CN118647408A - 抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物、其中间体、制备方法、药物组合物和用途 - Google Patents

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Abstract

一种抗体‑艾日布林或其衍生物的偶联物、其中间体、制备方法、药物组合物和用途。提供的通式I所示的抗体‑艾日布林或其衍生物的偶联物如下所示。通式I偶联物具有高抗肿瘤活性，在循环中的稳定性高，具有优异的肿瘤组织靶向性和治疗指数。

Description

抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物、其中间体、制备方法、药物组合物和用途
本申请要求申请日为2022/2/16的中国专利申请2022101407965的优先权。本申请引用上述中国专利申请的全文。
技术领域
本公开涉及一种抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物、其中间体、制备方法、药物组合物和用途。
背景技术
艾立布林(或称艾日布林)是一种软海绵素类微管动力学抑制剂，具有独特的结合特性。除了抑制微管动力学生长的作用机制外，非临床研究显示，艾立布林对肿瘤微环境具有独特的作用，例如：增加肿瘤核心的血管灌注和通透性，促进上皮状态，降低乳腺癌细胞的迁移能力等。目前，艾立布林已在包括欧洲、美洲和亚洲在内的70多个国家和地区获得批准，用于乳腺癌的治疗。一项由Synold等报道的I期临床研究共入组40例患者，可评价患者38例，甲磺酸艾日布林给药方法为d 1，d 8，d 15静脉滴注，28d为一个化疗周期，确定最大耐受剂量(maximum tolerated dose，MTD)为1.4mg/m2。甲磺酸艾日布林治疗中最常见的3-4级不良反应依次为中性粒细胞减少症(64％)。抗体药物偶联物(ADC)是抗体和小分子药物的偶联体，融合了抗体的肿瘤靶向作用和生物活性分子的活性，成为一种生物导弹，具有非常可期待的疗效和安全性优势。抗体引导ADC结合到靶细胞，随后被细胞内化，小分子药物在细胞内通过特定酶作用下发生的酶解释放，治疗疾病。因此可以期待由艾立布林和肿瘤靶向抗体联合组成的ADC可以保持艾立布林的治疗作用，同时消除或降低艾立布林作用于非疾病组织而引起的毒副作用，提高治疗效果。
马来酰亚胺因其高选择性、高反应活性和较好的稳定性，而广泛适用于通过迈克尔加成反应与抗体的硫醇偶联，形成ADC分子。已上市的15款ADC药物中，9款都是通过马来酰亚胺偶联的。已有多篇文献报道，硫代琥珀酰亚胺键在含硫醇物质存在的情况下(例如血浆中)是不稳定的，可以通过逆迈克尔反应断裂或与白蛋白(HAS)和谷胱甘肽(GSH)等内源性硫醇交换，导致药效学、药代动力学和安全性不理想。
发明内容
本公开的目的是提供一种抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物、其中间体、制备方法、药物组合物和用途。本公开的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物具有高抗肿瘤活性，能够更有效地杀死肿瘤细胞，比单独使用艾日布林具有更好的体内抗肿瘤效果；ADC在循环中的稳定性高，能够减少非目的性生物活性分子在非靶细胞中的脱落，增加生物活性分子在胞内的有效释放，生物活性分子具有更高的瘤内和血液浓度比，具有更高的治疗指数；通过在连接子中增加碱性氮原子，从而提高了整个抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物在相对酸性肿瘤环境中的暴露量，因而具有更好的肿瘤组织靶向性，增加 了生物活性分子在瘤内和血液浓度比，具有更高的治疗指数。
为此，在本公开的第一方面，本公开提供式I所示的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物，
或所述偶联物的立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，
其中，
Tb为和靶点结合的抗体或其抗原结合片段，或靶向部分；
q为药物Tb偶联比；
R1、R2各自独立地选自氢(H)、氘(D)、C1-6烷基；或者，R1和R2与其相连的氮原子、氧原子一起形成5-6元杂环，所述5-6元杂环任选地被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、C3-6杂环基中的一个或多个取代基所取代；
L1选自1位通过S原子与Tb相连，2位与L2相连；
Rc选自氢(H)、C1-6烷基；
L2选自1位与L1相连，2位与L3相连；
p选自0-10之间的任意整数；
Y选自-CH2-、-OCH2CH2-；
Z选自-CR3R4-，-NR5-；
R3、R4各自独立地选自氢(H)、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、C3-6杂环基；或者，R3和R4与其相连的碳原子一起形成3-6元碳环或3-6元杂环；
R5选自氢(H)、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、C3-6杂环基；
L3选自化学键、氨基酸残基或由2-10个氨基酸残基组成的短肽；所述的氨基酸残基选自天然氨基酸残基、非天然氨基酸残基、或选自AA1所示氨基酸残基或其立体异构体；
AA1所示氨基酸残基的结构如下所示，
其中：
Ra、Rb各自独立地选自氢(H)和且Ra、Rb不同时为氢(H)；
或者，Ra与Rb和与它们共同相连的碳原子一起形成4-10元杂环，所述4-10元杂环任选地被一个或多个R0所取代；
r、r1各自独立地选自0-20之间的任意整数；
Rm1、Rn1各自独立地选自氢(H)、C1-6烷基、C3-6环烷基；
或者，Rm1与Rn1和与它们共同相连的氮原子一起形成4-10元杂环，所述4-10元杂环任选地被一个或多个R0’所取代；
R0、R0’各自独立地选自C1-6烷基、C3-6环烷基、-NRm2Rn2和任选被C1-6烷基取代的4-10元杂环基；
Rm2、Rn2各自独立地选自氢(H)和C1-6烷基；
L4不存在或存在，L4存在时，L4选自1位与L3相连，2位与艾日布林的氮原子相连。
在一些实施方案中，所述式I所示的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物，或所述偶联物的立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，
其中，
Tb为和靶点结合的抗体或其抗原结合片段，或靶向部分；
q为药物Tb偶联比；
R1、R2各自独立地选自氢(H)、氘(D)、C1-6烷基；或者，R1和R2与其相连的氮原子、氧原子一起形成5-6元杂环，所述5-6元杂环任选地被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、C3-6杂环基中的一个或多个取代基所取代；
L1选自1位通过S原子与Tb相连，2位与L2相连；
Rc选自氢(H)、C1-6烷基；
L2选自1位与L1相连，2位与L3相连；
p选自0-10之间的任意整数；
Y选自CH2、OCH2CH2；
Z选自CR3R4，NR5；
R3、R4各自独立地选自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、C3-6杂环基；或 者，R3和R4与其相连的碳原子一起形成3-6元碳环或3-6元杂环；
R5选自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、C3-6杂环基；
L3选自氨基酸残基或由2-10个氨基酸残基组成的短肽；所述的氨基酸残基选自天然氨基酸残基、非天然氨基酸残基、或选自AA1所示氨基酸残基或其立体异构体；
AA1所示氨基酸残基的结构如下所示，
其中：
Ra、Rb各自独立地选自H和且Ra、Rb不同时为H；
或者，Ra与Rb和与它们共同相连的碳原子一起形成4-10元杂环，所述4-10元杂环任选地被一个或多个R0所取代；
r、r1各自独立地选自0-20之间的任意整数；
Rm1、Rn1各自独立地选自H、C1-6烷基、C3-6环烷基；
或者，Rm1与Rn1和与它们共同相连的氮原子一起形成4-10元杂环，所述4-10元杂环任选地被一个或多个R0’所取代；
R0、R0’各自独立地选自C1-6烷基、C3-6环烷基、-NRm2Rn2和任选被C1-6烷基取代的4-10元杂环基；
Rm2、Rn2各自独立地选自H和C1-6烷基；
L4不存在或存在，L4存在时，L4选自1位与L3相连，2位与艾日布林的氮原子相连。
在一些实施方案中，当L1为1位通过S原子与Tb相连，2位与L2相连时：
L3不为化学键，Val-Cit，Val-Lys，(Gly)2-Phe-Gly或Ala-Ala-Asn；或者，
L4存在且不为
在一些实施方案中，当L1为1位通过S原子与Tb相连，2位与L2相连，且L3为Val-Cit，Val-Lys，(Gly)2-Phe-Gly或Ala-Ala-Asn时：L4选自不存在， 或者，
L3为化学键时：L4存在。
在一些实施方案中，q选自0.1-16.0之间的任意数值，在优选地实施方案中，q选自0.1-10.0之间的任意整数。
在一些实施方案中，q选自2-8之间的任意数值。
在一些实施方案中，q选自1、2、3、4、5、6、7和8。
在一些实施方案中，R1、R2为氢(H)；或者，R1和R2与其相连的氮原子、氧原子一起形成1位与L4或者L3相连。
在一些实施方案中，L1选自1位通过S原子与Tb相连，2位与L2相连。
在一些实施方案中，L1选自1位通过S原子与Tb相连，2位与L2相连。
在一些实施方案中，L1选自1位通过S原子与Tb相连，2位与L2相连。
在一些实施方案中，L1为1位通过S原子与Tb相连，2位与L2相连。
在一些实施方案中，Rc为氢(H)。
在一些实施方案中，p选自0、1、2、3、4、5、6、7、8。
在一些实施方案中，Z为-CH2-、-C(CH3)2-或-NH-。
在一些实施方案中，Z为-C(CH3)2-。
在一些实施方案中，R3、R4各自独立地选自氢(H)、甲基。
在一些实施方案中，R5为氢(H)或甲基。
在一些实施方案中，L2选自1位与L1相连，2位与L3相连。
在一些实施方案中，L2选自 1位与L1相连，2位与L3相连。
在一些实施方案中，L2为1位与L1相连，2位与L3相连。
在一些实施方案中，L3选自氨基酸残基Val、D-Val、Cit、Phe、Lys、Lys(Ac)、Leu、Gly、Ala、Asn、Asp、Arg、AA1或由2-10个选自Val、Cit、Phe、Lys、D-Val、Leu、Gly、Ala、Asn、Asp、AA1的氨基酸残基组成的短肽。
在一些实施方案中，所述L3为包含至少1个(例如1个，2个或3个)AA1所示氨基酸残基或其立体异构体的二肽，三肽，四肽，五肽，六肽，七肽，八肽，九肽或十肽。
在一些实施方案中，所述L3为包含至少1个AA1所示氨基酸残基或其立体异构体的二肽，三肽或四肽。
在一些实施方案中，L3选自Val、Cit、Phe、Lys、D-Val、Leu、Gly、Ala、Asn、AA1、Val-Cit、Cit-Val、Cit-Ala、Val-Ala、Lys-Val、Val-Lys(Ac)、Phe-Lys、Phe-Lys(Ac)、Ala-Ala、Val-AA1、Ala-AA1、Gly-AA1、AA1-Gly、Ala-Ala-Ala、Ala-Ala-Asn、Ala-Ala-Asp、Val-AA1-Gly、Ala-AA1-Gly、Gly-AA1-Gly、Lys-(Ala)2-Asn、Lys-(Ala)2-Asp、Gly-Phe-Gly、(Gly)2-Phe-Gly、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn、Gly-Gly-Phe、Val-Lys-Gly、Val-Lys-(Gly)2、Val-Lys、Lys-Ala-Asn、(Gly)2-Phe-AA1。
在一些实施方案中，L3选自Val-AA1-Gly、Val-AA1、Val-Cit、(Gly)2-Phe-AA1。
在一些实施方案中，L3选自Val-AA1和Val-Cit。
在一些实施方案中，L3选自化学键、 1位与L2相连，2位与L4或艾日布林的氮原子相连。
在一些实施方案中，L3选自 1位与L2相连，2位与L4或艾日布林的氮原子相连。
在一些实施方案中，L3选自 1位与L2相连，2位与L4或艾日布林的氮原子相连。
在一些实施方案中，L3选自1位与L2相连，2位与L4或艾日布林的氮原子相连。
在一些实施方案中，Ra、Rb中，任一个为氢(H)，另一个为
在一些实施方案中，Ra与Rb和与它们共同相连的碳原子一起，形成被R0取代的5-6元杂环。
在一些实施方案中，Ra与Rb和与它们共同相连的碳原子一起，形成被R0取代的哌啶环或哌嗪环。
在一些实施方案中，Ra与Rb和与它们共同相连的碳原子一起，形成被R0取代的哌啶环。
在一些实施方案中，Ra与Rb和与它们共同相连的碳原子一起，形成1号碳 原子为与Ra和Rb共同相连的碳原子。
在一些实施方案中，r、r1各自独立地选自0、1、2、3、4和5。
在一些实施方案中，r、r1各自独立地选自0和4。
在一些实施方案中，r为0，r1为4。
在一些实施方案中，Rm1、Rn1各自独立地选自氢(H)和C1-6烷基；优选C1-6烷基。
在一些实施方案中，Rm1、Rn1各自独立地选自氢(H)、甲基、乙基、正丙基和正丁基；优选甲基、乙基、正丙基和正丁基。
在一些实施方案中，Rm1与Rn1和与它们共同相连的氮原子一起，形成任选被R0’取代的5-6元杂环。
在一些实施方案中，Rm1与Rn1和与它们共同相连的氮原子一起，形成任选被R0’取代的哌啶环或哌嗪环。
在一些实施方案中，Rm1与Rn1和与它们共同相连的氮原子一起，形成1号氮原子为与Rm1和Rn1共同相连的氮原子。
在一些实施方案中，R0、R0’各自独立地选自C1-6烷基、-NRm2Rn2和任选被C1-6烷基取代的5-6元杂环基。
在一些实施方案中，R0选自C1-6烷基和被C1-6烷基取代的5-6元杂环基，所述5-6元杂环基选自哌啶基和哌嗪基。
在一些实施方案中，R0选自甲基、乙基和被甲基取代的5-6元杂环基，所述5-6元杂环基为哌啶基。
在一些实施方案中，R0选自甲基和被甲基取代的5-6元杂环基，所述5-6元杂环基为哌啶基。
在一些实施方案中，R0选自甲基、乙基和
在一些实施方案中，R0选自甲基和
在一些实施方案中，R0’选自C1-6烷基和-NRm2Rn2。
在一些实施方案中，R0’选自甲基和-NRm2Rn2。
在一些实施方案中，Rm2、Rn2为甲基。
在一些实施方案中，AA1所示氨基酸残基选自 例如
在一些实施方案中，AA1所示氨基酸残基选自 例如
在一些实施方案中，AA1所示氨基酸残基为
在一些实施方案中，L4不存在或存在，L4存在时，L4选自1位与L3相连，2位 与艾日布林的氮原子相连。
在一些实施方案中，L4为1位与L3相连，2位与艾日布林的氮原子相连。
在一些实施方案中，连接体选自下式表示，
其中，Y、Z、p、AA1的定义如本公开中任一方案所述，1位通过S原子与Tb相连，2位与艾日布林的氮原子相连。
在一些实施方案中，连接体选自下式表示：
其中，Y、Z、p、AA1的定义如本公开中任一方案所述，1位通过S原子与Tb相连，2位与艾日布林的氮原子相连。
在一些实施方案中，连接体选自下式表示：
其中，Y、Z、p、AA1的定义如本公开中任一方案所述，1位通过S原子与Tb相连，2位与艾日布林的氮原子相连。
在一些实施方案中，连接体选自：
1位通过S原子与Tb相连，2位与艾日布林的氮原子相连。
在一些实施方案中，连接体选自：
1位通过S原子与Tb相连，2位与艾日布林的氮原子相连。
在一些实施方案中，连接体选自：
1位通过S原子与Tb相连，2位与艾日布林的氮原子相连。
在一些实施方案中，所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物优选为下列化合物：
另外，还需要说明的是，本领域技术人员可以理解的是，L是与打开二硫键(例如，通过还原剂TCEP还原二硫键可以打开二硫键，生成巯基-SH)后Tb(如抗体)自身所含有巯基进行连接，也就是说，L与Tb之间的-S-并非另外再外接的硫原子。例如，其中，-S-并非另外外接的硫原子，而是打开双硫键后的Tb自身所含有巯基与L进行连接后形成的-S-。
在一些实施方案中，Tb为抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体(例如，scFv)、非人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、全人抗体、前抗(Probody)、双特异性抗体或多特异性抗体。
在一些实施方案中，Tb为单克隆抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，Tb为具有内吞活性的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，Tb为具有结合肿瘤组织中游离抗原和/或肿瘤细胞表面抗原活性的抗体或其抗原结合片段。
在一些优选的实施方案中，Tb选自结合如下靶标的抗体或其抗原结合片段：表皮生长因子、整合素α5β6、整合素α4β7、0772P、5T4、ACTA2、ADGRE1、AGS-16、AIF1、AKR1C1、AKR1C2、ANGPTL4、ApoE、ASLG659、BAFF-R、BMPR1B、BNIP3、Brevican、C1QA、C1QB、CA6、pCAD、P-cadherin、CADM1、CCL5、CCR5、CD11b、CD11c、CD19、CD20、CD21、CD22、CD30、CD33、CD37、CD40、CD45(PTPRC)、CD49D(ITGA4)、CD56、CD66e、CD70、CD72、CD74、CD79a、CD80、CD138、CD223、CDCP1、CDH11、Claudin18.2、COL6A3、COL7A1、CRIPTO、CSF1R、CTGF、CTSD、 CTSS、CXCL10、CXCL11、CXCR5、DDIT4、DLL3、DLL4、DR5、E16、EFNA4、B7H3，EGFR、EGFRvIII、EGLN、EGLN3、EMR2、Endothelinreceoptor、ENPP3、EpCAM、EphB2R、ETBR、FGF2、FGFR2、FcRH1、FcRH2、GEDA、GPNMB、GZMB、Her2、Her3、HLA-DOB、HMOX1、IFNG、IFI6、IGF-1R、IGFBP3、IL10RA1、IL20Rα、IL-6、IRTA2、KISS1R、KRT33A、LOX、LRRC15、LUM、LY6E、LY64、LY86、LYPD3、MCPT8、MDP、Mesothelin、c-Met、MFI2、MMP10、MMP14、MMP16、MPF、MSG783、MS4A7、MUC 1、MUC16、NaPi2b、NaPi3b、NCA、Nectin 4、NOG、P2X5、PD-L1、PDK1、PDGFRA、PFKFB3、PGF、PGK1、PIK3AP1、PIK3CD、PLOD2、PSCA、PSCAhlg、PSMA、RNF43、ROR1、Sema5b、SERPINEl、SLC39A6、SLITRK6、SLTRK6、STAT1、STC2、STEAP1、STEAP2、TCF4、TENB2、TGF、TGFBR1、TGFB2、Tissue factor、TNFRSF21、TNFSF9、Trop-2、TrpM4、Tyro7、UPK1B、VEGFA和WNT5A。
