JP2015096512A - アルブミン−アミロイドペプチドコンジュゲートおよびその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
これらの障害は共通に、「アミロイド原線維」、「アミロイド沈着」または「アミロイド斑」として知られる、通常直径約10〜100nmの、特定の器官または組織領域に局在するタンパク質原線維の異常な細胞外沈着の存在を有する。このようなアミロイド斑は、主として天然の可溶性タンパク質またはペプチドからなる。これらの不溶性沈着物は、一般に直径およそ10〜15nmの原線維の横向きの凝集物から構成される。それらの発生が多様であるにもかかわらず、総てのアミロイド沈着が共通の形態的特性を有し、特定の色素(例えば、チオフラビンT、コンゴレッド)で染色され、染色後、偏光中で特徴的な赤−緑の複屈折性の外観を有する。
本発明者らは、アミロイドβタンパク質(1−42)[Aβ(1−42)]領域のC末端領域に由来するペプチドとアルブミンとを含んでなるコンジュゲートを投与すると、驚くことに、前記ペプチドに対する抗体が生じ、アルツハイマー病におけるアミロイド斑の主要な成分であるタンパク質Aβ(1−40)およびAβ(1−42)の血清レベルが低下することを見出した。これらの結果は、アミロイドタンパク質の沈着に関連する疾患を治療、予防および/または改善するための新たな治療の途を拓くものといえる。
本明細書において「免疫原性ペプチド」とは、対立遺伝子特異的モチーフ、エピトープまたは他の配列を含んでなるペプチドを意味し、従って、このポリペプチドまたは断片はMHC分子と結合し、その免疫原性ペプチドが由来する抗原、すなわちアミロイドβペプチドに対する細胞傷害性Tリンパ球(「CTL」)応答、および/またはB細胞応答(例えば、抗体生産)、および/またはT−ヘルパーリンパ球応答、および/または遅延型過敏症(DTH)応答を誘発する。あるペプチドが免疫原性であるかどうかを判定するための好適な方法は、例えば、本発明の実施例で示される。これらの方法は、前記ペプチドを投与した後に動物内で抗アミロイドβ抗体を生成する前記免疫原性ペプチドの能力に基づく。
上述のように、本発明の一態様は、薬剤におけるその使用のための、Aβ(1−42)のC末端領域に由来するペプチドとアルブミンとを含んでなるコンジュゲートに関する。
「アルブミン」は「血清アルブミン」と互換的に用いられ、本発明の改変ペプチドとコンジュゲートを形成するアルブミンの供給源を定義するものではない。従って、本明細書において「アルブミン」とは、血液もしくは漿液などの天然源から精製されたアルブミンを意味することもできるし、または化学合成されたもしくは組換え生産されたアルブミンを意味することもできる。種々の実施形態では、アルブミン変異体または天然アルブミンの誘導体を本発明のコンジュゲートの形成に使用することができる。いくつかの実施形態では、アルブミンは哺乳類アルブミンまたはその変異体もしくは誘導体である。使用可能な哺乳類アルブミンの限定されない例としては、ヒト、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ネコ、イヌ、ブタ、霊長類または齧歯類アルブミンが挙げられる。好ましい実施形態では、哺乳類アルブミンはヒトアルブミンである。
Aβ(1−42)のC末端領域に由来するペプチドとアルブミンは直接結合させてもよいし、あるいはまた1以上の架橋基(以下、介在分子またはスペーサー部分とも呼ぶ)を介して接続してもよい。
