JP2015516405A

JP2015516405A - １８ｆ標識された葉酸／葉酸代謝拮抗物質同族体

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Publication number: JP2015516405A
Application number: JP2015510812A
Authority: JP
Inventors: シブリ・ローガー; モーザー・ルードルフ; ミュラー・クリスティナ・マグダレナ; アメタマイ・ジーモン・メンザー; ベッツェル・トーマス; グレーン・ヴィーオラ
Original assignee: メルク・アンド・コンパニー
Priority date: 2012-05-08
Filing date: 2013-05-08
Publication date: 2015-06-11
Anticipated expiration: 2033-05-08
Also published as: JP6198814B2; EA201401225A1; US20150125390A1; KR20150010970A; AU2013258027B2; CA2870124C; WO2013167653A1; IL235476B; ZA201407266B; IL235476A0; CN104379585A; EP2864329A1; PL2864329T3; EP2864329B1; US10357576B2; CN104379585B; HK1202548A1; AU2013258027A1; PT2864329T; DK2864329T3

Abstract

本発明は、葉酸構造内のフェニル基が１８Ｆ−ヘテロ環で置換された新規な１８Ｆ−葉酸／葉酸代謝拮抗物質同族体の放射性医薬品、その前駆体、その調製方法、ならびに葉酸受容体を発現させる細胞または細胞集団を診断し、がん、炎症性疾患および自己免疫疾患ならびにそれらの治療をモニターする際にそれを使用することに関する。

Description

本発明は、葉酸構造内のフェニル基が^１８Ｆ−ヘテロ環で置換された新規な^１８Ｆ−葉酸／葉酸代謝拮抗物質同族体（ａｎｔｉｆｏｌａｔｅａｎａｌｏｇｕｅ）の放射性医薬品、その前駆体、その調製方法、ならびに葉酸受容体を発現させる細胞または細胞集団を診断し、がん、炎症性疾患および自己免疫疾患ならびにそれらの治療をモニターする際にそれを使用することを対象とする。

診断薬や治療薬などのエフェクター部分を送達するための細胞特異的ターゲティングは、幅広く研究されている分野であり、非侵襲性診断および／または治療医学用途の開発につながっている。特に、γ線のような電磁放射線または粒子放射線（ｐａｒｔｉｃｌｅｅｍｉｔｔｉｎｇｒａｄｉａｔｉｏｎ）を放出する放射性材料を用いる核医学手順および処置の分野では、特定の組織を可視化して疾患を評定および／もしくは治療処置の効果をモニターするための高いシグナル強度、または、たとえば他の健康な組織における放射傷害／放射毒性のリスクなしに、十分な線量の電離放射線を指定の疾患部位に送達するための高い放射線量のいずれかを実現するのに、目標の細胞または組織におけるこうした放射性材料の選択的な局在化が必要となる。したがって、細胞に特異的な構造、詳細には、がん（すなわち腫瘍）または炎症性疾患および自己免疫疾患の場合に存在する構造、たとえば、それぞれの生物学的媒体の特異的な標的となりうる受容体、抗原、ハプテンなどを特定し、評定することは、重大な関心事である。

葉酸受容体（ＦＲ）は、こうした構造の一つとして特定されている（Ｌｏｗ、ＡｃｃＣｈｅｍＲｅｓ．２００８；４１：１２０−９（非特許文献１））。ＦＲは、高親和性（Ｋ_Ｄ＜１０^−９Ｍ）膜結合タンパク質である。正常な組織および臓器において、ＦＲ発現は、いくつかの臓器（たとえば、腎臓、肺、脈絡叢および胎盤）だけに非常に限定され、そこで、主として上皮細胞の管腔表面に存在し、したがって循環中の葉酸には接近可能でない。ＦＲαは、上皮性腫瘍（たとえば、卵巣、子宮頸、子宮内膜、乳房、結腸直腸、腎臓、肺、たとえば、Ｐａｒｋｅｒら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００５；２：２８４−２９３（非特許文献２）を参照されたい）などの広範な種類の特定の細胞型上に頻繁に過剰発現されるのに対し、ＦＲβは、白血病細胞において頻繁に過剰発現される（急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）のおよそ７０％がＦＲβ陽性である）。したがって、どちらも、選択的腫瘍ターゲティングのための価値のある腫瘍マーカーとして使用することができる（ＥｌｎａｋａｔおよびＲａｔｎａｍ、Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．２００４；５６：１０６７−８４（非特許文献３））。加えて、最近では、関節リウマチと診断された患者における（静止型でなく）活性化型滑液マクロファージが、機能活性のあるＦＲβを有することが発見されている（Ｎａｋａｓｈｉｍａ−Ｍａｔｓｕｓｈｉｔａら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ、１９９９、４２（８）：１６０９−１６（非特許文献４））。したがって、活性化型マクロファージは、関節炎関節において、葉酸結合体によって選択的に標的化することができ、これにより、関節リウマチの診断および治療の可能性が開かれる（Ｐａｕｌｏｓら、Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．２００４；５６：１２０５−１７（非特許文献５））。葉酸受容体陽性マクロファージが一般に富化される他の炎症性病理としては、関節リウマチ、クローン病、アテローム性動脈硬化症、サルコイドーシス、糸球体腎炎、骨関節炎、臓器移植拒絶反応、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、糖尿病、虚血／再潅流傷害、衝突外傷、微生物感染症、人工関節周囲骨溶解（ｐｒｏｓｔｈｅｓｉｓｏｓｔｅｏｌｙｓｉｓ）、肝臓脂肪症および多発性硬化症が挙げられる（Ｐｉｓｃａｅｒら２０１１、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ６３、１８９８（非特許文献６）；Ｈｅｎｎｅら２０１２、ＭｏｌＰｈａｒｍ、９：１４３５−４０（非特許文献７）；Ａｙａｌａ−Ｌｏｐｅｚら２０１０、ＪＮｕｃｌＭｅｄ５１、７６８（非特許文献８））。葉酸をターゲットとする治療薬によって、同疾患のための非常に強力で非毒性の治療様式の開発が大いに有望なものとなる（ＨａｎｓｅｎＭ．Ｊら、ＴａｒｇｅｔｅｄＤｒｕｇＳｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒＣａｎｃｅｒａｎｄＩｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ、ＳｐｒｉｎｇｅｒＳｃｉｅｎｃｅ＋ＢｕｓｉｎｅｓｓＭｅｄｉａ、２０１１、１８１−１９３（非特許文献９））。ＦＲβは、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）上にも過剰発現される。ＴＡＭは、大部分が、腫瘍促進的機能を示し、腫瘍細胞生存、増殖および内転移を促進する。臨床試験では、中でも、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、食道がん、膵臓がん、神経膠芽腫および膀胱がんについて、ＴＡＭの数と予後の悪さの相関が示されている（ＫｕｒａｈａｒａＨ．ら、ＡｎｎＳｕｒｇＯｎｃｏｌ．、２０１２年２月１６日（非特許文献１０）、ＮａｇａｉＴ．ら、ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２００９）５８１５７７−１５８６（非特許文献１１）、Ｐｕｉｇ−ＫｒｏｅｇｅｒＡ．らＣａｎｃｅｒＲｅｓ２００９；６９（２４）．２００９年１２月１５日（非特許文献１２）、ＴｕｒｋＭ．Ｊ．ら、ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔｅｒｓ２１３（２００４）１６５−１７２（非特許文献１３））。したがって、腫瘍関連マクロファージは、葉酸結合体によって選択的に標的化することができる。これにより、がんの診断および治療の可能性が開かれる。

このような細胞特異的な別の構造は、プロトン共役葉酸輸送体（ＰＣＦＴ）である。ＰＣＦＴは、そこで自身が酸性ｐＨにおいて葉酸吸収を媒介する近位小腸において（Ｑｉｕら、Ｃｅｌｌ．２００６年１２月１日；１２７（５）：９１７−２８（非特許文献１４））、また低ｐＨ条件に遭遇しない肝臓や腎臓などの組織において発現される（Ｚｈａｏら、ＥｘｐｅｒｔＲｅｖＭｏｌＭｅｄ．２００９年１月２８日；１１：ｅ４（非特許文献１５））。固形腫瘍の間質ｐＨは、多くの場合、酸性であり（Ｈｅｌｍｌｉｎｇｅｒら、ＮａｔＭｅｄ．１９９７年２月；３（２）：１７７−８２（非特許文献１６）；Ｒａｇｈｕｎａｎｄら、ＢｉｏｃｈｅｍＰｈａｒｍａｃｏｌ．１９９９年２月１日；５７（３）：３０９−１２（非特許文献１７））、ＰＣＦＴ輸送に好都合である。３２種のうち２９種のヒト固形腫瘍細胞系において、際立った低ｐＨ輸送経路が確認されており（Ｚｈａｏら、ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２００４年１月１５日；１０（２）：７１８−２７（非特許文献１８））、広い範囲のヒト腫瘍において、高レベルのヒトＰＣＦＴ（ｈＰＣＦＴ）転写物が報告されている（ＫｕｇｅｌＤｅｓｍｏｕｌｉｎら、ＡｍＡｓｓｏｃＣａｎｃｅｒＲｅｓ５１：１１０３（非特許文献１９））。葉酸代謝拮抗物質活性および腫瘍選択性におけるｈＰＣＦＴの役割は、依然として展開の最中にある。古典的な葉酸代謝拮抗物質のＰＣＦＴによる輸送については、以前に記載されている（Ｚｈａｏら、ＭｏｌＰｈａｒｍａｃｏｌ．２００８年９月；７４（３）：８５４−６２．Ｅｐｕｂ２００８年６月４日（非特許文献２０））。プロトン共役葉酸輸送体の標的化薬により、腫瘍の診断および治療の可能性が開かれる。

したがって、葉酸およびその誘導体は、葉酸受容体を有する細胞集団に治療薬および／または診断薬を送達する標的化薬として、治療薬および／または診断薬をそのような細胞に正常細胞と比較して選択的に蓄積させるために、過去１５年間にわたり集中的に研究されてきた。

葉酸放射性医薬品（ＬｅａｍｏｎおよびＬｏｗ、ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ２００１；６：４４−５１（非特許文献２１）；Ｊａｍｍａｚら、Ｊ．ＬａｂｅｌＣｏｍｐｄ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．２００６；４９：１２５−１３７（非特許文献２２）；ＭｕｅｌｌｅｒおよびＳｃｈｉｂｌｉ、２０１１Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．５２、１（非特許文献２３）；Ｍｕｅｌｌｅｒ、ＣｕｒｒｅｎｔＰｈａｒｍＤｅｓｉｇｎ、２０１２（非特許文献２４））、化学療法薬の葉酸結合体（ＬｅａｍｏｎおよびＲｅｄｄｙ、Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．２００４；５６：１１２７−４１（非特許文献２５）；Ｌｅａｍｏｎら、ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ．２００５；１６：８０３−１１（非特許文献２６））、タンパク質およびタンパク質毒素（Ｗａｒｄら、Ｊ．ＤｒｕｇＴａｒｇｅｔ．２０００；８：１１９−２３（非特許文献２７）；Ｌｅａｍｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９３；２６８：２４８４７−５４（非特許文献２８）；ＬｅａｍｏｎおよびＬｏｗ、Ｊ．ＤｒｕｇＴａｒｇｅｔ．１９９４；２：１０１−１２（非特許文献２９））、アンチセンスオリゴヌクレオチド（Ｌｉら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１９９８；１５：１５４０−４５（非特許文献３０）；ＺｈａｏおよびＬｅｅ、Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．２００４；５６：１１９３−２０４（非特許文献３１））、リポソーム（ＬｅｅおよびＬｏｗ、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ−Ｂｉｏｍｅｍｂｒ．１９９５；１２３３：１３４−４４（非特許文献３２）；Ｇａｂｉｚｏｎら、Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．２００４；５６：１１７７−９２（非特許文献３３））、ハプテン分子（Ｐａｕｌｏｓら、Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．２００４；５６：１２０５−１７（非特許文献３４））、ＭＲＩ造影剤（Ｋｏｎｄａら、Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍａｔ．Ｐｈｙｓ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２００１；１２：１０４−１３（非特許文献３５））などを含めて、種々のプローブが、葉酸に結合させられ、（前）臨床評価がなされている。

葉酸放射性医薬品は、特に、がん治療の有効性の診断および評価の改善に非常に有用となりうる。これには、治療応答の評定および／または予測、ならびに、その結果として、放射線量計測の改善を含めることができる。典型的な可視化技術は、陽電子を放出する放射性核種を対象に投与し、核種が放射性崩壊を経るとき、陽電子消滅の結果として生じるガンマ線をＰＥＴ走査装置で検出する、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）である。ＰＥＴは、感度が高く、定量化法が十分に綿密に練られているために、脳および他の臓器におけるリガンドまたは代謝基質の局所取込みおよび親和性を評定するための最も精巧な機能的画像処理技術の一つとして確立されており、したがって、代謝活性に基づく画像処理の手段となる。ＰＥＴに適する放射性医薬品は、金属同位体を金属を閉じ込めるためのキレート化剤と組み合わせたもの（たとえば、^６８Ｇａ、^６４Ｃｕ、^８９Ｚｒ）、または共有結合連結した同位体、通常は、半減期の短い陽電子放射同位体、たとえば、^１１Ｃ（約２０分）、^１３Ｎ（約１０分）、^１５Ｏ（約２分）、^１８Ｆ（約１１０分）を主体としたものでよい。

過去数十年にわたって、いくつかのキレート系葉酸放射性医薬品、詳細には^１１１Ｉｎ、^９９ｍＴｃおよび^６７／８Ｇａ^８Ｇａ誘導体が、ＳＰＥＣＴまたはＰＥＴを使用して葉酸受容体陽性腫瘍を画像処理するための診断薬として合成され、好結果の評価を得ている（たとえば、Ｓｉｅｇｅｌら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２００３、４４：７００（非特許文献３６）；Ｍｕｅｌｌｅｒら、Ｊ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．２００４、６８９：４７１２（非特許文献３７）；Ｍａｔｈｉａｓら、Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００３、３０（７）：７２５（非特許文献３８）；ＷＯ２００８／１２５６１８（特許文献１）；Ｍｕｅｌｌｅｒら２０１１、Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．＆Ｂｉｏｌ．３８、７１５（非特許文献３９）を参照されたい）。

より最近では、共有結合連結した陽電子放射１８Ｆ核種を有する葉酸放射性医薬品が報告されており（たとえば、Ｂｅｔｔｉｏら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．、２００６、４７（７）、１１５３（非特許文献４０）；ＷＯ２００６／０７１７５４（特許文献２）；ＷＯ２００８／０９８１１２（特許文献３）；ＷＯ２００８／１２５６１３（特許文献４）；ＷＯ２００８／１２５６１５（特許文献５）；ＷＯ２００８／１２５６１７（特許文献６）；ＷＯ２０１０／０４０８５４（特許文献７）；Ｒｏｓｓら２０１０、ＪＮｕｃｌ．Ｍｅｄ．、５１、１７５６（非特許文献４１）；Ｆｉｓｃｈｅｒら２０１２、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．（非特許文献４２）を参照されたい）、上で言及した考慮すべき事項のすべてを満たすことになる優れた画像処理特性を有するために、ＰＥＴ画像処理に最も適することが示されている。

それにもかかわらず、既知の１８Ｆ葉酸放射性医薬品でも見込みのある結果が示されるとはいえ、高いＦＲ特異性を示し、日常の臨床用途に適し、しかも効率的かつ万能な方法において高い放射化学収率で得ることのできる化合物が、依然として求められている。

