JP2014522828A - Ｉｒｓ−１およびｖｅｇｆの阻害剤を含む組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、血管新生疾患を治療するためのＩＲＳ−１阻害剤およびＶＥＧＦ経路阻害剤を含む組成物またはキット部、およびそれらの使用法に関する。
【選択図】図

Description

本発明は、血管新生性の疾病、障害または状態の治療に関する。特に、本発明は、血管新生に関連する疾病、障害または状態を予防および／または治療するための、インスリン受容体基質−１（ＩＲＳ−１）の阻害剤およびＶＥＧＦ経路阻害剤を含むキット部および組成物に関する。

血管新生とは、新しい血管が内皮細胞によって形成されることによる基本的な過程である。この形成には、異なる３つの段階、内皮細胞の（ｉ）遊走、（ｉｉ）増殖および（ｉｉｉ）分化が含まれる。

血管新生は、再生、発達および創傷治癒のような多くの通常の生理現象において本質的なものである。このような通常の生物学的現象において、血管新生は厳しい制御下にあり、すなわち、血管新生は短期間（数日）の間に誘発され、次いで完全に阻害される。血管新生が通常の生理的過程であるにもかかわらず、病的な血管新生は、新生血管による組織および器官の浸潤に関連する多くの疾病において危険な状態である。例えば、浸潤性新生血管は、軟骨に関節炎の原因となるダメージを与える。さらに、約２０の異なる眼の疾病は、糖尿病性網膜症のように無秩序な血管新生によるものである。実際に、眼器官の血管新生は失明の主な原因である。癌腫学の分野において、腫瘍の増殖および転移は血管新生に直接関連していて、したがって血管新生に依存している。腫瘍は、（ｉ）その増殖に必要な栄養と酸素の供給を可能にし、かつ（２）血液循環を介して転移細胞の播殖を促進する腫瘍のための退避経路である新生血管の増殖を刺激する。

血管新生調節に関係するタンパク質の例は、細胞質ドッキングタンパク質であるインスリン受容体基質−１（ＩＲＳ−１）であり、これは、インスリン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、プロラクチン、成長ホルモン（ＧＨ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）受容体、インテグリン受容体系の構成要素およびサイトカイン受容体を含む活性化された細胞表面受容体の本質的シグナル伝達中間体下流（ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ）として機能する。

したがって、ＩＲＳ−１発現の阻害は、血管新生性の疾病を治療するための有望な方法である。例えば、ＧＳ−１０１（ＷＨＯ ＩＮＮ Ａｇａｎｉｒｓｅｎ）、インスリン受容体基質−１（ＩＲＳ−１）アンチセンスオリゴヌクレオチドが、血管新生を阻害するためにおよび血管新生に関連する眼の疾病を治療するために有効なものとして欧州特許ＥＰ１４０９６７２に記載された。特に、ＧＳ−１０１は、損傷関連角膜血管新生を予防すること（Ａｌ−Ｍａｈｍｏｏｄ等、２００９、Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ３２９：４９６〜５０４）および患者の増殖性角膜血管新生を退行させること（Ｃｕｒｓｅｉｆｅｎ等 ，２００９，Ｏｐｈｔａｌｍｏｌｏｇｙ１１６：１６３０〜１６３７）が示された。

亜型Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）の血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）は、血管新生の第１の刺激剤である。ＶＥＧＦ−Ａは、いくつかのイソ型で存在する多機能サイトカインである。それらのうちの２つが選択され（イソ型１２１および１６５）、これらは偏性二量体（ｏｂｌｉｇａｔｅ ｄｉｍｅｒｓ）に相応する。ＶＥＧＦ二量体は、内皮細胞上に選択的に発現される受容体ＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２に高い親和性を有して結合する。

ＥＰ１１７９５４１および２００７／１４０９２４のような特許明細書は、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦＲ阻害剤が血管新生性疾病を治療するために使用されうることを記載している。たとえば、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）は、癌治療に関してＦＤＡによって承認された。

本発明者らは、血管新生過程におけるＩＲＳ−１の阻害とＶＥＧＦ経路の阻害との間の意外な相乗作用を発見した。

したがって、本発明は、血管新生性の疾病、障害または状態およびさらに特には網膜障害のような眼の血管新生性疾病の治療のための改善された方法に関し、上記方法は、ＩＲＳ−１阻害剤とＶＥＧＦ経路阻害剤との投与を含む。

したがって、本発明は、ＩＲＳ−１阻害剤、好ましくはＩＲＳ−１発現阻害剤およびＶＥＧＦ経路阻害剤を含む組成物に関する。

本発明は、さらにＩＲＳ−１阻害剤およびＶＥＧＦ経路阻害剤を含むキット部に関する。上記キット部は、２つの部分を含み、上記第１の部分はＩＲＳ−１阻害剤を含み、上記第２の部分はＶＥＧＦ経路阻害剤を含む。

一実施形態において、ＩＲＳ−１阻害剤は、ＩＲＳ−１の発現阻害剤である。有利には、上記ＩＲＳ−１阻害剤は、ＩＲＳ−１アンチセンスオリゴヌクレオチドである。

一実施形態において、ＩＲＳ−１アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１の少なくとも１２のヌクレオチド配列である。

一実施形態において、ＩＲＳ−１アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号２を有するか、または配列番号２と比較して少なくとも７５％の同一性を有し、かつ配列番号２として病的な血管新生を阻害する能力を保存する９〜５０のヌクレオチドを含むいずれかの機能保存的配列を有する。

一実施形態において、上記の機能保存的配列は、配列番号３〜配列番号２１を含む群から選択される。

一実施形態において、本発明の組成物またはキット部に含まれるＶＥＧＦ経路阻害剤は、ＶＥＧＦ−Ａの阻害剤である。

一実施形態において、ＶＥＧＦ経路阻害剤は、ＶＥＧＦを導く抗体、好ましくはＶＥＧＦ−Ａを導く抗体である。

一実施形態において、ＶＥＧＦ経路阻害剤は、ＶＥＧＦ受容体のアンタゴニスト、好ましくはＶＥＧＦ−Ａ受容体 ＶＥＧＦＲ１またはＶＥＧＦＲ２のアンタゴニスト、好ましくはＶＥＧＦＲ２のアンタゴニストである。

一実施形態において、ＶＥＧＦ経路阻害剤は、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦ−Ｒ）を導く抗体、好ましくはＶＥＧＦ−Ａ受容体 ＶＥＧＦＲ１またはＶＥＧＦＲ２を導く抗体、さらに好ましくはＶＥＧＦＲ２を導く抗体である。

さらに本発明は、本発明の組成物またはキット部および薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物に関する。

さらに本発明は、本発明の組成物またはキット部を含む薬物に関する。

一実施形態において、本発明の組成物、キット部、医薬組成物または薬物は、血管新生性疾病の治療用である。

一実施形態において、血管新生性疾病は眼性血管新生性疾病である。

一実施形態において、血管新生性疾病は癌である。

図１は、ビヒクル、ＧＳ−１０１、抗ＶＥＧＦ抗体（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、またはＧＳ−１０１および抗ＶＥＧＦ抗体の組み合わせで処置したラットの血管新生を示すヒストグラムである。エラーバーは平均値の標準誤差である。 図２は、ＧＳ−１０１により、腫瘍細胞中のＩＲＳ−１およびＶＥＧＦ発現の濃度依存的阻害を示すグラフの組み合わせである。Ｈ４６０腫瘍細胞からのタンパク質抽出物当量を、ＥＬＩＳＡサンドイッチアッセイによるＩＲＳ−１タンパク質（Ａ）、ＱＰＣＲによるＶＥＧＦＡ発現（Ｂ）、およびＥＬＩＳＡサンドイッチアッセイによるＨ４６０腫瘍の培養液中のＶＥＧＦＡタンパク質（Ｃ）を定量化するために使用する。データを、平均値±ＳＤおよび記録値ＶＳビヒクル（０．９％ ＮａＣｌ）を表示した。対照実験として、ＳＯ（２０μＭ）を使用した。＊：Ｐ＜０．０５ＶＳ対照（ビヒクル−処置群、０．９％ＮａＣｌ） 図３は、ウエスタンブロットにより測定したｐ−Ｅｒｋ１／２（Ａ）およびｐ−Ａｋｔ（Ｂ）発現に関するＧＳ−１０１（０−１０μＭ）に４時間曝露した効果を示す、グラフおよび写真の組み合わせである。相当するタンパク質負荷を、ＧＡＰＤＨ医務のブロッティングにより収集した。陰性対照として、ＳＯを使用した（１０μｌ）。４つの独立した実験の代表的な画像を表した。＊：Ｐ＜０．０５ＶＳ対照（ビヒクル−処置群、０．９％ＮａＣｌ） 図４は、ＧＳ−１０１による腫瘍誘導血管新生のｉｎ ｖｉｖｏの阻害を示すグラフおよび写真の組み合わせである。Ａ）Ｈ４６０担腫瘍ヌードマウス中に４０モルの単一腹腔内（ｉｐ）注射の後のＧＳ−１０１の血漿濃度。データを、データを平均値±ＳＤ（ｎ＝３）として表し、ＧＳ−１０１ｍｇの血漿をμｇとして記録した。Ｂ）腫瘍の豊富なマトリゲルプラグ中のヘモグロビンの定量によりモニタリングしたｉｎ ｖｉｖｏの腫瘍誘導血管新生上のＧＳ−１０１の効果。結果を、平均値±ＳＥＭとして表した。＊：Ｐ＜０．０１ＶＳ対照（ビヒクル−処置群、０．９％ＮａＣｌ） 図５は、ＧＳ−１０１が、ｉｎ ｖｉｖｏの腫瘍増殖および腫瘍由来のヒトＶＥＧＦＡ（ｈ−ＶＥＧＦＡ）産生を阻害するが、生理学的マウスＥＧＦＡ（ｍ−ＶＥＧＦＡ）を阻害しないことを示すグラフの組み合わせである。Ａ）１２．８ｍｇ／ｋｇの一日量で、ビヒクルまたはＧＳ−１０１で処置したＨ４６０腫瘍を帯びるマウスのＭＴＶの進化の曲線。データを平均値±ＳＥＭで表した。（ｎ＝７）＊：Ｐ＜０．０５ＶＳ対照（ビヒクル−処置群、０．９％ＮａＣｌ）Ｂ）ビヒクルまたはＧＳ−１０１で処置の終わりに、腫瘍阻害中のｍ−およびｈ−ＶＥＦＧＡ ｍＲＮＡレベルのＱＰＣＲ測定。データを、平均値±ＳＥＭで表した。（ｎ＝７）＊：Ｐ＜０．０１ＶＳ対照（ビヒクル−処置群、０．９％ＮａＣｌ）Ｃ）ビヒクルまたはＧＳ−１０１で処置した後、ｍ−およびｈ−ＶＥＦＧＡタンパク質を計算するＥＬＩＳＡの決定。データを、データを、平均値±ＳＥＭで表した。（ｎ＝７）＊：Ｐ＜０．０１ＶＳ対照（ビヒクル−処置群、０．９％ＮａＣｌ）

