JP2016513712A - カイロミクロンへの分子の取り込みのためのコレストソーム小胞 - Google Patents
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Abstract
Description
「リポソームは、小型分子用の送達ビヒクルとして広範に利用されている。しかし、リポソーム内において、多くの巨大分子薬物に関する高濃度のカプセル化の達成は、依然として困難である。更に、多くの薬物製剤は、余りにも迅速にリポソームから漏出し、有用な薬物送達動態を維持することができない。マイクロ及びナノ粒子による薬物送達が、タンパク質及び小型分子薬物をカプセル化できるが、これは依然として粒子質量当たり非常に低いカプセル化薬物の総質量を提供し、この場合にはタンパク質:リン脂質混合物で、典型的にはおおよそ1:1000〜1:10、000の質量比である(例えば、US7,662,405参照)。その上、重合体粒子合成で用いられる有機溶媒及びこれらの粒子内の疎水性/酸性環境が、治療剤の破壊をもたらし得る。(Zhuら、Nat.Biotechnol.2000 18:52−57参照。)」
特定の実施形態において、医薬組成物は、小胞体積の約10%〜約98%、約20%〜約96%、しばしば約50%〜約96%、しばしば約90%〜約96%が、薬学的活性剤により占有される単一薄膜小胞である。
好ましい実施形態において、本発明は、抗感染化合物を含む積荷積載コレストソームの医薬組成物を提供し、抗感染化合物は、(1)ミコナゾール、テルコナゾール、エコナゾール、イソコナゾール、チオコナゾール、ビホナゾール、クロトリマゾール、ケトコナゾール、ブドコナゾール、イトラコナゾール、オキシコナゾール、フェンチコナゾール、ナイスタチン、ナフチフィン、アムホテリシンB、ジノコナゾール及びシクロピロクスオラミン、ミカファンギン、カスポファンギン、アンチデュラファンギン、バンコマイシン、ダプトマイシン、オリタバンシン、WAP8294A、ダルババンシン、セフタロリン、セフェピム、セフタジジム、キヌプリスチン/ダルフォプリスチン(シナシッド)、ホスホマイシン、コリスチン、チゲサイクリンからなる群から選択され、(2)本願において別途記載されるコレステリルエステルから本質的になる表面層によりカプセル化される。その組成物は、感染治療に用いることができ、経口又は膣内経路を含めて局所的に投与されることができる。
更に別の好ましい実施形態において、本発明は、ペプチドを含む積荷積載コレストソームの医薬組成物を提供し、ペプチドは、しばしば、親水性ペプチド、ヒト成長ホルモン、プロラクチン、オキシトシン、カルシトニン、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモン、グレリン、GLP−1、PYY36、オキシントモジュリン、GLP−2、グルカゴン及びインスリンからなる群より選択され、本願において別途記載されるコレステリルエステルによりカプセル化される。その組成物は、牛乳生産の増大、膵臓若しくは肝臓などの臓器及び組織の構造又は機能の改善、哺乳類の成長の増大又は開始、又はインスリン治療が有益な個体へのインスリン投与のために投与されることができる。
理論によって制限されることなく、本発明は、コレストソームに分子をカプセル化する製剤の経口送達を可能とし、コレストソームは、分子認識によってGI腸細胞に入り込み、摂取され、カイロミクロンに取り込まれ、それにより胃腸管、腸細胞、リンパ系、血液において、そして身体細胞の膜の通過において、分子の元の状態を完全に保護する。本発明の製剤は、身体の細胞に吸収されるまで活性成分を放出しない。したがって、本発明の特徴は、以下を含む。
1)Caco2腸細胞障壁の完全通過
2)細胞膜障壁の完全通過
3)エンドソーム吸収を大幅に回避する細胞内送達方法
4)経口送達が、活性分子寸法、電荷、結合又は分解経路と無関係であり、積荷積載コレストソームの表面は、それ自体が中性である
5)活性成分が、肝周辺のリンパ管で循環する−初回通過肝吸収を回避する経口的送達、及び
6)分子送達が、カイロミクロンの表面へのアポリポタンパク質の結合により促進され、細胞と結合することができ、細胞内に充填されて、続いて細胞質においてカプセル化された分子が開梱される。
本発明によるコレストソームは、分子のための送達システムの中で特異である。薬物送達手段の中でも特異であり、本発明の発明者らは、タンパク質及びその他分子並びに化学的化合物を、食品分野において広く公知された成分で成功的に偽装した。より具体的には、経口的吸収のために選択された物質が、食用コレステリルエステルであった。驚くべきことに、コレステリルエステルは、コレストソームのカプセル化された製品(特に、この方法以外では、患者に成功的に送達することができない巨大分子)をリポソーム又は任意のその他のナノ粒子とは差別化する以下の特性を有した、特異なコレステリルエステルナノ粒子を提供する。
1.送達手段及びシステムの全ての成分物質は、一般的な食用成分であり、ほとんどの適用において、これらの物質の1日当たりの総投与量が食品からよりも少ない。
2.コレストソームにカプセル化する作用温度は、多くの場合に35〜45℃であるが、これは、ペプチド及びタンパク質の身体循環形態での安定性のための最適温度である。
3.上記送達手段は、分子寸法、電荷、結合又は分解経路を考慮することもなく、全ての好ましい側面を提供する。
4.コレストソームのカプセル化されたタンパク質は、Caco2腸細胞障壁の完全な通過を示し、カイロミクロンに無傷のまま取り込まれる。
5.肝及び関連の初回通過消去経路のバイパス
6.コレストソーム及びそれを含むカイロミクロンが、経口摂取から細胞内吸収までの全ての経路で細胞膜を通過するため、これらは、分子に対する保護を提供する。
7.細胞との結合、定量的な細胞内積載、細胞膜障壁の完全な通過
8.内在的な経路であるコレステリルエステルヒドロラーゼによる細胞質でのカプセル化された内容物の開梱
9.コレストソームは、エンドソーム吸収経路を用いないが、細胞内部位において積載物分子の堅固な細胞内濃度
10.コレストソーム及びそのカプセル化された内容物は、本態形成カイロミクロンに取り込まれる時、全ての細胞に分配される。
リポソームは、たとえドキソルビシンのような親脂質性分子を用いる場合であっても、1%重量:重量すらほとんど積載しない。本発明者によって開発されたコレストソームは、多くの場合、本願の他のところに記載されたように、20%以上及び理論的にはより多く積載するものである。
リポソームは、タンパク質、遺伝子物質(ポリヌクレオチド、例えば、本願の他のところに記載されたようなDNA及び/又はRNA)、ペプチド(特にポリペプチド、例えば、モノクローナル抗体)及び利用可能な量の、巨大分子抗生剤を含めた多数の巨大分子(2%未満とは、ペプチド又はモノクローナル抗体に典型的である100〜1000mgの投与量のカプセル化時に担体の量が非常に多いことを意味する)を積載しない。水溶性であり、電荷が陽性である多数の分子が、リン脂質系リポソームのようなナノ粒子に有利に積載されない。対照的に、コレストソーム(コア)の内部は、カプセル化膜の寸法に比べて大きく、親水性であるが、中性であり、タンパク質、ペプチド、遺伝子だけでなく、荷電された親水性小型分子を積載するにおいて交換性のあるシステムである。これらの全てがGI管障壁を通過することはできないため、コレストソームの利用は、初めてタンパク質及びペプチドが経口的に吸収される可能性を提供する。
リポソームは、Caco−2腸細胞障壁を通過することができないが、実際、大部分がGI管の初入において破壊され、それらの個別成分のリン脂質を収穫するようになる。したがって、リポソーム及びそれらの積載物は、おそらくそれらの表面電荷のため、腸細胞によって取られない。コレストソームは、すでにコレステロールエステラーゼによって吸収可能な部分に変換されているコレステリルエステルを含めて構成される。これらは、コレステリルエステル由来のその組成により既に中性粒子であり、完全な吸収及びカイロミクロン形成での利用のために、十二指腸の腸細胞細胞にはそのような形態が好ましい。カプセル化された分子が完全に中空中心の内部に存在する限り、コレストソームは完全に取られ、腸細胞のゴルジ体中のカイロミクロンに無傷のまま配置される。
リポソームは、その積載物と経口的に吸収されないばかりか、細胞に入り込むこともなく、おそらくそれらの表面でAPOの欠乏時、脂質を必要とする細胞と結合する能力も備えていない。静脈内注射時、リポソームは肝により収穫され、そこでそれらの成分のリン脂質に破壊される。標的細胞が肝細胞である場合、肝における積載物分子の高い局地的濃度が大きな長所を提供できるにもかかわらず、これらは、普通、その内容物の細胞内送達を提供しない。
リポソームのリン脂質コーティングはGI管で分解され、したがって、リポソーム自体で分解され、その内容物がGI管で、そして、更には十二指腸の吸収部位に到着するも前に放出される。したがって、タンパク質がリポソームに積載され得るとしても、それが腸細胞により吸収できるようになる前に、リポソームとともに破壊される。リン脂質がカイロミクロンに取り込まれるリポソームを構成する機会はない。
静脈内投与されると、コレストソームは、細胞との結合に必須な表面アポリポタンパク質が欠乏しているため、細胞と結合することができない。しかし、細胞膜は、コレストソームを捕獲するものと現われ、そのような有利な点によりコレストソームの非経口的利用が特定の分子の一部の細胞内吸収を許容する。細胞内吸収は、これらの同一のコレストソームが経口的に提供される場合にはるかに多い。膣内投与を含めた局所投与が、また好ましい。
コレストソームは幾つかのステップで形成されるが、先に選択されたコレステリルエステルをエーテルのような有機溶媒に溶解させた後、有機溶媒を除去し、続いて超音波処理とともにカプセル化する分子を含んでいる水性の構成成分を添加して単一薄膜を形成し、水で分子周辺に親水性の比較的荷電されていない中空ポケットを生成する。
コレストソームの外膜は、一般的に複数のコレステリルエステルが同一であるか、又は類似した分子長を有した場合、コレステリルエステルベースの脂質ナノ粒子を形成するように配列されるコレステリルエステルからなり、前記コレストソームによりカプセル化される巨大分子の周辺に均一なカプセルを形成する。コレステリルエステルは、共に可溶性である限り、異なる長さで存在することができるが、これは、それらがともに凝集するように許容して、脂質ナノ粒子の全体寸法に比べて比較的大きな中空コアを有した小胞を形成するようになる。実際に、一部の構造配置は、全体ナノ粒子の80%を超えてコア変位(core displacement)を有しており、インスリンのような水溶性分子の有益な高水準の積載を提供する。
コレストソーム成分の混合物は、巨大分子構成成分のイオン及び物理化学的特徴によって新規な方式で異なる。積荷積載コレストソームの寸法は、しばしば特定のコレステロールエステルでの標的に影響を与え、コレストソームに形成される時、特定の分子送達、したがってエステル鎖長の影響についてより良好に適合される。
より大きな正味の陽電荷を有するより大きな分子は、最適のカプセル化にもっと長い鎖長を必要とするが、条件は、カプセル化プロセスの間に溶融温度がカプセル化される分子の安定性と両立できるという点である。より低い正味の陽電荷を有するより小さな分子は、もっと短い鎖長のコレステロールエステルにカプセル化することができる。本発明によってコレステリルエステルに基づいた脂質ナノ粒子を提供するためのコレステリルエステル鎖長の調整は、十分にありふれた技術の範囲内である。
より大きな正味の陽電荷を有するより大きな分子が、最適のカプセル化のためにもっと長い鎖長のコレステリルエステルを必要とする。
先行技術で開示された送達方法及び製剤に脂質を伴う組成物は、胃腸管の腸細胞を通過せず、カイロミクロンに取り込まれず、大部分の細胞の膜を通過しないという点は広く公知されている。
本発明において、図1に示されたように、インスリンのような巨大分子が、剤形化及び応用生物学的製法の2つの連鎖したステップの後に身体細胞内部へ送達され得る。第一番目のステップにおいて、コレストソームを調製して、上記巨大分子を形成したコレストソームにカプセル化するが、ここでコレストソームは、各選択された分子との相溶性に対して選択される特異的コレステリルエステルを含んでなるという点を前提にする。また、十二指腸腸細胞の表面上に輸送体があることを保障するようにコレストソームのコレステリルエステル内容物が選択されなければならない。巨大分子送達システムの調製における第二番目のステップは、十二指腸腸細胞がコレストソーム−巨大分子構築物をカイロミクロンに取り込み、これらの積載されて新規に変形されたカイロミクロンを、カイロミクロンを胸管に持っていき、結局上記患者の血中で循環するリンパ液に分泌する時に起きる。