在一些实施方案中，Tb为抗B7H3抗体或其抗原结合片段、抗Trop-2抗体或其抗原结合片段、抗Her 2抗体或其抗原结合片段、抗Her3抗体或其抗原结合片段或抗EGFR抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，Tb为抗Her 2的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述的抗Her 2的抗体为anbenitamab，coprelotamab，disitamab，gancotamab，margetuximab，pertuzumab，timigutuzumab，zanidatamab，Trastuzumab，Pertuzumab或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，Tb为抗Trop-2的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述的抗Trop-2的抗体为datopotamab，Sacituzumab或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，Tb为抗EGFR的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述的抗EGFR的抗体为demupitamab，depatuxizumab，futuximab，imgatuzumab，laprituximab，losatuxizumab，matuzumab，modotuximab，necitumumab，nimotuzumab，panitumumab，pimurutamab，serclutamab，tomuzotuximab，zalutumumab，Cetuximab或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，Tb为抗B7H3抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，其中所述抗B7H3抗体为enoblituzumab，mirzotamab，omburtamab，1D1-01，2E3-02抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，Tb为抗B7H3抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述抗B7H3抗体其抗原结合片段包含如下的互补决定区(CDR)，其中CDR按kabat编号系统定义：序列为SEQ ID NO：9的HCDR1，序列为SEQ ID NO：10的HCDR2，序列为SEQ ID NO：11的HCDR3；和/或，序列为SEQ ID NO：12的LCDR1，序列为SEQ ID NO：13的LCDR2，序列为SEQ ID NO：14的LCDR3。
在一些实施方案中，所述抗B7H3抗体其抗原结合片段包含如下的互补决定区(CDR)，其中CDR按IMGT编号系统定义：
序列为SEQ ID NO：15的HCDR1，序列为SEQ ID NO：16的HCDR2，序列为SEQ ID NO：17的HCDR3；和/或，序列为SEQ ID NO：18的LCDR1，序列为GAS的LCDR2，序列为SEQ ID NO：19的LCDR3。
在一些实施方案中，Tb为抗B7H3抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗B7H3抗体或其抗原结 合片段包含：SEQ ID NO：1或5所示的VH，和/或，SEQ ID NO：2或6所示的VL。进一步包含：(a)人免疫球蛋白的重链恒定区(CH)或其变体；和/或(b)人免疫球蛋白的轻链恒定区(CL)或其变体。
在一些实施方案中，Tb为抗B7H3抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗B7H3抗体或其抗原结合片段包含：SEQ ID NO：5所示的VH，SEQ ID NO：20所示的CH或其变体，和/或，SEQ ID NO：6所示的VL，SEQ ID NO：21所示的CL或其变体。
在一些实施方案中，Tb为抗B7H3抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗B7H3抗体或其抗原结合片段包含：SEQ ID NO：1所示的VH，SEQ ID NO：20所示的CH或其变体，和/或，SEQ ID NO：2所示的VL，SEQ ID NO：21所示的CL或其变体。
在一些优选地实施方案中，所述B7H3抗体或其抗原结合片段包含：SEQ ID NO：7所示的重链，和/或，SEQ ID NO：8所示的轻链。
在一些优选地实施方案中，所述B7H3抗体或其抗原结合片段包含：SEQ ID NO：3所示的重链，和/或，SEQ ID NO：4所示的轻链。
在一些实施方案中，所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物优选为下列化合物，
其中，B7H3-mAb为2E3-02抗体，q选自0.1-10.0之间的任意整数；优选地，q选自1、2、3、4、5、6、7和8。
在一些实施方案中，所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物优选为下列化合物，
其中，q选自0.1-10.0之间的任意整数；优选地，q选自1、2、3、4、5、6、7和8。
在一些实施方案中，所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物优选为下列化合物，
其中，B7H3-mAb为2E3-02抗体，q选自0.1-10.0之间的任意整数；优选地，q选自1、2、3、4、5、6、7和8。
在一些实施方案中，所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物优选为下列化合物，
其中，抗体为Trastuzumab，q选自0.1-10.0之间的任意整数；优选地，q选自1、2、3、4、5、6、7和8。
本公开还提供了一种通式II所示的药物连接体偶联物，
或所述药物连接体偶联物的立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，
其中，
当L1为时，1位和Lg相连，2位与L2相连；
Lg为和Tb反应时的离去基团；L2、L3、L4、Rc、R1和R2的定义如本公开中任一方案所述；
当L1为时，Lg-L1为L2、L3、L4、Rc、R1和R2的定义如本公开中任一方案所述。
在一些实施方案中，Lg选自卤素、砜基、三级胺盐基(Me3N+、Et3N+)、重氮盐基、-OMs、MeSO2-、CF3SO3-。
在一些实施方案中，Lg选自F、Cl、MeSO2-。
在一些实施方案中，Lg选自F、MeSO2-。
在一些实施方案中，通式II所示的药物连接体偶联物优选为下列任一化合物：
在一些实施方案中，所述的药物连接体偶联物优选为下列化合物：
本公开还提供了一种通式III所示的连接体：
Lg、L1、L2、L3和L4的定义如本公开中任一方案所述；Lg1为和艾日布林或其衍生物反应时的离去基团。
在一些实施方案中，Lg1优选为-OH、或卤素。
本公开提供了制备所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物、其立体异构体、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物的方法，其包括：将Tb上的巯基与所述的通式II所示的药物连接体偶联物进行偶联反应；
其中：Tb、q、Lg、L1、L2、L3、L4、R1和R2的定义如本公开中任一方案所述。
在一些实施方案中，所述的方法包括将Tb上的巯基与通式II所示的药物连接体偶联物在合适的溶剂和条件下进行偶联反应形成C-S键的步骤。
在一些实施方案中，所述的Tb上的巯基与所述的药物连接体偶联物的摩尔比可为1∶(1-20)，如1∶(2-20)、1∶(4-20)、1∶(6-20)、1∶(8-20)、1∶(10-20)、1∶(12-20)、1∶(14-20)、1∶(16-20)或1∶(18-20)。
在一些实施方案中，所述的偶联反应优选为在水和/或有机溶剂中进行。所述的有机溶剂优选为N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、腈类溶剂(例如乙腈)和醇类溶剂(例如甲醇、乙醇)中的一种或多种。
在一些实施方案中，所述的方法的后处理操作可为本领域偶联反应常规的后处理方法，优选为通过层析方法对偶联产物进行纯化。所述的层析方法通常为离子交换层析、疏水层析、反相层析或亲和层析中的一种或多种。
本公开提供了所述的式II所示药物连接体偶联物的制备方法，其选自下列任一方法：
方法一包括：将通式III所示的连接体与艾日布林或其衍生物进行如下所示的反应；
Lg、L1、L2、L3、L4、Lg1的定义如本公开中任一方案所述，其中艾日布林或其衍生物与含有与Lg1反应的基团；
方法二包括：将通式III’和通式III”所示的化合物进行如下所示的偶联反应；
Lg、L1、L2、L3、L4、R1和R2的定义如本公开中任一方案所述，L3’和L4’反应后得到L3-L4。
作为一优选为实施方案，本公开的式II所示药物连接体偶联物的制备方法包括下列步骤：将A片段活化后和C片段进行如下所示的偶联反应，得到偶联产物D，即式II所示的药物连接体偶联物；
抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群
本公开提供了一种抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群，其包含前所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物、其立体异构体、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，所述混合物中的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物具有两种或多种q值。
在某些实施例中，所述抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群中的药物与抗体的比例(DAR)选自1-10中的整数或小数；
在某些实施例中，所述抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群中的药物与抗体的比例(DAR)选自1-8中的整数或小数；
在某些实施例中，所述抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群中的药物与抗体的比例(DAR)选自2-8中的整数或小数；
在某些实施例中，所述抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群中的药物与抗体的比例(DAR)选自2±0.5，4±0.5，6±0.5和8±0.5中的整数或小数；
某些优选实施例中，所述抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群中的药物与抗体的比例(DAR)选自2、2.5、3、3.5、4、4.2、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.2、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.7、8.9和9；例如2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.2、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.7、8.9和9。
在一个实施例中，ADC抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群含有具有1至8的DAR的分布的ADC，例如，1.5、2、4、6、和8(即，1.5、2、4、6、和8的载药种类)。值得注意的是，可以产生降解产物，使得抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群中也可以包含1、3、5和7的DAR。此外，抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群中的ADC也可具有大于8的DAR。ADC抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群由链间二硫化物还原然后偶联产生。
在一个实施例中，ADC抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群包含如下两者：DAR为4或更低(即，载药种类为4或更低)的ADC以及DAR为6或更高(即，载药种类为6或更高)的ADC。
本公开提供了一种药物组合物，其包含如前所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物、其立体异构体、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，或者如前所述的式II所示的药物连接体偶联物、其立体异构体、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，或者如前所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群，以及任选的一种或多种药用辅料。所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物、其立体异构体、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，或者如前所述的式II所示的药物连接体偶联物、其立体异构体、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，或者如前所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群可为治疗有效量的。
本公开提供了一种药物组合物，当其包含如前所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物仅有一种q值时，所述艾日布林或其衍生物的偶联物与抗体的比例(DAR)和q值一致。在一些实施方案中，所述艾日布林或其衍生物的偶联物与抗体的比例(DAR)选自1-8。在一些优选地实施方案中，所述艾日布林或其衍生物的偶联物与抗体的比例(DAR)选自1，2，3，4，5，6，7，8。
本公开提供了如前所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物、其立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，或者如前所述的式II所示的药物连接体偶联物、其立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，或者如前所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群，或者前述的药物组合物在制备治疗和/或预防与细胞活动异常相关的疾病(例如癌症疾病)的药物中的用途。所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物、其立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，或者如前所述的式II所示的药物连接体偶联物、其立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，或者如前所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群，或者前述的药物组合物可为治疗有效量的。
本公开提供了一种预防和/或治疗与细胞活动异常相关的疾病(例如癌症疾病)的方法，其包括：给予有需要的个体预防和/或治疗有效量的如前所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物、其立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，或者如前所述的式II所示的药物连接体偶联物、其立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，或者如前所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群，或者前述的药物组合物。
在一些实施方案中，所述的与细胞活动异常相关的疾病可为血液和/或实体肿瘤，例如选自食管癌(例如食管腺癌和食管鳞状细胞癌)、脑瘤、肺癌(例如小细胞性肺癌和非小细胞性肺癌)、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、结直肠癌、肝癌、肾癌、尿路上皮癌、实体瘤、非霍奇金淋巴瘤、中枢神经系统肿瘤(例如神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、胶质瘤或肉瘤)、前列腺癌或甲状腺癌。
在一些实施方案中，所述的疾病优选为与B7H3相关的癌症疾病。
在一些实施方案中，所述的疾病优选为与HER2相关的癌症疾病。
在一些实施方案中，所述的疾病优选为与TROP2相关的癌症疾病。
在一些实施方案中，所述的疾病优选为与EGFR相关的癌症疾病。
在一些实施方案中，所述的疾病优选为实体肿瘤。
在本公开中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、分子遗传学、核酸化学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本公开，下面提供相关术语的定义和解释。
如本文所使用，术语“药学上可接受的盐”的例子是由形成药学上可以接受的阴离子的有机酸形成的有机酸加合盐，包括但不限于甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、苯甲酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、α-酮戊二酸盐、α-甘油磷酸盐、烷基磺酸盐或芳基磺酸盐；优选地，所述的烷基磺酸盐为甲基磺酸盐或乙基磺酸盐；所述的芳基磺酸盐为苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐。也可形成合适的无机盐，包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐和碳酸盐、硫酸盐或磷酸盐等。
药学上可接受的盐可使用本领域熟知的标准程序获得，例如，通过将足量的碱性化合物和提供药学上可以接受的阴离子的合适的酸反应。
本公开中，所述的药用辅料是指生产药品和调配处方时，使用的赋形剂和附加剂，是指除活性成分外，在安全性方面已进行了合理的评估，并且包含在药物制剂中的物质。药用辅料除了赋型、充当载体、提高稳定性外，还具有增溶、助溶、缓控释等重要功能，是可能会影响到药品的质量、安全性和有效性的重要成分。根据其来源可分为天然物、半合成物和全合成物。根据其作用与用途可分为：溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、湿润剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏着剂、抗氧剂、螯合剂、渗透促进剂、pH调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂等；根据其给药途径可分为 口服、注射、黏膜、经皮或局部给药、经鼻或口腔吸入给药和眼部给药等。同一药用辅料可用于不同给药途径的药物制剂，且有不同的作用和用途。
所述的药物组合物可根据给药途径制成各种适宜的剂型。例如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服溶液剂、口服混悬剂、口服乳剂、散剂、酊剂、糖浆剂、注射剂、栓剂、软膏剂、乳膏剂、糊剂、眼用制剂、丸剂、植入剂、气雾剂、粉雾剂、喷雾剂等。其中，所述的药物组合物或适宜的剂型可以含有0.01mg至1000mg的本公开的化合物或其药学上可接受的盐或偶联物，适宜含有0.1mg至800mg，优选为含有0.5-500mg，优选为含有0.5至350mg，特别优选为1-250mg。
所述的药物组合物可以注射剂形式用药，包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。其中，可使用的载体和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，灭菌的非挥发油也可用作溶剂或悬浮介质，如单甘油酯或二甘油酯。
本文使用的术语“治疗”一般是指获得需要的药理和/或生理效应。该效应根据完全或部分地预防疾病或其症状，可以是预防性的；和/或根据部分或完全稳定或治愈疾病和/或由于疾病产生的副作用，可以是治疗性的。本文使用的“治疗”涵盖了对患者疾病的任何治疗，包括：(a)预防易感染疾病或症状但还没诊断出患病的患者所发生的疾病或症状；(b)抑制疾病的症状，即阻止其发展；或(c)缓解疾病的症状，即，导致疾病或症状退化。
