JP2014520889A - 非抗凝固性硫酸化多糖の経口製剤を改善するための添加剤としての吸収促進剤 - Google Patents

Abstract

本発明の態様は、対象における血液凝固を促進するための方法を含む。特定の実施形態による方法の実行においては、ある量の非抗凝固性硫酸化多糖（ＮＡＳＰ）を、胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで、対象における血液凝固を促進するのに十分な様式で該対象に経口投与する。本発明の方法を実行するための組成物及びキットも記載する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）項に従い、２０１１年７月１９日に出願された米国特許仮出願第６１／５０９，５１４号の優先権を主張するものであり、同文献の開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

出血は、疾患の最も深刻且つ重大な徴候の１つであり、局所部位から生じることも、全身性のものであることもある。限局性の出血は、病変部と関連していることもあれば、止血機構の欠損をさらに合併していることもある。出血性障害においては凝血が十分に行われず、そのような障害は、先天性凝固障害、後天性凝固障害、又は外傷により誘導される出血病態が原因である場合がある。凝固因子のうちいずれかの先天的又は後天的な欠乏が、出血傾向と関連していることがある。先天性凝固障害のいくつかの例としては、凝固第ＶＩＩＩ因子の欠乏（血友病Ａ）又は第ＩＸ因子の欠乏（血友病Ｂ）が関与している伴性劣性遺伝障害である血友病、及び、ヴォン・ヴィレブランド因子の深刻な欠乏が関与しているまれな出血性障害であるヴォン・ヴィレブランド病が挙げられる。後天性凝固障害は、疾患過程の結果としての出血の既往歴がない個体において発生する場合がある。例えば、後天性凝固障害は、血液凝固因子（例えば、第ＶＩＩＩ因子、ヴォン・ヴィレブランド因子、第ＩＸ因子、第Ｖ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、及び第ＸＩＩＩ因子）に対する阻害薬若しくは自己免疫が原因で、又は、止血障害（例えば、凝固因子の合成の低下を伴うことがある肝疾患を原因とするもの）が原因で、生じることがある。

本発明の態様は、対象における血液凝固を促進するための方法を含む。特定の実施形態による方法の実行においては、ある量の非抗凝固性硫酸化多糖（ＮＡＳＰ）を、胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで、対象における血液凝固を促進するのに十分な様式で該対象に経口投与する。本発明の方法を実行するための組成物及びキットも記載する。

本発明の実施形態においては、ある量のＮＡＳＰを、胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで、血液凝固を促進するのに十分な様式で対象に経口投与する。特定の実施形態において、胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、タイトジャンクションモジュレーターである。例えば、本発明により提供されるタイトジャンクションモジュレーターとしては、限定されるものではないが、プロテアーゼ、胆汁酸、多糖、脂肪酸及びその塩、並びにそれらの任意の組合せを挙げることができる。例として、タイトジャンクションモジュレーターは、胆汁酸、例えばデオキシコラートなどであってもよい。他の場合において、タイトジャンクションモジュレーターは、プロテアーゼ、例えば、ブロメライン又はブロメラインの酵素成分であってもよい。また他の場合において、タイトジャンクションモジュレーターは、多糖、例えばキトサンであってもよい。さらに他の場合において、タイトジャンクションモジュレーターは、脂肪酸又は脂肪酸塩、例えばカプリン酸ナトリウムであってもよい。特定の実施形態において、本発明の胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、複数のタイトジャンクションモジュレーターの組合せである。例えば、特定の場合においては、ブロメラインとキトサンとの組合せが、ＮＡＳＰと共に、対象における血液凝固を促進するのに十分な様式で、該対象に経口投与される。

特定の実施形態において、本発明は、ある量のＮＡＳＰを胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで有する組成物を対象に経口投与することにより血液凝固を促進するための方法であって、該ＮＡＳＰが天然ＮＡＳＰである方法を提供する。いくつかの場合において、天然ＮＡＳＰは、Ｎ−アセチルヘパリン（ＮＡＨ）、Ｎ−アセチル−デ−Ｏ−硫酸化ヘパリン（ＮＡ−ｄｅ−ｏ−ＳＨ）、デ−Ｎ−硫酸化ヘパリン（Ｄｅ−ＮＳＨ）、デ−Ｎ−硫酸化アセチル化ヘパリン（Ｄｅ−ＮＳＡＨ）、過ヨウ素酸塩酸化ヘパリン（ＰＯＨ）、化学的硫酸化ラミナリン（ＣＳＬ）、化学的硫酸化アルギン酸（ＣＳＡＡ）、化学的硫酸化ペクチン（ＣＳＰ）、硫酸デキストラン（ＤＸＳ）、ヘパリン由来オリゴ糖（ＨＤＯ）、又はポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）である。特定の場合において、天然ＮＡＳＰは、フコイダンである。例えば、このような実施形態において、フコイダンは、フコイダンＧＦＳ５５０８００５、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ、脱パイロジェン化されたもの（ｄｅｐｙｒｏｇｅｎａｔｅｄ）；フコイダンＧＦＳ５５０８００４、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ；フコイダンＧＦＳ５５０８００３、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ；フコイダン５３０７００２、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、最大分子量ピーク１２６．７ｋＤ；フコイダンＶＧ４９、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、５３０７００２を加水分解した試料で、分子量が低下しており最大分子量ピークは２２．５ｋＤ；フコイダン５３０８００４、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ；フコイダン５３０８００５、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ；フコイダンＬ／ＦＶＦ１０９１、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ；フコイダンＶＧ２０１０９６Ａ、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ；フコイダンＶＧ２０１０９６Ｂ、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ；フコイダンＶＧ５７、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ、高チャージ（ｈｉｇｈ ｃｈａｒｇｅ）（高硫酸化、脱アセチル化されたもの）；フコイダンＶＧ５０、Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ ｎｏｄｏｓｕｍ、最大分子量ピーク１４９．７ｋＤ；及びそれらの組合せであってもよい。

他の実施形態において、本発明は、ある量のＮＡＳＰを胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで有する組成物を対象に経口投与することにより血液凝固を促進するための方法であって、該ＮＡＳＰが合成ＮＡＳＰである方法を提供する。例として、合成ＮＡＳＰは、硫酸化オリゴマー、例えば硫酸化オリゴ糖、又は硫酸化脂肪族化合物であってもよい。特定の場合において、合成ＮＡＳＰは、硫酸化ペントース、硫酸化ヘキソース、又は硫酸化シクロデキストリンである。例えば、合成ＮＡＳＰとしては、限定されるものではないが、硫酸化マルトペントース、硫酸化β−シクロデキストリン、硫酸化６−カルボキシイコデキストリン、及びそれらの誘導体を挙げることができる。

特定の実施形態において、発明の方法は、凝固促進量のＮＡＳＰを胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで含有する組成物と併せて、血液凝固因子を対象に経口投与することをさらに含む。このような場合において、血液凝固因子としては、限定されるものではないが、第Ｘａ因子、第ＩＸａ因子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、ＶＩＩＩａ、プレカレクレイン、及び高分子量キニノゲン、組織因子、第ＶＩＩａ因子、第Ｖａ因子、第Ｘａ因子、第ＩＩ因子、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、ヴォン・ヴィレブランド因子、並びにそれらの組合せを挙げることができる。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ある量のＮＡＳＰを、胃腸管上皮バリア浸透促進剤及び第ＶＩＩＩ因子との組合せで対象に経口投与することを含む。別の実施形態において、方法は、ある量のＮＡＳＰを、胃腸管上皮バリア浸透促進剤及び第ＩＸ因子との組合せで対象に経口投与することを含む。

他の実施形態において、本発明は、対象におけるＴＦＰＩ活性を阻害する方法を提供する。例えば、方法は、ある量のＮＡＳＰを、胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで、対象におけるＴＦＰＩ活性を阻害するのに十分な様式で経口投与することにより対象におけるＴＦＰＩ活性を阻害することをさらに含むことができる。特定の場合においては、凝固促進量のＮＡＳＰ及び胃腸管上皮バリア浸透促進剤を、ＴＦＰＩを含んでいる生体試料（例えば血漿）と合わせてから、該生体試料のＴＦＰＩ活性を測定する。他の場合において、方法は、凝固促進量のＮＡＳＰ及び胃腸管上皮バリア浸透促進剤を生体試料と合わせることと、ＴＦＰＩを組成物に加えることと、該生体試料のＴＦＰＩ活性を測定することとを含む。

特定の実施形態において、対象とする組成物は、例えば、ＣａＣｏ−２細胞モデルを用いた吸収試験により、胃腸管上皮浸透促進剤を含んでいない組成物と比較して定量した際に、浸透の促進を実証した。

発明の態様
１．対象における血液凝固を促進する方法であって、
凝固促進量の非抗凝固性硫酸化多糖（ＮＡＳＰ）を、胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで、前記対象における血液凝固を促進するのに十分な様式で前記対象に経口投与することを含む方法。
２．前記対象に投与されるＮＡＳＰの前記量が、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
３．前記ＮＡＳＰが、天然に存在するＮＡＳＰ又は合成ＮＡＳＰである、請求項１に記載の方法。
４．前記ＮＡＳＰが、天然に存在するＮＡＳＰである、請求項３に記載の方法。
５．前記天然に存在するＮＡＳＰが、Ｎ−アセチルヘパリン（ＮＡＨ）、Ｎ−アセチル−デ−Ｏ−硫酸化ヘパリン（ＮＡ−ｄｅ−ｏ−ＳＨ）、デ−Ｎ−硫酸化ヘパリン（Ｄｅ−ＮＳＨ）、デ−Ｎ−硫酸化アセチル化ヘパリン（Ｄｅ−ＮＳＡＨ）、過ヨウ素酸塩酸化ヘパリン（ＰＯＨ）、化学的硫酸化ラミナリン（ＣＳＬ）、化学的硫酸化アルギン酸（ＣＳＡＡ）、化学的硫酸化ペクチン（ＣＳＰ）、硫酸デキストラン（ＤＸＳ）、ヘパリン由来オリゴ糖（ＨＤＯ）、ポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）、及びフコイダン、並びにそれらの組合せから成る群から選択される、請求項４に記載の方法。
６．前記天然に存在するＮＡＳＰが、フコイダンである、請求項５に記載の方法。
７．前記ＮＡＳＰが、合成ＮＡＳＰである、請求項３に記載の方法。
８．前記合成ＮＡＳＰが、硫酸化オリゴマーである、請求項７に記載の方法。
９．前記胃腸管上皮バリア浸透促進剤が、タイトジャンクションモジュレーターである、請求項１に記載の方法。
１０．前記タイトジャンクションモジュレーターが、プロテアーゼ、胆汁酸、多糖、脂肪酸及びその塩、並びにそれらの組合せから成る群から選択される、請求項９に記載の方法。
１１．前記タイトジャンクションモジュレーターが、プロテアーゼを含む、請求項１０に記載の方法。
１２．前記タイトジャンクションモジュレーターが、ブロメライン又はその酵素成分である、請求項１１に記載の方法。
１３．前記タイトジャンクションモジュレーターが、胆汁酸である、請求項１０に記載の方法。
１４．前記胆汁酸が、デオキシコラートである、請求項１３に記載の方法。
１５．前記タイトジャンクションモジュレーターが、多糖である、請求項１０に記載の方法。
１６．前記多糖が、キトサンである、請求項１５に記載の方法。
１７．前記タイトジャンクションモジュレーターが、脂肪酸又はその塩である、請求項１０に記載の方法。
１８．前記タイトジャンクションモジュレーターが、カプリン酸ナトリウムである、請求項１７に記載の方法。
１９．前記胃腸管上皮バリア浸透促進剤が、キトサン及びブロメラインを含む、請求項１に記載の方法。
２０．前記胃腸管上皮バリア浸透促進剤が、約０．３％〜約３％のキトサン及び約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約０．５ｍｇ／ｍＬのブロメラインを含む、請求項１９に記載の方法。
２１．前記胃腸管上皮バリア浸透促進剤が、約３％のキトサン及び約０．５ｍｇ／ｍＬのブロメラインを含む、請求項２０に記載の方法。
２２．第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、プレカリクレイン、高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子、ヴォン・ヴィレブランド因子、組織因子、第ＶＩＩａ因子、第Ｖａ因子、及び第Ｘａ因子、第ＩＸａ因子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、及びＶＩＩＩａから成る群から選択される１つ又は複数の因子を前記対象に投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
２３．前記対象が、慢性又は急性の出血性障害、血液因子欠乏を原因とする先天性凝固障害、及び後天性凝固障害から成る群から選択される出血性障害を有する、請求項１に記載の方法。
２４．前記出血性障害が、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、及びヴォン・ヴィレブランド因子から成る群から選択される１つ又は複数の因子の血液因子欠乏；フィブリノゲン障害；プロトロンビン障害；又は血小板機能不全である、請求項２３に記載の方法。
２５．前記対象が、抗凝固薬の事前投与を理由に血液凝固の促進を必要としている、請求項１に記載の方法。
２６．前記抗凝固薬が、ヘパリン、クマリン誘導体、組織因子経路阻害薬（ＴＦＰＩ）、アンチトロンビンＩＩＩ、ループス抗凝固因子、線虫抗凝固ペプチド（ＮＡＰｃ２）、活性部位遮断第ＶＩＩａ因子（第ＶＩＩａｉ因子）、第ＩＸａ因子阻害薬、第Ｘａ因子阻害薬、第Ｖａ因子阻害薬、第ＶＩＩＩａ因子阻害薬、トロンビン阻害薬、及び、凝血因子と結合する抗体から成る群から選択される、請求項２５に記載の方法。
２７．前記抗凝固薬が、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、ヴォン・ヴィレブランド因子、プレカリクレイン、及び高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）から成る群から選択される凝血因子と結合する抗体である、請求項２６に記載の方法。
２８．前記対象が、外科的又は他の侵襲的な手術を理由に血液凝固の促進を必要としている、請求項１に記載の方法。
２９．前記対象におけるＴＦＰＩ活性を阻害する方法である、請求項１に記載の方法。
３０． （ａ）凝固促進量の非抗凝固性硫酸化多糖（ＮＡＳＰ）と、
（ｂ）胃腸管上皮バリア浸透促進剤と、
（ｃ）経口投与用送達ビヒクルと
を含み、単位剤形である、経口投与用組成物。
３１．前記組成物中に存在するＮＡＳＰの前記量が、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量をもたらす、請求項３０に記載の経口投与用組成物。
３２．前記ＮＡＳＰが、天然に存在するＮＡＳＰ又は合成ＮＡＳＰである、請求項３０に記載の経口投与用組成物。
３３．前記ＮＡＳＰが、天然に存在するＮＡＳＰである、請求項３２に記載の経口投与用組成物。
３４．前記天然に存在するＮＡＳＰが、Ｎ−アセチルヘパリン（ＮＡＨ）、Ｎ−アセチル−デ−Ｏ−硫酸化ヘパリン（ＮＡ−ｄｅ−ｏ−ＳＨ）、デ−Ｎ−硫酸化ヘパリン（Ｄｅ−ＮＳＨ）、デ−Ｎ−硫酸化アセチル化ヘパリン（Ｄｅ−ＮＳＡＨ）、過ヨウ素酸塩酸化ヘパリン（ＰＯＨ）、化学的硫酸化ラミナリン（ＣＳＬ）、化学的硫酸化アルギン酸（ＣＳＡＡ）、化学的硫酸化ペクチン（ＣＳＰ）、硫酸デキストラン（ＤＸＳ）、ヘパリン由来オリゴ糖（ＨＤＯ）、ポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）、及びフコイダン、並びにそれらの組合せから成る群から選択される、請求項３３に記載の経口投与用組成物。
３５．前記天然に存在するＮＡＳＰが、フコイダンである、請求項３４に記載の経口投与用組成物。
３６．前記ＮＡＳＰが、合成ＮＡＳＰである、請求項３２に記載の経口投与用組成物。
３７．前記合成ＮＡＳＰが、硫酸化オリゴマーである、請求項３６に記載の経口投与用組成物。
３８．前記胃腸管上皮バリア浸透促進剤が、タイトジャンクションモジュレーターである、請求項３０に記載の経口投与用組成物。
３９．前記タイトジャンクションモジュレーターが、プロテアーゼ、胆汁酸、多糖、脂肪酸及びその塩、並びにそれらの組合せから成る群から選択される、請求項３８に記載の経口投与用組成物。
４０．前記タイトジャンクションモジュレーターが、プロテアーゼを含む、請求項３９に記載の経口投与用組成物。
４１．前記タイトジャンクションモジュレーターが、ブロメライン又はその酵素成分である、請求項４０に記載の経口投与用組成物。
４２．前記タイトジャンクションモジュレーターが、胆汁酸である、請求項３９に記載の経口投与用組成物。
４３．前記胆汁酸が、デオキシコラートである、請求項４２に記載の経口投与用組成物。
４４．前記タイトジャンクションモジュレーターが、多糖である、請求項３９に記載の経口投与用組成物。
４５．前記多糖が、キトサンである、請求項４４に記載の経口投与用組成物。
４６．前記タイトジャンクションモジュレーターが、脂肪酸又はその塩である、請求項３９に記載の経口投与用組成物。
４７．前記タイトジャンクションモジュレーターが、カプリン酸ナトリウムである、請求項４６に記載の経口投与用組成物。
４８．前記胃腸管上皮バリア浸透促進剤が、キトサン及びブロメラインを含む、請求項３０に記載の経口投与用組成物。
４９．前記胃腸管上皮バリア浸透促進剤が、約０．３％〜約３％のキトサン及び約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約０．５ｍｇ／ｍＬのブロメラインを含む、請求項４８に記載の経口投与用組成物。
５０．前記胃腸管上皮バリア浸透促進剤が、約３％のキトサン及び約０．５ｍｇ／ｍＬのブロメラインを含む、請求項４９に記載の経口投与用組成物。
５１．第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、プレカリクレイン、高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子、ヴォン・ヴィレブランド因子、組織因子、第ＶＩＩａ因子、第Ｖａ因子、及び第Ｘａ因子、第ＩＸａ因子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、及びＶＩＩＩａから成る群から選択される１つ又は複数の因子をさらに含む、請求項３０に記載の経口投与用組成物。
５２．液体である、請求項３０に記載の経口投与用組成物。
５３．固体である、請求項３０に記載の経口投与用組成物。

フコイダンの吸収率（％）を決定するためのＣａＣｏ２バイオアベイラビリティースクリーニング用の実験装置を示す図である。 胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされたＮＡＳＰがＣａＣｏ２バイオアベイラビリティースクリーニングにおいて吸収される量の例を、フコイダンＦｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｌ／ＦＶＦ−１０９１の場合について示すグラフである。 ＣａＣｏ−２バイオアベイラビリティースクリーニングにおける細胞層の状態を、胃腸管上皮バリア浸透促進剤（ブロメライン）と組み合わされたフコイダンＦｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｌ／ＦＶＦ−１０９１について経上皮電気抵抗により測定した値として示すグラフである。 胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされたフコイダンＢＡＸ５１３についてのＣａＣｏ−２バイオアベイラビリティースクリーニングで得られた吸収量データの例を示すグラフである。 胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされたフコイダンＦ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ−１０９１についてのＣａＣｏ−２バイオアベイラビリティースクリーニングで得られた吸収量データの例を示すグラフである。 胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされたフコイダンＵ．ｐ．５５０８００５についてのＣａＣｏ−２バイオアベイラビリティースクリーニングで得られた吸収量データの例を示すグラフである。 胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされたフコイダンＦ．ｖ．Ｆ ＤＳ１００１１０８ＢについてのＣａＣｏ−２バイオアベイラビリティースクリーニングで得られた吸収量データの例を示すグラフである。 胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされたフコイダンＦｖＦ ＳＫ１１０１４４ＢについてのＣａＣｏ−２バイオアベイラビリティースクリーニングで得られた吸収量データの例を示すグラフである。 胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされた合成ＮＡＳＰ（硫酸化β−シクロデキストリン）についてのＣａＣｏ−２バイオアベイラビリティースクリーニングで得られた吸収量データの例を示すグラフである。 胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされた合成ＮＡＳＰ（硫酸化マルトペンタオース）についてのＣａＣｏ−２バイオアベイラビリティースクリーニングで得られた吸収量データの例を示すグラフである。 さまざまな濃度の胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされたフコイダンＦ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ−１０９１及びＦ．ｖ．Ｆ ＤＳ１００１１０８ＢについてのＣａＣｏ−２バイオアベイラビリティースクリーニングで得られた吸収量データの例を示すグラフである。 胃腸管上皮バリア浸透促進剤（ブロメライン）と組み合わされていない場合と組み合わされている場合の合成ＮＡＳＰ（硫酸化β−シクロデキストリン）についてのＣａＣｏ−２バイオアベイラビリティースクリーニングにおける細胞層の状態を、経上皮電気抵抗により測定した値として示すグラフである。 胃腸管上皮バリア浸透促進剤（デオキシコラート及びキトサン）と組み合わされていない場合と組み合わされている場合の合成ＮＡＳＰ（硫酸化マルトペンタオース）についてのＣａＣｏ−２バイオアベイラビリティースクリーニングにおける細胞層の状態を、経上皮電気抵抗により測定した値として示すグラフである。 胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされたフコイダンβ−シクロデキストリンについてのＣａＣｏ−２バイオアベイラビリティースクリーニングで得られた吸収量データの例を示すグラフである。 胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされたフコイダン硫酸化マルトペンタオースについてのＣａＣｏ−２バイオアベイラビリティースクリーニングで得られた吸収量データの例を示すグラフである。