ＷＯ２００８／１２５６１８ＷＯ２００６／０７１７５４ＷＯ２００８／０９８１１２ＷＯ２００８／１２５６１３ＷＯ２００８／１２５６１５ＷＯ２００８／１２５６１７ＷＯ２０１０／０４０８５４

Ｌｏｗ、ＡｃｃＣｈｅｍＲｅｓ．２００８；４１：１２０−９Ｐａｒｋｅｒら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００５；２：２８４−２９３ＥｌｎａｋａｔおよびＲａｔｎａｍ、Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．２００４；５６：１０６７−８４Ｎａｋａｓｈｉｍａ−Ｍａｔｓｕｓｈｉｔａら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ、１９９９、４２（８）：１６０９−１６Ｐａｕｌｏｓら、Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．２００４；５６：１２０５−１７Ｐｉｓｃａｅｒら２０１１、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ６３、１８９８Ｈｅｎｎｅら２０１２、ＭｏｌＰｈａｒｍ、９：１４３５−４０Ａｙａｌａ−Ｌｏｐｅｚら２０１０、ＪＮｕｃｌＭｅｄ５１、７６８ＨａｎｓｅｎＭ．Ｊら、ＴａｒｇｅｔｅｄＤｒｕｇＳｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒＣａｎｃｅｒａｎｄＩｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ、ＳｐｒｉｎｇｅｒＳｃｉｅｎｃｅ＋ＢｕｓｉｎｅｓｓＭｅｄｉａ、２０１１、１８１−１９３ＫｕｒａｈａｒａＨ．ら、ＡｎｎＳｕｒｇＯｎｃｏｌ．、２０１２年２月１６日ＮａｇａｉＴ．ら、ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２００９）５８１５７７−１５８６Ｐｕｉｇ−ＫｒｏｅｇｅｒＡ．らＣａｎｃｅｒＲｅｓ２００９；６９（２４）．２００９年１２月１５日ＴｕｒｋＭ．Ｊ．ら、ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔｅｒｓ２１３（２００４）１６５−１７２Ｑｉｕら、Ｃｅｌｌ．２００６年１２月１日；１２７（５）：９１７−２８Ｚｈａｏら、ＥｘｐｅｒｔＲｅｖＭｏｌＭｅｄ．２００９年１月２８日；１１：ｅ４Ｈｅｌｍｌｉｎｇｅｒら、ＮａｔＭｅｄ．１９９７年２月；３（２）：１７７−８２Ｒａｇｈｕｎａｎｄら、ＢｉｏｃｈｅｍＰｈａｒｍａｃｏｌ．１９９９年２月１日；５７（３）：３０９−１２Ｚｈａｏら、ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２００４年１月１５日；１０（２）：７１８−２７ＫｕｇｅｌＤｅｓｍｏｕｌｉｎら、ＡｍＡｓｓｏｃＣａｎｃｅｒＲｅｓ５１：１１０３Ｚｈａｏら、ＭｏｌＰｈａｒｍａｃｏｌ．２００８年９月；７４（３）：８５４−６２．Ｅｐｕｂ２００８Ｊｕｎ４ＬｅａｍｏｎおよびＬｏｗ、ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ２００１；６：４４−５１Ｊａｍｍａｚら、Ｊ．ＬａｂｅｌＣｏｍｐｄ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．２００６；４９：１２５−１３７ＭｕｅｌｌｅｒおよびＳｃｈｉｂｌｉ、２０１１Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．５２、１Ｍｕｅｌｌｅｒ、ＣｕｒｒｅｎｔＰｈａｒｍＤｅｓｉｇｎ、２０１２ＬｅａｍｏｎおよびＲｅｄｄｙ、Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．２００４；５６：１１２７−４１Ｌｅａｍｏｎら、ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ．２００５；１６：８０３−１１Ｗａｒｄら、Ｊ．ＤｒｕｇＴａｒｇｅｔ．２０００；８：１１９−２３Ｌｅａｍｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９３；２６８：２４８４７−５４ＬｅａｍｏｎおよびＬｏｗ、Ｊ．ＤｒｕｇＴａｒｇｅｔ．１９９４；２：１０１−１２Ｌｉら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１９９８；１５：１５４０−４５ＺｈａｏおよびＬｅｅ、Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．２００４；５６：１１９３−２０４ＬｅｅおよびＬｏｗ、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ−Ｂｉｏｍｅｍｂｒ．１９９５；１２３３：１３４−４４Ｇａｂｉｚｏｎら、Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．２００４；５６：１１７７−９２Ｐａｕｌｏｓら、Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．２００４；５６：１２０５−１７Ｋｏｎｄａら、Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍａｔ．Ｐｈｙｓ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２００１；１２：１０４−１３Ｓｉｅｇｅｌら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２００３、４４：７００Ｍｕｅｌｌｅｒら、Ｊ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．２００４、６８９：４７１２Ｍａｔｈｉａｓら、Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２００３、３０（７）：７２５Ｍｕｅｌｌｅｒら２０１１、Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．＆Ｂｉｏｌ．３８、７１５Ｂｅｔｔｉｏら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．、２００６、４７（７）、１１５３Ｒｏｓｓら２０１０、ＪＮｕｃｌ．Ｍｅｄ．、５１、１７５６Ｆｉｓｃｈｅｒら２０１２、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．Ｍ．Ｂｏｄａｎｚｓｋｙ、「ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第１および第２改訂版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ− Ｖｅｒｌａｇ、ニューヨーク州ニューヨーク、１９８４および１９９３ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ、「ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第２版、ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．、イリノイ州ロックフォード、１９８４ＢｅｔｚｅｌらＢｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．２０１３、２４：２０５−２１４Ｗｉｌｓｏｎら２００１ＡｐｐｌｉｅｄＲａｄｉａｔｉｏｎａｎｄＩｓｏｔｏｐｅｓ

出願人らは、今回、葉酸骨格のフェニル基がヘテロ環で置換された葉酸誘導体が、万能的および効率的にかつ高い放射化学収率を伴って、１つ以上の１８Ｆ核種により置換できることを見出した。得られた１８Ｆ−葉酸／葉酸代謝拮抗物質同族体化合物は、ＦＲ陽性組織に対して高い選択性を示し、したがって、葉酸骨格に対するこのような変更は、葉酸受容体結合親和性にマイナスの影響を及ぼさないと結論付けることができる。

かくして、本発明は、縮合ピリミジンヘテロ環を、適切なリンカー（プテリジンヘテロ環のＣ６位における−ＣＨ_２−ＮＨ−リンカーなど）を介して、葉酸構造内のアミノ酸部分に接続するフェニル基が、１８Ｆで置換された５員または６員ヘテロ環で置換された、新規な^１８Ｆ−葉酸／葉酸代謝拮抗物質同族体の放射性医薬品、その前駆体、その調製方法、ならびに葉酸受容体を発現させる細胞または細胞集団を診断し、がん、炎症性疾患および自己免疫疾患ならびにそれらの治療をモニターする際の、その使用を対象とする。

本発明は、第一の態様において、縮合ピリミジンヘテロ環をアミノ酸部分に接続するフェニル基が、^１８Ｆ置換された５員または６員ヘテロ環で置換された、新規な^１８Ｆ−葉酸／葉酸代謝拮抗物質同族体の放射性医薬品およびその前駆体（以下では本発明の化合物とも呼ぶ）を対象とする。

より詳細には、本発明は、式Ｉの化合物を対象とする。

式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｂは、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む５員または６員ヘテロ環であり、
Ｘ_１〜Ｘ_５は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｒ_１、Ｒ_２は、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ_７、−ＮＲ_８Ｒ_９、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノ）カルボニルであり、Ｒ_７は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖または分枝Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
ｐは、０、１または２であり、
ｑは、１〜７の値を有し、
ｒは、０または１である。

さらにより詳細には、本発明は、式Ｉａで表すとおり、５員または６員ヘテロ環が、少なくとも１個の窒素、酸素もしくは硫黄原子を有する５員ヘテロ環である、または式Ｉｂで表すとおり、５員または６員ヘテロ環が、少なくとも１個の窒素、酸素もしくは硫黄原子を有する６員ヘテロ環である、式Ｉの化合物を対象とする。

したがって、詳細な実施形態では、本発明は、式ＩａおよびＩｂの化合物を対象とする。

式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｚ_１〜Ｚ_４は、互いに独立して、Ｎ、Ｏ、ＳまたはＣであり、但し、式Ｉａでは、Ｚ_１およびＺ_４の少なくとも一方が、Ｎ、ＯまたはＳであり、式Ｉｂでは、Ｚ_１、Ｚ_２およびＺ_３の少なくとも１つが、Ｎ、ＯまたはＳであり、
Ｘ_１〜Ｘ_５は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｒ_１、Ｒ_２は、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ_７、−ＮＲ_８Ｒ_９、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノ）カルボニルであり、Ｒ_７は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖または分枝Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
ｐは、０、１または２であり、
ｑは、１〜７の値を有し、
ｒは、０または１である。

一部の実施形態では、本発明は、式Ｉ、またはより詳細には、
５員ヘテロ環が、ピロールもしくはピロリジン、フランもしくはテトラヒドロフラン、またはチオフェンもしくはテトラヒドロチオフェンである、すなわち、（ａ）Ｚ_１がＮ、ＯもしくはＳであり、Ｚ_２、Ｚ_３がＣであるか、または（ｂ）Ｚ_２がＮ、ＯもしくはＳであり、Ｚ_１、Ｚ_３がＣであるか、または（ｃ）Ｚ_３がＮ、ＯもしくはＳであり、Ｚ_１、Ｚ_２がＣであるかのいずれかである、または
５員ヘテロ環が、イミダゾールもしくはイミダゾリジン、またはジオキソラン、または１，３−ジチオランである、すなわち、（ｄ）Ｚ_１、Ｚ_２が両方ともＮ、ＯもしくはＳであり、Ｚ_３がＣであるか、または（ｅ）Ｚ_１、Ｚ_３が両方ともＮ、ＯもしくはＳであり、Ｚ_２がＣであるかのいずれかである、または
５員ヘテロ環が、ピラゾールもしくはピラゾリジン、または１，２−ジチオランである、すなわち、（ｆ）Ｚ_２、Ｚ_３が両方ともＮもしくはＳであり、Ｚ_１がＣである、または
５員ヘテロ環が、オキサゾールもしくはオキサゾリジン、またはチアゾールもしくはチアゾリジンである、すなわち、（ｇ）Ｚ_１およびＺ_２の一方がＮであり、Ｚ_１およびＺ_２の一方がＯもしくはＳであり、Ｚ_３がＣであるか、または（ｈ）Ｚ_１およびＺ_３の一方がＮであり、Ｚ_１およびＺ_３の一方がＯもしくはＳであり、Ｚ_２がＣであるかのいずれかである、または
５員ヘテロ環が、イソオキサゾールもしくはイソオキサゾリジン、またはイソチアゾールもしくはイソチアゾリジンである、すなわち、（ｉ）Ｚ_２およびＺ_３の一方がＮであり、Ｚ_２およびＺ_３の一方がＯもしくはＳであり、Ｚ_１がＣである、または
５員ヘテロ環が、トリアゾールまたはオキサジアゾールまたはチアジアゾールである、すなわち、（ｊ）Ｚ_１、Ｚ_２、Ｚ_２がすべてＮであるか、または（ｋ）Ｚ_１がＯもしくはＳであり、Ｚ_２、Ｚ_３が両方ともＮである、
式Ｉａの化合物を対象とする。

他の実施形態では、本発明は、５員または６員ヘテロ環が、式Ｉｂで表される、少なくとも１個の窒素原子を有する６員環（本明細書ではアザヘテロ環とも呼ぶ）である、式Ｉｂの化合物を対象とする。

式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｚ_１〜Ｚ_４は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、但し、Ｚ_１およびＺ_４の少なくとも一方は、Ｎであり、
Ｘ_１〜Ｘ_５は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｒ_１、Ｒ_２は、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ_７、−ＮＲ_８Ｒ_９、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノ）カルボニルであり、Ｒ_７は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖または分枝Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で独立して置き換えられており、Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
ｐは、０、１または２であり、
ｑは、１〜７の値であり、
ｒは、０または１である。

本発明での使用について、このようなアザヘテロ環は、ピリジン、ジアジンまたはトリアジンである。したがって、好ましい実施形態では、本発明は、式Ｉ、またはより詳細には、（ａ）Ｚ_１がＮであり、Ｚ_２、Ｚ_３、Ｚ_４がＣである、または（ｂ）Ｚ_４がＮであり、Ｚ_１、Ｚ_２、Ｚ_３がＣである、または（ｃ）Ｚ_１、Ｚ_２がＮであり、Ｚ_３、Ｚ_４がＣである、または（ｄ）Ｚ_１、Ｚ_３がＮであり、Ｚ_２、Ｚ_４がＣである、または（ｅ）Ｚ_１、Ｚ_４がＮであり、Ｚ_２、Ｚ_３がＣである、または（ｆ）Ｚ_３、Ｚ_４がＮであり、Ｚ_１、Ｚ_２がＣである、または（ｇ）Ｚ_１、Ｚ_２、Ｚ_３がＮであり、Ｚ_４がＣである、または（ｈ）Ｚ_１、Ｚ_３、Ｚ_４がＮであり、Ｚ_２がＣである、式Ｉｂの化合物を対象とする。

別の態様では、本発明は、その調製方法を対象とする。好ましい実施形態では、本発明の^１８Ｆ−葉酸／葉酸代謝拮抗物質同族体の放射性医薬品は、適切な前駆体の直接の^１８Ｆ放射標識（および引き続きの脱保護工程）によって得られる。

別の態様では、本発明は、葉酸受容体を発現させる細胞または細胞集団を診断し、がんおよびがん治療をインビトロもしくはインビボでモニターする、または関節リウマチなどの炎症性および自己免疫疾患ならびにその治療をモニターする際の使用を対象とする。

一実施形態では、本発明は、本発明の^１８Ｆ−葉酸／葉酸代謝拮抗物質同族体の放射性医薬品を、葉酸受容体を発現させる細胞または細胞集団の診断画像処理に使用することを対象とする。

より詳細には、本発明は、葉酸受容体を発現させる細胞または細胞集団の診断画像処理の方法を包含し、方法としては、たとえば、組織サンプルにおいて、葉酸受容体を発現させる細胞、たとえば、腫瘍細胞または活性化型マクロファージをインビトロで検出する方法が挙げられる。このような方法は、インビボで実施するものでもよい。

したがって、別の実施形態では、本発明は、がんまたは炎症性および自己免疫疾患治療の診断画像処理および／またはモニタリングを必要とする対象に好都合かつ有効に投与するための、本発明の^１８Ｆ−葉酸／葉酸代謝拮抗物質同族体の放射性医薬品の使用を対象とする。本発明の方法の対象は、動物またはヒトなどの哺乳動物であることが好ましく、ヒトが好ましい。

本発明のこのような方法は、すでに開発されている他の診断薬および／または治療薬を使用し、Ｘ線コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、機能磁気共鳴画像法（ｆＭＲＩ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）、光学画像処理および超音波を利用する方法を含めて、がんまたは炎症性疾患および自己免疫疾患の他のいずれかの診断または治療方法と組み合わせて実施することができる。

