JP2015510768A - 光合成生物の培養および/または増殖の方法および材料 - Google Patents
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Abstract
Description
いくつかの実施形態では、大規模フォトバイオリアクターは、空気および/または栄養分用の単一の注入点を含み得るので、空気(たとえばCO2)および/または栄養分を他の容器と機能的に接続された第1容器に導入すると、空気および/または栄養分が第1容器から他の容器に移動できる。
本明細書で提供される方法を実施するためのぺブル(本明細書ではランプアッセンブリとも呼ばれる)は、当技術分野で既知の任意の方法と材料により作製され得、光源と光源を囲むバリアを含む。
ぺブルは、LEDアレイ搭載の回路パネル(たとえば五角形のパネル)から作製され得る。ぺブルセクション(たとえば2枚以上を貼り合わせた五角形の回路基板)は、それぞれ内側エッジに沿って液体シアノアクリル酸塩で接着して準備されるが(1つの3パネルセクション、2つの4パネルセクション)、セクション同士は接続しない。シアノアクリル酸塩は約3時間かけて乾燥させる。乾燥後、3つのセクションを互いにプレス嵌めして十二面体の形にし、ただし該十二面体の1面は接続(たとえばワイヤアクセス)用に開けておいて、乾燥させて一晩かけて形状を落ち着かせる。次に、該3つの主要セクションをばらばらにする。2つの4面ぺブルセクションではそれぞれ、無鉛はんだのみを使い28ゲージワイヤを用いてアース接続を中心パネルにはんだ付けする。これを、アースと同じ中心パネルに12ボルト接続の接続を、3面部分では3面のいずれかをメイン接続パネルとして、繰り返す。次に、3パネルセクションのメインパネルからのアース接続を、4パネルセクションのうちの1つのメインパネルに28ゲージワイヤと無鉛はんだを用いて接続する。第2の4パネルセクションのメインパネルを、第1の4パネルセクションのメインパネルに隣接するこのセクションの遠くのパネル(メインパネルと1辺を共有し他の1辺のみパネルに接着)に接続する。こうして一方の回路ではすべてのアース、別の回路ではすべての12V接続を接続するこの最後のパネルに、各回路への22ゲージワイヤをはんだ付けする(長さは、バレル全体でのぺブルの均一な分布により決定される(約10〜40インチ)。)次に、ワイヤが内部に配置されるように注意しながらパネルを互いにプレス嵌めする。次いでぺブルに錘として10〜12個のガラスビーズを満たす。
ぺブルのケースが、ぺブル周囲が収まる寸法のポリエチレン(Nalgene)のジャーを用いて準備され得る。1/4インチの穴をジャーの蓋の中央部に開ける。次に、蓋の壁からシリコーンガスケットを1/4インチ挿入する。次に、雄1/4インチの真鍮壁貫通タケノコ継手を蓋の下側からねじ込み、蓋の頂部から1/4インチのシリコーンガスケットに取り付ける。次に、雌1/4インチの真鍮継手を蓋の頂部から雄継手に螺合させる。次に、1/4インチの内径の可撓性シリコーン管1と1/2インチを、シアノアクリル酸塩を接着剤として用いて蓋のガスケットに取り付ける。次に、外径(OD)1/4インチの剛性LLDPE白色管(長さはバレル内の最適なぺブル分布により決定される)を接続管にシアノアクリル酸塩を接着剤として用いて取り付ける。次に、ジャーの底部に錘と光拡散用のある数(たとえば14)の透明ガラスビーズを満たす。次に、組み立てたぺブルをジャー内でガラスビーズ上に載置させ配置する。次に、22ゲージワイヤをガスケットと管を縫うように通す。その後、ジャーを白色鉱油で満杯にし、可能な限り空気を抜いてから蓋を回し密封する。ジャーの外側に付着した余剰の油を除去した後、ジャーを逆浸透水で洗浄する。
図12から図35は、ランプアッセンブリの実施形態を示す図である。各実施形態において、ランプアッセンブリ108は、互いに接続されて、ケーシングの寸法に基づき独特の幾何学的形状にされた回路基板113を含む。各ランプアッセンブリは、イマージョンオイルを流れやすくする入口と出口を含む。入口と出口は、接続管602に機械的に接続する寸法になっている。さらに、入口は、電気コネクター111(図示せず)を含む。
