JP2014224088A - Skin external preparation - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、シークヮーサー種子油を含有する皮膚外用剤に関し、より詳細には、優れたコラーゲン合成促進作用を有し、しわやたるみ等を予防、改善して優れた美肌効果および保湿効果が得られる皮膚外用剤に関する。 The present invention relates to an external preparation for skin containing seeker seed oil, and more specifically, has an excellent collagen synthesis promoting action, and can prevent and improve wrinkles and sagging, thereby obtaining an excellent skin effect and moisturizing effect. It relates to an external preparation for skin.
コラーゲンは、動物の結合組織を構成している主要なタンパク質で、筋繊維骨、軟骨、腱、皮膚などに存在する。コラーゲンは、多数の分子種からなるスーパーファミリーを構成しており、繊維束形成型グループ（I型、II型、III型、V型、XI型）、シート形成型グループ（IV型、VII型、IX型）などに分類されている。従来コラーゲンは、組織を支持する構造タンパク質であると考えられていたが、現在では、細胞の代謝、形態、増殖、分化など、細胞が正常な機能を発揮するために重要な働きをしていることが明らかにされている。 Collagen is a major protein constituting the connective tissue of animals, and is present in muscle fiber bone, cartilage, tendon, skin and the like. Collagen constitutes a superfamily consisting of a large number of molecular species, including fiber bundle forming groups (type I, type II, type III, type V, type XI), sheet forming type groups (type IV, type VII, IX type). Traditionally, collagen was thought to be a structural protein that supports tissues, but now it plays an important role in the normal functioning of cells, such as cell metabolism, morphology, proliferation, and differentiation. It has been made clear.
コラーゲンは、皮膚では、基底膜、真皮に存在し、おもに繊維芽細胞で産生され、皮膚に保湿機能や柔軟性、弾力性を与え、張りやつやのあるみずみずしい肌の状態が維持されるが、紫外線照射や乾燥等の外的因子の影響、あるいは加齢によってコラーゲンが減少すると、皮膚の保湿機能や弾力性が低下し、肌荒れやしわ、たるみ等が生じる。そこで、しわ、たるみの改善等を目的とした皮膚外用剤に配合するために、コラーゲン産生を促進する成分について研究がなされてきた。 Collagen is present in the basement membrane and dermis in the skin, and is mainly produced by fibroblasts, giving the skin a moisturizing function, flexibility, and elasticity, and maintaining a fresh skin state with tension and gloss. When collagen decreases due to the influence of external factors such as ultraviolet irradiation and drying, or due to aging, the skin's moisturizing function and elasticity are lowered, resulting in rough skin, wrinkles, sagging and the like. Therefore, studies have been made on ingredients that promote collagen production in order to be incorporated into an external preparation for skin intended to improve wrinkles and sagging.
例えば、酵素で加水分解処理されたノグルミ抽出物やミロバランの果実の抽出物がコラーゲン産生促進作用を有することが報告されている（特許文献１〜２）。またコラーゲンの中でも、Ｉ型コラーゲンは真皮中のコラーゲンの約８０％を占める主要な成分であるため、Ｉ型コラーゲンの産生を促進させることにより、肌荒れやしわ、たるみ等を有効に予防、改善できると考えられるが、このようなＩ型コラーゲンの産生促進作用を有する成分として、イソフラボン、フィトステロールやセネデスムス属植物プランクトン抽出物などが知られている（特許文献３〜４）。 For example, it has been reported that a nogurumi extract hydrolyzed with an enzyme or a fruit extract of myrobalan has a collagen production promoting action (Patent Documents 1 and 2). Among collagens, type I collagen is a major component that occupies about 80% of collagen in the dermis. By promoting the production of type I collagen, rough skin, wrinkles, sagging, etc. can be effectively prevented and improved. However, isoflavones, phytosterols, Senedesmus phytoplankton extracts, and the like are known as components having an action of promoting production of type I collagen (Patent Documents 3 to 4).
本発明は、優れたコラーゲン合成促進作用を有し、肌荒れやしわ、たるみを有効に予防、改善するとともに、優れた保湿効果が得られる皮膚外用剤を提供すること課題とする。 An object of the present invention is to provide an external preparation for skin that has an excellent collagen synthesis promoting action, effectively prevents and improves rough skin, wrinkles and sagging, and provides an excellent moisturizing effect.