定義
発明において、次の用語は次の意味を表す。

−「薬学的に許容可能な賦形剤」:動物、好ましくは人に投与した場合に副作用、アレルギー反応または他の有害反応を引き起こさない賦形剤。これは、いずれかのおよびすべての溶剤、分散剤、コーティング剤、抗生剤および抗菌剤、等張および吸収遅延剤等を含む。人への投与の場合、製剤はＢｉｏｌｏｇｉｃｓ ｓｔａｎｄａｅｄｓのＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅにより要求されるような滅菌、発熱性（ｐｙｒｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）、一般的安全性および純度標準に見合うものでなくてはならない。

−「眼内投与」:眼の内部への製品の直接注射。その際、眼の内部とは、眼球内に位置するいずれかの範囲を意味し、これに限定されるものではないが、一般的に眼球内に見られるいずれかの機能的（たとえば視覚のための）または構造的組織、または眼球の内部を部分的にまたは完全に覆う組織または細胞層を含む。このような範囲の特異な例は、前眼房、後眼房、硝子体腔、脈絡膜、斑および網膜、および後部眼領域または部位を血管化または神経支配する血管および神経を含む。好ましい実施形態によれば、眼の内部とは、後眼房、硝子体腔、脈絡膜、斑および網膜、および後部眼領域または部位を血管化または神経支配する血管および神経を含む眼の後区を意味する。この好ましい実施形態によれば、眼内投与は、眼の後区内、好ましくは硝子体内への投与に関して言及し、かつ眼内投与は、さらに好ましくは硝子体内注射である。

−「局所投与」：供給を特徴づけ、局部的な効果のために関心部位（たとえば眼）に組成物を直接投与または適用すること。好ましくは、局所投与は、（全身効果を避けるために）対象の血流中への組成物の成分の著しい吸収なしに達成される。

−「抗体」（免疫グロブリン、略してＩｇとしても知られている）：脊椎動物の血液または他の体液中に見られ、細菌やウイルスのような異物を同定および中和するために免疫系によって使用されるガンマグロブリンタンパク質。抗体は、Ｙ形に配列される重鎖および軽鎖と呼ばれる一対のポリペプチド鎖からなる。Ｙの２つの先端は、抗体に結合し、それを不活性化する領域である。ここで使用される「抗体」（Ａｂ）という用語は、単クローン抗体、多クローン性抗体、マルチ特異性抗体（たとえば二重特異性抗体）および所望の生物活性を示すぐらい長い抗体フラグメントを含む。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、ここでは「抗体」に変更可能に使用される。

−ここで使用されるように、抗体という用語は「抗体フラグメント」も言及しえ、この際、抗体フラグメントは無傷抗体の部分、好ましくは無傷抗体の、抗原を結合するかまたは可変の領域を含む。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ´、Ｆ（ａｂ´）２およびＦｖフラグメント；ダイアボディ；直鎖抗体（米国特許Ｎｏ．５６４１８７０；Ｚａｐａｔａ等、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）１０５７〜１０６２[１９９５]参照）；単鎖抗体分子；および抗体フラグメントから形成されたマルチ特異性抗体を含む。抗体の「機能的フラグメントまたは類似体」という語は、全長の抗体と同様の質的生物活性を有する複合語である。たとえば、抗ＩｇＥ抗体の機能的フラグメントまたは類似体は、このような分子の能力が高い親和性の受容体、Ｆｃ[イプシロン]ＲＩに結合する能力を有することを妨げるかまたはかなり減らすようにして、ＩｇＥ免疫グロブリンに結合することができるものである。抗体のパパイン分解は、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメント、および容易に結晶化する能力を反映する表示である残存「Ｆｃ」」フラグメントを生じる。Ｆａｂフラグメントは、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）および１つの重鎖の第一の定常ドメイン（ＣＨ１）に沿った完全なＬ鎖からなる。それぞれのＦａｂフラグメントは、抗原結合に関して１価である。すなわち、シングル（ｓｉｎｇｌｅ）抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、シングルラージＦ（ａｂ´）２フラグメントをもたらし、これは二価の抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合Ｆａｂフラグメントにほぼ相応し、かつなおも交差結合抗体の能力を有する。Ｆａｂ´フラグメントは、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端において付加的な残基をほとんど有さない点が、Ｆａｂフラグメントとは異なる。Ｆａｂ´−ＳＨは、ここでは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を持つＦａｂ´のための表示である。Ｆ（ａｂ´）２抗体フラグメントは、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ´フラグメントの対として初めから製造されたものである。抗体フラグメントの他の化学的結合も公知である。

−「キメラ抗体」：異なる由来から誘導され、通常の技術によって化学的に一緒に結合されるか（たとえば合成物）、または遺伝子工学の手法を使って連続（ｃｏｎｔｉｇｕｏｕｓ）ポリペプチドとして調整された（たとえばキメラ抗体のタンパク質部分をコード化するＤＮＡは連続ポリペプチド鎖を生じるように発現されうる）部分を含む抗体。

−「ヒト化抗体」：少なくとも一部分がヒト由来である、異なる由来の抗体の部分を含む抗体。同様に、「霊長類化抗体」は、少なくとも一部分が霊長類由来である、異なる由来の抗体の部分を含む抗体である。

「治療」：器官、組織または細胞機能における欠乏または器官、組織または細胞機能の不在と関連した疾病、障害または状態のうちの少なくとも１つの悪影響または症状を予防（たとえば発症しないように防ぐこと）、減少または緩和すること。

−「治療的に効果的な量」：（ｉ）疾病または状態の１つ以上の症状の進行、悪化または劣化を遅延または停止させる、（ｉｉ）疾病または状態の症状を緩和する、または（ｉｉｉ）疾病または状態を治癒または治療するために必要なおよび充分な治療薬の量。

本発明は、ＩＲＳ−１阻害剤およびＶＥＧＦ経路阻害剤を含む組成物に関する。

本発明は、治療有効量のＩＲＳ−１阻害剤および治療上有効量のＶＥＧＦ経路阻害剤を含む組成物に関する。

さらなる実施形態によれば、本発明の組成物は、ＩＲＳ−１阻害剤およびＶＥＧＦ経路阻害剤を含む。

また、本発明は、本発明の組成物を含み、好ましくは２つの部分を含むキット部に関する。一実施形態によれば、本キットの第１の部分はＩＲＳ−１阻害剤を含み、第２の部分はＶＥＧＦ経路阻害剤を含む。

また、本発明は、上述の組成物またはキット部、および薬学的に許容可能な賦形剤を含む薬学的組成物に関する。

また、本発明は、本発明の組成物またはキット部を含む薬物に関する。

本発明の一実施形態において、このＩＲＳ−１阻害剤は、国際公開第２００８／１０８９８６号に記載したＩＲＳ−１のリン酸化を低減させることのできるＩＲＳ−１シグナリング阻害剤ではない。

一実施形態によれば、ＩＲＳ−１阻害剤は、ＩＲＳ−１発現阻害剤である。ＩＲＳ−１発現阻害剤の例は、限定するものではないが、ＩＲＳ−１のｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、またはアプタマーを含む。

別の実施形態によれば、ＩＲＳ−１阻害剤は、ＩＲＳ−１活性の阻害剤である。ＩＲＳ−１活性の阻害剤の例は、限定するものではないが、ヨーロッパ特許第１０１０４３３号に記載の基質を含む。

一実施形態によれば、このＩＲＳ−１阻害剤は、（ＩＲＳ−１）アンチセンスオリゴヌクレオチドである。

一実施形態によれば、ＩＲＳ−１アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１
５’−ＴＡＧＴＡＣＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＣＣＧＧＧＣＣＣＣＣＡＧＣＣＴＣＧＣＴＧＧＣＣＧＣＧＣＧＣＡＧＴＡＣＧＡＡＧＡＡＧＣＧＴＴＴＧＴＧＣＡＴＧＣＴＣＴＴＧＧＧＴＴＴＧＣＧＣＡＧＧＴＡＧＣＣＣＡＣＣＴＴＧＣＧＣＡＣＧＴＣＣＧＡＧＡＡＧＣＣＡＴＣＧＣＴＣＴＣＣＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＣＧ−３’
の内の少なくとも１２のヌクレオチド配列である。一実施形態において、ＩＲＳ−１アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１の少なくとも１２の近接したヌクレオチド配列、好ましくは、配列番号１の少なくとも、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０の近接したヌクレオチド配列である。

一実施形態によれば、ＩＲＳ−１アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＧＳ−１０１である。本発明によると、ＧＳ−１０１は、配列番号２
５’−ＴＣＴＣＣＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＴ−３’
の配列または配列番号２と比較して、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の同一性、または９５％、９６％、９７％、９８％、９９％超の同一性を有し、かつ配列番号２として病理的血管新生を阻害する能力を保存する、９〜５０、１５〜４５、２０〜４０、２５〜３０のヌクレオチドを含むいずれかの機能保存的配列である。

「同一である」または「同一の」との文言は、２つ以上のヌクレオチド配列間の関係で使用される際に、２つ以上の塩基鎖間の一致数により決定されるヌクレオチド配列間の配列の関連性の度合いを意味する。「同一性」は、（存在する場合）特定の数学的モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）により対応したギャップアライメントを備えたより小さな２つ以上の配列間で同一して一致するパーセントを測定する。関連するヌクレオチド配列の同一性を、知られている方法により容易に計算することができる。このような方法は、限定するものではないが、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｌｅｓｋ， Ａ． Ｍ．， ｅｄ．， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８８； Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ： Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ， Ｓｍｉｔｈ， Ｄ． Ｗ．， ｅｄ．， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９３； Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ， Ｐａｒｔ １， Ｇｒｉｆｆｉｎ， Ａ． Ｍ．， ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ， Ｈ． Ｇ．， ｅｄｓ．， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ， １９９４； Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ， Ｇ．， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， １９８７； Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ， Ｇｒｉｂｓｋｏｖ， Ｍ． ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ， Ｊ．， ｅｄｓ．， Ｍ． Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９１； ａｎｄ Ｃａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．， ＳＩＡＭ Ｊ． Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ． ４８， １０７３ （１９８８）に記載されている。同一性を決定する好ましい方法は、試験した配列間と最も大きな一致を得るように設計される。同一性を決定する方法は、公共の利用可能なコンピュータプログラムに記載される。２つの配列間の同一性を決定する好ましいコンピュータプログラム方法は、ＧＣＣプログラムパッケージ、ＧＡＰ （Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄ． Ｒｅｓ． ２， ３８７ （１９８４）； Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ， Ｍａｄｉｓｏｎ， Ｗｉｓ．）， ＢＬＡＳＴＰ， ＢＬＡＳＴＮ， ａｎｄ ＦＡＳＴＡ （Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． ＭｏＩ． Ｂｉｏｌ． ２１５， ４０３−４１０ （１９９０））を含む。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、国立生物工学情報センター（ＮＸＢＩ）および他のソース（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ， Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ． ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ． ２０８９４； Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， ｓｕｐｒａ）から公共で利用可能である。同一性を決定するために、既知のＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを使用してもよい。

