JP2014085294A - 蛍光測定方法、蛍光測定キット及び蛍光光度計 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 蛍光試薬で標識された抗体を含む第一の検査液81に光源1からの励起光を照射して蛍光強度を検出器3で検出する第一の測定ステップの後、抗原を含むと思われる試料Sを第二の検査液82に溶かしてから第一の検査液81に投入して得た液相対象物83について、同様に蛍光強度を検出する第二の測定ステップを行う。第一の測定ステップでの蛍光強度値F1、第二の測定ステップでの蛍光強度値F2、相関比Rに従って演算処理により蛍光増強比Q1 */Q1を求める。相関比Rは、第一の検査液81中の未反応の抗体により得られるであろう蛍光強度と当該未反応の抗体以外の成分により得られるであろう蛍光強度の比である。
【選択図】 図1
Description
蛍光測定によって試料の同定や定量を行うには、目的物質が蛍光物質である場合に限られるので、汎用性に欠けるとも言える。しかしながら、近年、目的物質を蛍光色素より成る試薬(蛍光試薬)で標識する蛍光標識法が開発されており、様々な物質について各々蛍光試薬が市販されている。このため、様々な目的物質について蛍光測定による同定や定量が可能になってきており、新薬や新材料の研究開発、プラントにおけるプロセス監視、環境評価など、多くの分野での応用が検討されている。
尚、目的物質以外からの蛍光は、フィルタにより除去できる場合がある。即ち、目的物質からの蛍光の波長の光のみを透過できるフィルタを検出器の手前の光路上に配置すれば、除去できる。しかしながら、目的物質からの蛍光の波長範囲と目的物質以外からの蛍光の波長範囲とが重なっている場合、フィルタでは十分に除去できない。
本願の発明は、以上のような事情を考慮して為されたものであり、抗体反応を利用して試料の同定又は定量を行う蛍光測定において、測定作業や光度計の動作を煩雑にすることなく高い精度で同定又は定量を行えるようにすることを解決課題としている。
当該抗原に対する抗体を含む第一の検査液に対し、試料を投入していない状態で励起光を照射して当該第一の検査液からの蛍光の強度を測定する第一の測定ステップと、
第一の測定ステップの後、第一の検査液に試料を投入して得た液相対象物に励起光を照射して当該液相対象物からの蛍光の強度を測定する第二の測定ステップと、
第一第二の各測定ステップでの測定結果から試料の同定又は定量のための演算を行う演算ステップとを有しており、
演算ステップは、第一の検査液について予め取得されている相関比Rと、第一の測定ステップで測定された蛍光強度の値F1と、第二の測定ステップで測定された蛍光強度の値F2とに従って演算を行うステップであり、
相関比Rは、第一の検査液において、当該第一の検査液中の未反応の抗体により得られるであろう蛍光強度と、当該未反応の抗体以外の成分により得られるであろう蛍光強度の比であり、
演算ステップは、試料投入前の抗体による蛍光強度をQ1、試料投入後の抗体による蛍光強度をQ1 *としたとき、F1=Q1+R・Q1とし、これに基づいてF1とF2の値からQ1 */Q1を求めるステップであるという構成を有する。
また、上記課題を解決するため、請求項2記載の発明は、前記請求項1の構成において、前記第二の測定ステップは、前記試料を第二の検査液に混合してから前記第一の検査液に投入して前記蛍光の強度を測定するステップであり、第二の検査液は、前記第一の検査液中の抗体以外の成分のうち無視し得ない蛍光を発する成分が少なくとも共通しているという構成を有する。
また、上記課題を解決するため、請求項3記載の発明は、前記請求項1の構成において、前記第二の測定ステップは、前記試料を第二の検査液に混合してから前記第一の検査液に投入して前記蛍光の強度を測定するステップであり、前記抗体は蛍光試薬によって蛍光標識されており、第二の検査液は、前記第一の検査液中の抗体及び蛍光試薬以外の成分のうち無視し得ない蛍光を発する成分が少なくとも共通しているという構成を有する。
また、上記課題を解決するため、請求項5記載の発明は、請求項2に記載の蛍光測定方法に使用される蛍光測定キットであって、前記第一の検査液と前記第二の検査液とを収容した試料容器を有しており、試料容器は、試料を前記第二の検査液に投入した後に当該第二の検査液を前記第一の検査液に混合させることが可能な構造を有しており、