在本公开中，术语“个体”包括人或非人动物。示例性人个体包括患有疾病(例如本文所述的疾病)的人个体(称为患者)或正常个体。本公开中术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物(例如鸟类、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，例如非人灵长类、家畜和/或驯化动物(例如绵羊、犬、猫、奶牛、猪等)。
本公开中，术语“有效剂量”指被给药后会在一定程度上缓解所治疗病症的一种或多种症状的化合物的量。
本公开中，术语“抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物”是指艾日布林或其衍生物与靶向部分连接得到的物质。在本公开的部分实施方案中，艾日布林或其衍生物与靶向部分通过连接体相连。所述的连接体在特定环境中或特定作用下能够断裂，从而使生物活性分子与靶向部分分离。在本公开的部分实施方案中，所述的连接体包含可切割或不可切割的单元，例如肽或二硫键。在本公开的部分实施方案中，生物活性分子与靶向部分直接通过共价键相连，所述的共价键在特定环境或作用下能够断裂，从而使生物活性分子与靶向部分分离。
本公开中，术语“连接体”是指将生物活性分子(药物分子)与靶向部分连接起来的片段。
本公开中，术语“靶向部分”是指偶联物中能够与细胞表面的靶标(或靶标的部分)特异性结合的部分。通过靶向部分与靶标的相互作用，偶联物可以被递送至特定的细胞群。
本公开中，当偶联物中的靶向部分为抗体时，偶联物可被称为“药物-抗体偶联物”。
本公开中，抗体或其抗原结合片段包括衍生化的抗体或其抗原结合片段，例如具有巯基的抗体或其抗原结合片段，其中所述衍生化使得抗体具有与药物连接体偶联物反应的基团或能力。所述巯基-SH可以打开二硫键(例如，通过还原剂TCEP还原)衍生获得。
本公开中，术语“抗体”取其最广义的解释，包括完整的单克隆抗体、多克隆抗体以及由至少两个完整抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)，只要它们具有所需的生物学活性。在本公开中，“抗体”和“免疫球蛋白”可以互换使用。如本文所述的“抗体分子”或“抗体”指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。因此，术语抗体广义上不仅涵盖完整抗体分子，还包括所述抗体的片段以及所述抗体和抗体片段的变体(包括衍生物)。当“抗体分子”或“抗体”与抗原结合片段在同一语境下使用时，“抗体分子”或“抗体”指完整抗体分子或全长抗体。在本说明书中所述术语抗体分子例如包括但非限于单链Fv(scFv)，Fab片段，Fab’片段，F(ab’)2，二硫键连接的Fv(sdFv)，Fv，及完整抗体或全长抗体。术语“单链Fv”或“scFv”是指一种多肽，其包含与抗体VH结构域连接的抗体的VL结构域。例如免疫特异性结合B7H3的抗体可以与其它抗原发生交叉反应。优选地，免疫特异性结合B7H3的抗体与其它抗原不发生交叉反应。免疫特异性结合B7H3的抗体可以例如通过免疫测定或其它本领域技术人员已知的方法鉴别。“完整”抗体或“全长”抗体指包含两条重链(H)和两条轻链(L)的蛋白，所述重链和轻链通过二硫键相互连接，所述蛋白包含：(1)就重链而言，包含可变区(本文缩写为“VH”)和含有三个结构域CH1、CH2、CH3的重链恒定区；和(2)就轻链而言，包含轻链可变区(本文缩写为″VL″)和含有一个结构域CL的轻链恒定区。本公开的抗体包括但非限于单克隆，多特异性，人或嵌合抗体，单链抗体，Fab片段，F(ab′)片段，抗独特型(抗-Id)抗体(包括例如本公开抗体的抗-Id抗体)，和上述任何抗体的表位结合片段。本公开的免疫球蛋白分子可以是免疫球蛋白的任何类型(例如IgG，IgE，IgM，IgD，IgA和IgY)，类别(例如IgG1，IgG2，IgG3，IgG4，IgA1和IgA2)或亚类。优选地，本公开的抗体包含或由具有序列及其具体信息表所述任一氨基酸序列或其片段或变体的VH结构域，VH CDR(本文中多用HCDR表示)，VL结构域，或VL CDR(本文中多用LCDR表示)组成。
在本公开中，术语“单克隆抗体”指抗体来自一群基本均一的抗体，即构成该集群的各抗体完全相同，除了可能存在的少量天然突变。单克隆抗体具有针对抗原的一个决定簇(表位)的高特异性，而与其相对的多克隆抗体则包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体。除了特异性之外，单克隆抗体的优点还在于合成时可以不受其他抗体的污染。此处修饰语“单克隆”表示该抗体的特征在于来自一个基本均一的抗体群，而不应理解成需由特殊方法制得。
在本公开的部分实施方案中，单克隆抗体还特别包括嵌合抗体，即重链和/或轻链的一部分与某种、某类或某亚类抗体相同或同源，其余部分则与另一种、另一类或另一亚类抗体相同或同源，只要它们具有所需的生物学活性(参见例如US 4,816,567；和Morrison等人，1984，PNAS，81：6851-6855)。可用于本公开的嵌合抗体包括灵长类化(primatized)抗体，其包含来自非人灵长类(例如古猴、猩猩等)的可变区抗原结合序列和人恒定区序列。
术语“抗体片段”是指抗体的一部分，优选为是抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fd、Fv、dAb和互补决定区片段，二抗体(diabody)，线性抗体和单链抗体分子。
术语“双特异性抗体”亦称为“双功能抗体偶联物”，是指由第一抗体(片段)和第二抗体(片段)通过偶联臂所形成的偶联物，该偶联物保留了各自抗体的活性，故具有双功能和双特异性。
术语“多特异性抗体”包括例如三特异性抗体和四特异性抗体，前者是具有三种不同抗原结合特异性的抗体，而后者是具有四种不同抗原结合特异性的抗体。
术语“完整抗体”指包含抗原结合可变区和轻链恒定区(CL)、重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的抗体。恒定区可以是天然序列(例如人天然恒定区序列)或其氨基酸序列变体。完整抗体优选为是具有一种或多种效应功能的完整抗体。
术语“前抗(Probody)”是一种修饰的抗体，包括一种抗体或一种抗体片段，能专门与其靶点结合，能够与掩蔽基团耦合，其中掩蔽基团指对抗体或抗体片段与其靶点的结合能力的裂解常数比没有耦合掩蔽基团的抗体或抗体片段与其靶点的结合能力的裂解常数至少大100倍或1000倍、或者10000倍。
在本公开中，非人(例如鼠)抗体的“人源化”形式指包含最少量非人免疫球蛋白序列的嵌合抗体。大多数人源化抗体是人接受者免疫球蛋白的超变区残基被置换成具有所需特异性、亲和力和功能的非人(例如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类)超变区残基(供者抗体)。在一些实施方案中，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基也被置换成非人残基。而且，人源化抗体还可以包含受者抗体或供者抗体中没有的残基。这些修饰是为了进一步优化抗体的性能。人源化抗体一般包含至少一个，通常是两个可变区，其中所有或几乎所有超变环(hypervanable loops)与非人免疫球蛋白的相对应，而FR则完全或几乎完全是人免疫球蛋白的序列。人源化抗体还可以包含免疫球蛋白恒定区(Fc，通常是人免疫球蛋白Fc)的至少一部分。有关细节参见例如Jones等人，1986，Nature，321：522-525；Riechmann等人，1988，Nature，332：323-329；和Presta，1992，Curr Op Struct Bwl 2：593-596。
完整抗体可根据重链恒定区的氨基酸序列分为不同的“类”。主要的五类是IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中几类还可以分为不同的“亚类”(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。抗体不同类的重链恒定区分别称为α、β、ε、γ和μ。免疫球蛋白不同类的亚基结构和三维构型是本领域中公知的。
在本公开中，尽管大多数情况下抗体中的氨基酸取代是被L-氨基酸取代，但也不限于此。在一些实施方案中，抗体肽链中可以包括一个或多个D-氨基酸。包含D-氨基酸的肽在口腔、肠道或血浆中比仅包含L-氨基酸的肽更加稳定而不易降解。
本公开所用的单克隆抗体可以由许多方法生产。例如，用于本公开的单克隆抗体可以通过杂交瘤方法，使用许多物种(包括小鼠、仓鼠、大鼠和人的细胞)获得(参见例如Kohler等人，1975，Nature，256：495)，或者通过重组DNA技术制得(参见例如US 4,816,567)，或者从噬菌体抗体库中分离得到(参见例如Clackson等人，1991，Nature，352：624-628；和Marks等人，1991，Journal of Molecular Biology，222：581-597)。
在一些实施方案中，所述Tb为靶向部分，例如配体、蛋白质、多肽、非蛋白质试剂(例如糖、RNA或DNA)，抗体类似物等。
本公开中，术语“靶向部分”是指偶联物中能够与细胞表面的靶标(或靶标的部分)特异性结合的部分。通过靶向部分与靶标的相互作用，偶联物可以被递送至特定的细胞群。
本公开中，当偶联物中Tb为靶向部分时，偶联物也可被称为“抗体-艾日布林或其衍生物的偶联 物”。
在本公开的部分实施方案中，靶向部分为曲妥珠单抗或帕妥珠单抗(Pertuzumab)。曲妥珠单抗是抗Her 2的单克隆抗体，其氨基酸序列是本领域技术人员已知的，其示意性序列可参见，例如CN103319599，末位Lys是容易缺失的但不影响生物活性，参见Dick，L.W.等人，Biotechnol.Bioeng.，100：1132-1143。
在本公开的部分实施方案中，靶向部分抗Trop-2抗体为记载于美国专利第7,517,964号中的RS7(即本公开Sacituzumab)；以及记载于US2012/0237518中的hRS7(即本公开Sacituzumab)。可用于本公开的抗Trop-2抗体还可以通过CN103476941A中公开的载体设计、构建和构建展示抗体的抗体库的方法筛选获得，也可以索伦托医疗公司(Sorrento Therapeutics，Inc.)的文库进行筛选获得。
在本公开中，ErbB2和Her2/neu可互换使用，二者均表示天然序列的人Her2蛋白(Genebank登录号：X03363，参见例如Semba等人，1985，PNAS，82：6497-6501；和Yamamoto等人，1986，Nature，319：230-234)及其功能性衍生物，例如氨基酸序列变体。ErbB2表示编码人Her2的基因，neu表示编码大鼠p185neu的基因。在部分实施方案中，本公开的化合物或偶联物能够抑制或杀伤表达ErbB2受体的细胞，例如乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、胃癌细胞、子宫内膜癌细胞、唾液腺癌细胞、肺癌细胞、肾癌细胞、结肠癌细胞、甲状腺癌细胞、胰腺癌细胞、膀胱癌细胞或肝癌细胞。
在本公开中Trop-2或TROP2是指人滋养层细胞表面抗原-2(human trophoblast cell-surface antigens 2)，又称为TACSTD2、M1S1、GA733-1、EGP-1，其是由许多人类肿瘤(如乳腺癌、结直肠癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、宫颈癌)细胞表达的细胞表面受体。在部分实施方案中，本公开的化合物或偶联物能够抑制或杀伤表达TROP2受体的细胞，例如乳腺癌细胞、结直肠癌细胞、肺癌细胞、胰腺癌细胞、卵巢癌细胞、前列腺癌细胞或宫颈癌细胞。
在本公开的部分实施方案中，靶向部分为抗B7H3的单克隆抗体，或其抗原结合的片段。在一些实施方案中，所述的抗B7H3抗体包括所有现有技术中的抗B7H3抗体，例如，参见CN112521512，WO2021027674，WO2021021543，WO2021006619，CN111662384，CN111454357，WO2020151384，WO2020140094，WO2020103100，WO2020102779，WO2020063673，WO2020047257，WO2020041626，CN110684790，CN110642948，WO2019225787，WO2019226017，US20190338030，CN110305213，WO2018209346，WO2018177393，US9150656，WO2016106004，WO2016044383，WO2016033225，WO2015181267，US20120294796，WO2011109400，CN101104639，WO2004093894，WO2002010187，WO2001018021。
在本公开的部分实施方案中，抗B7H3的抗体选自：CN 103687945B中编号M30-H1-L4的抗体，CN109069633A中编号mAb-C-DUBA的抗体。在本公开的部分实施方案中，抗B7H3的抗体选自1D1或2E3。
本文中，除非以其他方式明确指出，在本文中通篇采用的描述方式“各...独立地选自”和“...各自独立地选自”可以互换，均应做广义理解，其既可以是指在不同基团中，相同或不同的符号之间所表达的具体选项之间互相不影响，也可以表示在相同的基团中，相同或不同的符号之间所表达的具体选项 之间互相不影响。
AA1所示氨基酸残基的结构中，若r为0，则本领域技术人员可以理解的是，AA1所示氨基酸残基的结构将变为
AA1所示氨基酸残基的结构中，若Ra与Rb和与它们共同相连的碳原子一起，形成4-10元杂环，所述的4-10元杂环任选地被一个或多个R0所取代，其中，术语“所述的4-10元杂环任选地被一个或多个R0所取代”的含义为，所述的4-10元杂环可以不被取代，也可以被一个或多个R0所取代，且所述的多个R0中，各R0的定义可以相同，也可以不同。其余类似的定义可以参照前述内容进行理解。
在本说明书的各部分，本公开化合物的取代基按照基团种类或范围公开。特别指出，本公开包括这些基团种类和范围的各个成员的每一个独立的次级组合。例如，术语“C1-6烷基”特别指独立公开的甲基、乙基、C3烷基、C4烷基、C5烷基和C6烷基。
在本文中，术语“C1-6烷基”表示直链或支链的含有1-6个碳原子的烷基，包括例如“C1-3烷基”或“C1-4烷基”，甲基，乙基等，具体实例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基。
在本文中，术语“C1-4烷基”表示直链或支链的含有1-4个碳原子的烷基，包括例如“C1-3烷基”，甲基，乙基等，具体实例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基。
在本文中，术语“C2-6烯基”是指含有至少一个双键且碳原子数为2-6的直链、支链或环状的烯基，包括例如“C2-4烯基”等。其实例包括但不限于：乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、1，3-丁二烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、1，3-戊二烯基、1，4-戊二烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1，4-己二烯基、环戊烯基、1，3-环戊二烯基、环己烯基、1，4-环己二烯基等。
在本文中，术语“C2-6炔基”是指含有至少一个三键且碳原子数为2-6的直链或支链的炔基，包括例如“C2-4炔基”等。其实例包括但不限于：乙炔基、丙炔基、2-丁炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-甲基-2-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、5-甲基-2-己炔基等。
在本文中，术语“卤素”包括氟、氯、溴、碘。
在本文中，术语“3-6元环烷基”或“C3-6环烷基”是指含有3-6个碳原子的饱和环状烷基，包括环丙烷基(即环丙基)、环丁烷基(即环丁基)、环戊烷基(即环戊基)、环己基。
在本文中，术语“3-7元碳环烷基”或“C3-7环烷基”是指含有3-7个碳原子的饱和环状烷基，包括环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己基、环庚基。
在本文中，术语“3-8元碳环”是指含有3-8个碳原子的饱和、不饱和或部分不饱和的碳环。具体实 例包括但不限于环丙烷(即环丙基)、环丁烷(即环丁基)、环戊烷(即环戊基)、环己烷(即环己基)。
在本文中，术语“C1-6烷氧基”是指通过氧原子连接至母体分子部分的如上文所定义的烷基。具体实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。
在本文中，术语“C1-4烷氧基”是指通过氧原子连接至母体分子部分的如上文所定义的烷基。具体实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。
在本文中，术语“4-10元杂环基”是指含有4-10个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的环状基团。术语“4-6元杂环基”是指含有4-6个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的环状基团。任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧代。“4-8元杂环基”包括例如“4-8元含氮杂环基”、“4-8元含氧杂环基”、“4-7元杂环基”、“4-7元含氧杂环基”、“4-7元杂环基”、“4-6元杂环基”、“5-7元杂环基”、“5-6元杂环基”、“5-6元含氮杂环基”，包括但不限于氧代环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、高哌嗪基等。
在本文中，术语“4-10元杂环”是指含有4-10个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的环。术语“5-6元杂环”是指含有5-6个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的环，包括但不限于吡咯烷、四氢呋喃、哌啶、哌嗪、四氢吡喃等环。
在本文中，术语“3-8元杂环”是指含有3-8个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的环。
在本文中，术语“芳基”是指具有芳香性的单环或多环烃基，例如6-10元芳基、5-8元芳基等。具体的实例包括但不限于苯基、萘基、蒽基、菲基等。所述的“6-10元芳基”是指含有6-10个环原子的芳基。所述的“C6-10芳基”是指含有6-10个碳原子的芳基。
在本文中，术语“杂芳基”是指具有芳香性的环状基团，其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子。任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧代。具体实例包括但不限于5-10元杂芳基、5-6元杂芳基、5-10元含氮杂芳基、6-10元含氧杂芳基、6-8元含氮杂芳基、5-8元含氧杂芳基等，例如呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、吡啶基、2-吡啶酮基、4-吡啶酮基、嘧啶基、1，4-二氧杂环己二烯基、2H-1，2-噁嗪基、4H-1，2-噁嗪基、6H-1，2-噁嗪基、4H-1，3-噁嗪基、6H-1，3-噁嗪基、4H-1，4-噁嗪基、哒嗪基、吡嗪基、1，2，3-三嗪基、1，3，5-三嗪基、1，2，4，5-四嗪基、氮杂环庚三烯基、1，3-二氮杂环庚三烯基、氮杂环辛四烯基等。
本文用波浪线“～～”表示的结构式中的键意在表示，该结构表示顺式或反式异构体，或任意比例的顺式和反式异构体的混合物。
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选为条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
本公开的抗体-艾日布林或其衍生物能够实现下述至少一种技术效果：
(1)高抗肿瘤活性，能够更有效地杀死肿瘤细胞，比现有技术中连接相同小分子药物的抗体-艾日布林或其衍生物有更好的体内或体外抗肿瘤效果；