特定の実施形態では、反応性基(例えば、MPA、GMBA、NHS、スルホ−NHS、MBSまたはGMBS)は、例えば、ポリグリシンリンカー、ポリグリシン−リシンリンカー、AEEA、AEAもしくはOA、またはその任意の組合せを含む1以上の架橋基を介してペプチドと結合する。反応性基が2以上の架橋基を介してペプチドと結合するある特定の実施形態では、各架橋基は、ポリグリシン、ポリリジン、AEA、AEEAおよびOAから一般になる群から独立に選択することができる。実施形態では、架橋基(例えば、単量体ポリマー単位)の数は1〜2、1〜3、1〜4、1〜5、1〜6、1〜7、1〜8、1〜9、1〜10、1〜11、1〜12である。2以上の架橋基が存在する場合、これらの架橋基は同じ架橋基であっても異なる架橋基であってもよい。例えば、ポリグリシン、ポリリジン、AEA、AEEAおよび/またはOAの1つの任意の組合せは、いずれの順序で用いることもできる。一実施形態では、反応性基、一般にはMPAは、直列に配置された1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11または12のポリグリシン、ポリリジン、AEA、AEEAまたはOA架橋基を介してペプチドに結合される。別の実施形態では、反応性基、一般にMPAは、分枝型の構成で配置された1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11または12のポリグリシン、ポリリジン、AEA、AEEAまたはOA架橋基を介してペプチドに結合される。
Rは、−N(CH2−)2、−NHCH<または−NHCH(CH2−)2を表し、 Xは、水素またはペプチド基を表し、かつ
LAは、存在してもよく、アミノ酸または少なくとも2個のアミノ酸残基を含むペプチドであり、
LBは、存在してもよく、アミノ酸または少なくとも2個のアミノ酸残基を含むペプチドであり、
Pは、アミロイドタンパク質またはアミロイドタンパク質と実質的な類似性を有するタンパク質の全長または断片から選択されるペプチドであり、
Yは、OHまたはNH2である]
およびその薬学上許容される塩を持たない。
十分な量のAβ(1−42)のC末端領域に由来するペプチドおよびアルブミンが利用可能であれば、本発明のコンジュゲートは、両成分をそれらの間の共有結合性複合体の形成に好適な条件下で接触させることによって形成させる。
ペプチドに対するNHSおよびマレイミド反応性基の導入は、マレイミド−ベンゾイル−スクシンイミド(maleimide-benzoyl-siiccinimide)(MBS)、γ−マレイミド−ブチリルオキシスクシンイミドエステル(GMBS)、ジチオビス−N−スクシンイミジルプロピオネート(DTSP)、N−スクシンイミジル3−(2−ピリジルジチオ)(SPDP)、スクシンイミジルトランス−4−(マレイミジルメチル)−シクロヘキサン−1−カルボキシレート(SMCC)、スクシンイミジルアセチルチオアセテート(SATA)、ベンゾフェノン4−マレイミド、λ−((2−ピリジルジチオ(pyridyldifhio))エチル)−4−アジドサリチルアミド(PEAS;AET)などの二官能性架橋剤の使用によって行うことができる。このような二官能性リンカーは、保護基の選択に基づき、ペプチド上のカルボキシ基またはアミノ基のいずれかを活性化させる。
本発明のコンジュゲートは被験体に免疫応答を誘導してAβ(1−42)に対して特異的な抗体の量を増すことができ、かつ、血清中のアミロイド負荷を低減することができる。しかしながら、当業者に知られているように、コンジュゲートの抗原性を増大させるためにアジュバントを用いて免疫応答を増強することができる。よって、別の態様において、本発明は、薬剤に使用するための、本発明のコンジュゲートとアジュバントとを含んでなる組成物を提供する。
「リン酸アルミニウム」として知られるアジュバントは一般に、多くの場合少量の硫酸塩も含有するヒドロキシリン酸アルミニウム(すなわち、ヒドロキシリン酸硫酸アルミニウム)である。それらは沈殿によって得ることができ、沈殿中の反応条件および濃度が、塩中のヒドロキシルのリン酸置換度に影響を及ぼす。
本明細書の冒頭ですでに述べたように、本発明の組成物は、アミロイドタンパク質の沈着に関連する疾患の治療に有用であることが分かった。よって、別の態様において、本発明は、アミロイドタンパク質の沈着に関連する疾患の治療のための、Aβ(1−42)のC末端領域に由来するペプチドとアルブミンを含んでなる結合体、またはAβ(1−42)のC末端領域に由来するペプチドとアルブミンとアジュバントを含んでなる組成物に関する。
