JP2013523782A - 放射線防護剤化合物および方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(a)腫瘍に対する放射線の身体的標的化を最適化すること、
(b)放射線量の分割、および
(c)放射線修飾剤(放射線防護剤と放射線増感剤の両方を包含し、後者を使用し、放射線量単位当たりの細胞殺傷のレベルを高めることができる)の使用を包含する。
(i)放射線治療処置の総時間を低減するための、加速された処置スケジュールの開発。そのような加速されたスケジュールにおいて、急性反応は、特定の問題である。例えば、頭頸部癌患者における急性口腔粘膜炎は、放射線防護剤の明確な必要性を示す。
(ii)正常組織反応に起因する放射線治療処置の中断は、腫瘍管理の確率を低下させるであろうという認識。したがって、毒性により誘発される処置中断を防ぐための放射線防護剤の使用は、明らかに有益であろう。
X'は、NまたはNHを表し、ここで、XとX'は異なり、
Qは、メトキシルまたはHを表し、
Yは、O、メチレン、ヒドロキシメチルまたはメチルアミノを表し、
Aは、場合により置換されていてもよい2-ピリジル、場合により置換されていてもよい2-ピリミジル、場合により置換されていてもよい2-ピラジニル、場合により置換されていてもよい3-ピラゾリル、場合により置換されていてもよい5-ピラゾリル、場合により置換されていてもよい2-フラニル、場合により置換されていてもよい2-キノリニル、場合により置換されていてもよい1-イソキノリニルまたは場合により置換されていてもよい3-イソキノリニルを表す)
および薬学的に許容できるその誘導体が提供される。
R1およびR2は、同じであるかまたは異なり、水素、C1〜C4アルキルまたはC2〜C4アルケニルから選択され、
R3は、C1〜C4アルキルまたはC2〜C4アルケニルの基または鎖であり、
Zは、同じであるかまたは異なり、NまたはCHを表し、
Z'は、同じであるかまたは異なり、NまたはCを表し、
Xは、CH、NまたはNHを表し、ここで、
X'は、NまたはNHを表し、ここで、XがCHまたはNの場合は、X'はNHであり、XとX'は異なり、さらに、
Qは、H、アルコキシル、-NR1R2、FまたはClを表し、
Q1は、Z'がNの場合は存在せず、Z'がCの場合はH、アルコキシル、-NR1R2、FまたはClを表し、
Aは、複素環のNまたはOがオルト位に位置する5〜10員の単環構造または多環構造を表し、前記環は、任意選択で二重結合、置換および/または他のヘテロ原子を含んでいてよい]
および薬学的に許容できるその誘導体が提供される。
Aは、場合により置換されていてもよい2-ピリジル、場合により置換されていてもよい2-ピリミジル、場合により置換されていてもよい2-ピラジニル、場合により置換されていてもよい3-ピラゾリル、場合により置換されていてもよい5-ピラゾリル、場合により置換されていてもよい2-フラニル、場合により置換されていてもよい2-キノリニル、場合により置換されていてもよい1-イソキノリニルまたは場合により置換されていてもよい3-イソキノリニルを表す。
2-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
4-クロロ-2-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-(5''-モルホリノベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(4'-メトキシ-6'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-(5''-(4'''-ブチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-メトキシ-6'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
4-メトキシ-2-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
3-(5'-(5''-(4'''-ヒドロキシピペリジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)イソキノリン
2-(5'-(5''-(2'''-(2''''-メトキシエトキシ)エチルアミノ)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-(5''-(4'''-イソプロピルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
5-フルオロ-2-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
を包含する。
(a)経口投与、外部適用、例えば、ドレンチ剤(例えば、水性または非水性の液剤または懸濁液剤);錠剤またはボーラス剤;飼料と混合するための散剤、顆粒剤またはペレット剤;舌への適用のためのペースト剤;
(b)例えば、無菌の液剤もしくは懸濁剤として、例えば皮下、筋肉内もしくは静脈内注射による;または(適切な場合に)懸濁液剤もしくは液剤が、乳頭を介して乳房中に導入される乳房内注射による非経口投与;
(c)例えば、皮膚に適用されるクリーム、軟膏またはスプレーとしての局所適用;または
(d)例えば、ペッサリー、クリームまたはフォームとして膣内に
に適合しているものを包含する。
i.実施例における命名では、一般に、分子の右端に描いた複素環系を優先し、それに続く環系に順次番号付けした。適切な場合には、互変異性体を、DNAの副溝に水素結合によって配位し得る配向に描く。
ii.2-アミノ-4-(5’-(4”-メチルピペラジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリンは、KellyらのAust. J. Chem. 1994, 47, 247-262 (参考文献 7)の変形法を用いて、4-(5’-(4”-メチルピペラジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリンの水素化によって調製した。
iii.2-アミノ-4-(5’-(ピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリンは、KellyらのAust. J. Chem. 1994, 47, 247-262 (参考文献 7)の変形法を用いて、2-ニトロ-4-(5’-(ピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリンの水素化によって調製した。
iv.エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩は、KellyらのAust. J. Chem. 1994, 47, 247-262 (参考文献 7)の方法を用いて、エタノール中、4-アミノ-3-ニトロベンゾニトリルと無水HClガスとの反応によって調製した。
