JP2014125446A - 乳酸菌の細胞壁成分を含有する腸管免疫力増強剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】IgA抗体産生向上作用を有する乳酸菌の細胞壁成分を有効成分として含有する腸管免疫力増強剤。前記細胞壁成分は、前記乳酸菌の細胞壁、又は前記乳酸菌の細胞壁を溶媒抽出して得られる可溶性成分若しくは不溶性残渣であり、前記乳酸菌は、好ましくはラクトバチルス・プランタラムに属する乳酸菌、特に好ましくはラクトバチルス・プランタラムAYA株(受託番号FERM P−21106)である。
【選択図】なし
Description
本発明の目的は、高い腸管免疫力増強作用を有する乳酸菌由来の成分を有効成分として含有する腸管免疫力増強剤を提供することである。
すなわち、本発明は、IgA抗体産生向上作用を有する乳酸菌の細胞壁成分を有効成分として含有する腸管免疫力増強剤を提供するものである。
ここで、「IgA抗体産生向上作用を有する」とは、好ましくは、腸管免疫力増強剤を摂取する前後において、統計的に有意水準5%でIgA抗体産生が向上される状態をいう。
乳酸菌をMRS培地等で培養し、この培養した乳酸菌から調製した細胞壁成分を0.1〜20質量%含む飼料をマウスに一定期間摂取させる。摂取後、マウス(乳酸菌細胞壁成分添加群)を解剖し、小腸パイエル板細胞を取り出す。この小腸パイエル板細胞を培養し、培養上清を回収する。回収した培養上清中のIgA抗体産生量をELISA法により測定する。同様にして、乳酸菌細胞壁成分を含まない飼料を摂取させたマウス(乳酸菌無添加群)のIgA抗体産生量を測定する。乳酸菌細胞壁成分添加群のIgA抗体産生量と乳酸菌無添加群のIgA抗体産生量とを比較して、乳酸菌のIgA抗体産生向上作用を評価する。
MRS液体培地(DIFCO社)を用いて、30℃、18時間培養したときの菌の形態(1)菌の形態 桿菌
(2)グラム染色 陽性
(3)運動性 なし
(4)胞子 なし
(5)カタラーゼ なし
(6)通性嫌気性
(7)ブドウ糖の代謝 50%以上乳酸に転換する
(8)生育温度範囲 15℃、30℃および35℃では生育を認めるが、45℃では生育を認めない
(9)乳酸発酵 ホモ型
(10)乳酸の旋光性 DL
(11)炭水化物の発酵性 グリセロールは陽性、D- アラビノースは陰性、L- アラビノースは陽性、リボースは陽性、D- キシロースは陰性、ガラクトースは陽性、グルコースは陽性、フルクトースは陽性、マンノースは陽性、ラムノースは陽性、マンニトールは陽性、ソルビトールは陽性、αメチルDグルコシドは陰性、アミグダリンは陽性、エスクリンは陽性、サリシンは陽性、セロビオースは陽性、マルトースは陽性、ラクトースは陽性、メリビオースは陽性、シュクロースは陽性、トレハロースは陽性、イヌリンは陰性、メレジトースは陽性、ラフィノースは陽性、スターチは陰性、グルコン酸は陽性。
乳酸菌の細胞壁は、一般的には、乳酸菌に消化酵素処理、酸もしくはアルカリまたは熱水処理、あるいは物理的損傷処理等を施すことにより細胞壁の物質透過性を高めて、水または有機溶媒、あるいはこれらの混合物により、細胞内の可溶性成分を除去した残渣として得られる。
本発明の有効成分である細胞壁成分(細胞壁中に含まれる活性成分)は、上記のようにして得られた細胞壁(残渣)をそのまま、または必要に応じて該細胞壁を物理的損傷処理または酵素処理、あるいはこれらの組み合わせにより分解した後、溶媒抽出法により分離、回収することができる。
前記乳酸菌の細胞壁は、市販品でもよく、乳酸菌の菌体から採取したものでもよい。乳酸菌の菌体から採取する場合は、菌体は生菌でも死菌でもよく、水分を含んでいても乾燥されていてもよい。
抽出条件は、好ましくは冷却抽出、室温抽出、加熱抽出、加圧・加熱抽出(オートクレーブ等の処理)で行う0℃〜121℃であり、より好ましくは室温〜121℃である。
抽出後、遠心分離などにより液体を分離、回収することにより、可溶性画分が得られる。可溶性画分は、必要に応じて濾過などの処理を行った後、減圧濃縮などで濃縮する。さらに、真空乾燥、凍結乾燥などにより粉末化してもよく、該粉末化の際に賦形剤を添加してもよい。
(使用した乳酸菌)
ラクトバチルス・プランタラムAYA株(受託番号FERM P−21106:以下、AYA株という)を使用した。
10μg/mlシクロヘキシミドを含むMRS(de Man-Rogosa-Sharpe)培地を用い、AYA株を37℃で48時間培養した。その後、遠心分離によって集菌し、滅菌水で3回洗浄した後、滅菌水に懸濁し、121℃で30分間オートクレーブ処理し、これらを凍結乾燥してAYA株試料粉末を得た。
上記で得られたAYA株試料粉末0.1gを20mMリン酸カリウム(1mMジチオスレイトール含有)1mlに懸濁し、超音波処理を氷上で1分間行った。その後、Triton X-100を5μl添加し、60℃で0.5時間インキュベートした。それを0.1M酢酸アンモニウム1mlに懸濁し、卵白リゾチームを終濃度1mg/mlになるように加え、37℃で2.5時間インキュベートした。その上清に2倍量のアセトンを加えて、AYA株細胞壁成分を沈殿させた。
パイエル板細胞の調製とサンプルとの共培養
BALB/cマウスから小腸を採取し、パイエル板を回収した。このパイエル板を磨り潰し、37℃で70分間コラゲナーゼ処理を行ってから70μmのメッシュを通し、スルー側を細胞懸濁液として回収した。ライフテクノロジーズ製のウシ胎児血清:FCS(Foetal Calf Serum)を1質量%添加したAdvanced−RPMI1640培地(ライフテクノロジーズ製)で2回洗浄後、FCSを1質量%添加したAdvanced−RPMI1640培地に懸濁した。当培地に懸濁したパイエル板細胞(1.5×106 cells /ml)、サンプル(AYA株細胞壁成分50μg/ウェル)を細胞培養用96穴プレートに100μlスケールで添加し、3日間培養した。
培養上清を回収し、上清中のIgA濃度をサンドイッチELISA法で測定した。
実験結果を図1に示した。コントロール(サンプル無添加)と比較し、AYA株細胞壁成分を添加することで、有意にIgA抗体産生が亢進されることがわかった。
Claims (4)
- IgA抗体産生向上作用を有する乳酸菌の細胞壁成分を有効成分として含有する腸管免疫力増強剤。
- 前記細胞壁成分が、前記乳酸菌の細胞壁、又は前記乳酸菌の細胞壁を溶媒抽出して得られる可溶性成分若しくは不溶性残渣である請求項1に記載の腸管免疫力増強剤。
- 前記乳酸菌が、ラクトバチルス・プランタラムに属する乳酸菌である請求項1又は2に記載の腸管免疫力増強剤。
- 前記乳酸菌が、ラクトバチルス・プランタラムAYA株(受託番号FERM P−21106)である請求項1〜3の何れか1項に記載の腸管免疫力増強剤。
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