コレストソーム内にカプセル化され、カイロミクロン内に取り込まれる巨大分子の細胞内送達は、活性分子積載物を含む積荷積載コレストソームを含むカイロミクロンは、コレステロール及びトリグリセリドを必要とする細胞と結合し、上記コレストソームを含む上記構成成分を、エンドソームカプセル化を必要条件とせず、細胞に送達する時に達成される。本発明の方法の更なる新規性は、コレストソームに取り込まれた巨大分子を完全な形態で細胞の細胞質に放出することであるが、これは、外側表面のコレステリルエステルが細胞質から除去され、それにより、そのコレストソーム送達カプセルから分子を放出するからである。次いで、コレストソームの表面が標的細胞により必要なコレステリルエステルと認識される限り、標的細胞は積載物を収容するものであり、コレステリルエステルヒドロラーゼによる表面の開梱後、巨大分子は、標的身体細胞の膜の内部で遊離されるものである。
ゴルジ体によるコレストソーム及びその分子積載物のカイロミクロンへの積載は、Caco−2の頂端側再測定、及び基底側でカイロミクロンに回収される量から残存する量を差し引くことにより立証されるように定量的なものと示される。したがって、コレストソームに対するCaco−2細胞の親和性は非常に高いものと現われる。Caco−2細胞は、頂端側に位置した利用可能なコレストソームの全てを基底側上のカイロミクロンに消去する。したがって、活性分子(等)をカプセル化するために用いられるコレステリルエステルの早期の選択が、本発明の実施において核心的なステップである。
コレストソームが2〜14の範囲のpH値で損なわれずに存在することとは対照的に、リポソームは同一条件で迅速に分解されて、本発明による組成物に比べて相対的に不安定である。不安定な積載物を備えて調製されたコレストソームは、その積載物の内容物が胃腸管における分解から保護されなければならない場合に、腸を標的にした外側の層でコーティングされることがあり、積荷積載コレストソームが十二指腸(コレストソームを取り込んだカイロミクロンを提供する腸細胞のG.I.部位)に到逹するようになる。
「炎症関連代謝障害」には、限定でないが、肺疾患、糖尿病及びインスリン抵抗性から生じる障害を含む高血糖障害(例えば1型及び2型糖尿病並びに重度のインスリン抵抗性)、高インスリン血症及び異常脂肪血症(例えば、高脂血症(例えば、肥満対象で発症する)、上昇した低密度リポタンパク質(LDL)、減少した高密度リポタンパク質(HDL)、及び上昇したトリグリセリド)及びインスリン抵抗性及び炎症と連関された肝臓(又は肝)損傷、例えば、肝臓脂肪症、非アルコール性脂肪肝疾患、肝硬変、ウイルスによって誘発される肝炎、例えば、A、B又はC型肝炎、又は毒素及びインスリン抵抗性糖尿病、例えば、メンデンホール症候群(Mendenhall≡s Syndrome)、ウェルナー症候群、妖精症及びリポ萎縮性糖尿病、腎臓障害、例えば、急性および慢性腎不全、末期慢性腎不全、糸球体腎炎、間質性腎炎、腎盂腎炎、糸球体硬化症、例えば、糖尿病患者におけるKimmelstiel−Wilson及び腎移植後の腎不全、肥満、GH欠損症、GH抵抗、ターナー症候群、Laron症候群、低身長、脂肪量対筋肉量の比率減少、CD4+T細胞数の減少及び免疫不全症又は化学療法によって誘発された組織損傷を含む免疫不全、骨髄移植、心臓構造又は機能疾患又は不全症、例えば、心臓の機能障害と鬱血性心不全、アテローム性動脈硬化症、神経、神経学的又は神経筋障害、例えば、中枢神経系の疾患、例えば、アルツハイマー病又はパーキンソン病又は多発性硬化症及び末梢神経系及び筋肉系の疾患、例えば、末梢神経症、筋肉萎縮病又は筋緊張性ジストロフィー、及び異化状態、例えば任意の疾患、例えば、精神健康疾患(例えば、拒食症)、精神的外傷又は外傷によって誘発される消耗性と連関されたもの、又は例えば、バクテリア又はヒトウイルスによる感染、例えばHIV、C型又はB型肝炎、外傷、皮膚障害、復元が必要な胃腸管構造及び機能などが含まれる。
「感染性疾患」には、限定でないが、バクテリア、菌類、寄生虫及びウイルス剤によって誘発されるものが含まれる。そのような感染剤の例示は、以下のものを含む:他のものの中で特に、staphylococcus、streptococcaceae、neisseriaaceae、cocci、enter obacteriaceae、pseudomonadaceae、vibrionaceae、Campylobacter、pasteurellaceae、bordetella、francisella、brucella、legionellaceae、bacteroidaceae、gram−negative bacilli、Clostridium、corynebacterium、propionibacterium、gram−positive bacilli、anthrax、actinomyces、nocardia、mycobacterium、treponema、borrelia、leptospira、mycoplasma、ureaplasma、rickettsia、chlamydiae、全身性真菌症、機会性真菌症、原生動物、線虫類、吸虫類、条虫類、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、パポーバウイルス、肝炎ウイルス、オルソミクソウイルス、パラミクソウイルス、コロナウイルス、ピコルナウイルス、レオウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、ブンヤウイルス、ラブドウイルス、ヒト免疫不全ウイルス及びレトロウイルス。
用語「癌」は、明細書の全体にわたって癌又は悪性新生物、すなわち細胞増殖により、多くの場合、正常な細胞よりも早く成長して、新しい成長中断を開始する刺激後にも成長する、異常組織の形成及び成長を誘発する病理学的プロセスを意味する。悪性新生物は、正常組織との構造的組織化及び機能的協力の部分的又は完全な欠乏を示し、ほとんど周辺組織を攻撃し、多くの部位に転移され、未遂に終わる除去後には再発して、適切に治療しない時、患者の死亡を誘発する傾向がある。本願で用いられたように、上記用語の新生物は、全ての癌疾患状態を記述するために用いられ、悪性造血性の、苦しい固形腫瘍と関連した病理学的プロセスを包括又は包含する。
本発明の製剤は、薬学的に許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、保存剤及び/又はアジュバントを含むことができる。許容可能な製剤は、好ましくは、採用される投与量及び濃度において受容者に無毒性である。薬学的製剤は、例えば、組成物のpH、滲透性、粘度、透明度、色相、等張性、安定性、溶解又は放出速度、吸収又は浸透を変更、維持又は保存するための物質を含むことができる。適合した製剤材料には、限定でないが、以下のものが含まれる:アミノ酸(例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリシン);抗菌物質;抗酸化剤(例えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム又はナトリウム亜硫酸水素塩);バッファ(例えば、ホウ酸塩、重炭酸塩、トリス−HCl、クエン酸塩、リン酸塩又はその他の有機酸);増量剤(例えば、マンニトール又はグリシン);キレート剤(例えば、エチレンジアミン四酢酸(EDTA);錯化剤(例えば、カフェイン、ポリビニルピロリドン、β−シクロデクストリン又はヒドロキシプロピル−β−シクロデクストリン);フィラ;単糖類、二糖類、他の炭水化物(例えば、グルコース、マンノース又はデキストリン);タンパク質(例えば、血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン);着色剤、風味剤及び賦形剤;乳化剤;親水性ポリマー(例えば、ポリビニルピロリドン);低分子量のポリペプチド;塩形成対イオン(例えば、ナトリウム);保存剤(例えば、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸又は過酸化水素);溶媒(例えば、グリセリン、プロピレングリコール又はポリエチレングリコール);糖アルコール(例えば、マンニトール又はソルビトール);懸濁化剤;界面活性剤又は湿潤剤(プルロニック、ポリエチレングリコール(PEG)、ソルビタンエステル、ポリソルベート、例えば、ポリソルベート20及びとポリソルベート80、Tweenは、本発明の実施例で用いられる;Tweenは、押出しステップの前にエマルジョンの収率を改善するために用いることができる;Tweenは、脂質への追加より前に、あるいは脂質に水性製剤に添加することができ、その後、水分を加える。可能な限りの最小量のTweenを用い、これは、100mlの水分中で約100マイクロリットル未満である。トリトン、トリメタミン、レシチン、コレステロール、又はチロキサポール);安定性向上剤(例えば、蔗糖又はソルビトール);等張性強化剤(例えば、アルカリ金属ハライド、好ましくは、ナトリウム又は塩化カリウム、マンニトール又はソルビトール);送達ビヒクル;希釈剤;賦形剤及び/又は製薬アジュバント。例えば、REMINGTON≡S PHARMACEUTICAL SCIENCES、18.sup.th Edition、(A.R.Gennaro,ed.),1990、Mack Publishing Company参照。
実施例1.段階的:コレストソームのカプセル化タンパク質、ペプチド及び遺伝子物質の一般的調製及び試験
経口用タンパク質又はペプチドに適用されるコレストソーム
経口薬物分子、経口用タンパク質、経口用ペプチド、経口用遺伝子又は遺伝子物質の構築物(用語「分子」は、本願の実施例において、以後これらのものの中の1つ又は全部を定義する)の調製及びCaco2細胞での吸収に対する上記分子の試験ステップは、以下のとおりである。
1.コレステリルエステル及びカプセル化のための組成物構成要素を調製する。
2.カプセル化標的分子を得て、37゜C〜45゜Cで純度及び安定性に対して試験する。
3.上記分子の最大のコレストソーム積載を達成するエステルと分子の間の相互作用のコンピューターモデルを用いて、コレストソーム混合物中のコレステリルエステルの成分を最適化する。
4.コレストソームのカプセル化分子を調製し、顕微鏡を含めた生物学的研究遂行の目的でフルオレッセンイソチオシアネート(FITC)標識を含むようにする、上記FITC標識は、人体試験又は治療用途を意図する製品の構成成分ではない。
5.Caco2細胞単層でFITC標識された分子を試験し、カイロミクロンカプセル化FITC−コレストソーム−分子を収集して、コレストソーム積載されたカイロミクロンに取り込まれたものと定義する。
6.細胞をカイロミクロン含有FITC−コレストソーム−分子に暴露し、それらの試験細胞によるFITC−分子の吸収を決定する。使用の容易さ及び癌との関連性のためにMCF−7細胞がよく選択されるが、多数の生物活性分子の細胞内吸収と同様に細胞標的化が科学的研究の対象となる場合、吸収に対する多数の異なる細胞株試験が、薬物送達分野の先行技術より優れており、新規かつ予期していないものであることを操作者は実感できるだろう。
7.顕微鏡を用いて細胞内FITC−分子がエンドゾムに含まれるか否か、又はそれが細胞質に遊離されているか否かを決定する。エンドゾムを画像捕捉する典型的な時期は、最初の暴露後、約24時間になる時である。
8.GLUT−輸送体のウエスタンブロット発現を用いて、分子の細胞内作用が細胞内分子の作用によって制御される追加の物質又は分子の細胞表面媒介吸収として発現されるか否かを決定する。
9.動物又はヒトへの投与のために、FITC−分子−コレストソームのある腸溶コーティングされたpH5.5放出カプセルを調製する(酸不安定タンパク質、ペプチド、遺伝子又は生きている構築物、例えば、ワクチン又はウイルスに対する好ましい経口投与形態)。
10.FITC−分子−コレストソームの経口剤形をマウス又はヒトに投与する。
11.ステップ10の実験において、腸溶コーティングされたカプセル中のFITC−分子−コレストソームと同一の投与量のFITC−分子−コレストソームを経口的に投与し、IV。同一の投与量のFITC−分子−コレストソームをIV投与する。
12.以下の三つの方式の間で、各方式に対し、FITC−分子−コレストソームの投与後の分子のバイオマーカーに対する有効性を比較する。
a.FITC分子コレストソームで経口投与、これは、FITC分子で積載したリンパカイロミクロンを結果として提供する。
b.FITC−分子コレストソームで静脈内投与、これは、カイロミクロンを形成せず、分子の細胞への吸収を促進することができるか、或いは促進できない場合がある。
c.FITC−分子を静脈内投与するが、コレストソーム中になく、よってカイロミクロン中にない。