v.4-アミノ-3-メトキシ-5-ニトロベンゾニトリルは、WO 2005/070906 A1 (参考文献 11)に記載された方法によって調製した。
vi.5-(4’-メチルピペラジン-1’-イル)-2-ニトロアニリンは、KellyらのAust. J. Chem. 1994, 47, 247-262 (参考文献 7)の変形法を用いて調製した。
vii.2,4-ジクロロ-5-ニトロピリミジンは、WhittakerのJ. Chem. Soc., 1565, 1951 (参考文献 12)に記載された方法を用いて調製した。
実施例番号は、以下に基づいて付与した。
1〜5 アルデヒド/メタ重亜硫酸塩法を用いて調製したN-メチルピペラジン
6〜14 ニトリル/メトキシド法を用いて調製したN-メチルピペラジン
14〜18 カルボン酸/PPA法を用いて調製したN-メチルピペラジン
19〜21 モルホリノ類似体
22〜23 4-ヒドロキシピペリジン類似体
24〜29 他の5''-置換2-ピリジル類似体
30〜32 4'-メトキシおよびインドール/プリン類似体
33〜44 ピペラジニル、アミン、チオモルホリノ、およびモルホリノ類似体
45〜53 さまざまな化合物
このアッセイは、形質転換ヒトケラチン生成細胞系列(FP 1811)(Smithらの(6)に記載されているとおりのもの)と、クロノゲン(clonogen)生存の評価項目(endpoint)とを用いる細胞毒性および放射線防護性の評価からなる。詳細は、Martinらの(4)に詳しく記載されている(この開示を、参照により本明細書に組み込む)が、要約すると、対数増殖期中期の単層培養物を、さまざまな濃度の試験薬物と共に1時間インキュベートした後、単層を洗浄し、プロナーゼを用いて分散させて単独細胞懸濁液とし、最後に適切な数の細胞をペトリ皿に分配する。8日間インキュベートした後、コロニーの数を測定する。放射線防護研究のために、単層培養物を、137Cs-γ-細胞照射源中で、12Gyの線量まで照射する。(1分間に0.6Gyの線量率での)照射を、試験薬物の添加の30分後に開始する。照射が完了した後、培養物のインキュベーションを、薬物への曝露時間の合計が60分となるまで継続する。次いで、培養物を洗浄し、細胞毒性試験として記載するとおりに、クロノゲン生存評価のためのプレート化を行う。試験には、未処理の培養物を対照として含め、これらの対照のプレート化効率を用いて試験培養物のプレート化効率を適合させて、総合的なクロノゲン生存率の算出に用いる。
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.00, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.20, t (J = 13.2 Hz), 2H, NCH2; 3.34, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.97, d (J = 12.8 Hz), 2H, NCH2; 6.90, ddd (J = 3.6, 1.6, 0.4 Hz), 1H, H4; 7.35, d (J = 2.4 Hz), 1H, H4"; 7.44, dd (J = 9.2, 2.0 Hz), 1H, H6"; 7.69, d (J = 3.6 Hz), 1H, H3; 7.75, d (J = 9.2 Hz), 1H, H7"; 8.04, d, (J = 8.8 Hz), 1H, H7'; 8.07, d (J = 1.6 Hz), 1H, H5; 8.21, dd (J = 8.4, 1.6 Hz), 1H, H6'; 8.54, d (J = 1.6 Hz), 1H, H4'. 13C nmr (100 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 43.6, 4’’’-MeN; ~ 49.2 (obs), C2’’’/6’’’; 54.6, C3’’’/5’’’; 102.4, C4”; 113.0, 113.4, C3, C4; 114.4, C4’; 116.2, 116.6, 116.9, C6”, C7’, C7”; 122.8, C6’; 123.6, C5’; 133.8, 138.6, 139.7, 141.6, C3a’, C3a”, C7a’, C7a”; 145.8, 146.3, 147.1, C2, C2’, C5; 148.6, C5”; 152.4, C2”. MS (ESI +ve) m/z 399 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 399.19289, C23H23N6Oの理論質量:399.19279 (△= 0.3 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 57.3
PF = 7.7
DMFm = 1.37
DMF10 = 1.14
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.00, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.21, t (J = 11.6 Hz), 2H, NCH2; 3.34, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 11.6 Hz), 2H, NCH2; 3.96, d (J = 13.2 Hz), 2H, NCH2; 7.33, d (J = 2.4 Hz), 1H, H4"; 7.41, dd (J = 2.0, 8.8 Hz), 1H, H6"; 7.67, dd (J = 4.8, 7.6 Hz), 1H, H5; 7.73, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7"; 8.06, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7'; 8.13, dt (J = 1.6, 8.0 Hz), 1H, H4; 8.19, dd (J = 1.6, 8.8 Hz), 1H, H6'; 8.40, d (J = 8.0 Hz), 1H, H3; 8.58, d (J = 1.6 Hz), 1H, H4'; 8.87, d (J = 4.8 Hz), 1H, H6. 13C nmr (100 MHz, d4-MeOH + 3滴のHOAc) δ 43.6, 4’’’-MeN; 49.4, C2’’’/6’’’; 54.6, C3’’’/5’’’; 102.6, C4”; 115.1, C4’; 116.4, 116.7, 116.9, C6”, C7’, C7”; 122.7, C3 or C6’; 123.0, C6’ or C3; 124.6, C5’; 126.1, C5; 134.7, C7a”; 138.4, C4; 139.2, 140.4, C3a’, C3a”; 141.5, C7a’; 148.5, C5”; 148.7, C2; 150.8, C6; 153.1, 154.1, C2’, C2”. MS (ESI +ve) m/z 410 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 410.20859, C24H24N7の理論質量:410.20877 (△= 0.4 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 101.0