Aβ(1−42)のC末端領域に由来するペプチドがAβ(35−42)(配列番号2)、Aβ(33−42)(配列番号3)、Aβ(33−40)(配列番号4)から選択され;
Aβ(1−42)C末端領域に由来するペプチドが付加的なN末端Cysをさらに含んでなり;
アルブミンがウシ血清アルブミンであり;
アジュバントが好ましくはTh1またはTh2型アジュバントであり;かつ
本発明の組成物または本発明のキットからの有効成分が隔週で投与される。
I.材料および方法
1.動物の特徴
本発明では、両方の性の12歳のビーグル犬を用いた。これらの動物の特徴を表1にまとめる。それらは商業供給者から入手し、サンチアゴ大学の飼育場で飼育されたものである。試験中、動物は、屋内/屋外を自由に行き来できる3つの集合飼育場で飼い、配合ドッグフードと水を自由に摂らせた。これらの動物は試験の開始直前に身体検査、神経学的検査、血液生化学値およびヘモグラムを含め、十分に評価され、健康であることが明らかにされた。
4種類の異なるワクチン製剤に配合された抗原として、合成Aβ(35−42)ペプチド(SPDPを介してコンジュゲートさせた場合に付加的なN末端Cysを有する)(0.4g/注射)を動物の免疫に用いた。これらの製剤はそれぞれ、Blue Carrier(BC; Pierce社製, Rockford, IL;A群およびB群)またはウシ血清アルブミン(BSA; Sigma社製, Madrid, Spain;C群およびD群)のいずれかのタンパク質担体と、Rehydragel HPA(RH; Quimibios社製 (製造者はReheisである), Barcelona, Spain;A群およびC群)またはAbisco−300(AB; Isconova AB社製, Uppsala Science Park, SE-751 83 Uppsala, SWEDEN;B群およびD群)のいずれかのアジュバントとを組み合わせたものである。
まず、20mM SPDP(N−スクシンイミジル3−(2−ピリジルジチオ)プロピオネート;50mg/8ml DMSO)の保存溶液を調製した。次に、5mgのBSAを1mlのPBS/5mM EDTA pH8に溶解し、50μlの20mM SPDP溶液をBSAに加えた。この溶液を室温で2時間インキュベートした。その後、脱塩カラムをPBS/EDTAで平衡化し、SPDP改変BSAにバッファー交換して反応副産物と過剰な非反応SPDP試薬を除去した。
a)100μlのSPDP改変脱塩BSAをPBSで1mlに希釈する。
b)PBS/EDTAブランクと比較して、タンパク質サンプルの343nmでの吸光度を測定し、記録する(3回試験)。
c)10μlの15mg/ml DTTを1mlのSPDP改変タンパク質サンプルに加え、混合する。
d)正確に15分後、還元されたサンプルの343nmでの吸光度を測定し、記録する。
e)下式を用いる。
2mlのホウ酸バッファーpH10および66μl(200mg/ml)のBlue Carrierを反応バイアルに加え、穏やかに混合した。次に、12mgの合成ペプチドを反応バイアルに加えた。同時に、ホウ酸バッファーpH10を加えることにより、グルタルアルデヒドを0.3%に希釈した。
未反応のグルタルアルデヒドを遮断するため、250μlのグリシン1Mを反応バイアルに加え、穏やかに混合し、室温でさらに30分間インキュベートした。その後、反応混合物を、PBSで平衡化した脱塩カラムに移した。反応混合物を凍結乾燥させ、好適な濃度になるように溶かした。
A)400マイクログラムの、Blue CarrierにコンジュゲートしたAβ35−42と、200マイクロリットルのRehydragel HPA 。
B)400マイクログラムの、Blue CarrierにコンジュゲートしたAβ35−42と、200マイクロリットルのAbisco−300。
C)400マイクログラムの、BSAにコンジュゲートしたAβ35−42と、200マイクロリットルのRehydragel HPA。
D)400マイクログラムの、BSAにコンジュゲートしたAβ35−42と、37マイクロリットルのAbisco−300。
・Blue Carrierとグルタルアルデヒドとをコンジュゲートさせた場合、