本明細書で提供される方法を実施するためのフォトバイオリアクターは、当技術分野で既知の任意の方法と材料により作製され得、バレルと蓋とCO2ストーンのアッセンブリ(本明細書ではランプアッセンブリとも呼ばれる)により作製される。
標準的な60ガロンのポリプロピレン製バレル(開口するもの)を用いる例示的な方法では、バレルは、8個の1/2インチ穴を等距離でバレル底から4と1/2インチのところに開けて準備する。2つの隣接する穴の間の等距離のところに9番目の1/2インチ穴をバレル底から2と1/2インチのところに開ける。次に、エグザクトブレードで余分なブラスチックを除去してドリル穴エッジを滑らかにする。
例示的な方法では、黒色のポリプロピレン製の蓋に、1/2インチのプラスチックドリルビットを用いて、図11Aに示すような構成で7個の穴を開ける。
例示的な方法では、30インチの長さの剛性白色LLDPE管をコネクター管で中心の継手に取り付ける。次に、2部品構成の100mmの透明アクリル球体の雌半球上でドーム頂点をマークする。次に、雄半球上で一辺の長さ約2インチの等距離三角形(equidistant triangle)の角をマークし、ドーム頂点を中心に合わせる。次に、1/4インチの回転ツール研削ビットを用いて各マーキングの予備ガイド穴を開ける。次に、1/2インチのゴム引き研削ビットを用いて、ガイド穴を中心として最終穴を開ける。穴開けで出た余分なプラスチックは、クリッパーとエグザクトブレードで穴が滑らかになるまで取り除く。次に、1/2インチのゴム製壁貫通ガスケットを各穴に取り付ける。次に、1/2インチの真鍮壁貫通タケノコ継手をガスケットを用いて雌半球の中心穴に取り付ける。次に雄半球を450グラムの透明ガラスビーズで満たす。次に、シアノアクリル酸接着剤を下部の雄半球に塗布し、雄半球と雌半球をプレス嵌めする。約1時間かけてシアノアクリル酸接着剤を乾燥させる。次に、2インチの長さの剛性タイゴンをシアノアクリル酸接着剤で真鍮継手タケノコ部に取り付ける。再度シアノアクリル酸接着剤を約1時間かけて乾燥させる。次に、組み立てた球体とコネクター管を、中心の蓋継手に取り付けた剛性白色管に取り付ける。
本明細書で提供されるフォトバイオリアクターは、1種類または複数の光合成微生物を増殖させる方法で使用され得る。そのような方法は、以下を含む4ステップのプロセスをとり得る:(1)最適な環境条件(OEC)の決定、(2)生産環境のステージングと接種、(3)抽出可能な量(mass)になるまで光合成微生物を増殖、(4)成熟細胞の選択的抽出。
新規または未知の株を立ち上げる場合、塩分濃度、栄養分濃度、EM周波数(frequency)(RWB比)、EM周期および空気流量を含むあらゆる増殖変数の最適値を決定する必要がある。OECは、開始点として天然の環境条件(NEC)の近似を用いて決定され得る。まずは試験する各変数につき3つのジェネレーション4リアクターチャンバ(容量2リットル)で、選択肢を絞るため消去プロセスを用いる。たとえばチャンバ1は、そのNECよりも60%高い濃度の実験変数を含み、チャンバ2は、そのNECの実験変数を含み、チャンバ3は、そのNECよりも60%低い濃度の実験変数を含む。株の増殖速度は、拡散光学密度(DOD)の変化速度を観察して決定する。DODのIF/THENは以下の通りである。
上で決定したOEC値を用いてジェネレーション5リアクター(容量30リットル)を上記Aで決定したレベルに準備する。塩度レベルを設定し、ポンプを作動させ、所定のレベルどおりにリアクターに栄養分を添加する。栄養分は、光なしで約2時間かけて混合させる。栄養分の混合が終わると、リアクターに少なくとも10%の生体培養物を播種する。水栄養レベルの連続的な試験に基づき、株の増殖速度により必要に応じてそれから3〜10日間培養物を補給する。DODが個々のLEDが見えなくなるレベルに達すると、ジェネレーション5リアクターの培養物の90%をジェネレーション7リアクターの接種材料として、ジェネレーション7リアクターを上記と同様の方法で準備する。