機能保存的配列番号２の例は、
配列番号３（５’−ＴＡＴＣＣＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＴ−３’）
である。機能保存的配列番号２の例として、以下の、
５’−ＴＣＴＣＣＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣ−３’（配列番号４）
５’−ＴＣＴＣＣＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧ−３’（配列番号５）
５’−ＴＣＴＣＣＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴ−３’（配列番号６）
５’−ＴＣＴＣＣＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣ−３’（配列番号７）
５’−ＴＣＴＣＣＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧ−３’（配列番号８）
５’−ＴＣＴＣＣＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴ−３’（配列番号９）
５’−ＣＴＣＣＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号１０）
５’−ＴＣＣＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号１１）
５’−ＣＣＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号１２）
５’−ＣＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号１３）
５’−ＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号１４）
５’−ＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号１５）
５’−ＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号１６）
５’−ＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号１７）
５’−ＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号１８）
５’−ＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号１９）
５’−ＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号２０）
５’−ＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＴ−３’（配列番号２１）
がある。

一実施形態によれば、この機能保存型配列の２５、３０、３５、４０、４５、または５０のヌクレオチドは、はＣ末端およびＮ末端の他の核酸間の配列番号２または配列番号３を含む配列であってもよい。また、この機能保存型配列は、配列番号２または配列番号３の９〜１２の近接したヌクレオチドフラグメントであってもよい。

一実施形態によれば、上述の通りＩＲＳ−１阻害剤は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．０５ｍｇ／ｍｌ〜８０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは０．１〜５０ｍｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは、約０．５ｍｇ／ｍｌの濃度で本発明の組成物中に存在する。

一実施形態によれば、ＶＥＧＦ経路は、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体、またはそのフラグメント、ＶＥＧＦ受容体の活性を阻害する可溶性のペプチド、たとえば、ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達に関連するキナーゼおよび／またはシグナリング経路の小分子阻害剤などの小分子阻害剤、ならびに／またはｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイムなどのＶＥＧＦもしくはＶＥＧＦ受容体発現阻害剤を対象とする抗体であってもよい。

一実施形態によれば、ＶＥＧＦ経路阻害剤は、天然の受容体内のＶＥＧＦ相互作用を阻害するＶＥＧＦを対象とする抗体である。一実施形態によれば、抗ＶＥＧＦ抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローなる抗体、キメラ抗体、完全にヒトの抗体（ｆｕｌｌｙ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、「霊長類化抗体」、ヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントである。

抗ＶＥＧＦ抗体の例は、限定するものではないが、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、Ｇ６−３１、Ｂ２０−４．１、Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ、ＫＨ９０２ ＶＥＧＦ受容体‐Ｆｃ融合タンパク質、ｓＦＬＴ１０１、ｓＦＬＴ１０２、４Ａ５抗体、４Ｅ１０抗体、５Ｆ１２抗体、ＶＡ０１抗体、ＢＬ２抗体、Ｇ６−３１抗体、およびそのフラグメントを含む。

一実施形態によれば、ＶＥＧＦ経路阻害剤は、その天然の受容体とのＶＥＧＦ相互作用を阻害する可溶なＶＥＧＦ受容体である。ヒトの可溶なＶＥＧＦＲ２組み換えタンパク質が近年記載された。これらの可溶な受容体タンパク質は、７つの細胞外ＩｇＧのような繰り返しのみを含み、リガンド結合に必要なすべての情報を含む。本発明の一実施形態によれば、ＶＥＧＦ経路阻害剤は、可溶なＶＥＧＦＲ２受容体である。

一実施形態によれば、ＶＥＧＦ経路阻害剤は、ＶＥＧＦに対するｓｉＲＮＡなどのＶＥＧＦ発現阻害剤である。ＶＥＧＦに対するｓｉＲＮＡの例は、限定するものではないが、ｂｅｖａｓｉｒａｎｉｂを含む。

一実施形態によれば、ＶＥＧＦ経路阻害剤は、ＶＥＧＦ−Ｒのアンタゴニストである。ＶＥＧＦ受容体のアンタゴニストの例は、限定するものではないが、ＰＬＧ１０１、ガングリオシドＧＭ３およびペプチドＢ３を含む。

本発明の実施形態によれば、ＶＥＧＦ経路阻害剤は、ＶＥＧＦ受容体を対象とする抗体である。一実施形態によれば、ＶＥＧＦ受容体に対するこの抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、霊長類化抗体、ヒト化抗体、および／またはその抗原結合性フラグメントである。一実施形態によれば、ＶＥＧＦ受容体に対するこの抗体は、３Ｅ７、ＤＣ１０１抗体、Ｍａｂ２５抗体、Ｍａｂ７３抗体、ＧＶ３９Ｍ、２Ｃ３、１１Ｂ５、および７Ｇ３群、ならびにその抗原結合性フラグメントの抗体を含む群から選択される。

一実施形態によれば、ＶＥＧＦ経路阻害剤は、ＶＥＧＦ−Ｒに対するｓｉＲＮＡなどのＶＥＧＦ受容体発現の阻害剤である。ＶＥＧＦ−Ｒに対するｓｉＲＮＡの例は、限定するものではないがｓｉＲＮＡ−０２７である。

一実施形態によれば、ＶＥＧＦ経路阻害剤は、ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達に関連するキナーゼおよび／またはシグナリング経路の阻害剤である。このような阻害剤は、限定するものではないが、デクルシン、デクルシノール、ピクロポドフィリン、グッグルステロン、エイコサノイド、ＬＸＡ４、ＰＴＫ７８７、パゾパニブ、アキシチニブ、ＣＤＤＯ−Ｍｅ、ＣＤＤＯ−Ｉｍｍ、ＴＧ１００８０１、ソラフェニブおよびその薬学的に許容可能な塩を含む。

一実施形態によれば、ＶＥＧＦ経路阻害剤は、ＶＥＧＦ−Ａ経路の阻害剤である。ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ−Ａ〜Ｅ及びＰＩＧＦ（胎盤増殖因子）１，２の７種類のサブタイプを示す糖タンパク質である。ＶＥＧＦ−Ａは、ＶＥＧＦのうち、血管新生に関与する唯一の形態である。

さらなる実施形態によれば、ＶＥＧＦ−Ａ経路阻害剤は、ＶＥＧＦ−Ａ受容体の阻害剤である。

好ましくは、ＶＥＧＦ−Ａ経路阻害剤は、ＶＥＧＦＲ１またはＶＥＧＦＲ２の阻害剤であり、両受容体は選択的に内皮細胞上で発現し、血管新生に関与していることが知られている。ＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２は、ＶＥＧＦ−Ａアイソマー１２１および１６５により形成されるＶＥＧＦダイマーに結合する。（ＦＬＴ−１遺伝子によりコードされた）ＶＥＧＦＲ１および（ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１遺伝子によりコードされた）ＶＥＧＦＲ２は、７つの細胞外のＩｇＧの繰り返し、１回細胞膜貫通ドメイン、および細胞内分割チロシンキナーゼドメインにより特徴付けられる受容体型チロシンキナーゼＩＩＩ（ＲＴＫ ＩＩＩ）ファミリーのメンバーである。

本発明の実施形態において、ＶＥＧＦ経路阻害剤は、ＶＥＧＦＲ２受容体の阻害剤である。好ましくは、ＶＥＧＦＲ２受容体の阻害剤は、ＶＥＧＦＲ１受容体を阻害するものではない。

本発明の好ましい実施形態によれば、ＶＥＧＦ経路阻害剤は、ＶＥＧＦＲ２受容体に対する抗体である。ＶＥＧＦＲ２受容体に対する抗体およびそれを同定する方法は、ヨーロッパ特許第１ １７９ ５４１号および国際公開第２０１１／００５３７７号に記載されており、参照として本明細書に遠洋される。一実施形態によれば、ＶＥＧＦＲ２受容体に対する抗体は、モノクローナル抗体２Ｃ３ （ＡＴＣＣ ＰＴＡ １５９５）、モノクローナル抗体ＤＣ１０１、またはその抗原結合性フラグメントである。

一実施形態によれば、ＶＥＧＦＲ２受容体に対する抗体またはこの抗原結合性フラグメントは、非抱合型またはむきだしの抗体であり、このことは、別の薬剤、特に治療薬または診断薬に付着していないことを意味する。この定義は、抗体の生物学的半減期、親和性、結合活性、もしくは他の特性、または他のエフェクターと抗体の組み合わせなどの、後退の修飾を排除するものではない。

別の実施形態によれば、ＶＥＧＦＲ２受容体またはその抗原結合性フラグメントに対する抗体が、治療薬に動作可能に付着し、ＶＥＧＦＲ２受容体に対する抗体、またはその抗原結合性フラグメント、および治療薬が、免疫複合体を形成する。

一実施形態によれば、ＶＥＧＦＲ２受容体に対する抗体に付着した治療薬は、抗血管新生薬である。抗血管新生薬の例は、限定するものではないが、アンジオスタチン、エンドスタチン、ヴァスクロスタチン（ｖａｓｃｕｌｏｓｔａｔｉｎ）、カンスタチン（ｃａｎｓｔａｔｉｎ）、およびマスピンのいずれかを含む。

一実施形態によれば、ＶＥＧＦＲ２受容体に対する抗体に付着した治療薬は、内皮細胞を死滅、また増殖もしくは細胞分裂を抑制する特性を有する細胞傷害剤、細胞増殖阻害剤、または他の抗細胞剤である。適切な抗細胞剤は、化学療法剤、細胞毒性剤、および細胞増殖阻害剤を含む。細胞増殖阻害剤は、一般的に、標的細胞の天然の細胞周期を妨害し、好ましくは、この細胞周期を無力化するように妨害する。化学療法剤を一部の例は、限定するものではないが、ステロイド、サイトカイン、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、メトトレキサート、もしくはアミノプテリンなどの代謝拮抗薬、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ビンカアルカロイド、抗菌剤、デメコルチン、エトポシド、ミトラマイシン、およびクロラムブシルまたはメルファランなどの抗腫瘍アルキル化剤を含む。特定の好ましい抗細胞剤は、ダウノルビシン、ドキソルビシン、アドリアマイシンなどのＤＮＡ合成阻害剤である。