本発明の他の特色および利点は、以下のその詳細な説明および請求項から明らかとなろう。

（Ｘ）_ｎで置換された６−アミノニコチン酸をヘテロ環として用いた^１８Ｆ置換された３’−アザ−葉酸を調製するための代表的な合成反応式を示す図である。（Ｘ）_ｎは、^１８Ｆを導入するための１つ以上の電子吸引性置換基、たとえば、ＣＬ、Ｂｒ、ＮＯ_２、Ｆを表す。（Ｘ）_ｎで置換された６−アミノニコチン酸をヘテロ環として用いた^１８Ｆ置換された３’−アザ−葉酸を調製するための代表的な合成反応式を示す図である。（Ｘ）_ｎは、^１８Ｆを導入するための１つ以上の電子吸引性置換基、たとえば、ＣＬ、Ｂｒ、ＮＯ_２、Ｆを表す。（Ｘ）_ｎで置換された６−アミノニコチン酸をヘテロ環として用いた^１８Ｆ置換された３’−アザ−葉酸を調製するための代表的な合成反応式を示す図である。（Ｘ）_ｎは、^１８Ｆを導入するための１つ以上の電子吸引性置換基、たとえば、ＣＬ、Ｂｒ、ＮＯ_２、Ｆを表す。図１Ａ、１Ｂ、１Ｃの合成反応式で使用される、（Ｘ）_ｎで置換された６−アミノニコチン酸に代わるものとして使用する、アザ、ジアザまたはトリアザヘテロ環を選択して示す図である。（Ｘ）_ｎは、１つ以上の電子吸引性置換基、たとえば、ＣＬ、Ｂｒ、ＮＯ_２、Ｆを表す。Ａ：ヒト血漿（４時間）、Ｂ：ヒトグルタチオン（１時間）、Ｃ：マウスミクロソーム（１時間）、Ｄ：ヒトミクロソーム（１時間）における３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ葉酸の安定性を示すグラフである。ＨＰＬＣ精製後の３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ葉酸の精度管理を示すグラフである。３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ葉酸の代謝産物研究である、Ａ：精度管理、Ｂ：注射から５分後の血液サンプル、Ｃ：注射から３０分後の血液サンプル、Ｄ：注射から３０分後の腫瘍、Ｅ：注射から３０分後の尿、Ｆ：注射から３０分後の肝臓のラジオＵＰＬＣクロマトグラムである。３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ葉酸の細胞取込み研究の結果：合計取込み（青）、内部移行した画分（黄）、および遮断条件下での取込み（赤／不可視）を示すグラフである。（Ａ）３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ葉酸のみを注射してから、ならびに（Ｂ）過剰の葉酸および［^１８Ｆ］−３’−アザ−葉酸を注射してから１２０〜１５０分後の担ＫＢ腫瘍マウスのＰＥＴ画像（最大強度投射）である。３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ葉酸を（Ａ）単独で、および（Ｂ）予め注射されるペメトレキセドと組み合わせて注射してから１２０〜１５０分後の担ＫＢ腫瘍マウスのＰＥＴ画像（最大強度投射）である。

本発明は、第一の態様において、縮合ピリミジンヘテロ環をアミノ酸部分に接続するフェニル基が、^１８Ｆ置換された５員または６員ヘテロ環で置換された、新規な^１８Ｆ−葉酸／葉酸代謝拮抗物質同族体の放射性医薬品（以下では本発明の化合物とも呼ぶ）およびその前駆体を対象とする。

本発明で使用する葉酸／葉酸代謝拮抗物質同族体は、葉酸骨格のフェニル基、すなわち、葉酸において、縮合ピリミジンヘテロ環をアミノ酸（またはグルタミン酸）部分に連結するアミノベンゾイル基のフェニル基が、Ｏ、ＮおよびＳから独立して選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む５員または６員ヘテロ環で置換された、葉酸／葉酸代謝拮抗物質化合物である。

本明細書で葉酸／葉酸代謝拮抗物質構造について使用する用語ヘテロ環とは、１個または複数のＮ、ＯまたはＳ原子、より詳細には、１、２または３個のＮ、ＯまたはＳ原子を有する飽和または（部分的）不飽和のヘテロ環を指す。したがって、典型的なＮ、ＯまたはＳヘテロ環としては、たとえば、ピリジン、ジアジンまたはトリアジン、より詳細には、ピリジン、ピリミジン、ピリダジン、ピラジン、トリアジン、テトラヒドロフラン、フラン、チオラン、チオフェン、ピロリジン、ピロール、チアゾリジン、イソチアゾリジン、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾリジン、イソオキサゾリジン、オキサゾール、イソオキサゾール、ピラゾリジン、イミダゾリジン、ピラゾール、イミダゾール、ジオキソラン、ジチアゾール、チアジアゾール、オキサジアゾール、フラザンまたはトリアゾールが挙げられる。Ｎ、ＯまたはＳヘテロ環は、６員環の場合では１，４−結合型（またはパラ位）、５員環の場合では１，３−結合型であることが好ましく、６員ヘテロ環の場合では、Ｎ−ヘテロ環、すなわち、１、２または３個のＮ原子を有する飽和または（部分的）不飽和のヘテロ環が好ましく、通常は、アミノリンカーを介して縮合ピリミジンヘテロ環単位（またはその誘導体）に、またカルボニル基を介して１つ以上のアミノ酸単位に、パラ位で連結して、本発明によるアザ−フォレート（ａｚａ−ｆｏｌａｔｅ）およびその誘導体が得られる。本明細書で使用するとき、「縮合ピリミジンヘテロ環」は、別の５員または６員ヘテロ環と縮合したピリミジン、たとえば、プテリジンまたはピロロピリミジン二環を包含する。本明細書で使用するとき、用語「アミノ酸」は、アミノ基（たとえば、ＮＨ_２またはＮＨ_３ ^＋）とカルボン酸基（たとえば、ＣＯＯＨまたはＣＯＯ⁻）の両方を有する化合物を包含する。詳細な実施形態では、アミノ酸は、α−アミノ酸、β−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸でよい。アミノ酸は、天然のアミノ酸（たとえば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニンまたはヒスチジンなど）でよく、またはその誘導体でよい。誘導体の例としては、たとえば、ＣＮ、Ｈａｌおよび／またはＮＯ_２から選択される１つ以上の置換基を有する、任意選択で置換されているアミノ酸（たとえば、フルオログルタミン酸）が挙げられる。アミノ酸には、非天然の他のいずれかのアミノ酸、たとえば、ノルロイシン、ノルバリン、Ｌ−またはＤ−ナフトアラニン、オルニチン、ホモアルギニン、およびペプチド技術においてよく知られている他のものも含めることができる（たとえば、どちらも参照により本明細書に援用される、Ｍ．Ｂｏｄａｎｚｓｋｙ、「ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第１および第２改訂版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ− Ｖｅｒｌａｇ、ニューヨーク州ニューヨーク、１９８４および１９９３（非特許文献４３）、ならびにＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ、「ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第２版、ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．、イリノイ州ロックフォード、１９８４（非特許文献４４）を参照されたい）。アミノ酸およびアミノ酸類似体／誘導体は、市販品として購入する（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．、ＡｄｖａｎｃｅｄＣｈｅｍｔｅｃｈ）、または当業界で知られている方法を使用して合成することができる。別の詳細な実施形態では、アミノ酸は、同じまたは異なる複数の、上で定義したとおりのアミノ酸が共有結合連結している、すなわち、従来のペプチド結合または他の結合で連結している、ポリアミノ酸（ポリペプチドとも呼ばれる）の一部でもよい。好ましいアミノ酸としては、たとえば、グルタミン酸、アスパラギン酸、グルタミン、アスパルチン（ａｓｐａｒｔｉｎｅ）、リシン、アルギニン、システイン、およびこれらの誘導体が挙げられ、好ましいポリアミノ酸としては、そのそれぞれのホモポリマー（たとえば、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸など）が挙げられる。最も好ましいのは、任意選択で置換されているアスパラギン酸およびグルタミン酸である。

本発明の^１８Ｆ−葉酸／葉酸代謝拮抗物質化合物の誘導体が、ジヒドロ葉酸やテトラヒドロ葉酸などのより還元された形態を得るためのプテリジン環の（ピラジンヘテロ環の）異なる酸化状態、ならびにＮ５位および／またはＮ１０位における１つの炭素置換基のタイプ、結合体形成したアミノ酸残基のタイプおよび数、種々の単位の置換パターン、および他の誘導体を含めて、ピリミジンヘテロ環単位および／または１つ以上のアミノ酸の性質におけるさらなる変形形態を包含しうることは理解される。

上で指摘したとおり、６員ヘテロ環を有する本発明の^１８Ｆ−葉酸／葉酸代謝拮抗物質化合物の場合では、Ｎ−ヘテロ環（アザ−フォレートとも呼ばれる）が好ましい。本明細書で使用するこのようなアザ−フォレートの好ましい典型は、アザ−フォレート骨格、すなわち、Ｎ−［４［［（２−アミノ−１，４−ジヒドロ−４−オキソ−６−プテリジニル）メチル］アミノ］−アザヘテロシクロイル−］−グルタミン酸を主体としており、アザヘテロシクロイルとは、その２’−または３’−ピリジニル誘導体を指し、任意選択で置換されているアザ−葉酸、アザ−フォリン酸、プテロポリ−グルタミン酸、および葉酸受容体結合性プテリジン、たとえば、テトラヒドロプテリン、ジヒドロ−アザ−フォレート、テトラヒドロ−アザ−フォレート、ならびにこれらの既知のデアザ−およびジデアザ−プテロイル類似体を包含する。

同様に、アザヘテロシクロイル基の代わりに、上で定義したとおりの５員ヘテロ環を含む１８Ｆ−葉酸／葉酸代謝拮抗物質同族体の好ましい典型は、２−チエニル−、１，３，４−チアジアゾール−２−イル−、４−チアゾリル−、２−チアゾリル−、５−チアゾリル−、１Ｈ−ピラゾール−３−イル−、１Ｈ−イミダゾール−５−イル、１Ｈ−ピロール−２−イル−、１Ｈ−ピロール−３−イル−、および２−フラニル−化合物である。

アザ−フォレート構造は、本発明の化合物に使用する好ましい基礎構造である。表現「デアザ−およびジデアザ−プテロイル類似体」とは、プテロイル基中の４個の窒素原子のうちの１個または２個の窒素原子が、１個または２個の窒素原子の代わりに用いられる炭素原子により置換されている、当業界で認識されるプテロイル類似体を指す。たとえば、デアザ類似体には、１−デアザ、３−デアザ、５−デアザ、８−デアザおよび１０−デアザ類似体が含まれる。ジデアザ類似体には、たとえば、１，５−ジデアザ、５，１０−ジデアザ、８，１０−ジデアザおよび５，８−ジデアザ類似体が含まれる。フェニル基がアザヘテロ環により置換されて、対応するアザ−フォレート誘導体に到達しうる、既知で好ましいデアザ類似体として、Ｎ−［４−［２−［（６Ｒ）−２−アミノ−１，４，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル］エチル］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸（ロメトレキソール）およびＮ−［４−［１−［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］プロピル］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸（エダトレキセート）が挙げられる。

特定の実施形態では、新規な葉酸／葉酸代謝拮抗物質同族体の放射性医薬品は、式Ｉの化合物である。

好ましい一実施形態では、本発明は、式Ｉａで表すとおり、５員または６員ヘテロ環が、少なくとも１個の窒素、酸素または硫黄原子を有する５員ヘテロ環である、式Ｉの化合物を対象とする。

式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｚ_１〜Ｚ_３は、互いに独立して、Ｎ、Ｏ、ＳまたはＣであり、但し、Ｚ_１、Ｚ_２およびＺ_３の少なくとも１つは、Ｎ、ＯまたはＳであり、
Ｘ_１〜Ｘ_５は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｒ_１、Ｒ_２は、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ_７、−ＮＲ_８Ｒ_９、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノ）カルボニルであり、Ｒ_７は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖または分枝Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
ｐは、０、１または２であり、
ｑは、１〜７の値を有し、
ｒは、０または１である。

好ましい実施形態では、５員ヘテロ環は、ピロールもしくはピロリジン、フランもしくはテトラヒドロフラン、またはチオフェンもしくはテトラヒドロチオフェンである、すなわち、（ａ）Ｚ_１がＮ、ＯもしくはＳであり、Ｚ_２、Ｚ_３がＣであるか、または（ｂ）Ｚ_２がＮ、ＯもしくはＳであり、Ｚ_１、Ｚ_３がＣであるか、または（ｃ）Ｚ_３がＮ、ＯもしくはＳであり、Ｚ_１、Ｚ_２がＣであるかのいずれかである、または５員ヘテロ環は、イミダゾールもしくはイミダゾリジン、またはジオキソラン、または１，３−ジチオランである、すなわち、（ｄ）Ｚ_１、Ｚ_２が両方ともＮ、ＯもしくはＳであり、Ｚ_３がＣであるか、または（ｅ）Ｚ_１、Ｚ_３が両方ともＮ、ＯもしくはＳであり、Ｚ_２がＣであるかのいずれかである、または５員ヘテロ環は、ピラゾールもしくはピラゾリジン、または１，２−ジチオランである、すなわち、（ｆ）Ｚ_２、Ｚ_３が両方ともＮもしくはＳであり、Ｚ_１がＣである、または５員ヘテロ環は、オキサゾールもしくはオキサゾリジン、またはチアゾールもしくはチアゾリジンである、すなわち、（ｇ）Ｚ_１およびＺ_２の一方がＮであり、Ｚ_１およびＺ_２の一方がＯもしくはＳであり、Ｚ_３がＣであるか、または（ｈ）Ｚ_１およびＺ_３の一方がＮであり、Ｚ_１およびＺ_３の一方がＯもしくはＳであり、Ｚ_２がＣであるかのいずれかである、または５員ヘテロ環は、イソオキサゾールもしくはイソオキサゾリジン、またはイソチアゾールもしくはイソチアゾリジンである、すなわち、（ｉ）Ｚ_２およびＺ_３の一方がＮであり、Ｚ_２およびＺ_３の一方がＯもしくはＳであり、Ｚ_１がＣである、または５員ヘテロ環は、トリアゾールまたはオキサジアゾールまたはチアジアゾールである、すなわち、（ｊ）Ｚ_１、Ｚ_２、Ｚ_２がすべてＮであるか、または（ｋ）Ｚ_１がＯもしくはＳであり、Ｚ_２、Ｚ_３が両方ともＮである。

好ましい別の実施形態では、本発明は、式Ｉｂで表すとおり、５員または６員ヘテロ環が、少なくとも１個の窒素、酸素または硫黄原子、好ましくは少なくとも１個の窒素原子を有する６員ヘテロ環である、式Ｉの化合物を対象とする。

式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｚ_１〜Ｚ_４は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、但し、Ｚ_１およびＺ_４の少なくとも一方は、Ｎであり、
Ｘ_１〜Ｘ_５は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｒ_１、Ｒ_２は、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ_７、−ＮＲ_８Ｒ_９、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノ）カルボニルであり、Ｒ_７は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖または分枝Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
ｐは、０、１または２であり、
ｑは、１〜７の値を有し、
ｒは、０または１である。

上文で定義したとおり、このようなアザヘテロ環は、ピリジン、ジアジンまたはトリアジンである。したがって、詳細な実施形態では、本発明は、（ａ）Ｚ_１がＮであり、Ｚ_２、Ｚ_３、Ｚ_４がＣである、または（ｂ）Ｚ_４がＮであり、Ｚ_１、Ｚ_２、Ｚ_３がＣである、または（ｃ）Ｚ_１、Ｚ_２がＮであり、Ｚ_３、Ｚ_４がＣである、または（ｄ）Ｚ_１、Ｚ_３がＮであり、Ｚ_２、Ｚ_４がＣである、または（ｅ）Ｚ_１、Ｚ_４がＮであり、Ｚ_２、Ｚ_３がＣである、または（ｆ）Ｚ_３、Ｚ_４がＮであり、Ｚ_１、Ｚ_２がＣである、または（ｇ）Ｚ_１、Ｚ_２、Ｚ_３がＮであり、Ｚ_４がＣである、または（ｈ）Ｚ_１、Ｚ_３、Ｚ_４がＮであり、Ｚ_２がＣである、式Ｉの化合物を対象とする。

すなわち、本発明は、特に、アザヘテロ環としてピリジン基を有する、すなわち、式ＩＩで表すとおりＺ１がＮである、または式ＩＩＩで表すとおりＺ４がＮである、式Ｉの化合物を対象とする。

式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｚ_１〜Ｚ_４は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｘ_１〜Ｘ_５は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｒ_１、Ｒ_２は、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ_７、−ＮＲ_８Ｒ_９、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノ）カルボニルであり、Ｒ_７は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖または分枝Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
ｐは、０、１または２であり、
ｑは、１〜７の値を有し、
ｒは、０または１である。

