．０７４ｍｍｏｌ、１０．０等量）を添加した。室温で１３時間攪拌して反応させ、その後に反応の間中、Ｎ２の一様な流れを通すことによってDMFを除去した。９７．５％のＴＦＡ及び２．５％のＴＩＰＳの混合物をそのフラスコに添加し、室温で１時間攪拌して反応させ、その後にＴＦＡを減圧下で除去した。未精製の反応混合物をＨＰＬＣ（５ｍＬ／分で６６分間、Ｈ2Ｏ中での５０％ＭｅＣＮから８０％ＭｅＣＮへの勾配を用いたSunfireTM Prep C18カラム（１０×１５０mm））によって精製し、白色粉末としてｓ−９を得た（２．５ｍｇ）。それを直ぐに次のステップに使用した。
ｃｐ３３−ビス（Ｐｅｇ１６−尿素）
ｓ−９（２．５ｍｇ、０．９μｍｍｏｌ、１．０等量）を２ｍＬのＰＢＳ及び１ｍＬの水中の飽和炭酸水素ナトリウムに添加した。ｃｐ３３ペプチド（２．５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１．２等量）を添加し、室温で４時間攪拌して反応させ、それに続いてＨＰＬＣに直接注入して精製した（５ｍＬ／分で３９分間、Ｈ2Ｏ中での３０％ＭｅＣＮから４２％ＭｅＣＮへの勾配を用いたSunfireTM Prep C18カラム（１０×１５０mm））。生成物を含む画分を分離して凍結乾燥し、白色粉末を得た（１．４ｍｇ、３２．５％）。
Figure 2016529204
ベンジル ６−（６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサンアミド）ヘキサン酸（ｓ−９）
６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサンアミド）ヘキサン酸（２．５８ｇ、１１．１５ｍｍｏｌ、１．１等量）を５０ｍＬのＤＣＭに添加した。その溶液にＥＤＣ ＨＣｌ（２．１４ｇ、１１．１５ｍｍｏｌ、１．１等量）、ＨＯＢｔ Ｈ2ＯH（１．７１ｇ、１１．１５ｍｍｏｌ、１．１等量）、及びＣＨ2Ｃｌ2（５０ｍＬ）中のベンジル ６−アミノヘキサン酸の溶液（２．２４ｇ、１０．１４ｍｍｏｌ、１．０等量）を添加した。ＤＩＰＥＡ（２．０ｍＬ、１１．１５ｍｍｏｌ、１．１等量）を添加し、室温で９０分間攪拌して反応させ、その後に反応物を１０％のクエン酸（１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＯ3（１００ｍＬ）、及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を集め、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濃縮して、白色粉末としてｓ−９を得た（３．１７ｇ、７３％粗収率）。それを更に精製することなく使用した。
Figure 2016529204
ベンジル ６−（６−アミノヘキサンアミド）ヘキサン酸（ｓ−１０）
ｓ−９（３．１ｇ）を１５ｍＬのＴＦＡに溶解して室温で１時間攪拌し、その後にＴＦＡを減圧下で部分的に除去した。生じた油を１５０ｍＬのジエチルエーテルで洗浄し、そのエーテルを５０ｍＬの遠心分離管に注意して静かに注いだ。遠心分離管を３．０ｒｃｆで１０分間遠沈させて底に沈んだ生成物を生じさせ、エーテル層を注意して除去した。生成物をメタノールと組み合わせ、減圧下で濃縮し、重水素化クロロホルムと共沸して、緑色の油としてｓ−１０を得た（２．２７ｇ、９２％粗収率）。それを精製することなく使用した。
Figure 2016529204
ベンジル １−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−３，１０，１７−トリオキソ−２−オキサ−４，１１，１８−トリアザテトラコサン−２４−オアート（ｓ−１１）
６−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ヘキサン酸（２．３９ｇ、６．７８ｍｍｏｌ、１等量）をＣＨ2Ｃｌ2（３５ｍＬ）に溶解した。この溶液にＥＤＣ ＨＣｌ（１．５６ｇ、８．１４ｍｍｏｌ、１．２等量）、及びＨＯＢｔＨ2Ｏ（１．２５ｇ、８．１４ｍｍｏｌ、１．２等量）を添加した。別のフラスコにおいて、ｓ−１０（２．２７ｇ、６．７８ｍｍｏｌ、１等量）をＣＨ2Ｃｌ2（４０ｍＬ）に溶解し、残りのＴＦＡを中和するためにＤＩＰＥＡ（３ｍＬ、１７ｍｍｏｌ、２．５等量）を添加した。この溶液を最初の反応物に添加し、フラスコを更に１０ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2で洗浄した。それもまた最初の反応物に添加した。反応混合物を室温で７５分間攪拌し、その後に１０％のクエン酸（１００ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（１００ｍＬ）、及び飽和ブライ（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を集め、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、減圧下で濃縮し、部分的に精製して（シリカゲル、３×２５ｃｍ、ＣＨＣｌ3中の５％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の１０％ＭｅＯＨ）カップリング試薬を除去した。生成物を含む画分を集め、２回目のクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ3中の５０％ＭｅＣＮ＋２．５％ＤＩＰＥＡ）によって分離して白色固体を得た。それを３回目のクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ3中の５％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の１０％ＭｅＯＨ）によって分離して、真っ白な固体としてｓ−１１を得た（１．５ｇ、３３％、３ステップ）。IR（薄膜） 3306 (br), 2936 (m), 2861 (w), 1719 (s), 1647 (s), 1544 (s), 1450 (m), 1254 (s), 1160 (m), 741 (m) cm-1. lHNMR (400 MHz, MeOD) d 7.80 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.64 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.39 (t, J = 8 Hz, 2H), 7.35-7.32 (m, 5H), 7.30 (t, J = 8 Hz, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.33 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 4.21 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.16-3.08 (m, 6 H), 2.36 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.19-2.13 (m, 4H), 1.65-1.58 (m, 6H), 1.53-1.46 (m, 6H), 1.36-1.30 (m, 6H)。13CNMR (100 MHz, MeOD) d 176.0, 175.0, 158.9, 145.3, 142.6, 137.7, 129.5, 129.2, 128.8, 128.1, 126.2, 120.9, 67.6, 67.1, 41.6, 40.2, 40.1, 37.0, 37.0, 34.9, 30.6, 30.0, 27.5, 27.4, 27.4, 26.7, 25.7。HRMS (ES+) calc'd for C40H51N3O6 (M+H) m/z 670.3850 Found 670.3847。
Figure 2016529204
１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−３，１０，１７−トリオキソ−２−オキサ−４，１１，１８−トリアザテトラコサン−２４−オイック酸（ｓ−１２）
ｓ−１１を９０％ｉＰｒＯＨ／１０％ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）で吸収し、１０ｍＬの９０％ｉＰｒＯＨ／１０％ＭｅＯＨ中の１０％Ｐｄ／Ｃのスラリーに添加した。４０ｍＬの９０％ｉＰｒＯＨ／１０％ＭｅＯＨを残りの出発物質に添加するために使用し、フラスコをＮ2で１５分間パージした。次にスラリーを通して５分間Ｈ2ガスを泡立て、Ｈ2雰囲気下で室温で２時間攪拌して反応させ、その後にセライトによって濾過し、クロマトグラフィー（３×２５cmシリカゲル、ＣＨＣｌ3中の１０％MeOH）によって分離して、白色固体としてｓ−１２を得た。IR（薄膜） 3312 (br), 2935 (m), 2861 (w), 1705 (s), 1647 (s), 1546 (s), 1450 (w), 1255 (m) cm-1. 1HNMR (400 MHz, MeOD), 7.97 (s, 2H), 7.83 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.67 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.62 (t, J = 8 Hz, 2H), 7.35-7.32 (t, J = 8 Hz, 2H), 7.13 (s, 1H), 4.37 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 4.22 (t, J = 7.2 Hz, IH), 3.20-3.12 (m, 6H), 2.31 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.22-2.16 (m, 4H), 1.66-1.59 (m, 6H), 1.56-1.49 (m, 6H), 1.42-1.33 (m, 6H)。 13CNMR (100 MHz, MeOD) d 177.6, 176.1, 158.9, 145.4, 142.6, 128.8, 128.2, 126.2, 121.0, 67.6, 41.6, 40.2, 37.0, 37.0, 30.6, 30.1, 27.6, 27.5, 27.4, 26.8, 26.7, 25.8。HRMS (ES+) calc'd for C33H45N3O6 (M+H) m/z 580.3381 Found 580.3377。
Figure 2016529204
ベンジル ６−（６−（６−アミノヘキサンアミド）ヘキサンアミド）ヘキサン酸（ｓ−１３）
ｓ−１２（１．１７ｇ）を１：１のΕｔ２ΝΗ／ＣＨ2Ｃｌ2（３７ｍＬ）混合物に溶解し、室温で８時間攪拌して反応させ、その後に減圧下で濃縮し、クロマトグラフィー（３×２５cmシリカゲル、ＣＨＣｌ3中の２０％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の２０％ＭｅＯＨ＋２．５％Ｅｔ3Ｎ）によって分離して、白色固体としてｓ−１３を得た（６３０ｍｇ、８１％）。IR（薄膜） 3221 (w), 3277 (w), 2941 (m), 2862 (w), 1727 (m), 1633 (s), 1542 (m), 1477 (w), 1262 (w), 1184 (w) cm-1。1HNMR (400 MHz, CDC13) d 7.38-7.30 (m, 5H), 5.89 (s, 1H), 5.67 (s, 1H), 5.1 1 (s, 2H), 3.26-3.20 (m, 6H), 2.27 (t, J = 7.2, 2H), 2.19-2.14 (m, 4H), 1.69-1.62 (m, 6H), 1.55-1.48 (m, 6H), 1.40-1.32 (m, 6H)。13CNMR (100 MHz, CDC13) d 173.5, 173.0, 172.9, 136.0, 128.4, 128.3, 128.2, 66.2, 41.7, 39.2, 39.1, 36.6, 36.5, 34.1, 32.5, 29.3, 29.2, 26.4, 25.4, 25.1, 24.5。HRMS (ES+) calc'd for C25H41N3O4 (M+H) m/z 448.3170 Found 448.3150。