(2)生物活性分子在循环中的稳定性高，能够减少非目的性生物活性分子在非靶细胞中的脱落，增加生物活性分子在胞内的有效释放，生物活性分子具有更高的瘤内和血液浓度比，因此具有更高的治疗指数；
(3)通过在连接子中增加碱性氮原子，从而提高了整个抗体-艾日布林或其衍生物分子在相对酸性肿瘤环境中的暴露量，因而具有更好的肿瘤组织靶向性，增加了生物活性分子在瘤内和血液浓度比，因此具有更高的治疗指数。
序列及其具体信息：
附图说明
图1A抗B7H3抗体1D1-01与人B7H3-4IgG-His蛋白ELISA结合检测
图1B抗B7H3抗体2E3-02与人B7H3-4IgG-His蛋白ELISA结合检测
图2A抗B7H3抗体1D1-01与猴B7H3-4IgG-His蛋白ELISA结合检测
图2B抗B7H3抗体2E3-02与猴B7H3-4IgG-His蛋白ELISA结合检测
图3A抗B7H3抗体1D1-01与MCF-7肿瘤细胞流式结合检测
图3B抗B7H3抗体2E3-02与MCF-7肿瘤细胞流式结合检测
图4A抗B7H3抗体1D1-01与A549肿瘤细胞流式结合检测
图4B抗B7H3抗体2E3-02与A549肿瘤细胞流式结合检测
图5抗B7H3抗体2E3-02与PC-3肿瘤细胞流式结合检测
图6A肿瘤细胞A549对候选抗体1D1-01内吞检测
图6B肿瘤细胞A549对候选抗体2E3-02内吞检测
图7A B7H3-ADC-01在SW480细胞的抑制活性检测
图7B B7H3-ADC-01在A375细胞的抑制活性检测
图7C B7H3-ADC-01在A549细胞的抑制活性检测
图7D B7H3-ADC-01在HT29细胞的抑制活性检测
图7E HER2-ADC-04在H358细胞的抑制活性检测
图8A B7H3-ADC-01在NCI-HT29移植瘤模型的抑制肿瘤生长检测
图8B NCI-HT29移植瘤模型中各小鼠体重的变化情况
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
本公开中的缩写具有以下含义：
以下的实施例中记载的化合物的结构通过核磁共振(1H NMR)或质谱(MS)来确定。
核磁共振(1H NMR)的测定仪器使用Bruker 400MHz核磁共振仪；测定溶剂为氘代甲醇(CD3OD)、氘代氯仿(CDCl3)或六氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)；内标物质为四甲基硅烷(TMS)。
实施例中使用的核磁共振(NMR)谱中的缩写示于以下。
s：单峰(singlet)、d：二重峰(doublet)、t：三重峰(triplet)、q：四重峰(quartet)、dd：双二重峰(double doublet)、qd：四二重峰(quartet doublet)、ddd：双双二重峰(double double doublet)、ddt：双双三重峰(double double triplet)、dddd：双双双二重峰(double double double doublet)、m：多重峰(multiplet)、br：宽峰(broad)、J：偶合常数、Hz：赫兹、DMSO-d6：氘化二甲基亚砜。δ值用ppm值表示。
质谱(MS)的测定仪器使用Agilent(ESI)质谱仪，型号为Agilent 6120B。
一、生物活性分子和合成“药物-连接体化合物”过程使用的中间体的合成
实施例1(A1)：
N-2-氨基乙酰基-艾日布林
步骤一：N-2-(叔丁氧基羰基氨基)乙酰基-艾日布林
向化合物(A1.1)(21mg)的二氯甲烷(1ml)中加入DIPEA(100ul)，HBTU(45mg)，混合物室温下搅拌反应20分钟，然后向反应液中加入艾日布林(A1.2，73mg)。反应液室温下搅拌反应10小时，然后用乙酸乙酯(50ml)稀释，水洗(20ml x 3)，饱和氯化钠水溶液洗(20ml)，无水硫酸钠干燥，减压去除有机溶剂，硅胶柱色谱(乙酸乙酯∶石油醚)分离获得化合物A1.3。ESI-MS(m/z)：887.5[M+H]+。
步骤二：N-2-氨基乙酰基-艾日布林
向N-2-(叔丁氧基羰基氨基)乙酰基-艾日布林(A1.3，80mg)加入二氯甲烷(2ml)，TFA(1ml)。混合物搅拌10分钟，然后减压去除低沸点组分，粗产品溶于乙酸乙酯(50ml)，加入饱和碳酸氢钠水溶液(15ml)并充分混合，有机相水洗(20ml x 3)，饱和氯化钠水溶液洗(20ml)，无水硫酸钠干燥，减压去除有机溶剂，获得化合物N-2-氨基乙酰基-艾日布林(A1)。ESI-MS(m/z)：787.5[M+H]+。
B、含偶联连接段分子片段中间体的合成
实施例2(B1)：N6-(叔丁氧基羰基)-N2-((6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-己-5-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(化合物B1)
将6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸(920mg)和N-羟基丁二酰亚胺(537mg)溶于二氯甲烷(50mL)中，然后加入二环己基碳二亚胺(963mg)。反应液室温搅拌1小时，然后减压除去二氯甲烷，残留物溶于N，N-二甲基甲酰胺(50mL)，然后加入N2-L-缬氨酸-N6-(Boc)-L-赖氨酸(1.5g)，反应液室温下搅拌反应16小时，将反应液倒入200mL水中，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至11，上述水溶液用乙酸乙酯萃取两次，弃掉有机相，将水相用柠檬酸调节pH到4-5，用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取三次，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋蒸，得到粗产品2.8g， 粗产品用快速色谱法分离纯化(DCM∶MeOH＝30∶1)得到目标化合物N6-(叔丁氧基羰基)-N2-((6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-己-5-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(1.0g)。
ESI-MS(m/z)：564.3[M+H]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.45(s，1H)，8.68(s，2H)，8.12(d，J＝7.3Hz，1H)，7.88(d，J＝8.9Hz，1H)，6.76(s，1H)，4.27-4.19(m，1H)，4.11(d，J＝4.9Hz，1H)，2.88(d，J＝7.9Hz，3H)，2.73(s，1H)，2.59(s，1H)，2.52(s，4H)，2.40-2.24(m，3H)，2.03-1.88(m，2H)，1.77(d，J＝3.2Hz，2H)，1.68(d，J＝7.0Hz，1H)，1.60-1.49(m，1H)，1.36(s，15H)，0.85(dd，J＝14.8，6.7Hz，7H)。
实施例3(B2)：N6-(叔丁氧基羰基)-N2-((6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-己-5-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(化合物B2)
向化合物B1(260mg)的四氢呋喃(3mL)和水(3mL)混合溶液中加入过氧单磺酸钾(1.414g)，在室温下搅拌反应1小时。将反应液过滤，滤液用C18柱(乙腈/0.05％甲酸的水溶液：5％-60％)纯化得到目标化合物N6-(叔丁氧基羰基)-N2-((6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-己-5-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(化合物B2)(120mg)。
LCMS(ESI)[M+H]+：596；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.48(s，1H)，9.13(s，2H)，8.14(d，J＝7.0Hz，1H)，7.90(d，J＝9.1Hz，1H)，6.77(s，1H)，4.24(t，J＝7.7Hz，1H)，4.12(br s，1H)，3.41(s，3H)，2.89(d，J＝6.0Hz，2H)，2.43-2.29(m，2H)，2.03-1.93(m，2H)，1.82(br s，2H)，1.63-1.60(m，4H)，1.37(s，12H)，0.88-0.83(m，6H)。
实施例4(B3)：N6-(叔丁氧基羰基)-N2-((6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酰胺基)己酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(化合物B3)
用实施例B1相同的方法和反应条件，用反应式所示的已知化合物作为原料，得到目标产物N6-(叔丁氧基羰基)-N2-((6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酰胺基)己酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(化合物B3)。ESI-MS(m/z)：611[M+H]+。
实施例5(B4)：N6-(叔丁氧基羰基)-N2-((6-(4-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(化合物B4)
步骤一：6-(4-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酸
室温下，将2-甲硫基-5-乙炔基嘧啶(1.5g)、6-叠氮基己酸甲酯(1.71g)溶于叔丁醇与水的混合溶剂(20mL/25mL)中，加入维生素C钠(5.7g)，溴化亚铜(2.9g)搅拌反应10h。反应加入乙酸乙酯(200ml)，水洗(100ml x 5)，干燥后除去有机溶剂，硅胶柱层析得到6-(4-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酸甲酯(2.8g)，ESI-MS(m/z)：321.9[M+H]+。上述产物溶于四氢呋喃(100ml)，加入氢氧化锂(1M，20ml)，混合物搅拌3小时，然后加入盐酸至反应液pH 2，然后加入乙酸乙酯(200ml)，水洗(100ml x 3)，干燥，除去有机溶剂得到目标产物6-(4-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酸。ESI-MS(m/z)：308.4[M+H]+。
步骤二：N6-(叔丁氧基羰基)-N2-((6-(4-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酰)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸
将化合物6-(4-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酸(370mg，)和N-羟基丁二酰亚胺(152mg)溶在二氯甲烷(5mL)中搅拌，再加入二环乙基碳二亚胺(273mg)，然后反应液在室温下搅拌1小时。向反应液中加入10mL水，用乙酸乙酯萃取(20mL x 2)，有机相用饱和食盐水洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。将此粗品溶解在N，N-二甲基甲酰胺(10mL)搅拌，加入化合物N2-L-缬氨酸-N6-(Boc)-L-赖氨酸，反应液在室温下反应16小时，向反应液中缓慢加入柠檬酸将PH调至5左右，加入水，再用乙酸乙酯萃取(3x 10mL)，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩除去乙酸乙酯得到目标产物N6-(叔丁氧基羰基)-N2-((6-(4-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(化合物B4，400mg)。
ESI-MS(m/z)：635.3[M+H]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.46(s，1H)，9.06(s，2H)，9.06(s，1H)，8.70(s，1H)，8.07(d，J＝7.4Hz，1H)，7.77(d，J＝9.0Hz，1H)，6.76(t，J＝5.6Hz，1H)，4.41(t，J＝7.0Hz，2H)，4.19(dd，J＝8.9，7.0Hz，1H)，4.14-4.05(m，1H)，2.92-2.85(m，2H)，2.56(s，3H)，2.24-2.10(m，2H)，1.97-1.81(m，3H)，1.71-1.64(m，1H)，1.61-1.50(m，3H)，1.36(s，9H)，1.28-1.22(m，6H)，0.88-0.76(m，6H)。
实施例6(B5)：N6-(叔丁氧基羰基)-N2-((39-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-5，34-二氧代-3，9，12，15，18，21，24，27，30-九氧杂-6，33-二氮杂三十九烷-38-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(B5)
步骤一：
将化合物B5.1(336mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入N-羟基丁二酰亚胺(98mg，0.85mmol)，二环己基碳二亚胺(175mg，0.85mmol)室温搅拌反应1小时，然后将化合物N2-L-缬氨酸-N6-(Boc)-L-赖氨酸(230mg)加入反应液，室温搅拌反应过夜。浓缩除去溶剂得到粗产品，粗产品用C18柱反相分离纯化(乙腈/0.01％FA的水溶液：5％-50％)得到无色油状目标化合物(B5.2，290mg)。
LCMS(ESI)[M+H]+＝882.3。
步骤二：
将化合物B5.2(300mg)溶于无水甲醇(5mL)中，加入Pd/C(10％，60mg)，氢气置换三次，室温搅拌反应过夜，抽滤，浓缩得到目标化合物B5.3(293mg)为无色油状物。
LCMS(ESI)[M+H]+：856.1。
步骤三：
将6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸(84mg)溶于N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中，然后依次加入N，N-二异丙基乙胺(61mg)，HATU(108mg)。反应液室温搅拌20分钟，然后加入化合物B5.3(196mg)，40℃搅拌反应3小时，粗产品用C18柱反相分离纯化(乙腈/0.01％FA的水溶液：5％-65％)得到目标化合物N6-(叔丁氧基羰基)-N2-((39-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-5，34-二氧代-3，9，12，15，18，21，24，27，30-九氧杂-6，33-二氮杂三十九烷-38-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(B5)(170mg)。
LCMS(ESI)[M+H]+：1074.0；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.68(s，2H)，8.23(t，J＝5.7Hz，1H)，8.13(d，J＝8.9Hz，1H)，7.99(t，J＝5.6Hz，1H)，7.43(d，J＝6.5Hz，1H)，6.69(s，1H)，4.09(dd，J＝8.8，6.5Hz，1H)，4.02(s，2H)，3.98(d，J＝2.9Hz，2H)，3.74-3.70(m，1H)，3.50(s，30H)，3.45(d，J＝6.2Hz，2H)，3.39(d，J＝5.8Hz，2H)，3.26(d，J＝6.1Hz，2H)，3.20(q，J＝5.9Hz，2H)，2.81(t，J＝6.6Hz，2H)，2.52(s，3H)，2.24(t，J＝7.4Hz，2H)，2.12-2.06(m，1H)，1.79-1.74(m，2H)，1.67-1.59(m，1H)，1.50(d，J＝5.3Hz，1H)，1.36(s，9H)，1.24(s，2H)，1.20-1.09(m，2H)，0.85(t，J＝6.3Hz，6H)。
实施例7(B6)：N6，N6-二甲基-N2-((6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸
步骤一：
向化合物B6.1(10.0g)加入氯化氢-二氧六环(100mL)溶液，在室温下反应2小时。反应液减压浓缩得到白色固体目标化合物B6.2(8.0g)。
LCMS(ESI)[M+H]+：380.1。1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.18(d，J＝7.4Hz，1H)，7.40-7.30(m，5H)，7.26(d，J＝8.8Hz，1H)，5.08-4.99(m，2H)，4.23-4.11(m，1H)，3.94-3.88(m，1H)，2.78-2.73(m，2H)，2.03-1.94(m，1H)，1.77-1.51(m，4H)，1.44-1.31(m，2H)，0.87(dd，J＝17.3，6.6Hz，6H)。
步骤二：
将化合物B6.2(3.0g)和醋酸钠(1.90g)溶在甲醇(100mL)溶液中，室温下反应10分钟，向反应液中加入多聚甲醛(2.8g)，室温下搅拌反应30分钟，再向反应液中加入氰基硼氢化钠(1.0g)，反应在室温下搅拌反应16小时。反应液过滤后滤液用C18柱反向分离纯化(乙腈比0.05％的甲酸水溶液：5％到55％)得到目标化合物B6.3(1.70g)。
LCMS(ESI)[M+H]+：408.1；1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.86(d，J＝7.3Hz，1H)，7.40-7.26(m，6H)，5.03(s，2H)，4.08-4.06(m，1H)，3.90-3.85(m，1H)，2.50-2.45(m，2H)，2.35(s，6H)，2.05-1.93(m，1H)，1.73-1.55(m，2H)，1.51-1.40(m，2H)，1.33-1.22(m，2H)，0.85(dd，J＝16.5，6.8Hz，6H)。
步骤三：
室温下，将化合物B6.3(1.6g)溶于甲醇(80mL)中，然后向反应液中加入Pd/C(10％，0.16g)，氢气下室温下搅拌反应12小时。将反应液过滤，滤液减压浓缩得到目标化合物B6.4(680mg)。LCMS(ESI)[M+H]+：274.2；
步骤四：
将6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸(944mg)溶于N，N-二甲基甲酰胺(30mL)中，然后依次加入N，N-二异丙基乙胺(1.3g)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU，1.8g)。反应液室温搅拌20分钟，然后加入化合物B6.4(1.1g)，40℃搅拌反应3小时，粗产品用C18柱反相分离纯化(乙腈/0.01％甲酸的水溶液：5％-65％)得到白色固体目标化合物N6，N6-二甲基-N2-((6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸B6(1.2g)。
LCMS(ESI)[M+H]+：492.1；1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.68(s，2H)，8.00(d，J＝7.6Hz，1H)，7.91 (d，J＝9.0Hz，1H)，4.20(t，1H)，4.08(dd，J＝12.7，7.7Hz，1H)，2.47-2.40(m，4H)，2.37-2.31(m，2H)，2.30(s，6H)，2.01-1.92(m，1H)，1.82-1.73(m，2H)，1.71-1.56(m，2H)，1.49-1.37(m，2H)，1.33-1.23(m，2H)，0.88-0.82(m，6H).