13.蛍光顕微鏡を用いて、上記ステップ12における3つの投与方式(a対b対c)を提供されたマウスから取った組織でFITC−分子の生物学的分配を試験する。死後剖検で試験した組織には、肝、腎臓、脳、膵臓、十二指腸、回腸、大腸、脾臓、筋肉、腹部脂肪が含まれる。分子の高い細胞内濃度がこの方法により達成することができ、細胞での分配がエンドソーム又は消化胞に制限される代わりに均一であるものと予想された。分子の有効性の測定は、細胞内分配プロファイルと相関関係があり、全般的な生物活性対投与量の測定は、有効性測定から派生されたものである。
図12に示されたのは、例示としてカプセル化されたインスリンを有した、積載されたコレストソーム構造モデルである。そのような理想的な脂質粒子は、塊の原製品の寸法が約1000〜5000nmである脂質塊に凝集される。そのような大きい粒子の一様な250nmの粒子径での押出しが、好ましい実施例である。これは、当業界に広く公知された標準の高圧押出装置を用いて行うことができる。
コレストソームの製造における使用のために考慮されるコレステリルエステルの予備調査
各エステルの融点を決定する。例示として、ミリステートは、摂氏65度の溶融転移温度を有しており、その温度を超えると、固体構成成分が溶融する。
カプセル化小胞の適切な形成のための特定のコレステリルエステルの選択は、新規接近法及び電算化された分子モデリングを伴う。コレステリルエステルの特性及びカプセル化のための標的分子と、分子周辺のエステルから形成された小胞の中空コア内部との間の相互作用が、体積対体積基準又は重量対重量基準の積載のような好ましいコレストソーム−分子特性の定義に用いられる。
a.コレストソームを形成する請求されたコレステリルエステルは、以下のものを含む:コレステロール及び脂肪酸から生成される任意のコレステリルエステル、ここで脂肪酸は、限定でないが、下記表2における以下の化合物を含む飽和及び不飽和脂肪酸を含む。
本発明において、感染性疾患治療に用いる分子は、一般的にコレストソームへのカプセル化に適合しており、経口用として用いられる。大部分の抗生剤は、一般的に親水性であり、他の方法では経口的に吸収されないため、静脈内(IV)投与されなければならない。したがって、コレストソームでの使用は、それらの経口的吸収が可能となるようにする。本発明によるコレストソームには、多数の抗生剤が用いられてもよい。本発明に用いられる抗生剤には、以下のものが含まれる:アミノグリコシド、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、スペクチノマイシン;アンサマイシン、例えば、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、リファキシミン及びストレプトマイシン;カルバペネム、例えば、エルタペネム、ドリペネム、イミペネム/シラスタチン及びメロペネム;セファロスポリン、例えば、セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン/セファロチン、セファレキシン、セファクター、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフェピム、セフタロリンフォサミル及びセフトビプロール;グリコペプチド、例えば、テイコプラニン、バンコマイシン及びテラバンシン;リポペプチド、例えば、ダプトマイシン、オリタバンシン、WAP8294A;マクロライド、例えば、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、テリスロマイシン及びスピラマイシン;リンコサミド、例えば、クリンダマイシン及びリンコマイシン;モノバクタム、例えば、アズトレオナム;ニトロフラン、例えば、フラゾリドン及びニトロフラントイン;オキサゾリジノン、例えば、リネゾリド、ポシゾリド、ラデゾリド及びトレゾリド;ペニシリン、例えば、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンG、ペニシリンV、ピペラシリン、テモシリン及びチカルシリン;ペニシリン合剤、例えば、アモキシシリン/クラブラン酸、アンピシリン/スルバクタム、ピペラシリン/タゾバクタム、及びチカルシリン/クラブラン酸;ポリペプチド、例えば、バシトラシン、コリスチン及びポリミキシンB;キノロン/フルオロキノリン、例えば、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、及びスパルフロキサシン;スルホンアミド、例えば、マフェニド、スルファセタミド、スルファダイアジン、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファサラジン、スルフィソクサゾール、トリメトプリム−スルファメトキサゾール及びスルホンアミドクリソイジン;テトラサイクリン、例えば、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ビブラマイシン、ミノサイクリン、チゲサイクリン、オキシテトラサイクリン及びテトラサイクリン;抗ミコバクテリア、例えば、クロファジミン、カプレオマイシン、シクロセリン、エタンブトール、リファンピシン、リファブチン、リファペンチン、アルスフェナミン、未分類のもの、例えば、クロラムフェニコール、ホスホマイシン、フシジン酸、メトロニダゾール、ムピロシン、プラテンシマイシン、キヌプリスチン/ダルフォプリスチン、チアムフェニコール、チゲサイクリン、チニダゾール及びトリメトプリム。
本願に開示された分子を説明する好ましい実施形態は、実施例1で挙げられた原則によってコレストソームのカプセル化されたトブラマイシンの調製及び試験のためのリストから選択されるトブラマイシンである。特定の製剤が経口用で、またシュードモナス‐アエルギノーザ(Pseudomonas aeruginosa)のような標的グラム陰性バクテリアに対抗する抗生剤のトブラマイシンの全体的活性を増加させるために設計された。
バッチ特性
DLLS粒子寸法:2700nm
ゼータ電位:−21.7
脂質の濃度:1.9mg/ml、トブラマイシン濃度:2.0mg/ml
細胞暴露:MCF−7細胞(図23参照)
コレストソーム単独:24時間にわたって成長又は生存力に影響を与えない
FITC単独:24時間にわたって成長又は生存力に影響を与えない
トブラマイシン単独:10mcg/ml〜0.01mcg/ml、24時間にわたって成長又は生存力に影響を与えない
FITCトブラマイシン単独:10mcg/ml、24時間にわたって成長又は生存力に影響を与えない
FITCトブラマイシンコレストソーム:3.0mcg/ml24時間で死滅、繰り返して同一の結果。外部に比べて内部で100倍であることを想定すると、腎尿細管障壁細胞と類似した細胞内死滅閾値を有する。
結論:コレストソーム単独、FITCコレストソーム単独、トブラマイシン単独ではMCF−7細胞を死滅させない。MCF−7細胞上のFITC−トブラマイシンはまた、それらを害さない。しかし、FITC−トブラマイシン−コレストソームは、24時間目に死滅させる。
FITCトブラマイシンコレストソームでは、カイロミクロンの調査は行っていない。
明視野対FITC蛍光画像提供によるMCF−7細胞の比較は、1)FITC−コレストソームに対する24時間の暴露後、MCF−7細胞の全般的な成功的積載を示したが、これは、コレストソームを用いた本出願人の作業で繰り返して提示された。
経口的には吸収されず、したがって、現在、IV投与でのみ提供されているセファロスポリン抗生剤と関連した特定の例示として、抗MRSAセファロスポリン抗生剤セフタロリンポサミルを選択した。
バッチ:
FITC標識分画:未実施
DLLS粒子寸法は測定されず、押し出されていない
遊離されたセフタロリンを除去するために透析して調製:行ったが、遊離されたセフタロリンは製剤中に残っている
百分率収率:脂質の出発量の13%
ゼータ電位:未実施
細胞:MCF−7:融合性製剤で24時間目に400、000個の細胞。MCF−7細胞の寸法は2000nm
コレストソーム単独:24時間にわたってMCF−7細胞の成長又は生存力に有効性なし
FITC単独:24時間にわたってMCF−7細胞の成長又は生存力に有効性なし
セフタロリン単独:24時間にわたってMCF−7細胞の成長又は生存力に有効性なし
FITCセフタロリン単独:調製されなかったため未実施
FITCセフタロリンコレストソーム:24時間にわたってMCF−7細胞の成長又は生存力に有効性なし。外部に比べて内部で100倍であることを想定。
経口的に吸収されず、現在、IV投与でのみ提供されているグリコペプチド抗生剤であることを考慮した特定の実施例として、本出願人は、抗MRSAグリコペプチド抗生剤バンコマイシンを選択した。
バッチ:756、製造10−23−13
DLLS粒子寸法 1016nm未押出
DLLS粒子寸法:800nm押出し
製剤の透析で遊離されたバンコマイシン除去
百分率収率は、脂質の出発量の1.0%未満
ゼータ電位:−13
体積対体積算出:
脂質の濃度:10mlの中、1.0mg。バンコマイシンの濃度:5000mcg/ml
重量対重量算出:
脂質の濃度:<1.0mg/ml。本製剤には、遊離されたバンコマイシンがある。
この透析されたバージョンを用いてバクテリア試験を行ったが、MRSAを非常によく死滅し、バンコマイシン単独で用いたものに比べて、コレストソームでは約10倍より活性であった。
コレストソーム単独:24時間、有効性なし
FITC単独:24時間、有効性なし
バンコマイシン単独:有効性なし;666mcg/mlまでか試験の最大値。
FITCバンコマイシン単独;666mcg/ml〜41mcg/ml:24時間、有効性なし
FITCバンコマイシンコレストソーム:24時間目に有効性なし。コレストソームからのバンコマイシン濃度が0.83mcg/mlである時、FITC標識の調査は、MCF−7細胞で非常に高い内部バンコマイシン濃度を示したが、これは、666mcg/mlの画像標識と同等であり、図24を参照する。
上記データから、外部に対比して内部での1000倍のFITC−バンコマイシン濃度は、コレストソーム積載の有効性と観察することができる。
図24に示されたように、バンコマイシンは、細胞内部で幾つかの有効な特性を有する。本図面は、24時間目におけるMCF−7細胞へのバンコマイシンの入り込みを示す。この一連の実験において、バンコマイシンの本来の出発濃度は41〜666mcg/mlであった。各コラムにおいて、上端の画像は蛍光であり、下端は暗視野である。コラムBにおけるこのFITC−バンコマイシン系列は、83mcg/mlのFITCバンコマイシンを示す。コラムAにおいて、0.83mcg/mlでのFITC−バンコマイシン−コレストソームが、FITC−バンコマイシンのコラムBでのバンコマイシン濃度よりも100倍より低い値でより多くの吸収を提供する。コラムAでの蛍光画像は、コラムBでの画像よりも更に多くの積載を示し、MCF−7細胞の積載FITC−バンコマイシン−コレストソームを用いるものよりも100倍超えて大きいという点を示唆する。コラムCにおいて、FITC−バンコマイシンの細胞外濃度が666mcg/mlまで増加した時、依然として、コラムAでのそれほど多く積載は存在しない。したがって、FITCバンコマイシンの積載に対する蛍光データは、コレストソームを用いた時よりも1000倍より大きな値に近接する。これらのMCF−7細胞上では、FITCバンコマイシンコレストソームの高容量が効果ないということに留意しなければならない。3つのパネルにおける画像は、本発明者が観察したFITCバンコマイシンコレストソームの細胞内部への浸透を立証する。上記画像において、細胞膜がFITCバンコマイシンをより大きく濃縮するだけでなく、これらの細胞の細胞質にFITCバンコマイシンが積載される。これは、ただ24時間の暴露後であって、コレストソームが細胞においてより多くのバンコマイシンを大量で積載することを立証する。
コレストソーム中でのインスリン調製における特定のステップ
具体例として、Regular Insulin(Humulin、Lilly)コレストソームを、実施例2に好ましいものと開示されたコレステリルエステルを用いて、実施例1に記載されたような本発明の方法で調製した。インスリンを含んでいるコレストソームの試験バッチは、2種類のコレステリルエステル、コレステリルミリステート及びコレステリルラウレートの新規したブレンドを用いて調製した。組成物のためのコレステリルエステルの選択は、実施例2に開示された化合物から行ったが、これに限定されるものではなく、インスリン又は類似分子との剤形化のためのその他の適合したコレステリルエステルがあれば、本製剤において許容され得る。