Figure 2016529204
６，６’−（（６，６’―（（６，６’―（（５−アジドイソフタロイル）ビス（アザンジイル））ビス（ヘキサノイル）ビス（アザンジイル）ビス（ヘキサノイル）ビス（アザンジイル））ジヘキサン酸（ｓ−１４）
５ｍＬの乾燥ＣＨ2Ｃｌ2中のアジドイソフタル酸（１００ｍｇ、0.483ｍｍｏｌ、1等量）の混合物を、炎で乾燥させたフラスコ中に調製した。この混合物にＥＤＣ ＨＣｌ（２３３ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ、２．５等量）、ＨＯＢｔ Ｈ2Ｏ（１８３ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ、２．５等量）、ｓ−１３（４７６ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ、２．２等量）、及びピリジン（０．１１７ｍＬ、１．４５ｍｍｏｌ、３等量）を連続して添加した。室温で１８時間攪拌して反応させ、その後にシリカゲルコラム上に直接乗せ、カップリング剤を除去するために部分的に精製した（シリカゲル、２・15ｃｍ、ＣＨＣｌ3中の１０％ＭｅＯＨ）。未精製物質を５ｍＬのＭｅＯＨ及び５ｍＬのＴＨＦに溶解した。Ｈ2Ｏ中のＬｉＯＨの１Ｍ溶液を添加して（１．９ｍＬ、４等量）、室温で２４時間攪拌して反応させた。１ＭのＨＣｌ溶液を添加して（０．９５ｍＬ、２等量）、その反応物を減圧下で濃縮した。そして未精製の混合物をクロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、ＣＨＣｌ3中の２０％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の２０％ＭｅＯＨ＋１％ＴＦＡ）によって分離して、生成物を含む画分を集めて減圧下で濃縮し、明るい褐色油を得た。次に５０ｍＬの９５％ジエチルエーテル／５％ＭｅＯＨをその油に添加した。そのエーテル／ＭｅＯＨ混合物を別の容器に静かに移し、その油を減圧下で乾燥させて白色固体として、白色固体としてｓ−１４を得た（３８３ｍｇ、８９％、２ステップ）。IR（薄膜） 3310 (br), 2937 (m), 2865 (w), 2112 (m), 1650 (s), 1553 (m), 1439 (w), 1202 (m), 1139 (m) cm-1. 1HNM (400 MHz, MeOD) d 8.05 (s, 1H), 7.65 (s, 2H), 3.39 (t, J = 5.6 Hz, 4H), 3.15 (dd, J = 3.2, 6.6 Hz, 8H), 2.29 (t, 7.2 Hz, 4H), 2.22-2.15 (m, 8H), 1.68-1.58 (m, 16H), 1.51-1.47 (m, 8H), 1.42-1.32 (m, 12H)。13CNMR (100 MHz, MeOD) d 177.4, 176.0, 168.3, 138.1, 123.6, 121.5, 41.0, 40.2, 37.0, 34.8, 30.1, 30.1, 27.6, 27.5, 26.7, 25.7。HRMS (ES+) calc'd for (M+H) m/z 886.5397 Found 886.5408。
Figure 2016529204
（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ ２−（３−（（Ｓ）−６−（４−（アミノメチル−１Ｈ−１，２,３−トリアゾール−１−イル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１−オキソヘキサン−２−イル）ウレイド）ペンタン二酸（ｓ−１５）
ｓ−１（１８０ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ、１等量）及びプロパルギルアミン（１１７ｕＬ、１．７５ｍｍｏｌ、５等量）の混合物を、５ｍＬのマイクロ波反応管中でＨ2Ｏ（１．２５ｍＬ）及びｔ−ブタノール（１．２５ｍＬ）の混合物に溶解した。その混合物に０．１Mのアスコルビン酸ナトリウム（０．７ｍＬ、０．２等量）及び０．１Ｍの硫酸銅（ＩＩ）（０．１４ｍＬ、０．０４等量）を添加した。その管に栓をして、１１０℃で２．５分間マイクロ波照射に曝した。次にその反応物を６０℃での減圧下で濃縮し、クロマトグラフィー（シリカゲル、１×１５ｃｍ、ＣＨＣｌ3中の１０％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の１０％ＭｅＯＨ＋２．５％Ｅｔ3Ｎ）によって分離して、淡い緑色の油としてｓ−１５を得た（１５２ｍｇ、７７％）。IR（薄膜） 2978 (m), 2933 (w), 1730 (s), 1647 (m), 1559 (m), 1456 (w), 1368 (m), 1255 (w), 1154 (s) cm-1. 1HNMR (400 MHz, MeOD) d 7.90 (s, 1H), 4.90 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 4.20-4.16 (m, 1H), 4.14-4.12 (m, 1H), 3.96 (s, 2H), 2.36-2.26 (m, 2H), 2.08-2.00 (m, 1H), 1.95-1.89 (m, 2H), 1.84-1.73 (m, 2H), 1.69-1.59 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.44 (s, 18H), 1.39-1.31 (m, 2H)。13CNMR (100 MHz, MeOD) d 173.7, 173.7, 173.5, 159.9, 147.7, 123.8, 82.8, 82.7, 81.8, 54.2, 51.1, 37.1, 32.9, 32.5, 30.8, 29.0, 28.4, 28.3, 23.5。HRMS (ES+) calc'd for C27H48N6O7 (M+H) m/z 568.3657 Found 568.3637。
Figure 2016529204
（Ｓ）−ジ-ｔｅｒｆ−ブチル ２−（３−（（Ｓ）−６−（４−（１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル−３，１０，１７，２４−テトラオキソ−２−オキサ−４，１１，１８，２５−テトラアザヘキサコサン−２６−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１−オキソヘキサン−２−イル）ウレイド）ペンタン二酸（ｓ−１６）
６−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ヘキサン酸（１５６ｍｇ、０．２６７ｍｍｌ、１等量）の混合物を１．５ｍＬの乾燥ＣＨ2Ｃｌ2中において調製した。このスラリーにＥＤＣ ＨＣｌ（５６ｍｇ、０．２９４ｍｍｏｌ、１．１等量）及びＨＯＢｔ Ｈ2Ｏ（４５ｍｇ、０．２９４ｍｍｏｌ、１．１等量）を添加した。３ｍＬの乾燥ＣＨ2Ｃｌ2中のｓ−１６（１５２ｍｇ、０．２６７ｍｍｏｌ、１等量）溶液に続いてＤＩＰＥＡ（３２ｕＬ、０．２９４ｍｍｏｌ、１．１等量）をこのスラリーに添加した。室温で２時間攪拌して反応させ、その後にＥＤＣ−ＨＣｌ（２８ｍｇ、０．２４７ｍｍｏｌ、０．５等量）、ＨＯＢｔ−Ｈ2Ｏ（２３ｍｇ、０．２４７ｍｍｏｌ、０．５等量）、及びＤＩＰＥＡ（３２ｕＬ、０．２９４ｍｍｏｌ、１．１等量）を添加した。室温で更に２時間攪拌して反応させ、その後にその反応物を減圧下で濃縮し、クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、ＣＨＣｌ3中の１０％ＭｅＯＨ）によって分離して、粘性の淡い緑色の油としてｓ−１６を得た（２３５ｍｇ、７８％）。IR（薄膜） 2933 (m), 2862 (w), 2413 (br), 1729 (s), 1630 (s), 1453 (s), 1367 (m), 1251 (w), 1153 (s), 742 (w) cm-1. 1HNMR (400 MHz, MeOD) d 7.84 (s, 1H), 7.80 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.64 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.39 (t, J = 8 Hz, 2H), 4.40 (d, J = 2 Hz, 2H), 4.37 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.33 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 4.21-4.17 (m, 2H), 4.13 (dd, J = 5.2, 8 Hz, 1H), 3.17-3.08 (m, 6H), 2.34-2.29 (m, 2H), 2.23-2.13 (m, 6H), 2.08-2.00 (m, lH), 1.94-1.86 (m, 2H), 1.84-1.73 (m, 2H), 1.64-1.57 (m, 7H), 1.52-1.43 (m, 5H), 1.46 (s, 9H), 1.43 (s, 18H), 1.39-1.29 (m, 9H)。13CNMR (100 MHz, MeOD) d 176.0, 175.9, 173.7, 173.6, 173.4, 159.9, 158.8, 146.2, 145.3, 142.6, 128.8, 128.1, 126.2, 124.1, 120.9, 82.8, 82.6, 81.7, 67.6, 54.6, 54.1, 51.3, 41.6, 40.2, 37.0, 37.0, 36.7, 35.6, 32.9, 30.8, 30.6, 30.1, 29.0, 28.4, 28.3, 27.5, 27.4, 26.7, 26.7, 26.5, 23.4。HRMS (ES+) calc'd for C60E9lN9O12 (M+H) m/z 1130.6860 Found 1130.6848。
Figure 2016529204
（S）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（３−（（Ｓ）−６−（４−（（６−（６−（６−アミノヘキサンアミド）ヘキサンアミド）ヘキサンアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−オキソヘキサン−２−イル）ウレイド）ペンタン二酸（ｓ−１７）
ｓ−１６（１９５ｍｇ）を２．５ｍＬのＥｔ2ＮＨ及び２．５ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2に溶解した。室温で２６時間攪拌して反応させ、その後に減圧下で濃縮し、クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、ＣＨＣｌ3中の２０％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の２０％ＭｅＯＨ＋２．５％Ｅｔ3Ｎ）によって分離して、粘着性のある淡い黄色固体としてｓ−１７を得た（１３７ｍｇ、９０％）。IR（薄膜） 3271 (br), 2934 (m), 2864 (w), 1731 (s), 1643 (s), 1556 (s), 1457 (w), 1367 (m), 1256 (w), 1154 (s) cm-1. 1HNMR (400 MHz, MeOD) d 7.99 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 6.40 (dd, J = 12, 14 Hz, 1H), 4.42 (s, 2H), 4.41 (t, J = 9 Hz, 2H), 4.21-4.11 (m, 2H), 3.22-3.14 (m, 4H), 2.93 (t, J = 8 Hz, 2H), 2.35-2.30 (m, 2H), 2.25-2.16 (m, 6H), 2.08-2.01 (m, 1H), 1.95-1.90 (m, 1H), 1.83-1.74 (m, 2H), 1.71-1.58 (m, 9H), 1.55-148 (m, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.45 (s, 18H), 1.42-1.29 (m, 10H)。13CNMR (100 MHz, MeOD) d 176.0, 175.7, 173.8, 173.7, 173.5, 159.9, 146.3, 124.2, 82.8, 82.7, 81.8, 81.7, 40.6, 40.2, 40.2, 37.0, 36.8, 36.6, 35.6, 32.9, 32.5, 30.8, 30.6, 30.2, 29.0, 28.4, 28.3, 27.6, 27.0, 26.8, 26.5, 26.4, 23.5。HRMS (ES+) calc'd for C34E81N9O10 (M+H) m/z 908.6179 Found 908.6165。