1.イヌ(およびマウス;下記参照)のAβ(35−42)(NH2−MVGGVVIA−COOH)(配列番号2)
2.ウサギのAβ(33−42)(NH2−GLMVGGVVIA−COOH)(配列番号3)(下記参照)
・BSAとSPDPとをコンジュゲートさせた場合、
1.イヌ(およびマウス;下記参照)のAβcys−(35−42)(NH2−CMVGGVVIA−COOH)(配列番号17)
2.ウサギのAβcys−(33−42)(NH2−CGLMVGGVVIA−COOH)(配列番号18)(下記参照)。
動物(イヌ)を4群に分け、4つのワクチン製剤のいずれかを割り付けた。動物の背部の皮下にAβ35−42を免疫し、有害反応をモニタリングした。免疫および採血の計画を図1(A)に示す。簡単にいうと、動物に隔週で7回注射した。C群およびD群のイヌには、7回目の注射の7か月後にさらに8回目の免疫を行った。
抗Aβ抗体は、96ウェルポリプロピレンプレートにて直接ELISAによって測定した。マイクロタイターウェルを、4℃で一晩、100mM重炭酸ナトリウムおよび2M塩酸グアニジンバッファー(pH9.6)中、2.5μg/mlのヒトAβ(1−42)ペプチド(# 24224 AnaSpec社製, San Jose, CA, USA)でコーティングした。次に、これらのプレートを300μlの洗浄バッファー(0.5M Tris、1.5M塩化ナトリウム、0.5%Tween20;pH8)で3回洗浄し、37℃で2時間、300μlのブロッキングバッファー(0.05M Tris、0.2%Tween20、0.5%BSA;pH8)でブロッキングし、再びさらに3回洗浄した。コーティングされたプレートを37℃で1時間、最初のウェルを1:30希釈の血漿で始める10ウェルの1行において、イヌ血漿の、ビヒクルバッファー(0.05M Tris、0.5M塩化ナトリウム、0.05%BSA、0.05%Tween20;pH8)での3倍連続希釈液100μlでインキュベートした。アッセイした最大血漿希釈率は1/10×310であった。各プレートの第11列および第12列は、ブランク対照として、血漿を含まないビヒクルバッファーで満たした。次に、これらのプレートを洗浄し、37℃で1時間、ホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ(horse radix peroxidase)をコンジュゲートしたウサギ抗イヌIgG(Jackson InmunoResearch. Suffolk, UK)の、ビヒクルバッファーでの1:1000希釈液100μlでインキュベートし、3回洗浄し、ABTS用バッファー(Roche社製, Barcelona, Spain)中、0.0375%のABTS(Roche社製, Barcelona, Spain)でインキュベートした。自動プレートリーダー(Synergy 4, Biotek社製, Winooski, Vermont, USA)にて405nmで吸光度を読み取った。
イヌの血漿およびCSF中のAβ1−42およびAβ1−40のレベルは、Araclon Biotech社(Zaragoza, Spain)製のABテスト−40およびABテスト−42ELISAキットによる間接的サンドイッチELISAを用いて、製造者の説明書に従って測定した。
全試験期間を通じて動物は健康を維持し、活発であった。特に、ワクチンに対する反応の徴候は検出されなかった。0週目から13週目までの平均体重増加は1±1.7Kgであった(表1)。この期間に体重が低下したのは2匹だけであった(それぞれ1Kg、それぞれ0週目の体重の4%および7%に相当する)。
A群およびB群