関連する定義
本発明を記載するに際し、次に挙げる用語を用いることになるが、これらの用語は、以下に示すとおりに定義されるものとする。

本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」には、内容からそうでないことが明確に示されていない限り、複数の指示物が含まれることに注意しなければならない。したがって、例えば、「ａｎ ＮＡＳＰ」と言えば、所望により、２つ以上のＮＡＳＰの混合物が含まれることがある。

「ＮＡＳＰ」は、本明細書において使用する場合、本明細書に記載する多様な凝血アッセイのいずれかにおいて非抗凝固及び抗凝固活性を呈する硫酸化多糖（ＳＰ）を指す。ＮＡＳＰは、天然の硫酸化多糖（例えば、生物源から抽出されたもの）であっても合成の硫酸化多糖であってもよく、後者の場合、硫酸化多糖は、合成法（例えば化学合成）により部分的又は完全に作製されたものである。活性の１つの尺度は、ＮＡＳＰにより実証される凝血時間を、ヘパリンにより示される抗凝固活性と比較することである。例えば、対象とするＮＡＳＰは、希釈プロトロンビン時間（ｄＰＴ）又は活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）の凝血アッセイにおいて、未分画ヘパリン（分子量の範囲は８，０００〜３０，０００ダルトン、平均１８，０００ダルトン）の１モル当たりの抗凝固活性の３分の１を超えない、例えば１０分の１未満の抗凝固活性を呈する。したがって、対象とするＮＡＳＰは、本明細書において提供される方法及び組成物を用いることにより、ヘパリンとの比較で２倍以上低い抗凝固活性、例えばヘパリンとの比較で５倍以上低い抗凝固活性、例えばヘパリンとの比較で１０倍以上低い抗凝固活性、例えばヘパリンとの比較で２５倍以上低い抗凝固活性、例えばヘパリンとの比較で５０倍以上低い抗凝固活性、さらに例えばヘパリンとの比較で１００倍以上低い抗凝固活性を、実証する。

対象とするＮＡＳＰは、分子量が、１０ダルトン〜１，０００，０００ダルトン、例として、例えば１００ダルトン〜９００，０００ダルトン、例えば５００ダルトン〜５００，０００ダルトン、例えば１０００ダルトン〜２５０，０００ダルトン、さらに例えば５０００ダルトン〜１５０，０００ダルトンの範囲であってもよい。ＮＡＳＰは、平均分子量が、約１０ダルトン〜約５００，０００ダルトン、例えば約１００ダルトン〜約３００，０００ダルトン、例えば１０００ダルトン〜２５０，０００ダルトン、さらに例えば１０００ダルトン〜１５０，０００ダルトンの範囲であってもよい。

いくつかの場合において、対象とするＮＡＳＰとしては、限定されるものではないが、Ｎ−アセチルヘパリン（ＮＡＨ）、Ｎ−アセチル−デ−Ｏ−硫酸化ヘパリン（ＮＡ−ｄｅ−ｏ−ＳＨ）、デ−Ｎ−硫酸化ヘパリン（Ｄｅ−ＮＳＨ）、デ−Ｎ−硫酸化アセチル化ヘパリン（Ｄｅ−ＮＳＡＨ）、過ヨウ素酸塩酸化ヘパリン（ＰＯＨ）、化学的硫酸化ラミナリン（ＣＳＬ）、化学的硫酸化アルギン酸（ＣＳＡＡ）、化学的硫酸化ペクチン（ＣＳＰ）、硫酸デキストラン（ＤＸＳ）、ヘパリン由来オリゴ糖（ＨＤＯ）、ポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）、硫酸化マルトペントース、硫酸化β−シクロデキストリン、硫酸化６−カルボキシイコデキストリン、及びそれらの誘導体を挙げることができる。特定の場合において、ＮＡＳＰは、フコイダンである。例えば、フコイダンは、フコイダン５３０７００２、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、最大分子量ピーク１２６．７ｋＤ；フコイダンＶＧ４９、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、５３０７００２を加水分解した試料で、分子量が低下しており最大分子量ピークは２２．５ｋＤ；フコイダンＶＧ５７、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ、高チャージ（高硫酸化、脱アセチル化されたもの）；フコイダンＧＦＳ（５５０８００５）、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ、脱パイロジェン化されたもの；フコイダンＧＦＳ（Ｌ／ＦＶＦ−０１０９１）、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、脱パイロジェン化されたもの、最大分子量ピーク１２５ｋＤ；フコイダンＧＦＳ（Ｌ／ＦＶＦ−０１０９２）、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、脱パイロジェン化されたもの、最大分子量ピーク２６０ｋＤ；フコイダンＧＦＳ（Ｌ／ＦＶＦ−０１０９３）、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、加水分解され脱パイロジェン化されたもの、最大分子量ピーク３６ｋＤ；Ｍａｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ｅｃｋｌｏｎｉａ ｒａｄｉａｔａ抽出物；Ｍａｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ｅｃｋｌｏｎｉａ ｍａｘｉｍａ抽出物；Ｍａｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ｍａｃｒｏｃｙｓｔｉｓ ｐｙｒｉｆｅｒａ抽出物；Ｍａｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ｉｍｍｕｎｅ ｔｒｉａｌ Ｆｕｃｏｉｄａｎ Ｂｌｅｎｄ；及びそれらの組合せであってもよい。

胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされたＮＡＳＰは、出血性障害（例えば、凝固因子の欠乏に伴う出血性障害）の治療において止血を改善するために、又は、抗凝固薬の効果を逆転させるために、とりわけ、胃腸系による吸収の促進が必要である若しくは望ましいときに、本発明の方法において使用され得る。ＮＡＳＰが凝血を促進し出血を抑制する能力は、多様なｉｎ ｖｉｔｒｏ凝血アッセイ（例えば、ＴＦＰＩ−ｄＰＴ、トロンビン生成アッセイ及びトロンボエラストグラフィー（ＴＥＧ）アッセイ）、並びにｉｎ ｖｉｖｏ出血モデル（例えば、血友病のマウス又はイヌを用いた断尾、横切断、全血凝血時間、又は表皮出血時間の決定）を用いて決定され得る。例えば、ＰＤＲ Ｓｔａｆｆ．Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ、２００４、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、（１９７６）、Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．、９、５７５〜５８０ページ；Ｎｏｒｄｆａｎｇら、（１９９１）、Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ．、６６、４６４〜４６７ページ；Ｗｅｌｓｃｈら、（１９９１）、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、６４、２１３〜２２２ページ；Ｂｒｏｚｅら、（２００１）、Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ、８５、７４７〜７４８ページ；Ｓｃａｌｌａｎら、（２００３）、Ｂｌｏｏｄ、１０２、２０３１〜２０３７ページ；Ｐｉｊｎａｐｐｅｌｓら、（１９８６）、Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．、５５、７０〜７３ページ；及びＧｉｌｅｓら、（１９８２）、Ｂｌｏｏｄ、６０、７２７〜７３０ページ、及び本明細書の実施例を参照のこと。

「凝固促進剤」は、本明細書においては、その従来の意味で使用され、血塊形成を開始又は加速させることが可能な任意の因子又は試薬を指す。本発明の凝固促進剤としては、限定されるものではないが、内因性凝固経路又は外因性凝固経路の任意の活性化因子、例えば、第Ｘａ因子、第ＩＸａ因子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、及びＶＩＩＩａ、プレカレクレイン、高分子量キニノゲン、組織因子、第ＶＩＩａ因子、及び第Ｖａ因子から成る群から選択される凝血因子が挙げられ、並びに、凝血を促進する他の試薬としては、カリクレイン、ＡＰＴＴ開始剤（すなわち、リン脂質及び接触活性化剤を含有する試薬）、ラッセルクサリヘビ（Ｒｕｓｓｅｌ’ｓ ｖｉｐｅｒ）毒（ＲＶＶ時間）、及びトロンボプラスチン（ｄＰＴ用）が挙げられる。いくつかの実施形態において、接触活性化剤を凝固促進試薬として用いてもよい。例えば、接触活性化剤としては、微粉化されたシリカ粒子、エラグ酸、スルファチド、カオリンなどを挙げることができる。凝固促進剤は、未精製の天然の抽出物、血液、若しくは血漿試料に由来し、単離され実質的に精製されているものでも、合成、又は組換えによるものでもよい。凝固促進剤としては、天然に存在する凝血因子、又は、生物活性を保持する（すなわち、凝血を促進する）その断片、変異体、若しくは共有結合的に修飾された誘導体を挙げることができる。

用語「多糖」は、本明細書において使用する場合、２つ以上の共有結合的に連結された糖残基を含有するポリマーを指す。糖残基は、例えば、グリコシド、エステル、アミド、又はオキシムの連結部分により連結されていてもよい。多糖の平均分子量は、例えば１００〜１，０００，０００ダルトン以上、例えば１００〜５００，０００ダルトン以上、例えば１０００〜２５０，０００ダルトン以上、例えば１０００〜１００，０００ダルトン以上、例えば１０，０００〜５０，０００ダルトン以上の範囲であるなど、大きく異なっていてもよい。多糖は、直鎖状（すなわち直線状）でも分枝状でもよく、又は、直線状部分及び分枝状部分の不連続領域を含有してもよい。さらに、多糖は、より大きい多糖の分解（例えば加水分解）により生成された多糖の断片であってもよい。分解は、多糖を酸、塩基、熱、酸化体、又は酵素で処理することで断片化された多糖を得るなどの任意の便利なプロトコールにより達成できる。多糖は、化学変化させられていても修飾されていてもよく、そのような変化や修飾としては、限定されるものではないが、硫酸化、ポリ硫酸化、エステル化、及びメチル化が挙げられる。

分子量は、本明細書において論考する場合、数平均分子量又は重量平均分子量のどちらでも表現できる。特に指示しない限り、本明細書において分子量と言えばすべて、重量平均分子量を指す。数平均及び重量平均どちらの分子量の決定値も、例えば、ゲル浸透クロマトグラフィー法又は他の液体クロマトグラフィー法を用いて測定できる。

用語「〜に由来する」は、本明明細書においては、ある分子の起源を同定するために使用するが、その分子を作る方法（例えば、化学合成法による可能性もあれば、組換え法による可能性もある）を限定することを意味するものではない。

用語「変異体」、「類似体」、及び「突然変異タンパク質」は、出血性障害の治療において所望の活性（例えば凝血活性）を保持する、参照分子の生物活性誘導体を指す。用語「変異体」及び「類似体」は、ポリペプチド（例えば凝血因子）に関する場合、天然のポリペプチドの配列及び構造を有しつつ、天然の分子と比較して１つ若しくは複数のアミノ酸が付加、置換（性質は一般に保存されている）、及び／又は欠失されている化合物（但し、そのような修飾が生物活性を破壊しない場合に限る）であって、以下に定義するように参照分子と「実質的に相同的」である化合物を指す。そのような類似体のアミノ酸配列は、参照配列と高度の配列相同性、例としては、２つの配列をアラインした際に、５０％以上、例えば６０％以上、例えば７０％以上、例えば８０％以上、例えば９０％以上、例えば９５％以上、さらに例えば９９％以上のアミノ酸配列相同性を有する。いくつかの場合において、類似体同士は、同数のアミノ酸を含んでいても置換がなされていることがある。用語「突然変異タンパク質」には、１つ又は複数のアミノ酸様分子を有するポリペプチドがさらに含まれ、そのようなポリペプチドとしては、限定されるものではないが、アミノ及び／又はイミノ分子のみを含有する化合物、１つ又は複数のアミノ酸類似体（例えば、天然に存在しない合成アミノ酸などが挙げられる）を含有するポリペプチド、連結基が置換されているポリペプチド、並びに当技術分野で公知の他の修飾体で、天然に存在するものでも天然に存在しない（例えば合成の）ものでもどちらでもよく、環化された分子、分枝状の分子などが挙げられる。この用語には、１つ又は複数のＮ−置換グリシン残基を含む分子（「ペプトイド」）及び他の合成アミノ酸又はペプチドも含まれる（例えば、ペプトイドの説明については、米国特許第５，８３１，００５号；同第５，８７７，２７８号；及び同第５，９７７，３０１号；Ｎｇｕｙｅｎら、Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．、（２０００）、７、４６３〜４７３ページ；並びにＳｉｍｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、（１９９２）、８９、９３６７〜９３７１ページを参照のこと）。本発明（ｔｈｅ ｉｎｖｅｔｉｏｎ）の実施形態において、類似体及び突然変異タンパク質は、天然の分子と少なくとも同じ凝血活性を有する。

先に論考したように、類似体は、保存的な置換、すなわち、その側鎖に、近縁のアミノ酸ファミリー内で行われる保存的な置換を含んでいてもよい。具体的には、アミノ酸は、一般に４つのファミリー、すなわち、（１）酸性アミノ酸：アスパラギン酸及びグルタミン酸、（２）塩基性アミノ酸：リシン、アルギニン、ヒスチジン、（３）非極性アミノ酸：アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、並びに（４）非荷電極性アミノ酸：グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシンに分けられる。フェニルアラニン、トリプトファン、及びチロシンは、いくつかの場合においては、芳香族アミノ酸に分類される。例えば、ロイシンをイソロイシン若しくはバリンで、アスパラギン酸をグルタミン酸で、トレオニンをセリンで、個々に置き換えても、又は、あるアミノ酸を、構造的に近縁のアミノ酸で、同じように保存的に置き換えても、生物活性に大きな影響はないであろう。例えば、対象とするポリペプチドは、最大約５〜１０箇所の保存的若しくは非保存的なアミノ酸置換を含んでいてもよく、さらには最大約１５〜２５箇所、又は５〜２５の間の任意の整数箇所の保存的又は非保存的なアミノ酸置換を含んでいてもよいが、但し、分子の所望の機能が損なわれていない場合に限る。

「誘導体」とは、対象とする参照分子又はその類似体に任意の適当な修飾、例えば、硫酸化、アセチル化、グリコシル化、リン酸化、ポリマーコンジュゲーション（例えば、ポリエチレングリコールとの）、又は他の形での外来部分の付加がなされていることを意味するが、但し、参照分子の所望の生物活性（例えば、凝血活性、ＴＦＰＩ活性阻害性）が保持されているものに限る。例えば、多糖は、１つ又は複数の有機又は無機の基で誘導体化されていてもよい。例としては、限定されるものではないが、少なくとも１つのヒドロキシル基中で、別の部分（例えば、硫酸基、カルボキシル基、リン酸基、アミノ基、ニトリル基、ハロ基、シリル基、アミド基、アシル基、脂肪族基、芳香族基、若しくは糖基）での置換がなされている多糖、又は、環酸素がイオウ、窒素、メチレン基などにより置き換えられている多糖が挙げられる。多糖は、例えば、凝固促進機能を改善するために、化学変化させられていてもよい。そのような修飾としては、限定されるものではないが、硫酸化、ポリ硫酸化、エステル化、及びメチル化を挙げることができる。

「断片」とは、インタクトな完全長配列及び構造の一部を含有する分子を意味する。いくつかの場合において、多糖の断片は、より大きい多糖の分解（例えば加水分解）により生成されてもよい。本発明の多糖の活性断片は、完全長多糖のうちの約２〜２０糖単位、例えば完全長分子のうちの約５〜１０糖単位、さらに例えば２〜完全長分子の糖単位数の間の任意の整数個の糖単位を含んでいてもよいが、但し、その断片が、生物活性、例えば、凝血活性又はＴＦＰＩ活性阻害能力などを保持している場合に限る。ポリペプチドの断片としては、Ｃ末端欠失、Ｎ末端欠失、又は内部欠失している天然のポリペプチドを挙げることができる。特定のタンパク質の活性断片は、いくつかの実施形態において、完全長分子のうちの約５〜１０個又はそれ以上の近接アミノ酸残基、例えば完全長分子のうちの約１５〜２５個又はそれ以上の近接アミノ酸残基、例えば完全長分子のうちの約２０〜５０個又はそれ以上の近接アミノ酸残基、さらに例えば５〜完全長配列のアミノ酸数の間の任意の整数個のアミノ酸を含んでいてもよいが、但し、当該断片が、例えば凝血活性などの生物活性を保持している場合に限る。

「実質的に精製されている」とは、ある物質（例えば、非抗凝固性硫酸化多糖）が、その物質が存在している試料の大部分を当該物質が含むように単離されていることを意味する。例えば、実質的に精製されている試料は、対象とする物質を５０％以上、例えば対象とする物質を６０％以上、例えば対象とする物質を７５％以上、例えば対象とする物質を９０％以上、例えば対象とする物質を９５％以上、さらに例えば対象とする物質を９９％以上、含有する。対象とする多糖、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの精製には任意の便利なプロトコールを用いてもよく、そのようなプロトコールとしては、限定されるものではないが、限外ろ過、選択的沈殿、結晶化、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、及び密度による沈降が挙げられる。

「単離されている」とは、多糖又はポリペプチドに言及する場合、言及対象の分子が、自然において当該分子が見出される生物そのものから分かれており別個であること、又は、同じタイプの他の生物学的巨大分子の実質的な不在下で存在することを意味する。

「相同性」とは、２つのポリペプチド部分間の同一率（％）を意味する。本明細書中で言及する場合、２つのポリペプチド配列は、約５０％以上の配列同一性、例えば６０％以上の配列同一性、例えば７５％以上の配列同一性、例えば８５％以上の配列同一性、例えば９０％以上の配列同一性、例えば９５％以上の配列同一性、さらに例えば９９％以上の配列同一性を呈するとき、互いに「実質的に相同的」である。いくつかの実施形態において、実質的に相同的なポリペプチドは、特定の配列と完全な同一性を有する配列を含んでいる。

「同一性」とは、２つのポリマー配列のサブユニット同士が正確に一致することを意味する。例えば、同一のポリペプチドは、別のポリペプチドとの間でアミノ酸同士が正確に一致するポリペプチドであり、又は、同一のポリヌクレオチドは、別のポリヌクレオチドとの間でヌクレオチド同士が正確に一致するポリヌクレオチドである。同一率（％）は、複数の配列をアラインし、アラインされた２つの配列間の正確なマッチ数を計数し、これを参照配列の長さで割り、その結果に１００を掛けることにより、２つの分子（参照配列と、参照配列との同一率（％）が未知である配列）間の配列情報の直接比較により決定できる。２つのポリマー配列間の同一率（％）を決定するには、任意の便利なプロトコール、例えば、ＡＬＩＧＮ、Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．、収録先：Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ編、５、付録３、３５３〜３５８ページ、Ｎａｔｉｏｎａｌ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣなどを用いてもよく、これは、ペプチド解析用のＳｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎの局地的相同性アルゴリズム、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．、２、４８２〜４８９ページ、１９８１と適合する。

「対象」とは、脊索動物亜門（ｓｕｂｐｈｙｌｕｍ ｃｈｏｒｄａｔａ）の任意の構成動物を意味し、例としては、限定するものではないが、ヒト及び他の霊長動物（非ヒト霊長動物、例えばチンパンジー及び他の類人猿及びサル種を含む）；産業動物、例えばウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、及びウマ；家庭で飼われる哺乳動物、例えばイヌ及びネコ；実験動物、例として齧歯動物、例えばマウス、ラット、及びモルモット；鳥、例として家庭で飼われる鳥、野鳥、及び猟鳥、例えばニワトリ、七面鳥、及び他の家禽、アヒル、ガチョウなどが挙げられる。この用語は、特定の年齢を表すものではない。したがって、成熟した個体と生まれたばかりの個体は、どちらも対象とされる。

