JP2016128397A - ｉＰＳ細胞培養上清を含む神経変性疾患治療用組成物およびその製造方法、神経変性疾患発症抑制方法ならびに神経変性疾患治療方法 - Google Patents
ｉＰＳ細胞培養上清を含む神経変性疾患治療用組成物およびその製造方法、神経変性疾患発症抑制方法ならびに神経変性疾患治療方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2016128397A JP2016128397A JP2015003494A JP2015003494A JP2016128397A JP 2016128397 A JP2016128397 A JP 2016128397A JP 2015003494 A JP2015003494 A JP 2015003494A JP 2015003494 A JP2015003494 A JP 2015003494A JP 2016128397 A JP2016128397 A JP 2016128397A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- neurodegenerative disease
- composition
- cells
- culture supernatant
- treating
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 title claims abstract description 198
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 title claims abstract description 196
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 title claims abstract description 116
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 114
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 71
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title claims abstract description 59
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 54
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title abstract description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 184
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 claims description 30
- 208000001089 Multiple system atrophy Diseases 0.000 claims description 19
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 claims description 15
- 201000002212 progressive supranuclear palsy Diseases 0.000 claims description 14
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 14
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 13
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 claims description 11
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 10
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 10
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 10
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 10
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 9
- 208000024412 Friedreich ataxia Diseases 0.000 claims description 9
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 9
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 9
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 9
- 206010034010 Parkinsonism Diseases 0.000 claims description 8
- 238000011033 desalting Methods 0.000 claims description 8
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 claims description 7
- 206010008025 Cerebellar ataxia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000010112 Spinocerebellar Degenerations Diseases 0.000 claims description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract 1
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 36
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 29
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 27
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 26
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 26
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 210000001988 somatic stem cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 11
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 10
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 10
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 10
- 108010021188 Superoxide Dismutase-1 Proteins 0.000 description 10
- 102100038836 Superoxide dismutase [Cu-Zn] Human genes 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 102220020162 rs397508045 Human genes 0.000 description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 9
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 9
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 8
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 8
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 210000001259 mesencephalon Anatomy 0.000 description 8
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 7
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 7
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 6
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 6
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- 210000001103 thalamus Anatomy 0.000 description 6
- 101150086694 SLC22A3 gene Proteins 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 5
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 5
- 102000007371 Ataxin-3 Human genes 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108700021430 Kruppel-Like Factor 4 Proteins 0.000 description 4
- 208000002569 Machado-Joseph Disease Diseases 0.000 description 4
- 208000026072 Motor neurone disease Diseases 0.000 description 4
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 4
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 4
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 4
- 101100247004 Rattus norvegicus Qsox1 gene Proteins 0.000 description 4
- 208000009106 Shy-Drager Syndrome Diseases 0.000 description 4
- 208000036834 Spinocerebellar ataxia type 3 Diseases 0.000 description 4
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 4
- NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N Valproic acid Chemical compound CCCC(C(O)=O)CCC NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 4
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 4
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 4
- 210000004720 cerebrum Anatomy 0.000 description 4
- 210000002451 diencephalon Anatomy 0.000 description 4
- 210000002242 embryoid body Anatomy 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 208000005264 motor neuron disease Diseases 0.000 description 4
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 4
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 4
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 4
- 210000004129 prosencephalon Anatomy 0.000 description 4
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- 210000004322 M2 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 206010056677 Nerve degeneration Diseases 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 101150063416 add gene Proteins 0.000 description 3
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 3
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 3
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 3
- 210000003690 classically activated macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 3
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 3
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 3
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 210000001032 spinal nerve Anatomy 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 2
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- 206010008027 Cerebellar atrophy Diseases 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 2
- 206010012305 Demyelination Diseases 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- -1 Fbx15 Proteins 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101001094700 Homo sapiens POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 description 2
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 2
- 102100035423 POU domain, class 5, transcription factor 1 Human genes 0.000 description 2
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 2
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 229940077737 brain-derived neurotrophic factor Drugs 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 2
- 208000025434 cerebellar degeneration Diseases 0.000 description 2
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000003930 cognitive ability Effects 0.000 description 2
- 229960005188 collagen Drugs 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 210000005258 dental pulp stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 2
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 2