本発明者は上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、シークヮーサー種子油が、皮膚線維芽細胞におけるコラーゲン産生を促進し、これを皮膚に適用することにより、肌荒れやしわ、たるみに対する優れた予防、改善効果および保湿効果が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。 As a result of diligent studies to solve the above problems, the present inventor promoted collagen production in dermal fibroblasts and applied it to the skin, thereby being excellent for rough skin, wrinkles and sagging. It has been found that prevention, improvement effect and moisturizing effect can be obtained, and the present invention has been completed.
すなわち本発明は、シークヮーサー種子の圧搾油を含有することを特徴とする皮膚外用剤である。 That is, the present invention is an external preparation for skin characterized by containing a pressed oil of seeker seed.
また本発明は、シークヮーサー種子油を有効成分として含有することを特徴とするコラーゲン合成促進剤、抗しわ剤または保湿剤である。 The present invention also provides a collagen synthesis promoter, anti-wrinkle agent or moisturizer characterized by containing seeker seed oil as an active ingredient.
本発明の皮膚外用剤は、皮膚におけるコラーゲン合成を促進する作用を有し、特に真皮中の主要なコラーゲンであるＩ型コラーゲンの合成促進作用が高いため、真皮中のコラーゲン繊維の量を維持することができ、肌荒れやしわ、たるみの予防、改善に優れた効果を有するものである。またこのような美肌効果をもたらす成分は、長年食用に供されてきたシークヮーサーを原料とするものであるため、安全性にも優れるものである。 The skin external preparation of the present invention has an action of promoting collagen synthesis in the skin, and particularly has a high action of promoting the synthesis of type I collagen, which is the main collagen in the dermis, and therefore maintains the amount of collagen fibers in the dermis. It has an excellent effect in preventing and improving rough skin, wrinkles and sagging. Moreover, since the component which brings such a skin beautifying effect uses the seeker which has been used for food for many years as a raw material, it is excellent also in safety.
本発明の皮膚外用剤は、シークヮーサー（ヒラミレモン：Citrus depressa Hay）の種子油を含有するものである。本発明に用いるシークヮーサー種子油には、シークヮーサーの種子を圧搾した圧搾油の他、親油性の有機溶媒で抽出した抽出物も含まれるが、コラーゲン合成促進作用に優れることから、圧搾油が好適に用いられる。このようなシークヮーサー種子の圧搾油は、シークヮーサーの果実から、果皮や砂嚢、果肉等を除去して分離した種子を、スクリュープレス、直圧式圧搾などの公知の圧搾方法を用いて圧搾することにより得られる。圧搾方法は特に制限されるものではないが、成分の変質を抑制でき、また搾油率が向上することから、温度を１０〜４０℃程度に制御して直圧式圧搾で圧搾するコールドプレス製法によることが好ましい。圧力は、搾油率の観点から、２０〜２００ＭＰａが好ましく、５０〜１００ＭＰａがより好ましい。また、圧搾にあたっては、シークヮーサー種子を乾燥して水分を１〜５質量％（以下、単に「％」で示す）とすることが好ましく、２〜３％に調整することがより好ましい。このような範囲であると、種子の状態で長期間保存できるとともに、種子油の酸化が抑制され、保存安定性が向上する。圧搾後、さらに濾過等の公知の精製手段により更に精製してもよく、例えば、活性炭濾過によってクロロフィル等を除去することによって酸化を抑制することができる。 The external preparation for skin of the present invention contains a seed oil of squeak juicer (Cirrus depressa Hay). The seeker seed oil used in the present invention includes an extract extracted with a lipophilic organic solvent in addition to a presser oil obtained by pressing a seed of a seeker saucer. Used. Such squeezer seed pressing oil is obtained by squeezing seeds separated from the fruit of the squeak wacer by removing the peel, sandbag, pulp, etc. using a known pressing method such as a screw press or direct compression. It is done. Although the compression method is not particularly limited, it can be controlled by a cold press manufacturing method in which the temperature can be controlled at about 10 to 40 ° C. and compressed by direct compression because the deterioration of the components can be suppressed and the oil ratio is improved. Is preferred. The pressure is preferably 20 to 200 MPa and more preferably 50 to 100 MPa from the viewpoint of the oil extraction rate. Moreover, in pressing, it is preferable to dry the seeker seeds so that the water content is 1 to 5% by mass (hereinafter simply referred to as “%”), more preferably 2 to 3%. Within such a range, the seed can be stored for a long period of time, oxidation of the seed oil is suppressed, and storage stability is improved. After squeezing, it may be further purified by a known purification means such as filtration. For example, oxidation can be suppressed by removing chlorophyll and the like by activated carbon filtration.
