JP2016187319A - 転写因子変異株 - Google Patents
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Abstract
Description
[1] ace1遺伝子、xlnR遺伝子、及びclbR遺伝子からなる群から選択される一以上の遺伝子を高発現する、あるいは、clr2遺伝子の機能が欠損している、タラロマイセス(Talaromyces)属糸状菌CF−2612株(受託番号FERM P−21290)又はC1株(受託番号FERM P−18508)の変異株。
[2] ace1遺伝子を高発現する、[1]の変異株。
[3] clbR遺伝子を高発現する、[1]の変異株。
[4] xlnR遺伝子を高発現する、[1]の変異株。
[5] xlnR遺伝子及びclbR遺伝子を高発現する、[1]の変異株。
[6] clr2遺伝子が欠失している、[1]の変異株。
[7] セルロース含有原料を含む培地中にて、[1]〜[6]のいずれかの変異株を培養することを含む、セルラーゼ及び/又はヘミセルラーゼの製造方法。
[8] 培地がさらに糖類を含む、[7]の方法。
[9] [7]又は[8]の方法により得られた、セルラーゼ及び/又はヘミセルラーゼ。
[10] [7]又は[8]の方法により得られたセルラーゼ及び/又はヘミセルラーゼを用いてバイオマス資源を分解または糖化することを含む、バイオマス資源の分解または糖化方法。
本発明は、セルラーゼ及び/又はヘミセルラーゼの生産能が高い、タラロマイセス(Talaromyces)属糸状菌の変異株に関する。
セルラーゼ及び/又はヘミセルラーゼの生産は、上記本発明の変異株を培養することにより行うことができる。
上記生産されたセルラーゼ及び/又はヘミセルラーゼ、ならびにそれらの粗酵素液は、バイオマス資源の分解又は糖化に用いることができる。
タラロマイセス・セルロリティカス(Talaromyces cellulolyticus)C1株(FERM P−18508)(以下、「C1株」と記載する)をPD(ポテトデキストロース)培地で一晩培養し、得られた培養液を遠心分離によって集菌した。次に、菌体の2倍量から3倍量のTE緩衝液(2%SDS含有)で菌体を懸濁し、50℃で1時間保温し、5M酢酸カリウム溶液を全量の10分の1量加えて、氷上で1時間冷却した後、遠心して上清を回収した。得られた上清に対し、フェノール・クロロホルム処理を2回行い、100%エタノールを2.5倍量加えて、マイナス20℃で1時間以上冷却した後、遠心処理により核酸を沈殿させた。得られた沈殿を70%エタノールで2回洗い、適当量のTE緩衝液に懸濁した後、RNaseAを加え、37℃で1時間保温し、C1株のゲノムDNAを得た。
(2−1)pyrF遺伝子破壊用プラスミドの調製
pyrF遺伝子(AB668056)の配列情報をもとに以下のプライマーを設計し、上記実施例1で得たゲノムDNAを鋳型として、pyrF遺伝子の上流領域及び下流領域をそれぞれ増幅した。
PD培地を用いて一晩培養したC1株を遠心分離によって回収し、0.8M NaClを用いて洗浄した。
clr2遺伝子(配列番号8)の配列情報をもとに以下のプライマーを設計し、上記実施例1で得たゲノムDNAを鋳型として、clr2遺伝子の上流領域及び下流領域をそれぞれ増幅した。
グリセルアルデヒド3リン酸デヒドロゲナーゼ遺伝子(AB847425)の配列情報をもとに以下のプライマーを設計し、上記実施例1で得たゲノムDNAを鋳型として、当該遺伝子のプロモーター領域及びターミネーター領域をそれぞれ増幅した。
clbR遺伝子(配列番号6)の配列情報をもとに以下のプライマーを設計し、上記実施例1で得たゲノムDNAを鋳型として、当該遺伝子の全長を増幅した。
ace1遺伝子(配列番号7)の配列情報をもとに以下のプライマーを設計し、上記実施例1で得たゲノムDNAを鋳型として、当該遺伝子の全長を増幅した。
上記実施例4で得たxlnR遺伝子高発現用プラスミドを鋳型とし、以下のプライマーを用いて、xlnR遺伝子を含む断片Aを増幅した。
上記実施例2で得たCP4株をPD培地を用いて一晩培養し、遠心分離によって菌体を回収した後、0.8M NaClを用いて洗浄した。
C1株(対照)、ならびにClr2破壊株、XlnR高発現株、ClbR高発現株、Ace1高発現株、及びXlnR−ClbR高発現株をそれぞれ、(1)ソルカフロック50g/L、(2)ソルカフロック10g/L+グルコース40g/L、又は(3)微粉砕イナワラ100g/Lを炭素源とする以下の組成の培地に接種して、30℃で8日間好気的に培養した。なお、(2)ソルカフロック10g/L+グルコース40g/Lを利用する培養については、グルコース40g/Lを培養初期に全量添加する方式(バッチ式)にて行った。
Claims (10)
- ace1遺伝子、xlnR遺伝子、及びclbR遺伝子からなる群から選択される一以上の遺伝子を高発現する、あるいは、clr2遺伝子の機能が欠損している、タラロマイセス(Talaromyces)属糸状菌CF−2612株(受託番号FERM P−21290)又はC1株(受託番号FERM P−18508)の変異株。
- ace1遺伝子を高発現する、請求項1に記載の変異株。
- clbR遺伝子を高発現する、請求項1に記載の変異株。
- xlnR遺伝子を高発現する、請求項1に記載の変異株。
- xlnR遺伝子及びclbR遺伝子を高発現する、請求項1に記載の変異株。
- clr2遺伝子が欠失している、請求項1に記載の変異株。
- セルロース含有原料を含む培地中にて、請求項1〜6のいずれか1項に記載の変異株を培養することを含む、セルラーゼ及び/又はヘミセルラーゼの製造方法。
- 培地がさらに糖類を含む、請求項7に記載の方法。
- 請求項7又は8に記載の方法により得られた、セルラーゼ及び/又はヘミセルラーゼ。
- 請求項7又は8に記載の方法により得られたセルラーゼ及び/又はヘミセルラーゼを用いてバイオマス資源を分解または糖化することを含む、バイオマス資源の分解または糖化方法。
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