PF = 18.2
DMFm = 2.10
DMF10 = 1.93
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.01, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.21, t (J = 11.8 Hz), 2H, NCH2; 3.35, m (obs), NCH2; 3.69, d (J = 11.5 Hz), 2H, NCH2; 3.97, d (J = 13.5 Hz), 2H, NCH2; 7.35, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4"; 7.44, dd (J = 2.0, 9.0 Hz), 1H, H6"; 7.76, d (J = 9.0 Hz), 1H, H7"; 7.80, ddd (J = 4.3, 4.3, 8.6 Hz), 1H, H5; 7.99, ddd (J = 1.0, 8.5, 10.1 Hz), 1H, H4; 8.10, d (J = 8.5 Hz), 1H, H7'; 8.22, dd (J = 1.7, 9.0 Hz), 1H, H6'; 8.62, d (J = 1.5 Hz), 1H, H4'; 8.75, dt (J = 4.8, 1.5 Hz), 1H, H6. 13C nmr (100 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 43.6, 4’’’-MeN; 49.4, C2’’’/6’’’; 54.7, C3’’’/5’’’; 102.7, C4”; 115.4, C4’; 116.4, 116.8, 117.2, C6”, C7’, C7”; 123.3, C6’; 124.9, C5’; 126.4, d (2JCF = 19 Hz), C4; 127.8, d (3JCF = 4 Hz), C5; 134.8, C7a”; 136.7, d (2JCF = 9 Hz), C2; 139.4, 140.3, C3a’, C3a”; 141.4, C7a’; 146.9, d (4JCF = 5 Hz), C6; 148.5, C5”; 150.6, d (3JCF = 8 Hz), C2’; 153.1, C2”; 159.1, d (1JCF = 266 Hz), C3. MS (ESI +ve) m/z 428 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 428.19938, C24H23FN7の理論質量:428.19935 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 93.1
PF = 15.3
DMFm = 1.80
DMF10 = 1.40
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.00, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.20, t (J = 11.8 Hz), 2H, NCH2; 3.35, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.96, d (J = 13.6 Hz), 2H, NCH2; 7.32, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4”; 7.42, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H6”; 7.73, d (J = 9.2 Hz), 1H, H7”; 7.80, dd (J = 4.8, 8.4 Hz), 1H, H5; 8.00, dd (J = 0.8, 8.8 Hz), 1H, H7’; 8.07, dd (J = 1.8, 8.6 Hz), 1H, H6’; 8.41, dd (J = 0.8, 8.0 Hz), 1H, H4; 8.53, dd (J = 0.6, 1.4 Hz), 1H, H4’; 9.00, d (J = 4.7 Hz), 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 43.6, 4’’’-MeN; 49.5, C2’’’/6’’’; 54.7, C3’’’/5’’’; 103.0, C4”; 115.8, 116.5, 117.0, 117.4, C4’, C6”, C7’, C7”; 123.4, C6’; 124.5, q (1JCF = 266 Hz), 3-CF3; 125.2, C5’; 125.9, C5; 126.9, q (2JCF = 34 Hz), C3; 134.9, C7a”; 137.3, d (3JCF = 5 Hz), C4; 139.6, 140.6, C3a’, C3a”; 141.4, C7a’; 148.1, C2; 148.6, C5”; 152.0, C2’; 153.4, C2” and C6 (overlap). MS (ESI +ve) m/z 478 (MH+, 100%), 239.7 (MH2 2+, 60). HRMS (ESI +ve) m/z 478.19617, C25H23F3N7の理論質量:478.19615 (△= 0.04 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 190.0
PF = 30.5
DMFm = 1.99
DMF10 = 1.41
さらなる物質が、同じクロマトグラフィー条件を用いて混合フラクションを再カラム精製することによって得られた(50 mg, 合計収率43%)。
