JP2014513532A5 - - Google Patents

Claims (22)

1. 親菌株に由来する糸状菌の変異菌株であって、
   前記変異菌株が、前記変異菌株の細胞に、前記親菌株の細胞と比較して、変更された量の機能性Ｃｒｚ１タンパク質を生成させる、遺伝子変化を含み、
   前記変異菌株が、ｓｆｂ３遺伝子、ｓｅｂ１遺伝子、ｍｐｇ１遺伝子、ｇａｓ１遺伝子、及びｔｐｓ２遺伝子、又はこれらの相同遺伝子からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子の破壊を更に含み、並びに
   前記変異菌株の細胞が、深部培養における好気性発酵の間に（ｉ）前記親菌株の細胞と比較して、予め選択された溶存酸素量を維持するために、変更された撹拌量を必要とする、及び／又は、（ｉｉ）前記親菌株の細胞と比較して、予め選択された撹拌量で、変更された溶存酸素量を維持する、細胞ブロスを生成する、変異菌株。
2. 機能性Ｃｒｚ１タンパク質の前記変更された量が、減少された量であり、
   前記変異菌株が、深部培養における好気性発酵の間に、（ｉ）前記親菌株の細胞と比較して、予め選択された溶存酸素量を維持するために、減少した撹拌を必要とする、及び／又は、（ｉｉ）前記親菌株の細胞と比較して、予め選択された撹拌量で、増加した溶存酸素量を維持する、細胞ブロスを生成する、
   請求項１に記載の変異菌株。
3. （ａ）前記遺伝子変化が、前記親菌株中に存在するｃｒｚ１遺伝子の破壊を含む、
   （ｂ）前記ｃｒｚ１遺伝子の破壊が、前記ｃｒｚ１遺伝子の全て又は一部の欠失の結果である、
   （ｃ）前記ｃｒｚ１遺伝子の破壊が、前記ｃｒｚ１遺伝子を含むゲノムＤＮＡの一部の欠失の結果である、又は
   （ｄ）前記ｃｒｚ１遺伝子の破壊が、前記ｃｒｚ１遺伝子の突然変異誘発の結果である、
   請求項１又は２に記載の変異菌株。
4. 前記ｃｒｚ１遺伝子の破壊が、部位特異的組み換えを用いて行われる、又は
   前記ｃｒｚ１遺伝子の破壊が、前記ｃｒｚ１遺伝子の遺伝子座に選択マーカーの導入と共に行われる、
   請求項３に記載の変異菌株。
5. 前記変異菌株が、機能性Ｃｒｚ１タンパク質を生成しない、請求項１〜４のいずれか一項に記載の変異菌株。
6. 前記変異菌株が、Ｃｒｚ１タンパク質を生成しない、請求項１〜５のいずれか一項に記載の変異菌株。
7. 前記変異菌株が、対象タンパク質をコード化する遺伝子を更に含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の変異菌株。
8. ｓｆｂ３遺伝子の破壊を更に含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の変異菌株。
9. 前記変異菌株が、バイオマス単位量当たり、前記親菌株と実質的に同量、又はそれ以上のタンパク質を生成する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の変異菌株。
10. 前記糸状菌が、チャワンタケ亜門（Pezizomycotina）の種である、又は
    前記糸状菌が、トリコデルマ属（Trichoderma）の種である、
    請求項１〜９のいずれか一項に記載の変異菌株。
11. 前記糸状菌が、トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）である、請求項１０に記載の変異菌株。
12. 糸状菌細胞の変異菌株の作製方法であって、
    遺伝子変化を糸状菌細胞の親菌株に導入する工程であり、前記遺伝子変化が、前記親菌株の細胞と比較して機能性Ｃｒｚ１タンパク質の生成量を変更させる、該工程、
    それにより、深部培養における好気性発酵の間に（ｉ）前記親菌株の細胞と比較して、予め選択された溶存酸素量を維持するために、変更された撹拌量を必要とする、及び／又は、（ｉｉ）前記親菌株の細胞と比較して、予め選択された撹拌量で、変更された溶存酸素量を維持する、細胞ブロスを生成する、変異糸状菌細胞を製造する工程、