Figure 2016529204
ｓ−１８
ＣＨ2Ｃｌ2（１．５ｍＬ）中のｓ−１４（１５０ｍｇ、０．１６９ｍｍｏｌ、１．０等量）の溶液に、ＥＤＣ ＨＣＬ（８１ｍｇ、０．４２３ｍｍｏｌ、２．５等量）、ＨＯＢｔ Ｈ2Ｏ（６５ｍｇ、０．４２３ｍｍｏｌ、２．５等量）を添加し、続いてＣＨ2Ｃｌ2（３．５ｍＬ）中のｓ−１５（２１２ｍｇ、０．３７３ｍｍｏｌ、２．２等量）の溶液を添加した。生じた溶液にピリジン（８２□Ｌ、０．５０７ｍｍｏｌ、３等量）を添加し、室温で２０時間攪拌して反応させ、その後に減圧下で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（１×１５ｃｍ、シリカゲル、ＣＨＣｌ3中の５％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の１０％ＭｅＯＨ）によって部分的に精製し、暗い赤い油を得た（１９０ｍｇ、５７％粗収率）。それを次のステップに使用した。
Figure 2016529204
ｓ−１９
部分的に純粋なｓ−１８（１００ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、１．０等量）を、５ｍＬのマイクロ波バイアル中でＨ2Ｏ（１．２５ｍＬ）及びｔ−ＢｕＯＨ（１．２５ｍＬ）に溶解した。この溶液に６−ヘプチン酸（６．４μＬ、０．０５ｍｍｏｌ、１．０等量）、０．１Ｍアスコルビン酸ナトリウム（０．５ｍＬ、0.05ｍｍｏｌ、１．０等量）、及び０．１Ｍ硫酸銅（ＩＩ）（０．２５ｍＬ、０．０２５ｍｍｏｌ、０．５等量）を添加した。そのバイアルを密封して１１０℃で１時間に亘ってマイクロ波照射に曝した。その後にその反応物を濃縮し、ＨＰＬＣ（５ｍＬ／分で６６分間、Ｈ2Ｏ中での５０％ＭｅＣＮから８０％ＭｅＣＮへの勾配を用いたSunfireTM Prep C18カラム（１０×１５０mm））によって精製した。生成物を分離及び凍結乾燥して、白色粉末を得た（１１ｍｇ、１１％）。IR（薄膜） 2938 (w), 1634 (s), 1553 (m), 1461 (m), 1369 (w), 1141 (s), 975 (w), 841 (w), 800 (w), 722 (w) cm-1. 1HNMR (400 MHz, MeOD) d 8.78 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.45 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 8.36 (s, 1H), 7.88 (s, 2H), 4.41-4.37 (m, 8H), 4.18 (dd, J = 5, 8.8 Hz, 2H), 4.12 (dd, J = 5.2, 8 Hz, 2H), 3.67-3.64 (m, 1H), 3.43 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 3.14 (t, J = 6.4 Hz, 8H), 2.84 (t, J = 7 Hz, 2H), 2.37 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.34-2.29 (m, 4H), 2.26-2.13 (m, 12H), 2.08-1.99 (m, 2H), 1.95-1.87 (m, 4H), 1.84-1.71 (m, 6H), 1.69-1.54 (m, 20H), 1.50-1.42 (m, 10H), 1.46 (s, 18H), 1.44 (s, 18H), 1.43 (s, 18H), 1.38-1.26 (m, 12H)。13CNMR (100 MHz, MeOD) d 176.0, 173.7, 173.7, 173.5, 167.9, 159.9, 138.2, 122.6, 82.8, 82.7, 81.7, 54.6, 54.2, 40.2, 37.0, 32.9, 32.5, 30.1, 29.0, 28.4, 28.3, 27.6, 26.7, 23.4。HRMS (ES+) calc'd for C105H173N21Ｏ24 (M+H) m/z 2113.3062 Found (M+2H) 1057.1462。
ｓ−２０
部分的に純粋なｓ−１９（３５ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、１．０等量）をＴＨＦに溶解した。この溶液にトリフルオロ酢酸（１９ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、５．０等量）のＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル及びピリジン（10ｍｇ、0.125ｍｍｏｌ、7.0等量）を添加した。室温で１．５時間攪拌して反応させ、その後に０．５ｍＬのＰＢＳで急冷し、減圧下で濃縮した。生じた混合物に２ｍＬの９５％ＴＦＡ／５％ＴＩＰＳを添加し、室温で１時間攪拌して反応させ、その後に減圧下でＴＦＡを除去した。反応混合物をＨＰＬＣ（５ｍＬ／分で５１分間、Ｈ2Ｏ中での０％ＭｅＣＮから８０％ＭｅＣＮへの勾配を用いたSunfireTM Prep C18カラム（１０×１５０mm））によって精製し、生成物を含む画分を分離及び凍結乾燥してｓ−２０（１．９ｍｇ）を得た。それを直ぐに次の反応に使用した。
ｃｐ３３−ビス（Ａｃ３−尿素）
ｓ−２０を９７５□ＬのＰＢＳ及び３２５□Ｌの水中の飽和炭酸水素ナトリウムに溶解した。ｃｐ３３ペプチド（２．４ｍｇ、０．００１１ｍｍｏｌ、１．１等量）を添加し、室温で７時間攪拌して反応させ、その後に 反応混合物をＨＰＬＣ上に直接乗せて精製した（５ｍＬ／分で５１分間、Ｈ2Ｏ中での０％ＭｅＣＮから８０％ＭｅＣＮへの勾配を用いたSunfireTM Prep C18カラム（１０×１５０mm））。生成物を含む画分を集めて凍結乾燥し、白色粉末を得た（１．１ｍｇ、２５．６％）。
Figure 2016529204
ｓ−２１
ｓ−１４（１９０ｍｇ、０．２１４ｍｍｏｌ、１．０等量）の溶液をＣＨ2Ｃｌ2（５ｍＬ）中に調製した。ＥＤＣ ＨＣＬ（１０３ｍｇ、０．５３５ｍｍｏｌ、２．５等量）及びＨＯＢｔ Ｈ2Ｏ（８２ｍｇ、０．５３５ｍｍｏｌ、２．５等量）を添加し、続いてＣＨ2Ｃｌ2（５ｍＬ）中のｓ−１７（４２８ｍｇ、０．４７２ｍｍｏｌ、２．２等量）の溶液を添加した。ピリジン（５２μＬ、０．６４２ｍｍｏｌ、３．０等量）を添加して、室温で２４時間攪拌して反応させ、その後に減圧下で濃縮し、クロマトグラフィー（シリカゲル、１×１５ｃｍ、ＣＨＣｌ3中の１０％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の１５％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の２０％MeOH）によって分離して、部分的に純粋な淡い黄色固体を得た（２５０ｍｇ、４４％粗収率）。
Figure 2016529204
ｓ−２２
ｓ−２１（５０ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ、１．０等量）を、２ｍＬのマイクロ波バイアル中でＨ2Ｏ（０．５ｍＬ）及びｔ−ＢｕＯＨ（０．５ｍＬ）に溶解した。この溶液に６−ヘプチン酸（２．５□Ｌ、０．０１９ｍｍｏｌ、１．０等量）、０．１Mのアスコルビン酸ナトリウム（０．２ｍＬ、１．０等量）、及び０．１Ｍの硫酸銅（ＩＩ）（０．１ｍＬ、０．５等量）を添加した。そのバイアルを密封して、１１０℃で１時間に亘ってマイクロ波照射に曝した。その後に反応物を濃縮し、クロマトグラフィー（１×１５ｃｍ、シリカゲル、ＣＨＣｌ3中の２０％ＭｅＯＨ、次にＣＨＣｌ3中の２０％ＭｅＯＨ＋１％ＴＦＡ）によって分離した。生成物を含む画分を濃縮し、ジエチルエーテル（５０ｍＬ）で洗浄し、ＣＤＣｌ3と共沸して、部分的に純粋な緑色固体を得た（２７ｍｇ）。それを次のステップに使用した。
ｓ−２３
部分的に純粋なｓ−２２（３７ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、１．０等量）をＤＭＦ（０．５ｍＬ）に溶解した。ＥＤＣ（７．７ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、３．０等量）、ＨＯＢｔ（６．２ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、３．０等量）、及びＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（４．６ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、３．０等量）を連続して添加し、続いてＤＩＰＥＡ（７．１μＬ、０．０４ｍｍｏｌ、３．０等量）を添加した。室温で１時間攪拌して反応させ、その後にＥＤＣ（７．７ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、３．０等量）及びＤＩＰＥＡ（７．１μＬ、０．０４ｍｍｏｌ、３．０等量）を添加した。室温で２時間攪拌して反応させ、その後に反応の間中、Ｎ２の一様な流れを通すことによってDMFを除去した。９８％ＴＦＡ／２％ＴＩＰＳの１ｍＬの混合物をフラスコに添加し、室温で３０分間攪拌して反応させ、その後に減圧下でＴＦＡを除去した。反応物をＨＰＬＣ（５ｍＬ／分で５１分間、Ｈ2Ｏ中での０％ＭｅＣＮから８０％ＭｅＣＮへの勾配を用いたSunfireTM Prep C18カラム（１０×１５０mm））によって精製した。生成物を含む画分を集めて凍結乾燥し、白色粉末としてｓ−２３を得た（２．５ｍｇ）。それを直ぐに次のステップで使用した。
ｃｐ３３−ビス（Ａｃ６−尿素）
ｓ−２３（２．５ｍｇ、０．８６μｍｏｌ、１．０等量）を０．９ｍＬのＰＢＳ及び０．４ｍＬの水中の炭酸水素ナトリウムの７．５％溶液に溶解した。ｃｐ３３（２ｍｇ、０．６５μｍｏｌ、０．７５等量）を添加し、室温で１時間攪拌して反応させ、その後に１ｍＬのＤＭＦを添加した。室温で６時間攪拌して反応させ、その後に反応混合物をＨＰＬＣ上に直接注入して精製した（５ｍＬ／分で６６分間、Ｈ2Ｏ中での１０％ＭｅＣＮから６５％ＭｅＣＮへの勾配を用いたSunfireTM Prep C18カラム（１０×１５０mm））。生成物を含む画分を集めて凍結乾燥し、白色粉末としてｃｐ３３−ビス（Ａｃ６−尿素）を得た（０．２ｍｇ、４．５％）。
Figure 2016529204
ｓ−２２