一実施形態によれば、ＶＥＧＦＲ２受容体に対する抗体に付着した治療薬は、細胞殺傷効果を送達する毒素部分である。毒素部分の例は、限定する物ではないが、植物、真菌、または細菌由来の毒素である。毒素の例は、エピポドフィロトキシン、菌体内毒素、もしくは菌体内毒素のリピドＡサポリンもしくはゲロニンなどのリボソーム不活性化タンパク質、α−サルシン、アスペルギリン（ａｓｐｅｒｇｉｌｌｉｎ）、レストリクトシン、胎盤のリボヌクレアーゼなどのリボヌクレアーゼ、ジフテリア毒素、および緑膿菌外毒素である。好ましくは、毒素部分はリシンＡ鎖であり、脱グリコシル化リシンＡ、組み換え型および／または切断型リシン鎖も同様に使用してもよい。

一実施形態によれば、ＶＥＧＦＲ２受容体に対する抗体に付着した治療薬は、抗チューブリン薬剤である。「抗チューブリン薬剤」は、細胞の有糸分裂を阻害し、好ましくは、細胞の有糸分裂、好ましくはチューブリン重合もしくは脱重合に必要なチューブリン活性を直接もしくは間接的に阻害することにより、阻害するいずれかの薬剤、薬物、プロドラッグ、またはそれらの組み合わせを意味する。抗チューブリン薬剤の例は、限定するものではないが、コルヒチン、タキソールなどのタキサン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｃｉｎｅ）などのビンカアルカロイド、ならびにコンブレタスタチンＡ、Ｂ、および／またはＤなどのコンブレタスタチンを含む。

一実施形態によれば、ＶＥＧＦＲ２受容体に対する抗体に付着した治療薬は、凝固を促進することができる成分であり、すなわち凝固剤または凝固因子である。好ましい凝固因子は、切断型ＴＦ（ｔＴＦ）、二量体、三量体、重合体／多量体ＴＦ、および因子ＶＩＩを活性化する特性が欠損した変異型ＴＦなどの組織因子（ＴＦ）およびＴＦ誘導体である。他の適切な凝固因子は、因子ＩＩ／ＩＩａ、因子ＶＩＩ／ＶＩＩａ、因子ＩＸ／ＩＸａ、および因子Ｘ／ＸａなどのビタミンＫ依存性凝固剤、Ｇｌａ修飾のないビタミンＫ依存性凝固因子、ラッセルクサリヘビ毒因子Ｘアクチベータ、トロンボキサンＡ２およびトロンボキサンＡ２シンターゼなどの血小板活性化合物、ならびにα２抗プラスミンなどの線維素溶解阻害剤を含む。

一実施形態によれば、上述の通り、ＶＥＧＦ経路阻害剤は、約１μｇ／ｍｌ〜約１０００μｇ／ｍｌ、好ましくは５μｇ／ｍｌ〜５００μｇ／ｍｌ、より好ましくは１０〜１００μｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは約５０μｇ／ｍｌの濃度で本発明の組成物中に存在する。

一実施形態によれば、本発明の組成物は無菌性である。有利な点として、本発明の組成物は、微生物の増殖を予防するために、保存剤を含む。微生物作用の予防は、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールといった多様な抗菌剤および抗真菌剤によりもたらされてもよい。

本発明の組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物を、複数の経路の投与により投与してもよい。適合する投与経路の例は、限定するものではないが、皮下、筋肉内、静脈内、眼球内、経皮的、局所的、経鼻および経口投与、または注射を含む。投与形態の種類は、治療される疾患または障害に対応するものである。

好ましい実施形態によれば、投与経路は眼球投与である。第１の実施形態によれば、この投与経路は、点眼投与または本発明の組成部物またはキット部を含む点眼液中に目を浸すことによる局所的眼球投与である。第２の実施形態によれば、この投与経路は、硝子体内および／または前房内投与などの眼球内注射である。

一実施形態によれば、本発明の組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物は、注射に適合した形態、好ましくは、無菌性水溶液、分散剤、エマルジョン、懸濁液などの溶液を含む群から選択される形体であり、使用前に、液体として添加する際の溶液または懸濁液を調製する際に適した、粉末またはリポソーム形態といった固体の形態である。

一実施形態によれば、本発明の組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物は、経口投与に適合した形態である。第１の実施形態によれば、経口投与に適合した形態は、錠剤、ピル、カプセル、ソフトゼラチンカプセル、糖衣ピル、ＯＤ剤／ＯＤ錠（ｏｒｏｄｉｓｐｅｒｓｉｎｇ／ｏｒｏｄｉｓｐｅｒｓｉｎｇ ｔａｂｌｅｔｓ）、発泡剤、または他の固体を含む群から選択される固体形態である。第２の実施形態によれば、経口投与に適合した形態は、飲用可能な溶液、バッカルスプレー、リポソーム形態などの液体の形態である。

一実施形態によれば、本発明の組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物は、経鼻および呼吸経路を介した局所的送達に適合した形態である。経鼻投与に適した製剤の例は、限定するものではないが、経鼻溶液、スプレー、エアロゾル、および吸入剤を含む。

一実施形態によれば、本発明の組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物は、局所投与に適合した形態である。局所投与に適合した製剤の例は、限定するものではないが、軟膏、ペースト、点眼液、クリーム、経皮性パッチなどのパッチ、ゲル、リポソーム形態などを含む。

一実施形態によれば、本発明の組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物は、リポソームおよび／またはナノ粒子の形態である。

一実施形態によれば、本発明の組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物は、たとえば、界面活性剤（たとえば、ヒドロキシプロピルセルロース）、溶媒、または水、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングルコールなど）、それらの適切な混合物、ピーナッツ油およびゴマ油などの野菜油などを含む分散媒体などの適切なキャリアー、糖または塩化ナトリウムなどの等張剤、レシチンなどのコーティング剤、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの遅行吸収剤、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、クロロブタノール、チメロサールなどの保存剤、ホウ酸、炭酸水素ナトリウムおよび炭酸水素カリウム、ホウ酸ナトリウムおよびホウ酸カリウム、炭酸ナトリウムおよび炭酸カリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなどの緩衝液、デキストラン４０、デキストラン７０、ブドウ糖、グリセリン、嚥下カリウム、プロピレングリコール、塩化ナトリウムなどの等張化剤、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｔｈｉｏｓｕｌｆｉｔｅ）、チオ尿素などの抗酸化剤および安定剤、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロクサマー２８２およびチロキサポールなどの非イオン性湿潤剤または清澄剤、デキストラン４０、デキストラン７０、ゼラチン、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルプロピレンセルロース、ラノリン、メチルセルロース、ワセリン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースなどの粘性修正剤をさらに含む。

一実施形態によれば、上述の通り、本キット部の両方は、同一の投与経路により投与される。別の実施形態によれば、本キット部の第１の部分および第２の部分は、同一の投与経路により投与されない。

一実施形態によれば、本キット部の各部分は、局所投与、経鼻および呼吸経路を介した局所送達、経口投与、または注射に独立して適合する。

本発明の第１の実施形態によれば、本キット部の第１の部分および第２の部分は、対象に同時に投与される。本発明の第２の実施形態によれば、本キット部の第１の部分および第２の部分は、対象に順次投与される。

本発明の実施形態によれば、本発明の組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物の投与量は、０．１μｌ〜１ｍｌ、好ましくは０．５μｌ〜５００μＬの範囲である。

一実施形態によれば、本組成物は、シリンジ上に適合することのできるコンテナ内に封入される。一実施形態によれば、本キット部の各部分は、シリンジ上に適合することのできるコンテナ内に独立して封入される。

一実施形態によれば、本組成物または本キット部の各部部分は、単位剤形で存在する。この有利な点として、この単位剤形は、たとえば、本組成物または本キット部の各部分を配置し得るバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジ、または他のコンテナ手段といったコンテナ手段である。

また、本発明は、呪術の本組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物を含む装置に関する。一実施形態によれば、この装置は、注射用のシリンジである。

一実施形態によれば、本発明の組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物は、それを必要とする対象の血管新生疾患、障害または症状を治療する際の使用することを目的とする。

一実施形態によれば、本発明の組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物は、それを必要とする対象の血管新生疾患、障害または症状を治療するためのものである。

血管新生疾患、障害、または症状は、血管新生に関連するものであり、好ましくは、浸潤性であり、制御不能の血管新生に関連し、ならびに／または望ましいものではなく、不適切であり、異常性であり、過剰であり、かつ／または病的な血管新生（ｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）により特徴付けられる血管新生に関連した疾患、障害、または状態を意味する。