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 2
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 101150111214 lin-28 gene Proteins 0.000 description 2
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000478 neocortex Anatomy 0.000 description 2
- 210000001577 neostriatum Anatomy 0.000 description 2
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 2
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 2
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 2
- 210000004197 pelvis Anatomy 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 2
- 210000004560 pineal gland Anatomy 0.000 description 2
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 210000001202 rhombencephalon Anatomy 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 210000000697 sensory organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 210000003523 substantia nigra Anatomy 0.000 description 2
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 2
- 210000004062 tegmentum mesencephali Anatomy 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000000211 third ventricle Anatomy 0.000 description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 2
- 229960000604 valproic acid Drugs 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 102100021723 Arginase-1 Human genes 0.000 description 1
- 101710129000 Arginase-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 1
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 1
- 101100257372 Caenorhabditis elegans sox-3 gene Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 208000011990 Corticobasal Degeneration Diseases 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 101150099612 Esrrb gene Proteins 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010080379 Fibrin Tissue Adhesive Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 102000011787 Histone Methyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108010036115 Histone Methyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 101001139134 Homo sapiens Krueppel-like factor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000984042 Homo sapiens Protein lin-28 homolog A Proteins 0.000 description 1
- 101000713275 Homo sapiens Solute carrier family 22 member 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000687905 Homo sapiens Transcription factor SOX-2 Proteins 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101150072501 Klf2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100020677 Krueppel-like factor 4 Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 208000009829 Lewy Body Disease Diseases 0.000 description 1
- 201000002832 Lewy body dementia Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 101000804949 Mus musculus Developmental pluripotency-associated protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101100446513 Mus musculus Fgf4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100203181 Mus musculus Sh2b2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100310657 Mus musculus Sox1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100310648 Mus musculus Sox17 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100257376 Mus musculus Sox3 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700026495 N-Myc Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102100030124 N-myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 101150072008 NR5A2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 102100029438 Nitric oxide synthase, inducible Human genes 0.000 description 1
- 101710089543 Nitric oxide synthase, inducible Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 101710126211 POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010033892 Paraplegia Diseases 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 102100025460 Protein lin-28 homolog A Human genes 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101150001847 Sox15 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000032930 Spastic paraplegia Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 101150111019 Tbx3 gene Proteins 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 102100024270 Transcription factor SOX-2 Human genes 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000004115 adherent culture Methods 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001552 airway epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 210000003403 autonomic nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000002932 cholinergic neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 210000004081 cilia Anatomy 0.000 description 1
- GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N clopidogrel Chemical compound C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 210000000555 contractile cell Anatomy 0.000 description 1
- 101150027734 cript gene Proteins 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000003499 exocrine gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 210000001813 extracellular matrix secreting cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001654 germ layer Anatomy 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 229940075507 glyceryl monostearate Drugs 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940121372 histone deacetylase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000003276 histone deacetylase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 108010038862 laminin 10 Proteins 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 210000004216 mammary stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- ZFLWDHHVRRZMEI-UHFFFAOYSA-N methyl 2,6-dimethyl-5-nitro-4-[2-(trifluoromethyl)phenyl]-1,4-dihydropyridine-3-carboxylate Chemical compound COC(=O)C1=C(C)NC(C)=C([N+]([O-])=O)C1C1=CC=CC=C1C(F)(F)F ZFLWDHHVRRZMEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000001788 mono and diglycerides of fatty acids Substances 0.000 description 1
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- FMURUEPQXKJIPS-UHFFFAOYSA-N n-(1-benzylpiperidin-4-yl)-6,7-dimethoxy-2-(4-methyl-1,4-diazepan-1-yl)quinazolin-4-amine;trihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.Cl.C=12C=C(OC)C(OC)=CC2=NC(N2CCN(C)CCC2)=NC=1NC(CC1)CCN1CC1=CC=CC=C1 FMURUEPQXKJIPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000005155 neural progenitor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000002856 peripheral neuron Anatomy 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000004694 pigment cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 210000003019 respiratory muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 210000000844 retinal pigment epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 1
- 210000003497 sciatic nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000036421 sense of balance Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 230000036560 skin regeneration Effects 0.000 description 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000000352 storage cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000002636 symptomatic treatment Methods 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
- A61K35/545—Embryonic stem cells; Pluripotent stem cells; Induced pluripotent stem cells; Uncharacterised stem cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【課題】ｉＰＳ細胞の培養上清を利用して神経変性疾患の治療あるいは発症抑制を実現する。
【解決手段】本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は、ｉＰＳ細胞を培養することによって得られたｉＰＳ細胞培養上清を含む。本開示においては前記神経変性疾患治療用組成物の製造方法、神経変性疾患発症抑制方法および神経変性疾患治療方法も提供される。
【選択図】なし
【解決手段】本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は、ｉＰＳ細胞を培養することによって得られたｉＰＳ細胞培養上清を含む。本開示においては前記神経変性疾患治療用組成物の製造方法、神経変性疾患発症抑制方法および神経変性疾患治療方法も提供される。
【選択図】なし
Description
本発明は、ｉＰＳ細胞培養上清を含む神経変性疾患治療用組成物およびその製造方法、神経変性疾患発症抑制方法ならびに神経変性疾患治療方法、に関する。
従来の医療によっては治療困難な疾病に対する代替技術として、幹細胞を利用した再生医療が注目されている。
