JP2014193151A - 床材及び飼育用ケージ - Google Patents

Abstract

【課題】実験用動物の快適性及び成長性並びに糞・尿の採集効率性を同時に満足する床材を提供する。
【解決手段】実験用動物を飼育するための飼育用ケージ１の底面に設置される、少なくとも表面が樹脂材料からなる床材２０であって、前記実験用動物の飼育に供される床面２１及び前記実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される多数の貫通孔２２が設けられる床材である。
【選択図】図１

Description

本発明は、床材及び飼育用ケージに関する。

マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギなどの実験動物の飼育用ケージに関する各種発明が知られている。例えば特許文献１には、床が金網によって構成される飼育ケージが記載されている。この飼育ケージによれば、軽量化や、清掃・消毒の確実な実施が可能となる。また特許文献２には、短手方向に沿って矩形状の貫通孔が設けられた合成樹脂製のすのこが底面に載置された動物用ケージが記載されている。この動物用ケージによれば、貫通孔を介してのみ糞・尿が落下する。

特開平１０―３１３７２３号公報 特開２０００―２７０７０４号公報

しかしながら、特許文献１に記載の技術では、床が金網によって構成されるため、動物の体温が奪われる可能性や、指間炎や足底（皮膚）炎が発生する可能性があり、動物の快適性及び成長性の観点から課題がある。実際、金網によって構成される床は、動物福祉の観点から推奨できないという考え方をＡＡＡＬＡＣ（国際実験動物管理公認協会）が示している。

また、特許文献２に記載の技術では、動物の飼育に供される床面が貫通孔に対して大きく形成されるため、糞・尿が貫通孔を介して落下する量よりも床面に残る量が多い。したがって、動物が排泄した糞・尿の量に対する貫通孔を介して落下する糞・尿の量の割合として定義される採集効率性が低く、動物の健康状態を糞・尿によって検査する場合に、検査対象である糞・尿が足りない可能性がある。加えて、糞・尿が動物の体表に付着して汚れるため不衛生であり悪臭のもとになる。

本発明は上記の課題を解決するためになされたものであり、実験用動物の快適性及び成長性並びに糞・尿の採集効率性を同時に満足する床材及び飼育用ケージを提供することを目的とする。

上記目的を達成する本発明に係る床材は、実験用動物を飼育するための飼育用ケージの底面に設置される、少なくとも表面が樹脂材料からなる床材であって、前記実験用動物の飼育に供される床面及び前記実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される多数の貫通孔が設けられる床材である。

また、上記目的を達成する本発明に係る飼育用ケージは、実験用動物を飼育するための飼育用ケージであって、前記実験用動物の飼育に供される床面、及び前記実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される千鳥格子状に並んだ多数の貫通孔が設けられる、少なくとも表面が樹脂材料からなる第１床材と、前記実験用動物の飼育に供される床面、及び前記実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される正方形格子状に並んだ多数の貫通孔が設けられる、少なくとも表面が樹脂材料からなる第２床材と、前記第１床材または前記第２床材が載置される載置部と、前記載置部の下方に設けられ、前記貫通孔を介して前記実験用動物の糞・尿を採集する採集部と、を有し、前記第１床材において隣り合う３つの前記貫通孔間に形成される前記床面の面積は、前記第２床材において隣り合う４つの前記貫通孔間に形成される前記床面の面積よりも小さい飼育用ケージである。

上記のように構成した床材であれば、少なくとも表面が樹脂材料からなるため、実験用動物の快適性及び成長性を満足することができる。また、実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される多数の貫通孔が設けられるため、糞・尿の採集効率性を満足することができる。したがって、実験用動物の快適性及び成長性並びに糞・尿の採集効率性を同時に満足する床材を提供することができる。

また、上記のように構成した飼育用ケージであれば、第１床材及び第２床材の少なくとも表面が樹脂材料からなるため、実験用動物の快適性及び成長性を満足することができる。また、実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される多数の貫通孔が設けられるため、糞・尿の採集効率性を満足することができる。さらに、実験用動物の快適性及び成長性を重視する際は第２床材を載置部に載置し、糞・尿の採集効率性を重視する際は第１床材を載置部に載置し得る。したがって、実験用動物の快適性及び成長性並びに糞・尿の採集効率性を同時に満足する飼育用ケージを提供することができる。