３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサ−２６−イン−１−アミン（３ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ、１．０等量）を２ｍＬのマイクロ波バイアルに添加し、続いてＨ2Ｏ（０．２５ｍＬ）及びｔ−ＢｕＯＨ（０．２５ｍＬ）中のｓ−２０（２０ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ、１．０等量）の溶液を添加する。この溶液に０．１Ｍのアスコルビン酸ナトリウム（７０μＬ、０．００７ｍｍｏｌ、１．０等量）及び０．１Ｍの硫酸銅（ＩＩ）（３５μＬ、０．００３５ｍｍｏｌ、０．５等量）を添加した。そのバイアルを密封して１１０℃で１時間に亘ってマイクロ波照射に曝し、その後に反応物を濃縮して、未精製の暗い赤い油を得た。その油を５ｍＬのバイアル内にＣＨ2Ｃｌ2（３ｍＬ）中の６７％のＴＦＡで吸収し、そのバイアルを７０℃で２分間マイクロ波照射に曝した。反応物を濃縮し、Ｈ2Ｏ中の５０％MeCNで吸収して、ＨＰＬＣ（５ｍＬ／分で６６分間、Ｈ2Ｏ中での５０％ＭｅＣＮから８０％ＭｅＣＮへの勾配を用いたSunfireTM Prep C18カラム（１０×１５０mm））によって精製した。生成物を分離及び凍結乾燥して、白色粉末としてｓ−２２を得た（３ｍｇ、１５％）。IR（薄膜） 3296 (br), 2934 (m), 2864 (w), 1643 (s), 1556 (m), 1463 (w), 1202 (m), 1134 (m) cm-1. 1HNMR (500 MHz, MeOD) d 8.70 (s, 1H), 8.48 (d, J = 1.5 Hz, 2H), 8.38 (t, J = 1.5 Hz, 1H), 7.86 (s, 2H), 4.78 (s, 2H), 4.42 (d, J = 3.2 Hz, 4H), 4.39 (t, J = 7.2 Hz, 4H), 4.30 (dd, J = 5, 9 Hz, 2H), 4.27 (dd, J = 5, 8.5 Hz, 2H), 3.77-3.75 (m, 4H), 3.72-3.60 (m, 32H), 3.47 (t, J = 7.2 Hz, 4H), 3.15 (t, J = 7.2 Hz, 22H), 2.43-2.39 (m, 4H), 2.24-2.14 (m, 26H), 1.94-1.84 (m, 10H), 1.70-1.64 (m, 12H), 1.63-1.55 (m, 20H), 1.53-1.37 (m, 30H), 1.35-1.29, (m, 20H)。HRMS (ES+) calc'd for C129H218N28O36 (M+H) m/z 2737.6191 Found 2737.6153。
Figure 2016529204
（Ｓ）−ビス（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル）（６−オキソ−６−（プロパ−2−イル−１−イルアミノ）ヘキサン−１，５−ジイル）ジカルバメート（ｓ−２３）
ＣＨ2Ｃｌ2（３０ｍＬ）中のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ（1ｇ、１．６９ｍｍｏｌ、１．０等量）の溶液に、ＥＤＣ ＨＣＬ（３９１ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ、１．２等量）、ＨＯＢｔ Ｈ2Ｏ（３１１ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ、１．２等量）を添加し、続いてプロパルギルアミン（９３ｍｇ、０．１１ｍＬ、１．６９ｍｍｏｌ、１．０等量）及びＤＩＰＥＡ（２６４ｍｇ、０．３６ｍＬ、２．０３ｍｍｏｌ、１．２等量）を添加した。室温で９０分間攪拌して反応させ、その際に反応物はゲルに変わった。そのゲルをへらで細かく砕き、ＣＨ2Ｃｌ2（５０ｍＬ）で吸収した。その混合物を超音波で分解して濾過した。濾液を集めて10%のクエン酸（５０ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（５０ｍＬ）、及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を集め、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、減圧下で濃縮して、白色粉末としてｓ−２３を得た（３３０ｍｇ、３１％収率）。IR（薄膜） 3297 (s), 3068 (br), 2937 (br), 1687 (s), 1650 (s), 1539 (m), 1450 (w), 1264 (w) cm-1. 1HNMR (500 MHz, CDC13) d 7.75 (t, J = 7.8 Hz, 4H), 7.56 (d, J = 7.4 Hz, 4H), 7.39 (q, J = 7.5 Hz, 4H), 7.30 (q, J = 7.5 Hz, 4H), 6.28 (bs, 1H), 5.44 (bs, 1H), 4.85 (bs, 1H), 4.43-4.35 (m, 4H), 4.21-4.30 (m, 3H), 4.02 (s, 2H), 3.25-3.15 (m, 2H), 2.18 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.75-1.65 (m, 1H), 1.60-1.50 (m, 2H), 1.42-1.32 (m, 2H)。13CNMR (125 MHz, CDC13) d 171.4, 156.9, 144.1, 144.0, 143.9, 143.8, 141.5, 141.4, 127.9, 127.8, 127.2, 127.2, 125.1, 125.1, 120.2, 120.1, 79.3, 72.0, 67.2, 66.8, 47.4, 40.3, 31.7, 29.6, 29.4, 22.3。HRMS (ES+) calc'd for C39H37N3O5 (M+H) m/z 628.2806 Found 628.2802。
Figure 2016529204
（S）−２，６−ジアミノ−Ｎ−（プロパ−2−イル−1−イル）ヘキサンアミド（ｓ−２４）
ｓ−２３（３００ｍｇ）を１０ｍＬのＥｔ2ＮＨ及び１０ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2に溶解した。室温で２４時間攪拌して反応させ、その後に濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2中の２５％MeOH、次にＣＨ2Ｃｌ2中の２５％MeOH＋２％ＮＨ4ＯＨ）で精製して、白色固体としてｓ−２４を得た（４８ｍｇ、５５％）。IR（薄膜） 3278 (br), 2931 (m), 2861 (w), 1649 (s), 1554 (s), 1345 (w), 1262 (w), 920 (w) cm-1. 1HNMR (400 MHz, MeOD) d 3.96 (dd, J = 2.4, 7.2 Hz, 2H), 3.26 (t, J = 7 Hz, 1H), 2.71 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.59 (m, 1H), 1.69-1.61 (m, 1H), 1.58-1.47 (m, 3H), 1.46-1.34 (m, 2H)。13CNMR (100 MHz, MeOD) d 177.3, 80.1, 72.3, 55.9, 41.7, 36.0, 31.8, 29.3, 23.8。HRMS (ES+) calc'd for C9H17N3O (M+H) m/z 184.1444 Found 184.1441。
Figure 2016529204
（S）−ビス（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（１１，１９−ジオキソ−１３−（プロパ−２−イル−１−イルカルバモイル）−３，６，９，２１，２４，２７−ヘキサオキサ−１２，１８−ジアザノナコサン−１，２９−ジイル）ジカルバメート（ｓ−２５）
Ｆｍｏｃ−ｍｉｎｉＰＥＧ３−ＣＯＯＨ（１６４ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ、２．２等量）をＣＨ2Ｃｌ2（５ｍＬ）に溶解した。この溶液にＥＤＣ ＨＣｌ（８４ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ、２．５等量）及びＨＯＢｔ Ｈ2Ｏ（６７ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ、２．５等量）を添加した。生じた溶液を、ｓ−２４（３２ｍｇ、０．１７４ｍｍｏｌ、１．０等量）を含有するフラスコに移した。ＤＩＰＥＡ（６８ｍｇ、９２□Ｌ、０．５２ｍｍｏｌ、３．０等量）を添加し, 続いて１ｍＬのＤＭＦを添加した。室温で６時間攪拌して反応させ、その後に濃縮し、クロマトグラフィー（ＣＨＣｌ3中の５％MeOH）によって分離して、透明な油を得た（１２２ｍｇ、７０％）。IR（薄膜） 3307 (br), 3063 (w), 2918 (s), 1712 (m), 1659 (m), 1535 (s), 1450 (w), 1253 (m), 1105 (m) cm-1。1HNMR (500 MHz, CDC13) d 7.76 (d, J = 7.5 Hz, 4H), 7.60 (d, J = 7.5 Hz, 4H), 7.39 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 7.30 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 6.97 (bs, 1H), 6.84 (bs, 1H), 5.74 (bs, 1H), 5.63 (bs, 1H), 4.44-4.38 (m, 5H), 4.21 (t, J = 7 Hz, 2H), 4.05-3.96 (m, 6H), 3.65-3.61 (m, 16H), 3.57-3.55 (m, 4H), 3.42-3.35 (m, 4H), 3.28-3.21 (m, 3H), 2.15 (t, J = 2 Hz, 1H), 1.93-1.87 (m, 1H), 1.72-1.66 (m, 1H), 1.56-1.50 (m, 2H), 1.39-1.34 (m, 2H)。13CNMR (125 MHz, CDC13) d 171.2, 170.6, 170.1, 156.8, 144.2, 144.1, 141.5, 127.8, 127.8, 127.2, 125.3, 125.2, 120.1, 71.7, 71.1, 71.0, 70.6, 70.5, 70.5, 70.4, 70.4, 70.2, 70.2, 66.7, 66.7, 52.5, 47.4, 47.4, 41.1, 38.6, 31.5, 29.2, 23.1。HRMS (ES+) calc'd for C55H67N5O13 (M+H) m/z 1007.4840 Found 1007.4839。
Figure 2016529204
（Ｓ）−Ｎ，Ｎ”−（６−オキソ−６−（プロパ−２−イル−1−イルアミノ）ヘキサン−１，５−ジイル）ビス（２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）アセトアミド）（ｓ−２６）
ｓ−２５（１２０ｍｇ）を５ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2及び５ｍＬのＥｔ2ＮＨに溶解した。室温で２４時間攪拌して反応させ、その後に濃縮し、クロマトグラフィー（１×１５cmシリカゲル、ＣＨ2Ｃｌ2中の２５％ＭｅＯＨ、次にＣＨ2Ｃｌ2中の２５％ＭｅＯＨ＋２％ＮＨ4ＯＨ）によって分離して、無色の油を得た（４２ｍｇ、６３％）。IR（薄膜） 3289 (br), 2865 (m), 1655 (s), 1532 (m), 1457 (w), 1103 (m) cm-1。1HNMR (400 MHz, MeOD) d 4.40 (dd, J = 5.4, 8.8 Hz, 1H), 4.04 (s, 2H), 3.98-3.95 (m, 4H), 3.73-3.61 (m, 16H), 3.53 (dt, 3 = 2, 5.2 Hz, 4H), 3.24 (t, J = 7 Hz, 2H), 2.62 (t, J = 1.5 Hz, 1H), 1.89-1.80 (m, 1H), 1.76-1.68 (m, 1H), 1.59-1.52 (m, 2H), 1.43-1.33 (m, 2H)。13CNMR (100 MHz, MeOD), d 173.5, 172.6, 172.6, 80.5, 73.3, 73.2, 72.4, 72.0, 71.9, 71.6, 71.5, 71.4, 71.4, 71.2, 71.2, 71.2, 53.9, 42.1, 42.1, 39.7, 33.1, 30.1, 29.5, 24.1。HRMS (ES+) calc'd for C25H47N5O9 (M+H) m/z 562.3447 Found 562.3448。