より詳細には、本発明は、さらに、式ＩＶａまたはＩＶｂで表される、Ａが、たとえばグルタミン酸残基である、式Ｉ〜ＩＩＩの化合物を対象とする。

式中、
Ｘ_１〜Ｘ_５は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｘ_６、Ｘ_７は、互いに独立して、Ｃ、ＮまたはＯであり、
Ｒ_１、Ｒ_２は、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ_７、−ＮＲ_８Ｒ_９、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノ）カルボニルであり、Ｒ_７は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖または分枝Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
Ｒ_５、Ｒ_６は、互いに独立して、Ｈまたは直鎖もしくは分枝Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
ｐは、０、１または２であり、
ｑは、１〜７の値を有し、
ｒは、０または１である。

式ＩＶａおよびＩＶｂの化合物の好ましい実施形態として、式ＩＶｃ、ＩＶｄおよびＩＶｅの化合物が挙げられる。

式中、
Ｘ_１〜Ｘ_７、Ｒ_１〜Ｒ_９、Ｒ’、ｎ、ｐ、ｑおよびｒは、上文で定義したとおりである。

式ＩＶａ〜ＩＶｅの化合物の特に好ましい実施形態としては、たとえば、Ｘ_１〜Ｘ_５がＮであり、Ｒ_１がＮＨ_２であり、Ｒ_２がＯであり、Ｒ_３およびＲ_４が両方ともＨであり、ｐが０であり、ｑが１である化合物が挙げられる。

したがって、さらに特定の実施形態では、本発明は、式ＩＶｆおよびＩＶｇの化合物を対象とする。

式中、
Ｒ_５、Ｒ_６は、互いに独立して、Ｈまたは直鎖もしくは分枝Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり、非置換であるか、または少なくとも１つのＣＮ、Ｈａｌ、もしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルである。

式Ｉ〜ＩＩＩの化合物の別の実施形態として、式Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄを有する、アザヘテロ環がジアジンである化合物が挙げられる。

式中、
Ｘ_１〜Ｘ_５は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｘ_６、Ｘ_７は、互いに独立して、Ｃ、ＮまたはＯであり、
Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃ、Ｒ_ｄは、互いに独立して、Ｈまたは^１８Ｆであり、但し、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃ、Ｒ_ｄのうち１つは、^１８Ｆであり、
Ｒ_１、Ｒ_２は、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ_７、−ＮＲ_８Ｒ_９、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノ）カルボニルであり、Ｒ_７は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖または分枝Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
Ｒ_５、Ｒ_６は、互いに独立して、Ｈまたは直鎖もしくは分枝Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
ｐは、０、１または２であり、
ｑは、１〜７の値を有し、
ｒは、０または１である。

式Ｉ〜ＩＩＩの化合物のさらに別の実施形態として、式ＶＩａ、ＶＩｂを有する、アザヘテロ環がトリアジンである化合物が挙げられる。

さらに詳細な実施形態では、基Ｒ_３、Ｒ_４は、本発明のすべての化合物において出現するとき、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであることが好ましい。基Ｒ_３、Ｒ_４は、より好ましくは、互いに独立して、Ｈ、メチルまたはホルミルである。

さらに詳細な実施形態では、基Ｒ_５、Ｒ_６は、本発明のすべての化合物において出現するとき、好ましくは、互いに独立して、Ｈまたは直鎖もしくは分枝Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルであり、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルである。基Ｒ_５、Ｒ_６は、より好ましくは、互いに独立して、Ｈ、メチル、エチルまたはｔｅｒｔ−ブチルである。

略語「Ｎ」および「Ｃ」は、考えられるすべての飽和度を表すものであり、すなわち、Ｎは、−ＮＨ−および−Ｎ＝連結部を包含し、Ｃは、−ＣＨ_２−および−ＣＨ＝連結部を包含すると理解される。

さらに、（Ｈ）_ｑは、示される環上（すなわち、Ｘ_３、Ｃ６、Ｃ７およびＸ_４上）のすべてのＨ置換基を表すと理解される。たとえば、完全飽和非置換類似体（Ｘ_３＝Ｘ_４＝Ｎ、ｐ＝０）についてはｑ＝５、または完全飽和非置換５，８−ジデアザ類似体（Ｘ_３＝Ｘ_４＝Ｃ、ｐ＝０）についてはｑ＝７であり、Ｘ_３＝Ｘ_４＝Ｎ、ｐ＝０である完全不飽和類似体についてはｑ＝１である。

式Ｉ〜ＩＩＩの化合物の好ましい実施形態として、たとえば、Ｘ_１〜Ｘ_５がＮであり、Ｒ_１がＮＹ_１Ｙ_２であり、Ｒ_２がＯであり、ｐが１であり、ｑが３である化合物が挙げられる。

したがって、さらに特定の実施形態では、本発明は、式ＶＩＩおよびＶＩＩＩの化合物を対象とする。

式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｚ_１〜Ｚ_４は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
Ｙ_１、Ｙ_２は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖または分枝Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである。

化合物ＶＩＩおよびＶＩＩＩの詳細な実施形態としては、式ＩＸａ、ＩＸｂ、ＩＸｃ、ＩＸｄ、ＩＸｅ、ＩＸｆの化合物が挙げられる。

式中、
Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃ、Ｒ_ｄは、互いに独立して、^１８ＦまたはＨであり、但し、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃ、Ｒ_ｄのうち１つは、^１８Ｆであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
Ｒ_５、Ｒ_６は、互いに独立して、Ｈまたは直鎖もしくは分枝Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｙ_１、Ｙ_２は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖または分枝Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである。

式Ｉ〜ＩＩＩの化合物の好ましい実施形態として、たとえば、Ｘ_１〜Ｘ_５がＮであり、Ｒ_１がＮＹ_１Ｙ_２であり、Ｒ_２がＯであり、ｐが０であり、ｑが１である化合物も挙げられる。

したがって、さらに詳細な実施形態では、本発明は、式ＸおよびＸＩの化合物を対象とする。

式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｚ_１〜Ｚ_４は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｒ_４は、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
Ｙ_１、Ｙ_２は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖または分枝Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである。

化合物ＸおよびＸＩの詳細な実施形態としては、式ＸＩＩａ、ＸＩＩｂ、ＸＩＩｃ、ＸＩＩｄ、ＸＩＩｅ、ＸＩＩｆの化合物が挙げられる。

他の実施形態は、Ｘ_１〜Ｘ_５がＮであり、Ｒ_１およびＲ_２がＮＨ_２であり、Ｒ_３がＨであり、Ｒ_４がＣＨ_３であり、ｐが０であり、ｑが１である、式Ｉ〜ＩＩＩの化合物である。

したがって、別の詳細な実施形態では、本発明は、式ＸＩＩＩおよびＩＶＸの化合物を対象とする。

式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｚ_１〜Ｚ_４は、互いに独立して、ＮまたはＣである。

化合物ＸＩＩＩおよびＩＶＸの詳細な実施形態としては、式ＸＶａ、ＸＶｂ、ＸＶｃ、ＸＶｄ、ＸＶｅ、ＸＶｆの化合物が挙げられる。

式中、
Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃ、Ｒ_ｄは、互いに独立して、^１８ＦまたはＨであり、但し、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃ、Ｒ_ｄのうち１つは、^１８Ｆであり、
Ｒ_５、Ｒ_６は、互いに独立して、Ｈまたは直鎖もしくは分枝Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである。

他の実施形態は、Ｘ_１〜Ｘ_５ならびにＲ_１およびＲ_２がＮであり、Ｒ_４＝Ｒ_５＝Ｒ_６がＨであり、Ｒ_３がＣＨ_３またはホルミルであり、ｐが１であり、ｑが４である、式Ｉ〜ＩＩＩの化合物である。

したがって、さらに詳細な実施形態では、本発明は、式ＸＶＩおよびＸＶＩＩの化合物を対象とする。

式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｚ_１〜Ｚ_４は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｒ_３は、Ｈ、メチル−またはホルミル−である。

化合物ＸＶＩおよびＸＶＩＩの詳細な実施形態としては、式ＸＶＩＩＩａ、ＸＶＩＩＩｂ、ＸＶＩＩＩｃ、ＸＶＩＩＩｄ、ＸＶＩＩＩｅ、ＸＶＩＩＩｆの化合物が挙げられる。

式中、
Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃ、Ｒ_ｄは、互いに独立して、^１８ＦまたはＨであり、但し、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃ、Ｒ_ｄのうち１つは、^１８Ｆであり、
Ｒ_３は、Ｈ、メチル−またはホルミル−であり、
Ｒ_５、Ｒ_６は、互いに独立して、Ｈまたは直鎖もしくは分枝Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルであり、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである。

用語「アルキル」とは、単独でまたは複合語で使用するとき、示された数のＣ原子、通常は１〜１２個、好ましくは１〜８個、より好ましくは１〜４個の炭素原子を含んだ直鎖または分枝アルキル基、たとえば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチルイソペンチル、ネオペンチル、ヘキシルなどを指す。

本明細書で使用するとき、用語「アルケニル」（すなわち、少なくとも１つの二重結合を有する、上で定義したとおりのアルキル基）とは、単独でまたは他の基との複合語で、２〜１２個の炭素原子を含んだ直鎖または分枝アルキレン基、たとえば、メチレン、エチレン、プロピレン、イソプロピレン、ブチレン、ｔ−ブチレン、ｓｅｃ−ブチレン、イソブチレン、アミレン、イソアミレン、ペンチレン、イソペンチレン、ヘキシレンなどを指す。好ましいアルケニル基は、２〜８個の炭素原子を含む。

本明細書で使用する用語「アルキニル」（すなわち、少なくとも１つの三重結合を有する、上で定義したとおりのアルキル基）とは、１つ以上の炭素−炭素三重結合を有する、炭素原子の直鎖または分枝鎖を指す。好ましいアルキニル基は、２〜１２個、より好ましくは２〜８個の炭素原子を含む。

本明細書で使用する用語「アルコキシ」とは、酸素で置換されている、上で定義したとおりのアルキル、たとえば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシなどを指す。

本明細書で使用する用語「アルカノイル」とは、ホルミル、またはカルボニルで末端が置換されている上で定義したとおりのアルキル、たとえば、アセチル、プロパノイル、ブタノイル、ペンタノイルなどを指す。

本明細書で使用する用語「アルキルアミノ」とは、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、ｔｅｒｔ−ブチルアミノなどのモノアルキルアミノ、およびジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルプロピルアミノなどのジアルキルアミノの両方を含めて、窒素で置換されている上で定義したとおりのアルキルを指す。

本明細書で使用する用語「ハロ」とは、いずれかの１７族元素を指し、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨードおよびアスタチン（ｏ）を包含する。

表現「任意選択で置換されている」は、ヒドロキシ、アルコキシ、（ジ）アルキルアミノ、アルキルスルホニル、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アルコキシカルボニル、カルボキシル、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＯ_２での置換を包含することが好ましい。

好ましい実施形態では、Ｒ_１およびＲ_２は、互いに独立して、Ｈ、−ＯＲ”、−ＮＨＲ”であり、Ｒ”は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイル、（Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ）カルボニルであり、より好ましくは、Ｒ_１およびＲ_２は、互いに独立して、−ＯＨ、ＮＨ_２である。

好ましい一実施形態では、Ｒ_３およびＲ_４は、互いに独立して、Ｈ、メチルまたはホルミルである。

好ましい一実施形態では、Ｒ_５およびＲ_６は、互いに独立して、Ｈ、メチル、エチルまたはｔｅｒｔ−ブチルである。

好ましい実施形態では、Ｒ’は、Ｈ、メチルまたはエチルである。

好ましい実施形態では、Ｒ_７は、Ｈ、メチルまたはエチルである。

好ましい実施形態では、Ｒ_８は、Ｈ、メチルまたはエチルである。

好ましい実施形態では、Ｙ_１およびＹ_２は、互いに独立して、Ｈ、メチルまたはエチルである。

別の態様において、本発明は、本発明の化合物の合成方法を提供する。出願人らは、本発明の葉酸放射性医薬品が、［^１８Ｆ］フッ化物で直接放射標識することにより取得できることを見出した。

^１８Ｆ核種は通常、求電子性［^１８Ｆ］Ｆ_２として、また本明細書で一般に使用するように、求核性［^１８Ｆ］フッ化物として入手可能である。［^１８Ｆ］フッ化物の形では、フッ素１８がより効率よく製造可能である。加えて、これは、担体を加えない放射性トレーサーを十分に調製できる唯一の可能性である。

したがって、詳細な実施形態では、本発明の製造方法は、［^１８Ｆ］フッ化物による置換を受けやすい置換基を有するアザフォレートである前駆体を準備する工程と、前記前駆体を、テトラブチルアンモニウムカーボネートまたはアミノポリエーテル（たとえば、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ^（Ｒ）２．２．２）を炭酸またはシュウ酸カリウムと組み合わせたものなどの相間移動触媒によって活性化した［^１８Ｆ］フッ化物と反応させて、本発明の化合物を生成する工程とを含む。

通常、［^１８Ｆ］フッ化物による置換を受けやすい置換基は、脱離基として働くことができ、したがって入ってくる［^１８Ｆ］フッ化物との交換ができる電子吸引性基、または他には、［^１８Ｆ］フッ化物を導入するための活性化剤として働くことのできる電子吸引性基である。適切な電子吸引性基としては、−ＮＯ_２、−ＣＮ、−ＳＯ_３Ｒ’、−ＣＯＯＲ’、−ＣＯＲ’、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒが挙げられる。表現「５、６、または１０員環系などを構成する炭素環式およびヘテロ環式基」は、好ましくは、フェニル、ナフチル、アゼチジニル、ピロリジニル、イミダゾリル、インドリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサトリアゾリル、チアトリアゾリル、ピリダジニル、モルホリニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリジル、キノリニル、イソキノリニル、ピペリジニル、ピラゾリル、イミダゾピリジニルおよびピペラジニル、より好ましくは、フェニル、ナフチル、ピロリジニル、イミダゾリル、トリアゾリル、ピリミジニル、ピリジル、ピペリジニルおよびピラゾリル、最も好ましくは、フェニル、ピリジルおよびナフチルを包含する。

したがって、好ましい実施形態では、葉酸放射性医薬品は、^１８Ｆ−ニトロまたは^１８Ｆ−クロロ交換に基づく直接標識法において取得した。

典型的な反応では、適切な有機溶媒に溶解させた前駆体を、無水^１８Ｆ−フッ化物−クリプテートに加えた。得られる混合物を、適切な反応時間、適正な温度に、たとえば、１０分間約１６０℃に加熱した。ショートカートリッジで精製した後、塩基性または酸性条件、および穏やかな加熱のもとで脱保護を１０分間実施した。粗生成物溶液を中和し、半分取ＨＰＬＣ系に注入した。放射性生成物を収集し、ＨＰＬＣ溶媒を、別の固相抽出によって、または窒素流、真空および穏やかな加熱によって除去した。製剤については、乾燥生成物を生理溶液で溶解し直し、滅菌フィルターを使用して滅菌バイアルに移した。

別の態様において、本発明は、診断画像処理を必要とする対象に好都合かつ有効に投与する、本発明の葉酸放射性医薬品の使用を提供する。

したがって、本発明は、葉酸受容体を発現させる細胞または細胞集団の診断画像処理方法であって、少なくとも１種の本発明の葉酸放射性医薬品を診断画像処理量で投与する工程と、前記細胞または細胞集団の診断画像を取得する工程とを含む方法を提供する。

このような画像処理は、葉酸受容体を発現させる細胞または細胞集団に対して、インビトロまたはインビボで行うことができる。

したがって、本発明は、組織サンプルにおいて葉酸受容体を発現させる細胞をインビトロで検出する方法であって、前記組織サンプルを、少なくとも１種の本発明の葉酸放射性医薬品と、有効量で、かつ結合を生じさせるのに十分な時間および条件をかけて接触させる工程と、そうした結合をオートラジオグラフィーなどの画像処理技術によって検出する工程とを含む方法を提供する。