収容されている前記第二の検査液は、収容されている前記第一の検査液中の抗体以外の成分のうち無視し得ない蛍光を発する成分が少なくとも共通しているという構成を有する。
また、上記課題を解決するため、請求項6記載の発明は、請求項3に記載の蛍光測定方法に使用される蛍光測定キットであって、前記第一の検査液と前記第二の検査液とを収容した試料容器を有しており、試料容器は、試料を前記第二の検査液に投入した後に当該第二の検査液を前記第一の検査液に混合させることが可能な構造を有しており、
収容されている前記第一の検査液中の抗体は蛍光試薬によって蛍光標識されており、
収容されている前記第二の検査液は、収容されている前記第一の検査液中の抗体及び蛍光試薬以外の成分のうち無視し得ない蛍光を発する成分が少なくとも共通しているという構成を有する。
蛍光物質が放出した蛍光の強度を検出する検出器と、
試料容器内に収容された液相対象物に光源からの励起光を導き、液相対象物からの蛍光を検出器に導く光学系と、
検出器から出力される蛍光強度のデータを処理する演算処理部とを備えており、
演算処理部は、試料容器内に予め収容されている第一の検査液を液相対象物として蛍光強度を測定した結果である第一の蛍光強度測定値F1と、第一の検査液に試料に投入して得た液相対象物について蛍光測定した結果である第二の蛍光強度測定値F2と、第一の検査液について予め取得されている相関比Rと従って演算処理を行うものであり、
第一の検査液は、試料が含むと思われる抗原に対する抗体を含んでおり、
相関比Rは、第一の検査液において、当該第一の検査液中の未反応の抗体により得られるであろう蛍光強度と、当該未反応の抗体以外の成分により得られるであろう蛍光強度の比であり、
演算処理部は、試料投入前の抗体による蛍光強度をQ1、試料投入後の抗体による蛍光強度をQ1 *としたとき、F1=Q1+R・Q1とし、これに基づいてF1とF2の値からQ1 */Q1を求めるものであるという構成を有する。
また、上記課題を解決するため、請求項8記載の発明は、前記請求項7の構成において、前記試料容器は、蛍光測定キットに含まれるものとして提供されるものであって、この蛍光測定キットは、前記相関比Rを表示した表示部を有しており、
表示部に表示された前記相関比Rの読み取り手段を備えているという構成を有する。
また、請求項2又は5記載の発明によれば、上記効果に加え、抗体以外の成分については蛍光発光量が多くてゼロとみなせない場合でも、精度低下を招くことなく測定作業を簡略化させることができるという効果が得られる。
また、請求項3又は6記載の発明によれば、上記効果に加え、抗体及び蛍光試薬以外の成分については蛍光発光量が多くてゼロとみなせない場合でも、精度低下を招くことなく測定作業を簡略化させることができるという効果が得られる。
また、請求項8記載の発明によれば、上記効果に加え、表示部に表示された相関比Rの読み取り手段を備えているので、相関比Rを読み取って手入力する手間がなく、簡便となるという効果が得られる。
図1は、本願発明の実施形態の蛍光測定方法の概略図を示した図である。実施形態の方法は、抗体反応を利用して試料の同定又は定量を行う方法である。
この方法では、同定又は定量の目的物質は抗原であり、この抗体となる物質が試薬として使用される。試薬とは、測定に使用される材料という程度の意味である。抗体自体が蛍光物質である場合もなくはないが、本実施形態では、抗体を蛍光試薬で標識したものが使用される。この際、抗体分子と結合した蛍光色素の分子はクエンチング(消光)された状態であり、抗原との反応によりクエンチングが解消されて蛍光が生じる(又は蛍光が増強される)。このような性質を有する蛍光試薬及び抗体が使用される。
その上で、図1(3)に示すように、第二の測定ステップが行われる。第二の測定ステップは、試料Sが投入された状態の第一の検査液83を対象物として蛍光測定を行うステップである(試料投入後の第一の検査液を、試料未投入の第一の検査液と区別するため、以下、液相対象物と言い換える)。同様に光源1により液相対象物83に励起光が照射され、液相対象物83からの蛍光が検出器3で捉えられる。