Figure 2016529204
ｓ−２７
ｓ−２１（１６２ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ、１等量）及びｓ−２６（３４ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ、１等量）を、５ｍＬのマイクロ波バイアル中でＨ2Ｏ（１．５ｍＬ）及びｔ−ＢｕＯＨ（１．５ｍＬ）に溶解した。この溶液に０．１Ｍのアスコルビン酸ナトリウム（０．６ｍＬ、１等量）及び０．１Ｍの硫酸銅（ＩＩ）（０．３ｍＬ、０．５等量）を添加した。そのバイアルを密封して、１１０℃で１時間に亘ってマイクロ波照射に曝した。その後にその反応物を減圧下で濃縮して、未精製の褐色油を得た。その未精製の油を、５ｍＬのマイクロ波バイアル中でＣＨ2Ｃｌ2（３ｍＬ）中の６７％ＴＦＡで吸収した。そのバイアルを密封し、７０℃で２分間マイクロ波照射に曝した。その後にその反応物を減圧下で濃縮し、ＨＰＬＣ（５ｍＬ／分で６６分間、Ｈ2Ｏ中での５０％ＭｅＣＮから８０％ＭｅＣＮへの勾配を用いたSunfireTM Prep C18カラム（１０×１５０mm））を用いて精製した。生成物を分離及び凍結乾燥して白色粉末を得た（25ｍｇ、１４％、２ステップ）。IR（薄膜） 3300 (br), 3093 (w), 2935 (m), 2866 (w), 1640 (s), 1552 (m), 1459 (w), 1201 (w), 1135 (w) cm-1. 1HNMR (500 MHz, MeOD) d 8.56 (s, 1H), 8.45 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 8.37 (t, J = 1.5 Hz, 2H), 7.86 (s, 2H), 5.49 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.45-4.40 (m, 6H), 4.39 (t, J = 7 Hz, 4H), 4.30 (dd, J = 5, 9 Hz, 2H), 4.26 (dd, J = 5, 9 Hz, 2H), 4.07 (s, 2H), 4.00 (s, 2H), 3.73-3.66 (m, 24H), 3.43 (t, J = 7 Hz, 4H), 3.23 (dt, J = 3.1, 7.5 Hz, 2H), 3.17-3.13 (m, 26H), 2.43-2.39 (m, 4H), 2.24-2.13 (m, 28H), 1.96-1.82 (m, 10H), 1.78-1.71 (m, 2H), 1.71-1.63 (m, 12H), 1.63-1.54 (m, 24H), 1.53-1.46 (m, 24H), 1.44-1.37 (m, 12H), 1.35-1.29 (m, 22H), 1.04 (d, J = 5.6 Hz, 2H)。13CNMR (125 MHz, MeOD) d 176.3, 176.1, 175.9, 175.8, 174.1, 172.6, 172.5, 171.1, 167.8, 161.5, 161.2, 160.1, 147.4, 138.6, 138.3, 127.9, 124.3, 122.7, 122.6, 118.4, 116.1, 71.8, 71.7, 71.4, 71.2, 71.2, 71.1, 67.9, 67.9, 54.8, 54.2, 53.7, 53.5, 51.1, 41.1, 40.7, 40.6, 40.2, 39.6, 37.0, 36.8, 35.6, 32.9, 32.8, 31.1, 30.7, 30.1, 30.1 , 28.8, 27.6, 27.5, 26.7, 26.5, 25.7, 24.1, 23.4, 17.6, 12.9。HRMS (ES+) calc'd for C135H228N32O37 (M+3H) m/z 964.2387 Found (M+3H) m/z 964.2380。
ビス（ｃｐ３３）−ビス（Ａｃ６−尿素）
ｓ−２７（１．０ｍｇ、０．３１μｍｏｌ、１．０等量）を０．１５ｍＬのＤＭＦに溶解した。この溶液に０．１５ｍＬのＤＭＦ中のｃｐ３３−Ａｃ−ＮＨＳ（１．４８ｍｇ、０．６２□ｍｏｌ、２．０等量）の溶液を添加した。ＤＩＰＥＡを続けて添加し、室温で１２時間攪拌して反応させた。反応物を１ｍＬの水で急冷し、ＨＰＬＣ上に直接注入して精製し（５ｍＬ／分で３０分間、Ｈ2Ｏ中での２０％ＭｅＣＮから６０％ＭｅＣＮへの勾配を用いたSunfireTM Prep C18カラム（１０×１５０mm））、白色粉末を得た（０．４ｍｇ、１９％）。
生物学的評価
示されるような以下の緩衝液、溶液、蛋白質、抗体、試薬、装備、材料、ソフトウェアなどが、生物学的評価の実施に用いられた。
緩衝液及び溶液
・超低のＩｇＧ ＦＢＳ
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１６２５０−０８６
・ＲＰＭＩ−１６４０培地
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１８７５−０９３
４℃で貯蔵
・ＲＰＭＩ−１６４０フェノールを含まない培地
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１８３５−０３０
・ＲＰＭＩ成長培地
ＲＰＭＩ培地１６４０
ｘｘｘから
・ＤＭＥＭ−ｈｉグルコース
ＸＸＸＸ
・無色のＡＤＣＰ培地
ＲＰＭＩ培地１６４０、液体
１０％のＨＩ−ＦＢＳ超低のＩｇＧ及び１％のペニシリン−ストレプトマイシンを補ったフェノールレッド部材下のＡＴＣＣ ＃１１８３５−０３０
・ＤＰＢＳ溶液
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１４１９０−１４４
・ＥＤＴＡ分離溶液
２１０ｍＬのＤＰＢＳ
３９２ｍｇのＥＤＴＡジナトリウム塩（５．０ｍＭ）
８４ｍｇのＥＧＴＡ（１．０ｍＭ）
ｐＨ７．４まで
０．２２μＭの滅菌フィルタ
・１．５％のＢＳＡを用いたＴＢＳ−Ａトリス−緩衝食塩水
蛋白質、抗体及び試薬
・Ａｖｉ−タグ付き組換えヒトＰＳＭＡ蛋白質は、Ｄｒ．Ｊａｎ Ｋｏｎｖａｌｉｎｋａ及びＤｒ．Ｃｅｒｉｌ Ｂａｒｉｎｋａによって快く提供される。
基準として使用
・抗ジニトロフェニル−ＫＬＨのウサギのＩｇＧ画分
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃Ａ６４３０
市販の溶液を４℃で貯蔵する
・Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−Ａｌｅｘａ４６７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）
・Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ−Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ、液体（１０，０００単位のペニシリン、１０，０００μｇのストレプトマイシン／ｍＬ）
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１５１４０−１６３
・組換えヒトＩＦＮ−γ
Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
＃８９０１ＳＣ
・Ｖｙｂｒａｎｔ ＤｉＤ細胞標識溶液
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃Ｖ−２２８８７
エタノールでの１ｍＭ
ＦＬ−４蛍光団
・Ｖｙｂｒａｎｔ ＤｉＯ細胞標識溶液
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃Ｖ−２２８８６
ＤＭＦでの１ｍＭ
ＦＬ−１蛍光団
・トルイジンブルー染料０．４％
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１５２５０
・ＡＴ１０抗体ａｂ２３３３６ロット番号９０２０４７
・コンジュゲートされた抗ＰＳＭＡ抗体フィコエリトリン
Ａｂｅａｍ社の＃ＡＢ−７７２２８
・フィコエリトリン補正ビーズ
Ｂａｎｇｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＱｕａｎｔｕｍTM Ｒ−ＰＥ ＭＥＳＦ（＃８２７）
装備、材料及びソフトウェア
・９６ウェル平底免疫プレート
ＭａｘｉＳｏｒｐ、非滅菌、ＰＳ
Ｎｕｎｃ ＃４４２４０４
・Ｃ６ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ Ａｃｃｕｒｉ
ＣＦｌｏｗ Ｐｌｕｓソフトウェアを利用する
・ＩＤＥＡＳ分析ソフトウェアを利用したアムニスイメージストリームＸフローサイトメトリー
・ＦｌｏｗＪｏソフトウェア
・ペトリ皿
ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ ＃３５１０２９
１００×１５ｍｍ
・組織培養皿
ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ ＃３５３００３
１００×２０ｍｍ
・Ｓｙｎｅｒｇｙ ２ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ
Ｇｅｎ ５ソフトウェアを利用するＢｉｏＴｅｋ社の製品
・Ｔ−フラスコ
ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ ＃３５３１３６
７５ｃｍ2の組織培養が処理される
・ストレプトアビジン標識された６ｕＭのビーズ
Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ ６ｕＭ ＹＧ ｆｌｕｏｒｅｓｅｂｒｉｔｅ ｂｅａｄｓ
−０．７μｇ／ｍＬのビオチン積載ロット番号６０１５１４
−１．４μｇ／ｍＬのビオチン積載ロット番号５７３５６５
６ｕｍの無蛍光ビーズ
−２．０ｕｇ／ｍＬのビオチン積載ロット番号６２１２７７
ルシゲニン
Ｔｏｋｙｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社
・Ｐｒｉｓｍ ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェア
細胞の培養
一般的な過程
・細胞の計数：細胞懸濁液（１０μＬ）をトリパンブルー（０．４％、９０μＬ）で希釈した。１０μＬのそのような混合物を血球計数器上に積載した。生きている細胞を１０Ｘの倍率下に肉眼で計数した。
・ＥＤＴＡの分離：付着した細胞を吸出させ、ＤＰＢＳ（５ｍＬ）で洗浄した。フラスコにＥＤＴＡ分離溶液（５ｍＬ）を添加した。そのフラスコをインキュベーションした（１５分）。フラスコの底上で溶液を弱く洗い落とすことによって細胞を完全に分離した。細胞懸濁液をペレット化し、吸出させ、培地に懸濁させ、新たなフラスコに分注した。
・５％のＣＯ２で補った加湿の雰囲気下に３７℃でインキュベーションを行った。
・ペレット化は、５分間１０，０００ｒｐｍで遠心分離することによって実施
細胞株
・全ての細胞株は、５％のＣＯ２を補ったインキュベーター（３７℃）で生長させた。培地は、約４日毎に交替した。細胞を約４：１に分けた。細胞は、約３０継代を過ぎては生長しなかった。
・Ｕ９３７細胞は、ＡＴＣＣ（＃ＣＲＬ−１５９３．２）より購入しており、ペトリ皿で１０％のＨＩ−ＦＢＳ及び１％のペニシリン−ストレプトマイシンを補ったＲＰＭＩ−１６４０培地を用いた懸濁液で生長させた。
・ＩＩＡ１．６細胞は、Ｄｒ．Ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ Ｊ．Ｇ．Ｊ．及びＤｒ．Ｌｅｕｓｅｎ Ｊ．Ｈ．Ｗによって快く提供されており、組織培養処理皿で１０％のＨＩ−ＦＢＳ及び１％のペニシリン−ストレプトマイシンを補ったＲＰＭＩ−１６４０培地を用いて弱く付着した細胞として生長させた。
・Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｓｌｏａｎ Ｋｅｔｅｒｉｎｇ Ｃａｎｃｅｒ ＣｅｎｔｅｒのＤｒ．Ｍｉｃｈａｅｌ Ｓａｄｅｌａｉｎによって快く提供されたＲＭ１．ＰＧＬＳを組織培養処理皿で１０％のＨＩ−ＦＢＳ及び１％のペニシリン−ストレプトマイシンを補ったＤＭＥＭ−高グルコースを用いて付着した細胞として生長させた。
Figure 2016529204
ＰＳＭＡ結合定数に対するビーズ結合の分析
各ＳｙＡＭ誘導体のＰＳＭＡに対する結合は、ＰＳＭＡコーティングされたビーズ上で評価した。６μｍのストレプトアビジン標識ビーズ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）を４００μｇ／ｍｌの組換えａｖｉ−タグ付きＰＳＭＡ蛋白質と共に３０分間インキュベーションした。ビーズをＰＢＳで２回洗浄し、１ｍｇ／ｍｌのビオチンを用いて３０分間ブロッキングし、次いで、ＴＢＳ−Ａで２回洗浄した。１０5のビーズを１μＭ〜１００ｐｍの範囲の一連のＳｙＡｍ希釈物と共にインキュベーションした。Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−Ａｌｅｘａ４６７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を最終濃度３．３μＭまで添加した。試料を氷上で３０分間インキュベーションし、ＤＰＢＳで２回洗浄し、Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６フローサイトメトリーで評価した。ＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞に対する結合については、ＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞でビーズを置換し、同一の条件に従った。
Figure 2016529204
ＩＩＡ１．６ ＦｃγＲＩ発現細胞結合の分析
一般的に、１ｍＭの原液溶液から出発して１０倍ずつ希釈していくペプチド希釈物をＤＭＳＯ中に製造した。細胞ＩＩＡ１．６をＦｃγＲＩＡ／γ鎖を用いて安定して形質注入し、同質遺伝子の陰性対照群として用いられた非形質注入のＩＩＡ１．６細胞は、約１．５〜２×１０6細胞／ｍＬの密度で生長させ、スピンダウンさせ、フェノールレッドのないＲＰＭＩ １６４０培地で再建し、１０％のＦＢＳ及びＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ混合物を補って細胞密度が１×１０6細胞／ｍＬになった。細胞の１００μＬの分取液を更にエペンドルプチューブに移し、氷上で５〜１０分間冷却した。以後、ＤＭＳＯに溶解させた１ｕＬのペプチドを細胞に添加し、ＤＭＳＯの最終濃度が１％になるようにした。ペプチドと共に氷上で１時間インキュベーションした後、５ｕＬのＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ ４８８（２ｍｇ／ｍＬ）を細胞に添加し、氷上で３０〜６０分間インキュベーションされるようにした。インキュベーション後、細胞をフェノールレッドがなく、１０％のＦＢＳ及びＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐが補われた冷たいＲＰＭＩ １６４０培地の１ｍＬで２回洗浄し、最終的に１ｍＬのＴＢＳ緩衝液（１５０ｍＭのＮａＣＬ及び２５ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ ７．４）で１回洗浄した。細胞を残留ＴＢＳ緩衝液（一般的に、約１００ｕＬ）に再懸濁させ、ＦＬ１チャンネルで検出するフローサイトメトリーを通じて分析した。
ＰＳＭＡの測定
ＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞を酵素のない分離溶液を用いてピペットを弱く上下で作動して分離した。５％のＢＳＡのあるＰＢＳ中に１×１０6の濃度で再懸濁された細胞を５％のＢＳＡで処理した。前記細胞溶液をエペンドルプチューブ及び適切なチューブに移し、２ｕＬのフィコエリトリン標識された抗ＣＤ３２ａ抗体を添加した。エペンドルプを氷で３０分間インキュベーションした。試料を１．１ＲＰＭで５分間４℃で遠心分離し、ＰＢＳの５％のＢＳＡ溶液を用いて２回洗浄した。生きている細胞が２０ｋと計数されるまでに細胞をＡｃｃｕｒｉ Ｃ６フローサイトメトリー上で稼動させた。Ｂａｎｇｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社の定量Ｒ−フィコエリトリンビーズを製造社の指示事項に従って試料においてすぐに進めた。ＦＬ−２チャンネルの幾何平均蛍光値を製造社で供給する補正ワークシートに入力し、ＰＳＭＡのレベルを算出した。
エフェクター細胞準備
実験の３日前に、Ｕ９３７細胞のプレート（約６０％コンフルエント）を新たなペトリ皿（１０ｍＬの有色のＲＰＭＩ生長培地の総合体積）に通過させた。ＩＦＮ−γ（２０μＬ、ＤＰＢＳ中に１００μｇ／ｍＬ）を添加し、細胞をインキュベーター（３７℃、２４ｈ）で維持した。細胞を２４時間後にペレット化し、１０ｍＬのＩＦＮ−γ（２０ｕＬ、ＤＰＢＳ中に１００ｕｇ／ｍＬ）に再懸濁し、インキュベーター（３７℃、２４ｈ）で維持した。
ＲＯＳの生成のために、細胞をＲＰＭＩ生長培地（１０ｍＬ）に再懸濁し、２つのペトリ皿に同等に分注した。各皿に更なる有色のＲＰＭＩ生長培地（５ｍＬ）及びＩＦＮ−γ（２０μＬ、ＤＰＢＳ中に１００μｇ／ｍＬ）を添加し、インキュベーター（３７℃、２４ｈ）で維持した。
食作用について：細胞をＦａｌｃｏｎチューブに移し、ＤｉＤ（１９ｕＬ、最終濃度＝１．９μＭ）を添加した。細胞をインキュベーター（３７℃、３０分）で維持し、ペレット化し、吸出させ、ＲＰＭＩ生長培地（１０ｍＬ）に再懸濁し、２つのペトリ皿に同等に分注した。各皿に更なる有色のＲＰＭＩ生長培地（５ｍＬ）及びＩＦＮ−γ（２０μＬ，ＤＰＢＳ中に１００μｇ／ｍＬ）を添加し、インキュベーター（３７℃、２４ｈ）で維持した。
ＲＯＳ生成の分析
プライムＵ９３７を３×１０5のＵ９３７細胞の濃度で無色のＡＤＣＰ培地に懸濁し、９０ｕＬの体積中に９６ウェルプレート内に１０5のＰＳＭＡコーティングされたビーズ及び様々な濃度の分子と混合した。各ウェルに１０μＬの２．５ｍＭのルシゲニン（Ｔｏｋｙｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）溶液を添加して総体積が１００μＬになるようにした。プレートを２００ｒｃｆで２分間遠心分離した（ＰＬＡＴＥ ＳＰＩＮＮＥＲ）。次に、化学発光を６０〜９０分間プレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ ２）によって２分間隔で測定した。
ビーズの分子誘導性食作用に対する分析
・Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ社の６ｕＭのストレプトアビジンｆｌｕｏｒｅｓｂｒｉｔｅ ＹＧ微小球体を４ｘ濃度のａｖｉタグ付きＰＳＭＡと３０分間室温でＤＰＢＳ中にインキュベーションした（ａｖｉタグ付きＰＳＭＡの濃度は、微小球体のビオチン積載容量に依存する）。ビーズをＤＰＢＳで２回洗浄し、無色のＡＤＣＰ培地に１．６百万ビーズ／ｍＬで再懸濁させた。
・食作用：２５ｕＬのビーズ溶液をエペンドルプチューブ中の様々な濃度の分子の存在又は不存在下の２５ｕＬのＡＤＣＰ培地に添加した。ここに、ｍＬ当たり４百万個のプライムＵ９３７細胞を５０ｕＬ添加し、弱く混合した後、１．１ＲＰＭで２分間遠心分離した。キャップを開いてインキュベーター（３７℃、１ｈｒ）に靜置し、エペンドルプを閉じて氷に靜置した。試料を渦流させ、合計５０ｋカウントの間Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６フローサイトメトリー上で稼動させた。
・データの分析：各実験に対して、５０，０００回の事象を計数した。正方向及び側方向の散布図グラフ（ｆｏｒｗａｒｄ ａｎｄ ｓｉｄｅ ｓｃａｔｔｅｒ ｐｌｏｔｓ）を最適につながるようにして、破片粒子及び細胞凝集物を除去した。ＦＬ−２に対するＦＬ−４のグラフにおいて、次の個体群が計数された。
Figure 2016529204
Figure 2016529204
細胞の食作用の分析
・標的細胞の排出：実験の３日前に標的細胞であるＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞のプレートを新たなフラスコに排出させた。
・エフェクター細胞準備：実験の３日前に、Ｕ９３７細胞（約６０％コンフルエント）のプレートを新たなペトリ皿（１０ｍＬである有色のＡＤＣＰ培地の総体積）で通過させた。ＩＦＮ−γ（２０μＬ、ＤＰＢＳ中にＤＰ １００μｇ／ｍＬ）を添加し、細胞をインキュベーター（３７℃、２４ｈ）で維持した。細胞をＦａｌｃｏｎチューブに移し、ＤｉＤ（１９ｕＬ、最終濃度＝１．９μＭ）を添加した。細胞をインキュベーター（３７℃、３０分）中に維持し、ペレット化し、吸出させ、有色のＡＤＣＰ培地（１０ｍＬ）に再懸濁させ、２つのペトリ皿に同等に分注した。それぞれの皿に追加の有色のＡＤＣＰ培地（５ｍＬ）及びＩＦＮ−γ（２０μＬ、ＤＰＢＳ中に１００μｇ／ｍＬ）を添加し、細胞をインキュベーター（３７℃、２４ ｈ）で維持した。
・標的細胞の製造：標的細胞（６０〜８０％コンフルエントＲＭ１．ＰＧＬＳ細胞１０ｍＬの総培地体積）にＤｉＯ（２０μＬ、最終濃度＝２μＭ）を添加した。細胞をインキュベーター（３７℃、３０分）で維持し、吸出させ、有色のＡＤＣＰ培地（３×１０ｍＬ）で洗浄した。有色のＡＤＣＰ培地（１０ｍＬ）を添加した。細胞をインキュベーター（３７℃、２ｈ）で維持し、分離し、無色のＡＤＣＰ培地でｍＬ当たり０．５百万細胞の濃度で再懸濁させた。
・エフェクター細胞の製造：プライムＵ９３７細胞の２つの皿をＦａｌｃｏｎチューブに移し、ペレット化し、吸出させ、無色のＡＤＣＰ培地（１０ｍＬ）に再懸濁させ、計数し、無色のＡＤＣＰ培地で希釈してｍＬ当たり２百万細胞の最終の濃度を提供した。
・食作用：全ての条件を３回ずつ行った。各実験に対して、滅菌２ｍＬのＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに様々な濃度のＳｙＡＭ−Ｐｘ又はＡＲＭ−Ｐ８／抗体−ＤＮＰ抗体、標的細胞（２５μＬ＝１２，５００の細胞）、及びエフェクター細胞（５０μＬ＝１００，０００の細胞）を含む無色のＡＤＣＰ培地（２５μＬ）を入れ、エフェクターに対する標的の比率を８：１にした。チューブを手で弱く振とうした。細胞をペレット化した（２分、１１００ｒｐｍ）。チューブを開いてインキュベーター（３７℃、１ｈ）で維持し、渦流によって容易に振とうとして再懸濁し、フローサイトメトリーで分析した。
Figure 2016529204
Figure 2016529204
アムニスイメージストリーム画像の撮像
食作用の分析を前述したように行った。１時間後、細胞を３％のホルムアルデヒドで３０分間固定した。細胞をＤＰＢＳで１回洗浄した後、抗ＣＤ１４−ＡＰＣ及び抗ＣＤ１１ｂ−ＡＰＣ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で３０分間氷上で染色した。細胞をＤＰＢＳで１回洗浄した後、７０μｍの細胞ろ過網を通過させた。試料当たり３０，０００回の事象をアムニスイメージストリームＸフローサイトメトリー上で収集した。次に、二重陽性事象を食作用カップの形成に対して又は標的の完全呑食に対して手動でスコアを付けた。データをＡｍｎｉｓ ＩＤＥＡＳソフトウェア上で分析した。
参考文献
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Claims (59)

  1. 次の化学構造の化合物であって、
    Figure 2016529204
     式中、［ＩＢＴ］は、ＦｃγＲＩ受容体結合部分であり、