かくして得られるシークヮーサー種子油をそのまま単独で、あるいは、化粧料、医薬品、医薬部外品、飲食品等を製造する場合に通常用いられる任意成分に適宜配合し、公知の製法に従って製造することにより、皮膚外用剤、経口剤または飲食品等とすることができる。本発明の皮膚外用剤には、化粧料、医薬品、医薬部外品のいずれも包含される。 The seeker seed oil thus obtained can be used alone as it is, or appropriately blended with optional ingredients usually used when producing cosmetics, pharmaceuticals, quasi drugs, foods and drinks, etc., and manufactured according to known production methods. It can be used as an external preparation for skin, an oral preparation or a food and drink. The skin external preparation of the present invention includes any of cosmetics, pharmaceuticals, and quasi drugs.
化粧料に用いられる任意成分としては、水、アルコール類、油剤、界面活性剤、ゲル化剤、粉体、多価アルコール類、水溶性高分子、紫外線防御剤、抗菌剤、香料、ｐＨ調整剤、美白剤、抗炎症剤、抗酸化剤、ビタミン類、アロエ、ユーカリ、ローズマリー等の植物抽出物、モズク、コンブ等の海藻抽出物、シークヮーサー果皮油等の精油などが挙げられ、また公知のコラーゲン合成促進剤、保湿剤等と併用することもできる。また化粧料の剤型は、特に限定されるものではなく、例えばローション等の液状、ゲル、乳液、クリーム等の乳化状などが挙げられる。乳化状のものとしては、油中水型、水中油型等のいずれでもよい。また、その形態としては、例えば、洗顔フォーム、クレンジングオイル、クレンジングクリーム、マッサージ・コールド、乳液、化粧水、美容液、リップクリーム、パック、ハンドクリーム、フェイスパックシート、美容オイル等のスキンケア化粧料、メイクアップベース、ファンデーション、フェイスパウダー、アイシャドウ、アイライナー、アイブロウ、マスカラ、チークカラー、リップカラー等のメイクアップ化粧料、ボディクリーム、ボディマッサージケアクリーム、制汗デオドランド、除毛剤、脱色剤、サンスクリーン、マッサージオイル等のボディケア化粧料、シャンプー、リンス・コンディショナー、ヘアスタイリング剤、ヘアカラー、コールドウェーブ液、スカルプケア等のヘアケア・ヘアメイク化粧料等が例示される。 Optional ingredients used in cosmetics include water, alcohols, oils, surfactants, gelling agents, powders, polyhydric alcohols, water-soluble polymers, UV protection agents, antibacterial agents, perfumes, pH adjusters , Plant extracts such as whitening agents, anti-inflammatory agents, antioxidants, vitamins, aloe, eucalyptus and rosemary, seaweed extracts such as mozuku and kombu, essential oils such as shikwasa peel oil, etc. It can also be used in combination with a collagen synthesis promoter, humectant and the like. Moreover, the dosage form of cosmetics is not specifically limited, For example, liquid forms, such as a lotion, and emulsified forms, such as a gel, emulsion, and cream, are mentioned. The emulsified material may be either a water-in-oil type or an oil-in-water type. In addition, as its form, for example, skin-care cosmetics such as face-wash foam, cleansing oil, cleansing cream, massage cold, milky lotion, lotion, serum, lip balm, pack, hand cream, face pack sheet, beauty oil, Makeup base, foundation, face powder, eye shadow, eyeliner, eyebrow, mascara, cheek color, lip color, etc. Examples thereof include body care cosmetics such as sunscreens and massage oils, shampoos, conditioners, hair styling agents, hair colors, cold wave solutions, hair care / hair makeup cosmetics such as scalp cares, and the like.