F1とF2とからQ1 */Q1を求める際、単純にQ1=F1、Q1 *=F2であるとすることはできない。前述した「目的物質以外からの蛍光」の問題があるからである。具体的に説明すると、例えばF1については、試料Sが投入されていない第一の検査液81においては、蛍光色素により標識された抗体からの蛍光(目的物質からの蛍光)以外に、緩衝液が蛍光を発する場合がある。また、特定の目的のために緩衝液に添加されている材料が蛍光を発する場合もある。
ここで、測定された蛍光強度F1について、蛍光標識された抗体(ここでの目的物質)以外の物質から発せられた分の蛍光強度をQ2とすると、F1は、以下の式1で表される。
また、測定された蛍光強度F2をF1とともに扱う場合、蛍光強度としての光度は単位体積当たりの発光強度であるため、第一の検査液と試料投入済みの第二の検査液との混合比k(0<k<1)を導入する必要がある。第二の測定ステップでの液相対象物における単位体積において、第一の検査液81がkの量で存在していれば、試料投入済みの第二の検査液92は1−kの量で存在しているから、測定された蛍光強度F2は、以下の式で表される。
式2で、Q3やQ4は、液相対象物83における「目的物質以外からの蛍光」の強度に相当しており、Q3は試料が蛍光物質を含んでいる場合(例えば抗原が蛍光物質である場合)の当該蛍光物質からの蛍光強度、Q4は第二の検査液が蛍光物質を含んでいる場合の当該蛍光物質からの蛍光強度である。
相関比Rの求め方としては、第一の検査液81について、蛍光試薬及び抗体以外の材料についてまず蛍光強度を測定する。例えば、ph調整剤や器壁付着防止剤、防腐剤等の所定の各添加剤と緩衝液に添加し、蛍光試薬と抗体は投入しない状態で蛍光強度を求める。次に、蛍光試薬と抗体とを所定量投入した上で蛍光強度を再度測定し、これらの結果から相関比Rを求めることができる。尚、蛍光試薬及び抗体以外の材料のうち、蛍光物質であるものが特定されているのであれば、その材料だけの蛍光強度を測って相関値Rとしても良い。例えば、緩衝液だけが蛍光物質であるのであれば、添加剤無しで緩衝液だけの蛍光強度を測り、その結果から相関値Rを求めれば良い。
式4において、kを0.7〜0.8程度の大きな値とすると、第2項(1−k)(Q3+Q4)は、ゼロと見なし得る場合がある。抗体が蛍光物質でない場合やあっても少ない場合、(1−k)Q3はゼロであるとみなして良い。特に、試料Sについては第二の検査液82に対して微量投入すれば良い場合が多いから、試料Sからの蛍光は無視できる場合が多い。また、Q4についても、第二の検査液82が蛍光物質でなかったり、蛍光の発光が少ないものであったりする場合、ゼロとみなし得る。各々ゼロとみなし得るとすると、式4は、以下の式5となる。
即ち、第一の測定ステップでの測定結果F1と、第二の測定ステップでの測定結果F2と、各常数k及びRから、式6に従い、目的とする蛍光増強比Q1 */Q1が求められることになる。
よって、式3及び式7から、以下のようにQ1 */Q1を導出することができる。
図2は、図1に示す蛍光測定方法に好適に使用される蛍光光度計を示した図であり、図2は斜視概略図、図3は正面断面概略図である。
図2及び図3に示す蛍光光度計は、前述したように様々な場所での蛍光測定を考慮し、携帯型となっている。図2に示すように、本実施形態の蛍光光度計は、全体としては扁平なほぼ直方体の箱状のものである。携帯型であるので、大きさとしては人の手のひらサイズかそれよりも少し大きい程度である。
この蛍光光度計は、図3に示すように、光源1と、光学系2と、検出器3と、容器装着部4などを備えている。光源1や光学系2、検出器3などは、図2に示すような扁平なほぼ直方体状のケーシング5内に収められている。
図4は、図2及び図3に示す実施形態の蛍光光度計に使用される蛍光測定キットの概略図、図5は図4の蛍光測定キットに含まれる試料容器の斜視概略図である。
蛍光測定キットは、汚損や異物の混入がないよう個装袋90に試料容器91を封入したものとなっている。試料容器91は、図5に示すような縦長の細長い容器である。個装袋90内は、キットの劣化防止のため、減圧脱気されたり、又は窒素充填されたりする場合がある。