    ［ＣＢＴ］は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に結合する細胞結合部分であり、
    Ｌ1及びＬ2はリンカー基であり、該リンカー基は任意で１つ以上の二官能性のコネクタ基［ＣＯＮ］を含み、
    ［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］は、存在する場合、リンカーを介して少なくとも１つの［ＩＢＴ］基を少なくとも１つの［ＣＢＴ］基に連結する二官能性又は多官能性のコネクタ基であり、
    ＭＣＯＮは、０〜１０の整数であり、
    ＮＬ１及びＮＬ２は、それぞれが０〜１０の整数であり、但しｎ≧ＮＬ１かつｎ’≧ＮＬ２である、
    化合物。
  2. ＭＣＯＮは１、２又は３である、請求項１に記載の化合物。
  3. ＭＣＯＮは１である、請求項１又は２に記載の化合物。
  4. ｎは１、２又は３であり、ｎ’は１又は２である、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物。
  5. ＮＬ１は１であり、ＮＬ２は１である、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物。
  6. ＭＣＯＮは０であり、ＮＬ１は１であり、ＮＬ２は１である、請求項１に記載の化合物。
  7. ＭＣＯＮは０であり、ｎは１であり、ｎ’は１である、請求項１に記載の化合物。
  8. ＮＬ１は１である、請求項８に記載の化合物。
  9. ＮＬ２は１である、請求項８に記載の化合物。
  10. 前記［ＩＢＴ］は、添付の図１４に記載された基である、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物。
  11. 前記［ＩＢＴ］基はＣＰ３３である、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
  12. 前記［ＣＢＴ］基は、化学構造
    Figure 2016529204
     の基、又はその塩若しくは光学異性体であり、式中、Ｘ1及びＸ2は、それぞれ独立してＣＨ2、Ｏ、ＮＨ又はＳであり、
    Ｘ3は、Ｏ、ＣＨ2，ＮＲ1，Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）2、−Ｓ（Ｏ）2Ｏ、−ＯＳ（Ｏ）2又はＯＳ（Ｏ）2Ｏであり、
    Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ3アルキル基又は−Ｃ（Ｏ）（Ｃ1−Ｃ3）基であり、
    ｋは、０〜２０の整数である、
    請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物。
  13. 前記ＣＢＴ基は、
    Figure 2016529204
     の基又はその塩であり、式中、ｋは２、３又は４である、請求項１〜１３のいずれかに記載の化合物。
  14. ｋが４である、請求項１３に記載の化合物。
  15. 次の化学構造の［ＣＯＮ］基を任意で含み、
    Figure 2016529204
     式中、Ｘ2は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ4、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）2、−Ｓ（Ｏ）2Ｏ、−ＯＳ（Ｏ）2又はＯＳ（Ｏ）2Ｏであり、
    Ｘ3は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ4であり、
    Ｒ4は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ3アルキル若しくはアルカノール基、又は−Ｃ（Ｏ）（Ｃ1−Ｃ3）基である、
    請求項１〜１４のいずれかに記載の化合物。
  16. ［ＣＯＮ］基を含み、該［ＣＯＮ］基は次の化学構造であり、
    Figure 2016529204
     式中、ＣＬは、
    Figure 2016529204
     であり、ｍは、０〜１２の整数、多くの場合に０、１、２、３、４、５、６であり、
    ｉＬは、０又は１、多くの場合に１である、
    請求項１〜１５のいずれかに記載の化合物。
  17. 前記リンカー基Ｌ1又はＬ2は次のいずれかを含む、請求項１〜１６のいずれかに記載の化合物。
    （１）長さが１〜１００単位のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）連結、ポリプロピレングリコール連結、又はポリエチレングリコール共ポリプロピレングリコール重合体
    （２）次の化学構造のポリプロリンリンカー又はコラーゲンリンカー
    Figure 2016529204
     式中、ｎは１〜１００である。
    （３）次の構造のリンカー
    Figure 2016529204
     式中、Ｒaは、Ｈ、Ｃ1−Ｃ3アルキル、アルカノールであるか、又はＲ3がプロリンの場合にＲ3と環を形成し、Ｒ3は、アミノ酸から誘導される側鎖であり、
    ｍ”は、０〜２５の整数であり、
    ｍは、１〜１００の整数であり、
    前記基のそれぞれは、アミド基、ケト基、アミン基又はアミノ酸を介して更に連結されることができる。
    （４）次の構造のリンカー
    Figure 2016529204
     式中、Ｒaは、Ｈ又はＣ1−Ｃ3アルキル、好ましくはＣＨ3、最も多くの場合にＨであり、
    ｍは、１〜１２の整数、多くの場合に１、２、３、４、５又は６であり、
    ｍ”は、１、２、３、４、５又は６の整数、多くの場合に６であり、
    ｔは、０、１、２、３、４、５又は６であり、
    ｉＬは、０又は１であり、
    前記リンカーは、一端で［ＣＯＮ］基及び［ＣＢＴ］基に、他端で［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基に、任意で連結される。
    （５）次の構造のリンカー
    Figure 2016529204
     式中、ｑは、０〜１２の整数であり、
    ｑ’は、１〜１２である。
    （６）次の化学構造のリンカー
    Figure 2016529204
     式中、ｑは、０〜１２の整数であり、
    ｑ’は、１〜１２であり、
    ｉＬは、０又は１であり、
    ＲLは、アミノ酸又はオリゴペプチドである。
    （７）次の化学構造のスクシンイミドのリンカー
    Figure 2016529204
     式中、各ＸSは、独立してＳ、Ｏ又はＮ−ＲSであり、
    ＲSは、Ｈ又はＣ1-3アルキルであり、
    Ｓcは、ＣＨ2、ＣＨ2Ｏ、又はＣＨ2ＣＨ2Ｏであり、
    ｉは、０又は１であり、
    ｍSは、０、１、２、３、４、５又は６である。
    （８）次の化学構造のリンカー
    Figure 2016529204
     式中、Ｚ及びＺ’は、それぞれ独立して結合、−（ＣＨ2）i−Ｏ、−（ＣＨ2）i−Ｓ、−（ＣＨ2）i−Ｎ−Ｒ、
    Figure 2016529204
     であり、ここで、前記Ｚ及びＺ’基は、任意で別のリンカー基、コネクタ基［ＣＯＮ］、［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基、ＩＢＴ又はＣＢＴに結合され、
    各Ｒは、Ｈ、又はＣ1−Ｃ3アルキル若しくはアルカノール基であり、
    各Ｒ2は、独立してＨ又はＣ1−Ｃ3アルキル基であり、
    各Ｙは、独立して結合、Ｏ、Ｓ又はＮ−Ｒであり、
    各ｉは、独立して０〜１００であり、
    Ｄは、
    Figure 2016529204
     結合であるか、あるいはＤは、
    Figure 2016529204
     又は１〜１００のグリコール単位を有するポリプロピレングリコール又はポリプロピレン共ポリエチレングリコールリンカーであり、
    但し、Ｚ、Ｚ’及びＤは、それぞれ同時に結合でなく、
    各ｉは、上記と同じであり、
    ｊは、１〜１００であり、
    ｍ（この状況で）は、１〜約１００の整数であり、
    ｎ（この状況で）は、１〜約１００の整数であり、
    ｍ’は、１〜１００であり、
    ｍ”は、０〜２５、好ましくは１〜１０、１〜８、１、２、３、４、５又は６の整数であり、
    ｎ’は、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４又は５の整数であり、
    Ｘ1は、Ｏ、Ｓ又はＮ−Ｒであり、
    Ｒは上記のとおりであり、
    Ｒaは、Ｈ、Ｃ1−Ｃ3アルキル若しくはアルカノールであるか、又はＲ3と環を形成し、Ｒ3は、アミノ酸から誘導される側鎖である。
  18. 前記［ＭＵＬＴＩＣＯＮ］基は、次の化学構造の多官能性コネクタ基若しくは分子、又はその薬学的に許容される塩であり、
    Figure 2016529204
     式中、Ｙ4は、Ｃ−Ｈ又はＮであり、
    各Ｘ”は、独立して親電子性又は親核性の基、好ましくは（ＣＨ2）n"Ｏ、（ＣＨ2）n"ＮRCON、（ＣＨ2）n"Ｓ、（ＣＨ2）n"又は（ＣＨ2）n"Ｃ＝Ｏから誘導され、
    置換基ＲＣＯＮは、Ｈ又はＣ1−Ｃ3アルキル、好ましくはＨ又はＣＨ3であり、
    ｎ”は、０、１、２又は３であり、
    ｒは、１〜１２の整数であり、
    前記［ＣＯＮ］基は、存在するならば、次の化学構造による部分であり、
    Figure 2016529204
     式中、Ｘ2は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ4、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）2、−Ｓ（Ｏ）2Ｏ、−ＯＳ（Ｏ）2又はＯＳ（Ｏ）2Ｏであり、
    Ｘ3は、ＮＲ4、Ｏ又はＳであり、
    Ｒ4は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ3アルキル若しくはアルカノール基、又は−Ｃ（Ｏ）（Ｃ1−Ｃ3）基である、
    請求項１〜１７のいずれかに記載の化合物。
  19. Ｌ1及び／又はＬ2は、
    Figure 2016529204
     であり、式中、Ｒaは、Ｈ又はＣＨ3であり、
    ｍは、１〜１２の整数であり、
    ｍ”は、１、２、３、４、５又は６の整数あり、
    ｔは、０、１、２、３、４、５又は６であり、
    ｉＬは、０又は１である、
    請求項１〜１６、１８のいずれかに記載の化合物。
  20. Ｌ1及び／又はＬ2は、
    Figure 2016529204
     であり、式中、ＲaはＨであり、
    ｍ”は、１、２、３、４、５又は６であり、
    ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２である、
    請求項１〜１６、１８、１９のいずれかに記載の化合物。
  21. Ｌ1及び／又はＬ2は、長さが１〜１２のグリコール単位のポリエチレングリコールリンカー、又は［ＣＯＮ］基を介して別のポリエチレングリコールリンカーに延びるポリエチレングリコールリンカーであり、該ポリエチレングリコールリンカーは、長さが１〜１２のグリコール単位であり、前記別のポリエチレングリコールリンカーは、長さが１〜１２のグリコール単位である、化合物。
  22. 前記［ＣＯＮ］基は、
    Figure 2016529204
     である、請求項２１に記載の化合物。
  23. 図１６に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩、立体異性体、溶媒和物若しくは同質異像体である、請求項１に記載の化合物。
  24. ビオチン基がない図１６に記載の化合物。
  25. ビオチン基に結合するリジン基が、アミノ酸の側鎖に官能基を有しないアミノ酸と交換される、請求項２３に記載の化合物。
  26. 図２に記載の化合物２、又はその薬学的に許容される塩、立体異性体、溶媒和物若しくは同質異像体である、請求項１に記載の化合物。