血管新生疾患、障害、または状態の例は、限定するものではないが、腫瘍血管新生、網膜症、関節リウマチ、クローン病、粥状動脈硬化、卵巣の過剰刺激、乾癬、血管新生（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）に関連する子宮内膜症、バルーン血管形成術による再狭窄、ケロイド形成による組織の過剰産生、末梢血管疾患、高血圧、血管炎症、レイノー病およびレイノー現象、動脈瘤、動脈再狭窄、血栓性静脈炎、リンパ管炎、リンパ浮腫、組織のケロイド形成および修復、虚血、狭心症、心筋梗塞、慢性心疾患、うっ血性心不全などの心不全、加齢黄斑変性、骨粗しょう症、血管新生化した腫瘍のいずれかの形態、加齢黄斑変性を含む黄斑変性症、関節リウマチを含む関節炎、粥状動脈硬化、動脈硬化巣、糖尿病性網膜症、および他の網膜症、グレーヴス病を含む甲状腺過形成、血管腫、血管新生緑内障、乾癬、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、静脈閉塞疾患、動脈閉塞疾患、血管形成後の再狭窄を含む血管性再狭窄、血管線維腫、皮膚炎、子宮内膜症、血友病関節（ｈｅｍｏｐｈｉｌｉｃ ｊｏｉｎｔ）、肥厚性瘢痕、炎症性疾患および障害、化膿性肉芽腫、強皮症、滑膜炎、トラコーマ、血管性接着、血管接合組織の異常増殖、酒さ性ざ瘡、後天性免疫不全症候群、動脈閉塞、アトピー性結膜炎、細菌性潰瘍、ベーチェット病、血液由来の腫瘍、頚動脈閉塞疾患、化学外傷、脈絡膜血管新生に関連する状態、脈絡膜血管症、慢性炎症、慢性網膜剥離、慢性ブドウ膜炎、慢性硝子体炎、コンタクトレンズの摩耗、角膜移植後拒絶反応、角膜血管新生、角膜移植血管新生、クローン病、イールズ病、流行性角結膜炎、真菌性潰瘍、単純性ヘルペス感染症、帯状疱疹感染症、過粘稠度症候群、カポジ肉腫、白血病、脂肪変性、ライム病、境界性角質溶解、モーレン潰瘍、ハンセン病以外のマイコバクテリア感染症、近視、眼精血管新生疾患、視窩、オースラー−ウェーバー症候群（オースラー−ウェーバー−ランデュ病）、変形性関節症、ページェット病、毛様体扁平部炎、類天疱瘡、フィレクテヌローシス（ｐｈｙｌｅｃｔｅｎｕｌｏｓｉｓ）、多発動脈炎、レーザー治療後の合併症（ ｐｏｓｔ−ｌａｓｅｒ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）、原虫感染症、弾性線維性仮性黄色腫、弾性線維性仮性黄色腫、放射状角膜切開、網膜血管新生、未熟児網膜症、後水晶体線維形成、サルコイド、強膜炎、鎌状赤血球貧血、シェーグレン症候群（Ｓｏｇｒｅｎｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、固形腫瘍、シュタルガルト病、スティーブンス・ジョンソン病、動脈性細動脈瘤、上方輪部角膜炎、梅毒症、全身性エリテマトーデス、テリエン周辺角膜変性症、トキソプラズマ症、外傷、ユーイング肉腫の腫瘍、神経芽細胞腫の腫瘍、骨肉腫の腫瘍、網膜芽細胞腫の腫瘍、横紋筋肉腫の腫瘍、潰瘍性大腸炎（ｕｌｃｅｒｉｔｉｖｅ ｃｏｌｉｔｉｓ）、静脈閉塞、ビタミンＡ欠乏症、Ｗｅｇｅｎｅｒｓサルコイドーシス、糖尿病に関連した望ましくない血管新生、寄生虫症、血管治癒の異常、熱傷、傷害、または外傷後の肥大、発毛の阻害、排卵および黄体形成の阻害、移植の阻害、および子宮内の胚発達の阻害、移植片拒絶反応、肺炎症、ネフローゼ症候群、子癇前症、心膜液貯留、心膜炎関連、胸水、脳腫瘍に関連した浮腫、悪性腫瘍に関連した腹水症、メイグス症候群、肺炎症、ネフローゼ症候群、心膜液貯留、胸水、血管新生化した固形腫瘍、転移性腫瘍もしくは原発腫瘍からの転移、胃腸管系、尿生殖器系、リンパ系、および肺性（小細胞および非小細胞）癌、および、結腸直腸癌などの神経冠細胞由来の癌、非小細胞肺がんおよび小細胞肺癌などの肺癌、メラノーマ、褐色細胞腫、神経芽細胞腫、膵臓癌、リンパ腫、特にバーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、および非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫、精巣癌、中皮腫、腎細胞癌、卵巣癌、ならびに前立腺癌を含む。

一実施形態によれば、本発明の組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物は、癌または腫瘍学的疾患を治療するために使用することを目的とする。癌または腫瘍学的疾患の例は、限定するものではないが、細胞腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、白血病、固形腫瘍、泌尿生殖器癌（前立腺癌、腎細胞癌、膀胱癌）、婦人科系の癌（卵巣癌、子宮頸癌、子宮内膜癌）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）などの肺癌、胃腸癌（非転移性もしくは転移性結腸直腸癌）、膵臓癌、胃癌、食道癌（ｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｃａｎｃｅｒｓ）、肝細胞癌、胆管細胞癌）、頭頸部癌（頭頸部扁平上皮癌）、悪性神経膠芽腫、悪性中皮腫、非転移性もしくは転移性乳癌（たとえば、ホルモン不応性転移性乳癌）、悪性メラノーマ、もしくは骨および軟部肉腫、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、および急性リンパ性白血病などの血液学的腫瘍を含む。このような癌のより特定の例は、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜もしくは子宮癌、唾液腺細胞腫、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、腎臓癌（ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、外陰癌、甲状腺癌、肝細胞癌、胃癌、メラノーマ、および多様な種類の頭頸部癌を含む。

一実施形態によれば、本発明の組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物は、眼性血管新生疾患の治療のために使用することを目的とする。

一実施形態によれば、この眼性血管新生疾患は、網膜、網膜周辺、脈絡叢の血管新生に関連する。このような血管新生疾患の例は、限定するものではないが、ブドウ膜炎、脈絡膜炎、脈絡叢の脈管障害、過敏性網膜症、脈絡網膜炎、脈絡網膜炎（ｃｈｏｒｉｏｒｅｔｉｎｉｔｉｓ）、網膜血管腫症、網膜変性症、黄斑変性症、ＡＭＤ、網膜剥離、網膜血管新生、増殖性硝子体網膜症、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、中心性漿液性網脈絡膜症、糖尿病性網膜症、後眼部外傷、網膜血管病態、網膜の毛細血管拡張症（ｒｅｔｉｎａｌ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔｅｓａ）、眼内炎、黄斑浮腫、放射線誘導網膜症（ｒａｄｉａｔｉｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、嚢胞様黄斑浮腫、糖尿病性網膜症、網膜の炎症性病態、鎌状赤血球貧血、鎌状赤血球網膜症、サルコイド、梅毒、弾性線維性仮性黄色腫、ページェット病、静脈閉塞、動脈閉塞、頸動脈閉塞疾患、慢性ブドウ膜炎／硝子体炎、マイコバクテリア感染症、ライム病、全身性エリテマトーデス、網膜を含む全身性の病態、イールズ病、ベーチェット病、網膜炎もしくは脈絡膜炎を引き起こす感染症、推定眼ヒストプラスマ症候群、ベスト病、近視、視窩、シュタルガルト病、毛様体扁平部炎、慢性網膜剥離、過粘稠度症候群、トキソプラズマ症、外傷、およびレーザー治療後の合併症（ｐｏｓｔ−ｌａｓｅｒ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）を含む。

一実施形態によれば、この眼性血管新生疾患は、角膜血管新生に関連する。このような血管新生疾患の例は、限定するものではないが、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、角膜移植後拒絶反応、血管新生緑内障、後水晶体線維形成、流行性角結膜炎、ビタミンＡ欠乏症、ンタクトレンズの摩耗、アトピー性結膜炎、上方輪部角膜炎、乾燥翼状片角膜炎、シェーグレン症候群、酒さ性ざ瘡、フィレクテヌローシス、梅毒、マイコバクテリア感染症、脂肪変性、化学的隆起（ｃｈｅｍｉｃａｌ ｂｕｍｓ）、細菌性潰瘍、、真菌性潰瘍、単純性ヘルペス感染症、帯状疱疹感染症、原虫感染症、カポジ肉腫、モーレン潰瘍、テリエン周辺角膜変性症、境界性角質溶解、外傷、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発動脈炎、Ｗｅｇｅｎｅｒｓサルコイドーシス、強膜炎、スティーブンス・ジョンソン病、ペリフィゴイド放射状角膜切開（ｐｅｒｉｐｈｉｇｏｉｄ ｒａｄｉａｌ ｋｅｒａｔｏｔｏｍｙ）、および角膜移植片拒絶反応（ｃｏｍｅａｌ ｇｒａｐｈ ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ）を含む。

一実施形態によれば、眼性血管新生疾患は、虹彩血管新生（隅角（ａｎｇｌｅ）の血管新生）に関連する疾患、および糖尿病に関連しようとなかろうと、増殖性硝子体網膜症の全ての形態を含む血管結合組織または線維組織の異常増殖に引き起こされる疾患を含む群から選択される。

一実施形態によれば、本発明の組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物は、眼科学的疾患を治療することを目的とする。代表的な眼化学的疾患を以下に列挙する。

一実施形態において、眼科学的疾患は、加齢黄斑変性である。加齢黄斑変性の例は、非新生血管性（「ドライ」としても知られている）および新生血管性（「ウェット」としても知られている）黄斑変性症を含む。一実施形態において、ドライ型加齢黄斑変性は、ドルーゼの形成に関連する。また、ドライ型黄斑変性症を治療することは、網膜色素上皮の異常を治療することを含む。網膜色素上皮の異常は、地図状萎縮、非地図状萎縮、および限局的低色素沈着を含む。また、ウェット型加齢黄斑変性を治療することは、脈絡膜血管新生または色素上皮剥離を含む。

一実施形態において、眼科学的疾患は、ポリープ状脈絡膜血管症（ｐｏｌｙｐｏｉｄａｌ ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｖａｓｃｕｌｏｐａｔｈｙ）である。ポリープ状脈絡膜血管症は、動脈瘤の隆起または外側の突起の端部に位置する血管の内部脈絡叢の血管ネットワークからの病変により特徴付けられる。

一実施形態において、眼科学的疾患は、脈絡膜新生血管に関連した状態である。脈絡膜新生血管に関連した状態の例は、変性、炎症性、外傷性、または突発性の状態を含む。また、脈絡膜新生血管に関連した変性障害を治療することは、遺伝子変性障害を治療することをも含む。遺伝子変性障害の例は、卵黄様黄斑変性症、黄色斑眼底、および視神経乳頭ドルーゼン（ｏｐｔｉｃ ｎｅｒｖｅ ｈｅａｄ ｄｒｕｓｅｎ）を含む。脈絡膜新生血管に関連する変性障害の例は、近視性の変性または網膜色素線条症を含む。また、脈絡膜新生血管に関連する炎症障害は、眼ヒストプラスマ症候群、多病巣性脈絡膜炎、匍行性脈絡膜炎（ｓｅｒｐｉｍｎｏｕｓ ｃｈｏｒｏｉｄｉｔｉｓ）、トキソプラズマ症、トキソカラ症、風疹、フォークト・小柳・原田症候群、フォークト・小柳・原田症候群、または交感性眼炎（ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｏｐｈｔｈａｌｍｉａ）を含む。また、脈絡膜血管新生に関連する外傷性障害を治療することは、強烈な光硬化により引き起こされる脈絡膜破裂または外傷状態を治療することをも含む。

一実施形態において、眼科学的疾患は、高血圧性網膜症である。

一実施形態において眼科学的疾患は、糖尿病性網膜症である。糖尿病性網膜症は、非増殖性または増殖性糖尿病性網膜症である。非増殖性糖尿病性網膜症の例は、黄斑浮腫および黄斑部の虚血を含む。

一実施形態において、眼科学的疾患は、鎌状赤血球網膜症である。

一実施形態において、眼科学的疾患は、網膜血管新生周辺部に関連した状態である。網膜血管新生周辺部に関連した状態の例は、虚血性血管疾患、虚血の可能性のある炎症性疾患、色素失調症、網膜色素変性症、網膜分離症、または慢性網膜剥離を含む。