幹細胞を用いた再生医療は、全ての難病にとっての新しい臨床プラットフォームにおける有望なツールである。胚性幹細胞（ＥＳ細胞）および体性幹細胞を初めとする種々の幹細胞が報告されている。体性幹細胞のうち、骨髄、脂肪組織、皮膚、臍帯、胎盤等の種々の組織から単離される間葉系幹細胞（ＭＳＣ）が皮膚再生における臨床的応用に特に用いられてきた。
幹細胞を用いた再生医療は、全ての難病にとっての新しい臨床プラットフォームにおける有望なツールである。胚性幹細胞（ＥＳ細胞）および体性幹細胞を初めとする種々の幹細胞が報告されている。体性幹細胞のうち、骨髄、脂肪組織、皮膚、臍帯、胎盤等の種々の組織から単離される間葉系幹細胞（ＭＳＣ）が皮膚再生における臨床的応用に特に用いられてきた。
また、人工多能性幹細胞（ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ；ｉＰＳ細胞）は、体細胞に数種類の初期化因子を導入することによって作成された細胞であり、三胚葉系列すべてに分化できる「分化多能性」および未分化状態を保持したまま増殖できる「自己複製性」を有している（例えば、特許第５０９８０２８号明細書参照）。この分化多能性を利用して、ｉＰＳ細胞を分化させて移植材料を得ようとする試みも行われている（例えば、国際公開公報ＷＯ２０１１／１３６３７８号参照）。
一方、幹細胞を培養して得られる幹細胞培養上清を標的組織の損傷部を修復するために用いる試みもなされている（例えば、国際公開公報ＷＯ２０１１／１１８７９５号参照）。
神経変性疾患とは、中枢神経系（例えば脳や脊髄）にある神経細胞のなかで，ある特定の神経細胞群（例えば認知機能に関係する神経細胞や運動機能に関係する細胞）が徐々に障害を受け脱落する病気である。その発症原因については未解明であり、また脱落する細胞は疾患の種類により異なる。神経変性疾患には、運動能力が低下する疾患、バランス感覚が低下する疾患，筋力が低下する疾患，認知能力が低下する疾患などがある。運動能力が低下する疾患には、パーキンソン病，パーキンソン症候群（多系統萎縮症，進行性核上性麻痺など）などがある。バランス感覚が低下する疾患には、脊髄小脳変性症，一部の痙性対麻痺などがある。筋力が低下する疾患には、筋萎縮性側索硬化症などがある。認知能力が低下する疾患には、アルツハイマー病，レビー小体型認知症，皮質基底核変性症などがある。神経変性疾患は高齢者において発症頻度が高い。また、一般的には孤発性であるが、家族性の事例も見られている。
神経変性疾患のうち、運動神経だけが選択的に障害される進行性の神経変性疾患は、運動ニューロン疾患（Ｍｏｔｏｒ Ｎｅｕｒｏｎ Ｄｉｓｅａｓｅ（ＭＮＤ））と呼ばれる。その一例は、筋萎縮性側索硬化症（Ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ（ＡＬＳ））である。ＡＬＳは５０代での発症が多く、ＡＬＳに罹患すると四肢に力が入らなく、筋肉量が減少してゆく。典型的には片側の手の先に力が入らなくなり、この症状は徐々に全身に広がる。やがて全身の筋肉が動かなくなって寝たきりになり、最後は呼吸筋麻痺で死亡する。根本的な治療法は、まだ存在せず、基本的には対症療法を行うことができるのみである。発症から死亡までの期間は約２〜４年であるが、進行の速さには個人差がある。
幹細胞を用いて、神経変性疾患を治療しようとする試みも始まっており、例えば、Takayuki Kondo et al. "Focal Transplantation of Human iPSC-Derived Glial-Rich Neural Progenitors Improves Lifespan of ALS Mice" Stem Cell Reports Volume 3, Issue 2, p242−249 (12 August 2014)には、ヒトｉＰＳ細胞由来のグリア系神経前駆細胞を移植することでＡＬＳモデルマウスの生存期間を延長できたことが報告されている。
Takayuki Kondo et al. "Focal Transplantation of Human iPSC-Derived Glial-Rich Neural Progenitors Improves Lifespan of ALS Mice" Stem Cell Reports Volume 3, Issue 2, p242−249 (12 August 2014)
ｉＰＳ細胞を神経変性疾患の治療に用いようとする試みは、Takayuki Kondo et al. "Focal Transplantation of Human iPSC-Derived Glial-Rich Neural Progenitors Improves Lifespan of ALS Mice" Stem Cell Reports Volume 3, Issue 2, p242−249 (12 August 2014)に見られるようにｉＰＳ細胞自体の分化多能性や自己複製性を利用するものであった。この場合、例えば、ｉＰＳ細胞を分化させて得られた移植材料の移植が必要であり、患者に対する負担がかかる。さらに、拒絶を避けようとすれば患者自身の体細胞からｉＰＳ細胞をいちいち作製することが必要であり、治療の準備に要する時間や労力は比較的大きいものとなる。
一方、歯髄幹細胞などの、体内に存在する体性幹細胞を培養して得られた培養上清は、損傷修復において一定の効果を示すものの、適用対象となる組織の種類によってその有効性は変動し、体内の組織一般に対する普遍的な有効性を有するものとは言い難かった。
本発明は、上記の状況に鑑みてなされたものであり、ｉＰＳ細胞の培養上清を利用した新たな神経変性疾患治療用組成物およびその製造方法、神経変性疾患発症抑制方法ならびに神経変性疾患治療方法を提供することを課題とする。
一方、歯髄幹細胞などの、体内に存在する体性幹細胞を培養して得られた培養上清は、損傷修復において一定の効果を示すものの、適用対象となる組織の種類によってその有効性は変動し、体内の組織一般に対する普遍的な有効性を有するものとは言い難かった。
本発明は、上記の状況に鑑みてなされたものであり、ｉＰＳ細胞の培養上清を利用した新たな神経変性疾患治療用組成物およびその製造方法、神経変性疾患発症抑制方法ならびに神経変性疾患治療方法を提供することを課題とする。
本発明の第１の態様に係る神経変性疾患治療用組成物は、ｉＰＳ細胞を培養することによって得られたｉＰＳ細胞培養上清を含む、神経変性疾患治療用組成物である。
本発明の第２の態様に係る神経変性疾患治療用組成物の製造方法は、
（１）ｉＰＳ細胞を培養するステップ；および
（２）前記ｉＰＳ細胞の培養により得られた培養上清を回収するステップ、
を含む、神経変性疾患治療用組成物の製造方法である。
本発明の第３の態様に係る使用は、ｉＰＳ細胞を培養することによって得られたｉＰＳ細胞培養上清の、神経変性疾患治療用組成物の製造における使用である。
本発明の第２の態様に係る神経変性疾患治療用組成物の製造方法は、
（１）ｉＰＳ細胞を培養するステップ；および
（２）前記ｉＰＳ細胞の培養により得られた培養上清を回収するステップ、
を含む、神経変性疾患治療用組成物の製造方法である。
本発明の第３の態様に係る使用は、ｉＰＳ細胞を培養することによって得られたｉＰＳ細胞培養上清の、神経変性疾患治療用組成物の製造における使用である。
本発明の第４の態様に係る方法は、前記第１の態様に係る神経変性疾患治療用組成物を、神経変性疾患発症前の対象に、前記神経変性疾患の発症を抑えるために有効な量投与することを含む、対象において神経変性疾患の発症前に前記神経変性疾患の発症を抑える方法である。
本発明の第５の態様に係る方法は、前記第１の態様に係る神経変性疾患治療用組成物を、神経変性疾患を有する対象に、前記神経変性疾患を治療するために有効な量で投与することを含む、神経変性疾患の治療方法である。
本発明の第５の態様に係る方法は、前記第１の態様に係る神経変性疾患治療用組成物を、神経変性疾患を有する対象に、前記神経変性疾患を治療するために有効な量で投与することを含む、神経変性疾患の治療方法である。
本発明によれば、ｉＰＳ細胞の培養上清を利用した新たな神経変性疾患治療用組成物およびその製造方法、神経変性疾患発症抑制方法ならびに神経変性疾患治療方法、が提供される。
＜神経変性疾患治療用組成物＞
本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は、ｉＰＳ細胞を培養することによって得られたｉＰＳ細胞培養上清を含む。
ｉＰＳ細胞は分化多能性および自己複製性を有する。先に述べたとおり、ｉＰＳ細胞を分化させ、得られた分化組織を移植片として用いる試みはあった。しかしながら、ｉＰＳ細胞から分泌される物質に着目して、ｉＰＳ細胞の培養上清を用いて、神経変性疾患に対する治療的効果を得ようとする試みは無かった。それどころか、ｉＰＳ細胞の培養上清がどのような生物学的な効果を有するのかについて、何ら知られてはいなかった。
本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は、ｉＰＳ細胞を培養することによって得られたｉＰＳ細胞培養上清を含む。
ｉＰＳ細胞は分化多能性および自己複製性を有する。先に述べたとおり、ｉＰＳ細胞を分化させ、得られた分化組織を移植片として用いる試みはあった。しかしながら、ｉＰＳ細胞から分泌される物質に着目して、ｉＰＳ細胞の培養上清を用いて、神経変性疾患に対する治療的効果を得ようとする試みは無かった。それどころか、ｉＰＳ細胞の培養上清がどのような生物学的な効果を有するのかについて、何ら知られてはいなかった。
本発明の発明者は、ｉＰＳ細胞培養上清を、神経変性疾患の治療的効果を得るために用いるという、前例の無い試みを初めて行った。その結果、驚くべきことに、ｉＰＳ細胞培養上清は、中枢神経組織一般に対して広く修復能力を有し、またその修復能力は間葉系幹細胞や造血幹細胞などの体性幹細胞の培養上清が示す修復能力と比べて傑出したものであることを、本発明者は発見した。これは、体性幹細胞から分泌される分泌物（サイトカイン等を含む）と比較した場合、分化多能性を有するｉＰＳ細胞から分泌される分泌物はその物質組成が大きく異なっており、その結果として、どの中枢神経組織であるかを問わずに、広く一般の中枢神経組織に対して修復能力を示し、またその修復能力の程度も高いものとなっているものと推定される。具体的には、多くの成長因子、サイトカインについて、ｉＰＳ細胞の培養上清における含有量は、体性幹細胞の培養上清における含有量に比べて高く、あるいは、特定の成長因子、サイトカインは、ｉＰＳ細胞の培養上清には含まれるが、体性幹細胞の培養上清には実質的に含まれないと考えられる。また、ｉＰＳ細胞の培養上清は、体性幹細胞の培養上清には含まれないような抗加齢物質（例えば特定の種類のタンパク質）を含んでおり、この結果として、ｉＰＳ細胞の培養上清は、体性幹細胞の培養上清では見られないような優れた抗加齢効果を有すると考えられる。
ただし、本発明は、前記推定に何ら拘束されるものではない。
なお、本開示において「修復」とは、疾患によって失われた組織の機能の一部又は全部が、当該疾患の生じる前における当該組織の機能と比較して維持又は回復していることを意味し、組織の機能が回復することのみならず、機能的な組織として再生することも広く包含する。機能が維持又は回復していることの評価については、疾患が生じている組織において異なるが、外観、対象となる機能の程度を評価するために通常用いられるアッセイ等に基づいて行えばよい。
ただし、本発明は、前記推定に何ら拘束されるものではない。
なお、本開示において「修復」とは、疾患によって失われた組織の機能の一部又は全部が、当該疾患の生じる前における当該組織の機能と比較して維持又は回復していることを意味し、組織の機能が回復することのみならず、機能的な組織として再生することも広く包含する。機能が維持又は回復していることの評価については、疾患が生じている組織において異なるが、外観、対象となる機能の程度を評価するために通常用いられるアッセイ等に基づいて行えばよい。
本開示に係る神経変性疾患治療用組成物においては、ｉＰＳ細胞を培養して得られたｉＰＳ細胞培養上清を神経変性疾患治療用組成物の有効成分として用いる。当該ｉＰＳ細胞培養上清には、サイトカイン混合物等が含まれているため、種々の中枢神経組織において修復能力を示す。本発明の一形態では、ｉＰＳ細胞培養上清中のサイトカインの混合物が中枢神経組織の内在性幹細胞に対する誘導シグナルとして作用することにより、前記内在性幹細胞が、分化し、増殖し得、これが修復能力の発現をもたらし得ると推定できる。ただし、本発明は、前記推定に何ら拘束されるものではない。
本開示におけるｉＰＳ細胞培養上清は、ｉＰＳ細胞を培養して得られるものであるため、以下の説明ではその製法も併せて説明する。
人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）は、初期化因子を、体細胞に導入することによって作製された、ＥＳ細胞とほぼ同等の特性、例えば分化多能性と自己複製による増殖能、を有する体細胞由来の人工の幹細胞である（Ｋ． Ｔａｋａｈａｓｈｉ ａｎｄ Ｓ． Ｙａｍａｎａｋａ （２００６） Ｃｅｌｌ， １２６：６６３−６７６； Ｋ． Ｔａｋａｈａｓｈｉ ｅｔ ａｌ． （２００７）， Ｃｅｌｌ， １３１：８６１−８７２； Ｊ． Ｙｕ ｅｔ ａｌ． （２００７）， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ３１８：１９１７−１９２０； Ｎａｋａｇａｗａ， Ｍ．ら，Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２６：１０１−１０６ （２００８）；国際公開ＷＯ ２００７／０６９６６６）。初期化因子は、例えば、ＤＮＡ又はタンパク質の形態で体細胞に導入することが出来る。初期化因子は、ＥＳ細胞に特異的に発現している遺伝子、その遺伝子産物もしくはノンコーディングＲＮＡまたはＥＳ細胞の未分化維持に重要な役割を果たす遺伝子、その遺伝子産物もしくはノンコーディングＲＮＡ、あるいは低分子化合物によって構成されてもよい。初期化因子に含まれる遺伝子としては、例えば、特開２０１３−２４７９４３に挙げられているように、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、Ｓｏｘ１、Ｓｏｘ３、Ｓｏｘ１５、Ｓｏｘ１７、Ｋｌｆ４、Ｋｌｆ２、ｃ−Ｍｙｃ、Ｎ−Ｍｙｃ、Ｌ−Ｍｙｃ、Ｎａｎｏｇ、Ｌｉｎ２８、Ｆｂｘ１５、ＥＲａｓ、ＥＣＡＴ１５−２、Ｔｃｌ１、ｂｅｔａ−ｃａｔｅｎｉｎ、Ｌｉｎ２８ｂ、Ｓａｌｌ１、Ｓａｌｌ４、Ｅｓｒｒｂ、Ｎｒ５ａ２、Ｔｂｘ３またはＧｌｉｓ１等が挙げられる。
ｉＰＳ細胞は、上記の方法の他にも、これまでに報告された各種ｉＰＳ細胞作製法によって作製することができる。また、今後開発されるｉＰＳ細胞作製法を適用することも当然に想定される。
ｉＰＳ細胞は、上記の方法の他にも、これまでに報告された各種ｉＰＳ細胞作製法によって作製することができる。また、今後開発されるｉＰＳ細胞作製法を適用することも当然に想定される。
ｉＰＳ細胞作製法の最も基本的な手法は、転写因子であるOct3/4、Sox2、Klf4及びc-Mycの４因子を、ウイルスを利用して細胞へ導入する方法である（Takahashi K, Yamanaka S: Cell 126 (4), 663-676, 2006; Takahashi, K, et al: Cell 131 (5), 861-72, 2007）。ヒトｉＰＳ細胞についてはOct4、Sox2、Lin28及びNonogの４因子の導入による樹立の報告がある（Yu J, et al: Science 318(5858), 1917-1920, 2007）。c-Mycを除く３因子（Nakagawa M, et al: Nat. Biotechnol. 26 (1), 101-106, 2008）、Oct3/4及びKlf4の２因子（Kim J B, et al: Nature 454 (7204), 646-650, 2008）、或いはOct3/4のみ（Kim J B, et al: Cell 136 (3), 411-419, 2009）の導入によるiPS細胞の樹立も報告されている。また、遺伝子の発現産物であるタンパク質を細胞に導入する手法（Zhou H, Wu S, Joo JY, et al: Cell Stem Cell 4, 381-384, 2009; Kim D, Kim CH, Moon JI, et al: Cell Stem Cell 4, 472-476, 2009）も報告されている。一方、ヒストンメチル基転移酵素G9aに対する阻害剤BIX-01294やヒストン脱アセチル化酵素阻害剤バルプロ酸（VPA）或いはBayK8644等を使用することによって作製効率の向上や導入する因子の低減などが可能であるとの報告もある（Huangfu D, et al: Nat. Biotechnol. 26 (7), 795-797, 2008; Huangfu D, et al: Nat. Biotechnol. 26 (11), 1269-1275, 2008; Silva J, et al: PLoS. Biol. 6 (10), e 253, 2008）。遺伝子導入法についても検討が進められ、レトロウイルスの他、レンチウイルス（Yu J, et al: Science 318(5858), 1917-1920, 2007）、アデノウイルス（Stadtfeld M, et al: Science 322 (5903), 945-949, 2008）、プラスミド（Okita K, et al: Science 322 (5903), 949-953, 2008; Okita K. et al.: Nat Methods 8, 409-412）、トランスポゾンベクター（Woltjen K, Michael IP, Mohseni P, et al: Nature 458, 766-770, 2009; Kaji K, Norrby K, Pac a A, et al: Nature 458, 771-775, 2009; Yusa K, Rad R, Takeda J, et al: Nat Methods 6, 363-369, 2009）、或いはエピソーマルベクター（Yu J, Hu K, Smuga-Otto K, Tian S, et al: Science 324, 797-801, 2009）を遺伝子導入に利用した技術が開発されている。