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 5滴のd-TFA) δ 2.67, s, 3H, 6-Me; 3.00, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.22, m (obs), NCH2; 3.32, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 11.6 Hz), 2H, NCH2; 3.94, d (J = 12.8 Hz), 2H, NCH2; 7.28, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4"; 7.36, dd (J = 2.4, 9.2 Hz), 1H, H6"; 7.49, d (J = 8.0 Hz), 1H, H5; 7.68, d (J = 9.2 Hz), 1H, H7"; 7.96, t (J = 7.8 Hz), 1H, H4; 8.00, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7'; 8.14, m, 2H, H3, H6'; 8.49, d (J = 1.2 Hz), 1H, H4'. 13C nmr (100 MHz, d4-MeOH + 3滴のHOAc) δ 24.4, 6-Me; 43.6, 4’’’-MeN; 49.3, C2’’’/6’’’; 54.7, C3’’’/5’’’; 102.6, C4”; 115.3, C4’; 116.3, 116.9, 117.1, C6”, C7’, C7”; 119.9, C3; 123.0, C6’; 123.9, C5’; 125.8, C5; 134.0, C7a”; 138.6, C4; 138.8, 140.5, C3a’, C3a”; 141.6, C7a’; 147.9, C2; 148.7, C5”; 152.9, 154.5, C2’, C2”; 160.1, C6. MS (ESI +ve) m/z 424 (MH+, 100%), 213 (MH2 2+, 45). HRMS (ESI +ve) m/z 424.22433, C25H26N7の理論質量:424.22442 (△= 0.2 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 73.3
PF = 2.5
DMFm= 1.22
DMF10 = 1.12
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 2.50, s, 3H, 5-Me; 3.00, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.21, t (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.34, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 11.5 Hz), 2H, NCH2; 3.97, d (J = 13.5 Hz), 2H, NCH2; 7.34, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4"; 7.43, dd (J = 2.5, 9.0 Hz), 1H, H6"; 7.75, d (J = 9.5 Hz), 1H, H7"; 7.97, m, 1H, H4; 8.06, d (J = 9.0 Hz), 1H, H7'; 8.20, dd (J = 1.5, 8.5 Hz), 1H, H6'; 8.30, d (J = 8.0 Hz), 1H, H3; 8.58, d (J =1.5 Hz), 1H, H4'; 8.73, m, 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 18.4, 5-Me; 43.6, 4’’’-MeN; 49.4, C2’’’/6’’’; 54.6, C3’’’/5’’’; 102.6, C4”; 114.9, C4’; 116.3, 116.7 (overlap), C6”, C7’, C7”; 122.3. 122.9, C3, C6’; 124.2, C5’; 134.4, C7a”; 136.6, C5; 138.6, C4; 139.1, 140.3, C3a’, C3a”; 141.4, C7a’; 145.9, C2; 148.5, C5”; 151.1, C6; 153.0, 154.3, C2’, C2”. MS (ESI +ve) m/z 424 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 424.22406, C25H26N7の理論質量:424.22442 (△= 0.8 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 58.4
PF = 26.2
DMFm = 2.52
DMF10 = 2.43
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 2.58, s, 3H, 4-Me; 3.01, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.21, m (obs), NCH2; 3.34, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.97, d (J = 12.4 Hz), 2H, NCH2; 7.34, d (J = 2.4 Hz), 1H, H4"; 7.43, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H6"; 7.58, d (J = 4.0 Hz), 1H, H5; 7.75, d (J = 9.2 Hz), 1H, H7"; 8.08, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7'; 8.20, dd (J = 1.6, 8.4 Hz), 1H, H6'; 8.29, s, 1H, H3; 8.60, d (J =1.6 Hz), 1H, H4'; 8.73, d (J = 4.8 Hz), 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 21.1, 4-Me*; 43.6, 4’’’-MeN; 49.3, C2’’’/6’’’; 54.6, C3’’’/5’’’; 102.4, C4”; 115.1, C4’; 116.3, C7”; 116.9 (overlap), C6”, C7’; 123.0, C6’; 123.5, C3; 123.9, C5’; 127.0, C5; 134.0, C7a”; 138.8, 140.3, 141.5, C3a’, C3a”, C7a’; 148.4, 148.6, C2, C5”; 150.1, C4; 150.5, C6; 152.8, 154.2, C2’, C2”. MS (ESI +ve) m/z 847 (M2H+, 8%), 424 (MH+, 100), 213 (MH2 2+, 14). HRMS (ESI +ve) m/z 424.22433, C25H26N7の理論質量:424.22442 (△= 0.2 ppm).