虚血性血管疾患の例は、増殖性糖尿病性網膜、網膜静脈分枝閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症（ｂｒａｎｃｈ ｒｅｔｉｎａｌ ａｒｔｅｒｉｏｌａｒ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ）、頸動脈海綿洞瘻、鎌状異常ヘモグロビン症、非鎌状異常ヘモグロビン症、ＩＲＶＡＮ 症候群（突発性網膜血管炎、動脈瘤、および視神経網膜炎により特徴付けられる網膜血管炎性障害）、網膜塞栓形成、未熟児の網膜症、家族性滲出性硝子体網膜症、過粘稠度症候群、大動脈弓症候群、またはイールズ病を含む。鎌状異常ヘモグロビン症の例は、ヘモグロビンＳＳ症およびヘモグロビンＳＣ症を含む。非鎌状異常ヘモグロビン症の例は、ヘモグロビンＡＣ症およびヘモグロビンＡＳ症を含む。過粘稠度症候群の例は、白血病、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、赤血球増加症、または骨髄増殖性疾患を含む。

また、虚血の可能性のある炎症性疾患を治療することは、全身性疾患に関連する網膜血管炎、感染病原体に関連する網膜血管炎、またはｂｉｒｄｓｈｏｔ網膜症（ｂｉｒｄｓｈｏｔ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）をも含む。全身性疾患の例は、全身性エリテマトーデス、ベーチェット氏病、炎症性腸疾患、サルコイドーシス、多発性硬化症、ウェゲナー肉芽腫症、および結節性多発動脈炎を含む。感染病原体の例は、梅毒、結核、ライム病、またはねこひっかき病の原因である病原体、ヘルペスウイルスなどのウイルス、もしくはイヌ回虫もしくはトキソプラズマ原虫などの寄生虫である感染病原体を含む。ブドウ膜炎の例は、毛様体扁平部炎もしくはＦｕｃｈｓブドウ膜炎症候群を含む。

一実施形態において、眼科学的疾患は、未熟児網膜症である。未熟児網膜症は、網膜の発達を支持する血管床中の血管の異常増殖から生ずる可能性がある。

一実施形態において、眼科学的疾患は、静脈閉塞疾患である。静脈閉塞疾患の例は、網膜静脈分枝閉塞症および網膜静脈分枝閉塞症を含む。網膜静脈分枝閉塞症は、網膜の血管を排出する循環部を阻害し得る。この阻害は、毛細管のバックアップ圧力を引き起こし、これにより、出血を引き起こし、同様に体液および他の血液成分が漏出することとなり得る。

一実施形態において、眼科学的疾患は、動脈閉塞疾患である。動脈閉塞疾患の例は、網膜動脈分枝閉塞症、網膜中心動脈閉塞症、または眼虚血症候群を含む。網膜動脈分枝閉塞症（ＢＲＡＯ）は、動脈の分枝の内の１つが閉塞した網膜を供給する際に起こり得る。

一実施形態において、眼科学的疾患は、中心性漿液性網脈絡膜症（ＣＳＣ）である。一実施形態において、ＣＳＣは、中心網膜黄斑中の体液の漏出により特徴付けられる。

一実施形態において、眼科学的疾患は、嚢胞様黄斑浮腫（ＣＭＥ）である。一実施形態において、ＣＭＥは、網膜の中心または網膜黄斑に影響を与える。別の実施形態において、ＣＭＥは白内障手術に影響を与える。

一実施形態において、眼科学的疾患は網膜血管拡張症である。一実施形態において、網膜血管拡張症は、網膜の血管の拡張およびねじれ、ならびに多発性動脈瘤の形成により特徴付けられる。突発性ＪＸＴ、レーバー粟粒動脈瘤、およびコーツ病は、３つの種類の網膜の毛細血管拡張症である。

一実施形態において、眼科学的疾患は、動脈性細動脈瘤である。

一実施形態において、眼科学的疾患は、網膜血管腫症である。一実施形態において、網膜血管腫症は、眼の血管が多発性血管腫を形成する際に発症する。

一実施形態において、眼科学的疾患は、放射線誘導網膜症（ＲＩＲＰ）である。一実施形態において、ＲＩＲＰは、黄斑浮腫ならびに非増殖性および増殖性網膜症などの症状が表われてもよい。

一実施形態において、眼科学的疾患は、虹彩血管新生である。別の実施形態において、虹彩血管新生は、血管新生緑内障の形成で生じる、別の実施形態において、虹彩血管新生は、糖尿病性網膜症、網膜中心静脈閉塞症、眼虚血症候群、または慢性網膜剥離により引き起こされる。

一実施形態において、眼科学的疾患は、新生物である。新生物の例は、眼瞼の腫瘍、結膜腫瘍、脈絡膜腫瘍、虹彩腫瘍、視神経腫瘍、網膜腫瘍、浸潤性眼内腫瘍、または眼窩腫瘍を含む。眼瞼の腫瘍の例は、基底細胞癌、扁平上皮癌、皮脂腺細胞腫、悪性メラノーマ、毛細血管腫、水嚢腫、母斑、または脂漏性角化症を含む。結膜の腫瘍の例は、結膜のカポジ肉腫、扁平上皮癌、結膜の上皮内腫瘍、眼球上の類皮（ｅｐｉｂｕｌａｒ ｄｅｒｍｏｉｄ）、結膜のリンパ腫、メラノーマ、瞼裂斑または翼状片を含む。脈絡叢腫瘍の例は、脈絡膜母斑、脈絡叢血管腫、転移性脈絡叢腫瘍、脈絡叢骨腫、脈絡叢メラノーマ、毛様体メラノーマ、または太田母斑を含む。虹彩腫瘍の例は、前眼部転移、虹彩嚢腫、虹彩黒色細胞腫、虹彩メラノーマ、または虹彩の真珠嚢腫を含む。視神経腫瘍の例は、視神経黒色細胞腫、視神経髄膜腫、視神経に影響のある脈絡叢メラノーマ、または視神経症を備えた乳頭周辺部の転移を含む。網膜腫瘍の例は、網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）肥大、ＲＰＥ腺腫、ＲＰＥ細胞腫、網膜芽細胞腫、ＲＰＥの過誤腫、ｖｏｎ Ｈｉｐｐｅｌ血管腫を含む。浸潤性眼内腫瘍の例は、慢性リンパ性白血病、浸潤性脈絡膜症、または眼内リンパ腫を含む。眼窩腫瘍の例は、涙腺の腺様嚢胞癌、眼窩の海綿状血管腫、眼窩のリンパ管腫、眼窩の粘液嚢腫、眼窩偽腫瘍、眼窩横紋筋肉腫、小児の眼周囲血管腫、または硬化性眼窩偽腫瘍（ｓｃｌｅｒｏｓｉｎｇ ｏｒｂｉｔａｌ ｐｓｕｅｄｏｔｕｍｏｒ）を含む。

一実施形態によれば、本組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物を投与する対象は、哺乳類、好ましくはヒトである。

本発明の実施形態において、本組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物を投与する対象は、血管新生疾患、障害、または状態を発達させるリスクを有する、好ましくは血管新生疾患、障害、または状態と診断される。

また、本発明は、それを必要とする対象の血管新生疾患、障害、または状態を治療する方法であって、ＩＲＳ−１阻害剤およびＶＥＧＦ経路阻害剤の治療上有効量を投与することを含む方法に関する。

また、本発明は、それを必要とする対象の血管新生疾患、障害、または状態を治療する方法であって、上述のＩＲＳ−１阻害剤およびＶＥＧＦ経路阻害剤の治療上有効量からなる、またはＩＲＳ−１阻害剤およびＶＥＧＦ経路阻害剤の治療上有効量を含む組成物を投与することを含む方法に関する。

また、本発明は、それを必要とする対象の血管新生疾患、障害、または状態を治療する方法であって、上述のＩＲＳ−１阻害剤およびＶＥＧＦ経路阻害剤の治療上有効量を含むキット部を投与することを含む方法に関する。

本発明を、以下の実施例によってさらに示す。

実施例１
材料および方法
動物実験の手順
Ｈｏｐｉｔａｌ Ｓｔｅ−Ｊｕｓｔｉｎｅ（モントリオール、カナダ）の動物実験委員会により承認したプロトコルにより、視覚研究協会および眼の研究の動物の使用に関する眼科学の声明にしたがって、虚血性増殖性網膜症を、ＳＤラットの子ネズミ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）に導入した。基本的に、動物を、病原体のない施設内の標準的な長方形のケージに収容し、１２時間〜１２時間の明暗周期で維持した。室温および相対湿度を、それぞれ２１℃および５０％に固定した。ラットの固形飼料（Ｔｅｋｌａｄ，Ｈａｒｌａｎｄ，ＵＳＡ）および水を自由に与え、食料、水、およびケージを２週間に１度交換した。この施設は、動物ケアに関するカナダの評議会により証明された。

実験設計
酸素誘導網膜症（ＯＩＲ）モデル（Ｐｅｎｎ ｅｔ ａｌ，１９９４；Ｓａｐｉｅｈａ ｅｔ ａｌ，２００８）を、異常性網膜前新生血管を誘導するために使用した。新生児ラットを、出生後日数（Ｐ）１３〜Ｐ１７（血管増殖性段階）の正常酸素圧状態での曝露に続き、Ｐ７からＰ１２の過酸素症状態に曝露した。新生児ラットを、Ｐ１８での網膜前新生血管に関する抗血管新生効果を評価するための増殖性段階の間、２つの眼球内注射（Ｐ３０およびＰ１５）により、ＧＳ−１０１（０．５μｌ、０．５μｌ／注射）および／またはＶＥＧＦに対する抗体（Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃａｎａｄａ Ｉｎｃにより提供したＬｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）、０．５μｌ、２５ｎｇ／注射）で処置した。ＧＳ１０１の配列（５’−ＴＡＴＣＣＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＴ−３’，配列番号３）は、以前に公開されている（Ａｌ−Ｍａｈｍｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，２００９）。

網膜血管新生のラベリングおよび定量化
Ｐ１８で、動物をＣＯ２チャンバー内で安楽死させ、眼を収集し、組織学的調製用の４％パラホルムアルデヒド溶液（ｐａｒａｆｏｒｍａｄｅｈｙｄｅ）中に固定化した。固定化した網膜を解剖し、１００％メタノールで透過処理し、ＴＲＩＴＣ−標識レクチン（Ｓｉｇｍａ）（１／１００）で一晩、室温でインキュベートした。フラットマウントを、蛍光顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｅ８００，日本）で視覚化した。以下の、血管増殖、血管房、網膜外新血管形成、中心の血管狭窄、網膜の出血、および血管のねじれ（Ｈｉｇｇｉｎｓ，１９９９）の基準を評価する網膜スコアシステムを使用して、Ｐ１８で網膜症の重症度を評価した。さらに、血管房自体を、網膜のフラットマウント上で評価した。