用語「患者」は、その従来の意味で使用され、本発明のＮＡＳＰの投与により予防又は治療できる病態に罹患している又は罹りやすい生体を指し、ヒト及び非ヒト動物の両方が含まれる。

「生体試料」とは、対象から分離された組織又は体液の試料を意味し、限定されるものではないが例えば、血液、血漿、血清、糞便、尿、骨髄、胆汁、脊髄液、リンパ液、皮膚試料、皮膚、気道、腸管、及び泌尿生殖路の外分泌物、涙、唾液、乳、血球、器官、生検試料、さらに、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物の構成要素（限定されるものではないが例えば、培養培地中で細胞及び組織が成長した結果得られる馴化培地）の試料、例えば、組換え細胞、及び細胞成分などが挙げられる。

「治療上有効な用量又は量」とは、本明細書に記載するとおりに投与した際に、所望の治療応答、例えば出血の減少又は凝血時間の短縮などをもたらす量を意味する。

「出血性障害」とは、過剰な出血を伴う任意の障害、例えば、先天性凝固障害、後天性凝固障害、抗凝固薬の投与又は外傷により誘導される出血病態を意味する。以下で論考するように、出血性障害としては、限定されるものではないが、血友病Ａ、血友病Ｂ、ヴォン・ヴィレブランド病、突発性血小板減少症、１つ又は複数の接触因子、例えば第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、プレカリクレイン、及び高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）の欠乏、臨床的に意義のある出血に関連する１つ又は複数の因子、例えば第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子（低プロトロンビン血症）、及びヴォン・ヴィレブランド因子の欠乏、ビタミンＫ欠乏、フィブリノゲン障害、例えば無フィブリノゲン血症、低フィブリノゲン血症、及び異常フィブリノゲン血症、α_２−抗プラスミン欠乏、並びに過剰な出血、例えば、肝疾患、腎疾患、血小板減少症、血小板機能不全、血腫、内出血、関節血症、外科手術、外傷、低体温、月経、及び妊娠を原因とする過剰な出血を挙げることができる。

詳細な説明
本発明の態様は、対象における血液凝固を促進するための方法を含む。特定の実施形態による方法の実行においては、ある量の非抗凝固性硫酸化多糖（ＮＡＳＰ）を、胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで、対象における血液凝固を促進するのに十分な様式で、該対象に経口投与する。本発明の方法を実行するための組成物及びキットも記載する。

本発明をより詳細に記載する前に、本発明は、本明細書に記載する特定の実施形態に限定されず、したがって、実施形態は変化し得ることを理解されたい。本明細書において使用する術語は、特定の実施形態を記載することのみを目的としたものであり、そのような術語は、限定的であることを意図したものではないことも理解されたい。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される。特に定義されない限り、本明細書において使用するすべての専門用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に通常理解される意味と同じ意味を有する。値の範囲を示す場合、当該範囲の上限値と下限値との間にある各介在値（文脈によりそうでないことが明確に述べられていない限り、下限値の単位の１０分の１まで）、及び、その記載された範囲における任意の他の記載値又は介在値は、本発明内に包含されることは理解される。これらのより小さい範囲の上限値及び下限値が、そのより小さい範囲に独立に含まれることがあり、このような値も本発明内に包含され、記載された範囲において具体的に除外される上下限値があれば、それに支配される。記載された範囲に上下限値の一方又は両方が含まれる場合、その含まれる上下限値のどちらか又は両方を除外する範囲も、本発明に含まれる。本明細書においては、用語「約」が前に付いている数値を用いて提示される範囲もある。用語「約」は、本明明細書においては、この用語が前に付いている数そのもの、並びに、この用語が前に付いている数の近似数又は概数について文字による裏付けを与えるために使用される。ある数が、具体的に記載された数の近似数又は概数であるかどうかを決定する際、記載されていない近似数又は概数が、具体的に記載された数と、その数が提示される文脈においては実質的な等価値を示す数である場合がある。本明細書において引用するすべての刊行物、特許、及び特許出願は、参照により組み込まれることが個々の刊行物、特許、又は特許出願それぞれについて具体的且つ個々に指示されている場合と同程度まで、参照により本明細書に組み込まれる。さらに、引用する刊行物、特許、又は特許出願はそれぞれ、当該刊行物がその関連で引用される主題を開示及び記載するために参照により本明細書に組み込まれる。いかなる刊行物の引用も、本願の出願日に先立つ刊行物を開示するために行うものであり、本明細書に記載する本発明が、先行発明を理由にそのような刊行物に先行する権利がないと認めたものと解釈されるべきではない。さらに、記載された刊行日は実際の刊行日とは異なる場合もあるであろうから、実際の刊行日は独立に確認する必要があり得る。

特許請求の範囲は、一切の任意選択的な要素を除外するように書かれる場合があることは注意されたい。したがって、本記載は、特許請求の範囲の要素の記載、又は「否定的な」制限の使用との関連で、「単独で」、「のみ」などの排他的な術語の使用についての先行する基礎として機能することを意図したものである。本開示を読めば当業者には明白であろうが、本明細書において記載及び例証されている個々の実施形態のそれぞれは、本発明の範囲又は精神から逸脱することなく、他のいくつかの実施形態のうちいずれかの特徴と容易に分ける又は組み合わせることができる別個の構成要素及び特徴を有する。記載された方法はすべて、記載された事象の順序で実施してもよく、論理的に可能な任意の他の順序で実施してもよい。本発明の実行又は試験に際しては、本明細書に記載された方法及び材料と類似又は等価な任意の方法及び材料を使用することもできるが、代表的な例証的な方法及び材料をこれから記載する。

本発明をさらに記載するに際し、ＮＡＳＰを胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで経口投与することにより対象における血液凝固を促進するための方法を、まず、より詳細に記載する。次に、本発明の方法を実行するための組成物及びキットも記載する。

対象における血液凝固を促進するための方法
先に要約したように、本発明の態様は、ある量のＮＡＳＰを胃腸管上皮浸透促進剤との組合せで有する組成物を対象に経口投与することにより血液凝固を促進するための方法を含む。用語「血液凝固を促進すること」は、その従来の意味で使用され、血液凝固の開始を加速させること（すなわち、凝固が始まる時間の長さを短縮すること）、並びに、対象の血液凝固の全体的な速度を加速させること（すなわち、血液凝固が完了するのに要する時間の長さを短縮すること）を指す。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、血液凝固の開始を加速させる。例えば、本発明の方法は、血液が凝固し始めるのに要する時間の長さを、適当な対照との比較で、５％以上、例えば１０％以上、例えば２５％以上、例えば５０％以上、例えば７５％以上、例えば９０％以上、例えば９５％以上、短縮させ得る。他の実施形態において、本発明の方法は、血液凝固の速度を増加させる。例えば、本発明の方法は、血液凝固の速度を、適当な対照との比較で、２％以上、例えば５％以上、例えば１０％以上、例えば２５％以上、例えば５０％以上、例えば７５％以上、例えば１００％以上、例えば２００％以上、さらに例えば５００％以上、増加させ得る。

本開示の実施形態において、凝固促進量のＮＡＳＰは、胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで経口投与される。対象の生理機能によるが、語句「胃腸管上皮の」は、本明細書において使用する場合、胃及び腸管などの消化管（例えば、十二指腸、空腸、回腸）の上皮組織を指し、食道の下部、直腸、及び肛門など、体の胃腸管機能に関わる他の構造をさらに含むことがある。胃腸管浸透促進剤とは、経口投与されると、胃腸系により吸収されるＮＡＳＰの量を増加させる化合物を意味する。さらに、胃腸管浸透促進剤は、胃腸管上皮を通したＮＡＳＰの吸収の開始を加速させる（すなわち、吸収が始まるのに要する時間の長さを短縮する）と共に、対象の胃腸管上皮を越えたＮＡＳＰの輸送の全体的な速度を加速させる（すなわち、胃腸系によるＮＡＳＰの吸収が完了するのに要する時間の長さを短縮する）こともできる。

いくつかの実施形態において、胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、胃腸系により吸収されるＮＡＳＰの量を増加させる。例えば、胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、胃腸系により吸収されるＮＡＳＰの量を、適当な対照との比較で、５％以上、例えば１０％以上、例えば２５％以上、例えば５０％以上、例えば７５％以上、例えば９０％以上、例えば９５％以上、増加させ得る。他の実施形態において、胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、胃腸管上皮を通したＮＡＳＰの吸収の開始を加速させる。例えば、本発明の胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、ＮＡＳＰの吸収が開始するのに要する時間の長さを、適当な対照との比較で、５％以上、例えば１０％以上、例えば２５％以上、例えば５０％以上、例えば７５％以上、例えば９０％以上、例えば９５％以上、短縮させ得る。また他の実施形態において、本発明の胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、胃腸系によるＮＡＳＰの吸収の速度を増加させる。例えば、胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、ＮＡＳＰの吸収の速度を、適当な対照との比較で、２％以上、例えば５％以上、例えば１０％以上、例えば２５％以上、例えば５０％以上、例えば７５％以上、例えば１００％以上、例えば２００％以上、さらに例えば５００％以上、増加させ得る。いくつかの場合において、本発明の胃腸管上皮浸透促進剤は、以下にさらに詳細に記載するように、Ｃａｃｏ−２細胞モデルにより決定した値としてのＮＡＳＰの吸収量を増加させ得る。例えば、本発明の胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、Ｃａｃｏ−２細胞モデルにより決定した値としての吸収量を、適当な対照との比較で、２％以上、例えば５％以上、例えば１０％以上、例えば２５％以上、例えば５０％以上、例えば７５％以上、例えば１００％以上、例えば２００％以上、さらに例えば５００％以上、増加させ得る。

本発明の実施形態において、胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、特定の血液凝固障害、対象の生理機能、及び、胃腸系による吸収の所望の促進程度によって変動し得る。いくつかの実施形態において、胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、タイトジャンクションモジュレーターである。用語「タイトジャンクション」は、その従来の意味で用いられ、隣接する細胞同士の膜が結合し合っている、細胞が密接に結び付いた区域を指す。したがって、特定の実施形態において、本発明の方法は、凝固促進量のＮＡＳＰを、胃腸管上皮のタイトジャンクションを通したＮＡＳＰの浸透を調整する化合物との組合せで有する組成物を経口投与することを含む。「調整する」とは、胃腸管上皮のタイトジャンクションを通したＮＡＳＰの浸透を改変する又は増加させることを意味する。したがって、タイトジャンクションモジュレーターは、胃腸系によるＮＡＳＰの吸収を改変する又は増加させる。本発明の実施形態において、タイトジャンクションモジュレーターとしては、限定されるものではないが、酵素、胆汁酸、多糖、脂肪酸及びその塩、並びにそれらの任意の組合せを挙げることができる。

いくつかの場合において、タイトジャンクションモジュレーターは、多糖である。例えば、多糖であるタイトジャンクションモジュレーターは、キトサンであってもよい。キトサンは、本明細書において使用する場合、キチンのＮ−デアシレーションにより生成される、２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノースと２−アミノ−β−Ｄ−グルコピラノースとの直線状のコポリマーを指す。多糖であるタイトジャンクションモジュレーターとしては、キトサンの誘導体、中でも、例えば、Ｎ−アルキルキトサン、アシル化キトサン、チオール化キトサン、リン酸化キトサン、キトサンシクロデキストリン、Ｎ−（アミノアルキル）キトサン、スクシニルキトサン、及びオクタノイルキトサンを挙げることもできる。

他の場合において、タイトジャンクションモジュレーターは、胆汁酸である。用語「胆汁酸」は、その従来の意味で使用され、哺乳動物の胆汁中で通常見出されるステロイド酸及びその塩を指す。適当な胆汁酸としては、限定されるものではないが、中でも、コール酸（コラート）、デオキシコール酸（デオキシコラート）、ケノデオキシコール酸（ケノデオキシコラート）、ウルソデオキシコール酸（ウルソデオキシコラート）、グリココール酸（グリココラート）、タウロコール酸（タウロコラート）、及びリトコール酸（リトコラート）を挙げることができる。

他の場合において、タイトジャンクションモジュレーターは、酵素である。例えば、酵素であるタイトジャンクションモジュレーターは、プロテアーゼ、例えば、ブロメライン又はブロメラインの酵素断片であってもよい。ブロメラインは、本明細書において使用する場合、Ａｎａｎａｓ ｃｏｍｏｓｕｓの果実、茎、及び葉に通常由来する酵素群を指し、システインプロテアーゼ、アミラーゼ、酸性ホスファターゼ、ペルオキシダーゼ、及びセルラーゼなどの要素が含まれることもある。

また他の場合において、タイトジャンクションモジュレーターは、脂肪酸及びその脂肪酸塩である。脂肪酸である本発明のタイトジャンクションモジュレーターは、さまざまなものがあり得、例としては、中鎖脂肪酸、例えばＣ８脂肪酸及びその脂肪酸塩（カプリル酸及びその塩）、Ｃ１０脂肪酸及びその脂肪酸塩（カプリン酸及びその塩）、並びにＣ１２脂肪酸及びその脂肪酸塩（ラウリン酸及びその塩）などのうち任意の１つ又はそれらの組合せを挙げることができる。特定の場合において、例えば、脂肪酸であるタイトジャンクションモジュレーターは、カプリン酸ナトリウムである。

ＮＡＳＰとの組合せで投与される胃腸管上皮バリア浸透促進剤の濃度は、所望により、効果に応じて変動させることができる。胃腸管上皮バリア浸透促進剤によっては、濃度は、本組成物の総質量の０．０１％以上、本組成物の総質量の例えば０．１％以上、例えば１％以上、例えば２％以上、例えば５％以上、例えば１０％以上、例えば１５％以上、例えば２０％以上、例えば２５％以上、さらに例えば５０％以上であってもよい。他の実施形態において、ＮＡＳＰとの組合せで投与される胃腸管上皮バリア浸透促進剤の濃度は、０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、例えば０．０５ｍｇ／ｍＬ以上、例えば０．１ｍｇ／ｍＬ以上、例えば１ｍｇ／ｍＬ以上、さらに例えば５ｍｇ／ｍＬ以上である。また他の実施形態において、ＮＡＳＰとの組合せで投与される胃腸管上皮バリア浸透促進剤の濃度は、０．１ｍＭ以上、例えば０．５ｍＭ以上、例えば１ｍＭ以上、例えば５ｍＭ以上、例えば１０ｍＭ以上、例えば２５ｍＭ以上、さらに例えば５０ｍＭ以上である。特定の実施形態においては、２つ以上の胃腸管上皮バリア浸透促進剤が併用される。例えば、２つ以上のタイトジャンクションモジュレーター、例えば３つ以上のタイトジャンクションモジュレーター、さらに例えば４つ以上のタイトジャンクションモジュレーターをＮＡＳＰとの組合せで用いてもよい。タイトジャンクションモジュレーターの任意の組合せ、例えば、他の組合せの中でも、多糖とプロテアーゼ、脂肪酸と多糖、多糖と胆汁酸、多糖と脂肪酸と胆汁酸、２つの異なる多糖、又は２つの異なる胆汁酸などの組合せを用いてもよい。２つ以上の胃腸管上皮バリア浸透促進剤を用いる場合、各胃腸管上皮バリア浸透促進剤の質量百分率は、本組成物の総質量の１％以上、本組成物の総質量の例えば２％以上、例えば５％以上、例えば１０％以上、例えば２５％以上、さらに例えば５０％以上の範囲で変動し得る。例えば、２つの胃腸管上皮バリア浸透促進剤を用いる場合、第１の胃腸管上皮バリア浸透促進剤と第２の胃腸管上皮バリア浸透促進剤との質量比は、１：１〜１：２．５、１：２．５〜１：５、１：５〜１：１０、１：１０〜１：２５、１：２５〜１：５０、１：５０〜１：１００、１：１００〜１：１５０、１：１５０〜１：２００、１：２００〜１：２５０、１：２５０〜１：５００、１：５００〜１：１０００の間、又はこの範囲で、変動し得る。例えば、第１の胃腸管上皮バリア浸透促進剤対第２の胃腸管上皮バリア浸透促進剤の質量比は、１：１〜１：１０、１：５〜１：２５、１：１０〜１：５０、１：２５〜１：１００、１：５０〜１：５００、又は１：１００〜１：１０００の間であってもよい。いくつかの実施形態において、第２の胃腸管上皮バリア浸透促進剤対第１の胃腸管上皮バリア浸透促進剤の質量比は、１：１〜１：２．５、１：２．５〜１：５、１：５〜１：１０、１：１０〜１：２５、１：２５〜１：５０、１：５０〜１：１００、１：１００〜１：１５０、１：１５０〜１：２００、１：２００〜１：２５０、１：２５０〜１：５００、１：５００〜１：１０００の間、又はこの範囲である。例えば、第２の胃腸管上皮バリア浸透促進剤対第１の胃腸管上皮バリア浸透促進剤の質量比は、１：１〜１：１０、１：５〜１：２５、１：１０〜１：５０、１：２５〜１：１００、１：５０〜１：５００、又は１：１００〜１：１０００の間であってもよい。特定の場合において、胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、キトサン及びブロメラインを含む。キトサン及びブロメラインを用いる場合、キトサンとブロメラインとの質量比は、１：１〜１：２．５、１：２．５〜１：５、１：５〜１：１０、１：１０〜１：２５、１：２５〜１：５０、１：５０〜１：１００、１：１００〜１：１５０、１：１５０〜１：２００、１：２００〜１：２５０、１：２５０〜１：５００、１：５００〜１：１０００の間、又はこの範囲で、変動し得る。例えば、キトサン対ブロメラインの質量比は、１：１〜１：１０、１：５〜１：２５、１：１０〜１：５０、１：２５〜１：１００、１：５０〜１：５００、又は１：１００〜１：１０００の間であってもよい。いくつかの実施形態において、ブロメライン対キトサンの質量比は、１：１〜１：２．５、１：２．５〜１：５、１：５〜１：１０、１：１０〜１：２５、１：２５〜１：５０、１：５０〜１：１００、１：１００〜１：１５０、１：１５０〜１：２００、１：２００〜１：２５０、１：２５０〜１：５００、１：５００〜１：１０００の間、又はこの範囲である。例えば、ブロメライン対キトサンの質量比は、１：１〜１：１０、１：５〜１：２５、１：１０〜１：５０、１：２５〜１：１００、１：５０〜１：５００、又は１：１００〜１：１０００の間であってもよい。