ジェネレーション7リアクター内で増殖が安定すると、pH、アンモニア、硝酸塩、亜硝酸塩、リン酸塩、溶解CO2、溶解O2、系の空気流、系の圧力および拡散光学密度の各条件を連続的に監視しなければならない。これらの条件が微生物の増殖に応答してOECから外れると、OECを維持するための対策をこれらのパラメータにおいてとらなければならない。たとえば、ジェネレーター(Gen)7の藍藻培養が48時間で3倍の密度になり(DODと濁度の増加から観察できる)アンモニアが0ppmまで減少すると、濃縮肥料を希釈して添加しアンモニアをOECまで戻さなければならない。さらに、たとえば、ジェネレーター(Gen)7の培養が3か月継続運転され、複数回の栄養補給と消化排泄物の蓄積に応答してpHがOECを超えて8.4まで上昇した場合、有機酸(つまりクエン酸)を希釈して添加しpHをその培養物のOECのpHに戻さなければならない。
PSMが得られる時点以前に、次の2つの抽出構成のうち1つが成立しなければならない:(1)Gen7出口弁→ポンプ→フィルター→Gen7戻り、または(2)Gen7出口弁→フィルター→ポンプ→Gen7戻り。構成は、濾過される株の特徴により決定される。選択的濾過の効果は、所与の株の成熟細胞と未成熟細胞のサイズ差と、濾過媒体の孔径の適切な選択による。濾過孔径は、好ましいマージン>25%で、未成熟細胞の直径よりも大きく、成熟細胞の直径よりも小さくなくてはならない。上記の構成のうちの1つが設定され、PSMが得られると、以下のステップをとることができる:(a)Gen7出口弁を「閉」から「開」にする、(b)ポンプに迎え水が入るとポンプを「オフ」から「オン」にする、(c)フィルターバッグが満杯になり空気圧がフィルターバッグ全体で均等になると、フィルターキャップを「閉」から「開」にしてもよい、(d)随意であるが、フィルターの戻りラインに出口弁が取り付けられている場合、ポンプとフィルターを係合構成にする前に該弁を「閉」から「開」にしておかなければならない。フィルター圧力はどの時点でも15psiを超えてはならず、小径のバッグ(<5ミクロン)では10psiを超えてはならない。濾過時間は株により大きく異なるので、新規の株の濾過は厳重に監視しなければならない。
Claims (34)
- 光合成生物の培養および/または増殖のためのフォトバイオリアクターであって、
(a)容器内部容積を画定する壁を有する容器と、
(b)前記容器内部容積内に配置されるランプアッセンブリを含み、
前記ランプアッセンブリが、それぞれ少なくとも3つのエッジを含み、略球形に構成されてランプアッセンブリ内部容積を画定する複数の回路基板であって、前記ランプアッセンブリ内部容積と接触する第1平面と、発光ダイオード(LED)を含む反対側の第2平面を含む複数の回路基板と、前記略球形を形成する前記複数の回路基板を囲むバリアを含む、バイオリアクター。 - 前記容器が筒状であり、筒状壁、上部壁および下部壁を含み、それぞれが前記槽内部容積を画定する、請求項1に記載のバイオリアクター。
- 前記容器が略球体である、請求項1に記載のバイオリアクター。
- 前記容器が気体入口の穴を含む、請求項1に記載のバイオリアクター。
- 前記容器が気体出口の穴を含む、請求項1に記載のバイオリアクター。
- 前記容器が前記光源の配線の穴を含む、請求項1に記載のバイオリアクター。
- 前記ランプアッセンブリが前記容器の中心に配置される、請求項1に記載のバイオリアクター。
- 2つ以上のランプアッセンブリが前記容器内に配置される、請求項1に記載のバイオリアクター。
- 前記2つ以上のランプアッセンブリが前記容器内で異なる高さに配置される、請求項8に記載のバイオリアクター。
- 3つ以上のランプアッセンブリが前記容器内に配置される、請求項1に記載のバイオリアクター。
- 前記3つ以上のランプアッセンブリが前記容器内で異なる高さに配置される、請求項10に記載のバイオリアクター。
- 前記3つ以上のランプアッセンブリが前記容器内でらせん配列に配置される、請求項11に記載のバイオリアクター。
- 光合成生物の培養および/または増殖に使用されるランプアッセンブリであって、