別の態様において、本発明は、がんまたは炎症性および自己免疫疾患治療の診断画像処理またはモニタリングを必要とする対象に好都合かつ有効に投与する、本発明の葉酸放射性医薬品の使用を提供する。

別の態様において、本発明は、その必要のある対象に、診断有効量の少なくとも１種の本発明の葉酸放射性医薬品を、治療活性薬と組み合わせて投与する工程と、前記組織の診断画像を取得して、治療の経過を追跡する工程とを含む、同時の診断および治療方法を提供する。

本発明の方法の対象は、動物またはヒトなどの哺乳動物であることが好ましく、ヒトが好ましい。

投薬量は、診断や治療の形態などの、所望の効果の性質、治療の種類および頻度、診断機器、調製物の適用形態、レシピエントの年齢、体重、栄養および状態、あるとすれば同時治療の種類に応じて決まる。

しかし、最も好ましい投薬量は、個々の対象に合わせることができ、それは、当業者によって必要以上の実験なしに理解され、決定可能である。これには通常、標準用量の調整、たとえば、患者の体重が少ない場合の用量の減量が含まれる。

治療は、最適量未満の少なめの量から開始することができ、最適な効果を得るためにこれを増量することができる。

本発明の葉酸放射性医薬品は、反復用量として、または好ましくは一用量として投与することができる。たとえば、本発明の葉酸放射性医薬品は、静脈内ボーラス注射によって対象に投与することができる。注射に適する形態には、上で言及した本発明の葉酸放射性医薬品の水性滅菌溶液または懸濁液が含まれる。

注射する溶液について、好ましい単位投薬量は、約０．０１ｍｌ〜約１０ｍｌである。たとえば、静脈内投与の後、所望であれば、放射標識試薬が対象に投与されてから３０分〜４時間後、臓器または腫瘍のインビボでの画像処理を実施することができる。通常、投与された十分な量の用量が、標的化された範囲に蓄積される。

葉酸放射性医薬品は、ＨＰＬＣによって精製することが好ましい。ＨＰＬＣ精製の溶媒を除去した後、製品は、０．９％ＮａＣｌや０．１５Ｍリン酸緩衝溶液などの生理溶液に溶解してから適用することが好ましく、製剤された放射性医薬品は、滅菌フィルターを介して滅菌バイアルに移す。

本発明の葉酸放射性医薬品は、対象から採取した組織生検材料において葉酸受容体を発現させる細胞をインビトロで検出するのに使用することもできる。したがって、別の実施形態では、本発明は、組織サンプルにおいて、葉酸受容体を発現させる細胞、たとえば、腫瘍細胞または活性化型マクロファージをインビトロで検出する方法であって、前記組織サンプルを本発明の葉酸放射性医薬品と、有効量で、かつ結合を生じさせるのに十分な時間および条件をかけて接触させる工程と、そうした結合を画像処理技術によって検出する工程とを含む方法を提供する。

サンプルは、当業者に知られている手順によって、たとえば、気管または肺サンプルなどの吸引により組織生検材料または体液を収集することによって集めることができる。

試験される組織サンプルには、葉酸受容体を発現させる細胞、たとえば、腫瘍細胞、上皮細胞、腎臓、胃腸管または肝胆道系、活性化型マクロファージ、単球、その他を含むことが疑われるいずれかの組織が含まれる。サンプルは、たとえばミクロトームで薄片にすると、顕微鏡による検査および観察を容易にすることができる。サンプルはまた、本発明の葉酸放射性医薬品のうちの１種とインキュベートする前または後のいずれかに、適切な固定液で固定すると、サンプル組織の組織学的な質を向上させることができる。

本発明の葉酸放射性医薬品が細胞上の葉酸受容体に結合するのに十分な時間および条件としては、標準の組織培養条件が挙げられ、すなわち、サンプルをインビトロで培養し、生理的培地において本発明の化合物または組成物のうちの１種と共にインキュベートすることができる。このような条件は、当業者によく知られている。別法として、サンプルを固定し、次いで、等張性または生理的緩衝液中で本発明の葉酸放射性医薬品と共にインキュベートすることができる。

すべての用途について、本発明の化合物または組成物は、これを使用する部位またはその付近で準備することが好都合である。本明細書で開示し、請求項に記載する化合物および／または方法はすべて、本開示に照らして、必要以上の実験なしに製造し、実行することができる。当業者には、本発明の範囲から逸脱することなく、諸変形形態を本発明に適用してもよいことは、明白なところとなる。本明細書で提供する例は、例示的であり、網羅的でないものとし、したがって、例示される例は、一切、本発明を限定するとみなすべきでない（ＢｅｔｚｅｌらＢｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．２０１３、２４：２０５−２１４（非特許文献４５）も参照されたい）。

例
一般事項：試薬および溶媒は、他に言及がなければ、Ｓｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈＣｈｅｍｉｅＧｍｂＨ、ＡｃｒｏｓＯｒｇａｎｉｃｓ、またはＶＷＲＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＡＧから購入した。化学物質はすべて、供給されたまま使用した。ヒトおよびマウス（雌ＣＤ−１）ミクロソームならびにＮＡＤＰＨ再生系は、ＢＤｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。

分析ラジオＨＰＬＣ：分析ラジオ高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、ＲＰ−１８カラム、ＬｕｎａＰＦＰ（２）Ｃ１８（５μｍ、２５０×４．６ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）を使用する、ＧａｂｉＳｔａｒ（Ｒａｙｔｅｓｔ）放射線検出器（ｒａｄｉｏｄｅｔｅｃｔｏｒ）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズＨＰＬＣ系において、次のとおりの溶媒系および勾配を用いて実施した。溶離液Ａは、ＮａＨ_２ＰＯ_４／Ｎａ_２ＨＰＯ_４緩衝液（０．０５Ｍ、ｐＨ７．４）とし、溶離液Ｂは、ＭｅＯＨとした。０〜３０分で１００％〜７０％のＡの勾配を、１ｍｌ／分の流量で使用した。比活性は、異なる濃度の低温の参考化合物から得た検量線から求めた。塩素化前駆体（３’−アザ−２’−クロロ−葉酸）の量を求めるのには、異なる濃度の３’−アザ−２’−クロロ−葉酸から得た標準曲線を使用した。

半分取ラジオＨＰＬＣ：精製については、ＳｍａｒｔｌｉｎｅＰｕｍｐ１０００、ＳｍａｒｔｌｉｎｅＭａｎａｇｅｒ５０００、ＳｍａｒｔｌｉｎｅＵＶ検出器２５００（Ｋｎａｕｅｒ）、およびＧａｂｉＳｔａｒ放射検線出器（Ｒａｙｔｅｓｔ）を備えた半分取ＨＰＬＣ系において、ラジオＨＰＬＣを実施した。［^１８Ｆ］−３’−アザ−２’−フルオロ葉酸は、ＲＰ−１８カラム、ＬｕｎａＰＦＰ（２）Ｃ１８（５μｍ、２５０×１０ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）において、次のとおりの溶媒系で精製した。溶離液Ａは、０．１％のＥｔＯＨのＮａＨ_２ＰＯ_４／Ｎａ_２ＨＰＯ_４緩衝液（０．０５Ｍ、ｐＨ７．４）溶液とし、溶離液Ｂは、４０％のＥｔＯＨのＮａＨ_２ＰＯ_４／Ｎａ_２ＨＰＯ_４緩衝液（０．０５Ｍ、ｐＨ７．４）溶液とした。０〜１０分で１００％〜８５％のＡ、１０〜２５分は定組成で８５％のＡの勾配を、４ｍｌ／分の流量で使用した。

ラジオＵＰＬＣ：安定性研究については、ＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣＢＥＨＣ１８カラム（１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓ）および同時検出器（ＦｌｏｗＳｔａｒＬＢ５１３、Ｂｅｒｔｈｏｌｄ）を備えた超高性能液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ（商標）、Ｗａｔｅｒｓ）系を、次の溶媒系を用いて使用した。溶離液Ａは、ＮａＨ_２ＰＯ_４／Ｎａ_２ＨＰＯ_４緩衝液（０．０５Ｍ、ｐＨ７．４）とし、溶離液Ｂは、アセトニトリルとした。０〜４．０分で１００％〜４０％のＡの勾配を、０．６ｍｌ／分の流量で使用した。

担体無添加［^１８Ｆ］フッ化物の製造：担体無添加［^１８Ｆ］フッ化物は、Ｃｙｃｌｏｎｅ１８／９サイクロトロン（ＩＢＡ）における^１８Ｏ（ｐ，ｎ）^１８Ｆ核反応によって製造した。９７％同位体富化された^１８Ｏ水に、２．１ｍｌのターゲットを使用して、１８ＭｅＶのプロトンビームを照射した。ヘリウム流を使用して、ターゲット体積（１．９５ｍｌ）をホットセルに移した。担体無添加［^１８Ｆ］フッ化物（４０〜８０ＧＢｑ）を、炭酸カリウム水溶液（０．５Ｍ、５ｍｌ）および水（１０ｍｌ）で予備調湿（ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）した陰イオン交換カートリッジ（Ｓｅｐ−ＰａｋＬｉｇｈｔＡｃｃｅｌｌＰｌｕｓＱＭＡ、Ｗａｔｅｒｓ）に捕捉させた。

ｌｏｇＤの決定：ｌｏｇＤ値の決定は、フラスコ振盪法を使用して実施し、ｎ−オクタノールとリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）間の放射性トレーサーの分配係数を求めた（Ｗｉｌｓｏｎら２００１ＡｐｐｌｉｅｄＲａｄｉａｔｉｏｎａｎｄＩｓｏｔｏｐｅｓ（非特許文献４６））。放射性サンプル（５〜１０μｌ）を含有するエッペンドルフ管において、ｎ−オクタノール（０．５ｍｌ）とＰＢＳ（０．５ｍｌ）を混合した。管をオーバーヘッドシェーカーにおいて室温で１５分間振盪し、その後遠心分離した（３分、５０００ｒｐｍ）。各エッペンドルフ管から、各相５０μｌを、γ−カウンターでのカウント用バイアルに移した。ｌｏｇＤ値を次式に従って算出した。ｌｏｇＤ_７．４＝ｌｏｇ［活性（オクタノール相）／ＰＢＳ相活性）］。

細胞培養：ＫＢ細胞（ヒト子宮頸癌細胞系、ＨｅＬａサブクローン、ＡＣＣ−１３６）を、ＧｅｒｍａｎＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎｏｆＭｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓａｎｄＣｅｌｌＣｕｌｔｕｒｅｓ（ＤＳＭＺ、ドイツ国ブラウンシュヴァイク）から購入した。細胞は、５％ＣＯ_２を含んだ加湿雰囲気中にて３７℃で単層として培養した。重要な点で、細胞は、無葉酸細胞培養培地ＦＦＲＰＭＩ（改良ＲＰＭＩ、葉酸なし、ビタミンＢ_１２およびフェノールレッド、ＣｅｌｌＣｕｌｔｕｒｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＧｍｂＨ、スイス国Ｇｒａｖｅｓａｎｏ／Ｌｕｇａｎｏ）において培養した。ＦＦＲＰＭＩ培地は、１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＦＣＳ、唯一の葉酸供給源として）、Ｌ−グルタミン、および抗生物質（ペニシリン／ストレプトマイシン／ファンギゾン）で補充した。１週間に２回、ＰＢＳ中ＥＤＴＡ（２．５ｍｍｏｌ／ｌ）で型通りの培養処理を行った。

例１
前駆体Ｎ^２−アセチル−３’−アザ−２’−ニトロ葉酸ジ−ｔｅｒｔブチルエステルの合成
（ａ）Ｎ−（６−アミノ−２−クロロニコチノイル）−Ｌ−グルタミン酸ジ−ｔｅｒｔブチルエステルの合成
６−アミノ−２−クロロニコチン酸（６ｇ、３４．８ｍｍｏｌ、ＡｎｉｃｈｅｍＩｎｃ．から購入）を、室温でＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２３２ｍｌ）に溶解させた。溶液を０℃に冷却し、トリエチルアミン（１１ｍｌ、７．３９ｇ、７３．０ｍｍｏｌ）を加えた。ＨＢＴＵ（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、１４．５ｇ、３８．２ｍｍｏｌ）を加えた後、混合物を０℃で５分間撹拌し、次いで、ジｔｅｒｔブチル−Ｌ−グルタメート塩酸塩（１０．８ｇ、３６．５ｍｍｏｌ）を加えた。冷却浴を取り外し、混合物を１８時間撹拌した。−２０℃に冷却した後、固体を取り除き、ＤＭＦ（２０ｍｌ）で洗浄した。濾液を真空下で蒸発乾燥させ、残渣を、エチルアセテート（４００ｇ）とメチル−ｔｅｒｔブチルエーテル（２００ｇ）の混合物に溶解させた。溶液を水（合計１５０ｍｌ）で３回、１ＭＮａＨＣＯ_３水溶液（合計１５０ｍｌ）で３回、および飽和ＮａＣｌ水溶液（合計１５０ｍｌ）で３回洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム（１０ｇ）で乾燥させ、真空下で蒸発乾燥させた。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル７：３〜５：５）によって精製して、Ｎ−（６−アミノ−２−クロロニコチノイル）−グルタミン酸−ジｔｅｒｔブチルエステルを淡黄色の固体として得た。収率：６．８ｇ（３６．５ｍｍｏｌ、４７．３％）。
ＨＲ−ＭＳ（ＥＳＩ，試料はＣＨ_２Ｃｌ_２に溶解）：ｍ／ｚ［ＭＨ］^＋計算値Ｃ_１９Ｈ_２９ＣｌＮ_３Ｏ_５：４１４．１７９０；実測値：４１４．１７８９
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ＝１．３９（ｓ，９Ｈ，ＯｔＢｕ）、１．４１（ｓ，９Ｈ，ＯｔＢｕ）、１．７１〜２．０７（ｍ，２Ｈ，Ｃ（β）Ｈ_２）、２．３３（ｔ，２Ｈ，Ｃ（γ）Ｈ_２）、４．１８〜４．２９（ｍ，１Ｈ，Ｃ_αＨ）、６．４０（ｄ，１Ｈ，４’Ｈ_ａｒｏｍ，Ｊ^２＝８．３Ｈｚ）、６．６９（ｓ，２Ｈ，ＮＨ_２）、７．４７（ｄ，１Ｈ，５’Ｈ_ａｒｏｍ，Ｊ^２＝８．３Ｈｚ）、８．３６（ｄ，１Ｈ，ＮＨ，Ｊ^３＝７．６Ｈｚ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：２６．６、２８．２、３１．６、５２．９、８０．２、８１．１、１０６．３、１１８．９、１４０．１、１４６．２、１６０．６、１６６．２、１７１．２、１７２．０。