統計分析
Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ法の多重比較に続き、変動分析の１つの方法を使用して統計分析を行った。分析はプリズムを使用した。Ｐ＜０．０５は、統計学的に有意とした。

結果
ビヒクル（ＮａＣｌ）、ＧＳ−１０１、抗ＶＥＧＦ抗体、またはＧＳ−１０１および抗ＶＥＧＦ抗体の組み合わせで処置した後の網膜の血管新生の定量化の各データを、表１〜４、および図１に示した。

ＮａＣｌで処置したラットの血管新生を表１に示す（ｎ＝１１）

ＧＳ−１０１（０．５μｇ／注射）で処置したラットの血管新生を表２に示す（ｎ＝１１）

抗ＶＥＧＦ抗体（２５ｎｇ／注射）で処置したラットの血管新生を表３に示す（ｎ＝１０）

ＧＳ−１０１および抗ＶＥＧＦ抗体（それぞれ、０．５μｇおよび２５ｎｇ／注射）で処置した血管新生を表４に示す（ｎ＝１１）。

（ＮａＣｌでの処置と比較した）各処置の血管新生の阻害を表５に示す。

これらの結果は、ＧＳ−１０１または抗ＶＥＧＦ抗体の眼内注射は、３０％未満の病的な網膜血管新生阻害を誘導したことを示した。ＧＳ−１０１および抗ＶＥＧＦ抗体の組み合わせた注射は、６５％の異常性血管増殖を誘導した。

実施例２
材料および方法
動物、細胞、および産物
研究動物ケアの治験審査委員会により全てのｉｎ ｖｉｖｏの実験が審査され、動物ケアのフランスの国のガイドラインに従って全てのｉｎ ｖｉｖｏの実験を実行した。ヒトの肺腫瘍ＮＣＩ−Ｈ４６０（Ｈ４６０）細胞系を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから購入した。抗ＩＲＳ−１−ＨＲＰ複合物、抗ＧＡＰＤＨ−ＨＲＰ複合物、マウス抗ｐ−Ｅｒｋ１／２（ｒｅｆ ｓｃ−７３８３）、および抗ｐ−Ａｋｔ（Ｓｅｒ４７３， ｒｅｆ ｓｃ−７９８５−Ｒ）、抗ヤギＨＲＰ複合抗体を、アメリカのＳａｎｔａ Ｃｒｕｚから購入した。良質な工場で実施されたバッチを有するＧＳ−１０１（２５ｍｅｒ ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｓｓ ８，０３６Ｄａ；５’ＴＡＴＣＣＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＴＧＣＴＧＣＴ３’， 配列番号３）は、遺伝子シグナル企業（Ａｌ−Ｍａｈｍｏｏｄ， ２００２； Ａｌ−Ｍａｈｍｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，２００９）（Ｓｗｉｓｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌａｕｓａｎｎｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）により提供された。使用したスクランブルホスホロチオエートオリゴヌクレオチド（ＳＯ）は、５’−ＴＧＧＡＣＣＴＣＴＧＧＡＧＣＴＣＴＣＧＡＣＧＴＧＣ−３’，配列番号２２）の配列を有する。

リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ
３７℃、５％ＣＯ２加湿雰囲気下で、１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ中でＨ４６０細胞を増殖した。細胞層を洗浄し、血清誘導培地で一晩インキュベートし、Ｈ４６０細胞（５×１０^５細胞／ｍｌ）から、またはＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ ＲＮＡ ＩＩキットを使用したｉｎ ｖｉｖｏでの処置の終わりに収集した腫瘍ブロックからの総ｍＲＮＡの抽出に続き、ＧＳ−１０１（０−２０μＭ）、ＳＯ（０−２０μＭ）、またはビヒクル（０．９％ＮａＣｌ）に曝露した。ＲＮＡの収率および純度を、評価、分析し、かつ、このリアルタイムＲＴ−ＰＣＲを、上述の通り実行した（Ａｌ−Ｍａｈｍｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，２００９）。直後に、この合成したｃＤＮＡをＰＣＲ産物の検出用のＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉを使用したリアルタイムＰＣＲの増幅のために使用した。また、ｈ−ＶＥＧＦＡ（５′ＧＡＧＧＧＣＡＧＡＡＴＣＡＴＣＡＣＧＡＡ３′，配列番号２３および５′ＴＧＣＴＧＴＣＴＴＧＧＧＴＧＣＡＴＴＧＧ３′，配列番号２４）；ｈ−ＧＡＰＤＨ（５′ＴＧＡＡＧＧＴＣＧＧＡＧＴＣＡＡＣＧＧＡ３′，配列番号２５；および５′ＣＡＴＴＧＡＴＧＡＣＡＡＧＣＴＴＣＣＣＧ３′，配列番号２６）；ｍ−ＶＥＧＦＡ（５′ＴＴＧＴＣＣＡＡＧＡＴＣＣＧＣＡＧＡＣＧ３′，配列番号２７および５′ＴＣＧＧＴＣＴＴＴＣＣＧＧＴＧＡＧＡＧＧ３′，配列番号２８）；ｍ−ＧＡＰＤＨ（５′ＡＧＣＴＣＡＣＴＧＧＣＡＴＧＧＣＣＴＴＣ３′，配列番号２９および５′ＧＡＧＧＴＣＣＡＣＣＡＣＣＣＴＧＴＴＧＣ３′，配列番号３０）のプライマーを使用した。このリアルタイムＰＣＲ反応を、ＤＮＡ Ｅｎｇｉｎｅ Ｏｐｔｉｃｏｎ ２ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｏｒ（ＭＪ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）で実行した。この結果を定量化し、すべてのＰＣＲ産物を、上述のように分析した（Ａｌ−Ｍａｈｍｏｏｄｅｔ ａｌ．，２００９）。

タンパク質定量化
血清由来のＨ４６０細胞を、ＧＳ−１９１またはＳＯの異なる濃度と、３７℃、５％ＣＯ_２下で６時間インキュベートした。細胞を、氷冷したＰＢＳで洗浄した後、タンパク質抽出緩衝液（ＰＥＢ）と合わせた（Ａｌ−Ｍａｈｍｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，２００９）。このタンパク質内容物を調製し、ＩＲＳ−１タンパク質、ヒトＶＥＧＦＡ（ｈ−ＶＥＧＦＡ）、マウスＶＥＧＦＡ（ｍ−ＶＥＧＦＡ）を、サンドイッチＥＬＩＳＡキット製造者の指示に従った（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．， Ｄａｎｖｅｒｓ， ＭＡ）により、細胞可溶化液、Ｈ４６０細胞の培養液、またはマウスの血漿中で定量化した。重複して実施した４つの別々の実験化からデータを収集し、対照（ビヒクルで処置した細胞）と比較して発現させた。ＩＣ_５０値を、非線形回帰を使用したグラフパッドプリズムで計算した。調節した細胞可溶化液を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより溶解し、抗ＧＡＰＤＨ−ＨＲＰ複合物、マウス抗ｐ−Ｅｒｋ１／２、またはヤギ抗ｐ−Ａｋｔ、および抗ヤギＨＲＰ複合物でイムノブロッティングを実施した。タンパク質をＥＣＬｐｌｕｓ （ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ， Ｃｈａｌｆｏｎｔ Ｓｔ． Ｇｉｌｅｓ， ＵＫ）によりモニタリングした。

ｉｎ ｖｉｖｏでのＧＳ−１０１の生物学的利用率
Ｈ４６０腫瘍細胞（５×１０^６細胞を含む２００μｌのＨＢＳＳ）を、マウス（メスのＢＡＬＢｃ ｎｕ／ｎｕマウス、ｎ＝１８）（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒｓ， フランス）の右側腹部中に皮下注射した。腫瘍量（ＴＶ）を、ノギス（Ｖｅｒｎｉｅｒ ｃａｌｌｉｐｅｒ）を使用して測定し、上述の通りに計算した（Ｂａｌｓａｒｉ ｅｔ ａｌ．， ２００４）。ＴＶ≒１０^３ｍｍ^３では、各ビヒクル（０．９％生理食塩水）または４００μＭのＧＳ−１０１を、１００μＬ／注射で、腹腔内（ｉ．Ｐ）で注射した。特定の実験において、腫瘍を有するマウスを、ＧＳ−１０１の濃度を増加させてｉ．ｐ投与し、血漿中≒１μＭｎｏ濃度の標的ＧＳ−１０１を誘導するように１００μＬ中に４０ｎｍｏｌを選択した。開始時に、３匹のマウスを斬首により失血させ（２分）、または１００μＬのケタミンで麻酔し、かつ心臓穿刺により失血させた。内臓器官および腫瘍ブロックを収集し、重量を計測し、液体窒素で凍結保存し、分析するまでマイナス８０℃で保存した。

非競合的ハイブリダイゼーション−ライゲーションＥＬＩＳＡによる、ｉｎ ｖｉｖｏでのＧＳ−１０１の測定
固形組織または腫瘍ブロックを、溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．，Ｄａｎｖｅｒｓ， ＭＡ）中で４℃、３０分間ホモジナイズし、１６０００ｇで１０分間遠心（ｃｌｅａｒ）した。血漿中のＧＳ−１０１濃度および組織抽出物を、非競合的ハイブリダイゼーション−ライゲーションＥＬＩＳＡアッセイにより決定した。１００μＬの（配列番号３の９つの追加的なヌクレオチド３’−ＡＧＣＧＡＴＡＡＧ−５’を備えたＧＳ−１０１に相補的な）鋳型（Ｂｉｏｔｉｎｅ−３’−ＡＴＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＡＧＣＧＧＴＡＣＧＡＣＧＡ−５’（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ，Ｌｅｓ Ｕｌｉｓ，フランス）を含むハイブリダイゼーション緩衝溶液（６０ｍＭ Ｎａ_２ＨＰＯ_４ ｐＨ７．４，０．９Ｍ ＮａＣｌおよび０．２４％ Ｔｗｅｅｎ）（Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ， Ｂｅｌｇｉｕｍ）を血漿試料（１００μＬ）と共に、ハイブリダイゼーションのため、ポリプロピレン９６ウェルプレート中で３７℃、１時間インキュベートした。ハイブリダイゼーション後、１５０μＬの溶液をニュートラアビジンでコートした９６ウェルプレート（Ｐｉｅｒｃｅ， Ｂｒｅｂｉｅｒｅｓ，フランス）に移し、３７℃、３０分でインキュベートした。４つの緩衝液での洗浄後、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ（１．３３Ｕ／ｍｌ）および０．０５ｍＭ ＡＴＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｏｒｓａｙ，フランス）を含む１５０μＬのライゲーションプローブ溶液（リン酸塩５’−ＴＣＧＣＴＡＴＴＣ−３’−ジゴキシゲニン）（ＭＷＧ，Ｌｅｓ Ｕｌｉｓ，フランス）を添加し、２２℃で２時間インキュベートした。このプレートを洗浄緩衝液（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．２，０．１５Ｍ ＮａＣｌおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ）および脱イオン化水で洗浄した。その後、１：１０^４で希釈した１５０μＬの抗ジゴキシゲニン−ＡＰ（Ｒｏｃｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｍｅｙｌａｎ，フランス）を添加し、２２℃で０．５時間インキュベートした。洗浄緩衝液で洗浄した後、ＡｔｔｏＰｈｏｓ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｃｈａｒｂｏｎｎｉｅｒｅｓ，フランス）を添加し、このプレートを、３０℃で３０分間インキュベートした。ＫＣ４ソフトウェアＢｉｏＴｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）．に接続したμＱｕａｎｔプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃｏｌｍａｒ，フランス）を使用して、光学濃度を４５０ｎｍで決定した。