図１（Ａ）は、本発明の第１実施形態に係る飼育用ケージを示す斜視図であって、図１（Ｂ）は、図１（Ａ）のＢ部の内部を示す部分拡大図である。 図２（Ａ）は、本実施形態に係る床材の一部を示す斜視図であって、図２（Ｂ）は、図２（Ａ）の２Ｂ−２Ｂ線に沿う断面図である。 床材を上方から載置部に載置するときの様子を示す斜視図である。 図４（Ａ）は、第２床材の一部を示す斜視図であって、図４（Ｂ）は、第１床材の一部を示す斜視図であって、図４（Ｃ）は、図４（Ａ）の４Ｃ−４Ｃ線に沿う断面図である。 改変例に係る床材を示す斜視図である。

＜第１実施形態＞
以下、図面を参照して、本発明の実施形態を説明する。なお、図面の寸法比率は、説明の都合上、誇張されて実際の比率とは異なる場合がある。

図１（Ａ）は、本発明の第１実施形態に係る飼育用ケージ１を示す斜視図であって、図１（Ｂ）は、図１（Ａ）のＢ部の内部を示す部分拡大図である。なお、図１（Ａ）では床材２０が載置された状態を示す。図２（Ａ）は、本実施形態に係る床材２０の一部を示す斜視図であって、図２（Ｂ）は、図２（Ａ）の２Ｂ−２Ｂ線に沿う断面図である。

本実施形態に係る飼育用ケージ１は、概説すると、図１，２に示すように、床材２０と、床材２０が載置される載置部３０と、載置部３０の下方に設けられ、床材２０の貫通孔２２を介して実験用動物の糞・尿を採集する採集部４０と、を有する。以下、詳述する。

飼育用ケージ１は、図１に示すように、上端面が開放された本体部５０と、本体部５０の底部５５に配置され、実験用動物の飼育に供される床面２１及び実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される多数の貫通孔２２が設けられる床材２０と、貫通孔２２を介して実験用動物の糞・尿を採集する採集部４０と、を有する。

本体部５０は、図１において左手前側に位置する前方壁５１と、前方壁５１に向かい合う後方壁５２と、左右の側方壁５３，５４と、底部５５と、を有する。

前方壁５１には、実験用動物を出し入れするための開口部５１１が形成され、開口部５１１には、ドア体５１２、蝶番５１３、及びドアロック部５１４が設けられる。ドア体５１２は、蝶番５１３によって開閉自在に設けられ、ドアロック部５１４によって、閉じた状態を維持可能である。また、開口部５１１には給餌器５１５がさらに設けられる。

後方壁５２には、貫通孔５２１を介して、給水ノズル５２２が設けられる。また、側方壁５３，５４には、通気用のスリット５３１，５４１がそれぞれ設けられる。

底部５５には、床材２０が載置される載置部３０が設けられる。載置部３０は、略コの字形状を有し、前方壁５１、後方壁５２、及び側方壁５３，５４からなる４つの角に、両端がそれぞれの壁と固定されて配置される。固定方法は、例えば接着であるがこれに限られず、ネジ接合などであってもよい。また、載置部３０の形状は略コの字形状に限られず、載置部３０の形状及び配置位置は、床材２０を載置できる機能を有する限り特に限定されない。

底部５５は、載置部３０が設けられる箇所の下方において、下方に向かうにつれて断面が小さくなる四角錐形状の頂点を切り落とした形状を有し、下端面において採集部４０と連結する。実験用動物の糞・尿は貫通孔２２を通過した後、四角錐形状の斜面に沿って落下し、採集部４０に集められる。採集部４０は円筒形状を有し、必要に応じて糞及び尿を分別するための網（不図示）が設けられ得る。

床材２０は、実験用動物の飼育に供される床面２１及び実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される多数の貫通孔２２が設けられる。具体的には、貫通孔２２は、実験用動物の糞の大きさに対して、２ｍｍ〜４ｍｍ程度大きくなるように規定されることが好ましい。