6E10標品に対してA群およびB群内の動物の血漿吸光度を内挿したところ、免疫前サンプルとW5、W9およびW13に採取されたサンプルとの間に一貫した差は検出されなかった(表2Aおよび図2A)。3回および7回の免疫(それぞれW5およびW13)の後に6E10のμg/μl当量として測定された血漿抗体力価の増加倍率は極めて低かった(A群ではそれぞれ0.8±0.2および0.8±0.2、B群ではそれぞれ1.2±0.1および1.3±0.3 表3)。A群およびB群内の動物における特異的抗体(抗Aβ42)の血漿EC50の値は、0週目から13週目までは極めて低かった。実際に、W0からW5までの血漿EC50の値は、この時点でもっぱら有意でない増加を示したイヌB2を除き、これらのイヌの総てで低下した(表2Bおよび図2A−C)。さらに、これらのイヌの最も高濃度の血漿希釈率(1:30)であっても、免疫後に免疫前血漿サンプルで測定されたものの3倍高い吸光度を示す場合はなかった(表2C)。よって、これらの2群のイヌは、それらの対応するワクチン製剤(AおよびB)に不応答であると考えられた。
A群およびB群で見られたものとは対照的に、ワクチン製剤CおよびDで処置したイヌは、それらの血漿抗体力価に実質的な変化を示した。これらの2群の総てのイヌの応答は、6E10標品、EC50またはエンドポイント希釈率によって評価したところ、群間および群内の双方で量的な違いが見られたが、同じパターンをたどった(表2A−C)。一般的なパターンは、3回の免疫後の力価の実質的増加を特徴とし、これはW5からW13までわずかな変化があるだけで維持された(図2A−C)。よって、抗体力価は3回の免疫の後に実質的に増加したが、その後の隔週4回のワクチン注射の後は、実質的な増加はなかった(またはわずかに低下しさえした)。具体的には、3回および7回(それぞれW5およびW13)の免疫の後に、6E10のμg/μl当量として測定された力価に、C群ではそれぞれ12.3±0.4倍および8.1±2.6倍、D群ではそれぞれ30.2±12.8倍および24.1±15.3倍に増加した(表3)。
サンドイッチELISAは、不応答群の動物において、免疫前血漿とW5、W9およびW13に採取したサンプルとの間でAβ1−42またはAβ1−40ペプチド濃度に一貫した違いは検出しなかった(AおよびB)(表4A−B、図3A−B)。3回および7回の免疫(それぞれW5およびW13)の後の血漿Aβ1−42濃度の変化倍率は極めて低かった(A群ではそれぞれ1.2±0.7および1.0±0.0、B群ではそれぞれ0.9±0.0および1.0±0.1 表5A)。同様に、3回および7回の免疫(それぞれW5およびW13)の後の血漿Aβ1−40濃度の変化倍率も極めて低かった(どちらの週数でも両群とも0.9±0.1 表5B)。
I.材料および方法
1.動物の特徴
本発明では、両方の性の6歳のビーグル犬を用いた。それらは商業供給者から入手し、サンチアゴ大学の飼育場で飼育されたものである。試験中、動物は、屋内/屋外を自由に行き来できる3つの集合飼育場で飼い、配合ドッグフードと水を自由に摂らせた。これらの動物は試験の開始直前に身体検査、神経学的検査、血液生化学値およびヘモグラムを含め、十分に評価され、健康であることが明らかにされた。
2種類の異なるワクチン製剤に配合された抗原としての合成Aβ(33−40)ペプチド(SPDPを介してコンジュゲートさせた場合に付加的なN末端Cysを有する)(0.4g/注射)を動物の免疫に用いた。これらの製剤はそれぞれ、Blue Carrier(BC; Pierce社製, Rockford, IL;A群)またはウシ血清アルブミン(BSA; Sigma社製, Madrid, Spain;B群)のいずれかのタンパク質担体と、アジュバントAbisco−300(AB; Isconova AB社製, Uppsala Science Park, SE-751 83 Uppsala, SWEDEN)とを組み合わせたものである。
A)400マイクログラムの、Blue Carrierにコンジュゲートされた合成ペプチドと、200マイクロリットルのAbisco−300。
B)400マイクログラムの、BSAにコンジュゲートされた合成ペプチドと、37マイクロリットルのAbisco−300。
・SPDPを用いてコンジュゲートさせた場合、
ウサギのAβcys−(33−40)(NH2−CGLMVGGVV−COOH)(配列番号19)(下記参照)
動物を2群に分け、2つのワクチン製剤のいずれかの割り付けた(上記の(A)および(B)参照)。動物の背部の皮下に免疫し、有害反応をモニタリングした。免疫および採血の計画を図1(B)に示す。簡単にいうと、動物に隔週で7回注射した。