医薬品または医薬部外品である皮膚外用剤に配合される添加剤としては、例えば、安定化剤、界面活性剤、可溶化剤、懸濁化剤、抗酸化剤、香料、等張化剤、乳化剤、粘着剤、保湿剤、酸化防止剤、保存料等が挙げられる。またその剤型としては、クリーム、軟膏、ゲル軟膏、局所液剤、ローション、エアゾール、チンキ、貼付剤、テープ、湿布等が挙げられる。 Examples of the additive to be added to the external preparation for skin which is a pharmaceutical product or quasi-drug include a stabilizer, a surfactant, a solubilizer, a suspending agent, an antioxidant, a fragrance, an isotonic agent, Examples include emulsifiers, pressure-sensitive adhesives, humectants, antioxidants, and preservatives. Examples of the dosage form include creams, ointments, gel ointments, topical solutions, lotions, aerosols, tinctures, patches, tapes, and poultices.
本発明の皮膚外用剤においては、シークヮーサー種子油を０．０００１〜１００％含有させることが好ましく、０．１〜３０％含有させることがより好ましく、これを１回あたり、好ましくは０．０１ｍｇ〜１０ｇ、より好ましくは０．１ｍｇ〜１ｇとなるように皮膚に適用すればよい。この範囲内であれば、肌荒れやしわ、たるみの予防、改善および保湿において優れた効果が得られる。 In the external preparation for skin of the present invention, it is preferable to contain 0.0001 to 100% of sequoccer seed oil, more preferably 0.1 to 30%, and this is preferably 0.01 mg to 1 time. What is necessary is just to apply to skin so that it may be 10 g, More preferably, it is 0.1 mg-1g. Within this range, excellent effects can be obtained in preventing, improving and moisturizing rough skin, wrinkles and sagging.
また添加剤として、可塑剤、滑沢剤、滑沢化剤、可溶剤、可溶化剤、甘味剤、基剤、稀釈剤、矯味剤、結合剤、懸濁剤、懸濁化剤、抗酸化剤、光沢化剤、コーティング剤等を用いて、錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、カプセル剤、カプレット、軟カプセル剤、丸剤、内服液剤、シロップ剤、ドライシロップ剤、チュアブル剤、トローチ剤、発泡錠、ドロップ剤、懸濁剤等の経口製剤としてもよい。経口投与する場合の用量は、例えば、通常成人に対し一日あたり、シークヮーサー種子油として０．０１ｍｇ〜１０ｇ程度、より好ましくは０．１ｍｇ〜１ｇ程度とすればよい。 Additives include plasticizers, lubricants, lubricants, solubilizers, solubilizers, sweeteners, bases, diluents, corrigents, binders, suspending agents, suspending agents, antioxidants Tablets, granules, fine granules, powders, capsules, caplets, soft capsules, pills, liquids for internal use, syrups, dry syrups, chewables, lozenges Oral preparations such as effervescent tablets, drop agents, and suspensions may be used. The dose for oral administration may be, for example, usually about 0.01 mg to 10 g, more preferably about 0.1 mg to 1 g as a seeker seed oil per day for an adult.
またシークヮーサー種子油を含有する飲食品としては、ジュース類、清涼飲料水、茶類、アルコール飲料、乳酸菌飲料、発酵乳等の飲料、クッキー、ゼリー、チョコレート、チューインガム、キャンディ、スナック菓子等の菓子類、パン類、麺類等の農産加工品、調味料、レトルト食品、カプセル食品、タブレット状食品、流動食品、ドリンク剤等が挙げられ、コラーゲン合成促進作用を有する機能性食品とすることもできる。 In addition, as foods and drinks containing seeker seed oil, juices, soft drinks, teas, alcoholic beverages, lactic acid bacteria beverages, beverages such as fermented milk, cookies, jelly, chocolate, chewing gum, candy, snacks, etc. Agricultural processed products such as breads and noodles, seasonings, retort foods, capsule foods, tablet foods, liquid foods, drinks and the like can be mentioned, and functional foods having an action of promoting collagen synthesis can also be used.