（ｂ）Ｎ^２−アセチル−３’−アザ−２’−クロロ葉酸ジ−ｔｅｒｔブチルエステルの合成
Ｎ−（６−アミノ−２−クロロニコチノイル）−グルタミン酸−ジｔｅｒｔブチルエステル（０．５ｇ、１．２７ｍｍｏｌ）およびＮ^２−アセチル−６−ホルミルプテリン（０．３ｇ、１．２１ｍｍｏｌ）を、酢酸（３０ｍｌ）に溶解させた。オルトケイ酸テトラエチル（０．５４ｍｌ、１．２７ｍｍｏｌ）を加えた後、混合物を５５℃で６時間撹拌した。終夜室温に冷却した後、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（０．２７ｇ、２．４２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。ｎ−ヘキサン（１８ｇ）および水（８ｇ）を加えた後、有機層を分離し、水層を真空下で蒸発乾燥させた。残渣を、水（９ｇ）とアセトニトリル（１ｇ）の混合物に懸濁させた。固体を取り出し、水（合計１０ｇ）で２回洗浄して、未精製Ｎ^２−アセチル−３’−アザ−２’−クロロ葉酸ジｔｅｒｔブチルエステル（０．７７ｇ）を得た。粗生成物を、水とアセトニトリルの混合物中で、アセトニトリルの百分率を１０％から２５％に増やしながら、繰り返し消化することにより精製して、Ｎ^２−アセチル−３’−アザ−２’−クロロ葉酸ジｔｅｒｔブチルエステルを橙色の固体として得た。収率：０．６１ｇ（０．９１１ｍｍｏｌ、７５％）。
ＨＲ−ＭＳ（ＥＳＩ，試料は１：１ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２に溶解）：ｍ／ｚ［ＭＨ］^＋計算値Ｃ_２８Ｈ_３５ＣｌＮ_８ＮａＯ_７：６５３．２２０９；実測値：６５３．２２１１
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ＝１．３７（ｓ，９Ｈ，ＯｔＢｕ）、１．３９（ｓ，９Ｈ，ＯｔＢｕ）、１．７５〜１．８２（ｍ，１Ｈ，Ｃ（β）Ｈ）、１．９２〜１．９９（ｍ，１Ｈ，Ｃ（β）Ｈ’）、２．２０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）、２．２８〜２．３２（ｍ，２Ｈ，Ｃ（γ）Ｈ_２）、４．２１（ｍ，１Ｈ，Ｃ（α）Ｈ）、４．７２（ｄ，２Ｈ，Ｃ（６）ＣＨ_２，Ｊ＝５．８Ｈｚ）、６．７１（ｓ，１Ｈ，４’Ｈａｒｏｍ）、８．００（ｂｔ，１Ｈ，ＮＨ）、８．０４（ｓ，１Ｈ，５’Ｈ_ａｒｏｍ）、８．５０（ｄ，１Ｈ，ＮＨ（Ｇｌｕ）、Ｊ＝７．５Ｈｚ）、８．８３（ｓ，１Ｈ，Ｃ（７）Ｈ）、１１．９（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）、１２．３（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：２４．４、２６．５、２８．１、２８．２、３１．５、４４．５、５２．８、８０．３、８１．１、１０７．１、１１９．６、１３０．９、１３９．７、１４５．９、１４９．７、１５０．２、１５２．４、１５４．９、１５８．６、１５９．７、１６６．１、１７１．１、１７１．９、１７４．６。

（ｃ）Ｎ−（６−アミノ−２−ニトロニコチノイル）−Ｌ−グルタミン酸ジｔｅｒｔ−ブチルエステルの合成
６−アミノ−２−クロロ−ニコチン酸に代えて６−アミノ−２−ニトロニコチン酸を使用する以外、例１ａ）に記載の手順に従って合成を実現した。

（ｄ）Ｎ^２−アセチル−３’−アザ−２’−ニトロ葉酸ジ−ｔｅｒｔブチルエステルの合成
Ｎ−（６−アミノ−２−クロロニコチノイル）−グルタミン酸−ジｔｅｒｔブチルエステルに代えてＮ−（６−アミノ−２−ニトロニコチノイル）−Ｌ−グルタミン酸ジｔｅｒｔ−ブチルエステルを使用する以外、例１ｂ）に記載の手順に従って合成を実現した。

例２
担体無添加３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ葉酸の合成

炭酸セシウム（２．８ｍｇ）およびＫｒｙｐｔｏｆｉｘ２．２．２（５ｍｇ）をアセトニトリル（１．４ｍｌ）と水（０．６ｍｌ）の混合物に溶かした溶液を使用して、陰イオン交換カートリッジに捕捉された担体無添加［^１８Ｆ］フッ化物を、５ｍｌの密封反応容器に直接溶出させた。真空下および窒素流中にて９０℃で溶媒を除去した。引き続いて、無水アセトニトリル（３×１ｍｌ）を加え、蒸発乾燥させた。次いで、９０℃で１０分間、真空のみを適用した。

無水［^１８Ｆ］フッ化物−クリプテート錯体を含有するジメチルスルホキシド（３００μｌ）に、前駆体Ｎ^２−アセチル−３’−アザ−２’−クロロ葉酸ジ−ｔｅｒｔブチルエステル（２．５０ｍｇ、３．９６μｍｏｌ）、または別法としてＮ^２−アセチル−３’−アザ−２’−ニトロ−葉酸ジ−ｔｅｒｔブチルエステルを加えた。混合物を１０分間１６０℃に加熱した。１０分間冷却し、水（５ｍｌ）を加えた後、混合物を、メタノール（５ｍｌ）で予備調湿し水（１０ｍｌ）ですすいでおいた逆相カートリッジ（Ｓｅｐ−ＰａｋＣ１８Ｐｌｕｓ、Ｗａｔｅｒｓ）に通した。装填されたカートリッジを水（３×８ｍｌ）で洗浄した。^１８Ｆ標識された保護された中間体Ｎ^２−アセチル−３’−アザ２’−フルオロ葉酸ジ−ｔｅｒｔブチルエステルを、アセトニトリル（２ｍｌ）で、別の５ｍｌの密封反応容器に溶出させた。アセトニトリルの体積を、減圧下および窒素流中にて９０℃で、およそ０．１ｍｌに濃縮した。加水分解するために、塩化水素溶液（４Ｍ、１．２５ｍｌ）を加え、混合物を６０℃で１０分間加熱した。５分間冷却した後、水酸化ナトリウム溶液（５Ｍ、１．０ｍｌ）を加えて混合物を中和し、ＮａＨ_２ＰＯ_４／Ｎａ_２ＨＰＯ_４緩衝液（０．０５Ｍ、ｐＨ７．４、２．５ｍｌ）で希釈して、合計体積を５ｍｌとした。溶液を半分取ラジオＨＰＬＣ系に注入した。６％ＥｔＯＨを含有する収集された生成物画分（ｔ_Ｒ＝２１分）を、滅菌フィルターに通して、（インビトロおよびインビボでの）さらなる実験に直ちに使用できる滅菌無発熱物質バイアルに入れた。

減衰補正した放射化学収率は、５〜１５％（０．５〜２．７５ＧＢｑ）の範囲であった。精度管理（ｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌ）は、分析ラジオＨＰＬＣで行った（図２）。放射化学純度は、９８％を越えており、比活性は、４５〜１２６．８ＧＢｑ／μｍｏｌの範囲であった。

塩素化副生物の量は、製剤された製品溶液に対して１７μｇ／ｍＬ未満であった（１〜１６．３μｍｏｌ／ｍｌの範囲）。合計合成時間は、約８５分であり、［^１８Ｆ］−３’−アザ−２’−フルオロ葉酸の正体は、参考化合物３’−アザ−２’−［^１９Ｆ］フルオロ葉酸との同時注入によって確認された。放射標識条件の概要を表１に示す。

ＬｏｇＤ_７．４測定：親油性の評定については、［^１８Ｆ］−３’−アザ−２’−フルオロ−葉酸のｎ−オクタノール／ＰＢＳ中での分配係数が−４．２±０．１（ｎ＝１０）であることが判明し、［^１８Ｆ］−３’−アザ−２’−フルオロ−葉酸が非常に親水性の性質であることが示された。

例３
３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ−葉酸のモジュール方式ＧＭＰ放射性合成
放射性トレーサー３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ−葉酸のＧＭＰ生成を、自動合成モジュールにおいて実施した。担体無添加［^１８Ｆ］フッ化物を陰イオン交換カートリッジに捕捉し、炭酸セシウム（０．３５ｍｌのＨ_２Ｏ中に２．８ｍｇ）とＫｒｙｐｔｏｆｉｘ２．２．２（０．３５ｍｌのアセトニトリル中に６．５ｍｇ）の混合物を使用することにより、反応器に直接溶出させた。減圧下および窒素流中にて１２０℃で溶媒を除去した。アセトニトリル（０．１ｍｌ）を加え、蒸発乾燥させた。

Ｎ^２−アセチル−３’−アザ−２’−クロロ葉酸ジ−ｔｅｒｔブチルエステル（２．５０ｍｇ、３．９６μｍｏｌ）をＤＭＳＯ（４００μＬ）に溶かした前駆体溶液を、無水［^１８Ｆ］フッ化物−クリプテート錯体に加えた。混合物を１７分間１５０℃に加熱した。次いで、４ＭＨＣｌ（１．０ｍｌ）を反応器に直接加え、６０℃で１０分間かけて加水分解を実現した。反応混合物をＨ_２Ｏ（９ｍｌ）で希釈し、活性化ＭＣＸカートリッジに載せ、Ｈ_２Ｏ（５ｍｌ）で洗浄した。５０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．４中の１０％ＭｅＯＨで作られた溶液（４ｍｌ）でカートリッジをすすぐことにより、放射性トレーサーを溶離させた。溶離液を半分取ラジオＨＰＬＣ系に注入した。収集された生成物画分（ｔ_Ｒ＝２１．１分）を４ＭＨＣｌ（０．５ｍｌ）で酸性化し、別のＭＣＸカートリッジに載せた。カートリッジをＨ_２Ｏ（５ｍｌ）ですすいだ後、放射性トレーサーを１０％のＥｔＯＨの５０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．４溶液（５ｍＬ）で溶離させ、０．９％ＮａＣｌ水溶液（９ｍＬ）で希釈した。

合成の終わりの減衰補正した放射化学収率は、７〜１６％（２．４〜６．０ＧＢｑ）の範囲であった。精度管理は、自動ラジオＨＰＬＣで行った。放射化学純度は、９９％を越えており、比活性は、４７〜６２ＧＢｑ／μｍｏｌの範囲であった。

塩素化副生物の量は、製剤化した製品溶液に対して０．１μｇ／ｍｌ未満であった。合計合成時間は、約７５分であった。放射標識条件の概要を表２に示す。

例４
担体無添加［^１８Ｆ］−３’，５’−ジアザ−２’−フルオロ葉酸の合成
６−アミノ−２−クロロニコチン酸に代えて２−アミノ−４−クロロ−５−ピリミジンカルボン酸（ＡｂｂｙＰｈａｒｍａｔｅｃｈ、ＬＬＣから購入）を使用する以外、例１〜３と同様に合成を行った。

例５
［^１９Ｆ］−参考化合物の合成
（ａ）Ｎ−（６−アミノ−２−フルオロニコチノイル）−Ｌ−グルタミン酸−ジ−ｔ−ブチルエステルの合成

６−アミノ−２−フルオロニコチン酸塩酸塩（５．７２ｇ、２９．７ｍｍｏｌ、ＡｎｉｃｈｅｍＩｎｃ．から購入）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍｌ）溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（６．８３ｇ、５９．３ｍｍｏｌ）を加えた。０℃に冷却した後、１０分以内にトリエチルアミン（１５．０１ｇ、１４８．３ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を室温まで温め、５分以内にＮ，Ｎ−ジイソプロピルカルボジイミド（６．９ｍｌ、４４．５ｍｍｏｌ）を加えた。２９時間後、グルタミン酸ジｔｅｒｔブチルエステル塩酸塩（１７．６ｇ、５９．３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１１４ｍｌ）溶液を５分以内に滴下した。２１時間後、固体を取り除き、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（合計４０ｍｌ）で２回洗浄した。濾液と洗液を合わせ、エチルアセテート（５００ｍｌ）およびジイソプロピルエーテル（５００ｍｌ）で希釈した。溶液を水（合計１０００ｍｌ）で５回洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム（６０ｇ）および酸化アルミニウム（１０ｇ）で乾燥させ、真空中で蒸発乾燥させた。残渣にアセトニトリル（５７．９ｇ）を加え、固体を取り除き、アセトニトリル（合計２０ｇ）で洗浄した。洗液と濾液を合わせ、真空下にて４０℃で蒸発乾燥させた。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル７：３〜０：１、Ｒｆ＝０．４６、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル７：３）によって精製して、生成物画分を蒸発にかけた後、Ｎ−（６−アミノ−２−フルオロニコチノイル）−Ｌ−グルタミン酸−ジ−ｔ−ブチルエステルを結晶質固体として得た。収率：２．２７ｇ（５．７ｍｍｏｌ、１９％）。
ＨＲ−ＭＳ（ＥＳＩ，試料は１：１水／ＣＨ_３ＣＮに溶解）：ｍ／ｚ［ＭＨ］^＋計算値Ｃ_１９Ｈ_２９ＦＮ_３Ｏ_５：３９８．２０８６；実測値：３９８．２０８３
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ＝１．３７（ｓ，９Ｈ，ＯｔＢｕ）、１．４１（ｓ，９Ｈ，ＯｔＢｕ）、１．７９〜１．９８（ｍ，２Ｈ，Ｃ（β）Ｈ_２）、２．２９（ｔ，２Ｈ，Ｃ（γ）Ｈ_２）、４．３３（ｍ，１Ｈ，Ｃ（α）Ｈ）、６．３６（ｄｄ，１Ｈ，４’Ｈａｒｏｍ，^３Ｊ_ＨＨ＝８．４Ｈｚ，^５Ｊ_ＦＨ＝２．２Ｈｚ）、６．９１（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ_２）、７．７８〜７．８７（ｍ，２Ｈ，ＮＨ，５’Ｈ_ａｒｏｍ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：２６．１、２７．６、２７．７、３１．１、５２．３、７９．７、８０．７、１０１．６（ｄ，２Ｊ_ＣＦ＝２７．４Ｈｚ）、１０４．７（ｄ，^４Ｊ_ＣＦ＝２．８Ｈｚ）、１４２．１（ｄ，^３Ｊ_ＣＦ＝３．０Ｈｚ）、１６０．０（ｄ，^１Ｊ_ＣＦ＝２３７．０Ｈｚ）、１６０．７（ｄ，^３Ｊ_ＣＦ＝１９．３Ｈｚ）、１６２．９（ｄ，^３Ｊ_ＣＦ＝６．５Ｈｚ）、１７０．８、１７１．５。

（ｂ）Ｎ^２−アセチル−３’−アザ−２’−フルオロ葉酸ジ−ｔ−ブチルエステルの合成

Ｎ^２−アセチル−６−ホルミルプテリン（１．１７ｇ、５．０３ｍｍｏｌ）を室温で酢酸（２５ｍｌ）に懸濁させた。３０分以内に、懸濁液に、Ｎ−（６−アミノ−２−フルオロニコチノイル）−Ｌ−グルタミン酸−ジｔｅｒｔブチルエステル（１．００ｇ、２．５２ｍｍｏｌ）の酢酸（３５ｍｌ）溶液を滴下した。室温で２時間経過後、透明な溶液が生成しており、分子ふるい４Ａ（１０ｇ）を加えた。さらに２．５時間後、次の分の分子ふるい４Ａ（１０ｇ）を加えた。２時間後、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（０．５ｇ、２．３９ｍｍｏｌ）を加え、さらに１時間後、次の分のトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（０．５ｇ、２．３９ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間経過後、３番目の分のトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（０．５３ｇ、２．５２ｍｍｏｌ）を加えた。さらに２．５時間経過後、反応混合物から固体を取り除き、酢酸（３０ｍｌ）で洗浄した。濾液を、水（１５０ｍｌ）とアセトニトリル（３０ｍｌ）の混合物に滴下した。次いで、水（１００ｍｌ）を滴下した。混合物を２時間４℃に冷却し、沈殿した生成物を取り出した。生成物を水（合計４０ｇ）に４回懸濁させ、次いで、真空中にてＰ_２Ｏ_５で乾燥させて、Ｎ^２−アセチル−３’−アザ−２’−フルオロ葉酸ジ−ｔ−ブチルエステルをオフホワイト色の粉末として得た。収率：１．１０ｇ（１．７９ｍｍｏｌ、７１％）。
ＨＲ−ＭＳ（ＥＳＩ，試料は１：１水／ＣＨ_３ＣＮに溶解）：ｍ／ｚ［ＭＨ］^＋計算値Ｃ_２８Ｈ_３６ＦＮ_８Ｏ_７：６１５．２６８５；実測値：６１５．２６７７
^１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ＝１．３７（ｓ，９Ｈ，ＯｔＢｕ）、１．４０（ｓ，９Ｈ，ＯｔＢｕ）、１．８０〜２．０７（ｍ，２Ｈ，Ｃ（β）Ｈ_２）、２．２１〜２．３２（ｔ，２Ｈ，Ｃ（γ）Ｈ_２）、４．２９（ｍ，１Ｈ，Ｃ（α）Ｈ）、４．７１（ｄ，２Ｈ，Ｃ（６）ＣＨ_２）；６．５６（ｄｄ，１Ｈ，４’Ｈａｒｏｍ，^３Ｊ_ＨＨ＝８．４Ｈｚ，^５Ｊ_ＦＨ＝２．２Ｈｚ）、７．８３（ｄｄ，１Ｈ，４’Ｈａｒｏｍ，^３Ｊ_ＨＨ＝８．４Ｈｚ，^４Ｊ_ＦＨ＝１０．０Ｈｚ）、７．９１（ｄｄ，１Ｈ，ＮＨ（Ｇｌｕ），^３Ｊ_ＨＨ＝７．４Ｈｚ，^４Ｊ_ＨＨ＝４．５Ｈｚ）、８．２９（ｔ，１Ｈ，^３Ｊ_ＨＨ＝５．７Ｈｚ）、８．８８（ｓ，１Ｈ，Ｃ（７）Ｈ）、１１．９４（ｂｓ，１Ｈ，Ｎ（３）Ｈ）、１２．２８（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨＡｃ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：２３．９、２６．１、２７．７、２７．６、３１．１、４４．１、５２．３、７９．７、８０．７、１０２．５（ｄ，^２Ｊ_ＣＦ＝２８．３Ｈｚ）、１０５．４、１３０．５、１４１．７、１４９．３、１４９．４、１５１．７、１５４．５、１５８．９（ｄ，^３Ｊ_ＣＦ＝１７．８Ｈｚ）、１５９．３、１５９．８（ｄ，^１Ｊ_ＣＦ＝２３７．６Ｈｚ）、１６２．９（ｄ，^３Ｊ_ＣＦ＝６．５Ｈｚ）、１７０．７、１７１．５、１７４．１。