抗Aβ抗体は、96ウェルポリプロピレンプレートにて直接ELISAによって測定した。マイクロタイターウェルを、4℃で一晩、100mM重炭酸ナトリウムおよび2M塩酸グアニジンバッファー(pH9.6)中、2.5μg/mlのヒトAβ(1−40)ペプチド(# 24224 AnaSpec社製, San Jose, CA, USA)でコーティングした。次に、これらのプレートを300μlの洗浄バッファー(0.5M Tris、1.5M塩化ナトリウム、0.5%Tween20;pH8)で3回洗浄し、37℃で2時間、300μlのブロッキングバッファー(0.05M Tris、0.2%Tween20、0.5%BSA;pH8)でブロッキングし、再びさらに3回洗浄した。コーティングされたプレートを37℃で1時間、最初のウェルを1:30希釈の血漿で始める10ウェルの1行において、イヌ血漿の、ビヒクルバッファー(0.05M Tris、0.5M塩化ナトリウム、0.05%BSA、0.05%Tween20;pH8)での3倍連続希釈液100μlでインキュベートした。アッセイした最大血漿希釈率は1/10×310であった。各プレートの第11列および第12列は、ブランク対照として、血漿を含まないビヒクルバッファーで満たした。次に、これらのプレートを洗浄し、37℃で1時間、ホースラディッシュ・ペルオキシダーゼをコンジュゲートしたウサギ抗イヌIgG(Jackson InmunoResearch社製, Suffolk, UK)の、ビヒクルバッファーでの1:1000希釈液100μlでインキュベートし、3回洗浄し、ABTS用バッファー(Roche社製, Barcelona, Spain)中、0.0375%のABTS(Roche社製, Barcelona, Spain)でインキュベートした。自動プレートリーダー(Synergy 4, Biotek社製, Winooski, Vermont, USA)にて405nmで吸光度を読み取った。
イヌの血漿およびCSF中のAβ1−42およびAβ1−40のレベルは、Araclon Biotech社(Zaragoza, Spain)製のABテスト−40およびABテスト−42ELISAキットによる間接的サンドイッチELISAを用いて、製造者の説明書に従って測定した。
全試験期間を通じて動物は健康を維持し、活発であった。特に、ワクチンに対する反応の徴候は検出されなかった。
ワクチン製剤Bで処置したイヌはより効果的であり、それらの血漿抗Aβ40抗体力価に実質的な変化を示した。この群の総てのイヌの応答を、抗Aβ40抗体濃度およびEC50またはエンドポイント希釈率によって評価したところ、群間および群内の双方で量的な違いが見られたが、同じパターンをたどった(表6、パネルA−B)。B製剤で処置したイヌの一般的なパターンは、2回の免疫後(W5)の力価の実質的増加を特徴とし、これはW5からW9までわずかな変化があるだけで維持された(図5A)。よって、B群では、抗体力価は2回の免疫の後に実質的に増加したが、その後のワクチン注射の後には増加はなく、わずかに低下しさえし、具体的には、7回目の免疫(W13)の後には、力価はW5の値よりも低いレベルにやや低下した(表6および図5A)。
ワクチン製剤Bで処置したイヌは、それらの血漿Aβ(1−42)濃度に実質的な変化を示した。これらの変化は、2回の免疫の後であるW5において、Aβ(1−42)ペプチドが、検出不能となる点(<3.125pg/ml;表7A)まで実質的に低下することを特徴とするパターンをたどった。ペプチド濃度はW13まで検出不能のまま維持された。しかしながら、ワクチン製剤Aで処置したイヌは、それらの血漿Aβ(1−42)濃度の変化を示さなかった。Aβ1−40ペプチドの血漿濃度は、Aβ(1−42)とよく似た変化パターンをたどることが明らかであった(表7B)。
I.材料および方法
脳における免疫の効果を調べるため、以下の処方物を3回免疫させた後に動物を犠牲にするという急性試験を行った。
(1)AβX−42+BSA+Th2型アジュバント(Rehydragel)