キトサンとブロメラインとの組合せを用いる場合、特定の実施形態において、キトサンの濃度は、約０．１％〜約５％、例えば約０．１５％〜約４．５％、例えば０．２％〜約４％、例えば約０．２５％〜約３．５％、例えば０．３％〜約３％、例えば０．５％〜約２．５％、さらに例えば約０．５％〜１．５％の範囲で変動し得る。同様に、キトサンとブロメラインとの組合せを用いる場合、特定の実施形態において、ブロメラインの濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約１．０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．２ｍｇ／ｍＬ〜約０．９ｍｇ／ｍＬ、例えば０．２５ｍｇ／ｍＬ〜約０．７５ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約０．６ｍｇ／ｍＬ、さらに例えば約０．４ｍｇ／ｍＬ〜約０．５ｍｇ／ｍＬの範囲で変動し得る。したがって、これらの実施形態において、方法は、ＮＡＳＰをキトサンとブロメラインの両方との組合せで投与することを含む。例として、ＮＡＳＰは、天然又は合成のＮＡＳＰ、例えば、Ｎ−アセチルヘパリン（ＮＡＨ）、Ｎ−アセチル−デ−Ｏ−硫酸化ヘパリン（ＮＡ−ｄｅ−ｏ−ＳＨ）、デ−Ｎ−硫酸化ヘパリン（Ｄｅ−ＮＳＨ）、デ−Ｎ−硫酸化アセチル化ヘパリン（Ｄｅ−ＮＳＡＨ）、過ヨウ素酸塩酸化ヘパリン（ＰＯＨ）、化学的硫酸化ラミナリン（ＣＳＬ）、化学的硫酸化アルギン酸（ＣＳＡＡ）、化学的硫酸化ペクチン（ＣＳＰ）、硫酸デキストラン（ＤＸＳ）、ヘパリン由来オリゴ糖（ＨＤＯ）、ポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）、硫酸化マルトペントース、硫酸化β−シクロデキストリン、硫酸化６−カルボキシイコデキストリン、及びそれらの誘導体を含め、先に記載したものなどであってもよい。例として、ＮＡＳＰは、フコイダン、例えばフコイダン５３０７００２、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、最大分子量ピーク１２６．７ｋＤ；フコイダンＶＧ４９、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、５３０７００２を加水分解した試料で、分子量が低下しており最大分子量ピークは２２．５ｋＤ；フコイダンＶＧ５７、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ、高チャージ（高硫酸化、脱アセチル化されたもの）；フコイダンＧＦＳ（５５０８００５）、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ、脱パイロジェン化されたもの；フコイダンＧＦＳ（Ｌ／ＦＶＦ−０１０９１）、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、脱パイロジェン化されたもの、最大分子量ピーク１２５ｋＤ；フコイダンＧＦＳ（Ｌ／ＦＶＦ−０１０９２）、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、脱パイロジェン化されたもの、最大分子量ピーク２６０ｋＤ；フコイダンＧＦＳ（Ｌ／ＦＶＦ−０１０９３）、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、加水分解され脱パイロジェン化されたもの、最大分子量ピーク３６ｋＤ；Ｍａｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ｅｃｋｌｏｎｉａ ｒａｄｉａｔａ抽出物；Ｍａｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ｅｃｋｌｏｎｉａ ｍａｘｉｍａ抽出物；Ｍａｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ｍａｃｒｏｃｙｓｔｉｓ ｐｙｒｉｆｅｒａ抽出物；Ｍａｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ｉｍｍｕｎｅ ｔｒｉａｌ Ｆｕｃｏｉｄａｎ Ｂｌｅｎｄ；及びそれらの組合せであってもよい。先述のように、特定の場合において、キトサンの濃度は、約０．１％〜約５％の範囲、例えば約３％であり、ブロメラインの濃度は、０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬの範囲、例えば約０．５ｍｇ／ｍＬである。

２つ以上の胃腸管上皮バリア浸透促進剤を用いる場合、いくつかの実施形態において、その組合せは、胃腸管上皮バリア浸透促進剤の相乗的に有効な組合せである。用語「相乗的に有効な」は、複数の胃腸管上皮バリア浸透促進剤を組み合わせると、個々の胃腸管上皮バリア浸透促進剤を足し合わせたものにより得られると思われるより大きい効果（すなわち、胃腸管上皮バリア浸透を促進する効果）が得られることを意味する。例えば、２つ以上の胃腸管上皮バリア浸透促進剤の組合せは、個々の胃腸管上皮バリア浸透促進剤を足し合わせたものにより得られると思われる効果の２倍以上、個々の胃腸管上皮バリア浸透促進剤を足し合わせたもので達成されると思われる効果の例えば３倍以上、例えば４倍以上、例えば５倍以上、例えば１０倍以上、さらに例えば２５倍以上の効果をもたらす。したがって、２つの胃腸管上皮バリア浸透促進剤が組み合わされる場合、本発明の相乗的に有効な組合せは、２つの個々の胃腸管上皮バリア浸透促進剤を足し合わせたものにより得られると思われる効果の２倍以上、例えば５倍以上、例えば１０倍以上、さらに例えば２５倍以上の効果をもたらす。同様に、３つの胃腸管上皮バリア浸透促進剤が組み合わされる場合、本発明の相乗的に有効な組合せは、３つの個々の胃腸管上皮バリア浸透促進剤を足し合わせたものにより得られると思われる効果の２倍以上、例えば５倍以上、例えば１０倍以上、さらに例えば２５倍以上の効果をもたらす。特定の実施形態において、本発明の相乗的に有効な組合せとしては、キトサンとブロメラインとの組合せが挙げられる。このような実施形態において、キトサンとブロメラインとの組合せは、胃腸管上皮バリアを通した浸透の促進に対して、キトサンとブロメラインとを足し合わせたものにより個々に得られるより大きい効果を及ぼす。例えば、いくつかの場合において、キトサンとブロメラインとの組合せは、胃腸管上皮バリアを通した浸透を、キトサンとブロメラインとを足し合わせたものにより個々に得られるより、２倍以上、例えば５倍以上、例えば１０倍以上、さらに例えば２５倍以上、促進する。特定の場合において、相乗的に有効な組合せとしては、濃度が０．１ｍｇ／ｍＬ〜約０．５ｍｇ／ｍＬの範囲、例えば０．１５ｍｇ／ｍＬ〜約０．４ｍｇ／ｍＬ、さらに例えば０．２５ｍｇ／ｍＬであるブロメラインと、濃度が約１％〜約５％ｗ／ｖの範囲、例えば１．５％〜約４．５％ｗ／ｖ、例えば２％〜約４％ｗ／ｖ、さらに例えば約３％ｗ／ｖであるキトサンとの組合せが挙げられる。特定の実施形態において、ブロメラインとキトサンとの相乗的に有効な組合せとしては、０．５ｍｇ／ｍＬのブロメラインと３％ｗ／ｖのキトサンとの組合せが挙げられる。他の実施形態において、ブロメラインとキトサンとの相乗的に有効な組合せとしては、０．２５ｍｇ／ｍＬのブロメラインと１．５％ｗ／ｖのキトサンが挙げられる。また他の実施形態において、ブロメラインとキトサンとの相乗的に有効な組合せとしては、０．１２ｍｇ／ｍＬのブロメラインと０．７５％ｗ／ｖのキトサンが挙げられる。

本発明の実施形態において、ＮＡＳＰを胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで対象に経口投与することにより血液凝固を促進するための方法が提供される。「対象」とは、血液凝固の促進を受ける人間又は生物を意味する。したがって、本発明の対象としては、限定されるものではないが、ヒト及び他の霊長動物、例えばチンパンジー及び他の類人猿及びサル種；産業動物、例えばウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、及びウマ；家庭で飼われる哺乳動物、例えばイヌ及びネコ；実験動物、例として齧歯動物、例えばマウス、ラット、及びモルモット；鳥、例として家庭で飼われる鳥、野鳥、及び猟鳥、例えばニワトリ、七面鳥、及び他の家禽、アヒル、ガチョウなどを挙げることができる。

いくつかの実施形態において、本方法は、出血性障害、例えば、慢性又は急性の出血性障害、血液因子欠乏を原因とする先天性凝固障害、後天性凝固障害、及び抗凝固薬の投与に対処するために用いてもよい。例えば、出血性障害としては、限定されるものではないが、血友病Ａ、血友病Ｂ、ヴォン・ヴィレブランド病、突発性血小板減少症、１つ又は複数の接触因子、例えば第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、プレカリクレイン、及び高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）の欠乏、臨床的に意義のある出血に関連する１つ又は複数の因子、例えば第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子（低プロトロンビン血症）、及びヴォン・ヴィレブランド因子の欠乏、ビタミンＫ欠乏、フィブリノゲン障害、例えば無フィブリノゲン血症、低フィブリノゲン血症、及び異常フィブリノゲン血症、α_２−抗プラスミン欠乏、並びに過剰な出血、例えば、肝疾患、腎疾患、血小板減少症、血小板機能不全、血腫、内出血、関節血症、外科手術、外傷、低体温、月経、及び妊娠を原因とする過剰な出血を挙げることができる。

他の実施形態において、本方法は、対象において血液凝固を促進して抗凝固薬の効果を逆転させるようにするために用いてもよい。例として、対象は、限定されるものではないが以下に挙げるような抗凝固薬、すなわち、ヘパリン、クマリン誘導体、例えばワルファリン又はジクマロール、ＴＦＰＩ、ＡＴ ＩＩＩ、ループス抗凝固因子、線虫抗凝固ペプチド（ＮＡＰｃ２）、活性部位遮断第ＶＩＩａ因子（第ＶＩＩａｉ因子）、第ＩＸａ因子阻害薬、第Ｘａ因子阻害薬、例えばフォンダパリヌクス、イドラパリヌクス、ＤＸ−９０６５ａ、及びラザキサバン（ＤＰＣ９０６）、第Ｖａ因子及び第ＶＩＩＩａ因子の阻害薬、例えば活性化プロテインＣ（ＡＰＣ）及び可溶性トロンボモジュリン、トロンビン阻害薬、例えばヒルジン、ビバリルジン、アルガトロバン、及びキシメラガトランで治療されていてもよい。特定の実施形態において、対象が使用している抗凝固薬は、凝血因子と結合する抗体、限定されるものではないが例えば、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、ヴォン・ヴィレブランド因子、プレカリクレイン、又は高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）と結合する抗体であってもよい。

本発明の態様は、凝固促進量のＮＡＳＰを胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで有する組成物を対象に経口投与して血液凝固を促進することを含む。先述のように、本発明のＮＡＳＰは、天然ＮＡＳＰであっても合成ＮＡＳＰであってもよい。いくつかの実施形態において、ＮＡＳＰは、天然ＮＡＳＰである。「天然の」とは、当該ＮＡＳＰが、天然に存在する入手源、例えば動物若しくは植物源から見出され又はそれらに由来することを意味し、広い範囲のサブクラス、例えば、ヘパリン、グリコサミノグリカン、フコイダン、カラギーナン、ポリ硫酸ペントサン、デルマタン硫酸及び硫酸デキストランを包含する。いくつかの実施形態において、天然ＮＡＳＰは、生物源から抽出することができる。「生物源」とは、天然に存在する生物、又は生物の一部を意味する。例えば、対象とするＮＡＳＰは、植物、動物、真菌、又は細菌から抽出することができる。とりわけ、対象とするＮＡＳＰは、食用海藻、褐藻、棘皮動物（例えば、ウニ、ナマコ）などから抽出することができる。生物源からＮＡＳＰを抽出するには、任意の便利なプロトコールを用いることができる。例えば、ＮＡＳＰは、他の手順の中でも、酸塩基抽出、酵素的分解、選択的沈殿、ろ過により、生物源から抽出できる。食用海藻及び褐藻などの生物源からＮＡＳＰを抽出及び単離するための方法は、２０１０年２月２５日に出願された同時係属の米国特許出願第１２／４４９，７１２号に詳細に記載されており、同文献の開示内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

特定の実施形態において、本発明の天然ＮＡＳＰとしては、限定されるものではないが、Ｎ−アセチルヘパリン（ＮＡＨ）、Ｎ−アセチル−デ−Ｏ−硫酸化ヘパリン（ＮＡ−ｄｅ−ｏ−ＳＨ）、デ−Ｎ−硫酸化ヘパリン（Ｄｅ−ＮＳＨ）、デ−Ｎ−硫酸化アセチル化ヘパリン（Ｄｅ−ＮＳＡＨ）、過ヨウ素酸塩酸化ヘパリン（ＰＯＨ）、化学的硫酸化ラミナリン（ＣＳＬ）、化学的硫酸化アルギン酸（ＣＳＡＡ）、化学的硫酸化ペクチン（ＣＳＰ）、硫酸デキストラン（ＤＸＳ）、ヘパリン由来オリゴ糖（ＨＤＯ）、ポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）、及びそれらの組合せが挙げられる。いくつかの場合において、ＮＡＳＰは、天然に存在するＮＡＳＰの低分子量の断片であってもよい。他の場合において、天然ＮＡＳＰとしては、天然に存在するＮＡＳＰの生化学的又は化学的な誘導体を挙げることもできる。特定の場合において、天然ＮＡＳＰは、フコイダンである。以下にさらに詳細に記載するように、フコイダンは、天然に存在する複雑な硫酸化多糖化合物であり、特定の食用海藻、褐藻、及び棘皮動物（例えば、ウニ、ナマコ）から抽出することができる。本明細書において使用する場合、用語「フコイダン」は、単一の化学体ではなく、低分子量の硫酸ポリマーである、生物源から抽出された多種多様な部分群を指す。特定の場合において、本発明のフコイダンとしては、限定されるものではないが、フコイダンＧＦＳ５５０８００５、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ、脱パイロジェン化されたもの；フコイダンＧＦＳ５５０８００４、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ；フコイダンＧＦＳ５５０８００３、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ；フコイダン５３０７００２、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、最大分子量ピーク１２６．７ｋＤ；フコイダンＶＧ４９、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、５３０７００２を加水分解した試料で、分子量が低下しており最大分子量ピークは２２．５ｋＤ；フコイダン５３０８００４、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ；フコイダン５３０８００５、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ；フコイダンＬ／ＦＶＦ１０９１、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ；フコイダンＶＧ２０１０９６Ａ、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ；フコイダンＶＧ２０１０９６Ｂ、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ；フコイダンＶＧ５７、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ、高チャージ（高硫酸化、脱アセチル化されたもの）；フコイダンＶＧ５０、Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ ｎｏｄｏｓｕｍ、最大分子量ピーク１４９．７ｋＤ；及びそれらの組合せが挙げられる。

適当なＮＡＳＰの例は、２００５年５月２７日に出願された米国特許出願第１１／１４０，５０４号、現米国特許第７，７６７，６５４号、及び２０１１年１月１３日に出願された米国特許出願第１３／００６，３９６号にさらに詳細に記載されており、これらの文献の開示内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

他の実施形態において、ＮＡＳＰは、合成ＮＡＳＰである。「合成の」とは、当該硫酸化多糖が、人工の方法（例えば化学合成）により部分的又は完全に作製されていることを意味する。例えば、合成ＮＡＳＰは、硫酸化オリゴマー、例えば、硫酸化オリゴ糖又は硫酸化脂肪族化合物であってもよい。特定の場合において、合成ＮＡＳＰは、硫酸化ペントース、硫酸化ヘキソース、又は硫酸化シクロデキストリンである。例えば、合成ＮＡＳＰとしては、限定されるものではないが、硫酸化マルトペントース、硫酸化β−シクロデキストリン、硫酸化６−カルボキシイコデキストリン、及びそれらの誘導体を挙げることができる。

他の適当な合成ＮＡＳＰの例は、２０１２年１月３０日に出願された米国特許仮出願第６１／５９２，５５４号、及び２０１２年１月３０日に出願された米国特許仮出願第６１／５９２，５４９号にさらに詳細に記載されており、これらの文献の開示内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

ＮＡＳＰの所望の効果及び効力によっては、１つ又は複数のＮＡＳＰを一緒に用いてもよい。例えば、２つ以上のＮＡＳＰ、例えば３つ以上のＮＡＳＰ、さらに例えば４つ以上のＮＡＳＰを一緒に用いてもよい。２つ以上のＮＡＳＰを用いる場合、すべてのＮＡＳＰが天然ＮＡＳＰであってもよく、すべてのＮＡＳＰが合成ＮＡＳＰであっても、又はその任意の組合せであってもよい。２つ以上のＮＡＳＰを用いる場合、本組成物中の各ＮＡＳＰの質量百分率は、本組成物の総質量の１％以上、本組成物の総質量の、例えば２％以上、例えば５％以上、例えば１０％以上、例えば２５％以上、さらに例えば５０％以上の範囲で変動し得る。

本発明の実施形態において、ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤との質量比は、１：１〜１：２．５、１：２．５〜１：５、１：５〜１：１０、１：１０〜１：２５、１：２５〜１：５０、１：５０〜１：１００、１：１００〜１：１５０、１：１５０〜１：２００、１：２００〜１：２５０、１：２５０〜１：５００、１：５００〜１：１０００の間、又はこの範囲で、変動し得る。例えば、ＮＡＳＰ対胃腸管上皮バリア浸透促進剤の質量比は、１：１〜１：１０、１：５〜１：２５、１：１０〜１：５０、１：２５〜１：１００、１：５０〜１：５００、又は１：１００〜１：１０００の間であってもよい。いくつかの実施形態において、胃腸管上皮バリア浸透促進剤対ＮＡＳＰの質量比は、１：１〜１：２．５、１：２．５〜１：５、１：５〜１：１０、１：１０〜１：２５、１：２５〜１：５０、１：５０〜１：１００、１：１００〜１：１５０、１：１５０〜１：２００、１：２００〜１：２５０、１：２５０〜１：５００、１：５００〜１：１０００の間、又はこの範囲である。例えば、胃腸管上皮バリア浸透促進剤対ＮＡＳＰの質量比は、１：１〜１：１０、１：５〜１：２５、１：１０〜１：５０、１：２５〜１：１００、１：５０〜１：５００、又は１：１００〜１：１０００の間であってもよい。

ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とは、任意の順序で対象に投与してもよい。いくつかの場合において、ＮＡＳＰは、胃腸管上皮バリア浸透促進剤の経口投与に先立って経口投与される。他の場合において、ＮＡＳＰは、胃腸管上皮バリア浸透促進剤の経口投与の後で経口投与される。また他の場合において、ＮＡＳＰは、胃腸管上皮バリア浸透促進剤の経口投与と併せて経口投与される。ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤の両方が同時に提供される場合、それぞれは、同じ組成物中で提供することも異なる組成物中で提供することもできる。ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とが同時に投与される場合、ＮＡＳＰは、組成物を対象に投与する前に、胃腸管上皮バリア浸透促進剤及び血液凝固因子と混合してもよい。任意の便利な混合プロトコール、例えば乾燥振盪、溶液又は懸濁液の混合、工業的な混合プロトコールなどによるものを用いてもよい。したがって、ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とは、併用療法によって個体に与えることができる。「併用療法」とは、療法を受けている対象においてＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せの治療効果がもたらされるように、対象に投与することを意図したものである。同様に、１つ又は複数のＮＡＳＰと１つ又は複数の胃腸管上皮バリア浸透促進剤とは、少なくとも１つの治療用量で経口投与することができる。

ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤との任意の適当な組合せを投与してもよい。特定の実施形態において、方法は、天然ＮＡＳＰ（先述のとおり）を胃腸管上皮バリア浸透促進剤のうち１つ又は複数と共に投与することを含む。これらの実施形態において、方法は、天然ＮＡＳＰを、カプリン酸ナトリウム、デオキシコラート、ブロメライン、及びキトサンのうち１つ又は複数との組合せで投与することを含んでもよい。特定の実施形態において、方法は、天然ＮＡＳＰをカプリン酸ナトリウムと共に投与することを含む。例えば、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ Ｕ．ｐ．５５０８００５及びＦｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１のうち１つ又は複数を、カプリン酸ナトリウムと共に投与してもよい。他の実施形態において、方法は、天然ＮＡＳＰをデオキシコラートと共に投与することを含む。例えば、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ Ｕ．ｐ．５５０８００５、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．ＤＳ１００１１０８、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．ＳＫ１１０１４４Ｂのうち１つ又は複数を、デオキシコラートと共に投与してもよい。また他の実施形態において、方法は、天然ＮＡＳＰをブロメラインと共に投与することを含む。例えば、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ Ｕ．ｐ．５５０８００５、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．ＤＳ１００１１０８、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．ＳＫ１１０１４４Ｂのうち１つ又は複数を、ブロメラインと共に投与してもよい。また他の実施形態において、方法は、天然ＮＡＳＰをキトサンと共に投与することを含む。例えば、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ Ｕ．ｐ．５５０８００５、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．ＤＳ１００１１０８、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．ＳＫ１１０１４４Ｂのうち１つ又は複数を、キトサンとの組合せで投与してもよい。また他の実施形態において、方法は、天然ＮＡＳＰをブロメラインとキトサンとの組合せ（先述のとおり）と共に投与することを含む。例えば、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ Ｕ．ｐ．５５０８００５、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．ＤＳ１００１１０８、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．ＳＫ１１０１４４Ｂのうち１つ又は複数を、ブロメラインとキトサンとの組合せと共に投与してもよい。