（ｃ）３’−アザ−２’−フルオロ葉酸の合成

Ｎ^２−アセチル−３’−アザ−２’−フルオロ葉酸ジ−ｔ−ブチルエステル（０．６ｇ、１ｍｍｏｌ）を、１Ｍ塩酸水溶液（１６ｍｌ）とアセトニトリル（１．６ｍｌ）の混合物に懸濁させた。懸濁液を２時間６０℃に加熱した。４℃に冷却した後、沈殿した生成物を取り出し、水（合計１０ｍｌ）で洗浄し、真空中にてＰ_２Ｏ_５で乾燥させて、未精製３’−アザ−２’−フルオロ葉酸を薄黄色の粉末として得た。収率：０．４ｇ（０．９ｍｍｏｌ、８８％）。未精製３’−アザ−２’−フルオロ葉酸（０．２７ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）を、水（２ｍｌ）と水酸化ナトリウムの１Ｍ水溶液（１．２ｍｌ）の混合物に溶解させた。溶液を７０℃で１５分間、炭（０．０２７ｇ）で処理した。炭を取り除き、濾液を０℃に冷却した。２Ｍ塩酸水溶液（０．５９ｍｌ）を加えて生成物を沈殿させた。遠心分離によって沈殿を単離した。母液を固体からデカントし、固体を水（合計量：１４．２ｍｌ）で３回洗浄した。固体残渣を２０℃で真空乾燥して、３’−アザ−２’−フルオロ葉酸を黄色の粉末として得た。収率：７８ｍｇ、（０．１７ｍｍｏｌ、２９％）。
ＨＲ−ＭＳ（ＥＳＩ，試料は３−ヒドロキシピコリン酸をマトリックスとして用いてＣＨ_２Ｃｌ_２に溶解）：ｍ／ｚ［ＭＨ］^＋計算値Ｃ_１８Ｈ_１８ＦＮ_８Ｏ_６：４６１．１３２８；実測値：４６１．１３２８。
^１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ＝１．８８〜１．９６（ｍ，１Ｈ，Ｃ（β）Ｈ）、２．０３〜２．１０（ｍ，１Ｈ，Ｃ（β）Ｈ’）、２．１４〜２．２４（ｍ，２Ｈ，Ｃ（γ）Ｈ_２）、４．２４〜４．２６（ｍ，１Ｈ，Ｃ（α）Ｈ）、４．５７（ｓ，２Ｈ，Ｃ（６）ＣＨ_２）、６．４７（ｄｄ，１Ｈ，５’Ｈａｒｏｍ，^３Ｊ_ＨＨ＝８．６Ｈｚ，^５Ｊ_ＦＨ＝１．８Ｈｚ）、７．８５（ｄｄ，１Ｈ，４’Ｈａｒｏｍ，^３Ｊ_ＨＨ＝１０．１Ｈｚ，^４Ｊ_ＦＨ＝８．６Ｈｚ）、８．５（ｓ，１Ｈ，Ｃ（７）Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：２３．４、２８．７、３４．１、４４．３、５５．８、１０１．７、１０１．９、１０５．９、１２８．２、１４２．２、１４６．６、１４７．４、１５５．７、１５９．４、１５９．８、１６４．２、１６５．２、１６５．３、１７３．２、１７８．８、１８１．５、１８２．３。

（ｄ）Ｎ−（２−アミノ−４−フルオロピリミジン−５−カルボニル）−Ｌ−グルタミン酸−ジ−ｔ−ブチルエステルの合成
６−アミノ−２−フルオロニコチン酸に代えて２−アミノ−４−フルオロ−５−ピリミジンカルボン酸（ＡｂｂｙＰｈａｒｍａｔｅｃｈ、ＬＬＣから購入）を使用する以外、例５ａ）に記載の手順に従って合成を実現した。

（ｅ）Ｎ^２−アセチル−３’，５’−ジアザ−２’−フルオロ葉酸ジ−ｔ−ブチルエステルの合成
Ｎ−（６−アミノ−２−フルオロニコチノイル）−Ｌ−グルタミン酸−ジ−ｔ−ブチルエステルに代えてＮ−（２−アミノ−４−フルオロピリミジン−５−カルボニル）−Ｌ−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエステルを使用する以外、例５ｂ）に記載の手順に従って合成を実現した。

（ｆ）３’，５’−ジアザ−２’−フルオロ葉酸の合成
Ｎ^２−アセチル−３’−アザ−２’−フルオロ葉酸ジ−ｔ−ブチルエステルに代えてＮ^２−アセチル−３’，５’−ジアザ−２’−フルオロ葉酸ジ−ｔ−ブチルエステルを使用する以外、例５ｃ）に記載の手順に従って合成を実現した。

例６
分配係数
ｌｏｇＤ_７．４を求めるために、ＫＨ_２ＰＯ_４（１．７４３ｇ、１２．８１ｍｍｏｌ）およびＮａ_２ＨＰＯ_４・２Ｈ_２Ｏ（９．５９６ｇ、５３．９１ｍｍｏｌ）を水（１０００ｍｌ）に溶かした溶液を作製して、リン酸緩衝液を調製した。リン酸緩衝液のｎ−オクタノール飽和溶液およびｎ−オクタノールのリン酸緩衝液飽和溶液を調製した。ＰＢＳ溶液（５００μｌ）およびｎ−オクタノール溶液（５００μｌ）をピペットでエッペンドルフ管に取り、放射性トレーサー（５〜１０μｌ）を加えた。エッペンドルフ管をオーバーヘッドシェーカーにおいて室温で１５分間振盪した。２つの相を５０００ｒｐｍで３分間の遠心分離によって分離した。各相の一定分量（５０μｌ）を、γ−カウンター（Ｗｉｚａｒｄ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）でのカウント用の空のエッペンドルフ管に移した。ｎ−オクタノール相とＰＢＳ相におけるカウントの比の対数を算出することにより、ｌｏｇＤ_７．４値を求めた。値は、２回の独立した実験からの１０回の算定の平均を表す。

ｌｏｇＤ_７．４測定により、結果として−４．２±０．１の値が得られ、［^１８Ｆ］−２’−フルオロ−３’−アザ−葉酸の親水性の性質が明らかとなった。

例７
安定性実験
（ａ）ヒト血漿安定性
放射性トレーサーを、ヒト血漿中でのその安定性について、３７℃で４時間にわたり試験した。製剤された製品（２００μＬ）をリン酸ナトリウム緩衝液（１００μｌ）で希釈し、一定分量（６０μｌ、１５ＭＢｑ）をヒト血漿（５００μＬ）に加え、３７℃でプレインキュベートした。混合物をＴｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒｃｏｍｐａｃｔ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）において３７℃、５００ｒｐｍで振盪した。いくつかの時点（０、３０、６０、１２０、１５０、および２４０分）の後、トレーサを加えてから一定分量を採取した。各一定分量（７０μｌ）を氷冷ＭｅＯＨ（１５０μｌ）に加えて、タンパク質を沈殿させた。上清を沈殿から分離するために、懸濁液を室温で１０分間、１３４００ｒｐｍで遠心分離した（ＥｐｐｅｎｄｏｒｆＭｉｎｉＳｐｉｎ）。上清をマイクロフィルター（ＳａｒｔｏｒｉｕｓＳｔｅｄｉｍＢｉｏｔｅｃｈＧｍｂＨ、ＭｉｎｉｓａｒｔＲＣ２５、０．４５μｍ）に通し、ラジオＵＰＬＣ系で分析した。

（ｂ）肝臓ミクロソームを使用しての安定性実験
ＫＨ_２ＰＯ_４／Ｋ_２ＨＰＯ_４緩衝液（ｐＨ７．４、０．５Ｍ、２００μｌ）、ＮＡＤＰＨ再生系Ａ（５０μｌ）、ＮＡＤＰＨ再生系Ｂ（１０μｌ）、一定分量の［^１８Ｆ］−３’−アザ−２’−フルオロ葉酸（３８μｌ、およそ１５ＭＢｑ）からなる混合物に、水（６７７μｌ）を加え、９７５μｌの体積とし、３７℃でプレインキュベートした。次いで、マウスまたはヒト肝臓ミクロソーム（２０ｍｇ／ｍｌ、２５μｌ）を加え、３７℃でインキュベートした。いくつかの時点（０、２０、４０、および６０分）の後、一定分量（１００μｌ）を取り出し、溶液を氷冷メタノール（２００μｌ）に注いで酵素反応を停止させた。各サンプルをＮａＨ_２ＰＯ_４／Ｎａ_２ＨＰＯ_４緩衝液（ｐＨ７．４、０．０５Ｍ、６００μｌ）で希釈した。どの時点も三通りに実施し、ラジオＵＰＬＣ系において分析した。陰性対照（ａｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ）として、サンプルをミクロソームなしまたはＮＡＤＰＨ再生系なしでインキュベートした。

陽性対照実験（ａｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ）として、放射性トレーサーに代えてテストステロンを反応混合物と共にインキュベートした。

（ｃ）肝臓グルタチオンを使用しての安定性実験
グルタチオン（０．１Ｍ、１００μｌ）、Ｓ９画分（２０ｍｇ／ｍｌ、５０μｌ）、およびＫＨ_２ＰＯ_４／Ｋ_２ＨＰＯ_４緩衝液（ｐＨ７．４、０．５Ｍ、２００μｌ）を水（６１２μｌ）で希釈して、体積を７７２μｌとし、［^１８Ｆ］−３’−アザ−２’−フルオロ葉酸（３８μｌ、およそ１５ＭＢｑ）を加えた。混合物を３７℃でインキュベートした。いくつかの時点で、一定分量（１００μｌ）を取り出し、サンプルを氷冷メタノール（２００μｌ）に注いで反応を停止させた。各サンプルをＮａＨ_２ＰＯ_４／Ｎａ_２ＨＰＯ_４緩衝液（ｐＨ７．４、０．０５Ｍ、６００μｌ）で希釈した。どの時点も二通りに実施し、ラジオＵＰＬＣ系において分析した。

要約すると、（１時間にわたる）すべての調査時点でのＨＰＬＣ分析の結果、無傷の製品のみが検出されており、放射脱フッ素または代謝過程は起こらず、３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ葉酸が調査の全期間にわたり完全に安定していたことが示唆される（図２）。

例８
インビトロ内部移行調査
ＫＢ細胞を１２ウェルプレートに播いて、終夜成長させた（約７００，０００細胞を含む２ｍｌのＦＦＲＰＭＩ培地／ウェル）。［^１８Ｆ］−３’−アザ−２’−フルオロ葉酸（２５μＬ、１７０ｋＢｑ）を各ウェルに加えた。一部の場合では、細胞を過剰の葉酸（１００μＭ）と共にインキュベートして、ＫＢ細胞の表面にあるＦＲを遮断した。３７℃で１時間または２時間インキュベートした後、細胞をＰＢＳで３回洗浄して、３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ葉酸の合計細胞取込みを明らかにした。内部移行した３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ葉酸の画分を評定するために、ＫＢ細胞を、除去用緩衝液（０．１Ｍの酢酸および０．１５ＭのＮａＣｌの水溶液、ｐＨ３）で洗浄して、ＦＲに結合した放射性トレーサーを細胞表面から解放した。１ｍｌの１ＮＮａＯＨを各ウェルに加えて、細胞溶解を実現した。細胞懸濁液を４ｍｌの管に移し、サンプルをγ−カウンターでカウントした。ボルテックス撹拌によって均質化した後、測定された放射活性を単一ウェル中０．３ｍｇのタンパク質という平均含有量に対して標準化するために、各サンプルについて、タンパク質の濃度をＭｉｃｒｏＢＣＡＰｒｏｔｅｉｎＡｓｓａｙキットによって明らかにした。放射性製品の細胞取込み研究によって、過剰の葉酸で遮断可能となったような、特殊な取込みおよび内部移行が示された。２時間インキュベートした後、取込みは、約７８．１７％の合計細胞取込みとなり、内部移行した画分は、１８．５６％を占めた。過剰の葉酸と共インキュベートすると、放射性トレーサー取込みが０．０３％に抑制された（図５）。

例９
エクスビボ代謝産物研究
放射性代謝産物のインビボでの定量については、３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ葉酸（６０〜７０ＭＢｑ）を担ＫＢ腫瘍マウス（ｎ＝２）に静脈内注射した。５分後、反対側の静脈から血液サンプルを採取し、放射性トレーサー注射から３０分後に動物を屠殺した。全血、肝臓、腫瘍、および尿を収集した。血液サンプルは、４℃で５分間、５０００ｇで遠心分離した。同体積の氷冷メタノールを加えてから遠心分離することにより、血漿サンプルのタンパク質を沈殿させた。血漿の上清および尿サンプルをＰＢＳ緩衝液で希釈し、ラジオＵＰＬＣによって分析した。肝臓および腫瘍組織は、ＰＴ１２００ＣＰｏｌｙｔｒｏｎ（ＫｉｎｅｍａｔｉｃａＡＧ）を使用して、等体積のＰＢＳ中でそれぞれ均質化した。同体積の氷冷ＭｅＯＨを加えた後、混合物を４℃で５分間、５０００ｇで遠心分離した。氷冷メタノールを加えてから遠心分離することにより、上清から残存するタンパク質を除去した。得られる上清画分をＰＢＳ緩衝液で希釈し、ラジオＵＰＬＣによって分析した。

血漿サンプル（５分および３０分）ならびに尿および腫瘍のサンプルの分析では、検出可能な量の代謝産物が存在しないことが明らかになった。対照的に、肝臓サンプルの分析では、代謝の徴候が示された（図４）。