貫通孔２２の両端のうち床面２１側の縁部２２１には、図２（Ａ），（Ｂ）に示すように、断面テーパ形状が形成される。このように縁部２２１に断面テーパ形状が形成された貫通孔２２によれば、実験用動物が縁部２２１近傍において糞・尿をしたとき、テーパ形状に沿って糞・尿Ｄが落下（図２（Ｂ）矢視Ａ参照）し、貫通孔２２を介して採集部４０に採集されるため、糞・尿の採集効率性が向上する。

床材２０の厚さは例えば５ｍｍであるが、これに限られない。貫通孔２２の直径Ｄは例えば１４ｍｍである。また、貫通孔２２の縁部２２１における断面テーパ形状のテーパ角は例えば６０度であるが、これに限られない。また、床材２０を構成する材料は例えばポリプロピレンであるが、これに限られず、ポリエチレン、ポリオレフィン、ポリカーボネート、アクリル樹脂、ポリスルホンなどであってもよい。また、床材２０は少なくとも表面が樹脂材料によって構成されればよく、金属材料の表面に樹脂材料が覆われる構成であってもよい。

床材２０の貫通孔２２は千鳥格子状に並ぶ。ここで千鳥格子状とは、図２（Ａ）に示すように、隣り合う３つの貫通孔２２が略正三角形の頂点を形成するように３方向に一定のピッチＰ２で形成される態様を意味する。隣り合う貫通孔２２の中心間のピッチＰ２は例えば１９ｍｍであるが、これに限られない。

床材２０の床面２１には、貫通孔２２同士を連通するように溝部２３が設けられる。溝部２３は、図２（Ａ）に示すように、隣り合う貫通孔２２同士を連通するように設けられる。溝部２３は、図２（Ｂ）に示すように、貫通孔２２に向かって深くなる傾斜形状を有する。このような傾斜形状を有する溝部２３によれば、実験用動物が溝部２３において糞・尿をしたとき、傾斜形状に沿って糞・尿Ｄが落下（図２（Ｂ）矢視Ｂ参照）し、貫通孔２２を介して採集部４０に採集されるため、糞・尿の採集効率性が向上する。

次に、本実施形態に係る飼育用ケージ１の使用方法について説明する。

図３に示すように、床材２０を載置部３０に載置する。このとき、干渉を防ぐために、給餌器５１５及び給水ノズル５２２は取り外した状態で、床材２０を載置部３０に載置する。そして、ドア体５１２を開いた状態で、開口部５１１より実験用動物を飼育用ケージ１内に入れて、床面２１に実験用動物を配置する。そして、ドア体５１２を閉めた状態で、ドアロック部５１４によってロックし、閉じた状態を維持する。

なお、本実施形態に係る飼育用ケージ１によって飼育される実験用動物は、特に限定されず、ラット、モルモット、うさぎなどが挙げられる。

以上説明したように、本実施形態に係る床材２０は、実験用動物を飼育するための飼育用ケージ１の底面に設置される、樹脂材料からなる床材であって、実験用動物の飼育に供される床面２１及び実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される多数の貫通孔２２が設けられる床材２０である。この構成によれば、床材２０が樹脂材料からなるため、実験用動物の快適性及び成長性を満足することができる。また、実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される多数の貫通孔２２が設けられるため、糞・尿の採集効率性を満足することができる。したがって、実験用動物の快適性及び成長性並びに糞・尿の採集効率性を同時に満足する床材２０を提供することができる。

また、貫通孔２２の延在方向の両端のうち床面２１側の縁部２２１に断面テーパ形状が形成される。このため、実験用動物が縁部２２１近傍において糞・尿をしたとき、テーパ形状に沿って糞・尿が落下し、貫通孔２２を介して採集部４０に採集される。したがって、糞・尿の採集効率性が向上する。

また、床材２０の床面２１には、貫通孔２２同士を連通するように溝部２３が設けられる。このため、実験用動物が溝部２３において糞・尿をしたとき、溝部２３に沿って糞・尿が落下し貫通孔２２を介して採集部４０に採集される。したがって、糞・尿の採集効率性が向上する。

また、床材２０は、ポリプロピレンまたはポリエチレンによって構成される。よって、毒性がないため、実験用動物に対する安全性が向上する。

＜第２実施形態＞
次に、本発明の第２実施形態を説明する。第１実施形態と共通する部分は説明を省略し、第２実施形態のみに特徴のある箇所について説明する。本実施形態に係る飼育用ケージ２は、２種類の床材を選択的に載置部３０に載置する点において、第１実施形態に係る飼育用ケージ１と異なる。より具体的には、第１実施形態に係る床材２０である第１床材２０と、第２床材１０とを載置部３０に選択的に載置することができる。以下、第２床材１０の構成を第１床材２０の構成と比較しつつ説明する。