实施例8(B7)：N6，N6-二甲基-N2-((6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(B7)
将6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸(268mg)，化合物B6.4(328mg)，三乙胺(322mg)溶于N，N-二甲基甲酰胺(5mL)。然后再加入1-羟基苯并三唑(HOBT，162mg)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI，229mg)，反应液室温搅拌16小时，反应液直接经过C18柱反相(乙腈和0.05％的甲酸水溶液体系)提纯得到目标化合物N6，N6-二甲基-N2-((6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(B7，白色固体，327mg)。
LCMS(ESI)[M+H]+：524.4。1H NMR(400MHz，)δ9.13(s，2H)，7.95(t，J＝8.8Hz，2H)，4.21(dd，J＝8.8，6.9Hz，1H)，4.08-4.03(m，1H)，3.41(s，3H)，2.55(t，J＝7.0Hz，2H)，2.42-2.32(m，4H)，2.27(s，6H)，1.98(dd，J＝13.6，6.8Hz，1H)，1.86-1.77(m，2H)，1.74-1.55(m，2H)，1.47-1.37(m，2H)，1.31-1.23(m，2H)，0.85(dd，J＝12.8，6.8Hz，6H)。
实施例9(B8)：N2-(叔丁氧基羰基)-N6-((6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸
步骤一：
化合物B8.2(3g)溶于二氯甲烷(30ml)，加入DIPEA(4ml)，然后加入化合物B8.1(3.48g)，混合物室温下搅拌反应20小时。向反应液中加入乙酸乙酯(200ml)，混合物依次用盐酸(0.1M，30ml x 3)、水(30ml x 3)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后得到目标混合物B8.3(4.7g)。
步骤二：
室温下，将化合物B8.3(4.7g)溶于甲醇(80mL)中，然后向反应液中加入Pd/C(10％，0.6g)，在氢气下室温下搅拌反应12小时。将反应液过滤，滤液减压浓缩得到目标化合物B8.4(3.4g)。LCMS (ESI)[M+H]+：346.2。
步骤三：
将6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸(2.68g)，溶于N，N-二甲基甲酰胺(50mL)，然后再加入三乙胺(3ml)，HBTU(3.8g)，混合物室温下搅拌10分钟，然后加入乙酸乙酯(200ml)，混合物用饱和碳酸氢钠(20ml x 2)，盐酸(0.1M，50ml x 2)，水(50ml x 2)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物中间体，上述粗产物溶于DMF(30ml)，加入DIPEA(1.6ml)，然后加入B8.4(3.4g)，反应液室温搅拌3小时，然后加入乙酸乙酯(200ml)，用盐酸(0.1M，50mlx2)，水(50ml x 2)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物，经硅胶柱色谱分离提纯得到目标化合物N2-(叔丁氧基羰基)-N6-((6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(B8，白色固体，3.8g)。
LCMS(ESI)[M+H]+：596.4。
实施例10(B9)：N6，N6-二甲基-N2-((6-(4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸
步骤一：
将化合物6-(4-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酸(1.0g，3.3mmol)溶在四氢呋喃和水(40mL，3∶1)混合溶液中，加入过氧单磺酸钾(10.0g，16.3mmol)。室温搅拌反应3小时，LCMS检测反应完成。反应液过滤，滤饼用DMSO洗涤，合并滤液。经反相纯化(C18，乙腈：0.1％甲酸＝5％-55％)纯化，得到6-(4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酸(750mg，收率67.9％)白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝340.1；
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.48(s，2H)，8.95(s，1H)，4.49(t，J＝7.0Hz，2H)，3.45(s，3H)，2.22(t，J＝7.3Hz，2H)，1.95-1.84(m，2H)，1.61-1.50(m，2H)，1.36-1.26(m，2H)。
步骤二：
将化合物6-(4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酸(300mg，0.88mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(6mL)，加入HATU(337mg，0.88mmol)，DIPEA(286mg，2.21mmol)，室温搅拌反应30分钟，然后加入二肽B6.4(243mg，0.88mmol)，室温搅拌反应2小时。LCMS检测反应完成，反应液通过C18柱分离纯化(乙腈/0.01％FA的水溶液：5％-50％)得到目标化合物N6，N6-二甲基-N2-((6-(4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(300mg，收率57％)白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝595.5；
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.49(s，2H)，9.01(s，1H)，7.85(br s，1H)，7.84(d，J＝8.9Hz，1H)，4.48(t，J＝6.8Hz，2H)，4.17-4.15(m，1H)，4.02(br s，1H)，3.44(s，3H)，2.42(br s，2H)，2.30(s，6H)，2.18 -2.14(m，2H)，1.99-1.96(m，1H)，1.88(dd，J＝14.6，7.1Hz，2H)，1.67(br s，1H)，1.59-1.53(m，2H)，1.43(br s，2H)，1.28-1.26(m，5H)，0.83-0.89(m，6H)。
实施例11(B10)：N6，N6-二乙基-N2-((6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸
步骤一：
将化合物B6.2(5.0g)溶在二氯甲烷(100mL)中，向反应液中加入乙醛(3.2g)，室温下搅拌反应10分钟，再向反应液中分批次加入三乙酰氧基硼氢化钠(12.8g)，加毕后反应在室温下搅拌反应1小时。LCMS显示反应完全。向反应液中加入氯化铵饱和水溶液(20ml)搅拌一个小时，旋干，过滤后滤液用C18柱反向分离纯化(乙腈比0.05％的甲酸水溶液：5％到55％)得到目标化合物B10.1(4.57g)为白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝436.4；
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.70(d，J＝7.0Hz，1H)，7.41(d，J＝9.0Hz，1H)，7.38-7.26(m，5H)，5.08-4.99(m，2H)，4.00(dd，J＝12.6，6.5Hz，1H)，3.86(dd，J＝8.6，6.8Hz，1H)，2.74(dd，J＝14.0，6.9Hz，4H)，2.64-2.54(m，2H)，2.05-1.94(m，1H)，1.72-1.52(m，2H)，1.52-1.38(m，2H)，1.38-1.18(m，2H)，1.04(t，J＝7.1Hz，6H)，0.87-0.81(m，6H)。
步骤二：
室温下，将化合物B10.1(1.6g，3.68mmol)溶于甲醇(80mL)中，然后向反应液中加入Pd/C(0.16g)，氢气下室温下搅拌反应12小时。LCMS显示反应完成。将反应液过滤，滤液减压浓缩得到目标化合物B10.2(900mg，收率82％)为米白色固体。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.04(br s，1H)，4.02-3.99(m，1H)，3.10(d，J＝4.5Hz，1H)，2.65(q，J＝7.1Hz，4H)，2.55-2.51(m，2H)，2.06-1.93(m，1H)，1.73-1.54(m，2H)，1.47-1.38(m，2H)，1.30-1.21(m，2H)，1.01(t，J＝7.1Hz，6H)，0.89(d，J＝6.9Hz，3H)，0.79(d，J＝6.8Hz，3H)。
步骤三：
将化合物6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸(268mg，1mmol)溶于DMF(8mL)中，依次加入HATU(380mg，1mmol)和三乙胺(322mg，2.5mmol)，室温搅拌20分钟后加入化合物B10.2(301 mg，1mmol)，室温下继续搅拌30分钟。LCMS检测反应完成后，反应液直接经过C18柱反相(乙腈和0.05％的甲酸水溶液体系)提纯得到目标化合物N6，N6-二乙基-N2-((6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(B10，280mg，收率51％)为白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝552.3；
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.13(s，2H)，7.95(d，J＝8.9Hz，1H)，7.86(d，J＝7.2Hz，1H)，4.18(dd，J＝8.8，6.8Hz，1H)，4.02(dd，J＝12.8，7.2Hz，1H)，3.41(s，3H)，2.74-2.69(m，4H)，2.62-2.52(m，4H)，2.44-2.29(m，2H)，2.04-1.94(m，1H)，1.86-1.77(m，2H)，1.72-1.54(m，2H)，1.51-1.39(m，2H)，1.33-1.23(m，2H)，1.02(t，J＝7.2Hz，6H)，0.87-0.82(m，6H)。
实施例12(B11)：N6，N6-二乙基-N2-((6-(4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸
将化合物6-(4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酸(500mg，1.475mmol)，溶于N，N-二甲基甲酰胺(10mL)，然后加入HATU(560mg，1.475mmol)，N，N-二异丙基乙胺(476mg，3.688mmol)，搅拌30分钟，然后加入化合物B10.2(444mg，1.475mmol)，反应液室温搅拌1小时，LCMS检测反应完成后，反应液直接经过C18柱反相(乙腈和0.05％的甲酸水溶液体系)提纯得到目标化合物N6，N6-二乙基-N2-((6-(4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(B11，330mg，收率34％)为白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝623.4；
1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.49(s，2H)，9.04(s，1H)，7.84(d，J＝8.9Hz，1H)，7.80(d，J＝7.1Hz，1H)，4.47(t，J＝7.0Hz，2H)，4.14(dd，J＝8.8，6.6Hz，1H)，4.06-3.95(m，1H)，3.44(s，3H)，2.67-2.64(m，4H)，2.55(t，J＝7.4Hz，2H)，2.21-2.10(m，2H)，2.02-1.94(m，1H)，1.92-1.84(m，2H)，1.72-1.63(m，1H)，1.72-1.63(m，3H)，1.59-1.54(m，2H)，1.32-1.21(m，4H)，1.01(t，J＝7.1Hz，6H)，0.81(dd，J＝9.6，6.8Hz，6H)。
实施例13(B12)：N6，N6-二丙基-N2-((6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸
步骤一：
将化合物B6.2(5.0g)溶在二氯甲烷(100mL)中，向反应液中加入正丙醛(4.2g)，室温下搅 拌反应10分钟，再向反应液中分批次加入三乙酰氧基硼氢化钠(12.8g)，反应在室温下搅拌反应1小时。LCMS显示反应完全。向反应液中加入氯化铵饱和水溶液(20ml)搅拌一个小时，旋干，过滤后滤液用C18柱反向分离纯化(乙腈比0.05％的甲酸水溶液：5％到55％)得到目标化合物B12.1(4.57g，收率82.0％)为白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝464.0；
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.81(d，J＝7.3Hz，1H)，7.38-7.28(m，5H)，5.04(d，J＝1.7Hz，2H)，4.12-4.02(m，1H)，3.94-3.82(m，1H)，2.65-2.52(m，6H)，2.06-1.94(m，1H)，1.76-1.64(m，1H)，1.64-1.53(m，1H)，1.52-1.40(m，6H)，1.34-1.18(m，2H)，0.92-0.80(m，12H)。
步骤二：
室温下，将化合物B12.1(2.0g，4.32mmol)溶于甲醇(80mL)中，然后向反应液中加入Pd/C(0.16g)，氢气下室温下搅拌反应12小时。LCMS显示反应完成。将反应液过滤，滤液减压浓缩得到目标化合物B12.2(1.2g，收率85.5％)为白色固体。
步骤三：
将化合物6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸(100mg，0.373mmol)，溶于N，N-二甲基甲酰胺(1mL)，然后加入HATU(142mg，0.373mmol)，N，N-二异丙基乙胺(120mg，0.93mmol)，该体系搅拌30分钟，然后加入化合物B12.2(122mg，0.371mmol)，反应液室温搅拌1小时，LCMS检测反应完成后，反应液直接经过C18柱反相(乙腈和0.05％的甲酸水溶液体系)提纯得到目标化合物N6，N6-二丙基-N2-((6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(50mg，收率28％)为淡黄色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝580.0；
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.24(s，2H)，7.98-7.93(m，2H)，4.24-4.16(m，1H)，4.10(d，J＝5.2Hz，1H)，3.41(s，3H)，2.79-2.64(m，6H)，2.55(t，J＝7.1Hz，2H)，2.45-2.26(m，2H)，2.06-1.91(m，1H)，1.89-1.78(m，2H)，1.76-1.66(m，1H)，1.64-1.57(m，1H)，1.57-1.42(m，6H)，1.37-1.24(m，2H)，0.93-0.78(m，12H)。
实施例14(B13)：N6，N6-二丙基-N2-((6-(4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸
将化合物6-(4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酸(500mg，1.475mmol)，溶于N，N-二甲基甲酰胺(10mL)，然后加入HATU(560mg，1.475mmol)，N，N-二异丙基乙胺(476mg，3.688mmol)，该体系搅拌30分钟，然后加入化合物B12.2(485mg，1.475mmol)，反应液室温搅拌1小时，LCMS检测反应完成后，反应液直接经过C18柱反相(乙腈和0.05％的甲酸水溶液体系)提纯得到目标化合物N6，N6-二丙基-N2-((6-(4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酰基)-L-缬氨酸)-L-赖 氨酸(B13，320mg，收率33％)为白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝651.5；
1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.49(s，2H)，9.00(s，1H)，7.95(d，J＝7.2Hz，1H)，7.79(d，J＝8.9Hz，1H)，4.47(t，J＝6.9Hz，2H)，4.21-4.11(m，1H)，4.09-4.01(m，1H)，3.44(s，3H)，2.45-2.35(m，6H)，2.23-2.09(m，2H)，1.97-1.86(m，3H)，1.72-1.64(m，1H)，1.61-1.50(m，3H)，1.43-1.34(m，6H)，1.32-1.22(m，4H)，0.86-0.77(m，12H)。
实施例15(B14)：(S)-(6-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-5-(6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰胺基)-6-氧代己基)氨基甲酸叔丁酯
步骤一：
将化合物6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸(3.70g，15.7mmol)，二异丙基乙胺(11.0mL，62.8mmol)和HBTU(8.90g，23.6mmol)依次加入N，N-二甲基甲酰胺(30mL)中，反应在室温下反应30分钟。随后加入化合物Boc保护的赖氨酸(3.86g，15.7mmol)，反应在室温下反应2小时。LCMS检测反应完全。向反应液中加入柠檬酸水溶液(30mL)调至PH＝5，用二氯甲烷(50mL X 3)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，抽滤，减压浓缩得到目标化合物B14.1(7.0g)为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝465.1。
步骤二：
将化合物B14.1(7.00g，5.60mmol)，二异丙基乙胺(10.7mL，60.4mmol)和HBTU(8.60g，22.7mmol)依次加入N，N-二甲基甲酰胺(100mL)中，随后加入对氨基苄醇(3.71g，30.2mmol)，反应在室温下反应2小时。LCMS检测反应完全。向反应液中加入乙酸乙酯(300mL)，用饱和食盐水(100mL X 3)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩成固体，粗产品经柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇＝10/1)得到目标化合物(S)-(6-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-5-(6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰胺基)-6-氧代己基)氨基甲酸叔丁酯(B14，6.00g，收率：69.9％)为黄色油状物。
LCMS(ESI)[M+H]+＝570.1；
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.24(s，1H)，8.46(s，2H)，7.51-7.47(m，2H)，7.31-7.23(m，3H)，7.02-6.95(m，1H)，4.83(br s，1H)，4.63-4.60(m，2H)，3.19-2.96(m，4H)，2.57(s，3H)，2.52-2.48(m，2H)，2.47-2.41(m，2H)，1.99-1.92(m，2H)，1.87-1.77(m，2H)，1.76-1.63(m，2H)，1.43(s，9H)。
实施例16(B15)：(S)-(6-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-5-(6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酰胺基)-6-氧代己基)氨基甲酸叔丁酯
步骤一：
将化合物6-(4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酸(1.60g，5.21mmol)，二异丙基乙胺(2.68mL，20.8mmol)和HBTU(2.97g，7.82mmol)依次加入N，N-二甲基甲酰胺(30mL)，反应在室温下反应30分钟。随后加入Boc保护的赖氨酸(1.28g，5.21mmol)，反应在室温下反应2小时。LCMS检测反应完全。向反应液中加入柠檬酸水溶液(30mL)调至PH＝5，用二氯甲烷(50mL X 3)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，抽滤，减压浓缩得到目标化合物B15.1(3.0g，粗品)为黄色油状物。
LCMS(ESI)[M+H]+＝536.0；
步骤二：
将化合物B15.1(3.00g，5.60mmol)，二异丙基乙胺(2.89g，22.4mmol)和HBTU(3.19g，8.40mmol)依次加入N，N-二甲基甲酰胺(30mL)。随后加入对氨基苄醇(1.38g，11.2mmol)，反应在室温下反应2小时。LCMS检测反应完全。向反应液中加入乙酸乙酯(200mL)，用饱和食盐水(80mL X 3)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩成固体，粗产品经柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇＝10/1)得到目标化合物(S)-(6-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-5-(6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)己酰胺基)-6-氧代己基)氨基甲酸叔丁酯(B15，2.90g)为黄色油状物。
LCMS(ESI)[M+H]+＝641.1；
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.13(s，1H)，8.95(s，2H)，7.94(s，1H)，7.47(d，J＝8.4Hz，2H)，7.24(d，J＝8.4Hz，2H)，6.83-6.77(m，1H)，4.93-4.80(m，1H)，4.64-4.58(m，2H)，4.40-4.29(m，2H)，3.12-2.97(m，4H)，2.60(s，3H)，2.31-2.23(m，2H)，1.96-1.83(m，4H)，1.76-1.61(m，4H)，1.41(s，9H)，1.37-1.29(m，4H)。
实施例17(B16)：N6，N6-二丁基-N2-((6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸
步骤一：
将化合物B6.2(10.0g)溶在二氯甲烷(200mL)溶液中，向反应液中加入正丁醛(10.4g)，室温下搅拌反应10分钟，再向反应液中分批次加入三乙酰氧基硼氢化钠(25.6g)，反应在室温下搅拌反应1小时。LCMS显示反应完全。向反应液中加入氯化铵饱和水溶液搅拌一个小时，旋干，过滤后滤液用C18柱反向分离纯化(乙腈比0.05％的甲酸水溶液：5％到55％)得到目标化合物B16.1(4.9g)为白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝492.7；
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.35-7.30(m，5H)，5.14-5.08(m，2H)，4.33-4.30(m，1H)，4.14-4.12 (m，1H)，2.94-2.80(m，6H)，2.13-2.11(m，1H)，1.85-1.82(m，2H)，1.58-1.55(m，4H)，1.40-1.22(m，8H)，0.98-0.87(m，12H)。
步骤二：
室温下，将化合物B16.1(5.0g)溶于甲醇(100mL)溶液中，然后向反应液中加入Pd/C(10％，1g)，氢气下搅拌反应12小时。LCMS显示反应完成。将反应液过滤，滤液减压浓缩得到目标化合物B16.2(3.68g)为白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝358.3。
步骤三：
将化合物6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸(1.0g)溶于N，N-二甲基甲酰胺(15mL)，然后依次加入N，N-二异丙基乙胺(1.2g)，HATU(1.4g)，反应搅拌30分钟，然后加入化合物B16.2(1.3g)，反应液室温搅拌1小时，LCMS检测反应完成后，反应液，反应液直接经制备色谱(0.01％三氟乙酸水溶液，乙腈)纯化得到目标化合物N6，N6-二丁基-N2-((6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰基)-L-缬氨酸)-L-赖氨酸(B16，500mg)为黄色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝608.7；
1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.37(s，1H)，9.13(s，2H)，8.19(d，J＝7.3Hz，1H)，7.92(d，J＝8.8Hz，1H)，4.25-4.20(m，1H)，4.20-4.13(m，1H)，3.42(s，3H)，3.06-2.99(m，6H)，2.57-2.53(m，2H)，2.41-2.30(m，2H)，1.99-1.95(m，2H)，1.87-1.79(m，2H)，1.78-1.71(m，1H)，1.62-1.56(m，4H)，1.34-1.32(m，8H)，0.94-0.85(m，12H)。
实施例18(B17)：(S)-1-乙基-4-(3-甲基-2-(6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰胺基)丁酰胺基)哌啶-4-羧酸
步骤一：
将化合物B17.1(5.0g，20.49mmol)溶在DMF(100mL)中，向反应液中加入N-((苄氧基)羰基)-L-缬氨酸2，5-二氧吡咯烷-N-羟基酯(7.13g，20.49mmol)，100℃下搅拌反应48小时。LCMS显示反应完全。反应液用C18柱反向分离纯化(乙腈比0.05％的甲酸水溶液：5％到55％)得到目标化合物B17.2(1.3g，收率13.3％)为黄色固体。
LCMS(ESI)[M-boc]+＝378.2；
1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.38-7.33(m，5H)，7.32-7.27(m，1H)，7.20(d，J＝9.0Hz，1H)，5.14-5.02(m，2H)，3.97-3.87(m，1H)，3.70-3.59(m，2H)，3.08-2.95(m，2H)，2.04-1.97(m，1H)，1.95-1.87(m，2H)，1.76-1.69(m，2H)，1.40(s，9H)，0.91-0.84(m，6H)。
步骤二：
室温下，将化合物B17.2(1.3g，2.71mmol)溶于乙酸乙酯中(10mL)溶液中，然后向反应液中加入二氧六环-HCl(3N，10mL)，室温下搅拌反应1小时。LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩得到目标化合物B17.3(1.06g，收率94.4％)为黄色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝378.4。
步骤三：
将化合物B17.3(1.06g，2.81mmol)溶在二氯甲烷(10mL)中，向反应液中加入乙醛(0.75g，16.87mmol)，室温下搅拌反应10分钟，再向反应液中发批次加入三乙酰氧基硼氢化钠(3g，14.05mmol)，反应在室温下搅拌反应1小时。LCMS显示反应完全。向反应液中加入氯化铵饱和水溶液搅拌一个小时，减压蒸馏除去二氯甲烷，剩余水相经反相分离(乙腈比0.05％的甲酸水溶液：5％到55％)得到目标化合物B17.4(1.13g，收率99.23％)为白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝406.1；
1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.42-7.25(m，5H)，5.22-5.06(m，2H)，3.91(d，J＝7.0Hz，1H)，3.52-3.36(m，2H)，3.25-2.93(m，4H)，2.66-2.54(m，1H)，2.47-2.36(m，1H)，2.27-2.14(m，2H)，2.13-2.06(m，1H)，1.35-1.29(m，4H)，0.98-0.90(m，6H)。
步骤四：
室温下，将化合物B17.4(1.13g，2.78mmol)溶于甲醇(20mL)溶液中，然后向反应液中加入Pd/C(0.5g)，氢气下搅拌反应12小时。LCMS显示反应完成。将反应液过滤，滤液减压浓缩得到目标化合物B17.5(0.58g，收率76.18％)为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝272.4。
步骤五：
将化合物6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸(1g，3.73mmol)，溶于N，N-二甲基甲酰胺(5mL)，然后依次加入N，N-二异丙基乙胺(1.2g，9.32mmol)，HATU(1.42g，3.73mmol)，反应液搅拌30分钟，然后加入化合物B17.5(1.01g，3.73mmol)，反应液室温搅拌1小时，LCMS检测反应完成后，反应液直接经制备色谱(0.01％三氟乙酸水溶液，乙腈)纯化得到目标化合物(S)-1-乙基-4-(3-甲基-2-(6-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酰胺基)丁酰胺基)哌啶-4-羧酸(B17，500mg，收率28.7％)为黄色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝522.5；
1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.12(s，2H)，8.08(s，1H)，7.88(d，J＝9.0Hz，1H)，4.28-4.25(m，1H)，3.41(s，3H)，2.89-2.78(m，2H)，2.57-2.52(m，4H)，2.45-2.30(m，4H)，2.07-2.01(m，2H)，1.99-1.96(m，1H)，1.95-1.88(m，2H)，1.85-1.79(m，2H)，1.04(t，J＝7.1Hz，3H)，0.88-0.83(m，6H)。
实施例19(B18)：4-((S)-2-((S)-2-(2，2-二甲基-4-(4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三氮唑-1-基)丁酰胺)-3-甲基丁酰胺)-6-(二甲氨基)己酰胺)苄基(4-硝基苯基)碳酸酯
步骤一：
将化合物B18.1(500mg，4.39mmol)溶在超干二氯甲烷(5mL)中，在0℃下滴加三溴化硼(1.15g，4.6mmol)，滴加完毕升至室温，搅拌24小时，降温至0℃向反应液中滴加甲醇(5mL)淬灭反应，将反应液在室温下继续搅拌24小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)，然后用二氯甲烷萃取(30mL x 3)，合并有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，蒸除溶剂即为B18.2(830mg，收率92.5％)为棕色油状液体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.69(s，3H)，3.40-3.27(m，2H)，2.20-2.09(m，2H)，1.21(s，6H).