細孔径が0.4μmである12ウェルフォーマットのCorning Transwell Permeable Supportsを採用した。Caco2細胞が75cmフラスコで80〜90%融合した後、各トレンスウェル実験を開始した。細胞を通常通りトリプシン処理し、血球計算器を用いて計数した。細胞の濃度は、培養培地mL当たり2×105細胞に調整した。トレンスウェルプレートのウェルに0.5mLの細胞希釈物を播種した。体積1.5mlの培地を基底側に添加した。細胞を上記のように培養し、培地は、19〜20日間一日おきに替えた。その時、Caco2細胞は分化して、処理に備えるようになる。トレンスウェルプレートの上端及び下端チャンバ由来の全ての培地を除去して、2つのチャンバを1mg/mLのグルコースを含むPBS(PBSG)で3回洗浄した。PBSGをプレートの上端及び下端チャンバに添加し、1時間、培養を行った。全てのPBSGを2つのチャンバから除去し、グルコースを添加したリン酸緩衝食塩水(PBSG)1.5mLを下端チャンバに添加した。
バッチ:733及び蓄えたバッチ
DLLS粒子寸法1700nm未押出
DLLS粒子寸法:押出後149〜274nm
百分率収率:脂質出発量の13.0%
ゼータ電位:−24.7
積載の比率:積載重量対レギュラーインスリンに対する重量は、13%インスリン対87%コレステリルミリステート及びコレステリルラウレートの和。
コレストソーム単独:24時間にわたって成長又は生存力に有効性なし
FITC単独:24時間にわたって成長又は生存力に有効性なし
インスリン単独:1.5ml体積の3mcg/ml;(4.5mcg)24時間、有効性なし
FITCインスリン単独:466mcg/ml 24時間にわたって成長又は生存力に有効性なし(図22参照)
FITCインスリンコレストソーム:0.46mcg/ml;24時間にわたって成長又は生存力に有効性なし
インスリン吸収は、2時間ぶりに開始(図22参照)
FITCインスリンコレストソームカイロミクロン:占有された全ての細胞膜で2時間目に細胞質内に遊離されたインスリンを大量吸収。
濃度頂端側:Pre:頂点上に350μlの0.46mcg/mlコレストソーム溶液
FITCコレストソーム単独:24時間にわたってCaco−2細胞に何らの影響力なし;カイロミクロンは、図20のように形成される
FITCインスリン単独:24時間にわたってCaco−2細胞上に何らの影響力なし;図18のように、基底側上にはカイロミクロンが形成されない
FITC単独:24時間、Caco−2細胞上に何らの影響力なし;基底側上にはカイロミクロンなし(図19)
インスリンコレストソーム:遊離されたインスリンとともに0.46mcg/ml−全てのコレストソームが、基底側にカイロミクロンで移動される。(図21)
FITCインスリンコレストソームで形成されたカイロミクロン:インスリン濃度0.46mcg/ml以下。(図22)
図22.MCF−7細胞でのFITC−インスリン暴露のための本来の出発濃度は466mcg/mlであるが、これは、A列においてMCF−7細胞の内部で測定可能な量のFITCインスリンを提供していない。その下方にある2つの図(B及びC例)において、FITCインスリンコレストソームの濃度は0.46mcg/mlであったが、これは、最後の2つの図にまとめた実験に対して同一である。FITCインスリンコレストソーム由来の0.46mcg/ml(B列)は、コレストソームのないFITCインスリンの466mcg/ml(A列)とほぼ同一の細胞内蛍光を提供する。コレストソームのない、466mcg/mlのFITCインスリン(A列)と比べるとき、Caco−2細胞によるFITCインスリンコレストソームのカイロミクロンへの更なる加工は、FITCインスリンコレストソーム−カイロミクロン由来の細胞内部のインスリンの量において(C列)、FITC−インスリンのみの量より1000倍大きく、確固たる改善を提供しており、Caco−2細胞により加工されない場合の0.46mcg/mlのインスリンの有効性より遥かに大きい。Caco2細胞を通過する量が、頂端側に投与されるインスリンの全部であると仮定すれば、FITCインスリンコレストソームカイロミクロンのC列でのインスリン濃度は、中央列であるB列でのインスリン濃度と同一である。これらの特定の製剤には遊離されたインスリンが残っており、Caco−2細胞を通り過ぎる移動が100%未満である場合、これらの細胞内の積載の比率はより大きい。明らかに、FITCインスリンコレストソーム−カイロミクロンは、細胞内部により大きな積載を達成し、FITCコレストソーム単独で先に示したように、再びコレストソーム単独により、ペプチドが細胞膜を通って細胞に入るようにするということを証明する。下端のC列での画像は、観察された細胞内部でのFITCインスリンコレストソームカイロミクロンの浸透を反映する。本画像において、細胞膜がFITCインスリンを劇的により大きく濃縮するだけでなく、これらの細胞の細胞質にはFITCインスリンが積載される。これは単に2時間の暴露後であるため、カイロミクロンがより大量で積載するだけでなく、それ自体でコレストソームより更に速く積載するということを立証する。
カプセル化されたFITC−インスリンを含むコレストソームを、市販のFITC標識されたレギュラーインスリンを用いて、本願に開示されたように調製した。Caco−2細胞は、コレストソームが完全なインスリンを腸細胞を通じて移動させ(すなわち、インスリンがコレストソーム内に滞留)、キロミクロンに入り込んだ後、キロミクロンがCaco−2膜の基底側で検出されるようにするために用いられた。ELISAを用いて、酸保護されたインスリンが頂点Caco−2障壁を通過せず(<5%)、基底側上の全てのインスリンがキロミクロン内に存在することを証明した。FITC−インスリンを頂端側で用いて、インスリン単独では腸細胞障壁を通過しないが、コレストソーム内のFITCインスリンはCaco2腸細胞障壁を通過するということを明らかにした。そのような実験から、吸収効率は、インスリンの基底側及び頂端側内容物の間の差で決定された。追加の実験は、コレストソームのカプセル化インスリン上の変更されたpH及び胆汁塩の有効性を比較した。更に、コレストソームに積載されたインスリン含有時のキロミクロンの安定性を定量し、生体内の積載されたコレストソームからのインスリンの放出に必要な条件を調査した。
Caco−2細胞及びMCF−7細胞での試験管内研究の完了後、コレストソームインスリン製剤をマウスに投与することができ、ELISAは、インスリンの吸収及びカイロミクロンからの放出を決定し、それを生体内コレストソーム中の循環するインスリンの生物学的滞留を定義する手段で用いられる。
癌治療における小型及び大型分子の利用は、しばしば細胞内部の標的部位に到逹するために横断しなければならない障壁により制限される。本発明者及び専門家は、全ての類型の癌治療手段として、細胞膜障壁を横断して小型及び大型分子を送達する手段を探している。
代表的抗癌剤分子には、以下のものが含まれる:5−アザシチジン;アリトレチノイン;アルトレタミン;アザチオプリン;アミホスチン;アムサクリン;アナグレリド;アスパラギナーゼ;N−(ホスホニル)L−アスパラギン酸;ベキサロテン(タルグレチン);ブレオマイシン;ブリオスタチン;ブスルファン;カペシタビン;カンプトセシン;カルボプラチン;カルムスチン;カルボプロスト(カルボプロストトロメタミン);カルグルミン酸;カルモフール;クロラムブシル;クラドリビン;クロファラビン;クロファジミン;コルヒチン;クルクミン;二フッ素化クルクミン(CDF);シクロホスファミド;シタラビン;シトシンアラビノシド;D−アミノレブリン酸;ダカルバジン;ダウノルビシン/ダウノマイシン;デフェラシロクス;デニロイキンジフチトクス(Ontak);ドセタキセル/タキソテール;ドキシフルリジン;ドキソルビシン/アドリアマイシン;エフロルニチン;エピルビシン;エレファントピン;エストラムスチン;リン酸エトポシド;フルダラビン;フルオロウラシル;フルオロオロチン酸;ホテムスチン;ゲムシタビン;グスペリムス;ヒドロキシカルバミド;水酸化尿素;イダルビシン/4−デメトキダウノルビシン;イホスファミド;インカドロネート;イリノテカン;ペグイリノテカン;ラパチニブ/ラパチニブジトシレート;ロムスチン;マソプロコール;メルファランHcl;メルカプトプリン;メトトレキサート(アメトプテリン);メチルアミノレブリン酸;ミトマイシン;ミトタン;ミトキサントロン;塩酸ニムスチン;オキタデシルホスホコリン;オルマプラチン;オキサリプラチン;パクリタキセル;ペグアスパラギナーゼ;ペメトレキセド;ペントスタチン/デオキシコホルマイシン;ポルフィマーナトリウム;プロカルバジン;プロテインキナーゼC抑制剤;ラルチトレキセド;フェニル酪酸塩ナトリウム;スタウロスポリン;ストレプトゾシン;タフルポシド;テモゾロマイド;テニポシド;チオグアニン;チオテパ;サイモポエチン;チオグアニン;トムデックス;トポテカン;トレチノイン;トロピセトロン塩酸塩;ウラムスチン(ウラシルマスタード);バルルビシン;ベルテポルフィン;ビンブラスチン;ビンクリスチン;ビンデシン;ビノレルビン;ボリノスタット。
本願に開示された分子を説明する好ましい実施形態は、CDFとも称されるクルクミン、二フッ素化クルクミンである。CDFの有益な坑癌特性は、当業界でよく説明されている(16、85〜92)。CDFの作用中の1つは、ヒストンメチルトランスフェラーゼEZH2であるが、これは、細胞生存、増殖及び癌幹細胞(CSC)機能の中心的な後成的調節者である。EZH2の発現は、非常に攻撃的な膵臓癌を含む多様なヒト癌で増加されているが、その生物学的有効性に内在した機序は未だあまり理解されていない実情である。著者は、抗酸化特性を保有したウコン香辛構成成分の新規類似体である二フッ素化クルクミン(CDF)を用いて、膵臓癌でのEZH2機能を調査した。CDFは、ヒト膵臓癌細胞において膵臓癌細胞の生存、増殖性細胞、パンクレアトスフィアー(pancreatospheres)形成、侵略性細胞移動及びCSC機能を減少させる。そのような有効性は、膵臓癌で一般的に消失されるlet−7a、b、c、d、miR−26a、miR−101、miR−146a、andmiR−200b、cを含めた腫瘍抑制性のmicroRNAs(miRNA)のパネルの発現増加と関連している。機序の研究は、miR−101の再発現が、EZH2及びプロ侵略的(proinvasive)細胞の表面接着分子EpCAMの発現制限に十分であるということを明らかにした。ヒト膵臓癌の同素異種移植モデルにおけるCDFの投与は、EZH2、Notch−1、CD44、EpCAM及びNanogの減少された発現、及びlet−7、miR−26a及びmiR−101の増加した発現に関連のある方式で腫瘍の成長を抑制する。取り合わせると、その結果は、CDFが後成的に制御される遺伝子発現のためのEZH2−miRNA調節回路を標的ちすることで、膵臓癌腫瘍の成長及び悪性を抑制することを示唆する。(89)
本願には、モノクローナル抗体、遺伝子物質等を含むペプチド、タンパク質を含む巨大分子の経口的送達の好ましい実施形態が記載されている。それらは、6kdを超え、最も頻繁には100kdを超える分子量を有した、考慮される大型生物学的分子であり、生物分子が一般的に本願に記載されたカプセル化及び経口的吸収及び細胞内吸収の原則に従うことから、疾患に対抗して活性である大型生物分子群の選択は、本発明を特定の疾患又は治療にのみ限定するものと考えられるべきでない。いずれの場合においても、本発明が属した分野の当業者は、同等な代案的実施形態があり、本発明の重要な特徴がタンパク質治療剤分野においてヒト患者での疾病治療のための完全な形態の生物分子の信頼性のある経口的吸収及び細胞内送達であることが理解できるはずである。モノクローナル抗体のベバシズマブ及びトラスツズマブは、カプセル化のための主な分子であるが、これらは限定と考えられるべきでなく、実際に、類似した長さ、電荷及び分子量を有した大部分のモノクローナル抗体は、本願に記載されたコレストソームのカプセル化と関連して類似に挙動するものである。
本願に開示された分子を説明する好ましい実施形態は、実施例1で説明した原理によってコレストソームのカプセル化されたベバシズマブを調製及び試験するためにそのリストから選択されたベバシズマブである。細胞表面受容体受容体標的部位の標的化のための経口的使用及び細胞内送達及び対応するIV使用のための特定の製剤を設計した。
製剤タンパク質ベバシズマブを、コレストソームへの取り込み前に、実施例1に記載された方式と同様にFITCで標識した。
トレンスウェル実験に用いられるCaco−2細胞は、100IU/mLペニシリン及び100mcg/mLストレプトマイシン、2mM1−グルタミン、1%不必須アミノ酸及び10%加熱不活性化ウシ胎児血清を補充したDulbecco≡s Modified EagleMedium(DMEM)で、5%C02/95%O2の雰囲気及び90%相対湿度下、37℃で培養した。Caco−2細胞は、吸収性の両極化された単層を形成し、頂点フラシ形境界を発生させて、21日間の培養後、酵素を分泌する。