図４（Ａ）は、第２床材１０の一部を示す斜視図であって、図４（Ｂ）は、第１床材２０の一部を示す図であって、図４（Ｃ）は、図４（Ａ）の４Ｃ−４Ｃ線に沿う断面図である。

第２床材１０は、実験用動物の飼育に供される床面１１及び多数の貫通孔１２が設けられ、載置部３０に載置される。

貫通孔１２の両端のうち床面１１側の縁部１２１には、図４（Ａ）に示すように、断面テーパ形状が形成される。このように縁部１２１に断面テーパ形状が形成された貫通孔１２によれば、実験用動物が縁部１２１近傍において糞・尿をしたとき、テーパ形状に沿って糞・尿Ｄが落下（図４（Ｃ）矢視Ａ参照）し、貫通孔１２を介して採集部４０に採集されるため、糞・尿の採集効率性が向上する。

第２床材１０は、図４（Ａ）に示すように、多数の貫通孔１２が正方形格子状に並ぶ。ここで正方形格子状とは、図４（Ａ）に示すように、隣り合う４つの貫通孔１２が略正方形を形成するように略直交する２方向に一定のピッチＰ１で形成される態様を意味する。隣り合う貫通孔１２の中心間のピッチＰ１は例えば１９ｍｍであるが、これに限られない。

第２床材１０の床面１１には、貫通孔１２同士を連通するように溝部１３が設けられる。溝部１３は、図４（Ａ）に示すように、隣り合う４つの貫通孔１２のうち対角線上に設けられる貫通孔１２同士を連通するように設けられる。溝部１３は、図４（Ｃ）に示すように、貫通孔１２に向かって深くなる傾斜形状を有する。このような傾斜形状を有する溝部１３によれば、実験用動物が溝部１３において糞・尿をしたとき、傾斜形状に沿って糞・尿Ｄが落下（図４（Ｃ）矢視Ｂ参照）し、貫通孔１２を介して採集部４０に採集されるため、糞・尿の採集効率性が向上する。

また、第１床材２０において隣り合う３つの貫通孔２２間に形成される床面２１の面積Ｓ２（図４（Ｂ）においてハッチで示す）は、第２床材１０において隣り合う４つの貫通孔１２間に形成される床面１１の面積Ｓ１（図４（Ａ）においてハッチで示す）よりも小さい。ここで面積Ｓ１は、隣り合う４つの貫通孔１２の中心を結んだ略正方形における床面１１の面積として定義する。また、面積Ｓ２は、隣り合う３つの貫通孔２２の中心を結んだ略正三角形における床面２１の面積として定義する。したがって、実験用動物にとって、第２床材１０で飼育された方が、快適性及び成長性に優れる。逆に、第１床材２０で飼育された方が、糞・尿の採集効率性が向上する。

よって、糞・尿の採集効率性を重視する際、具体的には餌を食べた直後、第１床材２０を載置部３０に載置する。一方、実験用動物の快適性及び成長性を重視する際、具体的には、糞・尿をした後や就寝時には、第２床材１０を載置部３０に載置する。

以上説明したように、本実施形態に係る飼育用ケージ２は、実験用動物を飼育するための飼育用ケージ２であって、実験用動物の飼育に供される床面２１、及び実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される千鳥格子状に並んだ多数の貫通孔２２が設けられる、樹脂材料からなる第１床材２０と、実験用動物の飼育に供される床面１１、及び実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される正方形格子状に並んだ多数の貫通孔１２が設けられる、樹脂材料からなる第２床材１０と、第１床材２０または第２床材１０が載置される載置部３０と、載置部３０の下方に設けられ、貫通孔２２，１２を介して実験用動物の糞・尿を採集する採集部４０と、を有し、第１床材２０において隣り合う３つの貫通孔２２間に形成される床面２１の面積は、第２床材１０において隣り合う４つの貫通孔間１２に形成される床面１１の面積よりも小さい飼育用ケージ２である。この構成によれば、第１床材２０及び第２床材１０が樹脂材料からなるため、実験用動物の快適性及び成長性を満足することができる。また、実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される多数の貫通孔２２，１２が設けられるため、糞・尿の採集効率性を満足することができる。さらに、実験用動物の快適性及び成長性を重視する際は第２床材１０を載置部３０に載置し、糞・尿の採集効率性を重視する際は第１床材２０を載置部３０に載置し得る。したがって、実験用動物の快適性及び成長性並びに糞・尿の採集効率性を同時に満足する飼育用ケージ２を提供することができる。