またシークヮーサー種子油を単独で、あるいは適当な担体を用いて製剤化することにより、本発明のコラーゲン合成促進剤が調製される。シークヮーサー種子油の含有量は特に制限されるものではないが、コラーゲン合成促進剤中１０〜１００％であることが好ましく、５０〜１００％であることがより好ましい。本発明のコラーゲン合成促進剤の用法は、特に限定されず、経口でもよいが、外用により皮膚に適用することが好適であり、その場合の投与量は、症状、年齢、体重等により異なるが、例えば、成人に対し１回あたり、シークヮーサー種子油として０．０１ｍｇ〜１０ｇ、好ましくは０．１ｍｇ〜１ｇとなるように適用すればよい。また、このコラーゲン合成促進剤を上記した種々の任意成分に配合して、皮膚外用剤や飲食品とすることができる。本発明の抗しわ剤および保湿剤についても、上記コラーゲン合成促進剤と同様にして製造、使用することができる。 Further, the collagen synthesis promoter of the present invention is prepared by formulating seeker seed oil alone or using a suitable carrier. The content of seeker seed oil is not particularly limited, but is preferably 10 to 100%, more preferably 50 to 100% in the collagen synthesis accelerator. The usage of the collagen synthesis promoter of the present invention is not particularly limited and may be oral, but is preferably applied to the skin by external application, and the dosage in that case varies depending on symptoms, age, weight, etc. For example, it may be applied to adults at a dose of 0.01 mg to 10 g, preferably 0.1 mg to 1 g as a seeker seed oil. Moreover, this collagen-synthesis promoter can be mix | blended with the above-mentioned various arbitrary components, and can be used as a skin external preparation or food-drinks. The anti-wrinkle agent and humectant of the present invention can also be produced and used in the same manner as the collagen synthesis accelerator.
以下、本発明を実施例等に基づいてより詳細に説明する。なお、本発明はこれら実施例等により何ら制限されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on examples and the like. In addition, this invention is not restrict | limited at all by these Examples.
実施例１
シークヮーサー種子油の調製：
シークヮーサーの果実から、キャタピラ式搾汁機を用いてパルプ、内皮等を除去し、種子を分離した後、４０℃で４８時間乾燥し、水分が３％以下となるように調整した。乾燥した種子を直圧式圧搾機ＫＴ１００−２００（サン精機社製）を用いて、コールドプレス製法（２５℃、７５ＭＰａ、１５分）により圧搾した。得られた圧搾油を一夜静置し、上澄みを分取して活性炭濾過し、シークヮーサー種子油を得た。
Example 1
Preparation of seeker seed oil:
Pulp, endothelium, and the like were removed from the fruit of Sikuwasa using a caterpillar type juicer, seeds were separated, and then dried at 40 ° C. for 48 hours to adjust the water content to 3% or less. The dried seeds were squeezed by a cold press manufacturing method (25 ° C., 75 MPa, 15 minutes) using a direct pressure press KT100-200 (manufactured by Sun Seiki Co., Ltd.). The obtained compressed oil was allowed to stand overnight, and the supernatant was collected and filtered with activated charcoal to obtain seeker seed oil.