第二のセル部913は、第一のセル部912を含む下側の空間に対して隔壁914によって仕切られている。隔壁914は、不図示の治具によって破断可能となっており、第二の検査液82を第一の検査液81に混合する際、隔壁914は破断される。試料容器91の上端には、容器蓋95が設けられている。試料を投入する際には容器蓋95が開けられ、試料はまず最初に第二のセル部913内の第二の検査液82に投入されて混合される。その後、隔壁914が破断されて試料は第二の検査液82とともに第一の検査液81に投入される。
尚、コンタミネーションによる測定精度低下の防止の観点から、試料容器91は使い捨て(1回限りの測定で使用されるもの)とされることが好ましい。この観点から、試料容器91の材質としては、PMMAのような樹脂製の方がコスト面で好ましい。
図2に示すように、挿入孔40は、試料容器91の本体部911の断面形状に適合したものとなっており、円周状の部分と直線状の部分(以下、直線状部)401とから成っている。
試料容器91を蛍光光度計に装着する場合、図1に示すように開閉蓋51を開け、試料容器91を挿入孔40に挿入する。この際、本体部911の側面の平坦面部92を挿入孔40の直線状部401に合わせた状態にする。この状態で、試料容器91は、そのまま下方に押し下げられて容器装着部4に装着される。その後、開閉蓋51は閉じられる。
尚、この蛍光光度計では、試料容器91を容器装着部に装着した状態で試料を投入することができるようになっている。即ち、容器装着部4に試料容器91を装着した状態で容器蓋95が開けられるので、この状態で試料を投入し、不図示の治具で隔壁914を破断させた後、容器蓋95及び開閉蓋51を閉じれば良い。
光学系2は、光源1からの励起光を試料容器91の第一のセル部912内に導くとともに第一のセル部912内の液相対象物からの蛍光を検出器3に導くものである。本実施形態では、光学系2は、光源1からの光を集光する集光レンズ21と、光路の折り曲げと光の選択を行うためのダイクロイックミラー22と、光路上に配置されたフィルタ23,24等から構成されている。
また、ダイクロイックミラー22を挟んで容器装着部4とは反対側の位置に、検出器3が配置されている。容器装着部4に装着された試料容器91の第一のセル部912と、ダイクロイックミラー22と、検出器3とは、同じ高さに位置しており、水平な光軸(検出用光軸)上に配置されている。一方、光源1から下方に延びる光軸(励起用光軸)は、ダイクロイックミラー22により垂直に折り曲げられ、第一のセル部912に達している。尚、容器装着部4は、励起光や蛍光を遮らないよう開口を有する。
蛍光用フィルタ24は、測定する蛍光の波長の光を選択的に透過するものであり、ダイクロイックミラー22と検出器3との間に配置されている。例えば、蛍光の波長が550〜630nmの場合、570〜610nm程度の波長域の光を透過し、それ以外の波長域の光を反射するものが蛍光用フィルタ24として使用される。
集光レンズ21による集光位置(最もビームが細くなる位置)は、第一のセル部912の中央である。尚、ビーム径は最も細い位置で0.5〜1.5mm程度である。尚、集光レンズ21は、液相対象物中の蛍光物質から発せられた蛍光を集めて検出器3に入射させる目的でも配置されている。
また、図2に示すように、ケーシング5の前面には、光度計の動作状態や測定結果を表示するディスプレイ52と、幾つかの操作ボタン531〜536が設けられている。操作ボタン531〜536のうちの一つが、測定ボタン(光源1を動作させて検出器3の出力を取得するボタン)である。ディスプレイ52としては、液晶ディスプレイが採用でき、タッチパネルが採用されることもあり得る。この他、ケーシング5の側面には、不図示の電源スイッチが設けられている。
図3に示すように、ケーシング5内には、制御ボックス60が設けられている。制御ボックス60内には、各部の制御や信号処理を行う制御部6が設けられている。制御部6は、図6に示すように、演算処理を行うプロセッサ61や、データやプログラムを記憶するためのメモリ62などを有している。