以下、上述した実施形態の改変例を例示する。

上述した第２実施形態に係る飼育用ケージ２は、第１床材２０及び第２床材１０を選択的に載置部３０に載置した。しかしながら、図５に示すように、１枚の床材８０に、貫通孔７２が千鳥格子状に並んだ第１区画７０及び貫通孔６２が正方形格子状に並んだ第２区画６０が設けられ、当該床材８０を載置部３０に載置してもよい。このとき、実験用動物が第１区画７０と第２区画６０とを自由に行き来できないように第１区画７０及び第２区画６０の間に仕切り（不図示）を設けることが好ましい。

また、上述した第１実施形態では、貫通孔２２の両端のうち床面２１側の縁部２２１にのみ断面テーパ形状が設けられた。しかしながら、貫通孔２２の両端の縁部に設けられてもよい。この構成によれば、表裏どちら側から床材２０を載置しても、床面２１側に断面テーパ形状が設けられるため、床材２０の載置作業が容易となる。

また、上述した第１実施形態において床材２０の溝部２３は、隣り合う貫通孔２２同士を連通するように設けられた。しかしながら、溝部２３は任意の貫通孔２２同士を連通するように設けられてもよい。

また、上述した第１実施形態に係る採集部４０は円筒形状を有し、本体部５０の下方に設けられた。しかしながら、採集部４０の形状及び配置位置は、貫通孔２２を介して実験用動物の糞・尿を採集できる機能を有する限り特に限定されない。

＜実施例＞
以下、本発明の効果を実施例及び比較例を用いて説明する。ただし、本発明の技術的範囲が以下の実施例のみに制限されるわけではない。

まず、本発明に係る床材を載置した飼育用ケージ及び先行技術に係る金網を載置した飼育用ケージを準備した。本発明に係る床材の仕様は、貫通孔が千鳥格子状に設けられ、穴径が１４ｍｍ、隣り合う貫通孔の中心間の距離が１９ｍｍ、ポリプロピレン製であった。先行技術に係る金網の仕様は、金網の幅が２ｍｍ、隣り合う金網間の隙間が１５ｍｍであった。

次に、４匹のウサギ（２．７ｋｇ）を準備し、２群（２匹／群）に分けて、一の群のウサギを本発明に係る床材を載置した飼育用ケージで７日間飼育した。７日間飼育した後に、下記の方法によってＩＬ６遺伝子発現量を測定した。そして、一の群のウサギを先行技術に係る金網を載置した飼育用ケージでさらに７日間飼育した後に、ＩＬ６遺伝子発現量を測定した。ＩＬ６遺伝子は、急性及び慢性ストレス状態並びに疲れ等の低ストレス状態において増加することが知られている遺伝子である。このため、この遺伝子の増加量を、本発明に係る床材を載置した飼育用ケージと先行技術に係る金網を載置した飼育用ケージとで比較することで、ウサギの快適性を把握できる。

一方、他の群のウサギは、まず先行技術に係る金網を載置した飼育用ケージで７日間飼育し、その後ＩＬ６遺伝子発現量を測定した。そして、他の群のウサギを本発明に係る床材を載置した飼育用ケージでさらに７日間飼育した後に、ＩＬ６遺伝子発現量を測定した。

以下、ＩＬ６遺伝子発現量の測定方法を記載する。

まず、ウサギの耳翼辺縁静脈から採血した。この血液を血球分離試薬（モノ・ポリ分離溶液）で遠心分離し、白血球層を得て、ＲＮｅａｓｙ ｍｉｎｉ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）を用いて、ｔｏｔａｌ ＲＮＡの抽出を行った。ｔｏｔａｌ ＲＮＡの抽出方法は具体的には下記の通りである。