特定の実施形態において、方法は、合成ＮＡＳＰ（先述のとおり）を、胃腸管上皮バリア浸透促進剤のうち１つ又は複数と共に投与することを含む。これらの実施形態において、方法は、合成ＮＡＳＰと、カプリン酸ナトリウム、デオキシコラート、ブロメライン、及びキトサンのうち１つ又は複数との組合せを投与することを含んでもよい。特定の実施形態において、方法は、合成ＮＡＳＰをカプリン酸ナトリウムと共に投与することを含む。例えば、硫酸化β−シクロデキストリン及び硫酸化マルトペントースのうち１つ又は複数を、カプリン酸ナトリウムと共に投与してもよい。他の実施形態において、方法は、合成ＮＡＳＰをデオキシコラートと共に投与することを含む。例えば、２４ｋＤの硫酸化６−カルボキシイコデキストリン、１４ｋＤの６−カルボキシイコデキストリン、硫酸化β−シクロデキストリン、及び硫酸化マルトペントースのうち１つ又は複数を、デオキシコラートと共に投与してもよい。また他の実施形態において、方法は、合成ＮＡＳＰをブロメラインと共に投与することを含む。例えば、２４ｋＤの硫酸化６−カルボキシイコデキストリン、１４ｋＤの６−カルボキシイコデキストリン、硫酸化β−シクロデキストリン、及び硫酸化マルトペントースのうち１つ又は複数を、ブロメラインと共に投与してもよい。また他の実施形態において、方法は、合成ＮＡＳＰをキトサンと共に投与することを含む。例えば、２４ｋＤの硫酸化６−カルボキシイコデキストリン、１４ｋＤの６−カルボキシイコデキストリン、硫酸化β−シクロデキストリン、及び硫酸化マルトペントースのうち１つ又は複数を、キトサンとの組合せで投与してもよい。また他の実施形態において、方法は、合成ＮＡＳＰをブロメラインとキトサンとの組合せ（先述のとおり）と共に投与することを含む。例えば、２４ｋＤの硫酸化６−カルボキシイコデキストリン、１４ｋＤの６−カルボキシイコデキストリン、硫酸化β−シクロデキストリン、及び硫酸化マルトペントースのうち１つ又は複数を、ブロメラインとキトサンとの組合せと共に投与してもよい。

特定の実施形態において、本発明の態様は、凝固促進量のＮＡＳＰ及び胃腸管上皮バリア浸透促進剤を血液凝固因子との組合せで含有する組成物を対象に経口投与することにより対象における血液凝固を促進することを含む。例えば、対象には、ＮＡＳＰ及び胃腸管上皮バリア浸透促進剤を１つ又は複数の血液凝固因子との組合せで含有する凝固促進量の組成物を経口投与してもよく、そのような血液凝固因子としては、限定されるものではないが、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、プレカリクレイン、高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子、第ＶＩＩａ因子、及びヴォン・ヴィレブランド因子、第Ｘａ因子、第ＩＸａ因子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、及びＶＩＩＩａ、プレカレクレイン、及び高分子量キニノゲン、組織因子、第ＶＩＩａ因子、第Ｖａ因子、及び第Ｘａ因子が挙げられる。

ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とを含有する組成物が血液凝固因子と共に対象に経口投与される場合、ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とを含有する組成物対血液凝固因子の質量比は、１：１〜１：２．５、１：２．５〜１：５、１：５〜１：１０、１：１０〜１：２５、１：２５〜１：５０、１：５０〜１：１００、１：１００〜１：１５０、１：１５０〜１：２００、１：２００〜１：２５０、１：２５０〜１：５００、１：５００〜１：１０００の間、又はこの範囲で、変動し得る。例えば、ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とを含有する組成物対血液凝固因子の質量比は、１：１〜１：１０、１：５〜１：２５、１：１０〜１：５０、１：２５〜１：１００、１：５０〜１：５００、又は１：１００〜１：１０００の間であってもよい。いくつかの実施形態において、血液凝固因子対ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とを含有する組成物の質量比は、１：１〜１：２．５、１：２．５〜１：５、１：５〜１：１０、１：１０〜１：２５、１：２５〜１：５０、１：５０〜１：１００、１：１００〜１：１５０、１：１５０〜１：２００、１：２００〜１：２５０、１：２５０〜１：５００、１：５００〜１：１０００の間、又はこの範囲である。例えば、血液凝固因子対ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とを含有する組成物の質量比は、１：１〜１：１０、１：５〜１：２５、１：１０〜１：５０、１：２５〜１：１００、１：５０〜１：５００、又は１：１００〜１：１０００の間であってもよい。

血液凝固因子、及び、ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とを含有する組成物は、任意の順序で対象に投与してもよい。いくつかの場合において、ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とを含有する組成物は、血液凝固因子の投与に先立ち経口投与される。他の場合において、ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とを含有する組成物は、血液凝固因子の投与と併せて経口投与される。また他の場合において、ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とを含有する組成物は、血液凝固因子の投与の後で経口投与される。ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とを含有する組成物が、血液凝固因子と併せて経口投与される場合、ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とを含有する組成物は、該組成物を対象に経口投与する前に血液凝固因子と混合してもよい。任意の便利な混合プロトコール、例えば、乾燥振盪、溶液又は懸濁液の混合、工業的な混合プロトコールなどによるものを用いてもよい。

本発明の態様は、凝固促進量のＮＡＳＰを胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで経口投与することにより出血性障害を治療するための方法及び組成物を含む。本明細書において開示する、胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされたＮＡＳＰは、単独で（すなわち、単剤として）、又は他の止血剤との組合せで投与できる。所望により、凝固促進量のＮＡＳＰを胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで、出血性障害、例えば、先天性凝固障害、後天性凝固障害、抗凝固薬の投与及び外傷により誘導される出血病態を有すると診断されている対象の治療において用いてもよい。

いくつかの場合において、対象は、凝血障害を有すると診断されていてもよく、このような凝血障害としては、限定されるものではないが、血友病Ａ、血友病Ｂ、ヴォン・ヴィレブランド病、突発性血小板減少症、１つ又は複数の接触因子、例えば第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、プレカリクレイン、及び高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）の欠乏、臨床的に意義のある出血に関連する１つ又は複数の因子、例えば第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子（低プロトロンビン血症）、及びヴォン・ヴィレブランド因子の欠乏、ビタミンＫ欠乏、フィブリノゲン障害、例えば無フィブリノゲン血症、低フィブリノゲン血症、及び異常フィブリノゲン血症、α_２−抗プラスミン欠乏、並びに過剰な出血、例えば、肝疾患、腎疾患、血小板減少症、血小板機能不全、血腫、内出血、関節血症、外科手術、外傷、低体温、月経、及び妊娠を原因とする過剰な出血が挙げられる。

他の場合において、対象は、凝血障害を有すると診断されていてもよく、このような凝血障害としては、血液因子欠乏を原因とする先天性凝固障害又は後天性凝固障害が挙げられる。例えば、血液因子欠乏は、１つ又は複数の因子、限定されるものではないが例えば、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、及びヴォン・ヴィレブランド因子の欠乏を原因とするものであってもよい。

また他の場合において、対象は、該対象への抗凝固薬の投与の結果生じた凝血障害を有すると診断されていてもよい。例として、抗凝固薬としては、限定されるものではないが、ヘパリン、クマリン誘導体、例えばワルファリン又はジクマロール、組織因子経路阻害薬（ＴＦＰＩ）、アンチトロンビンＩＩＩ、ループス抗凝固因子、線虫抗凝固ペプチド（ＮＡＰｃ２）、活性部位遮断第ＶＩＩａ因子（第ＶＩＩａｉ因子）、第ＩＸａ因子阻害薬、第Ｘａ因子阻害薬、例えばフォンダパリヌクス、イドラパリヌクス、ＤＸ−９０６５ａ、及びラザキサバン（ＤＰＣ９０６）、第Ｖａ因子及び第ＶＩＩＩａ因子の阻害薬、例えば活性化プロテインＣ（ＡＰＣ）及び可溶性トロンボモジュリン、トロンビン阻害薬、例えばヒルジン、ビバリルジン、アルガトロバン、及びキシメラガトランを挙げることができる。特定の実施形態において、抗凝固薬は、凝血因子と結合する抗体、限定されるものではないが例えば、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、ヴォン・ヴィレブランド因子、プレカリクレイン、又は高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）と結合する抗体であってもよい。

また他の場合において、本発明の方法は、対象におけるＴＦＰＩ活性を阻害する方法を含む。例えば、方法は、ある量のＮＡＳＰを、胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで、対象におけるＴＦＰＩ活性を阻害するのに十分な様式で該対象に経口投与することをさらに含むことができる。特定の場合においては、胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされた凝固促進量のＮＡＳＰを、ＴＦＰＩを含んでいる生体試料（例えば血漿）と合わせてから、該生体試料のＴＦＰＩ活性を測定する。他の場合において、方法は、凝固促進量のＮＡＳＰ及び胃腸管上皮バリア浸透促進剤を生体試料と合わせることと、ＴＦＰＩを組成物に加えることと、及び該生体試料のＴＦＰＩ活性を測定することとを含む。特定の場合において、生体試料は、血漿試料、例えば、正常血漿又は第ＶＩＩＩ因子が阻害された血漿などである。

本発明の方法を実行するに際し、対象における血液凝固を促進するためのプロトコールは、例えば、対象の年齢、体重、凝血障害の重症度、全身の健康状態、並びに、投与しようとするＮＡＳＰ及び胃腸管上皮バリア浸透促進剤の特定の組成及び濃度などにより、変動し得る。本発明の実施形態において、経口投与及び胃腸系による吸収後に対象において達成されるＮＡＳＰの濃度は、いくつかの場合においては、０．０１ｎＭ〜５００ｎＭの範囲で変動し得る。対象とするＮＡＳＰは、その最適な濃度で凝固促進性となる。「最適な濃度」とは、ＮＡＳＰが最も高い値の凝固促進活性を呈する濃度を意味する。ＮＡＳＰの多くが、最適な濃度よりはるかに高い濃度でも抗凝固活性を実証したことから、本発明のＮＡＳＰは、その最適な濃度の範囲において非抗凝固性の挙動を示す。したがって、ＮＡＳＰの効力、並びに所望の効果によっては、本発明の方法によりもたらされるＮＡＳＰの最適な濃度は、０．０１ｎＭ〜５００ｎＭ、例えば０．１ｎＭ〜２５０ｎＭ、例えば０．１ｎＭ〜１００ｎＭ、例えば０．１ｎＭ〜７５ｎＭ、例えば０．１ｎＭ〜５０ｎＭ、例えば０．１ｎＭ〜２５ｎＭ、例えば０．１ｎＭ〜１０ｎＭ、さらに例えば０．１ｎＭ〜１ｎＭの範囲であってもよい。較正自動トロンボグラフィー（ＣＡＴ）アッセイにより決定した値としての、対象とするＮＡＳＰの最適な濃度及び活性レベルは、２００５年５月２７日に出願された米国特許出願第１１／１４０，５０４号、現米国特許第７，７６７，６５４号、及び２０１１年１月１３日に出願された米国特許出願第１３／００６，３９６号にさらに詳細に記載されており、これらの文献の開示内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。同様に、経口投与及び胃腸系による吸収後に対象において達成される胃腸管上皮バリア浸透促進剤の濃度は、いくつかの場合において、０．０１ｎＭ〜５００ｎＭの範囲で変動し得る。例えば、ＮＡＳＰの固有の吸収率、並びに所望の効果によっては、本発明の方法によりもたらされる胃腸管上皮バリア浸透促進剤の濃度は、０．０１ｎＭ〜５００ｎＭ、例えば０．１ｎＭ〜２５０ｎＭ、例えば０．１ｎＭ〜１００ｎＭ、例えば０．１ｎＭ〜７５ｎＭ、例えば０．１ｎＭ〜５０ｎＭ、例えば０．１ｎＭ〜２５ｎＭ、例えば０．１ｎＭ〜１０ｎＭ、さらに例えば０．１ｎＭ〜１ｎＭの範囲であってもよい。

したがって、対象とする、胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せでＮＡＳＰを含有する組成物の経口投与量は、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、例えば１日当たり０．０１ｍｇ／ｋｇ〜４００ｍｇ／ｋｇ、例えば１日当たり０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ、例えば１日当たり０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば１日当たり０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、例えば１日当たり０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、さらに例えば１日当たり０．０２ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇの範囲で変動し得る。他の実施形態において、経口投与量は、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇを１日４回（ＱＩＤ）、例えば０．０１〜５０ｍｇ／ｋｇ ＱＩＤ、例えば０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ ＱＩＤ、例えば０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ ＱＩＤ、例えば０．０１〜０．２ｍｇ／ｋｇ ＱＩＤの範囲であってもよい。他の実施形態において、経口投与量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇを１日３回（ＴＩＤ）、例えば０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ ＴＩＤ、例えば０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ ＴＩＤ、さらに例えば０．０１ｍｇ／ｋｇ〜０．２ｍｇ／ｋｇ ＴＩＤの範囲であってもよい。また他の実施形態において、経口投与量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇを１日２回（ＢＩＤ）、例えば０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤ、例えば０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤ、さらに例えば０．０１ｍｇ／ｋｇ〜０．２ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤの範囲であってもよい。投与される化合物の量は、特定のＮＡＳＰの効力及び濃度、所望の規模又は凝固促進効果、ＮＡＳＰの固有の吸収率、並びに、胃腸管吸収の所望の促進程度によって決まってこよう。

先に論考したように、本発明の方法により提供される、胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せでＮＡＳＰを含有する組成物は、他のＮＡＳＰ、胃腸管上皮バリア浸透促進剤、又は他の治療剤、例えば止血剤、血液因子、又は、他の医薬品と組み合わせて、臨床医の判断及び対象の必要性によって決まる投与スケジュールに従って経口投与されてもよい。したがって、投与スケジュールとしては、限定されるものではないが、１日５回、１日４回、１日３回、１日２回、１日１回、週３回、週２回、週１回、月２回、月１回の投与、及びその任意の組合せを挙げることができる。

いくつかの実施形態において、出血性障害は、長期間にわたる複数回投与での本方法及び組成物を必要とする慢性の病態（例えば、先天性又は後天性の凝固因子欠乏）であってもよい。あるいは、本発明の方法及び組成物は、急性の病態（例えば、外科手術若しくは外傷、又は、凝固補充療法を受けている対象における因子阻害薬／自己免疫エピソードを原因とする出血）を治療するために、単回又は複数回用量で、比較的短い期間、例えば１〜２週間にわたって、投与してもよい。

本発明の実施形態を実行するに際し、１回又は複数回の治療上有効な治療サイクルが、対象に施されることになる。「治療上有効な治療サイクル」とは、施されると、治療に関する所望の治療応答をもたらす治療サイクルを意味する。例として、１回又は複数回の治療上有効な治療サイクルは、凝血アッセイ（例えば、ＣＡＴ、ａＰＴＴ、以下に詳細に記載する）により決定した値としての凝血の速度を、１％以上、例えば５％以上、例えば１０％以上、例えば１５％以上、例えば２０％以上、例えば３０％以上、例えば４０％以上、例えば５０％以上、例えば７５％以上、例えば９０％以上、例えば９５％以上増加させ得るが、さらに例えば血塊形成の速度を９９％以上増加させる。他の場合において、１回又は複数回の治療上有効な治療サイクルは、血塊形成の速度を１．５倍以上、例えば２倍以上、例えば５倍以上、例えば１０倍以上、例えば５０倍以上増加させ得るが、さらに例えば血塊形成の速度を１００倍以上増加させる。いくつかの実施形態において、本発明の方法により治療される対象は、肯定的な治療応答を呈する。「肯定的な治療応答」とは、対象が、出血性障害の１つ又は複数の症状の改善を呈することを意味する。例えば、本発明により提供される方法に対して肯定的な治療応答を呈する対象としては、限定されるものではないが、凝血時間の短縮、出血の減少、因子補充療法の必要性の低下、又はそれらの組合せなどの応答を挙げることができる。特定の実施形態において、２回以上の治療上有効な治療サイクルが施される。

先に概説したように、特定の実施形態による方法の実行において、凝固促進量のＮＡＳＰを胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで有する組成物は、対象における血液凝固を促進するために、該対象に投与される。本組成物が胃腸管上皮を通して吸収される限り、任意の便利な投与様式を用いてもよい。したがって、投与様式は、経鼻胃管（例えば、採食チューブ又はＮＧチューブ）による経口投与を含んでいてもよい。以下でより詳細に論考するように、本発明の医薬組成物は、溶液剤若しくは懸濁剤、シロップ剤、錠剤、カプセル剤、散剤、ゲル剤、又はその任意の組合せの形態であってもよい。凝固促進量のＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とを有する組成物が、血液凝固因子との組合せで経口投与される場合、先に詳細に論考したように、ＮＡＳＰ及び胃腸管上皮バリア浸透促進剤成分の投与様式は、血液凝固因子の投与様式と同じであっても異なっていてもよい。例えば、いくつかの場合において、凝固促進量のＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とを有する組成物は経口投与してもよく、一方、血液凝固因子は局所的に適用（例えば、クリーム剤として）してもよい。他の場合において、凝固促進量のＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とを有する本組成物及び血液凝固因子は、両方とも経口投与される。

特定の実施形態において、本発明の方法は、凝固促進量のＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とを有する組成物を予防的に、例えば、計画された外科手術の前などに経口投与することを提供する。本組成物は、所望により、例えば計画された手術に１時間以上先行して、例えば計画された手術に１０時間先行して、例えば計画された手術に２４時間先行して、さらに例えば計画された手術に１週間先行して、予防的に投与してもよい。いくつかの場合において、計画された手術に先行して又は該手術中に投与される組成物は、以下にさらに詳細に記載するように、持続放出製剤（例えば、持続放出性のカプレット剤又は錠剤）であってもよい。

特定の実施形態において、本発明の組成物は、関係のある又は関係のない病態を治療するための他の薬剤に先行して、又はそれと併用して、又はそれに続けて、経口投与することができる。他の薬剤と同時に提供される場合、本発明の組成物は、同じ組成物中又は異なる組成物中で提供できる。したがって、対象とする、ＮＡＳＰ及び胃腸管上皮バリア浸透促進剤及び他の薬剤は、経口用剤形の形態で、併用療法を用いて個体に与えることができる。例えば、併用療法は、本発明の組成物と、少なくとも１つの他の薬剤、例えば止血剤又は凝固因子（例：ＦＶＩＩＩ又はＦＩＸ）を有する医薬組成物とを投与することにより達成してもよく、特定の経口投与法によれば、これらの組成物は、組合せの形で、治療上有効な用量を含む。同様に、１つ又は複数のＮＡＳＰは、１つ又は複数の胃腸管上皮バリア浸透促進剤及び治療剤との組合せで、少なくとも１つの治療用量で投与できる。別々の医薬組成物の投与は、これらの物質の組合せの治療効果が、療法を受けている対象においてもたらされる限り、同時に又は異なる時点で（すなわち、逐次的に、又は順序を問わず、又は同じ日に、又は異なる日に）実施できる。

組成物
本発明の態様は、さらに、対象における血液凝固を促進するための経口投与用組成物を含む。本発明の実施形態において、組成物は、凝固促進量のＮＡＳＰを胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで含む。組成物は、凝固促進量のＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せ及び血液凝固因子をさらに含む。先に詳細に記載したように、胃腸管上皮バリア浸透促進剤としては、経口投与されると、胃腸系により吸収されるＮＡＳＰの量を増加させる、化合物が挙げられる。さらに、胃腸管浸透促進剤は、胃腸管上皮を通したＮＡＳＰの吸収の開始を加速させる（すなわち、吸収が始まる時間の長さを短縮する）と共に、対象の胃腸管上皮を越えたＮＡＳＰの輸送の全体的な速度を加速させる（すなわち、胃腸系によるＮＡＳＰの吸収が完了するのに要する時間の長さを短縮する）こともできる。

先述のように、胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、胃腸系により吸収されるＮＡＳＰの量を増加させ得る。例えば、胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、胃腸系により吸収されるＮＡＳＰの量を、適当な対照との比較で、５％以上、例えば１０％以上、例えば２５％以上、例えば５０％以上、例えば７５％以上、例えば９０％以上、例えば９５％以上、増加させ得る。他の実施形態において、本発明の経口組成物中の胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、胃腸管上皮を通したＮＡＳＰの吸収の開始を加速させる。例えば、本発明の胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、ＮＡＳＰの吸収を開始するのに要する時間の長さを、適当な対照との比較で、５％以上、例えば１０％以上、例えば２５％以上、例えば５０％以上、例えば７５％以上、例えば９０％以上、例えば９５％以上、短縮させ得る。また他の実施形態において、本発明の経口組成物中の胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、ＮＡＳＰの吸収の速度を増加させる。例えば、胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、ＮＡＳＰの吸収の速度を、適当な対照との比較で、２％以上、例えば５％以上、例えば１０％以上、例えば２５％以上、例えば５０％以上、例えば７５％以上、例えば１００％以上、例えば２００％以上、さらに例えば５００％以上、増加させ得る。