MCF−7細胞は、図5、22及び23で各構築物に対する全ての対照実験に示されたように、コレストソームを容易に取る。それ以外は、本願に提示しなかった。上記は蛍光画像であるため、上記画像中のコレストソームの唯一の内容物は、コレストソームでカプセル化されたFITCに由来する。コレストソームによって積載した細胞膜の輪郭及びその後画像から、細胞全体的に、そして更にはその核を含むFITC標識の均一な分布に注意されたい。
製造日:2013年8月3日
DLLS粒子寸法10、510nm;未押出
百分率収率脂質出発量の20%
ゼータ電位:ベバシズマブに対しては未実施。トラスツズマブ:6.4
細胞:MCF−7;融合性製剤中で24時間目に400、000個の細胞。MCF−7細胞。寸法は2000nm
コレストソームだけ単独であるMCF−7細胞;24時間にわたって成長に有効性なし
FITC単独:24時間にわたって成長に有効性なし
ベバシズマブ単独:試験しない
FITCベバシズマブ単独;173mcg/mlまで:24時間にわたって成長に有効性なし
(図27)
FITCベバシズマブコレストソーム:約20mcg/ml;細胞によりよく容認される;2時間目に可視的な細胞内吸収を開始。
Caco−2細胞由来のFITCベバシズマブコレストソームカイロミクロン:視野にある全ての細胞が完全に死滅する4時間のMCF−7細胞上で15mcg/ml。(図28)
図27は、173mcg/mlの標的濃度のFITCベバシズマブをMCF−7細胞に適用後の2時間、4時間及び24時間目の暗視野(上端の熱)及び蛍光画像を示す。その濃度は、ベバシズマブ処理患者において一般的に観察されるより5〜10倍より大きい。FITCベバシズマブがそのようなMCF−7細胞の細胞膜と統合されるという証拠はない。MCF−7細胞による任意の時点におけるFITCベバシズマブの任意の蛍光吸収の証拠はなく、そのようなMCF−7細胞上にFITC−ベバシズマブの有効性の証拠もない。
図28.本実験において、FITCベバシズマブコレストソームを調製し、MCF−7細胞に対して試験した、2時間目には有効性がなく、細胞は、FITCベバシズマブコレストソームの吸収を示さなかった。次いで、これらの同一のFITCベバシズマブコレストソームをCaco−2細胞の頂端側に位置させ、結果として得られたFITCベバシズマブコレストソームカイロミクロンをMCF−7細胞上で試験した。下端列の第一番目のフレームは、FITCベバシズマブコレストソームカイロミクロンの大量吸収を示し、他の集中的に観察された有効性は、MCF−7細胞の迅速な細胞死滅であるが、それらが実験4時間になるまで全部死滅されたからである。
本発明の利用による経口用又は細胞内部での改善された作用のための代表的な巨大分子は、以下に挙げられたもののいずれか1つ又はそれらの組合せを含むことができ、本願に挙げられた化合物の開示後に発見された類似した寸法及び電荷の分子を含む:アダリムマブ(ヒュミラ);アブシキシマブ;アレムツズマブ;ベバシズマブ(アバスチン);バピニューズマブ;セツキシマブ;エタナーセプト(エムブレル);エロツズマブ;ゲムツズマブ;イノツズマブ;Isis−Genzyme社のKynamroTMミポメルセン;マブセラ/リツキシマブ;ナタリズマブ、Elan/Biogen社のタイサブリ;Eli Lilly社のネシツムマブ;パリビズマブ(シナジス);パニツムマブ;LDLコレステロール降下のためのRN316(Pfizer社の抗PCSK9)、REGN727(regeneron社の抗PCSK9);ソラネズマブ;トラスツズマブ(ハーセプチン);トシツモマブ;Roche/Genentech社の抗体薬物複合体であるT−DMl、これはトラスツズマブ(ハーセプチン)、DM1(エムタンシン)及びDM1をトラスツズマブに連結するリンカーからなる;T−DMlは、HER2信号伝逹を標的化して阻害し、DM1をHER2−陽性癌細胞内部に直接送達するために設計される;BRAFV600突然変異陽性転移性黒色腫に対するZelboraf(登録商標);アトロリムマブ;ベリムマブ;ブロダルマブ;カルルマブ;デュピマルマブ;フレソリムマブ;ゴリムマブ;レルデリムマブ;リリルルマブ(Lirilumab);ブリリムマブ;メテリムマブ;モロリムマブ;ナミルマブ;オキセルマブ;プラクルマブ;サリルマブ(Sarilumab);シファリムマブ;タバルマブ(Tabalumab);イピリムマブ;トレメリムマブ;ニボルマブ;ウレルマブ;ベルチリムマブ;ザノリムマブ;アフェリモマブ;エルシリモマブ;ファラリモマブ;ガビリモマブ;イノリモマブ;マスリモマブ;ネレリモマブ;オズリモマブ;テリモマブ;ベパリモマブ;ゾリモマバリトキス;バシリキシマブ;クレノリキシマブ;ガリキシマブ;ゴミリキシマブ;インフリキシマブ(Janssen社のレミケード);ケリキシマブ;ルミリキシマブ;プリリキシマブ;テネリキシマブ;バパリキシマブ;アセリズマブ;アポリズマブ;ベンラリズマブ(Benralizumab);セデリズマブ;セルトリズマブペゴール;ダクリズマブ;エクリズマブ;エファリズマブ;エプラツズマブ;エルリズマブ;エトロリズマブ(Etrolizumab);ホントリズマブ;イトリズマブ;ラムパリズマブ(Lampalizumab);リゲリズマブ(Ligelizumab);メポリズマブ;モガムリズマブ(Mogamulizumab);ナタリズマブ;オクレリズマブ;オファツムマブ;オマリズマブ;オゾラリズマブ(Ozoralizumab);パスコリズマブ;パテクリズマブ(Pateclizumab);ペキセリズマブ;ピジリズマブ(Pidilizumab);レスリズマブ;ロンタリズマブ;ロベリズマブ;ルプリズマブ;クィリズマブ(Quilizumab);サマリズマブ(Samalizumab);シプリズマブ;タリズマブ;テプリズマブ;トシリズマブ;トラリズマブ;ツレガリズマブ(Tregalizumab);ヴァテリズマブ(Vatelizumab);ベドリズマブ;ビシリズマブ;イバリズマブ;オテリキシズマブ;ブリアキヌマブ;カナキヌマブ;フェザキヌマブ;セクキヌマブ(Secukinumab);シルクマブ(Sirukumab);ツラロキヌマブ(Tralokinumab);ウステキヌマブ;アンルキヌズマブ(Anrukinzumab);クラザキズマブ(Clazakizumab);エノキズマブ(Enokizumab);ゲヴォキズマブ(Gevokizumab);イクセキズマブ(Ixekizumab);レブリキズマブ;オロキズマブ(Olokizumab);ペラキズマブ(Perakizumab);チルドラキズマブ(Tildrakizumab);ベシレソマブ;ファノレソマブ;レマレソマブ;スレソマブ。
本願に開示された分子中の好ましい実施形態は、PCSK−9に対するモノクローナル抗体であり、REGN727とも公知されたアリロクマブである。PCSK−9に対する代案的なモノクローナル抗体には、非限定的な例示としてエボロクマブ又はボコシズマブが含まれる。
実施例で開示された治療有益のタンパク質に特異的なPCSK9に対するモノクローナル抗体の経口用製剤は、強力な方式で上昇されたLDL及び経口用コレストソームのカプセル化のために選択されたタンパク質を制御する。
本願に開示された分子を説明する好ましい実施形態は、実施例1で説明された原則によるコレストソームのカプセル化の調製及び試験のための該リストから選択される、当業界においてアリロクマブとも公知されたREGN727である。治療時に毎月約100mgを服用する経口使用のための特定の製剤が設計された。
具体例として、平均直径が250〜450nmであるREGN727積載されたコレストソームが、実施例1に記載されたような本発明の方法で調製されることができる。REGN727を含むコレストソームは、2種類のコレステリルエステルの新規なブレンドを用いて調製される。そのような構築物は、用いられたより少ないLDLコレステロールであろう。その構築物は、スタチン系薬剤と併用して提供されるものであり、任意では、回腸ブレーキホルモン放出物質と併用して提供される。
HDLコレステロールを上昇させ、全てコレステロールを低下させるために、経口的REGN727が即時放出スタチン系薬剤とともに剤形化される。経口的PCSK−9処理との併用に適したスタチンのリストは、以下のものを含む:ロバスタチン、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シムバスタチン、プラバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン。例示として、10mg投与量のアトルバスタチンが好ましいが、全て単にフィルム−コーティングのみを必要条件とする即時放出性であるため、大部分の利用可能なスタチン分子が適合であることから、本発明は、アトルバスタチンのみに限定されない。
中性脂肪を低下させるために、REGN727及びスタチンの製剤が任意では、その全体内容及び全体製剤が本願に参考文献として含まれるUS2011/0268795に開示された回腸ブレーキホルモン放出物質の約10グラムと併用される。この製剤は、活性回腸ブレーキホルモン放出物質を対象の回腸から放出し、上昇された中性脂肪濃度を完全に制御する。本発明の発明者の研究結果、回腸に直接送達するAphoeline BrakeTMを用いた回腸ホルモンの慢性的な毎日刺激が身体恒常性を安定化して維持する傾向があるだけなく、断食状態でインスリン、グルコース、トリグリセリド及び測定される肝酵素の全ての異常な水準を減らすことを示す。また、アルファ−ペトタンパク質での有意な減少が、肝の炎症を減少させるものと見られる。インスリン耐性、中性脂肪及び肝での炎症の減少及び肝酵素の減少の組合せが、肝健康における有意な改善を示し、それらのホルモンが肝細胞再生及び肝健康維持において活動するように役割を示唆する。そのような有益な特性をスタチン及びPCSK9モノクローナル抗体と組み合わせることは、高脂血症の原因であり、結果的に粥状硬化性血管疾患を誘発するメタボリックシンドロームを抑制する、新規且つ総合的な接近法を患者に提供する。
そのような構成成分に起因する併用製品は、1日1回基準で高脂血症のある患者に投与され、結局、最小限の副作用で高脂血症を完全に抑制する結果をもたらす。
遺伝子物質
古典的遺伝学において、有性生殖有機体(一般的に真核生物類)では、生殖細胞が体細胞染色体の半分を有しており、ゲノムは、染色体の全体集合である。生殖細胞において遺伝子物質が半分となることは、減数分裂の間、相同染色体の分離によって行われる。完全又は半数体染色体から誘導される任意の物質が、遺伝子物質である。
C型肝炎ウイルス(HCV)の安定性及び増殖は、HCVゲノム及び肝発現microRNA−122(miR−122)の間の機能−相互作用に依存する。MicroRNAは、遺伝子発現を転写的に、そして転写後に改質するヒトゲノムによってエンコードされる小型非コーディングRNAである。microRNA−122(miR−122)は肝で支配的なmicroRNAを形成し、肝細胞で独歩的に発現される。これは、脂質代謝、細胞分化、鉄代謝及び肝で生物学的周期の調節を含む多様な異なるプロセスに連関されている。HCVの50個の未翻訳領域(UTR)が遺伝子型の間で高度に保存性であり、2個のmiR−122結合部位を含んでいるが、これの混乱は、HCV複製を遮断する。
ヒトゲノムに部位−特異的改質を提供(又は「編集」)する能力は、遺伝子の認識が遺伝の基本的な単位であるため、医薬において目標となって来た。ゲノム編集の挑戦課題は、DNA分子内に特異地点で一本一二本−破断を生成する能力である。メガヌクレアーゼを含む多数の薬物、DNA三重本を形成するオリゴヌクレオチド及びペプチド核酸を試験した事があり、非効率性によって制限されるものと現われた。他のクラスの試薬であるジンクフィンガーヌクレアーゼ(ZFN)は、ゲノム編集に多芸多才なものと示され、ZFNの利用は、現在多数のモデル有機体で、またヒト細胞で広く確立されている。
C型肝炎ウイルスの伝染生活周期
C型肝炎ウイルス(HCV)は、アポリポタンパク質B(apoB)及びE(apoE)と相互作用して感染性リポウイルス性粒子を形成する。peg−インターフェロンに対する応答は、インターフェロン−刺激遺伝子(ISGs)及びIL28B遺伝子型によって影響を受ける。LDLコレステロール(LDL−C)がまた、インターフェロン応答性を予測する。
有効なC型肝炎ワクチンは、脂質経路を通過してウイルスに追っていかなければならず、細胞及びたぶん脂質粒子自体中のその存在の免疫学的認識を提供する。したがって、送達のために、ワクチン構築物をカイロミクロンに位置させる経口的で吸収されるコレストソーム製剤は、ワクチン接種に対する新規な接近法である。