    を含み、並びに
    前記ｃｒｚ１遺伝子の破壊が、ｓｆｂ３遺伝子、ｓｅｂ１遺伝子、ｍｐｇ１遺伝子、ｇａｓ１遺伝子、及びｔｐｓ２遺伝子、又はこれらの相同遺伝子からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子の破壊と共に行われる
    方法。
13. 前記遺伝子変化が、機能性Ｃｒｚ１タンパク質の生成を低下させるか又は防ぎ、それにより、深部培養における好気性発酵の間に（ｉ）前記親菌株の細胞と比較して、予め選択された溶存酸素量を維持するために、減少した撹拌を必要とする、及び／又は、（ｉｉ）前記親菌株の細胞と比較して、予め選択された撹拌量で、増加した溶存酸素量を維持する、細胞ブロスを生成する、変異糸状菌細胞を製造する、請求項１２に記載の方法。
14. （ａ）前記遺伝子変化が、遺伝子操作を使用して親糸状菌細胞のｃｒｚ１遺伝子を破壊することを含む、
    （ｂ）前記遺伝子変化が、遺伝子操作を使用して親糸状菌細胞においてｃｒｚ１遺伝子を欠失させることを含む、又は
    （ｃ）前記遺伝子変化が、部位特異的遺伝子組み換えを使用して行われる、
    請求項１２又は１３に記載の方法。
15. （ａ）前記ｃｒｚ１遺伝子の破壊が、前記ｃｒｚ１遺伝子の遺伝子座に選択マーカーの導入と共に行われる、又は
    （ｂ）前記ｃｒｚ１遺伝子の破壊が、ｓｆｂ３遺伝子の破壊と共に行われる、
    請求項１８〜２２のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記変異菌株が、バイオマス単位量当たり、前記親菌株と実質的に同量、又はそれ以上のタンパク質を生成する、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記糸状菌が、チャワンタケ亜門の種である、又は
    前記糸状菌が、トリコデルマ属の種である、
    請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記糸状菌が、トリコデルマ・リーゼイである、請求項１７に記載の方法。
19. 前記親菌株が、対象タンパク質をコード化する遺伝子を更に含む、請求項１２〜１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記対象タンパク質をコード化する遺伝子が、機能性Ｃｒｚ１タンパク質の産生を低下させるか又は防ぐ遺伝子変化を導入する前に前記親菌株内に存在する、請求項１９に記載の方法。
21. 親菌株に由来する糸状菌の変異菌株であって、
    前記変異菌株が、
    （ａ）前記親菌株中に存在するｃｒｚ１遺伝子の破壊を含む遺伝子変化であって、（ｉ）深部培養において、前記親菌株の細胞と比較して、予め選択された溶存酸素量を維持するために、減少した撹拌の必要性、及び／又は、（ｉｉ）深部培養において、前記親菌株の細胞と比較して、予め選択された撹拌量で、増加した溶存酸素量の維持、をもたらす遺伝子変化、並びに
    （ｂ）（ａ）における遺伝子変化の前に前記変異菌株中に存在する対象タンパク質をコード化する遺伝子、
    を含み、かつ
    前記ｃｒｚ１遺伝子の破壊が、ｓｆｂ３遺伝子、ｓｅｂ１遺伝子、ｍｐｇ１遺伝子、ｇａｓ１遺伝子、及びｔｐｓ２遺伝子、又はこれらの相同遺伝子からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子の破壊と共に行われる、
    変異菌株。
22. （ａ）前記ｃｒｚ１遺伝子の破壊が、前記ｃｒｚ１遺伝子の遺伝子座に選択マーカーの導入と共に行われる、及び／又は
    （ｂ）前記ｃｒｚ１遺伝子の破壊が、ｓｅｂ１遺伝子の破壊と共に行われる、
    請求項３５に記載の変異菌株。