試験例１
コラーゲン合成促進試験：
製造例１で得られたシークヮーサー種子油を試験試料とし、線維芽細胞に対するI型コラーゲン合成促進作用を評価した。正常ヒト線維芽細胞を、0.5%仔牛血清含有ダルベッコ変法MEM(0.5%FBS-DMEM)を用いて2.0×104cells/wellの細胞密度にて96穴プレートに播種した。播種24時間後に試験可能な最高濃度から希釈した試験試料を含有する0.5%FBS-DMEMと交換した。なお、試験試料未処理細胞をコントロールとした。また陽性コントロールとして25μMアスコルビン酸リン酸マグネシウム塩(VC-PMg)を用いた。試験試料含有培地で24時間培養したのち、培養上清を回収してELISAに供した。細胞は0.1%Triton X-100溶液にて溶解したのち、BCA法にてタンパク量を定量した。より詳細には、培地および検量線用I型コラーゲン溶液を高吸着型ELISAプレートに入れ、4℃にて一昼夜コーティングしたのち、1%牛血清アルブミン(BSA)溶液を用いて37℃にて1時間ブロッキングした。一次抗体反応は、Anti-Human Collagen Type I antibody(Rabbit)を0.3%BSA溶液で希釈したものを添加し、37℃にて1時間反応させた。二次抗体反応は、ヒストファインMAX-PO(R)(Rabbit)をリン酸緩衝液で希釈したものを添加し、37℃にて1時間反応させた。次に、0.3mg/mLの2,2’-Azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)diammouniumsalt(ABTS)および0.03%の過酸化水素を含むリン酸-クエン酸緩衝液(0.1M,pH4.0)を添加して20分間反応させ、マイクロプレートリーダーにて405nmの吸光度を測定した。培地中のI型コラーゲン量は、市販のI型コラーゲンにて作成した検量線から算出した。全細胞のタンパク量で培地中のI型コラーゲン量を除することによって単位タンパク量あたりのI型コラーゲン産生量を算出した。それぞれのI型コラーゲン産生量はStudent t検定を用いて有意差検定を行い、コントロールとの差を評価した。結果を表1および図1に示す。
Test example 1
Collagen synthesis acceleration test:
The seeker seed oil obtained in Production Example 1 was used as a test sample to evaluate the type I collagen synthesis promoting effect on fibroblasts. Normal human fibroblasts were seeded in 96-well plates at a cell density of 2.0 × 10 4 cells / well using Dulbecco's modified MEM containing 0.5% calf serum (0.5% FBS-DMEM). It was replaced with 0.5% FBS-DMEM containing test samples diluted from the highest testable concentration 24 hours after seeding. The test sample untreated cells were used as a control. As a positive control, 25 μM ascorbic acid magnesium phosphate (VC-PMg) was used. After culturing in the test sample-containing medium for 24 hours, the culture supernatant was recovered and subjected to ELISA. The cells were lysed with 0.1% Triton X-100 solution, and the amount of protein was quantified by the BCA method. More specifically, the medium and calibration curve type I collagen solution were placed in a highly adsorbent ELISA plate, coated overnight at 4 ° C, and then 1% bovine serum albumin (BSA) solution at 37 ° C for 1 hour. Blocked. In the primary antibody reaction, Anti-Human Collagen Type I antibody (Rabbit) diluted with 0.3% BSA solution was added and reacted at 37 ° C. for 1 hour. In the secondary antibody reaction, Histofine MAX-PO (R) (Rabbit) diluted with a phosphate buffer was added and reacted at 37 ° C. for 1 hour. Next, a phosphate-citrate buffer solution (0.1 M, pH 4. 0) was added and reacted for 20 minutes, and the absorbance at 405 nm was measured with a microplate reader. The amount of type I collagen in the medium was calculated from a calibration curve prepared with commercially available type I collagen. The amount of type I collagen produced per unit protein amount was calculated by dividing the amount of type I collagen in the medium by the amount of protein in all cells. Each type I collagen production was subjected to a significant difference test using a Student t test, and the difference from the control was evaluated. The results are shown in Table 1 and FIG.
この結果に示されるとおり、シークヮーサー種子油によるI型コラーゲン産生量の有意な増加が認められた。 As shown in the results, a significant increase in the amount of type I collagen produced by seeker seed oil was observed.