アジュバントが存在する経口用コレストソームのカプセル化ワクチンのその同一の接近法が、T−リンパ球に隠れるHIV、神経組織に隠れる帯状ヘルペス、及び肝炎ウイルスと類似した特性を有するその他のフラビウイルス構築物を含むウイルスが、身体細胞に隠れるその他の慢性ウイルス感染に用いることができる。
本発明において、感染性疾患の治療のためにIV注射により用いられる分子が、一般的にコレストソームへのカプセル化に好適であり、軟膏又はクリームとして局所的に用いられる。
本願に開示された分子を説明する好ましい実施形態は、実施例1で挙げられた原則によってコレストソームのカプセル化トブラマイシンの調製及び試験のための当該リストから選択されたトブラマイシンである。特定の製剤が経口的使用のために、またシュードモナスアエルギノーザ(Pseudomonas aeruginosa)のような標的グラム陰性バクテリアに対する抗生剤トブラマイシンの全般的作用を増加させるために設計された。局所用トブラマイシンの製剤は、シュードモナス疾患である悪性外耳炎を有効に抑制することができるか、又は嚢胞性繊維症のある患者でシュードモナス菌を有効に防除するために吸入することができる。
化粧品の適用で働くコレストソームのカプセル化分子の能力は、当分野で予想される発見である。
実施例5に開示されたような二フッ素化クルクミン(CDF)のコレストソーム製剤がまた、皮膚癌の治療に局所的に用いることができる。
本発明において、感染性疾患の治療のためにIV注射によって用いられる分子が、一般的にコレストソームへのカプセル化に適合して、吸入用に用いられるが、ここで、コレストソームによる送達は、カプセル化された化合物の肺胞及び気管支内側を取り囲む細胞への浸透を強化するものと予測される。これは、細胞浸透を強化せず、より長い期間当該部位においてリポソームに化合物を担持しているだけの先行技術のリポソームの用途を凌ぐ、新規なものである。
そのような適用のためには、できるように100nm未満の非常に小さなナノ粒子が、吸入器内のコレストソームのカプセル化分子の包含に必要であることに留意しなければならない。
Kleemannらの文献Pharm Res 2007:肺動脈高血圧(PAH)は、重度の進行性疾患である。プロスタサイクリン類似体のイロプロストはPAHに有効であるが、1日当たり6〜9回の吸入を必要とする。吸入頻度を減らす徐放型放出製剤を提供するリポソームの実現可能性を、技術的観点から評価した。
Elhissi AMらの文献、J Pharm Pharmacol.2006;58:887−94.マルチラメラ及びオリゴラメラリポソームを、等張性塩化ナトリウム又はスクロース溶液の添加によるエタノール系大豆ホスファチジル−コリンプロリポソーム製剤から調製した。結果として得られるリポソームは、従来通り調製されたリポソームによっては1.23%のみが捕獲されることに比べて、利用可能なサルブタモールサルフェートの62%まで捕獲した。製剤は、エアジェットネブライザー(Pari LC Plus)又は振動網ネブライザー(Aeroneb Pro small mesh、Aeroneb Pro large mesh、又はOmron NE U22)を用いてエアゾル化した。AH振動網ネブライザーは、エアジェットネブライザーに比べてより大きな体積中間直径(VMD)及びより狭い寸法分布を有したエアゾル液滴を提供した。リポソーム分散媒の選択は、Pariネブライザーの性能にほとんど影響がなかった。しかし、Aeroneb Pro小型網及びOmron NE U22に対しては、スクロース溶液の使用が液滴のVMDを増加させ、ネブライザーからのエアゾル質量及びリン脂質出力を減少させる傾向があった。Aeroneb Pro大型網に対しては、スクロース溶液が、ネブライザー提供の液滴のVMDを増加し、リン脂質の出力を増加し、エアゾル質量出力に影響を与えなかった。Omron NE U22ネブライザーは、製剤とは関係なく最高質量出力(約100%)を提供し、送達速度は、スクロース−分散製剤と比較する時、NaCl−分散リポソームに対して遥かにより高かった。噴霧化は、リポソーム由来の捕獲された薬物の相当な損失を提供し、これは、小胞寸法の減少を伴う。薬物損失は、ジェットネブライザーよりは振動網ネブライザーにおいてより少ない傾向がある。大型穿孔寸法網(8mum)Aeroneb Proネブライザーは、ツイン集塵装置のより低いステップに送達される、捕獲された薬物の比率を増加させる。そのような研究は、プロリポソーム製剤から生成されたリポソームがエアジェット又は振動網ネブライザーを用いて、小型液滴にエアゾル化可能であることを立証した。ジェットネブライザーとは対照的に、振動網ネブライザーの性能は製剤に大きく依存する。採用されたネブライザーによって提供される高いリン脂質の出力は、エアジェット及び振動網ネブライザーが、いずれもリポソーム捕獲又は可溶化された疎水性薬物の気道への送達潜在性を提供できることを示唆する。
100nm以下のコレストソームへのカプセル化及びエアゾル送達によって用いられる標的化合物には、嚢胞性線維腫感染に対するトブラマイシン、肺癌腫に対する二フッ素化クルクミン、肺癌腫に対するsiRNA、MRSAによって誘発される肺炎に対するバンコマイシン、グラム陰性肺炎に対するホスホマイシンが含まれる。
臨床開発中に最近開発されたモノクローナル抗体は、モノクローナル抗体の吸入されるコレストソーム製剤の追加の例示である。臨床試験中である、完全ヒト化されたIgGlIL−5−特異的モノクローナル抗体であるメポリズマブは、高容量で吸入されるコルチコステロイド及び追加の制御剤薬物を用いては悪化減少を示さない、重度の好酸性喘息がある患者における臨床第2相III期研究においてその1次的な終端点に符合した。二重盲検法併用群、多重中心、プラシーボ制御、無作為MEAl15588研究において、12歳以上の576人の患者に75mgの静脈内メポリズマブ又は100mgの皮下(SC)メポリズマブを合計32週間の期間にかけて4株毎に提供した。75−mg IV処理部における患者の47%及び100−mg SC処理部における患者の53%が、研究中の悪化減少の1次終端点に符合した。MEAl15575で公知されている、第2の二重盲検法併用群、多重中心、プラシーボ制御、無作為研究において、12歳以上の135人の患者に100mgのSCメポリズマブを合計24週間の期間にかけて4週毎に提供した。上記研究は、第20〜24週間喘息の抑制を維持しながら、経口用コルチコステロイド使用減少の1次的終端点に符合した。会社では、メポリズマブに対する規制承認の申し込みを計画しており、また、COPD及び多発性脈管炎のある好酸性肉芽腫症でのメポリズマブの調査開発を続ける。
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Claims (84)
- ナノ粒子の小胞にカプセル化された薬学的活性剤を含む医薬組成物であって、前記ナノ粒子の小胞は、前記薬学的活性剤を含有する核と、前記核及び前記薬学的活性剤を取り囲む表面層とを含む中性表面を有し、前記表面層は、コレステロールから作られた1種以上の非イオン性のコレステリルエステルと、少なくとも1つのC4−C36脂肪酸とから主としてなり、1種以上のコレステリルエステルに対する前記薬学的活性剤の質量比は、約4:96〜約96:4の間であり、前記ナノ粒子は、前記コレストソームがない場合に得られる濃度の少なくとも2倍の濃度で、前記薬学的活性剤を患者又は対象の細胞内に送達可能である、医薬組成物。
- 前記医薬組成物は、前記小胞の体積の約10%〜約96%が前記薬学的活性剤によって占有される単一薄膜小胞である、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物は、1種以上のコレステリルエステルをジエチルエーテルと組み合わせ、結果として得られる有機相を真空下に除去し、水相を導入することを含む工程によって作られた小胞の集団を含む、請求項1に記載の医薬組成物。
- 経口剤形であって、患者又は対象への経口投与後に、コレステリルエステルは十二指腸腸細胞の表面上のコレステロール輸送体と反応してカイロミクロンに浸透し、前記医薬組成物の経口吸収及び前記薬学的活性剤が放出された細胞に吸収されることができる形質転換カイロミクロンの産生をもたらす、請求項1〜3のいずれかに記載の医薬組成物。
- 前記コレステリルエステルは、コレステロールをC8−C26脂肪酸でエステル化されることによって形成される、請求項1〜4のいずれかに記載の医薬組成物。
- 前記コレステリルエステルは、コレステロール自体を、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノレライド酸、α−リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、エルカ酸、ドコサヘキサエン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、セロチン酸、又はそれらの混合物からなる群から選択される脂肪酸でエステル化されることによって形成される、請求項1〜4のいずれかに記載の医薬組成物。
- 前記コレステリルエステルは、コレステリルミリステート、コレステリルラウレート、コレステリルドデコネート、コレステリルパルミテート、コレステリルアラキドネート、コレステリルベヘネート、コレステリルリノレート、コレステリルリノレナート、コレステリルオレエート、コレステリルステアレート及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項1〜5のいずれかに記載の医薬組成物。
- 前記コレステリルエステルは、コレステロールの酸素添加類似体の、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノレライド酸、α−リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、エルカ酸、ドコサヘキサエン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、セロチン酸、又はそれらの混合物からなる群から選択される脂肪酸とのエステル化から得られる、請求項1〜5のいずれかに記載の医薬組成物。
- 前記薬学的活性剤は、ミコナゾール、テルコナゾール、エコナゾール、イソコナゾール、チオコナゾール、ビホナゾール、クロトリマゾール、ケトコナゾール、ブドコナゾール、イトラコナゾール、オキシコナゾール、フェンチコナゾール、ナイスタチン、ナフチフィン、ミカファンギン、カスポファンギン、アンチデュラファンギン、アムホテリシンB、ジノコナゾール、シクロピロクスオラミン及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項1〜7のいずれかに記載の医薬組成物。
- 前記組成物は、局所投与、吸入用エアゾルでの経口投与、膣内投与される、請求項1〜3及び5〜9に記載の医薬組成物。
- 前記組成物はペプチドを含み、該ペプチドは、
(a)親水性ペプチド、ヒト成長ホルモン、プロラクチン、オキシトシン、カルシトニン、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモン、グレリン、GLP−1、PYY36、オキシントモジュリン、GLP−2、グルカゴン、及びレギュラーインスリン、NPNインスリン、レンテインスリン、組み換えインスリン、インスリングラルギン、インスリンリスプロ、インスリンデグルデクなどのいずれかのインスリン化合物からなる群より選択され、
(b)2種類のコレステリルエステルから主としてなる表面層によってカプセル化される、
請求項1〜10のいずれかに記載の医薬組成物。 - 前記薬学的活性剤は、タンパク質、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、抗生剤又は抗ウイルス剤である、請求項1〜11のいずれかに記載の医薬組成物。
- コレステリルエステルの前記小胞の前記表面層は、腸溶コーティングされる、請求項1〜12のいずれかに記載の医薬組成物。
- 前記小胞の前記表面層は、約2〜約14のpHの範囲において損なわれない、請求項1〜13のいずれかに記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物は、約100nm〜約750nm、しばしば約200〜約300nmの直径を有する単一薄膜小胞である、請求項1〜14のいずれかに記載の医薬組成物。
- 前記小胞は、約1nm〜約10、000nmの範囲の直径を有する、請求項1〜14のいずれかに記載の医薬組成物。