*HOAcによって隠されているシグナルは、gHSQC実験によって間接的に観測された。
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 130.5
PF = 183.8
DMFm = 2.55
DMF10 = 2.36
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.00, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.19, t (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.32, m (obs), NCH2; 3.67, d (J = 12.5 Hz), 2H, NCH2; 3.89, d (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 7.17, d (J = 1.5 Hz), 1H, H4"; 7.27, dd (J = 2.0, 9.0 Hz), 1H, H6"; 7.46, dd (J = 1.8, 5.3 Hz), 1H, H5; 7.58, d (J = 9.5 Hz), 1H, H7"; 7.78, d (J = 8.5 Hz), 1H, H7'; 7.86, dd (J = 1.5, 8.5 Hz), 1H, H6'; 8.17, d (J =1.5 Hz), 1H, H3 or H4'; 8.20, br s, 1H, H4' or H3; 8.56, d (J = 5.0 Hz), 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 44.0, 4’’’-MeN; 49.9, C2’’’/6’’’; 54.9, C3’’’/5’’’; 102.7, C4”; 114.9, C4’; 116.49, 116.55, 116.9, C6”, C7’, C7”; 122.5, 123.1, C3, C6’; 125.5, C5’; 125.7, C5; 135.5, C7a”; 139.8, 140.3, 141.3, C3a’, C3a”, C7a’; 146.0, C2 or C4; 148.5, C5”; 150.2, C4 or C2; 151.8, C6; 152.6, 153.2, C2’, C2”. MS (ESI +ve) m/z 444/446 (MH+, 100/35%), 223/224 (MH2 2+, 60/20). HRMS (ESI +ve) m/z 444.16977, C24H23ClN7の理論質量:444.16980 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 80.0
PF = 39.6
DMFm = 2.20
DMF10 = 2.12
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.00, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.08, br s, 4-MeN (minor); 3.14, br s, 4-MeN (major); 3.21, t (J = 12.6 Hz), 2H, NCH2; 3.34, m (obs), NCH2; 3.69, d (J = 12.4 Hz), 2H, NCH2; 3.97, d (J = 13.6 Hz), 2H, NCH2; 6.94, m, 1H, H5; 7.33, d (J = 2.4 Hz), 1H, H4”; 7.41, dd (J = 2.4, 9.2 Hz), 1H, H6”; 7.56, br s, 0.4H, H3 (minor); 7.64, br s, 0.6H, H3 (major); 7.73, d (J = 9.2 Hz), 1H, H7”; 8.00-8.26, m, 3H, H6, H6’, H7’; 8.58, br s, 1H, H4’. 13C nmr (100 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 29.7, 4-MeNH; 43.6, 4’’’-MeN; 49.4, C2'''/6'''; 54.7, C3'''/5'''; 102.7, C4"; 105.5, br, C3 or C5; 108.6, br, C5 or C3; 115.5, 116.5, 116.9, 117.5, C4', C6", C7', C7"; 123.6, C6'; 125.2, C5'; 134.8, C7a"; 139.4, 140.6, 141.7, 142.7, C2 or C4, C3a', C3a", C7a'; 143.4, C6; 148.6, C5"; 148.7, C4 or C2; 152.8, C2"; 159.5, C2'. MS (ESI +ve) m/z 877 (M2H+, 8%), 439 (MH+, 100), 220 (MH2 2+, 25). HRMS (ESI +ve) m/z 439.23526, C25H27N8の理論質量:439.23532 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 59.9
PF = 7.1
DMFm = 1.55
DMF10 = 1.14