試験例２
安全性試験：
実施例１のシークヮーサー種子油を試験試料とし、EpiSkin法による皮膚一次刺激性代替法を用い、皮膚一次刺激性を評価した。
試験は、OECD Guidelines for the Testing of Chemicals Test No. 439 およびEuropean Center for the Validation of Alternative Methods (ECVAM)にて公開されているプロトコールである-ECVAM Skin Irritation Validation Study- VALIDATION OF THE EpiSkinTMTEST METHOD15 min- 42 hours FOR THE PREDICTION OF ACUTE SKIN IRRITATION OF CHEMICALS.に準じて実施した。皮膚一次刺激性評価は、MTT法による皮膚モデルの細胞生存率 (MTT viability (%))を指標とした。EpiSkin-SMTM(0.38 cm2)を、維持培地にて24時間インキュベーションし、試験試料10μLを、表皮側から曝露した。なお陰性コントロールとしてPBS(+)、刺激性コントロールとして5%SDS(Sigma)を用いた。試験試料を15分間曝露した後、速やかに試験試料を洗浄操作により皮膚モデルから除去し、新鮮な維持培地にてさらに42時間培養した。培養後、皮膚モデルを0.3mg/mLの3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide(MTT、Sigma)を含有する試験培地(フェノールレッド未含有)に移し、3時間培養した。その後、トランスウェルより皮膚モデルをパンチで外し、さらに酸性イソプロパノールに72時間浸漬することによりブルーホルマザンを抽出し、抽出液の550nmにおける吸光度をマイクロプレートリーダー(Molecular devices, V max)にて測定した。MTT viability(%)は、陰性コントロール曝露皮膚モデルの吸光度を100としたときの百分率で表した。得られた結果を基にして、試験成立の判断基準および試験試料の皮膚一次刺激性(R38、Risk Phrase 38)判定基準を表２および３に示す。また試験試料のMTT試験による細胞生存率変化の結果および皮膚刺激性の判定結果を表４および５に示す。
Test example 2
Safety test:
Using the seeker seed oil of Example 1 as a test sample, the primary skin irritation was evaluated using an alternative skin primary irritation method by the EpiSkin method.
The test is based on the OECD Guidelines for the Testing of Chemicals Test No. 439. -ECVAM Skin Irritation Validation Study- VALIDATION OF THE EpiSkin TM TEST METHOD 15 min- 42 hours FOR THE PREDICTION OF ACUTE SKIN IRRITATION OF CHEMICALS. It carried out according to. Evaluation of primary skin irritation was based on the cell survival rate (MTT viability (%)) of the skin model by the MTT method. EpiSkin-SM ™ (0.38 cm 2 ) was incubated in maintenance medium for 24 hours, and 10 μL of the test sample was exposed from the epidermis side. PBS (+) was used as a negative control, and 5% SDS (Sigma) was used as a stimulus control. After the test sample was exposed for 15 minutes, the test sample was quickly removed from the skin model by a washing operation and cultured in fresh maintenance medium for an additional 42 hours. After culturing, the skin model was tested using 0.3 mg / mL test medium (no phenol red) containing 3- (4,5-Dimethyl-2-thiazolyl) -2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT, Sigma). ) And cultured for 3 hours. Thereafter, the skin model was removed from the transwell with a punch, and blue formazan was extracted by immersing in acidic isopropanol for 72 hours. The absorbance of the extract at 550 nm was measured with a microplate reader (Molecular devices, Vmax). MTT viability (%) was expressed as a percentage when the absorbance of the negative control-exposed skin model was taken as 100. Based on the obtained results, Tables 2 and 3 show the criteria for establishing the test and the criteria for determining the primary skin irritation (R38, Risk Phrase 38) of the test sample. Tables 4 and 5 show the results of changes in cell viability by the MTT test of the test samples and the results of determination of skin irritation.
得られた陰性および刺激性コントロールの結果(表４)は表２に示す試験成立判定基準を全て満たしていたことから、本試験は適正に行われたことが確認された。表３に示す判定基準より、試験試料シークヮーサー種子油は、“無刺激性”と判断された(表４、５)。 The obtained negative and irritation control results (Table 4) satisfied all the test establishment criteria shown in Table 2, confirming that this test was properly performed. From the criteria shown in Table 3, the test sample seeker seed oil was determined to be “non-irritating” (Tables 4 and 5).
処方例１
下記組成の乳液を常法により製造した。
実施例１のシークヮーサー種子油 ０．０１ｇ
ホホバオイル ４．０ｇ
オリーブオイル ２．０ｇ
スクワラン ２．０ｇ
セタノール ２．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル ２．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０） ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） ２．０ｇ
グリチルレチン酸ステアリル ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
ヒノキチオール ０．１５ｇ
香料０．０５ｇ
精製水 残量（全量１００ｇ）
Formulation Example 1
An emulsion having the following composition was produced by a conventional method.