Ｉｎｖｉｖｏで腫瘍誘導性血管新生
各プラグで、腫瘍細胞（１０^６細胞を含む５０μＬのＨＢＳＳ）を４５０μＬのマトリゲル（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＵＳＡ）に添加し、この混合物を、マウス（メスのＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウス、ｎ＝１０）の右側腹部に皮下注射した。３日目（Ｄ）に、マウスを５匹のマウスずる２つのグループにランダムに分け、Ｉ．ｐ．注射（１００μｌ／注射）を毎日処置し始めた。処置の終わり（接種後８日）、動物に麻酔をかけ、プラグを収集し、重量を計測し、上述の通りヘモグロビン内容物を分析した（Ｒｉｃｅ， １９６７）。

ヌードマウスの腫瘍異種移植片およびＧＳ−１０１投与
メスの生後４週間のＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウス（ｎ＝１４）を使用した。Ｈ４６０細胞（５×１０^６細胞を含む２００μＬのＨＢＳＳ）を、マウスの右側腹部の皮下に埋め込んだ。ＴＶ≒２００ｍｍ^３で、動物をランダムに選択し、２つのグループに分けた。処置をＩ．ｐ．注射（１００μＬ／注射）により行った。対照マウスに、毎日ビヒクル（０．９％生理食塩水）を注射した。グループ２には、マウスに、ＧＳ−１０１（４００μＭ）を毎日注射した。ＴＶおよび体重を処置期間（１１日）にわたって１日おきに計測した。

統計分析
連続したデータを、平均値±ＳＥＭで表し、「ｎ」は、独立した実験の数を表すものである。適切な単変量分析（ｔ試験またはＦｉｓｈｅｒ多重比較検定を備えたＡＮＯＶＡ）を使用した（Ｓｔａｔｖｉｅｗ ４．５）。ｐ＜０．０５は、統計学的に有意とした。

結果
腫瘍誘導血管新生にＩＲＳ−１が関与している可能性を示すために、ヒト腫瘍細胞系Ｈ４６０細胞をＳＯまたはＧＳ−１０１のどちらかの増加した濃度に曝露した。細胞の増殖は、ＧＳ−１０１（１００μＭ）の存在下で優位に変化するものではなかった（−１１±４％、処置していない細胞と共に、ｐ＜０．０５，ｎ＝６）。対照的に、ＳＯ、ＧＳ−１０１の用量は、独立してＩＣ５０が４．５２±１．２２μＭ（ｎ＝４）のＩＲＳ−１発現を低減させ（図２）、この低減は、ｍＲＮＡ（ＩＣ５０＝３．１２±０．８２μＭ）（ｎ＝４）および培養液中のＶＥＧＦＡタンパク質発現の濃度依存性阻害と対応した（図２および図３）。

同様に、ＡｋｔおよびＥｒｋ１／２活性上のＳＯおよびＧＳ−１０１の影響を調査した。ＧＳ１０１−とＨ４６０を４時間インキュベートした後、Ｅｒｋ１／２活性の変化は検出されなかった（図３）が、ＧＳ１０１は、Ａｋｔ活性を有意に減少させた（図３Ｂ）。

ＧＳ−１０１は、ｉｎｖｉｖｏでの腫瘍誘導性血管新生を阻害
特定の実施形態において、腫瘍を有しているマウスに、ＧＳ−１０１を増加させてｉ．ｐ．投与し、４０ｎｍｏｌのＧＳ−１０１を含む１００μｌを選択した。ＧＳ−１０１の濃度の測定により、単一の４００μＭのＧＳ−１０１のＩ．ｐ．注射が、注射後２４時間でのＧＳ１０１血漿濃度の低下により示されるＧＳ−１０１のクリアランスに続き、６時間で９．３７８＋０．０５６μｇ／ｍＬ（ｉ．ｅ．約１．１６６μＭ）（ｎ＝３）に達する第１の時間の間、ＧＳ−１０１の血漿濃度が徐々に増加することを示した。

腫瘍誘導血管新生上のＧＳ−１０１の影響を定量化するために、Ｈ４６０腫瘍を多く含むマトリゲルプラグを使用し、ヌードマウスへ埋め込んだ、処置の後、ビヒクルで処置したグループから分離したプラグは、強力なヘモグロビン充填を示す、すなわち血管新生を示す同種の赤であったのに対し、ＧＳ−１０１で処置したグループから分離したプラグは、孤発性の赤い点を有した黄白色であり、このことにより、ＧＳ−１０１が腫瘍誘導プラグの血管新生を阻害していることを示した（図４Ｂ）。このヘモグロビンの定量化は、ＧＳ−１０１で処置したマウスから分離したプラグにおいて、ビヒクルで処置したマウスと比較して７０±５％（ｎ＝５；ｐ＜０．０１）未満のヘモグロビンを有しており、ＧＳ−１０１が潜在的にｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍誘導性血管新生を阻害することを示唆するものである。

ＧＳ−１０１は、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍増殖および病的なＶＥＧＦＡ発現を阻害
すべてのヌードマウスは、Ｈ４６０腫瘍を有しており、生後１２日であり、この療法の間生存した。療法前に、体重および腫瘍量に有意な差異は見られなかった。平均腫瘍量（ＭＴＶ）の結果を図５に示す。ビヒクルで処置したマウスのＭＴＶ（８２０．１４±２３６．２３ｍｍ^３；ｎ＝７）と比較して、ＧＳ−１０１で処置したマウスのＭＴＶは、３日目（ｐ＜０．０５）でより小さくなり、処理の終わりまで安定したままだった（図５Ａ）。治療のＤ７およびＤ１１での、ＧＳ−１０１で処置したマウスのＭＴＶは、２５８．１８±６６．２１および２３２．５４＋１０８．３３ｍｍ^３であり、ビヒクルで処置したマウスのＭＴＶは８９７．２６±１８３．４５および１８２０．１４±２３６．２３ｍｍ^３であった。（ｎ＝７、ｐ＜０．０１）（図５Ａ）。

処置の終わりに、腫瘍ブロックを回収した。ＶＥＧＦＡのｍＲＮＡの定量化により、ＧＳ−１０１が、ｈ−ＶＥＧＦＡおよびｍ−ＶＥＧＦＡ転写発現において、それぞれ９±８％（ｎ＝７；ｐ＜０．０５）および４６±２０％（ｎ＝７；ｐ＜０．０５）の低下を誘導したことを示した（図５Ｂ）。

処置の終わりに、ｈ−ＶＥＧＦＡおよびｍ−ＶＥＧＦＡタンパク質を計算する定量化により、ｍ−ＶＥＧＦＡタンパク質はビヒクルとＧＳ−１０１マウスとの間に有意な差異はなかったことが示された。しかしながら、ｈ−ＶＥＧＦＡタンパク質レベルの計測値が、ＧＳ−１０１の処置により４２±６％（ｎ＝７；ｐ＜０．０１）低下した。

Claims (15)

1. ＩＲＳ−１発現阻害剤およびＶＥＧＦ経路阻害剤を含む組成物。
2. ＩＲＳ−１発現阻害剤およびＶＥＧＦ経路阻害剤を含むキット部であって、前記キット部が２つの部分を含み、前記第１の部分が前記ＩＲＳ−１発現阻害剤を含み、前記第２の部分が前記ＶＥＧＦ経路阻害剤を含む、キット。
3. 前記ＩＲＳ−阻害剤が、ＩＲＳ−１アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項１〜２のいずれか１項に記載の組成物またはキット部。
4. 前記ＩＲＳ−１アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号１の少なくとも１２のヌクレオチド配列である、請求項３に記載の組成物またはキット部。
5. 前記ＩＲＳ−１アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号２、または配列番号２と比較して少なくとも７５％の同一性を有し、かつ配列番号２として病的な血管新生を阻害する能力を保存する９〜５０のヌクレオチドを含むいずれかの機能保存的配列を有する、請求項３〜４のいずれか１項に記載の組成物またはキット部。
6. 前記機能保存型配列が、配列番号３〜配列番号２１を含む群から選択される、請求項５に記載の組成物またはキット部。
7. 前記ＶＥＧＦ経路阻害剤が、ＶＥＧＦ−Ａ阻害剤である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物またはキット部。
8. 前記ＶＥＧＦ経路阻害剤が、ＶＥＧＦを導く抗体、好ましくはＶＥＧＦ−Ａを導く抗体である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物またはキット部。
9. 前記ＶＥＧＦ経路阻害剤が、ＶＥＧＦ受容体のアンタゴニスト、好ましくは前記ＶＥＧＦ−Ａ受容体のＶＥＧＦＲ１またはＶＥＧＦＲ２のアンタゴニスト、好ましくはＶＥＧＦＲ２のアンタゴニストである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物またはキット部。
10. 前記ＶＥＧＦ経路阻害剤が、ＶＥＧＦ受容体を導く抗体、好ましくはＶＥＧＦ−Ａ受容体のＶＥＧＦＲ１またはＶＥＧＦＲ２を導く抗体、好ましくはＶＥＧＦＲ２を導く抗体である、請求項９に記載の組成物またはキット部。
11. 請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物またキット部、ならびに薬学的に許容可能な賦形剤を含む薬学的組成物。
12. 請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物またはキット部を含む薬物。
13. 血管新生治療用の請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物。
14. 前記血管新生疾患が眼性血管新生疾患である、請求項１３に記載の組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物。
15. 前記血管新生疾患が癌である、請求項１３に記載の組成物、キット部、薬学的組成物、または薬物。
    

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