- 前記コレステリルエステルは、薬学的活性剤−コレステリルエステル官能基相互作用に基づいて1種以上の前記コレステリルエステルを選択することにより、1種以上の前記コレステリルエステルに対する前記薬学的活性剤の質量比を最大化する交互嵌合型の交互アルキル鎖モデルを用いて選択される、請求項1〜16のいずれかに記載の医薬組成物。
- 前記薬学的活性剤は、インスリン、親水性ペプチド、ヒト成長ホルモン、プロラクチン、オキシトシン、カルシトニン、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモン、グレリン、GLP−1、PYY36、オキシントモジュリン、GLP−2、グルカゴン、インターフェロン及びインスリン、二フッ素化クルクミン、セフタロリン、バンコマイシン、ベバシズマブ、ベバシズマブ、トラスツズマブ、アリロクマブ、又は抗PCSK−9モノクローナル抗体の化合物からなる群から選択される、請求項1〜11に記載の医薬組成物。
- 前記薬学的活性剤は、抗脂質異常症モノクローナル抗体であり、前記医薬組成物は、スタチンを更に含む、請求項1〜8、10、又は13〜18のいずれかに記載の医薬組成物。
- (a)前記医薬組成物は単一薄膜小胞であり、
(b)前記医薬組成物は、約200〜約1000nmのナノ粒子直径を有し、
(c)前記小胞の体積の約10%〜約96%が前記薬学的活性剤によって占有され、
(d)前記薬学的活性剤は、インスリン、バンコマイシン、二フッ素化クルクミン、セフタロリン、ベバシズマブ、REGN727としても知られるアリロクマブ、PCSK−9をブロックする抗脂質異常症モノクローナル抗体からなる群から選択される、
請求項1〜14に記載の医薬組成物。 - 請求項11〜20に記載の医薬組成物の薬学的有効量を前記対象に投与することを含む、炎症関連代謝障害を患う対象を治療する方法。
- 前記炎症関連代謝障害は、肺疾患、高血糖障害及び癌からなる群から選択される、請求項21に記載の方法。
- 前記炎症関連代謝障害は、1型及び2型糖尿病、重度のインスリン抵抗性、高インスリン血症、異常脂肪血症、上昇した低密度リポタンパク質(LDL)、減少した高密度リポタンパク質(HDL)、上昇したトリグリセリド、及びインスリン抵抗性糖尿病からなる群から選択される、請求項21に記載の方法。
- 前記薬学的活性剤は、PCSK9に対する抗脂質異常症モノクローナル抗体であり、前記医薬組成物は、スタチン及び回腸ブレーキホルモン放出物質を更に含む、請求項21に記載の方法。
- 前記炎症関連代謝障害は癌であり、前記薬学的活性剤は、二フッ素化クルクミン、トラスツズマブ及びベバシズマブからなる群から選択される、請求項21に記載の方法。
- 前記組成物は、回腸ブレーキホルモン放出物質を更に含む、請求項21〜25のいずれかに記載の方法。
- 前記薬学的活性剤は、抗生剤などの親水性の抗感染物質である、請求項1〜8、10、及び13〜17のいずれかに記載の組成物。
- 前記薬学的活性剤は、アムホテリシンB、HIVウイルス、B型肝炎又はC型肝炎に対して活性な化合物、あるいはバンコマイシン、グリコペプチド、セフタロリン、セファロスポリン、ホスホマイシン、シナシッド、又はマクロライド若しくはマクロライド様抗生剤である、請求項1〜8、10、及び13〜17のいずれかに記載の組成物。
- 前記薬学的活性剤は、インターフェロン、ペグ化インターフェロン、ペグ化インターフェロンラムダ、又はインターフェロンのいずれかの他の適合した製剤である、請求項1〜8、10、及び13〜17のいずれかに記載の組成物。
- 前記コレストソームの小胞は、該小胞にインターフェロンを最適に積載するために、炭素単位が約2以下のおおよそ等しい鎖長の1種以上のコレステリルエステルから形成される、請求項29に記載の組成物。
- 前記薬学的活性剤は、ヒト免疫不全ウイルス1型若しくは2型(HIV−1型若しくは2型)、B型肝炎又はC型肝炎に対して活性な抗ウイルス剤である、請求項1〜8、10、及び13〜17のいずれかに記載の組成物。
- 前記抗ウイルス剤は、リバビリン、テラプレビル、ダクラタスビル、アスナプレビル、ボセプレビル、ソホスブビル、BI201335、BI1335;ACH−2928、ACH1625;ALS−2158;ALS2200;BIT−225;BL−8020;アリスポリビル;IDX19368;IDX184;IDX719;シメプレビル;BMS−790052;BMS−032;BMS−791325;ABT072;ABT333;TMC435;ダノプレビル;VX222;メリシタビン;MK−8742、GS−5885又はそれらの混合物である、請求項31に記載の組成物。
- 前記抗ウイルス剤は、インターフェロン、ペグ化インターフェロン、ペグ化インターフェロンラムダ又はインターフェロンの別の適した製剤と組み合わせられる、請求項31又は32に記載の組成物。
- 必要とする患者における肝臓脂肪症を効果的に治療する経口投与される回腸ブレーキホルモン放出物質を更に含む、請求項28〜33のいずれかに記載の組成物。
- 前記GLP−1分子は、DPP−IV酵素分解に対する安定性を改善するために又は血液における循環時間を長くするために変更され、リキシセナチド、エキセナチド、リラグルチド、アルビグルチドの市販製剤、又はそれらの誘導体を含む、請求項11〜18のいずれかに記載の組成物。
- 必要とする患者におけるメタボリックシンドロームを効果的に治療する経口投与される回腸ブレーキホルモン放出物質を更に含む、請求項35に記載の組成物。
- 前記回腸ブレーキホルモン放出物質は、前記患者又は対象の回腸に送達される有効量のグルコースである、請求項24、26、34又は36のいずれかに記載の組成物。
- 中空部を有した積荷積載コレステリルエステル脂質ナノ粒子(コレストソーム)であって、該コレストソームは薬学的活性剤を含有し、前記ナノ粒子は少なくとも1種の非イオン性のコレステリルエステルから本質的になり、前記活性剤は、前記コレステリルエステルナノ粒子がない場合に十二指腸の腸細胞を認め得るほどには通過することができず、前記積荷積載コレステリルエステルナノ粒子は、中性表面を有しており、経口的に吸収される栄養素脂質の方法で前記積荷積載ナノ粒子が投与された患者又は対象の十二指腸の腸細胞を通過する能力を有しており、カイロミクロンに組み込まれてナノ粒子積載カイロミクロンを生成する、積荷積載コレステリルエステル脂質ナノ粒子。
- 前記積荷積載コレストソームと結合した前記ナノ粒子を含有するカイロミクロンは前記患者での細胞に取り込まれ、前記コレストソームは解体されて、治療又は診断結果をもたらすためにカプセル化された前記活性剤を細胞膜の内部で放出する、請求項39に記載の積荷積載コレストソーム。
- ある経路での投与による前記患者又は対象における前記細胞での前記活性剤の治療効果は、前記積荷積載コレストソームがない場合の前記患者又は対象における同じ経路での投与による前記活性剤の効果より明らかに大きい、請求項38又は39に記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記非イオン性のコレステリルエステルは、コレステロールをエステル化することによって、又は1種以上のC4−C36(好ましくはC8−C26)脂肪酸を用いて形成される、請求項38〜40のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- それぞれの前記コレストソームの小胞の直径は、約1nm〜約1ミクロンの範囲である、請求項38〜41のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記コレステリルエステルは、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノレライド酸、α−リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、エルカ酸、ドコサヘキサエン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、セロチン酸、又はそれらの混合物からなる群から選択される脂肪酸から形成される1種以上の前記非イオン性のコレステリルエステルを含む、請求項38〜42のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記中性表面は、約−40〜+20のゼータ電位として規定される、請求項38〜43のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記中性表面は、約−40〜+10のゼータ電位として規定される、請求項38〜44のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記中性表面は、約−5〜+5のゼータ電位として規定される、請求項38〜45のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記中性表面は約0として規定される、請求項38〜46のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記活性剤は、タンパク質、ポリペプチド、及び/又はポリヌクレオチドからなる群から選択される、請求項38〜47のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記コレステリルエステルは、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノレライド酸、α−リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、エルカ酸、ドコサヘキサエン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、セロチン酸、又はそれらの混合物からなる群から選択される非イオン性の脂肪酸から形成される1種以上の非イオン性のコレステリルエステルを含む、請求項38〜42及び44〜48のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記活性剤は、抗生剤、抗真菌薬、抗ウイルス剤、抗癌剤及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項38〜49のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記活性剤は、アムホテリシンB、HIVウイルス、B型肝炎又はC型肝炎に対して活性な化合物、あるいはバンコマイシン、グリコペプチド、セフタロリン、セファロスポリン、ホスホマイシン、シナシッド、又はマクロライド若しくはマクロライド様抗生剤からなる群から選択される、請求項38〜49のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記活性剤は、モノクローナル抗体、スタチン、タンパク質、抗癌剤、抗生剤、抗真菌薬、抗ウイルス剤、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項38〜49のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記活性剤は、インスリン、バンコマイシン、セフタロリン、イロプロスト、サルブタモール、トブラマイシン、アリロクマブ、スタチン、ベバシズマブ、二フッ素化クルクミン、又はそれらの混合物である、請求項38〜49のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記モノクローナル抗体は、アダリムマブ(ヒュミラ);アブシキシマブ;アレムツズマブ;ベバシズマブ(アバスチン);バピニューズマブ;セツキシマブ;エタナーセプト(エムブレル);エロツズマブ;ゲムツズマブ;イノツズマブ;Isis−Genzyme社のKynamroTMミポメルセン;マブセラ/リツキシマブ;ナタリズマブ、Elan/Biogen社のタイサブリ;メポリズマブ;Eli