步骤二：
将化合物18.2(650mg，3.13mmol)溶在DMF(10mL)中，加入叠氮化钠(1.02g，15.63mmol)，升温至80℃，搅拌过夜，然后降至室温，向反应液中加入水(30mL)，然后用MTBE萃取(30mL x 3)，合并有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，旋干即为目标化合物B18.3(470mg，收率88.9％)为淡黄色油状液体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.69(s，3H)，3.31-3.23(m，2H)，1.89-1.81(m，2H)，1.22(s，6H).
步骤三：
将化合物18.3(365mg，2.13mmol)、5-乙炔基-2-(甲硫基)嘧啶(320mg，2.13mmol)溶在叔丁醇(5mL)和水(5mL)中，加入维生素C钠(84mg，0.43mmol)，无水硫酸铜(34mg，0.21mmol)在室温下搅拌1小。向反应液中加入水(25mL)，然后用乙酸乙酯萃取(30mL x 3)，合并有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，残留物经硅胶柱色谱(PE∶EA＝3∶1)纯化，得到目标化合物B18.4(600mg，收率88.2％)为白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝322.1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.95(s，2H)，7.85(s，1H)，4.53-4.39(m，2H)，3.69(s，3H)，2.61(s，3H)，2.29-2.17(m，2H)，1.31(s，6H).
步骤四：
将化合物18.4(500mg，1.60mmol)溶在四氢呋喃(5mL)和水(5mL)中，加入氢氧化锂(112mg，4.70mmol)，在室温下搅拌5小时。向反应液中加入1N的盐酸调pH＝3～4，会有大量的白色固体析出，过滤，滤饼即为目标化合物B18.5(450mg，收率93.5％)为白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝308.0
1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.43(s，1H)，9.06(s，2H)，8.76(s，1H)，4.55-4.31(m，2H)，2.56(s，3H)，2.15-2.04(m，2H)，1.20(s，6H).
步骤五：
将化合物B18.5(1.5g，4.90mmol)溶在四氢呋喃(10mL)和水(10mL)中，加入Oxane(15.0g，24.5mmol)，在室温下搅拌过夜。将反应液倒入水(200mL)中，过滤，滤饼即为目标化合物B18.6(1.6g，收率93.5％)为白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝340.1
1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.48(s，2H)，8.98(s，1H)，4.54-4.48(m，2H)，3.44(s，3H)，2.16-2.09(m，2H)，1.21(s，6H).
步骤六：
将化合物B18.6(1.9g，5.32mmol)溶于DMF(40mL)中，再加入HATU(2.13g，5.32mmol)和DIEA(1.7g，13.3mmol)，反应液于室温下搅拌30分钟，将N2-(L-缬氨酸)-N6，N6-二甲氨基-L-赖氨酸(1.45g，5.32mmol)，加入到反应液中，继续搅拌1小时。将反应液直接经反相色谱(H2O∶ACN＝5％-100％)纯化，得到目标化合物B18.7(1.5g，收率44.5％)为白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝595.5
1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.51(s，2H)，9.05(s，1H)，7.89(d，J＝7.1Hz，1H)，7.48(d，J＝8.6Hz，1H)，4.45-4.35(m，2H)，4.13(t，1H)，4.07-4.09(m，1H)，3.44(s，3H)，2.34(t，J＝7.3Hz，2H)，2.23(s，6H)，2.19-2.06(m，4H)，1.73-1.57(m，2H)，1.45-1.36(m，2H)，1.31-1.27(m，1H)，1.22(d，J＝9.6Hz，6H)，0.91-0.86(m，6H).
步骤七：
将化合物18.7(360mg，0.61mmol)，4-氨基苯乙醇(75mg，0.61mmol)溶于DMF(5mL)中，加入HATU(230mg，0.61mmol)和DIEA(195mg，1.52mmol)，反应液于室温下搅拌1小时。将反应液直接经反相色谱(H2O∶ACN＝5％-100％)纯化，得到目标化合物B18.8(255mg，收率60.1％)为白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝700.4
1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.93(d，J＝87.4Hz，1H)，9.47(s，1H)，9.39(s，1H)，8.89(d，J＝57.3Hz，1H)，8.54-8.16(m，1H)，7.68(d，J＝7.8Hz，0.5H)，7.56-7.48(m，2H)，7.47(d，J＝8.3Hz，0.5H)，7.19(d，J＝8.4Hz，1H)，7.13(d，J＝8.5Hz，1H)，5.10-5.04(m，1H)，4.44-4.36(m，4H)，4.214.09(m，1H)，3.45(s，3H)，2.75-2.65(m，2H)，2.23-2.04(m，4H)，1.83-1.63(m，2H)，1.59-1.51(m，2H)，1.42-1.35(m，1H)，1.35-1.16(m，12H)，0.94-0.87(m，6H).
步骤八：
将化合物18.8(250mg，0.36mmol)，4-硝基苯基氯甲酸酯(288mg，1.43mmol)溶在DCM(10mL)中，加入TEA(72mg，0.72mmol)，在室温下搅拌3小时。将反应液浓缩，残留物经反相色谱(H2O∶ACN＝5％-100％)纯化，得到B18(120mg，收率38.9％)为黄色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝865.2；
1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.04(d，J＝73.3Hz，1H)，9.46(s，1H)，9.36(s，1H)，8.86(d，J＝56.6Hz，1H)，8.31(d，J＝9.1Hz，2H)，8.08(d，J＝9.2Hz，1H)，7.64(d，J＝8.0Hz，1H)，7.59-7.55(m，3H)，7.42(d，J＝8.3Hz，1H)，7.37(d，J＝8.5Hz，1H)，7.27(d，J＝8.5Hz，1H)，6.83(d，J＝9.1Hz，1H)，5.19(d，J＝14.8Hz，2H)，4.45-4.38(m，2H)，4.37-4.28(m，1H)，4.21-4.14(m，1H)，3.44(s，3H)，2.18-2.12(m，3H)，2.10-2.06(m，8H)，1.81-1.63(m，2H)，1.44-1.32(m，4H)，1.23(d，J＝7.4Hz，7H)，0.94-0.88(m，6H).
实施例20(B19)：4-((S)-2-((S)-2-(2，2-二甲基-4-(4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三氮唑-1-基)丁酰胺)-3-甲基丁酰胺)-5-脲基戊酰胺)苄基(4-硝基苯基)碳酸酯
步骤一：
将化合物19.1(447mg，1.39mmol)和18.6(500mg，1.39mmol)溶于DMF(5mL)中，加入HATU(500mg，1.39mmol)和DIEA(425mg，3.30mmol)，反应液于室温下搅拌1小时。将反应液直接经反相色谱(H2O∶ACN＝5％-100％)纯化，得到目标化合物B19.2(900mg，收率97.0％)为白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝701.5
1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.01(s，1H)，9.46(s，2H)，8.96(s，1H)，8.15(d，J＝7.5Hz，1H)，7.53-7.50(m，2H)，7.47(d，J＝8.6Hz，1H)，7.18(d，J＝8.5Hz，2H)，6.05(t，J＝5.7Hz，1H)，5.43(s，2H)，5.08(t，J＝5.7Hz，1H)，4.45-4.38(m，5H)，4.18(t，J＝8.2Hz，1H)，3.63-3.58(m，1H)，3.44(s，3H)，3.07-2.94(m，2H)，2.23-2.01(m，4H)，1.80-1.71(m，2H)，1.24(d，J＝9.5Hz，6H)，0.92-0.87(m，6H).
步骤二：
将化合物B19.2(400mg，0.57mmol)，4-硝基苯基氯甲酸酯(574mg，2.86mmol)溶在DCM(10mL)中，加入TEA(173mg，1.71mmol)，在室温下搅拌3小时。反应液浓缩，残留物经反相色谱(H2O∶ACN＝5％-100％)纯化，得到目标化合物B19(150mg，收率30.4％)为黄色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝866.5
1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.18(s，1H)，9.47(s，2H)，8.95(s，1H)，8.32(d，J＝9.2Hz，1H)，8.18(d，J＝7.2Hz，1H)，7.93(d，J＝8.8Hz，1H)，7.63-7.56(m，3H)，7.55-7.47(m，1H)，7.45(d，J＝8.6Hz，1H)，7.37(d，J＝8.6Hz，1H)，7.19(d，J＝8.7Hz，1H)，6.04(t，J＝4.4Hz，1H)，5.43(s，2H)，5.21(s，1H)，4.48-4.37(m，4H)，4.22-4.15(m，1H)，3.44(s，3H)，3.05-2.96(m，2H)，2.20-2.09(m，3H)，2.04-1.98(m，2H)，1.51-1.43(m，2H)，1.25(d，6H)，0.92-0.87(m，6H).
二、药物-连接体化合物合成
实施例21(2.1)：4-((S)-2-((S)-2-(2，2-二甲基-4-(4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三氮唑-1-基)丁酰胺)-3-甲基丁酰胺)-5-脲基戊酰胺)苄基(艾日布林基)氨基甲酸酯(DL-001)
将化合物B18(36mg，0.041mmol)，化合物Eribulin(20mg，0.027mmol)，溶于DMF(2mL)。然后再加DIEA(7mg，0.054mmol)加完后反应液室温搅拌1小时。粗产品经制备色谱(0.01％FA in water，MeCN)纯化，得到目标化合物DL001(21.8mg，收率52.6％)为白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝1455.6；
1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.01(d，J＝69.6Hz，1H)，9.46(s，1H)，9.39(s，1H)，8.88(d，J＝47.0Hz，1H)，8.50(d，J＝7.3Hz，0.5H)，8.37(s，2H)，8.16(d，J＝6.7Hz，0.5H)，7.67-7.46(m，3H)，7.23(d，J＝8.5Hz，1H)，7.17(d，J＝8.4Hz，1H)，7.07(t，J＝5.4Hz，1H)，5.05(s，1H)，4.99(s，1H)，4.90(d，J＝3.6Hz，1H)，4.87(s，1H)，4.83(s，1H)，4.75(s，1H)，4.63(s，1H)，4.55(t，J＝4.0Hz，1H)，4.43-4.33(m，3H)，4.26(d，J＝10.3Hz，1H)，4.21-4.14(m，2H)，4.11(d，J＝10.6Hz，4H)，4.01(d，J＝9.8Hz，1H)，3.84-3.73(m，4H)，3.72-3.65(m，3H)，3.44(s，3H)，3.27-3.22(m，5H)，2.96(t，J＝5.6Hz，2H)，2.84(d，J＝9.5Hz，1H)，2.80-2.64(m，3H)，2.60-2.55(m，1H)，2.36-2.29(m，2H)，2.27-2.23(m，2H)，2.21-2.11(m，6H)，2.08(d，J＝4.8Hz，6H)，2.06-2.03(m，1H)，2.03-1.95(m，2H)，1.94-1.88(m，4H)，1.74-1.60(m，7H)，1.56-1.45(m，3H)，1.38-1.28(m，6H)，1.24-1.20(m，6H)，1.03(d，J＝6.3Hz，3H)，0.97(d，J＝12.0Hz，1H)，0.92-0.86(m，6H)。
实施例22(2.2)：4-((S)-2-((S)-2-(2，2-二甲基-4-(4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)-1H-1，2，3-三氮唑-1-基)丁酰胺)-3-甲基丁酰胺)-5-脲基戊酰胺)苄基(艾日布林基)氨基甲酸酯(DL-002)
将化合物B19(48mg，0.055mmol)，化合物Eribulin(20mg，0.027mmol)，溶于DMF(2mL)，然后再加DIEA(8.7mg，0.068mmol)加完后反应液室温搅拌1小时。粗产品经制备色谱(0.01％FA in water，MeCN)纯化，得到目标化合物DL-002(13.34mg，收率33.6％)为白色固体。
LCMS(ESI)[M+H]+＝1456.6；
1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.07(s，1H)，9.46(s，2H)，8.94(s，1H)，8.37(s，1H)，8.14(d，J＝7.2Hz，1H)，7.55(d，J＝8.3Hz，2H)，7.43(d，J＝8.5Hz，1H)，7.24(d，J＝8.4Hz，2H)，7.07(t，J＝5.0Hz，1H)，6.00(t，J＝5.3Hz，1H)，5.42(s，2H)，5.05(s，1H)，5.00(s，1H)，4.95-4.87(m，2H)，4.84(s，1H)，4.76(s，1H)，4.64(s，1H)，4.58-4.54(m，1H)，4.47-4.38(m，3H)，4.26(d，J＝10.4Hz，1H)，4.21-4.14(m，2H)，4.11(s，3H)，4.05-3.98(m，1H)，3.84-3.73(m，2H)，3.72-3.65(m，1H)，3.57-3.46(m，4H)，3.44(s，3H)，3.25(s，4H)，3.06-2.91(m，4H)，2.84(d，J＝9.6Hz，1H)，2.81-2.67(m，2H)，2.61-2.54(m，1H)，2.38-2.04(m，10H)，2.02-1.87(m，6H)，1.75-1.61(m，6H)，1.56-1.43(m，4H)，1.39-1.27(m，4H)，1.23(d，J＝7.1Hz，6H)，1.18(d，J＝14.7Hz，1H)，1.08-1.01(m，3H)，0.98(d，J＝12.1Hz，1H)，0.93-0.86(m，6H)。
三.抗体的制备和鉴定
实施例23(3.1.1)B7H3抗原和抗B7H3抗体制备
选取人2Ig B7H3的29-245位氨基酸(NCBI蛋白编号NP_001316557.1)的核酸序列，其中C端添加检测6×His标签，命名为人B7H3-2IgG-his；选取人4Ig B7H3的27-461位氨基酸(Uniprot蛋白编号Q5ZPR3-1)的核酸序列，其中C端添加纯化6×His标签，命名为人B7H3-4IgG-his；选取猴B7H3 4Ig的27-465位氨基酸(Uniprot蛋白编号F7G5V3)的核酸序列，其中C端添加纯化6x His标签，命名为猴B7H3-4IgG-his；B7H3-C1参考CN 103687945B中编号M30-H1-L4的抗体；B7H3-C2参考CN109069633A中编号mAb-C-DUBA的抗体。
分别合成上述三种B7H3抗原的基因，以及密码子优化合成B7H3-C1和B7H3-C2抗体的基因(上海生工生物技术有限公司)，构建到PTT5表达载体上，并大量抽提质粒。将抽提制备好的表达载体分别于HEK293F中瞬转表达7天，表达上清经ProteinA化制备获得抗原蛋白和B7H3-C1抗体和B7H3-C2抗体。
将1D1和2E3的VH氨基酸序列SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：5分别加上IgG1的恒定区氨基酸序列(SEQ ID NO：20)通过密码子优化及基因合成(上海生工生物技术有限公司)，然后构建到PTT5载体上，分别命名为PTT5-01-CH和PPT5-02-CH；将1D1和2E3的VL氨基酸序列SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：6分别加上Kappa恒定区序列(SEQ ID NO：21)通过密码子优化及基因合成(上海生工生物技术有限公司)，然后构建到PTT5载体上，分别命名为PTT5-01-CL和PTT5-01-CL；通过PEI max试剂将抗体B7H3抗体表达质粒PTT5-01-CH/PTT5-01-CL、PTT5-02-CH/PTT5-02-CL共转染HEK293F细胞进行表达，37℃ 5％CO2摇床表达7天，收集上清液，通过ProA磁珠进行纯化，获得抗B7H3抗体分别命名为1D1-01(其重链序列为SEQ ID NO：3，轻链序列为SEQ ID NO：4)、2E3-02(其重链序列为SEQ ID NO：7，轻链序列为SEQ ID NO：8)。
实施例24(3.1.2)抗B7H3抗体蛋白亲和力检测