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 5滴のd-TFA) δ 3.00, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.20, t (J = 12.4 Hz), 2H, NCH2; 3.38, br m (obs.), 4-Me2N and NCH2; 3.68, d (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.95, d (J = 13.2 Hz), 2H, NCH2; 7.07, dd (J = 3.0, 7.4 Hz), 1H, H5; 7.33, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4"; 7.41, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H6"; 7.73, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7"; 7.77, d (J = 2.8 Hz), 1H, H3; 8.02, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7'; 8.08, dd (J = 1.6, 8.8 Hz), 1H, H6'; 8.18, d (J =7.6 Hz), 1H, H6; 8.57, d (J = 0.8 Hz), 1H, H4'. 13C nmr (100 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 39.9, 4-Me2N; 43.6, 4’’’-MeN; 49.4, C2’’’/6’’’; 54.7, C3’’’/5’’’; 102.6, C4”; 105.5, 107.8, C3, C5; 115.1, C4’; 116.5, 116.8, 117.3, C6”, C7’, C7”; 123.3, C6’; 125.0, C5’; 134.9, C7a”; 139.4, 140.3, 141.4, 142.6, C2 or C4, C3a’, C3a”, C7a’; 143.9, C6; 148.5, C5”; 149.3, C4 or C2; 152.8, C2”; 157.6, C2’. MS (ESI +ve) m/z 453 (MH+, 100%), 227 (MH2 2+, 34). HRMS (ESI +ve) m/z 453.25107, C26H29N8の理論質量:453.25097 (△= 0.2 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 18.6
PF = 10.1
DMFm = 1.51
DMF10 = 1.39
さらなる物質を、n-ブタノール上清を蒸発させ、残渣をアセトニトリル(2 x 6 ml)で処理する(各処理において遠心分離し、上清を除去する)ことによって得た。減圧下で乾燥させた後、さらなる153 mgの純粋な物質が得られた(合計収率86%)。
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.00, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.21, t (J = 12.3 Hz), 2H, NCH2; 3.34, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 12.5 Hz), 2H, NCH2; 3.96, d (J = 11.5 Hz), 2H, NCH2; 4.17, s, 3H, 4-OMe; 7.34, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4"; 7.42, dd (J = 2.5, 9.0 Hz), 1H, H6"; 7.45, dd (J = 2.5, 6.5 Hz), 1H, H5; 7.74, d (J = 9.0 Hz), 1H, H7"; 8.07, d (J = 8.5 Hz), 1H, H7'; 8.13, d (J = 2.5 Hz), 1H, H3; 8.15, dd (J = 2.0, 8.5 Hz), 1H, H6'; 8.61, d (J =1.0 Hz), 1H, H4'; 8.69, d (J = 6.5 Hz), 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 43.6, 4’’’-MeN; 49.4, C2’’’/6’’’; 54.6, C3’’’/5’’’; 56.1, 4-OMe; 102.5, C4”; 108.5, 112.4, C3, C5; 115.1, C4’; 116.3, 116.8 (overlap), C6”, C7’, C7”; 123.0, C6’; 124.3, C5’; 134.4, C7a”; 139.0, 140.3, 141.4, C3a’, C3a”, C7a’; 148.5, C5”; 150.1, C2; 151.9, C6; 152.9, 154.0, C2’, C2”; 168.0, C4. MS (ESI +ve) m/z 879 (M2H+, 10%), 440 (MH+, 100), 221 (MH2 2+, 7). HRMS (ESI +ve) m/z 440.21918, C25H26N7Oの理論質量:440.21933 (△= 0.3 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 53.6
PF = 51.4
DMFm = 2.28
DMF10 = 1.95
(A) エチル ピラジン-2-カルボイミダート塩酸塩の調製
1H nmr (400 MHz, d6-dmso) δ 1.49, t (J = 7.0 Hz), 3H, OEt; 4.73, q (J = 6.9 Hz), 2H, OEt; 7.85, br, 1H, C=NH2 +; 8.24, br, 1H, C=NH2 +; 8.93, dd (J = 1.6, 2.4 Hz), 1H, H6; 9.06, d (J = 2.4 Hz), 1H, H5; 9.33, d (J = 1.2 Hz), 1H, H3.