  27. ビオチンがない請求項２６に記載の化合物。
  28. ビオチン基に結合するリジン基が、アミノ酸の側鎖に官能基を有しないアミノ酸と交換される、請求項２６に記載の化合物。
  29. 図２に記載の化合物３である、請求項１に記載の化合物。
  30. 有効量の請求項１〜２９のいずれかに記載のキメラ化合物を、薬学的に許容される担体、添加剤又は賦形剤と組み合わせて含む、医薬組成物。
  31. 前記組成物は、有効量の追加の抗癌剤を更に含む、請求項３０に記載の組成物。
  32. 前記追加の抗癌剤は、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼＩ及びＩＩの阻害剤、アルキル化剤、微小管阻害剤、又はそれらの組み合わせである、請求項３１に記載の組成物。
  33. 前記抗癌剤は、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アルトレタミン、アミホスチン、アナストロゾール、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、生ＢＣＧ、ベキサロテンカプセル、ベキサロテンゲル、ブレオマイシン、静注ブスルファン、経口ブスルファン、カルステロン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、ポリフェプロサン２０インプラントを有するカルムスチン、セレコキシブ、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、シクロホスファミド、シタラビン、シタラビンリポソーマル、ダカルバジン、ダクチノマイシン、アクチノマイシンＤ、ダルベポエチンアルファ、ダウノルビシンリポソーマル、ダウノルビシン、ダウノマイシン、デニロイキンディフティトックス、デクスラゾキサン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドキソルビシンリポソーマル、プロピオン酸ドロモスタノロン、エリオットＢ溶液、エピルビシン、エポエチンアルファエストラムスチン、リン酸エトポシド、エトポシド（ＶＰ−１６）、エキセメスタン、フィルグラスチム、フロクスリジン（動脈内）、フルダラビン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルベストラント、ゲムツズマブオゾガマイシン、酢酸ゴセレリン、ヒドロキシウレア、イブリツモマブチウキセタン、イダルビシン、イフォスファミド、メシル酸イマチニブ、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、イリノテカン、レトロゾール、ロイコボリン、レバミソール、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、酢酸メゲストロール、メルファラン（Ｌ−ＰＡＭ）、メルカプトプリン（６−ＭＰ）、メスナ、メトトレキサート、メトクスサレン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、フェンプロピオン酸ナンドロロン、ノフェツモマブ、ＬＯｄｄＣ、オプレルベキン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ミトラマイシン、ポルフィマーナトリウム、プロカルバジン、キナクリン、ラスブリカーゼ、リツキシマブ、サルグラモスチム、ストレプトゾシン、タルブビジン（ＬＤＴ）、タルク、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド（ＶＭ−２６）、テストラクトン、チオグアニン（６−ＴＧ）、チオテパ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン（ＡＴＲＡ）、ウラシルマスタード、バルルビシン、バルトルシタビン（モノバルＬＤＣ）、ビンブラスチン、ビノレルビン、ゾレドロネート、及びこれらの混合物である、請求項３１に記載の組成物。
  34. 少なくとも１つの抗アンドロゲン化合物を更に含む、請求項３０〜３３のいずれかに記載の組成物。
  35. 少なくとも１つのＧｎＲＨモジュレータを更に含む、請求項３０〜３４のいずれかに記載の組成物。
  36. フルタミド、ビカルタミド、ニルタミド、酢酸シプロテロン、ケトコナゾール、アミノグルテチミド、アバレリックス、ロイプロリド、ゴセレリン、トリプトレリン、ブセレリン、酢酸アビラテロン、ソラフェニブ、及びそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの薬剤を更に含む、請求項３０〜３３のいずれかに記載の組成物。
  37. 前立腺肥大用薬剤、エウレキシン、フルタミド、ゴセレリン、ロイプロリド、ルプロン、ニランドロン、ニルタミド、ゾラデックス及びそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの薬剤を更に含む、請求項３０〜３３のいずれかに記載の組成物。
  38. 経口の投与形態である、請求項３０〜３７のいずれかに記載の組成物。
  39. 非経口の投与形態である、請求項３０〜３７のいずれかに記載の組成物。
  40. 前記非経口の投与形態は、静脈投与の形態である、請求項３９に記載の組成物。
  41. 局所投与の形態である、請求項２９〜３６のいずれかに記載の組成物。
  42. 有効量の請求項１〜２９のいずれかに記載の化合物を患者に投与することを含む、必要とする患者において前立腺癌を治療する方法。
  43. 前記前立腺癌は、転移性前立腺癌である、請求項４２に記載の方法。
  44. 有効量の請求項３０〜４１のいずれかに記載の組成物を患者に投与することを含む、必要とする患者において前立腺癌を治療する方法。
  45. 有効量の請求項１〜２９のいずれかに記載の化合物を患者に投与することを含む、必要とする患者において前立腺癌の転移を抑制する方法。
  46. 請求項３０〜３３のいずれかに記載の組成物を患者に投与することを含む、必要とする患者において癌を治療する方法。
  47. 前記癌は、胃癌、結腸癌、直腸癌、肝癌、脾臓癌、肺癌、乳癌、子宮頸癌、子宮体癌、卵巣癌、精巣癌、膀胱癌、腎臓癌、脳腫瘍／ＣＮＳ癌、頭部癌、首部癌、咽喉癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、白血病、黒色腫、非黒色腫の皮膚癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、ユーイング肉腫、小細胞肺癌、絨毛腫、横紋筋肉腫、ウィルムス腫瘍、神経芽細胞腫、ヘアリー細胞白血病、口腔癌／咽頭癌、食道癌、喉頭癌、腎癌又はリンパ腫である、請求項４６に記載の方法。
  48. 有効量の請求項３０〜３３のいずれかに記載の組成物を患者に投与することを含む、別の形態の癌も有する患者において前立腺癌を治療する方法。
  49. 前記別の形態の癌は、胃癌、結腸癌、直腸癌、肝癌、脾臓癌、肺癌、乳癌、子宮頸癌、子宮体癌、卵巣癌、精巣癌、膀胱癌、腎臓癌、脳腫瘍／ＣＮＳ癌、頭部癌、首部癌、咽喉癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、白血病、黒色腫、非黒色腫の皮膚癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、ユーイング肉腫、小細胞肺癌、絨毛腫、横紋筋肉腫、ウィルムス腫瘍、神経芽細胞腫、ヘアリー細胞白血病、口腔癌／咽頭癌、食道癌、喉頭癌、腎癌又はリンパ腫である、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記別の形態の癌は、癌腫、悪性の黒色腫、骨髄増殖性疾患、肉腫、中枢神経系の腫瘍、生殖系列腫瘍、混合型の新生物又は混合起源の腫瘍である、請求項４８に記載の方法。
  51. 癌の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜２９のいずれかに記載の化合物の使用。
  52. 前記癌は前立腺癌である、請求項５１に記載の使用。
  53. 前記癌は転移性癌である、請求項５１に記載の使用。
  54. 前記前立腺癌は転移性前立腺癌である、請求項５２に記載の使用。
  55. 転移性癌の抑制において使用される薬剤の製造における、請求項１〜２９のいずれかに記載の化合物の使用。
  56. 前記転移性癌は前立腺癌である、請求項５５に記載の使用。
  57. 前記化合物は、追加の抗癌剤と組み合わされる、請求項５１〜５６のいずれかに記載の使用。
  58. 前記追加の抗癌剤は、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼＩ及びＩＩの阻害剤、アルキル化剤、微小管阻害剤、又はそれらの組み合わせである、請求項５７に記載の使用。
  59. 前記抗癌剤は、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アルトレタミン、アミホスチン、アナストロゾール、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、生ＢＣＧ、ベキサロテンカプセル、ベキサロテンゲル、ブレオマイシン、静注ブスルファン、経口ブスルファン、カルステロン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、ポリフェプロサン２０インプラントを有するカルムスチン、セレコキシブ、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、シクロホスファミド、シタラビン、シタラビンリポソーマル、ダカルバジン、ダクチノマイシン、アクチノマイシンＤ、ダルベポエチンアルファ、ダウノルビシンリポソーマル、ダウノルビシン、ダウノマイシン、デニロイキンディフティトックス、デクスラゾキサン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドキソルビシンリポソーマル、プロピオン酸ドロモスタノロン、エリオットＢ溶液、エピルビシン、エポエチンアルファエストラムスチン、リン酸エトポシド、エトポシド（ＶＰ−１６）、エキセメスタン、フィルグラスチム、フロクスリジン（動脈内）、フルダラビン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルベストラント、ゲムツズマブオゾガマイシン、酢酸ゴセレリン、ヒドロキシウレア、イブリツモマブチウキセタン、イダルビシン、イフォスファミド、メシル酸イマチニブ、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、イリノテカン、レトロゾール、ロイコボリン、レバミソール、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、酢酸メゲストロール、メルファラン（Ｌ−ＰＡＭ）、メルカプトプリン（６−ＭＰ）、メスナ、メトトレキサート、メトクスサレン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、フェンプロピオン酸ナンドロロン、ノフェツモマブ、ＬＯｄｄＣ、オプレルベキン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ミトラマイシン、ポルフィマーナトリウム、プロカルバジン、キナクリン、ラスブリカーゼ、リツキシマブ、サルグラモスチム、ストレプトゾシン、タルブビジン（ＬＤＴ）、タルク、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド（ＶＭ−２６）、テストラクトン、チオグアニン（６−ＴＧ）、チオテパ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン（ＡＴＲＡ）、ウラシルマスタード、バルルビシン、バルトルシタビン（モノバルＬＤＣ）、ビンブラスチン、ビノレルビン、ゾレドロネート、及びこれらの混合物である、請求項５７に記載の使用。
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