検出器3は、蛍光を受光する光電変換部(この例ではシリコンフォトダイオード)31と、光電変換部31の出力信号を増幅する増幅器32と、増幅された信号に基づいて蛍光強度の信号として出力する出力回路33とを含んでいる。出力回路33は、光度(蛍光強度)を絶対値で表示するための校正回路を必要に応じて含む。
尚、図2に示すように、ケーシング5内には、電池ケース8が設けられている。電池ケース8には、光源1や検出器3、制御部6などに必要な電圧を供給する電池が装着される。
また、図3には不図示であるが、蛍光光度計は、温度センサ64を内蔵している。図6に示すように、温度センサ64は制御部6に接続されており、ケーシング5内の雰囲気温度の信号を制御部6に常時送信している。
まず、図5に示すように、蛍光測定キットに含まれる試料容器91には、収容された検査液81,82の情報をコード化した液情報コード部93が設けられている。本実施形態では、液情報コード部93は、図5に示すようにバーコードとなっている。液情報コード部93は、試料容器91の側面の平坦面部92に液情報コード部93が設けられている。例えば、バーコードをシールに印刷し、平坦面部92に貼り付けることで液情報コード部93とすることができる。
容器装着部4は、途中の高さの位置に読み取り用開口41を有している。読み取り用開口41の縁から斜め上方に突出するようにしてリーダ取付部42が形成されている。リーダ取付部42は短い筒状の部位である。コードリーダ7は、このリーダ取付部42内に嵌め込まれて保持されており、読み取り用開口41を通して光照射したり受光したりすることが可能となっている。
図7は、図3に示すコードリーダ7の概略構成及びその動作原理を示した図である。図7の(1)は、コードリーダ7が液情報コード部93を読み取っている状態を示し、(2)は試料容器91の装着を検知するセンサとして動作している状態を示している。図7に示すように、コードリーダ7は、液情報コード部93に光を照射する発光器71と、液情報コード部93からの光を受光する受光器72と、受光器72からの出力信号を処理してデジタル信号を得る二値化素子73とを備えている。
このようなコードリーダ7としては、例えば岡谷電機産業(株)製のRPU813Tなどを使用することができる。また、発光器71にレーザーを使用したものでも良く、例えばHonewell社のH0A6480などを使用することができる。
図8は、図7に示す液情報コード部のフォーマットの一例について示した概略図である。図8に示すように、この例では、10桁の数字がバーコード化されている。このうち、最初の1桁が検査液特定情報、次の6桁が使用期限情報、次の3桁がR値となっている。
図9に示すように、テーブルは、各検出液IDについて、目的物質名、算出式ID、参照データ等が対応づけられている。目的物質名は、検査液IDで特定される検査液組合せによって同定又は定量が行える目的物質の名称である。算出式IDは、前述した蛍光増強比Q1 */Q1を算出する際の式を特定するものである。本実施形態では、前述した式6又は式8に従って算出がされる。算出式IDが“1”が式6、“2”が式8を意味している。
蛍光光度計の電源スイッチがオンされるとメインプログラムが自動で起動し、ディスプレイ52に各操作メニューが表示される。ここで測定メニューを選択すると、図10に示す測定プログラムが起動する。
例外的に、コードリーダ7から容器有りの信号が送られる場合がある。試料容器91が既に装着されていて、コードリーダ7が矩形部94を読み取っている場合である。前回の測定で使用した試料容器91が装着されたままとなっているか、又は試料容器91を装着した後に電源スイッチをオンしたかである。いずれの場合も、測定に必要な検査液情報が取得できていない状態であるので、測定プログラムは、試料容器91の装着をし直させる画面を表示する。「試料容器が装着されたままとなっています。試料容器の装着をし直して下さい。」というような画面である。
検査液情報が取得でき、試料容器91の装着が確認されたら、図9に示すように、測定プログラムは、検査液情報を処理し、図8に示すフォーマットに従って検査液ID、使用期限情報、R値をそれぞれ取得する。
二回目の測定ボタンが押されるまで、装着確認部63の出力がオフにならなければ、測定プログラムは、上記の通り算出式を選択し、参照データを適用して同定又は定量を行う。