ｉＰＳ細胞作製に際して、初期化因子を導入する対象となる体細胞は、哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、サル、ブタ、ラット等）由来の生殖細胞以外のいかなる細胞であってもよく、例えば、特開２０１３−２４７９４３に挙げられているように、角質化する上皮細胞（例、角質化表皮細胞）、粘膜上皮細胞（例、舌表層の上皮細胞）、外分泌腺上皮細胞（例、乳腺細胞）、ホルモン分泌細胞（例、副腎髄質細胞）、代謝・貯蔵用の細胞（例、肝細胞）、境界面を構成する内腔上皮細胞（例、I型肺胞細胞）、内鎖管の内腔上皮細胞（例、血管内皮細胞）、運搬能をもつ繊毛のある細胞（例、気道上皮細胞）、細胞外マトリックス分泌用細胞（例、線維芽細胞）、収縮性細胞（例、平滑筋細胞）、血液系細胞、免疫系細胞（例、Tリンパ球）、感覚器官の細胞（例、桿細胞）、自律神経系ニューロン（例、コリン作動性ニューロン）、感覚器と末梢ニューロンの支持細胞（例、随伴細胞）、中枢神経系の神経細胞とグリア細胞（例、星状グリア細胞）、色素細胞（例、網膜色素上皮細胞）、およびそれらの前駆細胞(組織前駆細胞)等が挙げられる。細胞の分化の程度や細胞を採取する動物の齢などに特に制限はなく、未分化な前駆細胞(体性幹細胞も含む)であっても、最終分化した成熟細胞であっても、同様に、本開示において体細胞の起源として使用することができる。ここで未分化な前駆細胞としては、たとえば神経幹細胞、造血幹細胞、間葉系幹細胞、歯髄幹細胞等の組織幹細胞（体性幹細胞）が挙げられる。中でも、安定性の点からは骨髄由来間葉系幹細胞が好ましい。また、修復能力の点からは、体細胞はヒト由来のものであることが好ましい。また、前記体細胞として、前記神経変性疾患治療用組成物の投与対象となる対象自身から得た体細胞を用いることが、拒絶の回避の上で有利な場合がある。
ｉＰＳ細胞誘導のための培養液としては、特開２０１３−２４７９４３に挙げられているように、例えば、10〜15% FBSを含有するDMEM、DMEM/F12又はDME培養液（これらの培養液にはさらに、LIF、penicillin/streptomycin、puromycin、L-グルタミン、非必須アミノ酸類、β-メルカプトエタノールなどを適宜含むことができる。）または市販の培養液[例えば、マウスES細胞培養用培養液(TX-WES培養液、トロンボＸ社)、霊長類ES細胞培養用培養液（霊長類ES/iPS細胞用培養液、リプロセル社）、無血清培地（mTeSR、Stemcell Technology社）]などが含まれる。
培養法の例としては、たとえば、特開２０１３−２４７９４３に挙げられているように、37℃、5% CO2存在下にて、10% FBS含有DMEM又はDMEM/F12培養液上で体細胞と初期化因子とを接触させ約4〜7日間培養し、その後、細胞をフィーダー細胞(たとえば、マイトマイシンC処理STO細胞、SNL細胞等)上に播種し直し、体細胞と初期化因子の接触から約10日後からbFGF含有霊長類ES細胞培養用培養液で培養し、該接触から約30〜約45日又はそれ以上後にｉＰＳ様コロニーを生じさせることができる。
あるいは、37℃、5%CO2存在下にて、フィーダー細胞(たとえば、マイトマイシンC処理STO細胞、SNL細胞等)上で10% FBS含有DMEM培養液（これにはさらに、LIF、ペニシリン/ストレプトマイシン、ピューロマイシン、L-グルタミン、非必須アミノ酸類、β-メルカプトエタノールなどを適宜含むことができる。）で培養し、約25〜約30日又はそれ以上の後にES様コロニーを生じさせることができる。望ましくは、フィーダー細胞の代わりに、初期化される体細胞そのものを用いる（Takahashi K, et al. (2009), PLoS One. 4:e8067またはWO2010/137746）、もしくは細胞外基質（例えば、Laminin（WO2009/123349）およびマトリゲル（BD社））を用いる方法が例示される。
この他にも、血清を含有しない培地を用いて培養する方法も例示される（Sun N, et al. (2009), Proc Natl Acad Sci U S A. 106:15720-15725）。さらに、樹立効率を上げるため、低酸素条件（0.1%以上、15%以下の酸素濃度）によりiPS細胞を樹立しても良い（Yoshida Y, et al. (2009), Cell Stem Cell. 5:237-241またはWO2010/013845）。
上記培養の間には、培養開始2日目以降から毎日1回新鮮な培養液と培養液交換を行う。また、核初期化に使用する体細胞の細胞数は、限定されないが、培養ディッシュ100cm2当たり約5×103〜約5×106細胞の範囲である。
上記培養の間には、培養開始2日目以降から毎日1回新鮮な培養液と培養液交換を行う。また、核初期化に使用する体細胞の細胞数は、限定されないが、培養ディッシュ100cm2当たり約5×103〜約5×106細胞の範囲である。
ｉＰＳ細胞は、特開２０１３−２４７９４３に記載されているように、形成したコロニーの形状により選択することが可能である。また、Fbxo15、Nanog、Oct/4、Fgf-4、Esg-1及びCript等の多能性幹細胞マーカー（未分化マーカー）の発現などを指標として選択することができる。一方、体細胞が初期化された場合に発現する遺伝子（例えば、Oct3/4、Nanog）と連動して発現する薬剤耐性遺伝子をマーカー遺伝子として導入した場合は、対応する薬剤を含む培養液（選択培養液）で培養を行うことにより樹立したｉＰＳ細胞を選択することができる。また、マーカー遺伝子が蛍光タンパク質遺伝子の場合は蛍光顕微鏡で観察することによって、発光酵素遺伝子の場合は発光基質を加えることによって、また発色酵素遺伝子の場合は発色基質を加えることによって、ｉＰＳ細胞を選択することができる。選択された細胞をｉＰＳ細胞として回収する。
得られたｉＰＳ細胞から培養上清を得るには、ｉＰＳ細胞の培養条件として通常用いられる条件をそのまま適用することができる。例えば、ｉＰＳ細胞を作製する際の培地および培養条件としては、上記説明で記載された培地および培養条件が挙げられる。なお、ｉＰＳ細胞を維持する上でフィーダー細胞の使用は必須ではなく、例えばラミニン５１１を用いることでフィーダー細胞を省略することも可能である（A novel efficient feeder-free culture system for the derivation of human induced pluripotent stem cells
Masato Nakagawa, et al. Scientific Reports 4,Article number:3594doi:10.1038/srep03594 Received 09 October 2013 Accepted 06 December 2013 Published 08 January 2014 (Nature)）。また、培養の際には細胞死を抑制するためにＲＯＣＫ阻害剤を添加してもよい。
Masato Nakagawa, et al. Scientific Reports 4,Article number:3594doi:10.1038/srep03594 Received 09 October 2013 Accepted 06 December 2013 Published 08 January 2014 (Nature)）。また、培養の際には細胞死を抑制するためにＲＯＣＫ阻害剤を添加してもよい。
本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は、血清を含まないものであってもよい。血清を含まないことで安全性が高められる場合がある。例えば、血清を含まない培地（無血清培地）でｉＰＳ細胞を培養することによって、血清を含まない培養上清を調製することができる。１回又は複数回の継代培養を行うことにし、最後又は最後から数回の継代培養を無血清培地で培養することによっても、血清を含まない培養上清を得ることができる。一方、回収した培養上清から、透析やカラムによる溶媒置換などを利用して血清を除去することによっても、血清を含まない培養上清を得ることができる。
血清を含まない「ｉＰＳ細胞の培養上清」を調製するためには、全過程を通して或いは最後又は最後から数回の継代培養についは無血清培地を使用するとよい。尚、基本培地としてはDMEMの他、イスコフ改変ダルベッコ培地（IMDM）（GIBCO社等）、ハムF12培地（HamF12）（SIGMA社、GIBCO社等）、RPMI1640培地等を用いることができる。二種以上の基本培地を併用することにしてもよい。混合培地の一例として、IMDMとHamF12を等量混合した培地（例えば商品名：IMDM/HamF12（GIBCO社）として市販される）を挙げることができる。また、培地に添加可能な成分の例として、血清（ウシ胎仔血清、ヒト血清、羊血清等）、血清代替物（Knockout serum replacement(KSR)など）、ウシ血清アルブミン（BSA）、抗生物質、各種ビタミン、各種ミネラルを挙げることができる。
血清を含まない「ｉＰＳ細胞の培養上清」を調製するためには、全過程を通して或いは最後又は最後から数回の継代培養についは無血清培地を使用するとよい。尚、基本培地としてはDMEMの他、イスコフ改変ダルベッコ培地（IMDM）（GIBCO社等）、ハムF12培地（HamF12）（SIGMA社、GIBCO社等）、RPMI1640培地等を用いることができる。二種以上の基本培地を併用することにしてもよい。混合培地の一例として、IMDMとHamF12を等量混合した培地（例えば商品名：IMDM/HamF12（GIBCO社）として市販される）を挙げることができる。また、培地に添加可能な成分の例として、血清（ウシ胎仔血清、ヒト血清、羊血清等）、血清代替物（Knockout serum replacement(KSR)など）、ウシ血清アルブミン（BSA）、抗生物質、各種ビタミン、各種ミネラルを挙げることができる。
培養上清を得るための培養時間としては、例えば５時間〜７日間であり、また、１日〜６日間であってもよい。培養温度は例えば３６℃〜３８℃、例えば３７℃、であり、ＣＯ２濃度は４〜６％、例えば５％、である。また、培養は、例えば非接着性条件下での三次元培養、例えば浮遊培養(例えば、分散培養、凝集浮遊培養など)により行ってもよい。
培養後に、細胞成分を分離除去することによって、ｉＰＳ細胞の培養上清を得ることができる。本開示において、培養上清とは、培養液から細胞成分を分離除去した上清そのものだけでなく、各種処理（例えば、遠心処理、濃縮、溶媒の置換、透析、凍結、乾燥、凍結乾燥、希釈、脱塩、保存等）を適宜施した培養上清もその範囲に含む。培養上清の処理方法の詳細は後述する。本開示において培養上清とは、細胞成分を含まない。このため、本開示における培養上清は、培養に用いられたｉＰＳ細胞は含んでいない。
本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は、上記により得られたｉＰＳ細胞の培養上清を有効成分として含むものであり、ある実施形態においては、前記神経変性疾患治療用組成物は組成物全体としても前記ｉＰＳ細胞を含まない。また、別の実施形態では、前記神経変性疾患治療用組成物は組成物全体としても細胞（細胞の種類は問わない）を含まない。つまり、無細胞である。当該実施形態の神経変性疾患治療用組成物はこの特徴によって、ｉＰＳ細胞自体は当然のこと、ｉＰＳ細胞を含む各種組成物と明確に区別される。この実施形態の典型例は、ｉＰＳ細胞を含まず、ｉＰＳ細胞の培養上清のみで構成された神経変性疾患治療用組成物である。
適用される被検体の状態に応じて、期待される治療効果が維持されることを条件として、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は他の成分を追加的に含んでもよい。追加的に含まれ得る成分の一例は以下の通りである。
(i)生体吸収性材料
有機系生体吸収性材料としてヒアルロン酸、コラーゲン、フィブリノーゲン（例えばボルヒール（登録商標））等を使用することができる。
(i)生体吸収性材料
有機系生体吸収性材料としてヒアルロン酸、コラーゲン、フィブリノーゲン（例えばボルヒール（登録商標））等を使用することができる。
(ii)ゲル化材料
ゲル化材料は、生体親和性が高いものを用いることが好ましく、ヒアルロン酸、コラーゲン又はフィブリン糊等を用いることができる。ヒアルロン酸、コラーゲンとしては種々のものを選択して用いることができるが、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物の適用目的（適用組織）に適したものを採用することが好ましい。用いるコラーゲンは可溶性（酸可溶性コラーゲン、アルカリ可溶性コラーゲン、酵素可溶性コラーゲン等）であることが好ましい。
ゲル化材料は、生体親和性が高いものを用いることが好ましく、ヒアルロン酸、コラーゲン又はフィブリン糊等を用いることができる。ヒアルロン酸、コラーゲンとしては種々のものを選択して用いることができるが、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物の適用目的（適用組織）に適したものを採用することが好ましい。用いるコラーゲンは可溶性（酸可溶性コラーゲン、アルカリ可溶性コラーゲン、酵素可溶性コラーゲン等）であることが好ましい。
(iii)その他
製剤上許容される他の成分（例えば、担体、賦形剤、崩壊剤、緩衝剤、乳化剤、懸濁剤、無痛化剤、安定剤、保存剤、防腐剤、生理食塩水など）を含有させることもできる。賦形剤としては乳糖、デンプン、ソルビトール、D-マンニトール、白糖等を用いることができる。崩壊剤としてはデンプン、カルボキシメチルセルロース、炭酸カルシウム等を用いることができる。緩衝剤としてはリン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩等を用いることができる。乳化剤としてはアラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、トラガント等を用いることができる。懸濁剤としてはモノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸アルミニウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム等を用いることができる。無痛化剤としてはベンジルアルコール、クロロブタノール、ソルビトール等を用いることができる。安定剤としてはプロピレングリコール、アスコルビン酸等を用いることができる。保存剤としてはフェノール、塩化ベンザルコニウム、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルパラベン等を用いることができる。防腐剤としては塩化ベンザルコニウム、パラオキシ安息香酸、クロロブタノール等を用いることができる。抗生物質、ｐＨ調整剤、成長因子（例えば、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）、神経成長因子（NGF）、脳由来神経栄養因子（BDNF））等を含有させることにしてもよい。
製剤上許容される他の成分（例えば、担体、賦形剤、崩壊剤、緩衝剤、乳化剤、懸濁剤、無痛化剤、安定剤、保存剤、防腐剤、生理食塩水など）を含有させることもできる。賦形剤としては乳糖、デンプン、ソルビトール、D-マンニトール、白糖等を用いることができる。崩壊剤としてはデンプン、カルボキシメチルセルロース、炭酸カルシウム等を用いることができる。緩衝剤としてはリン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩等を用いることができる。乳化剤としてはアラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、トラガント等を用いることができる。懸濁剤としてはモノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸アルミニウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム等を用いることができる。無痛化剤としてはベンジルアルコール、クロロブタノール、ソルビトール等を用いることができる。安定剤としてはプロピレングリコール、アスコルビン酸等を用いることができる。保存剤としてはフェノール、塩化ベンザルコニウム、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルパラベン等を用いることができる。防腐剤としては塩化ベンザルコニウム、パラオキシ安息香酸、クロロブタノール等を用いることができる。抗生物質、ｐＨ調整剤、成長因子（例えば、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）、神経成長因子（NGF）、脳由来神経栄養因子（BDNF））等を含有させることにしてもよい。