Ｂｕｆｆｅｒ ＲＬＴにメルカプトエタノール（Ｍ−Ｅ）を１０μＬ／ｍＬの濃度で添加した。遠心分離により沈殿させて得られた白血球サンプルにＢｕｆｆｅｒ ＲＬＴ（＋Ｍ−Ｅ）を７００μＬ加えた。ボルテックスミキサーにより、物理的に細胞を破壊した。

さらに、シリンジに取り付けた先の尖っていない注射針（２０−Ｇ、直径０．９ｍｍ）に白血球サンプルを少なくとも５回通し、物理的に白血球を破壊した。得られたサンプルに６００μＬの７０％エタノール水溶液を添加し、ピペッティングによりよく混和した。

６００μＬのサンプルを、２ｍＬチューブ中にセットしたＲＮｅａｓｙスピンカラムに適用し、８０００×ｇ（１００００ｒｐｍ）以上で１５秒間遠心分離し、上清を除去した。３５０μＬの洗浄液（ＲＷ１ ｂｕｆｆｅｒ）をＲＮｅａｓｙスピンカラムに添加し、８０００×ｇ（１００００ｒｐｍ）以上で１５秒間遠心分離し、上清を除去した。

ＤＮＡのコンタミネーションを防ぐため、１サンプルあたりＤＮＡ分解酵素（ＤＮａｓｅ）２０μＬとバッファーＲＤＤ１４０μＬの計１６０μＬをカラム中央に適用し、室温で１５分間静置した。

３５０μＬの洗浄液（ＲＷ１ ｂｕｆｆｅｒ）をＲＮｅａｓｙスピンカラムに添加し、８０００×ｇ（１００００ｒｐｍ）以上で１５秒間遠心分離し、上清を除去した。ＲＮｅａｓｙスピンカラムに５００μＬの洗浄液（ＲＰＥ ｂｕｆｆｅｒ）を添加し、８０００×ｇ（１００００ｒｐｍ）以上で１５秒間遠心分離し、上清を除去した。

再び、ＲＮｅａｓｙスピンカラムに５００μＬの洗浄液（ＲＰＥ ｂｕｆｆｅｒ）を添加し、８０００×ｇ（１００００ｒｐｍ）以上で２分間遠心操作した。ＲＮｅａｓｙスピンカラムを新しい１．５ｍＬチューブにセットした。蒸留水４０μＬを直接スピンカラム・メンブレンに添加し、８０００×ｇ（１０，０００ｒｐｍ）以上で１分間遠心操作を行ない、ＲＮＡを溶出した。

新しい蒸留水４０μＬを用いて上記ステップを再度行ない、ＲＮＡを溶出した。抽出した各ｔｏｔａｌ ＲＮＡサンプル５０μＬを濃度測定に用いた。残りのＲＮＡサンプルは−８０℃にて凍結保存した。抽出したｔｏｔａｌ ＲＮＡは吸光度測定にてＤＮＡマイクロアレイ解析に用いられる品質であることを確認した。

次に、ｃＤＮＡの合成、ｃＲＮＡのラベルと増殖を、Ｌｏｗ Ｉｎｐｕｔ ＱｕｉｃｋＡｍｐ ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用いて行った。まず、ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ２５ｎｇ、Ｔ７ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｐｒｉｍｅｒ １．８μＬを加え、ｔｏｔａｌで３．３μＬになるようにＮｕｃｌｅａｓｅ ｆｒｅｅ ｗａｔｅｒを加えた。

ＲＮＡ Ｓｐｉｋｅ Ｉｎ Ｋｉｔ（１カラー用）（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）のＳｐｉｋｅ混合液をＣｙ３ラベルするそれぞれのサンプルに、２μＬずつ加えた。６５℃で１０分間、インキュベート後、５分間、氷上に置き、熱変性させた。

熱変性させたＲＮＡにｃＤＮＡマスターミックス（５×Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ Ｂｕｆｆｅｒ ２．０μＬ、０．１Ｍ ＤＴＴ １．０μＬ、１０ｍＭ ｄＮＴＰ ｍｉｘ ０．５μＬ、ＡｆｆｉｎｉｔｙＳｃｒｉｐｔ １．２μＬ）を４．７μｌ加え、４０℃で２時間インキュベートした。チューブをウォーターバスから取り出し、７０℃で１５分間インキュベートし、反応を停止した後、氷上で５分間冷却した。