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.01, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.20, t (J = 13.0 Hz), 2H, NCH2; 3.35, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.97, d (J = 13.6 Hz), 2H, NCH2; 7.32, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4"; 7.41, dd (J = 2.4, 9.2 Hz), 1H, H6"; 7.73, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7"; 8.01, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7'; 8.09, dd (J = 1.6, 8.4 Hz), 1H, H6'; 8.53, d (J = 1.6 Hz), 1H, H4'; 8.79, d (J = 2.8 Hz), 1H, H5; 8.84, dd (J = 1.6, 2.4 Hz), 1H, H6; 9.55, d (J = 1.2 Hz), 1H, H3. 13C nmr (100 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 43.6, 4’’’-MeN; 49.2, C2’’’/6’’’; 54.6, C3’’’/5’’’; 102.4, C4”; 115.2, C4’; 116.3, 116.7, 117.1, C6”, C7’, C7”; 123.2, C6’; 124.5, C5’; 134.3, C7a”; 138.9, 140.4, C3a’, C3a”; 141.4, C7a’; 143.7, C3, C5 or C6; 144.7, C2; 145.6, 146.1, C3, C5 or C6; 148.4, C5”; 151.5, 152.5, C2’, C2”. MS (ESI +ve) m/z 411 (MH+, 100%), 206 (MH2 +, 15). HRMS (ESI +ve) m/z 411.20373, C23H23N8の理論質量:411.20402 (△= 0.7 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 54.2
PF = 6.5
DMFm = 1.29
DMF10 = 1.15
さらなる物質を、メタノールの上清をシリカゲルの短いプラグ(45 x 30 mm)に担持させ、メタノールで溶出させることによってさらに87 mg得た(合計収率78%)。
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.01, s, 3H, 4'''-MeN; 3.20, t (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.35, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.94, d (J = 13.0 Hz), 2H, NCH2; 7.25, d (J = 1.5 Hz), 1H, H4"; 7.36, dd (J = 2.0, 9.5 Hz), 1H, H6"; 7.67, m, 2H, H6 or H7, H7"; 7.85, t (J = 7.5 Hz), 1H, H7 or H6; 7.97, d (J = 9.0 Hz), 1H, H5 or H8; 8.03, d (J = 8.5 Hz), 1H, H7'; 8.10, br d (J = 8.5 Hz), 1H, H6'; 8.22, d (J = 8.5 Hz), 1H, H8 or H5; 8.38, d (J = 8.5 Hz), 1H, H3 or H4; 8.49, s, 1H, H4'; 8.54, d (J = 8.5 Hz), 1H, H4 or H3. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 43.6, 4’’’-MeN; 49.1, C2’’’/6’’’; 54.6, C3’’’/5’’’; 102.0, C4”; 115.1, 116.0, 116.6, 116.8, C4’, C6”, C7’, C7”; 119.6, C3; 122.8, C6’; 123.4, C5’; 128.3, 128.8, C5, C6, C7 or C8; 129.5, C4a; 130.2, 131.0, C5, C6, C7 or C8; 133.5, C7a”; 138.0, C4; 138.3, 140.2, 141.4, C3a’, C3a”, C7a’; 148.1, 148.4, 148.6, C2, C5”, C8a; 152.2, 153.8, C2’, C2”. MS (ESI +ve) m/z 460 (MH+, 100). HRMS (ESI +ve) m/z 460.22437, C28H26N7の理論質量:460.22442 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 14.0
PF = 11.0
DMFm = 1.66
DMF10 = 1.65
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.01, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.20, t (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.34, m (obs), NCH2; 3.69, d (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.96, d (J = 13.6 Hz), 2H, NCH2; 7.31, d (J = 1.6 Hz), 1H, H4"; 7.41, dd (J = 2.0, 9.2 Hz), 1H, H6"; 7.73, d (J = 9.2 Hz), 1H, H7"; 7.88, app. t (J = 7.0 Hz), 1H, H6 or H7; 7.95, app. t (J = 7.0 Hz), 1H, H7 or H6; 8.10, d (J = 8.4 Hz), 1H, H7'; 8.15, d (J = 8.0 Hz), 1H, H5 or H8; 8.22, m, 2H, H6' and H8 or H5; 8.59, br s, 1H, H4'; 8.85, s, 1H, H1 or H4; 9.50, s, 1H, H4 or H1. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 43.6, 4’’’-MeN; 49.0, C2’’’/6’’’; 54.5, C3’’’/5’’’; 101.8, C4”; 114.4, C4’; 115.9, 116.6 (重複), C6”, C7’, C7”; 119.6, C4; 122.5, C6’; 122.7, C5’; 128.3, 128.6, 129.4, C5, C7, C8; 129.9, C8a; 132.0, C6; 133.1, C7a”; 136.7, 138.0, 139.6, 141.5 (overlap), C3, C3a’, C3a”, C4a, C7a’; 148.5, C5”; 152.1, C2’ or C2”; C2; 153.4, C6; 154.2, C2” or C2’. MS (ESI +ve) m/z 919 (M2H+, 3%), 460 (MH+, 100), 231 (MH2 2+, 45). HRMS (ESI +ve) m/z 460.22436, C28H26N7の理論質量:460.22442 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 26.0