特定の場合において、本発明の経口組成物中の胃腸管上皮浸透促進剤は、Ｃａｃｏ−２細胞モデルにより決定した値としてのＮＡＳＰの吸収量を増加させ得る。例えば、本発明の胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、Ｃａｃｏ−２細胞モデルにより決定した値としての吸収量を、適当な対照との比較で、２％以上、例えば５％以上、例えば１０％以上、例えば２５％以上、例えば５０％以上、例えば７５％以上、例えば１００％以上、例えば２００％以上、さらに例えば５００％以上、増加させ得る。

先に詳細に論考したように、本発明の経口投与用組成物は、１つ又は複数のＮＡＳＰを１つ又は複数の胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで含む。対象とする組成物中の胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、さまざまなものがあり得る。いくつかの実施形態において、胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、タイトジャンクションモジュレーターである。例えば、本発明の経口投与用組成物中のタイトジャンクションモジュレーターとしては、限定されるものではないが、酵素、胆汁酸、多糖、脂肪酸及びその塩、並びにそれらの任意の組合せを挙げることができる。

いくつかの場合において、タイトジャンクションモジュレーターは、多糖である。例えば、多糖であるタイトジャンクションモジュレーターは、特定の場合において、キトサンであってもよい。キトサンは、先に論考したように、キチンのＮ−デアクチレーションにより作られる２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノースと２−アミノ−β−Ｄ−グルコピラノースとの直線状のコポリマーを指す。多糖であるタイトジャンクションモジュレーターとしては、キトサンの誘導体、中でも、例えばＮ−アルキルキトサン、アシル化キトサン、チオール化キトサン、リン酸化キトサン、キトサンシクロデキストリン、Ｎ−（アミノアルキル）キトサン、スクシニルキトサン、及びオクタノイルキトサンを挙げることもできる。

他の場合において、タイトジャンクションモジュレーターは、胆汁酸である。胆汁酸である適当なタイトジャンクションモジュレーターとしては、限定されるものではないが、中でも、コール酸（コラート）、デオキシコール酸（デオキシコラート）、ケノデオキシコール酸（ケノデオキシコラート）、ウルソデオキシコール酸（ウルソデオキシコラート）、グリココール酸（グリココラート）、タウロコール酸（タウロコラート）、及びリトコール酸（リトコラート）を挙げることができる。

他の場合において、タイトジャンクションモジュレーターは、酵素である。例えば、本発明の特定の組成物において、酵素であるタイトジャンクションモジュレーターは、プロテアーゼ、例えばブロメラインである。

また他の場合において、タイトジャンクションモジュレーターは、脂肪酸及びその脂肪酸塩である。本発明の組成物中の脂肪酸であるタイトジャンクションモジュレーターは、さまざまなものがあり得、例としては、中鎖脂肪酸、例えばＣ８脂肪酸及びその脂肪酸塩（カプリル酸及びその塩）、Ｃ１０脂肪酸及びその脂肪酸塩（カプリン酸及びその塩）、並びにＣ１２脂肪酸及びその脂肪酸塩（ラウリン酸及びその塩）などのうち任意の１つ又はそれらの組合せを挙げることができる。特定の場合において、例えば、脂肪酸であるタイトジャンクションモジュレーターは、カプリン酸ナトリウムである。

特定の実施形態において、本発明の経口投与用組成物は、２つ以上の胃腸管上皮バリア浸透促進剤を含む。例えば、組成物は、２つ以上のタイトジャンクションモジュレーター、例えば３つ以上のタイトジャンクションモジュレーター、さらに例えば４つ以上のタイトジャンクションモジュレーターを含んでいてもよい。組成物は、タイトジャンクションモジュレーターの任意の組合せ、例えば、他の組合せの中でも、多糖とプロテアーゼ、脂肪酸と多糖、多糖と胆汁酸、多糖と脂肪酸と胆汁酸、２つの異なる多糖、又は２つの異なる胆汁酸などの組合せを含んでいてもよい。組成物が、２つ以上の胃腸管上皮バリア浸透促進剤を含む場合、各胃腸管上皮バリア浸透促進剤の質量百分率は、組成物の総質量の１％以上、組成物の総質量の、例えば２％以上、例えば５％以上、例えば１０％以上、例えば２５％以上、さらに例えば５０％以上の範囲で変動し得る。

特定の場合において、本発明の組成物は、キトサン及びブロメラインを含む。本組成物がキトサンとブロメラインとの組合せを含む場合、キトサンとブロメラインとの質量比は、１：１〜１：２．５、１：２．５〜１：５、１：５〜１：１０、１：１０〜１：２５、１：２５〜１：５０、１：５０〜１：１００、１：１００〜１：１５０、１：１５０〜１：２００、１：２００〜１：２５０、１：２５０〜１：５００、１：５００〜１：１０００の間、又はこの範囲で変動し得る。例えば、キトサン対ブロメラインの質量比は、１：１〜１：１０、１：５〜１：２５、１：１０〜１：５０、１：２５〜１：１００、１：５０〜１：５００、又は１：１００〜１：１０００の間であってもよい。いくつかの実施形態において、ブロメライン対キトサンの質量比は、１：１〜１：２．５、１：２．５〜１：５、１：５〜１：１０、１：１０〜１：２５、１：２５〜１：５０、１：５０〜１：１００、１：１００〜１：１５０、１：１５０〜１：２００、１：２００〜１：２５０、１：２５０〜１：５００、１：５００〜１：１０００の間、又はこの範囲である。例えば、ブロメライン対キトサンの質量比は、１：１〜１：１０、１：５〜１：２５、１：１０〜１：５０、１：２５〜１：１００、１：５０〜１：５００、又は１：１００〜１：１０００の間であってもよい。

本発明の組成物がキトサンとブロメラインとの組合せを含む場合、キトサンの濃度は、さらに、約０．１％〜約５％、例えば約０．１５％〜約４．５％、例えば０．２％〜約４％、例えば約０．２５％〜約３．５％、例えば０．３％〜約３％、例えば０．５％〜約２．５％、さらに例えば約０．５％〜１．５％の範囲で変動し得る。同様に、キトサンとブロメラインとの組合せを用いる場合、特定の実施形態において、ブロメラインの濃度は、さらに、約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約１．０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．２ｍｇ／ｍＬ〜約０．９ｍｇ／ｍＬ、例えば０．２５ｍｇ／ｍＬ〜約０．７５ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約０．６ｍｇ／ｍＬ、さらに例えば約０．４ｍｇ／ｍＬ〜約０．５ｍｇ／ｍＬの範囲で変動し得る。特定の場合において、キトサンの濃度は約３％であり、ブロメラインの濃度は約０．５ｍｇ／ｍＬである。

先述のように、本発明の経口投与用組成物中のＮＡＳＰは、凝固促進活性を実証する硫酸化多糖である。ＮＡＳＰの非抗凝固特性は、凝血アッセイを用いて決定してもよく、そのようなアッセイとしては、第ＶＩＩＩ因子及び／若しくは第ＩＸ因子欠乏血漿を用いた較正自動トロンボグラフィー（ＣＡＴ）、希釈プロトロンビン時間（ｄＰＴ）又は活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）凝血アッセイが挙げられる。非凝固活性の１つの尺度は、当該ＮＡＳＰを公知の抗凝固薬ヘパリンと比較することである。例えば、ＮＡＳＰは、未分画ヘパリン（分子量の範囲は８，０００〜３０，０００ダルトン、平均１８，０００ダルトン）の抗凝固活性（統計的に有意な凝血時間の増加により測定される）の３分の１以下、例えば１０分の１以下を呈してもよい。したがって、ＮＡＳＰは、本明細書中で詳述する多様な凝血アッセイのうちいずれかを用いて、ヘパリンとの比較で少なくとも２倍低い抗凝固活性、例えばヘパリンとの比較で２倍〜５倍以上低い抗凝固活性、さらに例えばヘパリンとの比較で２倍〜１０倍以上低い抗凝固活性を実証することができる。

いくつかの実施形態において、本発明の経口投与用組成物は、天然ＮＡＳＰを胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで含む。先に論考したように、天然ＮＡＳＰは、天然に存在する入手源、例えば動物若しくは植物源から見出され又はそれらに由来するＮＡＳＰであってもよく、広い範囲のサブクラス、例えば、ヘパリン、グリコサミノグリカン、フコイダン、カラギーナン、ポリ硫酸ペントサン、デルマタン硫酸、及び硫酸デキストランの誘導体を包含し得る。いくつかの実施形態において、本発明の天然ＮＡＳＰは、生物源から抽出される。「生物源」とは、天然に存在する生物、又は生物の一部を意味する。例えば、対象とするＮＡＳＰは、植物、動物、真菌、又は細菌から抽出することができる。とりわけ、対象とするＮＡＳＰは、食用海藻、褐藻、棘皮動物（例えば、ウニ、ナマコ）などから抽出することができる。例えば、ＮＡＳＰは、他の手順の中でも、酸塩基抽出、酵素的分解、選択的沈殿、ろ過により、生物源から抽出できる。生物源、限定されるものではないが例えば食用海藻及び褐藻から抽出されるＮＡＳＰなどの天然ＮＡＳＰは、２０１０年２月２５日に出願された同時係属の米国特許出願第１２／４４９，７１２号に詳細に記載されており、同文献の開示内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

特定の実施形態において、本発明の天然ＮＡＳＰとしては、限定されるものではないが、Ｎ−アセチルヘパリン（ＮＡＨ）、Ｎ−アセチル−デ−Ｏ−硫酸化ヘパリン（ＮＡ−ｄｅ−ｏ−ＳＨ）、デ−Ｎ−硫酸化ヘパリン（Ｄｅ−ＮＳＨ）、デ−Ｎ−硫酸化アセチル化ヘパリン（Ｄｅ−ＮＳＡＨ）、過ヨウ素酸塩酸化ヘパリン（ＰＯＨ）、化学的硫酸化ラミナリン（ＣＳＬ）、化学的硫酸化アルギン酸（ＣＳＡＡ）、化学的硫酸化ペクチン（ＣＳＰ）、硫酸デキストラン（ＤＸＳ）、ヘパリン由来オリゴ糖（ＨＤＯ）、ポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）、及びそれらの組合せが挙げられる。いくつかの場合において、ＮＡＳＰは、天然に存在するＮＡＳＰの低分子量の断片であってもよい。他の場合において、天然ＮＡＳＰとしては、天然に存在するＮＡＳＰの生化学的又は化学的な誘導体を挙げることもできる。特定の場合において、天然ＮＡＳＰは、フコイダンである。先述のように、フコイダンは、天然に存在する複雑な硫酸化多糖化合物であり、特定の食用海藻、褐藻、及び棘皮動物（例えば、ウニ、ナマコ）から抽出することができる。適当なＮＡＳＰの例は、２００５年５月２７日に出願された米国特許出願第１１／１４０，５０４号、現米国特許第７，７６７，６５４号、及び２０１１年１月１３日に出願された米国特許出願第１３／００６，３９６号にもさらに詳細に記載されており、これらの文献の開示内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

対象とするＮＡＳＰの平均分子量は、約１０ダルトン〜約５００，０００ダルトン、例えば約１００ダルトン〜約３００，０００ダルトン、例えば１０００ダルトン〜２５０，０００ダルトン、さらに例えば１０００ダルトン〜１５０，０００ダルトンの範囲であってもよい。ＮＡＳＰの分子量は、任意の便利なプロトコール、中でも、例えば、ゲル浸透クロマトグラフィー又は高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）、キャピラリー電気泳動法、ＰＡＧＥ（ポリアクリルアミドゲル電気泳動）、アガロースゲル電気泳動などにより決定できる。

いくつかの実施形態において、対象とするＮＡＳＰは、さまざまな分子量の硫酸化多糖の不均質な混合物であってもよい。例えば、いくつかの場合において、ＮＡＳＰ組成物の５％以上は、分子量が１０〜３０，０００ダルトンの範囲、ＮＡＳＰ組成物の例えば１０％以上、例えば２５％以上、例えば５０％以上、例えば７５％以上、例えば９０％以上、さらに例えば９５％以上は、分子量が１０〜３０，０００ダルトンの範囲である。他の実施形態において、ＮＡＳＰ組成物の５％以上は、分子量が３０，０００ダルトン〜７５，０００ダルトンの範囲、ＮＡＳＰ組成物の例えば１０％以上、例えば２５％以上、例えば５０％以上、例えば７５％以上、例えば９０％以上、さらに例えば９５％以上は、分子量が３０，０００〜７５，０００ダルトンの範囲である。また他の実施形態において、ＮＡＳＰ組成物の５％以上は、分子量が７５，０００ダルトン超、ＮＡＳＰ組成物の例えば１０％以上、例えば２５％以上、例えば５０％以上、例えば７５％以上、例えば９０％以上、さらに例えば９５％以上は、分子量が７５，０００ダルトン超である。

特定の実施形態において、本発明の方法及び組成物により提供されるように、血液凝固を促進するために、低分子量ＮＡＳＰを用いてもよい。「低分子量ＮＡＳＰ」とは、重量平均分子量が約１０〜３０，０００ダルトン、例えば１００〜３０，０００ダルトン、例えば５００〜２５，０００ダルトン、例えば１０００〜１５，０００ダルトン、さらに例えば５０００〜１０，０００ダルトンの範囲であるＮＡＳＰを意味する。低分子量ＮＡＳＰの例としては、限定されるものではないが、分子量が１０〜３０，０００ダルトン、例えば５０００〜１０，０００ダルトンの範囲である天然に存在するＮＡＳＰ又は合成ＮＡＳＰ、より分子量の大きいＮＡＳＰの酸性加水分解又は酵素的加水分解により生成される、該より分子量の大きいＮＡＳＰの断片を挙げることができ、又は、低分子量ＮＡＳＰは、分画されたＮＡＳＰ試料に由来する、分子量が１０〜３０，０００ダルトン、例えば５０００〜１０，０００ダルトンの範囲である単離画分であってもよい。

特定の実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管上皮バリア浸透促進剤（例えば、カプリン酸ナトリウム、デオキシコラート、ブロメライン、又はキトサン）、及び低分子量の天然ＮＡＳＰを含む。例えば、対象とする組成物は、分子量が２０，０００ダルトン以下であるＦｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓフコイダンを胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで含んでいてもよい。例えば、対象とする組成物は、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．ＤＳ１００１１０８、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．ＳＫ１１０１４４Ｂのうち１つ又は複数を、デオキシコラート、ブロメライン、及びキトサンのうち１つ又は複数との組合せで含んでいてもよい。別の例では、対象とする組成物は、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．ＤＳ１００１１０８、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ Ｆ．ｖ．ＳＫ１１０１４４Ｂのうち１つ又は複数を、キトサンとブロメラインとの混合物との組合せで含んでいてもよい。特定の他の実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管上皮バリア浸透促進剤（例えば、カプリン酸ナトリウム、デオキシコラート、ブロメライン、又はキトサン）及び低分子量の合成ＮＡＳＰを含む。例えば、特定の組成物は、分子量が２５，０００ダルトン以下である、硫酸化６−カルボキシイコデキストリン、硫酸化β−シクロデキストリン、及び硫酸化マルトペントースのうち１つ又は複数を、胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで含んでいてもよい。例えば、対象とする組成物は、２４，０００ダルトンの硫酸化６−カルボキシイコデキストリン、１４，０００ダルトンの硫酸化６−カルボキシイコデキストリン、硫酸化β−シクロデキストリン、及び硫酸化マルトペントースのうち１つ又は複数を、デオキシコラート、ブロメライン、及びキトサンのうち１つ又は複数との組合せで含んでいてもよい。別の例では、対象とする組成物は、２４，０００ダルトンの硫酸化６−カルボキシイコデキストリン、１４，０００ダルトンの硫酸化６−カルボキシイコデキストリン、硫酸化β−シクロデキストリン、及び硫酸化マルトペントースのうち１つ又は複数を、キトサンとブロメラインとの混合物との組合せで含んでいてもよい。

いくつかの実施形態において、ＮＡＳＰは、生物源から抽出され、低分子量ＮＡＳＰ（すなわち、分子量が１０〜３０，０００ダルトンの範囲であるＮＡＳＰを含有する画分）を単離するために分画されてもよい。対象とするＮＡＳＰを分画するには、任意の便利なプロトコール、中でも、限定されるものではないが、例えばサイズ排除クロマトグラフィー、ゲル浸透クロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動法を用いてもよい。

特定の場合において、ＮＡＳＰ試料を分画することにより得られる低分子量ＮＡＳＰは、本発明の方法及び組成物により提供されるように、血液凝固を促進するために用いてもよい。例えば、生物源から抽出されるＮＡＳＰは、分子量が１０〜３０，０００ダルトン、例えば１０〜５０００ダルトン、例えば５０００〜１０，０００ダルトン、例えば１０，０００〜１５，０００ダルトン、さらに例えば１５，０００〜３０，０００ダルトンの範囲であるＮＡＳＰを単離するために分画されてもよい。特定の実施形態において、これらの画分のうち１つ又は複数は、対象における血液凝固を促進するために、例えば先に記載した方法により、胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで経口投与されてもよい。

特定の実施形態において、異なる分子量の画分は、高分子量ＮＡＳＰの酸性加水分解又はラジカル解重合により調製してもよい。その結果得られる生成物の分子量の範囲は、用いられる加水分解又は解重合の条件の厳密性に基づいて調節してもよい。次いで、画分を、イオン交換クロマトグラフィーを用いてさらに精製してもよい。例えば、中程度の分子量及び低分子量の画分のＮＡＳＰを得るには、ＨＣｌなどの酸（又は任意の他の適当な酸）を、０．０２〜１．５Ｍの範囲の濃度、及び２５℃〜８０℃の範囲の温度で使用して、高分子量ＮＡＳＰを加水分解してもよい。加水分解反応時間は、典型的には１５分〜数時間の範囲である。次いで、その結果得られた、加水分解された反応混合物を、塩基（例えば、水酸化ナトリウム）の添加により中和させる。引き続き、塩を、例えば電気透析により除去し、炭水化物分析のための従来の分析法を用いて加水分解生成物を分析して、重量平均分子量、糖含有量、及びイオウ含有量を決定する。代替的に、酵素的な方法を用いてＮＡＳＰを分解してもよく、例えばグリコシダーゼを使用してもよい。本発明において使用するためのＮＡＳＰは、用いられる分離の程度によっては、不均質でも均質でもよい。

特定の実施形態において、本発明の経口投与用組成物は、血液凝固因子を胃腸管上皮バリア浸透促進剤及びフコイダン、例えば、フコイダン５３０７００２、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、最大分子量ピーク１２６．７ｋＤ；フコイダンＶＧ４９、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、５３０７００２を加水分解した試料で、分子量が低下しており最大分子量ピークは２２．５ｋＤ；フコイダンＶＧ５７、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ、高チャージ（高硫酸化、脱アセチル化されたもの）；フコイダンＧＦＳ（５５０８００５）、Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ、脱パイロジェン化されたもの；フコイダンＧＦＳ（Ｌ／ＦＶＦ−０１０９１）、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、脱パイロジェン化されたもの、最大分子量ピーク１２５ｋＤ；フコイダンＧＦＳ（Ｌ／ＦＶＦ−０１０９２）、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、脱パイロジェン化されたもの、最大分子量ピーク２６０ｋＤ；フコイダンＧＦＳ（Ｌ／ＦＶＦ−０１０９３）、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、加水分解され脱パイロジェン化されたもの、最大分子量ピーク３６ｋＤ；Ｍａｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ｅｃｋｌｏｎｉａ ｒａｄｉａｔａ抽出物；Ｍａｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ｅｃｋｌｏｎｉａ ｍａｘｉｍａ抽出物；Ｍａｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ｍａｃｒｏｃｙｓｔｉｓ ｐｙｒｉｆｅｒａ抽出物；Ｍａｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ｉｍｍｕｎｅ ｔｒｉａｌ Ｆｕｃｏｉｄａｎ Ｂｌｅｎｄ；及びそれらの任意の組合せなどとの組合せで含む。

他の実施形態において、本発明の経口投与用組成物は、合成ＮＡＳＰを胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで含んでいてもよい。合成ＮＡＳＰは、人工の方法（例えば化学合成）により部分的又は完全に作製されている硫酸化多糖である。例として、合成ＮＡＳＰは、硫酸化オリゴマー、例えば硫酸化オリゴ糖又は硫酸化脂肪族化合物であってもよい。特定の場合において、合成ＮＡＳＰは、硫酸化ペントース、硫酸化ヘキソース、又は硫酸化シクロデキストリンである。例えば、合成ＮＡＳＰとしては、限定されるものではないが、硫酸化マルトペントース、硫酸化β−シクロデキストリン、硫酸化６−カルボキシイコデキストリン、及びそれらの誘導体を挙げることができる。