本開示に係る神経変性疾患治療用組成物の最終的な形態は特に限定されない。形態の例は液体状（液状、ゲル状など）及び固体状（粉状、細粒、顆粒状など）である。本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は、吸入に適した形態を有していてもよく、例えば、ネブライザーやディフューザーによって霧状に散布可能な液体の形態を有していてもよい。神経変性疾患の関係部位が脳である場合、血液脳関門（Ｂｌｏｏｄ Ｂｒａｉｎ Ｂａｒｒｉｅｒ（ＢＢＢ））の存在を考慮すると、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は経鼻投与が可能な形態であることが望ましい。例えばスプレー状あるいは粉末状の形態で経鼻投与を行ってもよい。ｉＰＳ細胞の培養上清は、事前の準備や保存の点において、ｉＰＳ細胞自体を用いる場合よりも有利であり、神経変性疾患の急性期や亜急性期の治療に特に適するといえる。また、細胞成分を含まず、免疫拒絶の問題を克服し得るという点においても、ｉＰＳ細胞の培養上清の有用性は極めて高い。
近年、細胞を用いた再生医療の実現に向けた研究が数多くの研究グループによって進められている。細胞を利用する場合、生体から採取した細胞を培養、選択、処理などに施し、その後回収して移植物の成分とする。そのような従来の研究においては、通常、一連の操作の過程で培養上清は廃棄或いは生理的緩衝液などに置換される。従って、最終的な移植物は培養上清を積極的に含むものではない。このことに鑑みれば、ｉＰＳ細胞の培養上清を含む点において、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は、ｉＰＳ細胞自体の有用性に注目してｉＰＳ細胞を有効成分として使用した組成物などとは、文言上は勿論のこと実質的にも峻別される。
とはいえ、実施形態によっては、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物はｉＰＳ細胞の培養上清に加えてｉＰＳ細胞を含むものであってもよい。このような場合には、作製後に分化誘導をしていない（換言すれば未分化状態を維持させている）ｉＰＳ細胞を用いることが好ましい。ｉＰＳ細胞を追加的に用いることにより、治療効果が向上する場合がある。
本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は、ｉＰＳ細胞の培養上清を含有することにより、神経変性疾患に対して組織を修復する効果を奏する。この効果の程度は、従来の体性幹細胞の培養上清の使用により得られていた効果を遙かに凌駕する。また、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は、驚くべきことに、中枢神経の神経組織一般に対し広く一般的な修復効果を奏する。このため、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は、特定の神経変性疾患に限定されず、広範囲の神経変性疾患に対して神経変性疾患治療用組成物として用いることが可能である。本発明の神経変性疾患治療用組成物は、神経変性疾患の発症前であるために、当該神経変性疾患への罹患が未知の段階であっても、対象への投与により対象内における神経変性疾患の進行を有効に抑制できる。このため、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物を習慣的に用いることにより、多岐に渡る神経変性疾患を発症前に治療することが可能である。
本開示においては、
（１）ｉＰＳ細胞を培養するステップ；
（２）前記ｉＰＳ細胞の培養により得られた培養上清を回収するステップ。
を含む、神経変性疾患治療用組成物の製造方法も提供される。この製造方法は、前記回収された培養上清に遠心処理、濃縮、溶媒の置換、透析、凍結、乾燥、凍結乾燥、希釈、および脱塩の中から選択される一つ以上の処理を施すステップをさらに含んでもよい。このようなステップを含むことにより、神経変性疾患治療用組成物の取り扱いや保存、運搬がより容易になる。また、前記製造方法は、前記回収された培養上清に、追加の成分を添加するステップをさらに含んでいてもよい。そのような追加の成分の添加により、神経変性疾患治療用組成物全体の物性を変化させ、その特性を向上することが可能である。また、前記製造方法は、体細胞に初期化因子を導入して前記ｉＰＳ細胞を作成するステップをさらに含んでいてもよい。各々のステップならびに追加の成分等については、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物の説明において記載した事項がそのまま当てはまる。前記回収された培養上清に遠心処理、濃縮、溶媒の置換、透析、凍結、乾燥、凍結乾燥、希釈、および脱塩の中から選択される一つ以上の処理を施すステップと、前記回収された培養上清に、追加の成分を添加するステップの両方を含む場合には、両ステップはどちらを先に行ってもよく、また可能な場合には同時並行して行ってもよい。
（１）ｉＰＳ細胞を培養するステップ；
（２）前記ｉＰＳ細胞の培養により得られた培養上清を回収するステップ。
を含む、神経変性疾患治療用組成物の製造方法も提供される。この製造方法は、前記回収された培養上清に遠心処理、濃縮、溶媒の置換、透析、凍結、乾燥、凍結乾燥、希釈、および脱塩の中から選択される一つ以上の処理を施すステップをさらに含んでもよい。このようなステップを含むことにより、神経変性疾患治療用組成物の取り扱いや保存、運搬がより容易になる。また、前記製造方法は、前記回収された培養上清に、追加の成分を添加するステップをさらに含んでいてもよい。そのような追加の成分の添加により、神経変性疾患治療用組成物全体の物性を変化させ、その特性を向上することが可能である。また、前記製造方法は、体細胞に初期化因子を導入して前記ｉＰＳ細胞を作成するステップをさらに含んでいてもよい。各々のステップならびに追加の成分等については、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物の説明において記載した事項がそのまま当てはまる。前記回収された培養上清に遠心処理、濃縮、溶媒の置換、透析、凍結、乾燥、凍結乾燥、希釈、および脱塩の中から選択される一つ以上の処理を施すステップと、前記回収された培養上清に、追加の成分を添加するステップの両方を含む場合には、両ステップはどちらを先に行ってもよく、また可能な場合には同時並行して行ってもよい。
上記ステップ（２）においては、ｉＰＳ細胞の培養上清を回収する。例えば、スポイトやピペットなどで培養液を吸引して回収することができる。回収した培養上清はそのまま或いは一以上の処理を経た後に本開示に係る神経変性疾患治療用組成物の有効成分として使用される。ここでの処理として、遠心処理、濃縮、溶媒の置換、透析、凍結、乾燥、凍結乾燥、希釈、脱塩、保存（例えば、4℃、-80℃）を例示することができる。尚、ｉＰＳ細胞の培養上清は、複雑高度な精製をしなくとも、所期の作用を示す。このため、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は簡便な工程で製造できる。複雑な精製工程を要しないことは、精製に伴う活性の低下を回避できる点においても有利である。
＜ｉＰＳ細胞培養上清の濃縮方法＞
本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は、製剤化されたものであってもよい。製剤化のためのｉＰＳ細胞培養上清の濃縮方法としては、培養上清の濃縮に通常用いられている方法を適用することができる。濃縮方法の例としては、例えば、以下の二つの方法を挙げることができる。
1. スピンカラム濃縮法
培養上清をAmicon Ultra Centrifugal Filter Units-10K(ミリポア社製)を用いて濃縮する（最大75倍濃縮）。具体的な操作手順は次の通りである。
(i) 培養上清（最大15ml）をAmicon Ultra Centrifugal Filter Units-10Kへ投入し、×4000gで約60分間遠心し、200μlまで濃縮する。
(ii) 上記チューブへ培養上清と同量の滅菌PBSを投入し、再度×4000gで約60分間遠心し、ベース溶液をPBSへ置換する。
(iii) 得られた溶液200μlをマイクロテストチューブへ回収し、濃縮ｉＰＳ細胞培養上清とする。
本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は、製剤化されたものであってもよい。製剤化のためのｉＰＳ細胞培養上清の濃縮方法としては、培養上清の濃縮に通常用いられている方法を適用することができる。濃縮方法の例としては、例えば、以下の二つの方法を挙げることができる。
1. スピンカラム濃縮法
培養上清をAmicon Ultra Centrifugal Filter Units-10K(ミリポア社製)を用いて濃縮する（最大75倍濃縮）。具体的な操作手順は次の通りである。
(i) 培養上清（最大15ml）をAmicon Ultra Centrifugal Filter Units-10Kへ投入し、×4000gで約60分間遠心し、200μlまで濃縮する。
(ii) 上記チューブへ培養上清と同量の滅菌PBSを投入し、再度×4000gで約60分間遠心し、ベース溶液をPBSへ置換する。
(iii) 得られた溶液200μlをマイクロテストチューブへ回収し、濃縮ｉＰＳ細胞培養上清とする。
2. エタノール沈殿濃縮法
培養上清をエタノール沈殿法を用いて濃縮する（最大10倍濃縮）。具体的な操作手順は次の通りである。
(i) 培養上清5mlに対し100%エタノール45mlを加え、混和し、-20℃で60分間放置する。
(ii) 4℃、×15000gで15分間遠心する。
(iii) 上澄みを除去し、90%エタノール10mlを加え、よく攪拌する。
(iv) 4℃、×15000gで5分間遠心する。
(v) 上澄みを除去し、得られたペレットを滅菌水500μlに溶解し、マイクロテストチューブへ回収し、濃縮ｉＰＳ細胞培養上清とする。
培養上清をエタノール沈殿法を用いて濃縮する（最大10倍濃縮）。具体的な操作手順は次の通りである。
(i) 培養上清5mlに対し100%エタノール45mlを加え、混和し、-20℃で60分間放置する。
(ii) 4℃、×15000gで15分間遠心する。
(iii) 上澄みを除去し、90%エタノール10mlを加え、よく攪拌する。
(iv) 4℃、×15000gで5分間遠心する。
(v) 上澄みを除去し、得られたペレットを滅菌水500μlに溶解し、マイクロテストチューブへ回収し、濃縮ｉＰＳ細胞培養上清とする。
＜ｉＰＳ細胞培養上清の凍結乾燥方法＞
また本開示に係る神経変性疾患治療用組成物におけるｉＰＳ細胞培養上清は、凍結乾燥されたものであってもよい。これにより、良好な保存安定性が得られる。ｉＰＳ細胞培養上清の凍結乾燥方法としては、培養上清の凍結乾燥に通常用いられている方法を適用することができる。凍結乾燥方法の例としては、例えば、以下の方法を挙げることができる。
(i) 上記方法で得られたｉＰＳ細胞培養上清又は濃縮ｉＰＳ細胞培養上清を-80℃で2時間から半日凍結する。
(ii) 凍結後、サンプルチューブの蓋を開放し、凍結乾燥機へセットする。
(iii) 1〜2日間凍結乾燥を行う。
(iv) 得られたサンプルを凍結乾燥ｉＰＳ細胞培養上清とする（-80℃で保存可能）。
また本開示に係る神経変性疾患治療用組成物におけるｉＰＳ細胞培養上清は、凍結乾燥されたものであってもよい。これにより、良好な保存安定性が得られる。ｉＰＳ細胞培養上清の凍結乾燥方法としては、培養上清の凍結乾燥に通常用いられている方法を適用することができる。凍結乾燥方法の例としては、例えば、以下の方法を挙げることができる。
(i) 上記方法で得られたｉＰＳ細胞培養上清又は濃縮ｉＰＳ細胞培養上清を-80℃で2時間から半日凍結する。
(ii) 凍結後、サンプルチューブの蓋を開放し、凍結乾燥機へセットする。
(iii) 1〜2日間凍結乾燥を行う。
(iv) 得られたサンプルを凍結乾燥ｉＰＳ細胞培養上清とする（-80℃で保存可能）。
本開示においては、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物を、神経変性疾患の発症前の対象に、前記神経変性疾患の発症を抑えるために有効な量投与することを含む、前記対象において神経変性疾患の発症前に前記神経変性疾患の発症を抑える方法、も提供される。前記対象は、ヒト、またはヒト以外の哺乳動物（ペット動物、家畜、実験動物を含む。具体的には例えばマウス、ラット、モルモット、ハムスター、サル、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ等）であってもよい。前記対象は、神経変性疾患を発病するリスクを有すると判定された対象であってもよい。そのようなリスクは、遺伝子診断、家系分析等により判定することが出来る。例えば、特定の遺伝子における特定のアレルの存在が、特定の疾患への罹患確率に相関することが統計的に明らかにされている例がある。
一般に神経変性疾患は、進行すればするほど治療はより困難になる。このため、そうした神経変性疾患の早期発見が重要となる訳であるが、毎年の検診によって早期発見が確実にできるわけではない。この点を考慮すると、神経変性疾患の発症前に予め治療を開始できることが望ましいが、そのような治療に用いられる薬剤は継続的に用いられるものである以上、投与対象者に与える負担が少ないものであることが望ましく、またその段階ではまだ明らかではない神経変性疾患の進行を抑えなければならないという点からは、神経変性疾患一般に広く有効性を有するものであることが望ましい。これらの要求を同時に満たすことは、従来の知見では困難であった。しかし、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物を用いれば、移植や注射といった侵襲的処置を行わなくても投与可能であり、腫瘍生成リスクが無く、また前記神経変性疾患治療用組成物は神経変性疾患一般に広く有効性を有する。このことから、前記神経変性疾患治療用組成物は、上記のような、発症前における神経変性疾患の早期処置（進行抑制）に高い有効性を有する。このような発症前における早期処置のことを、本開示においては先制医療と称する。
前記神経変性疾患治療用組成物の投与量は、未処理の培養上清の量に換算して、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０００ｍｇ／ｋｇ／日であり、また、１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日であってもよい。また、投与の方法は特に制限されない。例えば、前記神経変性疾患治療用組成物の投与は、非経口投与であることが好ましく、非経口投与としては、全身性投与であっても局所投与であってもよい。局所投与の例としては、目的組織への注入、塗布又は噴霧などを挙げることができる。前記神経変性疾患治療用組成物の投与方法の例としては、静脈内投与、動脈内投与、門脈内投与、皮内投与、皮下投与、筋肉内投与、腹腔内投与、経肺投与（経肺吸収）及び経鼻投与等を挙げることができる。中でも、経鼻投与、経肺投与等は、低侵襲性であり、好ましい。また、経鼻投与によれば、血液脳関門（ＢＢＢ）の通過可能性について懸念する必要が無いため、脳に関係する神経変性疾患の発症抑制においては特に有効である。投与スケジュールとしては例えば一日一回〜数回、二日に一回、或いは三日に一回などを採用できる。投与スケジュールの作成においては、対象（レシピエント）の性別、年齢、体重、病態などを考慮することができる。
投与方法の選択は、発症抑制の目標となる組織の種類、神経変性疾患の種類等に基づいて当業者により行うことができる。例えば、当該組織が頭部にある場合には、血液脳関門の通過を考慮する必要がなく、低侵襲性であることから、経鼻投与等を適用することが特に好ましい。例えば、前記組織が脳である場合には、経鼻投与が好ましく適用され得る。
なお、実施形態によっては、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物に加えてｉＰＳ細胞も投与することが出来る。例えば、前記神経変性疾患治療用組成物とｉＰＳ細胞とを同時に、または別々のタイミングで、対象に投与することができる。このような場合には、採取後に分化誘導をしていない（換言すれば未分化状態を維持させている）ｉＰＳ細胞を用いることが好ましい。前記神経変性疾患治療用組成物とｉＰＳを併用する場合には、前記神経変性疾患治療用組成物を含有する第１構成要素と、ｉＰＳ細胞を含有する第２構成要素とからなるキットを用いて投与を行ってもよい。各構成要素は、例えば各々別々のカプセルであったり、あるいは別々のアンプルあるいはバイアルであってもよい。この場合、第１構成要素を投与した治療対象に対して、第１構成要素の投与と同時又は投与後に第２構成要素を投与してもよい。尚、ここでの「同時」は厳密な同時性を要求するものではない。従って、両要素を混合した後に対象へ投与する等、両要素の投与が時間差のない条件下で実施される場合は勿論のこと、片方の投与後、速やかに他方を投与する等、両要素の投与が実質的な時間差のない条件下で実施される場合もここでの「同時」の概念に含まれる。