0.01 g of seeker seed oil of Example 1
Jojoba oil 4.0g
Olive oil 2.0g
Squalane 2.0g
Cetanol 2.0g
Glyceryl monostearate 2.0g
2.5 g of polyoxyethylene cetyl ether (20E.0)
Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.0) 2.0 g
Stearyl glycyrrhetinate 0.1g
1,3-butylene glycol 3.0 g
Hinokitiol 0.15g
Fragrance 0.05g
Purified water remaining amount (100g in total)
処方例２
下記組成の化粧水を常法により製造した。
実施例１のシークヮーサー種子油 ２ｇ
グリセリン ３ｇ
１，３−ブチレングリコール ３ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
クエン酸 ０．１ｇ
クエン酸ソーダ ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残量（全量１００ｇ）
Formulation example 2
A lotion having the following composition was produced by a conventional method.
2 g of seeker seed oil of Example 1
Glycerin 3g
1,3-butylene glycol 3g
Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.0) 0.5g
Methyl paraoxybenzoate 0.15g
Citric acid 0.1g
Sodium citrate 0.1g
Fragrance 0.05g
Purified water remaining amount (100g in total)
処方例３
下記組成のクリームを常法により製造した。
実施例１のシークヮーサー種子油 ０．０５ｇ
アロエエキス ０．１ｇ
流動パラフィン ５．０ｇ
サラシミツロウ ４．０ｇ
スクワラン １０．０ｇ
セタノール ３．０ｇ
ラノリン ２．０ｇ
ステアリン酸 １．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル ３．０ｇ
油溶性甘草エキス０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール６．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル１．５ｇ
香料０．１ｇ
精製水 残量（全量１００ｇ）
Formulation Example 3
A cream having the following composition was produced by a conventional method.
0.05 g of seeker seed oil of Example 1
Aloe extract 0.1g
Liquid paraffin 5.0g
Salami beeswax 4.0g
Squalane 10.0g
Cetanol 3.0g
Lanolin 2.0g
Stearic acid 1.0g
Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.0) 1.5g
3.0 g glyceryl monostearate
Oil soluble licorice extract 0.1g
1,3-butylene glycol 6.0 g
1.5 g of methyl paraoxybenzoate
Fragrance 0.1g
Purified water remaining amount (100g in total)
処方例４
下記組成のパックを常法により製造した。
実施例１のシークヮーサー種子油０．０５ｇ
ポリビニルアルコール１５ｇ
ポリエチレングリコール３ｇ
プロピレングリコール７ｇ
エタノール１０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル０．０５ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム０．１ｇ
香料０．０５ｇ
精製水 残量（全量１００ｇ）
Formulation Example 4
A pack having the following composition was produced by a conventional method.
0.05 g of seeker seed oil of Example 1
Polyvinyl alcohol 15g
Polyethylene glycol 3g
7g of propylene glycol
Ethanol 10g
0.05 g of methyl paraoxybenzoate
0.1g dipotassium glycyrrhizinate
Fragrance 0.05g
Purified water remaining amount (100g in total)
本発明の皮膚外用剤は、優れたコラーゲン合成促進作用を有し、肌荒れやしわ、たるみを有効に予防、改善することができ、安全性にも優れるものである。したがって、しわ、たるみの改善用の化粧料等として有用なものである。 The skin external preparation of the present invention has an excellent collagen synthesis promoting action, can effectively prevent and improve rough skin, wrinkles and sagging, and is excellent in safety. Therefore, it is useful as a cosmetic for improving wrinkles and sagging.
Claims (5)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013261086A JP2014224088A (en) | 2013-12-18 | 2013-12-18 | Skin external preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013261086A JP2014224088A (en) | 2013-12-18 | 2013-12-18 | Skin external preparation |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2013102517A Division JP5443637B1 (en) | 2013-05-14 | 2013-05-14 | Collagen synthesis promoter |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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Family
ID=52123075
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP2013261086A Pending JP2014224088A (en) | 2013-12-18 | 2013-12-18 | Skin external preparation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2014224088A (en) |
-
2013
- 2013-12-18 JP JP2013261086A patent/JP2014224088A/en active Pending
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