本発明の経口投与用組成物は、所望により、１つ又は複数のＮＡＳＰを含んでいてもよい。例えば、２つ以上のＮＡＳＰ、例えば３つ以上のＮＡＳＰ、さらに４つ以上のＮＡＳＰを組み合わせてもよい。２つ以上のＮＡＳＰを一緒に組み合わせる場合、すべてのＮＡＳＰが天然ＮＡＳＰであってもよく、すべてのＮＡＳＰが合成ＮＡＳＰであっても、又はその任意の組合せであってもよい。経口組成物が２つ以上のＮＡＳＰを含む場合、該組成物中の各ＮＡＳＰの質量百分率は、該組成物の総質量の１％以上、該組成物の総質量の、例えば２％以上、例えば５％以上、例えば１０％以上、例えば２５％以上、さらに例えば５０％以上の範囲で変動し得る。

本発明の実施形態において、経口投与用組成物中の１つ又は複数のＮＡＳＰ及び１つ又は複数の胃腸管上皮バリア浸透促進剤の質量比は、１：１〜１：２．５、１：２．５〜１：５、１：５〜１：１０、１：１０〜１：２５、１：２５〜１：５０、１：５０〜１：１００、１：１００〜１：１５０、１：１５０〜１：２００、１：２００〜１：２５０、１：２５０〜１：５００、１：５００〜１：１０００の間、又はこの範囲で変動し得る。例えば、ＮＡＳＰ対胃腸管上皮バリア浸透促進剤の質量比は、１：１〜１：１０、１：５〜１：２５、１：１０〜１：５０、１：２５〜１：１００、１：５０〜１：５００、又は１：１００〜１：１０００の間であってもよい。いくつかの実施形態において、胃腸管上皮バリア浸透促進剤対ＮＡＳＰの質量比は、１：１〜１：２．５、１：２．５〜１：５、１：５〜１：１０、１：１０〜１：２５、１：２５〜１：５０、１：５０〜１：１００、１：１００〜１：１５０、１：１５０〜１：２００、１：２００〜１：２５０、１：２５０〜１：５００、１：５００〜１：１０００の間、又はこの範囲である。例えば、胃腸管上皮バリア浸透促進剤対ＮＡＳＰの質量比は、１：１〜１：１０、１：５〜１：２５、１：１０〜１：５０、１：２５〜１：１００、１：５０〜１：５００、又は１：１００〜１：１０００の間であってもよい。

加えて、本発明の経口投与用組成物は、１つ又は複数の血液凝固因子をさらに含むことができる。例えば、組成物は、ある量の１つ又は複数のＮＡＳＰ及び１つ又は複数の胃腸管上皮バリア浸透促進剤を、１つ又は複数の血液凝固因子との組合せで含んでいてもよい。対象とする血液凝固因子としては、限定されるものではないが、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、プレカリクレイン、高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子、第ＶＩＩａ因子、及びヴォン・ヴィレブランド因子、第Ｘａ因子、第ＩＸａ因子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、及びＶＩＩＩａ、プレカレクレイン、及び高分子量キニノゲン、組織因子、第ＶＩＩａ因子、第Ｖａ因子、及び第Ｘａ因子が挙げられる。

対象とする経口投与用組成物中のＮＡＳＰ、胃腸管上皮バリア浸透促進剤、及び血液凝固因子のそれぞれの量（すなわち、質量）は、０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇ、例えば０．０１ｍｇ〜５００ｍｇ、例えば０．１ｍｇ〜２５０ｍｇ、例えば０．５ｍｇ〜１００ｍｇ、例えば１ｍｇ〜５０ｍｇ、さらに例えば１ｍｇ〜１０ｍｇの範囲で変動し得る。したがって、本組成物において、ＮＡＳＰ＋胃腸管上皮バリア浸透促進剤対血液凝固因子の質量比は、変動し得、いくつかの場合においては、１：１〜１：２．５、１：２．５〜１：５、１：５〜１：１０、１：１０〜１：２５、１：２５〜１：５０、１：５０〜１：１００、１：１００〜１：１５０、１：１５０〜１：２００、１：２００〜１：２５０、１：２５０〜１：５００、１：５００〜１：１０００の間、又はこの範囲であってもよい。例えば、ＮＡＳＰ＋胃腸管上皮バリア浸透促進剤対血液凝固因子の質量比は、１：１〜１：１０、１：５〜１：２５、１：１０〜１：５０、１：２５〜１：１００、１：５０〜１：５００、又は１：１００〜１：１０００の間であってもよい。いくつかの実施形態において、血液凝固因子対ＮＡＳＰ＋胃腸管上皮バリア浸透促進剤の質量比は、１：１〜１：２．５、１：２．５〜１：５、１：５〜１：１０、１：１０〜１：２５、１：２５〜１：５０、１：５０〜１：１００、１：１００〜１：１５０、１：１５０〜１：２００、１：２００〜１：２５０、１：２５０〜１：５００、１：５００〜１：１０００の間、又はこの範囲である。例えば、血液凝固因子対ＮＡＳＰと胃腸管上皮バリア浸透促進剤とを含有する本組成物の質量比は、１：１〜１：１０、１：５〜１：２５、１：１０〜１：５０、１：２５〜１：１００、１：５０〜１：５００、又は１：１００〜１：１０００の間であってもよい。

経口投与用組成物は、単一のタイプのＮＡＳＰ及び単一のタイプの胃腸管上皮浸透バリア促進剤のみを含有する均質なものであってもよい。他の実施形態において、対象とする組成物は、２つ以上のＮＡＳＰ又は２つ以上の胃腸管上皮浸透バリア促進剤の不均質な混合物である。例えば、不均質な混合物は、２つ以上のＮＡＳＰ及び２つ以上の胃腸管上皮浸透バリア促進剤を含有してもよい。他の場合において、不均質な混合物は、１つのＮＡＳＰ及び２つ以上の胃腸管上皮浸透バリア促進剤を含有してもよい。また他の場合において、不均質な混合物は、２つ以上のＮＡＳＰ及び１つの胃腸管上皮浸透バリア促進剤を含有してもよい。

特定の実施形態において、本発明の経口投与用組成物は、１つ又は複数の薬学的に許容される添加剤又は経口投与用送達ビヒクルを医薬組成物の一部としてさらに含むことができる。添加剤としては、限定されるものではないが、炭水化物、無機塩、抗微生物剤、酸化防止剤、界面活性剤、水、アルコール、ポリオール、グリセリン、植物油、リン脂質、緩衝剤、酸、塩基、及びそれらの任意の組合せを挙げることができる。炭水化物、例えば、糖、誘導体化された糖、例えばアルジトール、アルドン酸、エステル化された糖、及び／又は糖ポリマーを用いることもできる。対象とする、炭水化物であるいくつかの添加剤としては、例として、単糖、例えばフルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボースなど；二糖、例えば乳糖、ショ糖、トレハロース、セロビオースなど；多糖、例えばラフィノース、メレチトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなど；及びアルジトール、例えばマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール（グルシトール）、ピラノシルソルビトール、ミオイノシトールなどが挙げられる。無機塩としては、限定されるものではないが、クエン酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、硝酸カリウム、リン酸一ナトリウム、リン酸二ナトリウム、及びそれらの任意の組合せを挙げることができる。

特定の実施形態において、本発明の経口投与用組成物は、微生物の成長を予防又は阻止するための抗微生物剤、例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、塩化セチルピリジニウム、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、チメルソール、及びそれらの任意の組合せなどをさらに含むことができる。

１つ又は複数の酸化防止剤をさらに用いることができる。酸化防止剤は、組成物の酸化、ひいては劣化を抑制又は防止することができるものであり、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール、没食子酸プロピル、亜硫酸水素ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、メタ亜硫酸水素ナトリウム、及びそれらの任意の組合せが挙げられる。

１つ又は複数の界面活性剤が、本発明の組成物中にさらに含まれていてもよい。例えば、適当な界面活性剤としては、限定されるものではないが、ポリソルベート、例えば「Ｔｗｅｅｎ２０」及び「Ｔｗｅｅｎ８０」、並びにｐｌｕｒｏｎｉｃ、例えばＦ６８及びＦ８８（ＢＡＳＦ、Ｍｏｕｎｔ Ｏｌｉｖｅ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）；ソルビタンエステル；脂質、例えばリン脂質、例えば、レシチン及び他のホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン（但し、リポソーム形態でないことが好ましい）、脂肪酸及び脂肪酸エステル；ステロイド、例えばコレステロール；キレート化剤、例えばＥＤＴＡ；並びに、亜鉛及び他の陽イオンが挙げられる。

本発明の経口投与用組成物中には、酸又は塩基がさらに存在していてもよい。例えば、酸としては、限定されるものではないが、塩酸、酢酸、リン酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、硝酸、過塩素酸、リン酸、硫酸、フマル酸、及びそれらの任意の組合せを挙げ得る。塩基の例としては、限定されるものではないが、水酸化ナトリウム、酢酸ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、酢酸アンモニウム、酢酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、フマル酸カリウム、及びそれらの任意の組合せが挙げられる。

本経口投与用組成物中のすべての個々の添加剤の量は、添加剤の性質及び機能、経口投与用送達ビヒクル、並びに該組成物の特定の必要性により変動する。典型的に、すべての個々の添加剤の最適な量は、慣例的な実験法を通して、すなわち、さまざまな量の添加剤（低量〜高量にわたり）を含有する組成物を調製し、安定性及び他のパラメーターを調査し、次いで、重大な有害作用を伴わずに最適な成績が得られる範囲を決定することにより、決定する。しかし、一般に、添加剤（複数可）は、本経口投与用組成物中に、添加剤の約１重量％〜約９９重量％、例えば約５重量％〜約９８重量％、例えば約１５〜約９５重量％、さらに例えば３０重量％未満の量で存在することになる。対象とする組成物中で用いてもよい医薬用添加剤に加え、他の添加剤については、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」、第１９版、Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｌｉａｍｓ、（１９９５）；「Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ」、第５２版、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ、Ｍｏｎｔｖａｌｅ、ＮＪ、（１９９８）；及びＫｉｂｂｅ，Ａ．Ｈ．、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第３版、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．、２０００に記載されており、これらの文献の開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

先述のように、本発明の組成物は、該組成物が胃腸管上皮を通して（例えば、経口的に又は経鼻胃管により）吸収される限り、任意の便利な投与様式により投与してもよい。したがって、製剤は、さまざまなものがあり得る。例えば、本発明の組成物は、使用に先立ち溶媒で再構成することができる粉末又は凍結乾燥物、使用に先立ちビヒクルと組み合わせることを必要とする乾燥した不溶性の組成物、並びに、投与に先立ち希釈を要するエマルション及び原液であってもよい。固体の組成物を再構成するための希釈剤としては、限定されるものではないが、静菌性注射用水、デキストロース５％水溶液、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、生理食塩水、滅菌水、脱イオン水、及びそれらの任意の組合せが挙げられる。いくつかの実施形態において、本発明の医薬組成物は、経鼻胃管により摂取又は適用するための、溶液剤若しくは懸濁剤、シロップ剤、錠剤、カプセル剤、散剤、ゲル剤、又はその任意の組合せの形態であってもよい。例えば、本発明の経口投与用組成物は、使用目的によっては、錠剤、カプセル、カプレット装置などの中に予め入れられていてもよい。特定の実施形態において、本組成物は、単位剤形の形態であり、ある量の組成物が、単回経口投与の単位で、予め計量された又は予め包装された形態で、即時使用可能になっている。

有用性
本方法及び組成物は、対象における血液凝固を促進したいという要望、胃腸系を通してＮＡＳＰの吸収を促進したいという要望が存在し、該対象が、ＮＡＳＰ及び胃腸管上皮バリア浸透促進剤を用いた治療に応答性である任意の状況において用途がある。特定の実施形態において、本方法及び組成物は、出血性障害、例えば、慢性又は急性の出血性障害、血液因子欠乏を原因とする先天性凝固障害、後天性凝固障害、及び抗凝固薬の投与を処置するために用いてもよい。例えば、出血性障害としては、限定されるものではないが、血友病Ａ、血友病Ｂ、ヴォン・ヴィレブランド病、突発性血小板減少症、１つ又は複数の接触因子、例えば第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、プレカリクレイン、及び高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）の欠乏、臨床的に意義のある出血に関連する１つ又は複数の因子、例えば第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子（低プロトロンビン血症）、及びヴォン・ヴィレブランド因子の欠乏、ビタミンＫ欠乏、フィブリノゲン障害、例えば無フィブリノゲン血症、低フィブリノゲン血症、及び異常フィブリノゲン血症、α_２−抗プラスミン欠乏、並びに過剰な出血、例えば、肝疾患、腎疾患、血小板減少症、血小板機能不全、血腫、内出血、関節血症、外科手術、外傷、低体温、月経、及び妊娠を原因とする過剰な出血を挙げることができる。

本方法及び組成物は、さらに、血液因子欠乏を原因とする先天性凝固障害又は後天性凝固障害を治療するために血液凝固を促進することにおいて用途がある。血液因子欠乏は、１つ又は複数の因子、限定されるものではないが、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、及びヴォン・ヴィレブランド因子の欠乏を原因とするものであってもよい。

本方法及び組成物は、さらに、出血性障害、例えば、凝固因子の欠乏に伴う出血性障害の治療において血液凝固を促進して止血が改善されるようにする上で、又は対象において抗凝固薬の効果を逆転させるために、用途がある。例えば、本発明の方法及び組成物により血液凝固を促進することは、出血性障害、例えば、先天性凝固障害、後天性凝固障害、及び、外傷により誘導される出血性病態を治療するために用いてもよい。ＮＡＳＰ及び胃腸管上皮バリア浸透促進剤で治療し得る出血性障害の例としては、限定されるものではないが、血友病Ａ、血友病Ｂ、ヴォン・ヴィレブランド病、突発性血小板減少症、１つ又は複数の接触因子、例えば第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、プレカリクレイン、及び高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）の欠乏、臨床的に意義のある出血に関連する１つ又は複数の因子、例えば第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子（低プロトロンビン血症）、及びヴォン・ヴィレブランド因子の欠乏、ビタミンＫ欠乏、フィブリノゲン障害、例えば無フィブリノゲン血症、低フィブリノゲン血症、及び異常フィブリノゲン血症、α_２−抗プラスミン欠乏、並びに過剰な出血、例えば、肝疾患、腎疾患、血小板減少症、血小板機能不全、血腫、内出血、関節血症、外科手術、外傷、低体温、月経、及び妊娠を原因とする過剰な出血が挙げられる。特定の実施形態において、本発明の方法及び組成物は、先天性凝固障害、例えば、血友病Ａ、血友病Ｂ、及びヴォン・ヴィレブランド病を治療するために使用される。他の実施形態において、ＮＡＳＰは、後天性凝固障害、例えば、第ＶＩＩＩ因子、ヴォン・ヴィレブランド因子、第ＩＸ因子、第Ｖ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、及び第ＸＩＩＩ因子の欠乏、とりわけ、血液凝固因子に対する阻害薬若しくは自己免疫を原因とする障害、又は凝固因子の合成の低下をもたらす疾患若しくは病態を原因とする止血障害を治療するために使用される。

いくつかの実施形態において、出血性障害は、本方法及び組成物を長期間にわたり複数回投与で必要とする慢性の病態（例えば、先天性又は後天性の凝固因子欠乏）であってもよい。あるいは、本発明の方法及び組成物は、急性の病態（例えば、外科手術若しくは外傷を原因とする出血、又は、凝固補充療法を受けている対象における因子阻害薬／自己免疫エピソード）を治療するために、単回又は複数回用量で比較的短い期間、例えば１〜２週間にわたり、経口投与されてもよい。

本方法及び組成物は、さらに、外科的又は侵襲的な手術を受けている対象における血液凝固を促進することにおいて用途がある。

本方法及び組成物は、さらに、対象において抗凝固薬の効果を逆転させるために血液凝固を促進することにおいて用途があり、本方法は、凝固促進量のＮＡＳＰを胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで含む治療上有効な量の組成物を該対象に投与することを含む。特定の実施形態において、対象は、限定されるものではないが以下に挙げるような抗凝固薬、すなわち、ヘパリン、クマリン誘導体、例えばワルファリン又はジクマロール、ＴＦＰＩ、ＡＴ ＩＩＩ、ループス抗凝固因子、線虫抗凝固ペプチド（ＮＡＰｃ２）、活性部位遮断第ＶＩＩａ因子（第ＶＩＩａｉ因子）、第ＩＸａ因子阻害薬、第Ｘａ因子阻害薬、例えばフォンダパリヌクス、イドラパリヌクス、ＤＸ−９０６５ａ、及びラザキサバン（ＤＰＣ９０６）、第Ｖａ因子及び第ＶＩＩＩａ因子の阻害薬、例えば活性化プロテインＣ（ＡＰＣ）及び可溶性トロンボモジュリン、トロンビン阻害薬、例えばヒルジン、ビバリルジン、アルガトロバン、及びキシメラガトランで治療されていてもよい。特定の実施形態において、対象が使用している抗凝固薬は、凝血因子と結合する抗体、限定されるものではないが例えば、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、ヴォン・ヴィレブランド因子、プレカリクレイン、又は高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）と結合する抗体であってもよい。

別の態様では、本発明は、凝血の改善が望ましいと思われる外科的又は侵襲的な手術を受けている対象を治療するための方法であって、本明細書において詳述した、凝固促進量のＮＡＳＰを胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで含む治療上有効な量の組成物を該対象に経口投与することを含む方法を提供する。特定の実施形態において、ＮＡＳＰ及び胃腸管上皮バリア浸透促進剤は、１つ若しくは複数の異なるＮＡＳＰ及び１つ若しくは複数の異なる胃腸管上皮バリア浸透促進剤と共に、並びに／又は、１つ若しくは複数の他の治療剤と組み合わせて、外科的又は侵襲的な手術を受けている対象に併用投与することができる。例えば、対象には、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、プレカリクレイン、高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子、第ＶＩＩａ因子、及びヴォン・ヴィレブランド因子から成る群から選択される治療上有効な量の１つ又は複数の因子を投与してもよい。治療は、凝固促進剤、例えば、内因性凝固経路の活性化因子、例として、第Ｘａ因子、第ＩＸａ因子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、及びＶＩＩＩａ、プレカレクレイン、及び高分子量キニノゲン；又は、外因性凝固経路の活性化因子、例として、組織因子、第ＶＩＩａ因子、第Ｖａ因子、及び第Ｘａ因子を投与することをさらに含むことができる。外科的又は侵襲的な手術を受けている対象を治療するために使用される治療剤は、同じ又は異なる組成物中で、また、ＮＡＳＰ及び胃腸管上皮バリア浸透促進剤の投与と併用して、又はその前に、又はその後に、投与できる。

先に開示したとおり、止血剤、血液因子、及び医薬品を用いることもできる。例えば、対象には、１つ又は複数の血液凝固因子、例えば、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、プレカリクレイン、高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子、第ＶＩＩａ因子、ヴォン・ヴィレブランド因子、第Ｘａ因子、第ＩＸａ因子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、及びＶＩＩＩａ、プレカレクレイン、及び高分子量キニノゲン、組織因子、第ＶＩＩａ因子、第Ｖａ因子、及び第Ｘａ因子を投与してもよい。

キット
本方法の実行において使用するためのキットも提供され、このキットは、先述の組成物のうち１つ又は複数、例えば、先に記載した、ＮＡＳＰ組成物、胃腸管上皮バリア浸透促進剤組成物、及び／又は血液凝固因子を備えていてもよい。本キットは、他の構成要素、例えば、投与器具、流体源など、本方法の実行において用途があり得る構成要素をさらに備えていてもよい。多様な構成要素は、所望により、例えば、一緒に又は別々に包装されていてもよい。