前記神経変性疾患は、特に限定はされない。例えば、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン症候群（パーキンソン病など）、アルツハイマー型痴呆、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病、多系統萎縮症（ＭＳＡ）（黒質線状体変性症（ＳＮＤ）、シャイ・ドレーガー症候群（Ｓｈｙ−Ｄｒａｇｅｒ症候群）、オリーブ橋小脳萎縮症（ＯＰＣＡ）など）、脊髄小脳変性症（ＳＣＤ）（脊髄小脳失調症（ＳＣＡ３、通称マシャド・ジョセフ病など）、フリードライヒ失調症（フリードライヒ運動失調症など）等が挙げられる。前記神経変性疾患は、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）であってもよい。
前記疾患の発生する部位は、特に限定はされない。前記疾患の発生する部位は、例えば、脳および脊髄が挙げられ、脳には前脳および脳幹があり、前脳には大脳及び間脳、脳幹には中脳および菱脳がある。大脳には、嗅脳、へんとう、線条体、海馬および大脳新皮質などがあり、間脳には視床上部、視床、視床下部、視床腹部、下垂体、松果体および第三脳室などがある。中脳には、中脳蓋、大脳脚、視蓋前域および中脳水道などがあり、菱脳には、橋、小脳および延髄などがある。前記疾患の発生する部位は、これらの部位のいずれであってもよい。
前記疾患の発生する部位は、特に限定はされない。前記疾患の発生する部位は、例えば、脳および脊髄が挙げられ、脳には前脳および脳幹があり、前脳には大脳及び間脳、脳幹には中脳および菱脳がある。大脳には、嗅脳、へんとう、線条体、海馬および大脳新皮質などがあり、間脳には視床上部、視床、視床下部、視床腹部、下垂体、松果体および第三脳室などがある。中脳には、中脳蓋、大脳脚、視蓋前域および中脳水道などがあり、菱脳には、橋、小脳および延髄などがある。前記疾患の発生する部位は、これらの部位のいずれであってもよい。
上記の方法において、神経変性疾患の発症の抑制は、内在性の幹細胞の能力に基づいて達成されるものであってもよい。本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は、サイトカインを始めとする種々の成分を含んでおり、これらの成分は内在性の幹細胞の能力を刺激して、神経変性疾患の発症を抑制することが可能だからである。
もちろん、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物の用途は先制医療に制限されるものではない。このため、本開示によれば、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物を、神経変性疾患を有する対象に、前記神経変性疾患を治療するために有効な量で投与することを含む、神経変性疾患の治療方法も提供される。
前記対象は、ヒト、またはヒト以外の哺乳動物（ペット動物、家畜、実験動物を含む。具体的には例えばマウス、ラット、モルモット、ハムスター、サル、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ等）であってもよい。
前記神経変性疾患の治療方法における、前記神経変性疾患治療用組成物の投与量は、未処理の培養上清の量に換算して、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０００ｍｇ／ｋｇ／日であり、また、１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日であってもよい。また、投与の方法は特に制限されない。例えば、前記神経変性疾患治療用組成物の投与は、非経口投与であることが好ましく、非経口投与としては、全身性投与であっても局所投与であってもよい。局所投与の例としては、目的組織への注入、塗布又は噴霧などを挙げることができる。前記神経変性疾患治療用組成物の投与方法の例としては、静脈内投与、動脈内投与、門脈内投与、皮内投与、皮下投与、筋肉内投与、腹腔内投与、経肺投与（経肺吸収）及び経鼻投与等を挙げることができる。中でも、経鼻投与、経肺投与等は、低侵襲性であり、好ましい。また、経鼻投与によれば、血液脳関門（ＢＢＢ）の通過可能性について懸念する必要が無いため、脳に関係する神経変性疾患の発症抑制においては特に有効である。投与スケジュールとしては例えば一日一回〜数回、二日に一回、或いは三日に一回などを採用できる。投与スケジュールの作成においては、対象（レシピエント）の性別、年齢、体重、病態などを考慮することができる。なお、本開示において「治療」の範囲には、疾患や組織異常を根治する処置だけでなく、根治に至らないまでも疾患や組織異常の進行を停止させる、あるいは処置をしない場合に比べて遅らせる、処置も含まれる。また、本開示において治療の開始時期は、発症が見られてからでもよく、また、前述のとおり発症前に未然に行うものであってもよい。
前記対象は、ヒト、またはヒト以外の哺乳動物（ペット動物、家畜、実験動物を含む。具体的には例えばマウス、ラット、モルモット、ハムスター、サル、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ等）であってもよい。
前記神経変性疾患の治療方法における、前記神経変性疾患治療用組成物の投与量は、未処理の培養上清の量に換算して、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０００ｍｇ／ｋｇ／日であり、また、１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日であってもよい。また、投与の方法は特に制限されない。例えば、前記神経変性疾患治療用組成物の投与は、非経口投与であることが好ましく、非経口投与としては、全身性投与であっても局所投与であってもよい。局所投与の例としては、目的組織への注入、塗布又は噴霧などを挙げることができる。前記神経変性疾患治療用組成物の投与方法の例としては、静脈内投与、動脈内投与、門脈内投与、皮内投与、皮下投与、筋肉内投与、腹腔内投与、経肺投与（経肺吸収）及び経鼻投与等を挙げることができる。中でも、経鼻投与、経肺投与等は、低侵襲性であり、好ましい。また、経鼻投与によれば、血液脳関門（ＢＢＢ）の通過可能性について懸念する必要が無いため、脳に関係する神経変性疾患の発症抑制においては特に有効である。投与スケジュールとしては例えば一日一回〜数回、二日に一回、或いは三日に一回などを採用できる。投与スケジュールの作成においては、対象（レシピエント）の性別、年齢、体重、病態などを考慮することができる。なお、本開示において「治療」の範囲には、疾患や組織異常を根治する処置だけでなく、根治に至らないまでも疾患や組織異常の進行を停止させる、あるいは処置をしない場合に比べて遅らせる、処置も含まれる。また、本開示において治療の開始時期は、発症が見られてからでもよく、また、前述のとおり発症前に未然に行うものであってもよい。
前記神経変性疾患の治療方法における、投与方法の選択は、神経変性疾患組織の種類、神経変性疾患の種類等に基づいて当業者により行うことができる。例えば、当該組織が頭部にある場合には、血液脳関門の通過を考慮する必要がなく、低侵襲性であることから、経鼻投与等を適用することが特に好ましい。例えば、前記組織が脳である場合には、経鼻投与が好ましく適用され得る。
なお、実施形態によっては、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物に加えてｉＰＳ細胞も投与することが出来る。例えば、前記神経変性疾患治療用組成物とｉＰＳ細胞とを同時に、または別々のタイミングで、対象に投与することができる。このような場合には、採取後に分化誘導をしていない（換言すれば未分化状態を維持させている）ｉＰＳ細胞を用いることが好ましい。前記神経変性疾患治療用組成物とｉＰＳを併用する場合には、前記神経変性疾患治療用組成物を含有する第１構成要素と、ｉＰＳ細胞を含有する第２構成要素とからなるキットを用いて投与を行ってもよい。各構成要素は、例えば各々別々のカプセルであったり、あるいは別々のアンプルあるいはバイアルであってもよい。
この場合、第１構成要素を投与した治療対象に対して、第１構成要素の投与と同時又は投与後に第２構成要素を投与してもよい。第１構成要素と第２構成要素を同時に投与するという使用法は急性期や亜急性期の神経変性疾患への適用に特に適する。尚、ここでの「同時」は厳密な同時性を要求するものではない。従って、両要素を混合した後に対象へ投与する等、両要素の投与が時間差のない条件下で実施される場合は勿論のこと、片方の投与後、速やかに他方を投与する等、両要素の投与が実質的な時間差のない条件下で実施される場合もここでの「同時」の概念に含まれる。
前記神経変性疾患の治療方法によって治療される神経変性疾患は、特に限定はされない。例えば、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン症候群（パーキンソン病など）、アルツハイマー型痴呆、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病、多系統萎縮症（ＭＳＡ）（黒質線状体変性症（ＳＮＤ）、シャイ・ドレーガー症候群（Ｓｈｙ−Ｄｒａｇｅｒ症候群）、オリーブ橋小脳萎縮症（ＯＰＣＡ）など）、脊髄小脳変性症（ＳＣＤ）（脊髄小脳失調症（ＳＣＡ３、通称マシャド・ジョセフ病など）、フリードライヒ失調症（フリードライヒ運動失調症など）等が挙げられる。
前記疾患の部位は、特に限定はされない。前記疾患の部位は、例えば、脳および脊髄が挙げられ、脳には前脳および脳幹があり、前脳には大脳及び間脳、脳幹には中脳および菱脳がある。大脳には、嗅脳、へんとう、線条体、海馬および大脳新皮質などがあり、間脳には視床上部、視床、視床下部、視床腹部、下垂体、松果体および第三脳室などがある。中脳には、中脳蓋、大脳脚、視蓋前域および中脳水道などがあり、菱脳には、橋、小脳および延髄などがある。前記疾患の部位は、これらの部位のいずれであってもよい。
前記疾患の部位は、特に限定はされない。前記疾患の部位は、例えば、脳および脊髄が挙げられ、脳には前脳および脳幹があり、前脳には大脳及び間脳、脳幹には中脳および菱脳がある。大脳には、嗅脳、へんとう、線条体、海馬および大脳新皮質などがあり、間脳には視床上部、視床、視床下部、視床腹部、下垂体、松果体および第三脳室などがある。中脳には、中脳蓋、大脳脚、視蓋前域および中脳水道などがあり、菱脳には、橋、小脳および延髄などがある。前記疾患の部位は、これらの部位のいずれであってもよい。
上記の方法において、神経変性疾患の治療は、内在性の幹細胞の能力に基づいて達成されるものであってもよい。本開示に係る神経変性疾患治療用組成物は、サイトカインを始めとする種々の成分を含んでおり、これらの成分は内在性の幹細胞の能力を刺激して、神経変性疾患の治療を達成することが可能だからである。
本開示によれば、また、ｉＰＳ細胞を培養することによって得られたｉＰＳ細胞培養上清の、神経変性疾患治療用組成物の製造における使用も提供される。前記ｉＰＳ細胞培養上清、前記神経変性疾患治療用組成物および使用方法の詳細については、前述の説明（本開示に係る神経変性疾患治療用組成物およびその製造方法、ならびに本開示に係る各種治療方法の説明等を参照）のとおりである。
本発明の実施形態には以下のものが含まれる。
＜１＞ ｉＰＳ細胞を培養することによって得られたｉＰＳ細胞培養上清を含む、神経変性疾患治療用組成物。
＜２＞ 前記ｉＰＳ細胞を含まない、＜１＞に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜３＞ 無細胞である、＜１＞または＜２＞に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜４＞ 前記ｉＰＳ細胞培養上清が、遠心処理、濃縮、溶媒の置換、透析、凍結、乾燥、凍結乾燥、希釈、脱塩及び保存からなる群から選択される１以上によって処理されたものである、＜１＞〜＜３＞のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜５＞ 前記ｉＰＳ細胞が、骨髄由来間葉系幹細胞に由来するものである、＜１＞〜＜４＞のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜６＞ 血清を含まない、＜１＞〜＜５＞のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜１＞ ｉＰＳ細胞を培養することによって得られたｉＰＳ細胞培養上清を含む、神経変性疾患治療用組成物。
＜２＞ 前記ｉＰＳ細胞を含まない、＜１＞に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜３＞ 無細胞である、＜１＞または＜２＞に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜４＞ 前記ｉＰＳ細胞培養上清が、遠心処理、濃縮、溶媒の置換、透析、凍結、乾燥、凍結乾燥、希釈、脱塩及び保存からなる群から選択される１以上によって処理されたものである、＜１＞〜＜３＞のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜５＞ 前記ｉＰＳ細胞が、骨髄由来間葉系幹細胞に由来するものである、＜１＞〜＜４＞のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜６＞ 血清を含まない、＜１＞〜＜５＞のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜７＞ 対象において神経変性疾患の発症前に前記神経変性疾患の発症を抑えるために用いられる、＜１＞〜＜６＞のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜８＞ 前記対象が、前記神経変性疾患を発病するリスクを有すると判定された対象である、＜７＞に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜９＞ 前記神経変性疾患が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン症候群、アルツハイマー型痴呆、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、脊髄小脳変性症（ＳＣＤ）およびフリードライヒ失調症からなる群から選択される、＜１＞〜＜８＞のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜１０＞ 経鼻投与により投与される、＜１＞〜＜９＞のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜８＞ 前記対象が、前記神経変性疾患を発病するリスクを有すると判定された対象である、＜７＞に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜９＞ 前記神経変性疾患が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン症候群、アルツハイマー型痴呆、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、脊髄小脳変性症（ＳＣＤ）およびフリードライヒ失調症からなる群から選択される、＜１＞〜＜８＞のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜１０＞ 経鼻投与により投与される、＜１＞〜＜９＞のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
＜１１＞ （１）ｉＰＳ細胞を培養するステップ；および
（２）前記ｉＰＳ細胞の培養により得られた培養上清を回収するステップ、
を含む、神経変性疾患治療用組成物の製造方法。
＜１２＞ 体細胞に初期化因子を導入して前記ｉＰＳ細胞を作成するステップをさらに含む、＜１１＞に記載の方法。
＜１３＞ 前記回収した培養上清に対して、遠心処理、濃縮、溶媒の置換、透析、凍結、乾燥、凍結乾燥、希釈、脱塩及び保存からなる群より選択される少なくとも１の処理を行うステップをさらに含む、＜１１＞または＜１２＞に記載の方法。
＜１４＞ 前記回収した培養上清に追加的成分を添加するステップをさらに含む、＜１１＞〜＜１３＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１５＞ ｉＰＳ細胞を培養することによって得られたｉＰＳ細胞培養上清の、神経変性疾患治療用組成物の製造における使用。
（２）前記ｉＰＳ細胞の培養により得られた培養上清を回収するステップ、
を含む、神経変性疾患治療用組成物の製造方法。
＜１２＞ 体細胞に初期化因子を導入して前記ｉＰＳ細胞を作成するステップをさらに含む、＜１１＞に記載の方法。
＜１３＞ 前記回収した培養上清に対して、遠心処理、濃縮、溶媒の置換、透析、凍結、乾燥、凍結乾燥、希釈、脱塩及び保存からなる群より選択される少なくとも１の処理を行うステップをさらに含む、＜１１＞または＜１２＞に記載の方法。
＜１４＞ 前記回収した培養上清に追加的成分を添加するステップをさらに含む、＜１１＞〜＜１３＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１５＞ ｉＰＳ細胞を培養することによって得られたｉＰＳ細胞培養上清の、神経変性疾患治療用組成物の製造における使用。
＜１６＞ 前記神経変性疾患治療用組成物が前記ｉＰＳ細胞を含まない、＜１５＞に記載の使用。
＜１７＞ 前記神経変性疾患治療用組成物が無細胞である、＜１５＞または＜１６＞に記載の使用。