それぞれのサンプルにＣｙａｎｉｎｅ３ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｍｉｘを各反応チューブに加えた。Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎマスターミックスとして、Ｎｕｃｌｅａｓｅ ｆｒｅｅ ｗａｔｅｒ ０．７５μＬ、５×Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ ３．２μＬ、０．１Ｍ ＤＴＴ ０．６μＬ、ＮＴＰ ｍｉｘ １．０μＬ、Ｔ７ ＲＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｍｉｘ ０．２１μＬ、Ｃｙａｎｉｎｅ ３ ＣＴＰ ０．２４μＬを１反応の必要量（Ｔｔｏｔａｌ ６．０μＬ）として用いた。

４０℃のウォーターバス中で、遮光しながら２時間インキュベートした。次に、ＲＮｅａｓｙ ｍｉｎｉ ｓｐｉｎ ｃｏｌｕｍｕｓ（Ｑｉａｇｅｎ社製）を用いて、ラベル化ｃＲＮＡを調整した。 Ｎｕｃｌｅａｓｅ ｆｒｅｅ ｗａｔｅｒ ８４μＬ、ＲＬＴ ｂｕｆｆｅｒ ３５０μＬ、エタノール ２５０μＬを順次反応チューブに加えた。

７００μＬのｃＲＮＡサンプルをカラムに移し、１３０００ｒｐｍで１分間遠心した。フロースルーを別のチューブに移し、カラムをコレクションチューブに戻した。５００μＬのＲＰＥ Ｂｕｆｆｅｒを加え、１３０００ｒｐｍで１分間遠心した。

フロースルーを別のチューブに移し、カラムをコレクションチューブに戻した。５００μＬのＲＰＥ Ｂｕｆｆｅｒを加え、１３０００ｒｐｍで１分間遠心した。カラムを１．５ｍＬチューブに移した。３０μＬのＮｕｃｌｅａｓｅ ｆｒｅｅ ｗａｔｅｒを加え、１分間静置した。１３０００ｒｐｍで１分間遠心し溶出した。

次に、溶出した溶液状態のｃＲＮＡを分光光度計で濃度測定し、以下の溶液量となるようｃＲＮＡターゲット溶液の調整を行った。以下のように２×ｃＲＮＡターゲット溶液を調整した。１チューブあたりの反応量を示す。

Ｃｙａｎｉｎｅ３ラベル化ｃＲＮＡ ０．８２５μｇ １０×Ｂｌｏｃｋｉｎｇ ａｇｅｎｔ １１．０μＬ Ｎｕｃｌｅａｓｅ ｆｒｅｅ ｗａｔｅｒ Ｔｏｔａｌ ５２．８μＬ ２×ｃＲＮＡターゲット溶液５２．８μＬに２５×フラグメンテーションバッファーを２．２μＬ加え、６０℃のウォーターバスで３０分間インキュベートした。

フラグメンテーションをストップさせるために、２×ハイブリダイゼーションバッファーを５５μＬ加えた。Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ（Ｒａｂｂｉｔ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ,４×４４Ｋ、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓｔ社製）に１００μＬアプライし、６５℃で約１７時間、ハイブリオーブンで攪拌しながらハイブリダイゼーションを行った。

室温のＡｇｉｌｅｎｔ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ洗浄バッファー１で１分間洗浄した。３７℃のＡｇｉｌｅｎｔ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ洗浄バッファー２で１分間洗浄した。スライドを引き上げて風乾した。乾燥後、Ａｇｉｌｅｎｔ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ ｓｃａｎｎｅｒを用いて５μｍの解像度でスキャンした。

そして、ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ ｓｃａｎｎｅｒから出力された５種類のＩＬ６プローブの数値データを、正規化方法ｑｕａｎｔｉｌｅ法によってそれぞれ正規化し、シグナル値を算出した。

表１は、４匹のウサギに対して、「先行技術に係る金網を載置した飼育用ケージにおいて飼育した後のＩＬ６発現量」に対する「本発明に係る床材を載置した飼育用ケージにおいて飼育した後のＩＬ６発現量」の割合を示したものである。一の群のウサギに係る上記割合を示す結果を結果１及び結果２に示す。また、他の群のウサギに係る上記割合を示す結果を結果３及び結果４に示す。