通过ELISA实验方法检测B7H3全人源抗体与人B7H3-4IgG-his和猴B7H3-4IgG-his蛋白的亲和力。具体实验操作：将人B7H3-4IgG-his或猴B7H3-4IgG-his蛋白用PH值为9.6的碳酸盐缓冲液稀释至终浓度为1μg/mL按100μL/孔分别加入96孔酶标孔中，4℃包被过夜；弃包被液，PBST洗涤1次，每孔加入100μL PBS(含2％BSA)，37℃封闭1小时；然后每孔加入100μL PBS(含2％BSA)稀释好的B7H3全人源抗体(10μg起始，3倍稀释，2复孔)，37℃，孵育2h；PBST洗涤3次，加入辣根过氧化物酶标记的抗人Fc抗体(用PBS按1∶10000稀释)，100μL/孔，37℃作用1小时；PBST洗板5次。加入TMB显色液显色，100μL/孔，37℃，7min，加入终止液终止反应，50μL/孔，于450nm下测吸光度。根据原始数据计算EC50值。
结果见图1A，1B，2A和2B，详细结果如表1-1和1-2所示，1D1-01、2E3-02与人B7H3-4IgG均具有较高亲和力，分别是43.56pM和17.54pM，其中2E3-02强于B7H3-C1的亲和力51.85pM；1D1-01、2E3-02与猴B7H3-4IgG较高结合能力，分别是35.82pM和27.72pM。
表1-1. 1D1-01抗体蛋白亲和力检测结果
表1-2. 2E3-02抗体蛋白亲和力检测结果
实施例25(3.1.4)抗B7H3抗体细胞亲和力检测
B7H3蛋白在多种实体瘤细胞上高表达，通过FACS实验方法检测B7H3全人源抗体与肿瘤细胞亲和力。具体实验操作：将生长至对数期的MCF-7乳腺癌细胞、A549人非小细胞肺癌以及PC3人前列腺癌细胞通过胰酶消化，用含2％BSA的PBS缓冲液重悬到5*10^5细胞每毫升，加入100uL细胞悬液至96孔板中；用含有2％BSA的PBS缓冲液稀释B7H3-C1、B7H3-C2，1D1-01以及2E3-02，起始浓度40μg/mL，3倍稀释，然后加入100μL抗体悬液至96孔板中混匀；4℃孵育1小时，采用预冷的PBS清洗2次，每次300μL/孔，500g离心5分钟；加入1∶50荧光二抗APC anti-Human IgG或者PE anti-human IgG(购买自Biolegend)100μL/每孔，混匀；4℃孵育0.5小时，采用预冷的PBS清洗2次，每次300μL/孔，500g离心5分钟，用500μl PBS重选，采用贝克曼流式细胞仪进行检测平均荧光信号值。将平均荧光信号值计算EC50值，结果见图3A、3B、4A、4B及图5，具体数据见表2-1和2-2。
表2-1. 1D1-01抗体细胞亲和力检测结果
表2-2. 2E3-02抗体细胞亲和力检测结果
如表2-1和2-2所示，在B7H3高表达肿瘤细胞MCF-7上，1D1-01和2E3-02亲和力分别是0.524nM和0.398nM，均远高于B7H3-C1，同时最大荧光信号值比B7H3-C1分别高12％和23％，其中2E3-02最大荧光信号值比B7H3-C2高2.78倍。在B7H3中表达肿瘤细胞A549上，1D1-01和2E3-02亲和力分别是0.322nM和0.150nM，均远高于B7H3-C1，同时最大荧光信号值比B7H3-C1分别高36％和77％。在B7H3低表达肿瘤细胞PC-3上，2E3-02亲和力0.06nM远高于B7H3-C1亲和力0.618nM，也高于B7H3-C2亲和力0.167nM，同时最大荧光信号值分别是B7H3-C1和B7H3-C2的1.51和4.48倍。综合来看，抗B7H3抗体1D1-01和2E3-02比B7H3-C1、B7H3-C2均有更好的肿瘤细胞亲和力。
实施例26(3.1.5)抗B7H3抗体内吞活性检测
采用FACS方式检测A549人非小细胞肺癌细胞对抗B7H3抗体被细胞内吞的强弱。将生长至对数生长期的A549细胞采用胰酶进行消化，离心收集细胞，预冷PBS洗三次；用PBS(含1％BSA)重悬细胞，分别加入待检测抗B7H3抗体，浓度为10μg/mL，4℃孵育1小时；离心收集细胞，PBS洗三次，用DMEM+10％FBS重悬细胞，将重悬后细胞分成4份，分别在37℃孵育0、1、2、4小时；孵育相完成后，离心收集细胞，预冷PBS洗三次，用50μL 1％BSA(in PBS)重悬细胞，每孔加入1μL荧光二抗APC anti-Human IgG(Biolegend)，混匀，4℃孵育0.5小时；离心收集细胞，预冷PBS洗三次，用200μL PBS重悬细胞，上机检测。按照公式：内吞率(％)＝【1-(该时间点检测样品平均荧光值-该时间点阴性对照样品平均荧光值)/(0小时检测样品平均荧光值-0小时阴性对照样品平均荧光值)】*100。1D1-01和2E3-02结果分别如图6A和6B所示，抗B7H3抗体1D1-01和2E3-02在A549肿瘤细胞上具有较强的内吞活性，4小时能达到40％左右，与抗体B7H3-C1相当。
四、包含细胞生物活性分子和连接体的化合物与抗体的偶联
实施例27(4.1)：B7H3-ADC-01的制备
取0.3mL B7H3抗体(2E3-02，17mg/mL)，用0.13mL 20mM PB+150mM NaCl+20mM依地酸钠溶液(pH 7.6)稀释，后加入0.23mL 20mM PB+150mM NaCl溶液(pH 7.6)混匀，以1M K2HPO4溶液调pH至7.4，加入10mM TCEP(三(2-羧乙基)膦，0.017ml，0.17μmol)溶液混匀，室温放置30min。向上述溶液体系加入DL-001(1.0mg，20倍抗体物质摩尔数量)的二甲基亚砜(0.1mL)溶液， 混匀，室温静置2h，完毕后加入100mM半胱氨酸6.1μl终止反应。最后采用G-25凝胶柱将缓冲液置换为pH6.4的20mM PB缓冲溶液。得到DL-001与B7H3抗体的偶联产物B7H3-ADC-01(DAR8)。质谱法测定DAR值为8.0。
质谱法测定DAR值方法如下：
色谱条件：
色谱柱：PLRP-S，2.1*50mm，5μm；
流动相A：0.1％FA/H2O；流动相B：0.1％FA/ACN
柱温：30℃样品室温度：8℃流速：0.6ml/min进样量：2μl
样品处理：取ADC-01样品50μg，加入1M DTT2μl，加超纯水至50μl稀释至约1.0mg/ml浓度，混匀，室温还原30min。
LC/MS型号：Agilent 1290-6545XT Q-TOF。
质谱条件：Gas temp：320℃，Drying Gas：Nebulizer：35psi；Sheath Gas Temp：350℃；sheath Gas Flow：11l/min；m/z 500～3000。
表中，LC代表抗体轻链；HC代表抗体重链；DAR1代表包含轻链或重链偶联1个毒素分子的偶联物；DAR2代表包含轻链或重链偶联2个毒素分子的偶联物；DAR3代表包含轻链或重链偶联3个毒素分子的偶联物。下文中LC、HC、DAR1、DAR2、DAR3如上说明。
测定2E3-02抗体轻链偶联1个毒素分子(DAR1比例为100.0％)、重链偶联3个毒素分子(DAR3 的比例为100％)，由此计算B7H3-ADC-01的抗体-药物偶联比(DAR值)为8.0。由轻链偶联1个毒素分子DAR1位100％且重链偶联3个毒素分子(DAR3的比例为100％)可知，q为8。
实施例28(4.2)：B7H3-ADC-02的制备
采用与B7H3-ADC-01相同的操作，将DL-001替换为DL-002，得到DL-002与B7H3抗体2E3-02的偶联产物B7H3-ADC-02(DAR8)。质谱法测定DAR值为8.0。
实施例29(4.3)：B7H3-ADC-03的制备
采用与B7H3-ADC-01相同的操作，将DL-001的投料量由20倍抗体物质摩尔数量降为4.4倍抗体物质摩尔数量，得到DL-001与B7H3抗体2E3-02的偶联产物B7H3-ADC-03(DAR4.2)。采用实施例4.1相同的方法，测定DAR值为4.2。
测定2E3-02抗体轻链偶联0～1个毒素分子(LC和DAR1比例分别为76.0％和24.0％)、重链偶联0～3个毒素分子(HC、DAR1、DAR2、DAR3的比例分别为12.0％、21.0％、36.0％、31.0％)，由此计算B7H3-ADC-03的抗体-药物偶联比(DAR值)为4.2。由重轻链上偶联毒素分子的分布可知， q可为1，2，3，4，5，6，7或8。
实施例30(4.4)：Her2-ADC-04的制备
采用与B7H3-ADC-01相同的操作，将抗体替换为Trastuzumab，将DL-001替换为DL-002，得到DL-002与Trastuzumab的偶联产物Her2-ADC-04。采用实施例4.1相同的方法，测定DAR值为7.9。
测定Trastuzumab抗体轻链偶联0～1个毒素分子(LC和DAR1比例分别为3％和97％)、重链偶联0～4个毒素分子(HC、DAR1、DAR2、DAR3、DAR4的比例分别为0％、0％、6％、90％、4％)，由此计算Her2-ADC-04的抗体-药物偶联比(DAR值)为7.9。由轻重链上偶联毒素分子的分布可知，q可为2、3、4、5、6、7、8、9或10。
实施例31(4.5)：参照ADC-01的制备
参照文献(WO 2017151979)制备参照DL，结构如下所示。
采用与实施例4.4相同的操作，将DL-002替换为参照DL，得到参照ADC-01，如下所示。测定DAR值为7.4。
五、ADC对体外细胞活性的抑制活性检测
实施例32(5.1)：ADC对体外细胞活性的抑制活性检测
使用胰酶通过常规方法对HT29、NCI-H358(HT29和NCI-H358为B7H3阳性肿瘤细胞)、SW480、A375、A549和Calu-3(Calu-3为B7H3阴性肿瘤细胞)肿瘤细胞进行消化，收集管细胞数，用对应的检测培养基(含2％FBS)重悬，将2000-5000细胞/孔加至96孔板。2％FBS培养基稀释的ADC加入100uL至96孔板，浓度从150μg/ml起始，3倍稀释(12个浓度梯度)。37℃ 5％CO2培养7天，然后每孔加入CCK8试剂20μL，反应至2-6小时，酶标仪读数(检测波长为450nm)。检测结果如表3-1、表3-2和附图7A-E所示。
测试结果表明，本公开的ADC分子具有肿瘤细胞杀伤作用。同时对本公开的ADC分子在B7H3阴性细胞Calu-3上测试，结果显示杀伤效果弱(IC50＞107ng/ml)，说明体外在B7H3阳性与阴性肿瘤细胞间，本公开的ADC分子具有很好的选择靶向性杀伤。
表3-1.B7H3-ADC-01的细胞抑制活性测定
表3-2.Her2-ADC-04的细胞抑制活性测定
实施例33(5.2)：ADC对NCI-HT29移植瘤药效测试
1.实验材料
受试化合物：B7H3-ADC-01
对照化合物：B7H3单抗(2E3-02)
实验细胞：NCI-HT29细胞，购自ATCC；
实验动物：Balb/c nu裸小鼠，雌性，5-6周龄，购自维通利华实验动物有限公司。
2.实验方案
2.1.细胞处理
NCI-HT29细胞用含10％FBS的1640培养基培养于15cm直径培养皿，达80-90％左右融合度时用胰蛋白酶-EDTA消化，用PBS洗两次，然后离心重悬于预冷PBS中，细胞计数仪计数，PBS稀释使细胞浓度为5×107/ml。
2.2.肿瘤细胞移植
Balb/c nu小鼠实验室环境适应2-5天，于右肋部皮下接种NCI-HT29细胞，接种细胞量为5×106/只，接种体积为0.2ml(含50％Matrigel)，待肿瘤生长至250mm3左右时，进行实验。
2.3.动物给药与检测
入组的荷瘤裸鼠，按以下方案给药：
给药周期结束后，继续观察1-2周。最后一次瘤体积测量后，分离肿瘤，准确称取肿瘤重量并拍照记录。
2.4.肿瘤体积及体重测定：
于实验的1、4、8、11、15、18天测量肿瘤体积及体重，计算TGI％。
肿瘤体积(V)计算公式为：V＝1/2×L长×L短 2。
TGI计算公式为TGI(％)＝(1-T/C)×100％(T和C分别为治疗组和对照组在某一特定时间点的相对肿瘤体积)。
3.实验结果
表3-3.NCI-HT29移植瘤模型数据(肿瘤体积mm3)
测试结果表明，本申请的ADC具有极强的抑制肿瘤的效果。给药期间，各组动物无明显体重下降和明显的药物毒性。检测结果如表3-3和图8A-B所示。
实施例34(5.3)、ADC血浆稳定性测试
溶液配制：用PBS将待测试ADC原液稀释至浓度2mg/mL的工作溶液。
样品孵育：B7H3-ADC-01、B7H3-ADC-03、Her2-ADC-04、参照ADC-01、人血浆中均加入抑菌剂ProClin，ProClin终浓度为0.1％，无菌操作。将B7H3-ADC-01、B7H3-ADC-03、Her2-ADC-04、参照ADC-01分别以终浓度200ug/ml加入上述无菌血浆中，置于37℃细胞培养箱中孵育，震荡速度80 次/分钟。孵育0天、14天，取出ADC样品，每管加入100ul的ProteinA，吸附2h，洗脱，获得孵育后的ADC。对孵育后的ADC进行DAR值检测(检测及计算方法同实施例4.1)，判定样品的血浆稳定性。检测结果如表3-4所示。
表3-4 ADC血浆稳定性测试
测试结果表明，B7H3-ADC-01、B7H3-ADC-03和Her2-ADC-04在血浆孵育过程中DAR值基本保持(即几乎没有毒素linker从抗体上脱落)，而带有马来酰亚胺接头参照ADC-01在孵育14天后DAR降低非常显著。实验结果证明，与参照ADC-01相比，本发明的ADC均具有更好的血浆稳定性。
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式做出多种变更或修改。因此，本发明的保护范围由所附权利要求书限定。

Claims (17)

  1. 式I所示的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物，
    或所述偶联物的立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，
    其中，
    Tb为和靶点结合的抗体或其抗原结合片段，或靶向部分；
    q为药物Tb偶联比；
    R1、R2各自独立地选自氢、氘、C1-6烷基；或者，R1和R2与其相连的氮原子、氧原子一起形成5-6元杂环，所述5-6元杂环任选地被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、C3-6杂环基中的一个或多个取代基所取代；
    L1选自1位通过S原子与Tb相连，2位与L2相连；
    Rc选自氢、C1-6烷基；
    L2选自1位与L1相连，2位与L3相连；
    p选自0-10之间的任意整数；
    Y选自-CH2-、-OCH2CH2-；
    Z选自-CR3R4-，-NR5-；
    R3、R4各自独立地选自氢、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、C3-6杂环基；或者，R3和R4与其相连的碳原子一起形成3-6元碳环或3-6元杂环；
    R5选自氢、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-6环烷基、C3-6杂环基；
    L3选自化学键、氨基酸残基或由2-10个氨基酸残基组成的短肽；所述的氨基酸残基选自天然氨基酸残基、非天然氨基酸残基、或选自AA1所示氨基酸残基或其立体异构体；
    AA1所示氨基酸残基的结构如下所示，
    其中：
    Ra、Rb各自独立地选自氢和且Ra、Rb不同时为氢；
    或者，Ra与Rb和与它们共同相连的碳原子一起形成4-10元杂环，所述4-10元杂环任选地被一个或多个R0所取代；
    r、r1各自独立地选自0-20之间的任意整数；
    Rm1、Rn1各自独立地选自氢、C1-6烷基、C3-6环烷基；
    或者，Rm1与Rn1和与它们共同相连的氮原子一起形成4-10元杂环，所述4-10元杂环任选地被一个或多个R0’所取代；
    R0、R0’各自独立地选自C1-6烷基、C3-6环烷基、-NRm2Rn2和任选被C1-6烷基取代的4-10元杂环基；
    Rm2、Rn2各自独立地选自氢和C1-6烷基；
    L4不存在或存在，L4存在时，L4选自1位与L3相连，2位与艾日布林的氮原子相连；
    并且，当L1为1位通过S原子与Tb相连，2位与L2相连时：
    L3不为化学键，Val-Cit，Val-Lys，Gly-Gly-Phe-Gly或Ala-Ala-Asn；或者，
    L4存在且不为
  2. 如权利要求1所述的偶联物或所述偶联物的立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，其特征在于，满足下述条件中的一种或多种：
    (1)Tb为抗体或其抗原结合片段，其满足如下条件中的一个或多个：
    (i)所述抗体或其抗原结合片段包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、非人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、全人抗体、前抗、单克隆抗体、双特异性抗体或多特异性抗体；
    (ii)Tb为单克隆抗体或其抗原结合片段；
    (iii)Tb为具有内吞活性的抗体或其抗原结合片段；
    (iv)Tb为具有结合肿瘤组织中游离抗原和/或肿瘤细胞表面抗原活性的抗体或其抗原结合片段；
    (v)Tb选自结合如下靶点的抗体或其抗原结合片段：生长因子、整合素α5β6、整合素α4β7、0772P、5T4、ACTA2、ADGRE1、AGS-16、AIF1、AKR1C1、AKR1C2、ANGPTL4、ApoE、ASLG659、BAFF-R、BMPR1B、BNIP3、Brevican、C1QA、C1QB、CA6、pCAD、P-cadherin、CADM1、CCL5、CCR5、 CD11b、CD11c、CD19、CD20、CD21、CD22、CD30、CD33、CD37、CD40、CD45(PTPRC)、CD49D(ITGA4)、CD56、CD66e、CD70、CD72、CD74、CD79a、CD80、CD138、CD223、CDCP1、CDH11、Claudin18.2、COL6A3、COL7A1、CRIPTO、CSF1R、CTGF、CTSD、CTSS、CXCL10、CXCL11、CXCR5、DDIT4、DLL3、DLL4、DR5、E16、EFNA4、B7H3、EGFR、EGFRvIII、EGLN、EGLN3、EMR2、Endothelin receoptor、ENPP3、EpCAM、EphB2R、ETBR、FGF2、FGFR2、FcRH1、FcRH2、GEDA、GPNMB、GZMB、Her2、Her3、HLA-DOB、HMOX1、IFNG、IFI6、IGF-1R、IGFBP3、IL10RA1、IL20Rα、IL-6、IRTA2、KISS1R、KRT33A、LOX、LRRC15、LUM、LY6E、LY64、LY86、LYPD3、MCPT8、MDP、Mesothelin、c-Met、MFI2、MMP10、MMP14、MMP16、MPF、MSG783、MS4A7、MUC1、MUC16、NaPi2b、NaPi3b、NCA、Nectin4、NOG、P2X5、PD-L1、PDK1、PDGFRA、PFKFB3、PGF、PGK1、PIK3AP1、PIK3CD、PLOD2、PSCA、PSCA hlg、PSMA、RNF43、ROR1、Sema5b、SERPINEl、SLC39A6、SLITRK6、SLTRK6、STAT1、STC2、STEAP1、STEAP2、TCF4、TENB2、TGF、TGFBR1、TGFB2、Tissue factor、TNFRSF21、TNFSF9、Trop-2、TrpM4、Tyro7、UPK1B、VEGFA和WNT5A；