＜１８＞ 前記ｉＰＳ細胞培養上清が、遠心処理、濃縮、溶媒の置換、透析、凍結、乾燥、凍結乾燥、希釈、脱塩及び保存からなる群から選択される１以上によって処理されたものである、＜１５＞〜＜１７＞のいずれか一項に記載の使用。
＜１９＞ 前記ｉＰＳ細胞が、骨髄由来間葉系幹細胞に由来するものである、＜１５＞〜＜１８＞のいずれか一項に記載の使用。
＜２０＞ 前記神経変性疾患治療用組成物が血清を含まない、＜１５＞〜＜１９＞のいずれか一項に記載の使用。
＜２１＞ 前記神経変性疾患治療用組成物が、対象において神経変性疾患の発症前に前記神経変性疾患の発症を抑えるために用いられる、＜１５＞〜＜２０＞のいずれか一項に記載の使用。
＜２２＞ 前記対象が、前記神経変性疾患を発病するリスクを有すると判定された対象である、＜２１＞に記載の使用。
＜１７＞ 前記神経変性疾患治療用組成物が無細胞である、＜１５＞または＜１６＞に記載の使用。
＜１８＞ 前記ｉＰＳ細胞培養上清が、遠心処理、濃縮、溶媒の置換、透析、凍結、乾燥、凍結乾燥、希釈、脱塩及び保存からなる群から選択される１以上によって処理されたものである、＜１５＞〜＜１７＞のいずれか一項に記載の使用。
＜１９＞ 前記ｉＰＳ細胞が、骨髄由来間葉系幹細胞に由来するものである、＜１５＞〜＜１８＞のいずれか一項に記載の使用。
＜２０＞ 前記神経変性疾患治療用組成物が血清を含まない、＜１５＞〜＜１９＞のいずれか一項に記載の使用。
＜２１＞ 前記神経変性疾患治療用組成物が、対象において神経変性疾患の発症前に前記神経変性疾患の発症を抑えるために用いられる、＜１５＞〜＜２０＞のいずれか一項に記載の使用。
＜２２＞ 前記対象が、前記神経変性疾患を発病するリスクを有すると判定された対象である、＜２１＞に記載の使用。
＜２３＞ 前記神経変性疾患が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン症候群、アルツハイマー型痴呆、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、脊髄小脳変性症（ＳＣＤ）およびフリードライヒ失調症からなる群から選択される、＜１５＞〜＜２２＞のいずれか一項に記載の使用。
＜２４＞ 前記神経変性疾患治療用組成物が経鼻投与により投与される、＜１５＞〜＜２３＞のいずれか一項に記載の使用。
＜２４＞ 前記神経変性疾患治療用組成物が経鼻投与により投与される、＜１５＞〜＜２３＞のいずれか一項に記載の使用。
＜２５＞ ＜１＞〜＜６＞のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物を、神経変性疾患発症前の対象に、前記神経変性疾患の発症を抑えるために有効な量で投与することを含む、対象において神経変性疾患の発症前に前記神経変性疾患の発症を抑える方法。
＜２６＞ 前記対象が、前記神経変性疾患を発病するリスクを有すると判定された対象である、＜２５＞に記載の方法。
＜２７＞ 前記神経変性疾患が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン症候群、アルツハイマー型痴呆、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、脊髄小脳変性症（ＳＣＤ）およびフリードライヒ失調症からなる群から選択される、＜２５＞または＜２６＞に記載の方法。
＜２８＞ 前記神経変性疾患の発症抑制が、内在性の幹細胞の能力に基づいて達成される、＜２５＞〜＜２７＞のいずれか一項に記載の方法。
＜２６＞ 前記対象が、前記神経変性疾患を発病するリスクを有すると判定された対象である、＜２５＞に記載の方法。
＜２７＞ 前記神経変性疾患が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン症候群、アルツハイマー型痴呆、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、脊髄小脳変性症（ＳＣＤ）およびフリードライヒ失調症からなる群から選択される、＜２５＞または＜２６＞に記載の方法。
＜２８＞ 前記神経変性疾患の発症抑制が、内在性の幹細胞の能力に基づいて達成される、＜２５＞〜＜２７＞のいずれか一項に記載の方法。
＜２９＞ ＜１＞〜＜６＞のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物を、神経変性疾患を有する対象に、前記神経変性疾患を治療するために有効な量で投与することを含む、神経変性疾患の治療方法。
＜３０＞ 前記神経変性疾患が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン症候群、アルツハイマー型痴呆、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、脊髄小脳変性症（ＳＣＤ）およびフリードライヒ失調症からなる群から選択される、＜２９＞に記載の方法。
＜３１＞ 前記神経変性疾患の治療が、内在性の幹細胞の能力に基づいて達成される、＜２９＞または＜３０＞に記載の方法。
＜３２＞
前記神経変性疾患治療用組成物が経鼻投与により投与される、＜２５＞〜＜３１＞のいずれか一項に記載の方法。
＜３０＞ 前記神経変性疾患が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン症候群、アルツハイマー型痴呆、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、脊髄小脳変性症（ＳＣＤ）およびフリードライヒ失調症からなる群から選択される、＜２９＞に記載の方法。
＜３１＞ 前記神経変性疾患の治療が、内在性の幹細胞の能力に基づいて達成される、＜２９＞または＜３０＞に記載の方法。
＜３２＞
前記神経変性疾患治療用組成物が経鼻投与により投与される、＜２５＞〜＜３１＞のいずれか一項に記載の方法。
以下に本発明の実施例について説明するが、これに限定されるものではない。また実施例中の％は、特に断らない限り、重量（質量）基準である。
実施例１：ＡＬＳモデルマウスを用いた、ｉＰＳ細胞培養上清のＡＬＳ進行抑制効果の検証
ＡＬＳモデルマウスである変異SOD1（G93A）導入マウスを用いて、本開示に係るｉＰＳ細胞培養上清を投与した場合と投与しない場合におけるＡＬＳの進行における差異を調べた。
具体的には、下記のようにして、ヒトｉＰＳ細胞の培養上清を得た。なお、下記において培養はいずれも３７℃で行った。
（ｉＰＳ細胞）
ｉＰＳ細胞の作製元となる細胞としてヒト骨髄由来間葉系細胞を用いた以外は、Takahashi K, et al. "Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors" Cell. 131(5): 861-72 (2007)に記載された方法に従い作成されたｉＰＳ細胞を、国立大学法人京都大学から入手した。具体的には、ヒトＯｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、Ｋｌｆ４およびｃ−Ｍｙｃを含む、レトロウィルス（pMXベクター）をヒト骨髄由来間葉系細胞に導入し、導入６日後に細胞をトリプシン処理し、マイトマイシンＣで処理されたＳＮＬフィーダー細胞上にプレーティングした（McMahon and Bradley, 1990）。翌日、培地を１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭから、４ｎｇ／ｍｌのｂＦＧＦを添加した霊長類ＥＳ細胞用培地（primate ES cell culture、株式会社リプロセル製）に変えた。
約２週間後に、ヒトＥＳ細胞様の形態を有する球状コロニーが現れた。約２５日目に平坦で、ヒトＥＳ細胞に類似したコロニーが観察された。各細胞の形態はヒトＥＳ細胞のものに類似し、コロニーの中央においては時折自発的な分化も見られた。また、フィーダー細胞依存性を有していたり、マトリゲル被覆プレート上マウス胚性線維芽細胞（ＭＥＦ）馴化霊長類ＥＳ細胞用培地では未分化な状態を保つものの、無調整培地においては未分化状態を保たないといった点においても、得られた細胞はヒトＥＳ細胞に類似した性質を示した。
こうして得られたヒトｉＰＳ細胞を用いて、ｉＰＳ細胞培養上清の作製を行った。
ＡＬＳモデルマウスである変異SOD1（G93A）導入マウスを用いて、本開示に係るｉＰＳ細胞培養上清を投与した場合と投与しない場合におけるＡＬＳの進行における差異を調べた。
具体的には、下記のようにして、ヒトｉＰＳ細胞の培養上清を得た。なお、下記において培養はいずれも３７℃で行った。
（ｉＰＳ細胞）
ｉＰＳ細胞の作製元となる細胞としてヒト骨髄由来間葉系細胞を用いた以外は、Takahashi K, et al. "Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors" Cell. 131(5): 861-72 (2007)に記載された方法に従い作成されたｉＰＳ細胞を、国立大学法人京都大学から入手した。具体的には、ヒトＯｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、Ｋｌｆ４およびｃ−Ｍｙｃを含む、レトロウィルス（pMXベクター）をヒト骨髄由来間葉系細胞に導入し、導入６日後に細胞をトリプシン処理し、マイトマイシンＣで処理されたＳＮＬフィーダー細胞上にプレーティングした（McMahon and Bradley, 1990）。翌日、培地を１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭから、４ｎｇ／ｍｌのｂＦＧＦを添加した霊長類ＥＳ細胞用培地（primate ES cell culture、株式会社リプロセル製）に変えた。
約２週間後に、ヒトＥＳ細胞様の形態を有する球状コロニーが現れた。約２５日目に平坦で、ヒトＥＳ細胞に類似したコロニーが観察された。各細胞の形態はヒトＥＳ細胞のものに類似し、コロニーの中央においては時折自発的な分化も見られた。また、フィーダー細胞依存性を有していたり、マトリゲル被覆プレート上マウス胚性線維芽細胞（ＭＥＦ）馴化霊長類ＥＳ細胞用培地では未分化な状態を保つものの、無調整培地においては未分化状態を保たないといった点においても、得られた細胞はヒトＥＳ細胞に類似した性質を示した。
こうして得られたヒトｉＰＳ細胞を用いて、ｉＰＳ細胞培養上清の作製を行った。
（培養上清の調製）
前記ヒトｉＰＳ細胞は接着培養用シャーレで接着培養することにより維持した。培養に際しては、４ｎｇ／ｍｌのヒト塩基性ＦＧＦ（ｂＦＧＦ）を添加した霊長類ＥＳ細胞用培地（無血清；株式会社リプロセル製；以後このｂＦＧＦ添加霊長類ＥＳ細胞用培地を、ｉＰＳ細胞用培地と称する）を用いた。培養中は１週間毎に継代が必要であるが、これはヒトｉＰＳ細胞を０．２５％トリプシン、０．１ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼＩＶ、１ｍＭのＣａＣｌ２および２０％のＫＳＲを含む溶液で処理することにより行った。
上記の通り維持されたヒトｉＰＳ細胞を、ＥＳ細胞解離液（株式会社リプロセル製）を用いて接着培養用シャーレから剥がし、非接着培養用シャーレに入れたｉＰＳ細胞用培地中で１週間浮遊培養した。この結果、胚様体（Ｅｍｂｒｙｏ Ｂｏｄｙ：ＥＢ）が形成された。
形成された胚様体（ＥＢ）を接着培養用シャーレ上に播種し、１０％ＦＢＳおよび１％アンチアンチ（登録商標、抗真菌剤）を含有するＤＭＥＭ中で１週間成長（ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ）させた（細胞のoutgrowthについては、Stem Cells Dev. 22, 102-113, 2013を参照）。
次に、上記ヒトｉＰＳ細胞を０．０５％トリプシン−ＥＤＴＡ溶液を用いて接着培養用シャーレから剥がし、新たな接着培養用シャーレに播種した。これにより、ヒトｉＰＳ細胞はｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌ化した。培地として１０％ＦＢＳおよび１％アンチアンチ（登録商標、抗真菌剤）を含有するＤＭＥＭを用い、一週間培養した。
ヒトｉＰＳ細胞が７０〜８０％以上コンフルエントになったことを確認した後に、培地を無血清培地（ＦＢＳを含まない、１％アンチアンチ（登録商標、抗真菌剤）含有ＤＭＥＭ）に置換し、２日間（４８時間）培養後、上清を回収した。回収した上清を１５００回転で５分遠心し、上清を再度回収した後に３０００回転で３分遠心し、上清を再度回収したものを以後の実験においてヒトｉＰＳ細胞培養上清として用いた。前記遠心はトミー精工製卓上多本架遠心機LC-120を用いて行った。
前記ヒトｉＰＳ細胞は接着培養用シャーレで接着培養することにより維持した。培養に際しては、４ｎｇ／ｍｌのヒト塩基性ＦＧＦ（ｂＦＧＦ）を添加した霊長類ＥＳ細胞用培地（無血清；株式会社リプロセル製；以後このｂＦＧＦ添加霊長類ＥＳ細胞用培地を、ｉＰＳ細胞用培地と称する）を用いた。培養中は１週間毎に継代が必要であるが、これはヒトｉＰＳ細胞を０．２５％トリプシン、０．１ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼＩＶ、１ｍＭのＣａＣｌ２および２０％のＫＳＲを含む溶液で処理することにより行った。
上記の通り維持されたヒトｉＰＳ細胞を、ＥＳ細胞解離液（株式会社リプロセル製）を用いて接着培養用シャーレから剥がし、非接着培養用シャーレに入れたｉＰＳ細胞用培地中で１週間浮遊培養した。この結果、胚様体（Ｅｍｂｒｙｏ Ｂｏｄｙ：ＥＢ）が形成された。
形成された胚様体（ＥＢ）を接着培養用シャーレ上に播種し、１０％ＦＢＳおよび１％アンチアンチ（登録商標、抗真菌剤）を含有するＤＭＥＭ中で１週間成長（ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ）させた（細胞のoutgrowthについては、Stem Cells Dev. 22, 102-113, 2013を参照）。
次に、上記ヒトｉＰＳ細胞を０．０５％トリプシン−ＥＤＴＡ溶液を用いて接着培養用シャーレから剥がし、新たな接着培養用シャーレに播種した。これにより、ヒトｉＰＳ細胞はｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌ化した。培地として１０％ＦＢＳおよび１％アンチアンチ（登録商標、抗真菌剤）を含有するＤＭＥＭを用い、一週間培養した。
ヒトｉＰＳ細胞が７０〜８０％以上コンフルエントになったことを確認した後に、培地を無血清培地（ＦＢＳを含まない、１％アンチアンチ（登録商標、抗真菌剤）含有ＤＭＥＭ）に置換し、２日間（４８時間）培養後、上清を回収した。回収した上清を１５００回転で５分遠心し、上清を再度回収した後に３０００回転で３分遠心し、上清を再度回収したものを以後の実験においてヒトｉＰＳ細胞培養上清として用いた。前記遠心はトミー精工製卓上多本架遠心機LC-120を用いて行った。
次に、生後９０日の変異SOD1（G93A）導入マウスに上記で作製したヒトｉＰＳ細胞の培養上清５００μｌを一日一回４０日間経鼻投与した（実験群）。対照群には等量のＰＢＳを投与した。実験群および対照群のいずれも、それぞれ変異SOD1（G93A）導入マウスのオス５匹からなっていた。生後１８０日目に脊髄と末梢神経の免疫染色を行った。同時に、神経栄養因子などの発現を観察した。また、生後１８０日目に坐骨神経の免疫染色および腓腹筋湿重量を測定し、さらに神経線維の観察を行った。さらに、観察期間（２００日）を通しての、生存期間を計測した（図１）。
図２に実験群および対照群の各々における生存期間を示す。対照群の平均生存期間が１５０．５日だったのに対し、ｉＰＳ細胞培養上清を経鼻投与した実験群では平均生存期間は１７０．４日と大幅に伸びていた。これは、ｉＰＳ細胞培養上清の投与により、ＡＬＳの進行が顕著に抑制されたことを示している。
生後１８０日目に、実験群および対照群の各々について、脊髄に対しＫＢ（Kluver-Barrera's stain）染色、ＨＥ（Hematoxylin-Eosin stain）染色およびスダンブラック染色(Sudan Black stain)を行った。結果を図３に示す。図３から分かるように、対照群では脊髄神経の変性および脱髄が観察されるのに対して、ｉＰＳ細胞培養上清を経鼻投与した実験群では、脊髄神経の変性が顕著に抑制され、脱髄は見られなかった。これは、ｉＰＳ細胞培養上清の投与により、脊髄神経の変性が顕著に抑制されたことを示している。
生後１８０日目にはさらに、炎症マーカーであるＩＦＮ−γ、ＩＬ−１７およびＴＮＦ−α、Ｍ１マクロファージのマーカーであるｉＮＯＳおよびＭ２マクロファージのマーカーであるアルギナーゼ１、ならびにＴ細胞中にける炎症性サイトカインであるＢｒｄＵ、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１７の発現について測定した。結果を図４に示す。図４から分かるように、対照群では炎症マーカーの発現が高く、Ｍ１マクロファージが多く、一方Ｍ２マクロファージは少なかったのに対し、ｉＰＳ細胞培養上清を経鼻投与した実験群では炎症マーカーの発現が抑えられ、Ｍ１マクロファージは少なく、逆にＭ２マクロファージは多かった。このことから、ｉＰＳ細胞培養上清の投与により、脊髄における炎症が顕著に抑えられていることが分かる。
生後１８０日目に、実験群および対照群のそれぞれについて、腓腹筋湿重量を測定し、また腓腹筋の状態を写真観察した。結果を図５に示す。図５から分かるように、対照群では腓腹筋が明らかに衰え、筋肉重量も大きく減少していたのに対し、ｉＰＳ細胞培養上清を経鼻投与した実験群では筋肉の減少は顕著に抑えられていた。この結果も、ｉＰＳ細胞培養上清の投与により、ＡＬＳの進行が顕著に抑制されたことを示している。