Lilly社のネシツムマブ;パリビズマブ(シナジス);パニツムマブ;RN316(Pfizer社の抗PCSK9)、REGN727(アリロクマブとも呼ばれるregeneron社の抗PCSK9)又はエボロクマブ若しくはボコシズマブ、LDLコレステロール降下のための全てのモノクローナル抗体;ソラネズマブ;トラスツズマブ(ハーセプチン);トシツモマブ;Roche/Genentech社の抗体薬物複合体であるT−DMl、これはトラスツズマブ(ハーセプチン)、DM1(エムタンシン)及びDM1をトラスツズマブに連結するリンカーからなる;T−DMlは、HER2信号伝逹を標的化して阻害し、DM1をHER2−陽性癌細胞内部に直接送達するために設計される;BRAFV600突然変異陽性転移性黒色腫に対するZelboraf(登録商標);アトロリムマブ;ベリムマブ;ブロダルマブ;カルルマブ;デュピマルマブ;フレソリムマブ;ゴリムマブ;レルデリムマブ;リリルルマブ(Lirilumab);ブリリムマブ;メテリムマブ;モロリムマブ;ナミルマブ;オキセルマブ;プラクルマブ;サリルマブ(Sarilumab);シファリムマブ;タバルマブ(Tabalumab);イピリムマブ;トレメリムマブ;ニボルマブ;ウレルマブ;ベルチリムマブ;ザノリムマブ;アフェリモマブ;エルシリモマブ;ファラリモマブ;ガビリモマブ;イノリモマブ;マスリモマブ;ネレリモマブ;オズリモマブ;テリモマブ;ベパリモマブ;ゾリモマバリトキス;バシリキシマブ;クレノリキシマブ;ガリキシマブ;ゴミリキシマブ;インフリキシマブ(Janssen社のレミケード);ケリキシマブ;ルミリキシマブ;プリリキシマブ;テネリキシマブ;バパリキシマブ;アセリズマブ;アポリズマブ;ベンラリズマブ(Benralizumab);セデリズマブ;セルトリズマブペゴール;ダクリズマブ;エクリズマブ;エファリズマブ;エプラツズマブ;エルリズマブ;エトロリズマブ(Etrolizumab);ホントリズマブ;イトリズマブ;ラムパリズマブ(Lampalizumab);リゲリズマブ(Ligelizumab);メポリズマブ;モガムリズマブ(Mogamulizumab);ナタリズマブ;オクレリズマブ;オファツムマブ;オマリズマブ;オゾラリズマブ(Ozoralizumab);パスコリズマブ;パテクリズマブ(Pateclizumab);ペキセリズマブ;ピジリズマブ(Pidilizumab);レスリズマブ;ロンタリズマブ;ロベリズマブ;ルプリズマブ;クィリズマブ(Quilizumab);サマリズマブ(Samalizumab);シプリズマブ;タリズマブ;テプリズマブ;トシリズマブ;トラリズマブ;ツレガリズマブ(Tregalizumab);ヴァテリズマブ(Vatelizumab);ベドリズマブ;ビシリズマブ;イバリズマブ;オテリキシズマブ;ブリアキヌマブ;カナキヌマブ;フェザキヌマブ;セクキヌマブ(Secukinumab);シルクマブ(Sirukumab);ツラロキヌマブ(Tralokinumab);ウステキヌマブ;アンルキヌズマブ(Anrukinzumab);クラザキズマブ(Clazakizumab);エノキズマブ(Enokizumab);ゲヴォキズマブ(Gevokizumab);イクセキズマブ(Ixekizumab);レブリキズマブ;オロキズマブ(Olokizumab);ペラキズマブ(Perakizumab);チルドラキズマブ(Tildrakizumab);ベシレソマブ;ファノレソマブ;レマレソマブ;スレソマブ又はそれらの混合物である、請求項52に記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記活性剤は、ミコナゾール、テルコナゾール、エコナゾール、イソコナゾール、チオコナゾール、ビホナゾール、クロトリマゾール、ケトコナゾール、ブドコナゾール、イトラコナゾール、オキシコナゾール、フェンチコナゾール、ナイスタチン、ナフチフィン、アムホテリシンB、ジノコナゾール、シクロピロクスオラミン、ミカファンギン、カスポファンギン、アンチデュラファンギン、又はそれらの混合物からなる群から選択される抗真菌薬である、請求項38〜49のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記活性剤は、アミノグリコシド、アンサマイシン、カルバペネム、セファロスポリン、グリコペプチド抗生剤、リンコサミド抗生剤、リポペプチド抗生剤、マクロライド抗生剤、モノバクタム抗生剤、オキサゾリジノン、ペニシリン抗生剤、ペニシリン合剤、ポリペプチド抗生剤、キノロン/フルオロキノリン抗生剤、スルホンアミド抗生剤、テトラサイクリン抗生剤、抗ミコバクテリア又はそれらの混合物からなる群から選択される抗生剤である、請求項38〜49のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記活性剤は抗ウイルス剤である、請求項38〜49のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記抗ウイルス剤は、ヒト免疫不全ウイルス1型若しくは2型(HIV−1型若しくは2型)感染、B型肝炎ウイルス(HBV)感染、又はC型肝炎ウイルス(HCV)感染の処置において治療上有用である、請求項57に記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記活性剤は、ポリペプチド又はポリヌクレオチドである、請求項38〜49のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記活性剤は、microRNAのmiR−122である、請求項38〜49のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記活性剤は、ヒューマログ、リスプロ、デグルデク、グラルギン、NPN、レンテ、アスパルト、ノボリン、デテミルなどの1つ以上の形態のインスリンを含む、請求項38〜49のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記活性剤はワクチンであり、前記コレストソームは、患者の免疫系に対する前記ワクチンの免疫原性効果を高めるために任意で更にアジュバントを含む、請求項38〜49のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記ワクチンは免疫原性ペプチドを含む、請求項62に記載の積荷積載コレストソーム。
- 前記活性剤は、トブラマイシン、バンコマイシン、セフタロリン、インスリン、ベバシズマブ、トラスツズマブ、遺伝子物質、又はワクチン株細胞からなる群から選択される、請求項38〜49のいずれかに記載の積荷積載コレストソーム。
- 積荷積載コレストソームの集団を含む医薬組成物であって、該組成物は、有効量の請求項38〜64のいずれかに記載の積荷積載コレストソームを含む、医薬組成物。
- 経口投与、局所投与、膣内投与又は吸入投与に適用される、請求項65に記載の組成物。
- 経口投与に適用される、請求項65に記載の組成物。
- 前記コレストソームがない場合に得られる濃度の少なくとも2倍の濃度で、前記組成物を投与された患者又は対象の細胞に前記活性剤を送達する、請求項65〜67のいずれかに記載の組成物。
- 患者又は対象の細胞内の標的に薬学的活性剤を送達する方法であって、該方法は、請求項38〜49のいずれかに記載の積荷積載コレストソームを前記患者又は対象に投与することを含み、前記コレストソームは、前記患者又は対象の十二指腸の腸細胞に吸収され、カイロミクロンに組み込まれ、前記コレストソームは細胞と結合して前記活性剤を含むその内容物を前記細胞内で放出し、前記細胞内の活性濃度は、前記活性剤が従来の手段を用いて前記細胞に送達された場合より大きい、方法。
- 前記積荷積載コレストソームは経口で投与される、請求項69に記載の方法。
- 前記積荷積載コレストソームは、局所、膣内又は吸入により送達される、請求項69に記載の方法。
- 必要とする患者における脂質異常症を治療する方法であって、該方法は、請求項38〜49のいずれかに記載の積荷積載コレストソームを含む組成物を投与することを含み、前記活性剤は、PCSK−9モノクローナル抗体を含み、スタチン系薬剤を含むことができ、更に回腸ブレーキホルモン放出物質を含むことができる、方法。
- 前記PCSK−9抗体は、REGN727若しくはアリロクマブ、又はエボロクマブ若しくはボコシズマブであり、前記スタチンは、アトルバスタチン、シムバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチンであり、前記回腸ブレーキホルモン放出物質は、前記患者又は対象の回腸において放出されるグルコースである、請求項72に記載の方法。
- 1型糖尿病を治療する方法であって、該方法は、請求項18に記載の積荷積載コレストソームの集団を含む組成物を、必要とする患者又は対象に投与することを含み、前記薬学的活性剤はインスリンである、方法。
- HIV−1型及び2型、HBV又はHCVからなる群から選択されるウイルス感染を治療する方法であって、請求項58に記載の組成物を、必要とする患者又は対象に投与することを含む、方法。
- 前記ウイルス感染はHIVであり、前記活性剤は、3TC(ラミブジン)、AZT(ジドブジン)、(−)−FTC、ddl(ジダノシン)、ddC(ザルシタビン)、アバカビル(ABC)、テノホビル(PMPA)、D−D4FC(レバーセット)、D4T(スタブジン)、ラシビル、L−FddC、L−FD4C(エルブシタビン)、ペンスティナビル、NVP(ネビラピン)、DLV(デラビルジン)、EFV(エファビレンツ)、SQVM(サキナビルメシラート)、RTV(リトナビル)、IDV(インジナビル)、SQV(サキナビル)、NFV(ネルフィナビル)、APV(アンプレナビル)、LPV(ロピナビル)、フセオン(fuseon)、ネビラピン(BI−R6−587)、デラビルジン(U−90152S/T)、エファビレンツ(DMP−266)、UC−781(N−[4−クロロ−3−(3−メチル−2−ブテニルオキシ)フェニル]−2−メチル3−フランカルボチオアミド)、エトラビリン(TMC125)、トロビルジン(Ly300046.HCl)、MKC−442(エミビリン、共同アクチノン)、HI−236、HI−240、HI−280、HI−281、リルピビリン(TMC−278)、MSC−127、HBY097、DMP266、バイカリン(TJN−151)、U−104489又はPNU−104489)、カプラビリン、アテビルジンカラノリドA(NSC675451)、カラノリドB、フォスカーネット(フォスカヴィール)、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項75に記載の方法。
- 前記ウイルス感染はHBVであり、前記活性剤は、ヘプセラ(アデフォビルジピボキシル)、ラミブジン、エンテカビル、テルビブジン、テノホビル、エムトリシタビン、クレブジン、バルトリシタビン、アムドキソビル、プラデホビル、ラシビル、BAM205、ニタゾキサニド、UT231−B、Bay41−4109.EHT899、ザダキシン(チモシンα−1)、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項75に記載の方法。
- 前記ウイルス感染はHCVであり、前記活性剤は、リバビリン、インターフェロン、ペグ化インターフェロン、ボセプレビル、ダクラタスビル、アスナプレビル、INX−189、FV−100、NM283、VX−950(テラプレビル)、SCH50304、TMC435、VX−500、BX−813、SCH503034、R1626、ITMN−191(R7227)、R7128、PF−868554、TT033、CGH−759、GI5005、MK−7009、SIRNA−034、MK−0608、A−837093、GS9190、GS9256、GS9451、GS5885、GS6620、GS9620、GS9669、ACH−1095、ACH−2928、GSK625433、TG4040(MVA−HCV)、A−831、F351、NS5A、NS4B、ANA598、A−689、GNI−104、IDX102、ADX184、ALS−2200、ALS−2158、BI201335、BI207127、BIT−225、BIT−8020、GL59728、GL60667、PSI−938、PSI−7977、PSI−7851、SCY−635、TLR9アゴニスト、PHX1766、SP−30、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項75に記載の方法。
- 前記活性剤はmiR−122と共投与される、請求項78に記載の方法。
- 患者又は対象の細胞において発現した標的に活性剤を送達するための薬剤の剤形である医薬の製造における、請求項38〜49のいずれかに記載の積荷積載コレストソームの使用であって、前記コレストソームは、前記活性剤を治療の標的にされた細胞内に送達し、前記コレストソームは、前記コレストソームがない場合に前記活性剤が細胞に送達される時の少なくとも2倍の量で前記活性剤を標的細胞内に送達する、使用。
- 前記積荷積載コレストソームは経口投与される、請求項80に記載の使用。
- 前記コレストソームは、前記コレストソームがない場合に前記活性剤が細胞に送達される時の少なくとも10倍の量で標的細胞に前記活性剤を送達する、請求項80又は81に記載の使用。
- 前記コレストソームは、局所、膣内又は吸入により投与される、請求項80に記載の使用。
- 疾患を治療するための医薬の製造における請求項38〜49のいずれかに記載の積荷積載コレストソームの使用。
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