先述の構成要素に加え、本キットは、キットの構成要素を使用して本方法を実行するための取扱説明書をさらに備えていてもよい。本方法を実行するための取扱説明書は、一般に、適当な記録媒体に記録されている。例えば、取扱説明書は、例えば紙又はプラスチックなどに印刷されていてもよい。したがって、取扱説明書は、キット中に添付文書として、例えば、キット又はその構成要素の容器のラベリングの形態で（すなわち、パッケージ又はサブパッケージに付随して）、存在してもよい。他の実施形態において、取扱説明書は、コンピューター可読記憶媒体、例えばＣＤ−ＲＯＭ、ディスケットなどに、電子記憶装置のデータファイルとして存在する。また他の実施形態において、実際の取扱説明書はキット中には存在せず、離れた入手源から、例えばインターネットを介して取扱説明書を得るための手段が提供される。この実施形態の例は、取扱説明書を見ることができる及び／又は取扱説明書をダウンロードすることができるウェブアドレスを備えたキットである。取扱説明書と同様に、取扱説明書を得るためのこの手段は、適当な基材に記録される。

次に記載する実施例は、例証的な目的のみのために示すものであり、本発明の範囲を限定することを意図したものでは決してない。

使用する数字（例えば、量、温度など）に関しては正確性を確保するよう努力したが、若干の実験誤差及び偏差は、当然ながら許容されるべきである。

ＮＡＳＰを胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わせた場合のバイオアベイラビリティー及び吸収試験
対象とする、胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされたＮＡＳＰのバイオアベイラビリティーを、ＣａＣｏ−２細胞モデルスクリーニングを用いて試験した。この方法は、さまざまな輸送タンパク質を細胞膜上で発現するヒト結腸癌細胞株を利用する。細胞層は、２つのコンパートメントを分ける膜表面上で成長する（２４ウェルプレート）。この実験のための実験装置の例を図１に示す。選択したＮＡＳＰ＋胃腸管上皮バリア浸透促進剤試料を、１ｍｇ／ｍＬの濃度でＲＰＭＩ細胞培地に溶解し、頂端側コンパートメント中の細胞上に塗布した。細胞を、５％ＣＯ_２下、３７℃でインキュベートした。培地試料は、異なる時点で側底側コンパートメント及び頂端側コンパートメントから除去した。細胞層の状態を経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の測定によりモニタリングした。試料をトロンビン生成アッセイ（ＣＡＴ）により分析した。ＮＡＳＰ濃度を、ＣＡＴアッセイで得られた活性に基づいて計算した。トロンビン生成アッセイ及び他の血液凝固アッセイの実験についての詳細は、２００５年５月２７日に出願された米国特許出願第１１／１４０，５０４号、現米国特許第７，７６７，６５４号、及び２０１１年１月１３日に出願された米国特許出願第１３／００６，３９６号に記載されており、これらの文献の開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

すべてのＮＡＳＰ＋胃腸管上皮バリア浸透促進剤試料を、試料濃度が凝固促進活性を増加させる範囲の濃度であるように希釈した。最初の担持濃度の値を基準に、頂端側及び側底側の濃度を、２時間が経過するごとに（例えば、２時間、４時間、６時間、８時間。２４時間を含む）決定した。決定された側底側濃度を基準に、吸収率（％）を化合物の組合せ（すなわち、ＮＡＳＰ＋胃腸管上皮バリア浸透促進剤）それぞれについて決定した。

本明細書に記載する吸収試験の例を表１〜３に示すが、これらの表は、ＮＡＳＰであるフコイダンＦ．ｖ．１０９１を、胃腸管上皮バリア浸透促進剤であるブロメライン（０．５ｍｇ／ｍＬ）と組み合わせた場合の、Ｃａｃｏ−２細胞モデルにおける頂端側濃度及び側底側濃度をまとめたものである。表１は、Ｆ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１をブロメラインと組み合わせた場合の最初の頂端側濃度が約８４０μｇ／ｍＬであることを示すものである。約８時間後、Ｆ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１の頂端側濃度は、平均約６２７μｇ／ｍＬまで、約２５％低下している。

表２は、Ｆ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１をブロメラインと組み合わせた場合の多様な時点での側底側濃度を示すものである。図２は、Ｃａｃｏ−２系における、ブロメライン（０．５ｍｇ／ｍＬ）の存在下でのＦ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１の側底側濃度を示すものである。図３は、各試行の対応する経上皮電気抵抗曲線により測定した値として細胞層の状態を示すものである。

表３は、ブロメラインの存在下での多様な時点におけるＦ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１の吸収率（％）を示すものである。

表２及び表３に基づき、平均吸収量は、Ｆ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１をブロメラインと組み合わせた場合は８時間時点で１９ｍｇ／ｍＬであり、Ｆ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１の側底側濃度は、胃腸管上皮バリア浸透促進剤であるブロメラインの存在下では時間と共に増加することを実証している。

表４は、多様な濃度の数種類の胃腸管上皮浸透促進剤の存在下での、Ｃａｃｏ−２細胞モデルにおける天然ＮＡＳＰの吸収率（％）をまとめたものである。表４に示すように、天然ＮＡＳＰはすべて、対象とする胃腸管上皮バリア浸透促進剤の存在下で吸収率の増加を示した。

表５は、多様な濃度の数種類の胃腸管上皮浸透促進剤の存在下での、Ｃａｃｏ−２細胞モデルにおける合成ＮＡＳＰの吸収率（％）をまとめたものである。表５に示すように、合成ＮＡＳＰはすべて、対象とする胃腸管上皮バリア浸透促進剤の存在下で吸収率の増加を示した。

図４〜８は、異なる胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされた、対象とするいくつかの天然ＮＡＳＰのＣａｃｏ−２細胞モデルにおける吸収量を、ＴＧＡ及び液体クロマトグラフィー／質量分析により決定した値として示すものである。図９及び１０は、異なる胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わされた、対象とするいくつかの合成ＮＡＳＰのＣａｃｏ−２細胞モデルにおける吸収量を、ＴＧＡ及び液体クロマトグラフィー／質量分析により決定した値として示すものである。

図４ａ〜ｂは、一切の胃腸管上皮バリア浸透促進剤の不在下、並びに、ブロメライン、キトサンの存在下、及びブロメラインとキトサンとの組合せの存在下での、ＮＡＳＰであるＢＡＸ５１３のＣａｃｏ−２細胞モデルにおける吸収量を示すものである。図４ａ〜ｂに示すように、ＢＡＸ５１３の側底側濃度は胃腸管上皮バリア浸透促進剤の存在下で増加しており、このことから、ＢＡＸ５１３の吸収量は、胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わせて投与されると増加することが示される。

図５ａ〜ｃは、一切の胃腸管上皮バリア浸透促進剤の不在下、並びに、いくつかの異なる胃腸管上皮バリア浸透促進剤、すなわち、カプリン酸ナトリウム、デオキシコラート、ブロメライン、キトサンの存在下、及びブロメラインとキトサンとの組合せの存在下での、ＮＡＳＰであるフコイダンＦ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１のＣａｃｏ−２細胞モデルにおける吸収量を示すものである。図５ａ〜ｃは、フコイダンＦ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１の側底側濃度が胃腸管上皮バリア浸透促進剤の存在下で増加することを実証するものであり、このことから、フコイダンＦ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１の吸収量は、胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わせて投与されると増加することが示される。とりわけ、フコイダンＦ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１の吸収量は、キトサンとブロメラインとの組合せの存在下で投与されると、実質的に増加する。

図６ａ〜ｂは、一切の胃腸管上皮バリア浸透促進剤の不在下、並びに、胃腸管上皮バリア浸透促進剤、すなわち、カプリン酸ナトリウム、デオキシコラート、ブロメライン、キトサンの存在下、及びブロメラインとキトサンとの組合せの存在下での、ＮＡＳＰであるフコイダンＵ．ｐ．５５０８００５のＣａｃｏ−２細胞モデルを示すものである。図６ａ〜ｂは、フコイダンＵ．ｐ．５５０８００５の側底側濃度が胃腸管上皮バリア浸透促進剤の存在下で増加することを実証するものであり、このことから、フコイダンＵ．ｐ．５５０８００５の吸収量は、胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わせて投与されると増加することが示される。とりわけ、フコイダンＵ．ｐ．５５０８００５の吸収量は、カプリン酸ナトリウム、ブロメラインの存在下、及び、キトサンとブロメラインとの組合せの存在下で、実質的に増加した。

図７ａ〜ｂは、一切の胃腸管上皮バリア浸透促進剤の不在下、並びに、胃腸管上皮バリア浸透促進剤、すなわち、デオキシコラート（２通りの異なる濃度）、ブロメライン、キトサンの存在下、及びブロメラインとキトサンとの組合せの存在下での、ＮＡＳＰであるフコイダンＦｖＦ ＤＳ１００１１０８ＢのＣａｃｏ−２細胞モデルにおける吸収量を示すものである。図７ａ〜ｂは、フコイダンＦ．ｖ．Ｆ ＤＳ１００１１０８Ｂの側底側濃度が胃腸管上皮バリア浸透促進剤の存在下で増加することを実証するものであり、このことから、フコイダンＦ．ｖ．Ｆ ＤＳ１００１１０８Ｂの吸収量は、胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わせて投与されると増加することが示される。とりわけ、フコイダンＦ．ｖ．Ｆ ＤＳ１００１１０８Ｂの吸収量は、キトサンとブロメラインとの組合せの存在下で投与されると、実質的に増加する。

図８ａ〜ｂは、一切の胃腸管上皮バリア浸透促進剤の不在下、並びに、胃腸管上皮バリア浸透促進剤、すなわち、デオキシコラート（２通りの異なる濃度）、ブロメライン、キトサンの存在下、及びブロメラインとキトサンとの組合せの存在下での、ＮＡＳＰであるフコイダンＦｖＦ ＳＫ１１０１４４ＢのＣａｃｏ−２細胞モデルを示すものである。図８ａ〜ｂは、フコイダンＦｖＦ ＳＫ１１０１４４Ｂの側底側濃度が胃腸管上皮バリア浸透促進剤の存在下で増加することを実証するものであり、このことから、フコイダンＦｖＦ ＳＫ１１０１４４Ｂの吸収量は、胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わせて投与されると増加することが示される。とりわけ、フコイダンＦｖＦ ＳＫ１１０１４４Ｂの吸収量は、０．０８％デオキシコラート、ブロメラインの存在下、及び、キトサンとブロメラインとの組合せの存在下で、実質的に増加した。

図９及び１４は、一切の胃腸管上皮バリア浸透促進剤の不在下、並びに、胃腸管上皮バリア浸透促進剤、すなわち、デオキシコラート、ブロメライン、及びカプリン酸ナトリウムの存在下での、合成ＮＡＳＰである硫酸化β−シクロデキストリンのＣａｃｏ−２細胞モデルにおける吸収量を示すものである。図９は、硫酸化β−シクロデキストリンの側底側濃度が胃腸管上皮バリア浸透促進剤の存在下で増加したことを実証するものであり、このことから、硫酸化β−シクロデキストリンの吸収量は、胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わせて投与されると増加することが示される。とりわけ、硫酸化β−シクロデキストリンの吸収量は、デオキシコラート、ブロメライン、及びカプリン酸ナトリウムの３つすべての存在下において、８時間時点で実質的に増加した。

図１０及び１５は、一切の胃腸管上皮バリア浸透促進剤の不在下、並びに、胃腸管上皮バリア浸透促進剤、すなわち、デオキシコラート、ブロメライン、キトサン、及びカプリン酸ナトリウムの存在下での、合成ＮＡＳＰである硫酸化マルトペンタオースのＣａｃｏ−２細胞モデルを示すものである。図１０は、硫酸化マルトペンタオースの側底側濃度が胃腸管上皮バリア浸透促進剤の存在下で増加したことを実証するものであり、このことから、硫酸化マルトペンタオースの吸収量は、胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わせて投与されると増加することが示される。とりわけ、硫酸化マルトペンタオースの吸収量は、デオキシコラート、及びブロメラインの存在下において、８時間時点で実質的に増加した。硫酸化マルトペンタオースも、キトサン及びカプリン酸ナトリウムの存在下で、吸収量の強力な増加を示した。

図４〜１０において実証されるように、天然ＮＡＳＰ及び合成ＮＡＳＰいずれの側底側濃度も、それぞれの胃腸管上皮バリア浸透促進剤の存在下で増加しており、このことから、ＮＡＳＰの吸収量は、胃腸管上皮バリア浸透促進剤と組み合わせて投与されると、胃腸管上皮バリア浸透促進剤の不在下での吸収量と比較して増加することが示される。

図１１ａ〜ｂは、キトサンとブロメラインとの組合せを、ＮＡＳＰであるフコイダンＦ．ｖ．Ｌ／ＦＶＦ１０９１と組み合わせて用いた場合（図１１ａ）、及び、フコイダンＦｖＦ ＤＳ１００１１０８Ｂと組み合わせて用いた場合（図１１ｂ）の、異なる濃度のキトサン及びブロメラインの効果を示すものである。とりわけ、キトサンとブロメラインとの組合せには、０．３％のキトサンと０．５ｍｇ／ｍＬのブロメライン；１．５％のキトサンと０．２５ｍｇ／ｍＬのブロメライン；３％のキトサンと０．０５ｍｇ／ｍＬのブロメライン（ｂｒｏｍａｌｅｉｎ）；及び３％のキトサンと０．５ｍｇ／ｍＬのブロメラインが含まれている。図１０ａ〜ｂに示すように、３％のキトサンと０．５ｍｇ／ｍＬのブロメラインとの組合せは、ＮＡＳＰの最も強力な吸収を示した。

表６は、Ｃａｃｏ−２細胞モデルにおける天然ＮＡＳＰ及び合成ＮＡＳＰの吸収率（％）をまとめたものである。表４に示すように、ＮＡＳＰはすべて、対象とする胃腸管上皮バリア浸透促進剤の存在下で吸収率の増加を示した。

図１２ａ〜ｂ及び図１３ａ〜ｃは、胃腸管上皮バリア浸透促進剤の存在下及び不在下における経上皮電気抵抗により測定した値としての細胞層の状態を、図１２は硫酸化β−シクロデキストリン、図１３は硫酸化マルトペントースを用いて試験した場合について示すものである。図１２ａ〜ｂに示すように、硫酸化β−シクロデキストリンの存在下では、胃腸管上皮バリア浸透促進剤であるブロメラインは、経上皮電気抵抗値を実質的に低下させる（３００オーム／ｃｍ^２未満）。経上皮電気抵抗値は、新鮮培地の添加後は低いままであった。しかし、胃腸管上皮バリア浸透促進剤単独で処置すると、経上皮電気抵抗は回復した。同様に、図１３ａ〜ｃに示すように、硫酸化マルトペントースの存在下では、胃腸管上皮バリア浸透促進剤であるブロメライン、デオキシコラート、及びキトサンは、経上皮電気抵抗値を実質的に低下させる。しかし、図１２ａ〜ｂに示す硫酸化β−シクロデキストリンについての試験とは対照的に、経上皮電気抵抗は、胃腸管上皮バリア浸透促進剤及びマルトペンタオースを除去した後に増加した。

前述の発明を、理解が明瞭になることを目的として、例証及び実施例を用いていくらか詳細に記載してきたが、本発明の教示に照らせば、添付の特許請求の範囲の精神又は範囲を逸脱することなく、これにある種の変化及び改変を加え得ることは、当業者には容易に明白となることである。

したがって、これまでの記載は、本発明の原理を単に例証するものである。当業者であれば、本明細書には明示的に記載も提示もされていなくても、本発明の原理を具体化する多様な構成を工夫することは可能であろうし、そのような構成が本発明の精神及び範囲内に含まれることは理解されよう。さらに、本明細書に記載するすべての例及び条件付きの文言は、当技術分野が拡大するように本発明者らにより提供される、本発明の原理、及び概念を理解する上で読者の助けとなることを主として意図したものであり、そのような具体的に記載される例及び条件に限定されるものではないと解釈されたい。さらに、本発明の原理、態様、及び実施形態、並びにその具体例を記載する本明細書中のすべての文章は、その構造的等価物と機能的な等価物の両方を包含することを意図したものである。加えて、そのような等価物には、現時点で公知の等価物及び将来的に開発される等価物の両方、すなわち、構造に関わらず同じ機能を発揮する、開発下にある一切の要素が含まれることを意図している。したがって、本発明の範囲は、本明細書に示され、記載されている実施形態に限定されることを意図したものではない。そうではなく、本発明の範囲及び精神は、添付の特許請求の範囲により具現化される。

Claims (15)

1. 対象における血液凝固を促進する方法であって、凝固促進量の非抗凝固性硫酸化多糖（ＮＡＳＰ）を、胃腸管上皮バリア浸透促進剤との組合せで、前記対象における血液凝固を促進するのに十分な様式で前記対象に経口投与することを含む方法。
2. 前記対象に投与されるＮＡＳＰの前記量が、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
3. 前記ＮＡＳＰが、天然に存在するＮＡＳＰ又は合成ＮＡＳＰである、請求項１又は２に記載の方法。
4. 前記ＮＡＳＰが、Ｎ−アセチルヘパリン（ＮＡＨ）、Ｎ−アセチル−デ−Ｏ−硫酸化ヘパリン（ＮＡ−ｄｅ−ｏ−ＳＨ）、デ−Ｎ−硫酸化ヘパリン（Ｄｅ−ＮＳＨ）、デ−Ｎ−硫酸化アセチル化ヘパリン（Ｄｅ−ＮＳＡＨ）、過ヨウ素酸塩酸化ヘパリン（ＰＯＨ）、化学的硫酸化ラミナリン（ＣＳＬ）、化学的硫酸化アルギン酸（ＣＳＡＡ）、化学的硫酸化ペクチン（ＣＳＰ）、硫酸デキストラン（ＤＸＳ）、ヘパリン由来オリゴ糖（ＨＤＯ）、ポリ硫酸ペントサン（ＰＰＳ）、及びフコイダン、並びにそれらの組合せから成る群から選択される天然に存在するＮＡＳＰである、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
5. 前記ＮＡＳＰが、硫酸化オリゴマー、硫酸化ペントース、硫酸化ヘキソース、又は硫酸化シクロデキストリンから成る群から選択される合成ＮＡＳＰである、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
6. 前記胃腸管上皮バリア浸透促進剤が、プロテアーゼ、胆汁酸、多糖、脂肪酸及びその塩、並びにそれらの組合せから成る群から選択されるタイトジャンクションモジュレーターである、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
7. 前記タイトジャンクションモジュレーターが、ブロメライン又はその酵素成分、デオキシコラート、キトサン、カプリン酸ナトリウム、又はそれらの組合せから成る群から選択される、請求項６に記載の方法。
8. 前記胃腸管上皮バリア浸透促進剤が、キトサン及びブロメラインを含む、請求項７に記載の方法。
9. 第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、プレカリクレイン、高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子、ヴォン・ヴィレブランド因子、組織因子、第ＶＩＩａ因子、第Ｖａ因子、及び第Ｘａ因子、第ＩＸａ因子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、及びＶＩＩＩａから成る群から選択される１つ又は複数の因子を前記対象に投与することをさらに含む、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
10. 前記対象が、
    （ａ）慢性若しくは急性の出血性障害、血液因子欠乏を原因とする先天性凝固障害、及び後天性凝固障害から成る群から選択される出血性障害を有する、又は
    （ｂ）抗凝固薬の事前投与を理由に血液凝固の促進を必要としている、又は
    （ｃ）外科的若しくは他の侵襲的処置を理由に血液凝固の促進を必要としている、
    請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
11. 前記対象におけるＴＦＰＩ活性を阻害する方法である、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
12. （ａ）凝固促進量の非抗凝固性硫酸化多糖（ＮＡＳＰ）と、
    （ｂ）胃腸管上皮バリア浸透促進剤と、
    （ｃ）経口投与用送達ビヒクルと
    を含み、単位剤形である、経口投与用組成物。
13. 前記胃腸管上皮バリア浸透促進剤が、プロテアーゼ、胆汁酸、多糖、脂肪酸及びその塩、並びにそれらの組合せから成る群から選択されるタイトジャンクションモジュレーターである、請求項１２に記載の経口投与用組成物。
14. 前記タイトジャンクションモジュレーターが、ブロメライン若しくはその酵素成分、デオキシコラート、キトサン、カプリン酸ナトリウム、又はそれらの組合せから成る群から選択される、請求項１３に記載の経口投与用組成物。
15. 前記胃腸管上皮バリア浸透促進剤が、キトサン及びブロメラインを含む、請求項１２に記載の経口投与用組成物。