例１０
葉酸受容体結合親和性
非放射性参考化合物３’−アザ−２’−フルオロ葉酸を用いた結合検定は、ＰＢＳｐＨ７．４に懸濁させたＫＢ腫瘍細胞（エッペンドルフ管１本あたり７，０００細胞／２４０μＬ）で実施した。細胞は、シェーカーにおいて、^３Ｈ−葉酸（１０μＬ、０．８４ｎＭ）および漸増濃度の３’−アザ−２’−フルオロ葉酸（２５０μＬのＰＢＳｐＨ７．４中に５．０×１０^−７〜５．０×１０^−１２Ｍ）と共に、４℃で３０分間、三通りにしてインキュベートした。非特異的結合は、過剰の葉酸（１０^−４Ｍ）の存在下で明らかにした。インキュベートした後、細胞懸濁液を含有するエッペンドルフ管を４℃で５分間遠心分離し、上清を除去した。０．５ｍｌの１ＭＮａＯＨを加えることにより細胞ペレットを溶解させ、５ｍｌのシンチレーションカクテル（ＵｌｔｉｍａＧｏｌｄ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を含有するシンチレーション管に移した。液体シンチレーション分析装置（Ｔｒｉ−Ｃａｒｂ１９００ＴＲ、Ｐａｃｋａｒｄ）を使用して放射活性を測定し、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ（バージョン５．０１）ソフトウェアを使用して、置換曲線から５０％阻害濃度を求めた。

非放射性参考化合物３’−アザ−２’−フルオロ葉酸のＦＲ結合親和性を求めた結果、ＩＣ_５０値は、０．８１±０．１８ｎＭであった。この値は、天然葉酸（約０．９ｎＭ）について求めたＩＣ_５０値と同じ範囲にあり、葉酸誘導体３’−アザ−２’−フルオロ葉酸の結合親和性が大部分保持されていることが示唆される。

例１１
生体内分布研究
インビボ実験は、地域の獣医部門による承認を受け、スイス国動物保護法に従って実施した。６〜８週齢の雌の無胸腺ヌードマウス（ＣＤ−１Ｆｏｘｎ−１／ｎｕ）をＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ドイツ国Ｓｕｌｚｆｅｌｄ）から購入した。動物には、腫瘍細胞接種の５日前から、葉酸欠乏げっ歯類食を与えた。マウスの各肩の皮下組織に、ＫＢ細胞（１００μＬのＰＢＳ中に５×１０^６細胞）を接種した。動物実験は、腫瘍細胞接種後およそ１４日間行った。生体内分布研究は、三通りに実施した。［^１８Ｆ］−３’−アザ−２’−フルオロ葉酸は、側方尾静脈から直ちに投与するために、ＰＢＳｐＨ７．４に希釈して、所望の放射活性濃度（マウス１匹あたり約５ＭＢｑ）とした。遮断研究は、３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ葉酸の投与直前に過剰の葉酸（１００μＬのＰＢＳ中に１００μｇ）を注射することにより実施した。

動物は、放射性葉酸３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ葉酸を投与してから３０分、６０分、および１９０分後に屠殺した。選択した組織および臓器を集め、秤量し、γ−カウンターで放射活性をカウントした。結果は、同時にカウントした、もとの注射物の明確なサンプルからの参考カウントを使用して、組織重量１グラムあたりの注射用量に対する百分率［％ＩＤ／ｇ］として一覧にした。

得られた結果は、表３に要約し、３匹または４匹の動物の平均を取った、組織１グラムあたりの対注射用量百分率［％ＩＤ／ｇ］を表す（表３）。

例１２
ＰＥＴ画像処理研究
ＰＥＴ実験は、ｅＸｐｌｏｒｅＶＩＳＴＡＰＥＴ／ＣＴ断層撮影機（ＧＥ）を用いて実施した。担腫瘍マウスに、１０〜１８ＭＢｑの３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ葉酸（注射１本あたり１００〜１５０μｌ）を側方尾静脈から注射した。遮断研究については、動物に、放射性トレーサー注射の１０分前に、過剰の葉酸（１００μｌ中１００μｇ）を静脈内注射によって与えた。動物を空気／酸素混合物中のイソフルランで麻酔した。ＰＥＴ走査像を、注射から１２０〜１５０分後に取得した。取得後、ＰＥＴデータを、使用者が定めた時間枠で再構築した。ＰＥＴとＣＴのデータセットを融合させたものを、ＰＭＯＤ（バージョン３．２）ソフトウェアで解析した。

３’−アザ−２’−［^１８Ｆ］フルオロ葉酸の注射から１．５〜９０分後、および注射から６０〜１５０分後のマウスの動的ＰＥＴ走査を行った。［^１８Ｆ］−２’３’−アザ−葉酸の静的ＰＥＴ走査は、通常、注射から１２０〜１５０分後の走査時間で行った。典型的な結果を図６Ａ／Ｂおよび図７に示す。静的ベースライン走査（注射から１２０〜１５０分後）では、ＫＢ腫瘍異種移植片における高く（ＳＵＶ１．９）特異的な取込み（１２．６±１．８％ＩＤ／ｇ）が示された（図６Ａおよび図７Ａ）。他の非標的臓器における取込みは、肝臓、腎臓、および唾液腺だけは例外として、ごくわずかであった。共に注射した葉酸（注射から１２０〜１５０分後）で行った研究では、腫瘍組織および腎臓における放射性トレーサーの取込みの低減が示された（図６Ｂ）。

ＰＢＳ（１００μｌ）中ペメトレキセド（４００μｇ、放射性トレーサーの６０分前）を予め注射すると、高い腫瘍取込みを保持しながら、放射性トレーサーの腎臓取込みの低減、および肝臓における蓄積の非常に強力な低減が示された（図７Ｂ）。

図６：
Ｔｕ：腫瘍
Ｋｉ：腎臓
Ｂｌ：膀胱
Ｌｉ：肝臓
Ｉｎｔ：腸
ＳＧＳ：唾液腺
ＧＢ：胆嚢
図７：
ｔｕ：腫瘍
ｌｉ：肝臓
ｋｉ：腎臓
ｂｌ：膀胱

Claims

式Ｉの化合物
［式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｂは、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む５員または６員ヘテロ環であり、
Ｘ_１〜Ｘ_５は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｒ_１、Ｒ_２は、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ_７、−ＮＲ_８Ｒ_９、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノ）カルボニルであり、Ｒ_７は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
ｐは、０、１または２であり、
ｑは、１〜７の値を有し、
ｒは、０または１である］
または薬学的に許容されるその塩。
式Ｉａ
［式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｚ_１〜Ｚ_３は、互いに独立して、Ｎ、Ｏ、ＳまたはＣであり、但し、Ｚ_１、Ｚ_２およびＺ_３の少なくとも１つは、Ｎ、ＯまたはＳであり、
Ｘ_１〜Ｘ_５は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｒ_１、Ｒ_２は、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ_７、−ＮＲ_８Ｒ_９、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノ）カルボニルであり、Ｒ_７は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
ｐは、０、１または２であり、
ｑは、１〜７の値を有し、
ｒは、０または１である］
を有する請求項１に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
式Ｉｂ
［式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｚ_１〜Ｚ_４は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、但し、Ｚ_１およびＺ_４の少なくとも一方は、Ｎ、ＯまたはＳ、好ましくはＮであり、
Ｘ_１〜Ｘ_５は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｒ_１、Ｒ_２は、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ_７、−ＮＲ_８Ｒ_９、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノ）カルボニルであり、Ｒ_７は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
ｐは、０、１または２であり、
ｑは、１〜７の値を有し、
ｒは、０または１である］
を有する請求項１に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
（ａ）Ｚ_１がＮであり、Ｚ_２、Ｚ_３、Ｚ_４がＣである、または（ｂ）Ｚ_４がＮであり、Ｚ_１、Ｚ_２、Ｚ_３がＣである、または（ｃ）Ｚ_１、Ｚ_２がＮであり、Ｚ_３、Ｚ_４がＣである、または（ｄ）Ｚ_１、Ｚ_３がＮであり、Ｚ_２、Ｚ_４がＣである、または（ｅ）Ｚ_１、Ｚ_４がＮであり、Ｚ_２、Ｚ_３がＣである、または（ｆ）Ｚ_３、Ｚ_４がＮであり、Ｚ_１、Ｚ_２がＣである、または（ｇ）Ｚ_１、Ｚ_２、Ｚ_３がＮであり、Ｚ_４がＣである、または（ｈ）Ｚ_１、Ｚ_３、Ｚ_４がＮであり、Ｚ_２がＣである、請求項３に記載の式Ｉｂの化合物。
式ＩＩまたはＩＩＩ
［式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｚ_１〜Ｚ_４は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｘ_１〜Ｘ_５は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｒ_１、Ｒ_２は、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ_７、−ＮＲ_８Ｒ_９、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノ）カルボニルであり、Ｒ_７は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
ｐは、０、１または２であり、
ｑは、１〜７の値を有し、
ｒは、０または１である］
を有する請求項１〜４のいずれか一つに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
式ＩＶａまたはＩＶｂ
［式中、
Ｘ_１〜Ｘ_５は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｘ_６、Ｘ_７は、互いに独立して、Ｃ、ＮまたはＯであり、
Ｒ_１、Ｒ_２は、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ_７、−ＮＲ_８Ｒ_９、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノ）カルボニルであり、Ｒ_７は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
Ｒ_５、Ｒ_６は、互いに独立して、Ｈまたは直鎖状もしくは分枝状Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
ｐは、０、１または２であり、
ｑは、１〜７の値を有し、
ｒは、０または１である］
を有する請求項１〜５のいずれか一つに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
式ＩＶｆまたはＩＶｇ
［式中、
Ｒ_５、Ｒ_６は、互いに独立して、Ｈまたは直鎖状もしくは分枝状Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルである］
を有する請求項１〜６のいずれか一つに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
式Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ
［式中、
Ｘ_１〜Ｘ_５は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｘ_６、Ｘ_７は、互いに独立して、Ｃ、ＮまたはＯであり、
Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃ、Ｒ_ｄは、互いに独立して、Ｈまたは^１８Ｆであり、但し、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃ、Ｒ_ｄのうち１つが^１８Ｆであり、
Ｒ_１、Ｒ_２は、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ_７、−ＮＲ_８Ｒ_９、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノ）カルボニルであり、Ｒ_７は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
Ｒ_５、Ｒ_６は、互いに独立して、Ｈまたは直鎖状もしくは分枝状Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
ｐは、０、１または２であり、
ｑは、１〜７の値を有し、
ｒは、０または１である］
を有する請求項１〜７のいずれか一つに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
式ＶＩａ、ＶＩｂ
［式中、
Ｘ_１〜Ｘ_５は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｘ_６、Ｘ_７は、互いに独立して、Ｃ、ＮまたはＯであり、
Ｒ_１、Ｒ_２は、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、−ＯＲ_７、−ＮＲ_８Ｒ_９、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ）カルボニルおよび（Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアミノ）カルボニルであり、Ｒ_７は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
Ｒ_５、Ｒ_６は、互いに独立して、Ｈまたは直鎖状もしくは分枝状Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
ｐは、０、１または２であり、
ｑは、１〜７の値を有し、
ｒは、０または１である］
を有する請求項１〜８のいずれか一つに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
式ＶＩＩおよびＶＩＩＩ
［式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｚ_１〜Ｚ_４は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
Ｙ_１、Ｙ_２は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである］
を有する、請求項１〜９のいずれか一つに記載の化合物。
式ＩＸａ、ＩＸｂ、ＩＸｃ、ＩＸｄ、ＩＸｅ、ＩＸｆ
［式中、
Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃ、Ｒ_ｄは、互いに独立して、^１８ＦまたはＨであり、但し、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃ、Ｒ_ｄのうち１つが^１８Ｆであり、
Ｒ_３、Ｒ_４は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
Ｒ_５、Ｒ_６は、互いに独立して、Ｈまたは直鎖状もしくは分枝状Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｙ_１、Ｙ_２は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖状または分枝状Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである］
を有する請求項１〜１０のいずれか一つに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
式ＸおよびＸＩ
［式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｚ_１〜Ｚ_４は、互いに独立して、ＮまたはＣであり、
Ｒ_４は、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
Ｙ_１、Ｙ_２は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである］
を有する請求項１〜１１のいずれか一つに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
式ＸＩＩａ、ＸＩＩｂ、ＸＩＩｃ、ＸＩＩｄ、ＸＩＩｅ、ＸＩＩｆ
［式中、
Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃ、Ｒ_ｄは、互いに独立して、^１８ＦまたはＨであり、但し、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃ、Ｒ_ｄのうち１つが^１８Ｆであり、
Ｒ_４は、Ｈ、ホルミル、イミノメチル、ニトロソ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイル、ハロ置換Ｃ１〜Ｃ１２アルカノイルであり、
Ｒ_５、Ｒ_６は、互いに独立して、Ｈまたは直鎖状もしくは分枝状Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｙ_１、Ｙ_２は、互いに独立して、Ｈ、ホルミル、直鎖状または分枝状Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルから選択され、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである］
を有する請求項１〜１２のいずれか一つに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
式ＸＩＩＩおよびＩＶＸ
［式中、
Ａは、アミノ酸であり、
Ｚ_１〜Ｚ_４は、互いに独立して、ＮまたはＣである］
を有する請求項１〜１３のいずれか一つに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
式ＸＶａ、ＸＶｂ、ＸＶｃ、ＸＶｄ、ＸＶｅ、ＸＶｆ
［式中、
Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃ、Ｒ_ｄは、互いに独立して、^１８ＦまたはＨであり、但し、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂ、Ｒ_ｃ、Ｒ_ｄのうち１つは^１８Ｆであり、
Ｒ_５、Ｒ_６は、互いに独立して、Ｈまたは直鎖状もしくは分枝状Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり、非置換であるかまたは少なくとも１つのＣＮ、ＨａｌもしくはＮＯ_２で置換されており、組み込まれた、隣接していないＣＨ_２基の１つ以上は、独立して、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−で置き換えられていてもよく、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである］
を有する請求項１〜１４のいずれか一つに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
ヘテロ環Ｂを［^１８Ｆ］フッ化物で直接放射標識する工程を含む、請求項１〜１５のいずれか一つに記載の化合物の製造方法。
葉酸受容体を発現させる細胞または細胞集団をインビトロまたはインビボで診断画像処理するための、請求項１〜１５のいずれか一つに記載の化合物の使用。
診断画像処理を必要とする対象に有利にかつ有効に投与するための、請求項１〜１５に記載の化合物の使用。
葉酸受容体を発現させる細胞または細胞集団の診断画像処理方法であって、少なくとも１種の請求項１〜１５に記載の化合物を診断画像処理量で投与する工程と、前記細胞または細胞集団の診断画像を取得する工程とを含む、上記診断画像処理方法。
葉酸受容体を発現させる細胞または細胞集団の診断画像処理をインビトロまたはインビボで実施する、請求項１９に記載の方法。
組織サンプルにおいて葉酸受容体を発現させる細胞をインビトロで検出する方法であって、前記組織サンプルを請求項１〜１５に記載の化合物と、有効量で、かつ結合を生じさせるのに十分な時間および条件をかけて接触させる工程と、その結合をオートラジオグラフィー等の技術によって検出する工程とを含む、上記検出する方法。
対象の診断画像処理またはモニタリングの方法であって、（ｉ）少なくとも１種の請求項１〜１５に記載の化合物を診断画像処理量で投与する工程と、（ｉｉ）前記少なくとも１種の化合物からのシグナルを検出することによるＰＥＴを使用して診断画像処理を行う工程とを含む、上記診断画像処理またはモニタリングの方法。
対象においてがんまたは炎症性および自己免疫疾患治療をモニターする方法であって、（ｉ）その必要のある対象に、診断画像処理量の少なくとも１種の請求項１〜１５に記載の化合物を、治療活性薬と組み合わせて投与する工程と、（ｉｉ）前記少なくとも１種の化合物からのシグナルを検出することによるＰＥＴを使用して診断画像処理を行って、がんまたは炎症性および自己免疫疾患治療の経過を追跡する工程とを含む、上記モニターする方法。
がんまたは炎症性および自己免疫疾患の他のいずれかの診断または治療方法と組み合わせて使用される、請求項２２および２３に記載の方法。