(2)AβX−42+BSA+混合Th1/Th2型アジュバント(Abisco)
(3)対照:アルブミン+Th2型アジュバント
BSAにコンジュゲートしたAβX−42での免疫は、これらのペプチドの可溶性形態に対して強い効果をもたらし、対照群に比べて各処置群で50%を超える濃度の低下があった。不溶性形態の濃度に有意な低下はなかった(図6)。種々の脳切片に関しては、Aβ40およびAβ42ペプチドの可溶性形態に対しては、その低下は、若干の差はあるが、総ての領域で同等であった(図7)。
Claims (17)
- 薬剤に使用するための、Aβ(1−42)のC末端領域に由来する少なくとも1つの免疫原性ペプチドとアルブミンとを含んでなるコンジュゲート。
- 少なくとも1つの免疫原性ペプチドとアルブミンとがリンカー領域によって接続される場合、前記リンカー領域が、それに結合されている免疫原性ペプチドを1個だけ含む、請求項1に記載のコンジュゲート。
- 少なくとも1つの免疫原性ペプチドがシステインを含んでなるリンカー領域によってアルブミン分子に連結されている、請求項2に記載のコンジュゲート。
- システインが免疫原性ペプチドのN末端に位置する、請求項3に記載のコンジュゲート。
- Aβ(1−42)のC末端領域に由来するペプチドが、Aβ(35−42)(配列番号2)、Aβ(33−42)(配列番号3)、およびAβ(33−40)(配列番号4)のうち1以上からなる群から選択される、請求項1〜4のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
- アルブミンがウシ血清アルブミンである、請求項1〜5のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
- 薬剤に使用するための、請求項1〜6のいずれか一項に記載のコンジュゲートとアジュバントとを含んでなる組成物。
- アジュバントがTh1型アジュバント、Th2型アジュバントおよび混合型Th1/Th2型アジュバントからなる群から選択される、請求項7に記載の組成物。
- アミロイドタンパク質の沈着に関連した疾患の治療または予防に使用するための、Aβ(1−42)のC末端領域に由来する少なくとも1つの免疫原性ペプチドとアルブミンとを含んでなるコンジュゲート、またはAβ(1−42)のC末端領域に由来する少なくとも1つの免疫原性ペプチドとアルブミンとアジュバントとを含んでなる組成物。
- コンジュゲートまたは組成物が隔週で投与される、請求項9に記載のコンジュゲートまたは組成物。
- 少なくとも1つの免疫原性ペプチドとアルブミンとがリンカー領域によって接続される場合、前記リンカー領域が、それに結合されている免疫原性ペプチドを1個だけ含む、請求項10に記載のコンジュゲートまたは組成物。
- Aβ(1−42)のC末端領域に由来するペプチドが、Aβ(35−42)(配列番号2)、Aβ(33−42)(配列番号3)、およびAβ(33−40)(配列番号4)から選択される、請求項9〜11のいずれか一項に記載のコンジュゲートまたは組成物。
- アミロイドタンパク質の沈着に関連する疾患が、アルツハイマー病、クロイツフェルト−ヤコブ病、脳アミロイドアンギオパチーおよびプリオンタンパク質関連障害から選択される、請求項9〜12のいずれか一項に記載のコンジュゲートまたは組成物。
- アルブミンがウシ血清アルブミンである、請求項9〜13のいずれか一項に記載のコンジュゲートまたは組成物。
- アジュバントをさらに含んでなる、請求項9〜14のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
- アジュバントがTh1型アジュバント、Th2型アジュバントおよび混合型Th1/Th2型アジュバントからなる群から選択される、請求項15に記載のコンジュゲート。
- コンジュゲートまたは組成物が隔週で投与される、請求項9〜16のいずれか一項に記載のコンジュゲートまたは組成物。
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