    (vi)Tb为抗B7H3抗体或其抗原结合片段、抗Trop-2抗体或其抗原结合片段、抗Her2抗体或其抗原结合片段、抗Her3抗体或其抗原结合片段，或抗EGFR抗体或其抗原结合片段；
    (2)所述q选自0.1-16.0之间的任意数值，优选地，q选自1-10之间的任意数值；更优选地，q选自1、2、3、4、5、6、7和8；
    (3)所述R1、R2为氢；或者，R1和R2与其相连的氮原子、氧原子一起形成1位与L4或L3相连；
    (4)所述L1选自1位通过S原子与Tb相连，2位与L2相连；
    优选地，L1选自1位通过S原子与Tb相连，2位与L2相连；更优选地，L1为1位通过S原子与Tb相连，2位与L2相连；
    (5)所述Rc为氢；
    (6)所述p选自0、1、2、3、4、5、6、7、8；
    (7)所述Z为-CH2-、-C(CH3)2-或-NH-；
    (8)所述R3、R4各自独立地选自氢、甲基；
    (9)所述R5为H或甲基；
    (10)所述L3选自氨基酸残基Val、D-Val、Cit、Phe、Lys、Lys(Ac)、Leu、Gly、Ala、Asn、Asp、Arg、AA1或由2-10个选自Val、Cit、Phe、Lys、D-Val、Leu、Gly、Ala、Asn、Asp、AA1的氨基酸残基组成的短肽；
    优选地，L3选自Val、Cit、Phe、Lys、D-Val、Leu、Gly、Ala、Asn、AA1、Val-Cit、Cit-Val、Cit-Ala、Val-Ala、Lys-Val、Val-Lys(Ac)、Phe-Lys、Phe-Lys(Ac)、Ala-Ala、Val-AA1、Ala-AA1、Gly-AA1、AA1-Gly、Ala-Ala-Ala、Ala-Ala-Asn、Ala-Ala-Asp、Val-AA1-Gly、Ala-AA1-Gly、Gly-AA1-Gly、Lys-(Ala)2-Asn、Lys-(Ala)2-Asp、Gly-Phe-Gly、(Gly)2-Phe-Gly、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn、Gly-Gly-Phe、Val-Lys-Gly、Val-Lys-(Gly)2、Val-Lys、Lys-Ala-Asn、(Gly)2-Phe-AA1；
    更优选地，L3选自Val-AA1-Gly、Val-AA1、Val-Cit、(Gly)2-Phe-AA1；特别优选地，L3选自Val-AA1、Val-Cit；
    (11)所述Ra、Rb中，任一个为氢，另一个为
    或者，Ra与Rb和与它们共同相连的碳原子一起，形成被R0取代的5-6元杂环，优选地，Ra与Rb和与它们共同相连的碳原子一起，形成1号碳原子为与Ra和Rb共同相连的碳原子；
    (12)所述r、r1各自独立地选自0、1、2、3、4和5；优选地，r、r1各自独立地选自0和4；更优选地，r为0，r1为4；
    (13)所述Rm1、Rn1各自独立地选自C1-6烷基；或者，Rm1与Rn1和与它们共同相连的氮原子一起，形成任选被R0’取代的5-6元杂环；
    优选地，Rm1、Rn1各自独立地选自甲基、乙基、正丙基和正丁基；或者，Rm1与Rn1和与它们共同相连的氮原子一起，形成任选被R0’取代的哌啶环或哌嗪环；
    (14)所述R0、R0’各自独立地选自C1-6烷基、-NRm2Rn2和任选被C1-6烷基取代的5-6元杂环基；
    (15)所述Rm2、Rn2为甲基；
    (16)所述L2选自1位与L1相连，2位与L3相连。
  3. 如权利要求1或2所述的偶联物或所述偶联物的立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，其特征在于，满足下述条件中的一种或多种：
    (1)L2选自1位与L1相连，2位与L3相连；
    优选地，L2为1位与L1相连，2位与L3相连；
    (2)L3选自化学键、 1位与L2相连，2位与L4或艾日布林的氮原子相连；
    优选地，L3选自 1位与L2相连，2位与L4或艾日布林的氮原子相连；
    更优选地，L3选自 1位与L2相连，2位与L4或艾日布林的氮原子相连；
    特别优选地，L3选自1位与L2相连，2位与L4或艾日布林的氮原子相连；
    (3)AA1所示氨基酸残基选自
    优选地，AA1所示氨基酸残基选自
    更优选地，AA1所示氨基酸残基为
    (4)L4不存在或存在，L4存在时，L4选自1位与L3相连，2位与艾日布林的氮原子相连；
    优选地，L4为1位与L3相连，2位与艾日布林的氮原子相连。
  4. 如权利要求1-3中任一项所述的偶联物或所述偶联物的立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，其特征在于，连接体选自下式表示，
    其中，Y、Z、p、AA1的定义如权利要求1-3中任一项所述，1位通过S原子与Tb相连，2位与艾日布林的氮原子相连；
    优选地，连接体选自下式表示，
    其中，Y、Z、p、AA1的定义如权利要求1-3中任一项所述，1位通过S原子与Tb相连，2位与艾日布林的氮原子相连；
    更优选地，连接体选自下式表示，
    其中，Y、Z、p、AA1的定义如权利要求1-3中任一项所述，1位通过S原子与Tb相连，2位与艾日布林的氮原子相连。
  5. 如权利要求1-4任一项所述的偶联物或所述偶联物的立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，其特征在于，连接体选自以下，
    1位通过S原子与Tb相连，2位与艾日布林的氮原子相连；
    优选地，连接体选自以下，
    1位通过S原子与Tb相连，2位与艾日布林的氮原子相连；
    更优选地，连接体选自以下：
    1位通过S原子与Tb相连，2位与艾日布林的氮原子相连。
  6. 如权利要求1-5中任一项所述的偶联物或所述偶联物的立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，其特征在于，所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物选自，
  7. 如权利要求1-6中任一项所述的偶联物或所述偶联物的立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，其特征在于，Tb为如下任一方案：
    (i)Tb为抗Her 2的抗体或其抗原结合片段，所述的抗Her 2的抗体为anbenitamab，coprelotamab，disitamab，gancotamab，margetuximab，pertuzumab，timigutuzumab，zanidatamab，Trastuzumab，Pertuzumab或其抗原结合片段；
    (ii)Tb为抗Trop-2的抗体或其抗原结合片段，所述的抗Trop-2的抗体为datopotamab，Sacituzumab或其抗原结合片段；
    (iii)Tb为抗EGFR的抗体或其抗原结合片段，所述的抗EGFR的抗体为demupitamab，depatuxizumab，futuximab，imgatuzumab，laprituximab，losatuxizumab，matuzumab，modotuximab，necitumumab，nimotuzumab，panitumumab，pimurutamab，serclutamab，tomuzotuximab，zalutumumab，Cetuximab或其抗原结合片段；
    (iv)Tb为抗B7H3抗体或其抗原结合片段，其中所述抗B7H3抗体为enoblituzumab，mirzotamab，omburtamab，1D1-01，2E3-02抗体或其抗原结合片段；
    (v)Tb为抗B7H3抗体或其抗原结合片段，其中所述抗B7H3抗体其抗原结合片段包含如下的互补决定区(CDR)，其中CDR按kabat编号系统定义：
    序列为SEQ ID NO：9的HCDR1，序列为SEQ ID NO：10的HCDR2，序列为SEQ ID NO：11的HCDR3；和/或，
    序列为SEQ ID NO：12的LCDR1，序列为SEQ ID NO：13的LCDR2，序列为SEQ ID NO：14的LCDR3；
    (vi)Tb为抗B7H3抗体或其抗原结合片段，其中所述抗B7H3抗体其抗原结合片段包含如下的互补决定区(CDR)，其中CDR按IMGT编号系统定义：
    序列为SEQ ID NO：15的HCDR1，序列为SEQ ID NO：16的HCDR2，序列为SEQ ID NO：17的HCDR3；和/或，
    序列为SEQ ID NO：18的LCDR1，序列为GAS的LCDR2，序列为SEQ ID NO：19的LCDR3；
    (vii)Tb为抗B7H3抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗B7H3抗体或其抗原结合片段包含：SEQ ID NO：1或5所示的VH，和/或，SEQ ID NO：2或6所示的VL；
    进一步包含：
    (a)人免疫球蛋白的重链恒定区(CH)或其变体；和/或
    (b)人免疫球蛋白的轻链恒定区(CL)或其变体，
    (viii)Tb为抗B7H3抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗B7H3抗体或其抗原结合片段包含：SEQ ID NO：5所示的VH，SEQ ID NO：20所示的CH或其变体，和/或，SEQ ID NO：6所示的VL，SEQ ID NO：21所示的CL或其变体；
    优选地，所述B7H3抗体或其抗原结合片段包含：
    SEQ ID NO：3所示的重链，和/或，SEQ ID NO：4所示的轻链；或
    SEQ ID NO：7所示的重链，和/或，SEQ ID NO：8所示的轻链。
  8. 如权利要求1-7中任一项所述的偶联物或所述偶联物的立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，其特征在于，所述的偶联物选自如下任一：
    其中，B7H3-mAb为2E3-02抗体，q选自0.1-10.0之间的任意整数；优选地，q选自1、2、3、4、5、6、7和8；
    其中，q选自0.1-10.0之间的任意整数；优选地，q选自1、2、3、4、5、6、7和8；
    其中，B7H3-mAb为2E3-02抗体，q选自0.1-10.0之间的任意整数；优选地，q选自1、2、3、4、5、6、7和8；或
    其中，q选自0.1-10.0之间的任意整数；优选地，q选自1、2、3、4、5、6、7和8。
  9. 式II所示的药物连接体偶联物，
    或所述药物连接体偶联物的立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，
    其中，
    当L1为时，1位和Lg相连，2位与L2相连；
    Lg为和Tb反应时的离去基团；L2、L3、L4、Rc、R1和R2的定义如权利要求1-6中任一项所述；
    当L1为时，Lg-L1为L2、L3、L4、Rc、R1和R2的定义如权利要求1-6中任一项所述。
  10. 如权利要求9所述的药物连接体偶联物或所述偶联物的立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，其特征在于，所述Lg选自卤素、砜基、三级胺盐基(Me3N+、Et3N+)、重氮盐基、-OMs、MeSO2-、CF3SO3-；优选地，Lg选自F、Cl、MeSO2-；更优选地，Lg选自F、MeSO2-。
  11. 如权利要求9或10所述的药物连接体偶联物或所述药物连接体偶联物的立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，其特征在于，所述药物连接体偶联物选自，
  12. 式III所示的连接体，
    Lg——L1——L2——L3——L4——Lg1
    III
    Lg、L1、L2、L3和L4的定义如权利要求1-11中任一项所述；Lg1为和艾日布林或其衍生物反应时的离去基团；优选地，Lg1为-OH、或卤素。
  13. 一种制备式I所示的偶联物的方法，其包括：将Tb上的巯基与所述的通式II所示的药物连接体偶联物进行偶联反应；其中，Tb、q、Lg、L1、L2、L3和L4、R1和R2的定义如权利要求1-11任一项所述。
  14. 如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述的方法包括将Tb上的巯基与通式II所示的药物连接体偶联物在合适的溶剂和条件下进行偶联反应形成C-S键的步骤；其中：Tb、q、Lg、L1、L2、L3和L4、R1和R2的定义如权利要求1-11中任一项所述；
    所述的Tb上的巯基与所述的药物连接体偶联物的摩尔比可为1∶(1-20)，如1∶(2-20)、1∶(4-20)、1∶(6-20)、1∶(8-20)、1∶(10-20)、1∶(12-20)、1∶(14-20)、1∶(16-20)或1∶(18-20)；
    所述的偶联反应优选为在水和/或有机溶剂中进行；所述的有机溶剂优选为N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、腈类溶剂(例如乙腈)和醇类溶剂(例如甲醇、乙醇)中的一种或多种； 所述的方法的后处理操作可为本领域偶联反应常规的后处理方法，优选为通过层析方法对偶联产物进行纯化；所述的层析方法通常为离子交换层析、疏水层析、反相层析或亲和层析中的一种或多种。
  15. 一种抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群，其包含权利要求1-8中任一项所述抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物、其立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，所述抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群中的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物具有两种或多种q值；
    可选地，所述抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群中的药物与抗体的比例(DAR)选自1-10中的整数或小数；
    优选地，所述抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群中的药物与抗体的比例(DAR)选自1-8中的整数或小数；
    优选地，所述抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群中的药物与抗体的比例(DAR)选自2-8中的整数或小数；
    优选地，所述抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群中的药物与抗体的比例(DAR)选自2、2.5、3、3.5、4、4.2、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.2、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.7、8.9和9。
  16. 一种药物组合物，其包含如权利要求1-8中任一项所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物、其立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，或者如权利要求9-11中任一项所述的式II所示的药物连接体偶联物、其立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，或者如权利要求15所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物群，以及任选的一种或多种药用辅料。
  17. 一种如权利要求1-8中任一项所述的抗体-艾日布林或其衍生物的偶联物、其立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，或者如权利要求9-11任一项所述的式II所示的药物连接体偶联物、其立体异构体、其前药、其药学上可接受的盐或其药学上可接受的溶剂合物，或者如权利要求15所述的混合物，或者如权利要求16所述的药物组合物在制备治疗和/或预防与细胞活动异常相关的疾病的药物中的用途；
    可选地，所述的与细胞活动异常相关的疾病为血液和/或实体肿瘤，例如选自食管癌(例如食管腺癌和食管鳞状细胞癌)、脑瘤、肺癌(例如小细胞性肺癌和非小细胞性肺癌)、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、结直肠癌、肝癌、肾癌、尿路上皮癌、实体瘤、非霍奇金淋巴瘤、中枢神经系统肿瘤(例如神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、胶质瘤或肉瘤)、前列腺癌或甲状腺癌。
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