上記の腓腹筋（生後１８０日）については、さらにＨＥ染色による組織学的観察も行った。結果を図６に示す。図６から分かるように、対照群では筋線維の広範な破壊が認められたのに対し、ｉＰＳ細胞培養上清を経鼻投与した実験群では野生型の筋線維と同様の構造が保たれていた。
なお、図４および図５中、ｉＰＳ−ＣＭはｉＰＳ細胞培養上清を投与した実験群を示す。
なお、図４および図５中、ｉＰＳ−ＣＭはｉＰＳ細胞培養上清を投与した実験群を示す。
上記の実験結果が得られた理由は次のように推定することが出来る。経鼻投与されたｉＰＳ細胞培養上清中の複数のサイトカインが臭神経を通じて脳髄液に吸収され、同時に鼻粘膜を介して血中に入り、脊髄に到達したものと考えられる。到達したサイトカインは強い抗炎症効果および神経再生効果を示し、その結果、運動神経の萎縮が防がれたと考えられる。今回の実験では、神経変性疾患の一例としてＡＬＳモデルマウスを用いたが、このような効果は、他の神経変性疾患、例えばパーキンソン病やアルツハイマー病に対しても同様に作用すると考えられる。上記の効果は、広く中枢神経系一般に作用するものであるからである。
（プラスミドを用いて作製したヒトｉＰＳ細胞）
また、ｉＰＳ細胞の作製元となる細胞としてヒト骨髄由来間葉系細胞を用いた以外は、Okita K. et al.: Nat Methods 8, 409-412に記載された方法に従って作製されたヒトｉＰＳ細胞でも実験を行った。具体的には、プラスミドpCXLE-hOCT3/4-shp53（OCT3/4を有するpCXLE-hOCT3/4 (Addgene accession code 27076)のBamHIサイトにマウスU6プロモータに駆動された、p53用shRNA発現カセットを挿入したもの）、pCXLE-hSK（Addgene accession code 27078、SOX2およびKLF4を有する）およびpCXLE-hUL（Addgene accession code 27080、L-MYCおよびLIN28を有する）を用意し、１００μｌキットと共にマイクロポレーター（インビトロゲン社）を用いて6×105個のヒト骨髄由来間葉系細胞にエレクトロポレーションで導入した。導入条件は、１８００Ｖ、２０ｍｓ、一回のパルスであった。導入の７日後に細胞をトリプシン処理し、１×１０５細胞をＳＮＬまたはＭＥＦフィーダー層で覆われた１００ｍｍディッシュに再プレーティングした。次の日に培地を上記ｉＰＳ細胞用培地に交換した。プレーティングの２６〜３２日後にコロニーをカウントした。ヒトＥＳ細胞に類似したコロニーを選抜した。こうして得られたヒトｉＰＳ細胞を用いて、培養上清の作製を、上記と同様にして行った。そして、この培養上清を用いて上記と同様に変異SOD1（G93A）導入マウスに投与した場合の効果を調べた。
その結果、レトロウィルスを用いて作製されたヒトｉＰＳ細胞の場合と同様の結果が得られた。このように、ｉＰＳ細胞の作製方法によらず、ｉＰＳ細胞培養上清は神経変性疾患の抑制について優れた性質を有していた。
また、ｉＰＳ細胞の作製元となる細胞としてヒト骨髄由来間葉系細胞を用いた以外は、Okita K. et al.: Nat Methods 8, 409-412に記載された方法に従って作製されたヒトｉＰＳ細胞でも実験を行った。具体的には、プラスミドpCXLE-hOCT3/4-shp53（OCT3/4を有するpCXLE-hOCT3/4 (Addgene accession code 27076)のBamHIサイトにマウスU6プロモータに駆動された、p53用shRNA発現カセットを挿入したもの）、pCXLE-hSK（Addgene accession code 27078、SOX2およびKLF4を有する）およびpCXLE-hUL（Addgene accession code 27080、L-MYCおよびLIN28を有する）を用意し、１００μｌキットと共にマイクロポレーター（インビトロゲン社）を用いて6×105個のヒト骨髄由来間葉系細胞にエレクトロポレーションで導入した。導入条件は、１８００Ｖ、２０ｍｓ、一回のパルスであった。導入の７日後に細胞をトリプシン処理し、１×１０５細胞をＳＮＬまたはＭＥＦフィーダー層で覆われた１００ｍｍディッシュに再プレーティングした。次の日に培地を上記ｉＰＳ細胞用培地に交換した。プレーティングの２６〜３２日後にコロニーをカウントした。ヒトＥＳ細胞に類似したコロニーを選抜した。こうして得られたヒトｉＰＳ細胞を用いて、培養上清の作製を、上記と同様にして行った。そして、この培養上清を用いて上記と同様に変異SOD1（G93A）導入マウスに投与した場合の効果を調べた。
その結果、レトロウィルスを用いて作製されたヒトｉＰＳ細胞の場合と同様の結果が得られた。このように、ｉＰＳ細胞の作製方法によらず、ｉＰＳ細胞培養上清は神経変性疾患の抑制について優れた性質を有していた。
以上説明したとおり、本開示に係るｉＰＳ細胞培養上清が有する神経変性疾患の抑制効果により、本開示に係る神経変性疾患治療用組成物を用いれば、神経変性疾患の先制医療や治療（進行抑制も含む）を達成することが可能となる。
この発明は、上記発明の実施の形態及び実施例の説明に何ら限定されるものではない。特許請求の範囲の記載を逸脱せず、当業者が容易に想到できる範囲で種々の変形態様もこの発明に含まれる。
本明細書に記載された全ての文献、特許出願、および技術規格は、個々の文献、特許出願、および技術規格が参照により取り込まれることが具体的かつ個々に記された場合と同程度に、本明細書中に援用されて取り込まれる。
本明細書に記載された全ての文献、特許出願、および技術規格は、個々の文献、特許出願、および技術規格が参照により取り込まれることが具体的かつ個々に記された場合と同程度に、本明細書中に援用されて取り込まれる。
Claims (14)
- ｉＰＳ細胞を培養することによって得られたｉＰＳ細胞培養上清を含む、神経変性疾患治療用組成物。
- 前記ｉＰＳ細胞を含まない、請求項１に記載の神経変性疾患治療用組成物。
- 無細胞である、請求項１または請求項２に記載の神経変性疾患治療用組成物。
- 前記ｉＰＳ細胞培養上清が、遠心処理、濃縮、溶媒の置換、透析、凍結、乾燥、凍結乾燥、希釈、脱塩及び保存からなる群から選択される１以上によって処理されたものである、請求項１〜請求項３のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
- 前記ｉＰＳ細胞が、骨髄由来間葉系幹細胞に由来するものである、請求項１〜請求項４のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
- 血清を含まない、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
- 対象において神経変性疾患の発症前に前記神経変性疾患の発症を抑えるために用いられる、請求項１〜請求項６のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
- 前記対象が、前記神経変性疾患を発病するリスクを有すると判定された対象である、請求項７に記載の神経変性疾患治療用組成物。
- 前記神経変性疾患が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン症候群、アルツハイマー型痴呆、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、脊髄小脳変性症（ＳＣＤ）およびフリードライヒ失調症からなる群から選択される、請求項１〜請求項８のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
- 経鼻投与により投与される、請求項１〜請求項９のいずれか一項に記載の神経変性疾患治療用組成物。
- （１）ｉＰＳ細胞を培養するステップ；および
（２）前記ｉＰＳ細胞の培養により得られた培養上清を回収するステップ、
を含む、神経変性疾患治療用組成物の製造方法。 - 体細胞に初期化因子を導入して前記ｉＰＳ細胞を作成するステップをさらに含む、請求項１１に記載の方法。
- 前記回収した培養上清に対して、遠心処理、濃縮、溶媒の置換、透析、凍結、乾燥、凍結乾燥、希釈、脱塩及び保存からなる群より選択される少なくとも１の処理を行うステップをさらに含む、請求項１１または請求項１２に記載の方法。
- 前記回収した培養上清に追加的成分を添加するステップをさらに含む、請求項１１〜請求項１３のいずれか一項に記載の方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2015003494A JP2016128397A (ja) | 2015-01-09 | 2015-01-09 | ｉＰＳ細胞培養上清を含む神経変性疾患治療用組成物およびその製造方法、神経変性疾患発症抑制方法ならびに神経変性疾患治療方法 |
| PCT/JP2016/050729 WO2016111378A1 (ja) | 2015-01-09 | 2016-01-12 | ｉＰＳ細胞培養上清を含む神経変性疾患治療用組成物およびその製造方法、神経変性疾患発症抑制方法ならびに神経変性疾患治療方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2015003494A JP2016128397A (ja) | 2015-01-09 | 2015-01-09 | ｉＰＳ細胞培養上清を含む神経変性疾患治療用組成物およびその製造方法、神経変性疾患発症抑制方法ならびに神経変性疾患治療方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2016128397A true JP2016128397A (ja) | 2016-07-14 |
Family
ID=56356061
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2015003494A Pending JP2016128397A (ja) | 2015-01-09 | 2015-01-09 | ｉＰＳ細胞培養上清を含む神経変性疾患治療用組成物およびその製造方法、神経変性疾患発症抑制方法ならびに神経変性疾患治療方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2016128397A (ja) |
| WO (1) | WO2016111378A1 (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011118795A1 (ja) * | 2010-03-26 | 2011-09-29 | 国立大学法人名古屋大学 | 損傷部治療用組成物 |
-
2015
- 2015-01-09 JP JP2015003494A patent/JP2016128397A/ja active Pending
-
2016
- 2016-01-12 WO PCT/JP2016/050729 patent/WO2016111378A1/ja active Application Filing
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011118795A1 (ja) * | 2010-03-26 | 2011-09-29 | 国立大学法人名古屋大学 | 損傷部治療用組成物 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| YOO, J. ET AL.: "Stem cells as promising therapeutic options for neurological disorders", J. CELL. BIOCHEM., vol. 114, no. 4, JPN6016011109, 2013, pages 743 - 753, ISSN: 0003770168 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2016111378A1 (ja) | 2016-07-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11135243B2 (en) | Composition for treatment of damaged part | |
| AU2014250190B2 (en) | Method for producing reprogrammed derivative neuronal stem cell from non-neuronal cell by using HMGA2 | |
| WO2016111377A1 (ja) | ｉＰＳ細胞培養上清を含む医薬組成物およびその製造方法、化粧品およびその製造方法、抗加齢組成物、疾患発症抑制方法、疾患治療方法、組織異常治療方法ならびに美容方法 | |
| KR101210984B1 (ko) | 음파를 이용한 중간엽 줄기세포의 신경세포 분화유도 방법 | |
| JP2018534370A (ja) | 神経細胞の細胞外小胞 | |
| Gong et al. | Materials for Neural Differentiation, Trans‐Differentiation, and Modeling of Neurological Disease | |
| Xu et al. | How to reprogram human fibroblasts to neurons | |
| JP7094567B2 (ja) | 神経堤細胞および交感神経細胞の製造方法 | |
| KR101548318B1 (ko) | 신경특이인자 및 신경영양인자를 이용하여 체세포로부터 신경전구세포, 신경세포, 희소돌기아교세포, 별아교세포 또는 도파민 신경세포를 유도하는 방법 | |
| KR102167826B1 (ko) | Sox2, c-Myc를 이용하여 비신경 세포로부터 직접 리프로그래밍된 유도신경줄기세포를 제조하는 방법 | |
| WO2014057997A1 (ja) | 初期化ペプチド及びその用途 | |
| Panda et al. | Non-viral reprogramming and induced pluripotent stem cells for cardiovascular therapy | |
| WO2016111378A1 (ja) | ｉＰＳ細胞培養上清を含む神経変性疾患治療用組成物およびその製造方法、神経変性疾患発症抑制方法ならびに神経変性疾患治療方法 | |
| Du et al. | HiPSC-Neural Stem/Progenitor Cell Transplantation Therapy for Spinal Cord Injury | |
| Zhao et al. | Emerging restorative treatments for Parkinson's disease: Manipulation and inducement of dopaminergic neurons from adult stem cells | |
| TWI769410B (zh) | 新穎誘導性多能幹細胞(ipscs)及其應用 | |
| Xiao-cheng et al. | Prospective use of skin-derived precursors in neural regeneration | |
| US20230242873A1 (en) | Fibroblast based therapy for treatment of parkinson's disease | |
| WO2021045238A1 (ja) | 皮膚由来骨格筋細胞の調製方法 | |
| Huang et al. | Induced pluripotent stem cell technologies for tissue engineering | |
| Tsai et al. | Differentiation of blood T cells: reprogramming human induced pluripotent stem cells into neuronal cells | |
| Yang et al. | Application of human umbilical cord mesenchymal stem cells in spinal cord injury | |
| Zadeh et al. | Mining Human Clinical Waste as a Rich Source of Stem Cells for Neural Regeneration | |
| KR20200047096A (ko) | 역분화 만능 유도세포 유도용 조성물 | |
| Haneef et al. | Gene expression pattern in rat bone marrow mesenchymal stem cells in response to hypoxia |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170721 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180403 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20181009 |