表１の結果から分かるように、全ての結果において、「先行技術に係る金網を載置した飼育用ケージにおいて飼育した後のＩＬ６遺伝子発現量」に対する「本発明に係る床材を載置した飼育用ケージにおいて飼育した後のＩＬ６遺伝子発現量」の割合は１より小さい値を示した。

上述したようにＩＬ６遺伝子発現量の増加は、急性及び慢性ストレス状態並びに疲れ等の低ストレス状態において認められる。このことから、本発明に係る床材によって実験用動物を飼育することで、実験用動物に与えるストレスが大きく低減していることが示され、本発明に係る床材の優位性が示された。

１，２ 飼育用ケージ、
２０ 床材（第１床材）、
１０ 第２床材、
１１，２１ 床面、
１２，２２，６２，７２ 貫通孔、
１２１，２２１ 縁部、
３０ 載置部、
４０ 採集部、
６０ 第２区画、
７０ 第１区画、
８０ 床材、
Ｓ１，Ｓ２ 面積。

Claims (10)

1. 実験用動物を飼育するための飼育用ケージの底面に設置される、少なくとも表面が樹脂材料からなる床材であって、
   前記実験用動物の飼育に供される床面及び前記実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される多数の貫通孔が設けられる床材。
2. 前記貫通孔の延在方向の両端のうち少なくとも前記床面側の縁部に、断面テーパ形状が形成される請求項１に記載の床材。
3. 前記床面には、前記貫通孔同士を連通するように溝部が設けられる請求項１または２に記載の床材。
4. 少なくとも表面がポリプロピレンまたはポリエチレンによって構成される請求項１〜３のいずれか１項に記載の床材。
5. 前記実験用動物はウサギであって、
   前記貫通孔は千鳥格子状に並び、前記貫通孔の穴径は１４ｍｍであって、隣り合う前記貫通孔の中心間の距離は１９ｍｍである請求項１〜４のいずれか１項に記載の床材。
6. 請求項１〜５のいずれか１項に記載の床材と、
   前記床材が載置される載置部と、
   前記載置部の下方に設けられ、前記貫通孔を介して前記実験用動物の糞・尿を採集する採集部と、を有する飼育用ケージ。
7. 実験用動物を飼育するための飼育用ケージであって、
   前記実験用動物の飼育に供される床面、及び前記実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される千鳥格子状に並んだ多数の貫通孔が設けられる、少なくとも表面が樹脂材料からなる第１床材と、
   前記実験用動物の飼育に供される床面、及び前記実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される正方形格子状に並んだ多数の貫通孔が設けられる、少なくとも表面が樹脂材料からなる第２床材と、
   前記第１床材または前記第２床材が載置される載置部と、
   前記載置部の下方に設けられ、前記貫通孔を介して前記実験用動物の糞・尿を採集する採集部と、を有し、
   前記第１床材において隣り合う３つの前記貫通孔間に形成される前記床面の面積は、前記第２床材において隣り合う４つの前記貫通孔間に形成される前記床面の面積よりも小さい飼育用ケージ。
8. 前記貫通孔の延在方向の両端のうち少なくとも前記床面側の縁部に、断面テーパ形状が形成される請求項７に記載の飼育用ケージ。
9. 前記床面には、前記貫通孔同士を連通するように溝部が設けられる請求項７または８に記載の飼育用ケージ。
10. 実験用動物を飼育するための飼育用ケージであって、
    前記実験用動物の飼育に供される床面及び前記実験用動物の糞の大きさに基づいて穴径が規定される多数の貫通孔が設けられ、前記貫通孔が千鳥格子状に並んだ第１区画及び前記貫通孔が正方形格子状に並んだ第２区画を備える、少なくとも表面が樹脂材料からなる床材と、
    前記床材が載置される載置部と、
    前記載置部の下方に設けられ、前記貫通孔を介して前記実験用動物の糞・尿を採集する採集部と、を有し、
    前記第１区画において隣り合う３つの前記貫通孔間に形成される前記床面の面積は、前記第１区画において隣り合う４つの前記貫通孔間に形成される前記床面の面積よりも小さい飼育用ケージ。