したがって、メタンフェタミン用の検査液としては、適宜選択された抗メタンフェタミン抗体に対して、適宜選択された蛍光標識色素を結合させて標識し、それを緩衝液としてのPBS溶液(リン酸生理延生理食塩水)に溶かしたものを用いることができる。
仮に、相関比Rが使用温度範囲内の温度で大きく異なる場合には、その変化率を予め測定しておき、それを参照データの一つとしてメモリ62に記憶しておけば良い。液情報コード部93から取得した相関値Rを、温度センサ63から送られる温度データとメモリ62から読み取った変化率のデータに従って補正し、補正後の相関値Rを適用して蛍光増強比Q1 */Q1の算出を行えば良い。
尚、相関比Rについては、試料容器91に表示されている場合の他、図4に示す個装袋90に表示されていても良い。試料容器91に表示する場合も、相関比Rをそのまま数値で表示しても良いし、QRコード((株)デンソーウェーブ社の登録商標)のような他の情報コードで表示するようにし、それを読み取る手段を蛍光光度計が備えるようにしても良い。
採取ポイントを取り違えないように蛍光測定を行う必要がある。例えば、A,B,C三つのポイントで採取された試料A,B,Cがあり、それぞれについて蛍光測定キットが用意されたとする(目的物質は同じとする)。この場合、試料容器Aを装着して第一の測定ステップを行った後、試料容器Aを取り外して試料を投入するようなことをしていると、試料Bを投入した試料容器Bを取り違えて装着してしまい、この状態で第二の測定ステップを行うようなミスが生じ易い。この場合、第一の測定ステップにおいて蛍光強度F1を取得した第一の検査液と、第二の測定ステップで試料が投入されている第一の検査液とは、違うものである。つまり、同じ抗体について抗原との反応の前後での蛍光増強比を測定したことにならない。このため、測定結果の信頼性が低下する。
尚、試料容器91を装着した状態で試料の投入が可能な構造になっており、第一の測定ステップの後、第二の測定ステップの前に試料容器91が取り外されるとエラー表示(警告)を行ったり、測定を中止させたりする点は、相関比Rの導入とは別個の独立した意義を有しており、別個の独立した発明と観念することも可能である。
また、第二の検査液を使用する場合も、第二の検査液が第一の検査液と同じ試料容器に予め収容されていなくても良い。即ち、蛍光測定キットは、第一の検査液を収容した試料容器と、第二の検査液を収容した別の試料容器を有するものであっても良い。
この例では、モルヒネが目的物質(抗原)とされた。第一の検査液としては、モルヒネ用抗体を蛍光試薬で標識し、緩衝液に溶解して使用した。蛍光試薬としては、TAMRAが使用された。緩衝液としては、ph調整作用のあるPBS(リン酸塩生理食塩水)に、器壁付着防止剤としてのBSAを1vol%、たんぱく質安定剤としてTween20を0.05vol%で添加したものが使用された。第一の検査液におけるモルヒネ用抗体の濃度は、8nM(ナノモル)程度である。
一方、第二の検査液は、第一の検査液における緩衝液と全く同じ成分とした。即ち、PBSにBSAを1vol%、Tween20を0.05vol%で添加したものを使用した。この第二の検査液に試料であるモルヒネを投入し、濃度が100nM程度になるようにした。
2 光学系
3 検出器
4 容器装着部
5 ケーシング
52 ディスプレイ
6 制御部
7 コードリーダ
81 第一の検査液
82 第二の検査液
91 試料容器
912 第一のセル部
913 第二のセル部
93 液情報コード部
S 試料
Claims (8)
- 抗原を含むと思われる試料について蛍光を測定する蛍光測定方法であって、
当該抗原に対する抗体を含む第一の検査液に対し、試料を投入していない状態で励起光を照射して当該第一の検査液からの蛍光の強度を測定する第一の測定ステップと、
第一の測定ステップの後、第一の検査液に試料を投入して得た液相対象物に励起光を照射して当該液相対象物からの蛍光の強度を測定する第二の測定ステップと、
第一第二の各測定ステップでの測定結果から試料の同定又は定量のための演算を行う演算ステップとを有しており、