それぞれ少なくとも3つのエッジを含み、略球形に構成されてランプアッセンブリ内部容積を画定する複数の回路基板であって、前記ランプアッセンブリ内部容積と接触する第1平面と、発光ダイオード(LED)を含む反対側の第2平面を含む複数の回路基板と、
前記略球形を形成する前記複数の回路基板を囲むバリアを含む、ランプアッセンブリ。 - 前記平面回路基板の前記略球形の構成が、少なくとも1枚の回路基板がない面を有して電気的接続を許容する、請求項13に記載の光源。
- 前記回路基板が、前記回路基板の噛合を許容する1つまたは複数の切欠き部を形成する2つ以上のタブをその周囲に含む、請求項13に記載の光源。
- 前記回路基板が五角形である、請求項13に記載の光源。
- 11枚の五角形が接合されて面が1つない十二面体を形成している、請求項16に記載の光源。
- 前記回路基板が三角形である、請求項13に記載の光源。
- 20枚の三角形が接合されて面が1つない二十面体を形成している、請求項18に記載の光源。
- 前記回路基板が赤色LED、白色LEDおよび青色LEDを含む、請求項13に記載の光源。
- 前記赤色LED、白色LEDおよび青色LEDが反対色のLEDに隣接させて配置される、請求項13に記載の光源。
- 前記バリアがプラスチックである、請求項13に記載の光源。
- 前記バリアが略球体である、請求項13に記載の光源。
- 前記プラスチックが光を透過させる、請求項22に記載の光源。
- 前記バリアが電気的接続を許容する開放端を有する、請求項22に記載の光源。
- 前記バリアと前記回路基板の間の空隙が、熱を拡散させる流体を含む、請求項22に記載の光源。
- 前記流体が鉱物油である、請求項26に記載の光源。
- ドコサヘキサエン酸(DHA)を生産する方法であって、
(a)DHAを生成する酵素を含む1種類または複数の光合成生物を準備することと、
(b)前記光合成生物を、液体増殖培地を含むバイオリアクターの容器に添加することと、
(c)前記1種類または複数の光合成生物をランプアッセンブリが発する光と接触させることであって、
前記ランプアッセンブリが、
それぞれ少なくとも3つのエッジを含み、略球形に構成されてランプアッセンブリ内部容積を画定する複数の回路基板であって、前記ランプアッセンブリ内部容積と接触する第1平面と、発光ダイオード(LED)を含む反対側の第2平面を含む複数の回路基板と、
前記略球形を形成する前記複数の回路基板を囲むバリアを含む、接触させることと、
(d)前記1種類または複数の光合成生物からDHAを生産すること、を含む方法。 - 前記1種類または複数の光合成生物が藻類である、請求項28に記載の方法。
- 塩度は類似しているが温度が異なる自然環境を有する2種類以上の藻類が提供される、請求項29に記載の方法。
- 前記藻類が、イソクリシス aff. ガルバナ(Isochrysis aff. Galbana)とパブロバ・ルテリ(pavlova lutheri)からなる群より選択される、請求項30に記載の方法。
- 前記DHAを前記増殖培地から単離することをさらに含む、請求項28に記載の方法。
- 光エネルギーを保存する方法であって、
(a)光エネルギーから1種類または複数の化合物を生成する酵素を含む1種類または複数の光合成生物を準備することと、
(b)前記1種類または複数の光合成生物を、液体増殖培地を含むバイオリアクターの槽に添加することと、
(c)前記1種類または複数の光合成生物をランプアッセンブリが発する光と接触させることであって、
前記ランプアッセンブリが、
それぞれ少なくとも3つのエッジを含み、略球形に構成されてランプアッセンブリ内部容積を画定する複数の回路基板であって、前記ランプアッセンブリ内部容積と接触する第1平面と、発光ダイオード(LED)を含む反対側の第2平面を含む複数の回路基板と、
前記略球形を形成する前記複数の回路基板を囲むバリアを含む、接触させること
(d)前記光エネルギーから1種類または複数の化合物を生産すること、を含む方法。 - 前記1種類または複数の化合物から、その後エネルギーが放出される、請求項33に記載の方法。
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