演算ステップは、第一の検査液について予め取得されている相関比Rと、第一の測定ステップで測定された蛍光強度の値F1と、第二の測定ステップで測定された蛍光強度の値F2とに従って演算を行うステップであり、
相関比Rは、第一の検査液において、当該第一の検査液中の未反応の抗体により得られるであろう蛍光強度と、当該未反応の抗体以外の成分により得られるであろう蛍光強度の比であり、
演算ステップは、試料投入前の抗体による蛍光強度をQ1、試料投入後の抗体による蛍光強度をQ1 *としたとき、F1=Q1+R・Q1とし、これに基づいてF1とF2の値からQ1 */Q1を求めるステップであることを特徴とする蛍光測定方法。 - 前記第二の測定ステップは、前記試料を第二の検査液に混合してから前記第一の検査液に投入して前記蛍光の強度を測定するステップであり、第二の検査液は、前記第一の検査液中の抗体以外の成分のうち無視し得ない蛍光を発する成分が少なくとも共通していることを特徴とする請求項1記載の蛍光測定方法。
- 前記第二の測定ステップは、前記試料を第二の検査液に混合してから前記第一の検査液に投入して前記蛍光の強度を測定するステップであり、前記抗体は蛍光試薬によって蛍光標識されており、第二の検査液は、前記第一の検査液中の抗体及び蛍光試薬以外の成分のうち無視し得ない蛍光を発する成分が少なくとも共通していることを特徴とする請求項1記載の蛍光測定方法。
- 請求項1乃至3いずれかに記載の蛍光測定方法に使用される蛍光測定キットであって、前記相関比Rの表示部を有していることを特徴とする蛍光測定キット。
- 請求項2に記載の蛍光測定方法に使用される蛍光測定キットであって、前記第一の検査液と前記第二の検査液とを収容した試料容器を有しており、試料容器は、試料を前記第二の検査液に投入した後に当該第二の検査液を前記第一の検査液に混合させることが可能な構造を有しており、
収容されている前記第二の検査液は、収容されている前記第一の検査液中の抗体以外の成分のうち無視し得ない蛍光を発する成分が少なくとも共通していることを特徴とする蛍光測定キット。 - 請求項3に記載の蛍光測定方法に使用される蛍光測定キットであって、前記第一の検査液と前記第二の検査液とを収容した試料容器を有しており、試料容器は、試料を前記第二の検査液に投入した後に当該第二の検査液を前記第一の検査液に混合させることが可能な構造を有しており、
収容されている前記第一の検査液中の抗体は蛍光試薬によって蛍光標識されており、
収容されている前記第二の検査液は、収容されている前記第一の検査液中の抗体及び蛍光試薬以外の成分のうち無視し得ない蛍光を発する成分が少なくとも共通していることを特徴とする蛍光測定キット。 - 蛍光物質を励起する励起光を放射する光源と、
蛍光物質が放出した蛍光の強度を検出する検出器と、
試料容器内に収容された液相対象物に光源からの励起光を導き、液相対象物からの蛍光を検出器に導く光学系と、
検出器から出力される蛍光強度のデータを処理する演算処理部とを備えており、
演算処理部は、試料容器内に予め収容されている第一の検査液を液相対象物として蛍光強度を測定した結果である第一の蛍光強度測定値F1と、第一の検査液に試料に投入して得た液相対象物について蛍光測定した結果である第二の蛍光強度測定値F2と、第一の検査液について予め取得されている相関比Rと従って演算処理を行うものであり、
第一の検査液は、試料が含むと思われる抗原に対する抗体を含んでおり、
相関比Rは、第一の検査液において、当該第一の検査液中の未反応の抗体により得られるであろう蛍光強度と、当該未反応の抗体以外の成分により得られるであろう蛍光強度の比であり、
演算処理部は、試料投入前の抗体による蛍光強度をQ1、試料投入後の抗体による蛍光強度をQ1 *としたとき、F1=Q1+R・Q1とし、これに基づいてF1とF2の値からQ1 */Q1を求めるものであることを特徴とする蛍光光度計。 - 前記試料容器は、蛍光測定キットに含まれるものとして提供されるものであって、この蛍光測定キットは、前記相関比Rを表示した表示部を有しており、
表示部に表示された前記相関比Rの読み取り手段を備えていることを特徴とする請求項7記載の蛍光光度計。
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