PF = 25.1
DMFm = 2.45
DMF10 = 2.34
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.01, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.19, t (J = 11.9 Hz), 2H, NCH2; 3.33, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.94, d (J = 13.0 Hz), 2H, NCH2; 7.25, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4"; 7.36, dd (J = 2.0, 9.0 Hz), 1H, H6"; 7.67, d (J = 9.0 Hz), 1H, H7"; 7.85, m, 2H, H6, H7; 7.97-8.06, m, 4H, H4, H5, H6', H7'; 8.50, d (J = 1.0 Hz), 1H, H4'; 8.70, d (J = 5.0 Hz), 1H, H3; 9.53, dd (J = 1.0, 8.5 Hz), 1H, H8. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 5滴のHOAc) δ 43.5, 4’’’-MeN; 49.1, C2’’’/6’’’; 54.5, C3’’’/5’’’; 102.1, C4”; 115.6, 116.1, 116.8, 117.0, C4’, C6”, C7’, C7”; 122.8, C4 or C6’; 123.3, C5’; 123.7, C6’ or C4; 127.6, C8a; 128.1, 128.7, 129.5, 131.6, C5, C6, C7, C8; 133.4, C7a”; 138.29, 138.34, 140.5, 141.5, C3a’, C3a”, C4a, C7a’; 142.7, C3; 147.6, 148.5, C1, C5”; 152.6, 154.3, C2’, C2”. MS (ESI +ve) m/z 919 (M2H+, 7%), 460 (MH+, 100). HRMS (ESI +ve) m/z 460.22445, C28H26N7の理論質量:460.22442 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 26.9
PF = 36.9
DMFm = 1.85
DMF10 = 1.70
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.00, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.20, m (obs), NCH2; 3.32, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.94, d (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 7.29, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4”; 7.38, dd (J = 2.5, 9.0 Hz), 1H, H6”; 7.45, m, 1H, H5 or H6; 7.54, m, 1H, H6 or H5; 7.70, m, 2H, H7, H7”; 8.03, d (J = 8.5 Hz), 1H, H7’; 8.16, dd (J = 2.0, 8.5 Hz), 1H, H6’; 8.40, d (J = 8.5 Hz), 1H, H4; 8.53, d (J = 1.5 Hz), 1H, H4’. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 5滴のHOAc) δ 43.5, 4’’’-MeN; 48.9, C2’’’/6’’’; 54.4, C3'''/5'''; 101.7, C4"; 111.5, C7; 114.6, 115.8, 116.6, 117.0, C4', C6", C7', C7"; 122.0, 122.2, C3a, C5'; 122.4, 122.5, 123.2, C4, C5, C6'; 128.1, C6; 132.5, 136.4, 137.6, 140.0, 142.0, 142.9, C3, C3a', C3a", C7a, C7a', C7a"; 148.7, C5"; 150.7, 152.2, C2', C2". MS (ESI +ve) m/z 449 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 449.21947, C26H25N8の理論質量:449.21967 (△= 0.4 ppm).
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.00, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.20, m (obs), NCH2; 3.32, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 11.5 Hz), 2H, NCH2; 3.94, d (J = 13.5 Hz), 2H, NCH2; 4.58, s, 3H, 1-Me; 7.29, d (J = 2.5 Hz), 1H, H4"; 7.33, ddd (J = 1.0, 6.5, 8.5 Hz), 1H, H5 or H6; 7.38, dd (J = 2.5, 9.0 Hz), 1H, H6"; 7.42, ddd (J = 1.0, 7.0, 8.5 Hz), 1H, H6 or H5; 7.70, d (J = 9.0 Hz), 1H, H7"; 7.73, m, 1H, H7; 7.99, d (J = 8.5 Hz), 1H, H7'; 8.02, m, 1H, H4; 8.04, dd (J = 1.5, 8.5 Hz), 1H, H6'; 8.49, d (J = 1.5 Hz), 1H, H4'. MS (ESI +ve) m/z 925 (M2H+, 6%), 463 (MH+, 100). HRMS (ESI +ve) m/z 463.23511, C27H27N8の理論質量:463.23587 (△= 1.6 ppm).
実施例16の細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 40.9
PF = 18.3
DMFm = 2.16
DMF10 = 1.78
実施例17の細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 76.5
PF = 10.9
DMFm = 1.68
DMF10 = 1.27
さらなる物質が、メタノール濾液からの物質とアセトニトリルとを混合し、アルミナのカラムクロマトグラフィー(塩基性, act. I, 22 x 170 mm)にかけ、1:1の酢酸エチル/メタノール、メタノール、最後に5:1のメタノール/酢酸を用いて溶出させることによって得られた。適切なフラクション(TLC)を、濃縮し、その物質を0.8 Mの重炭酸ナトリウム溶液(12 ml)で処理し、n-ブタノール(3 x 5 ml)で抽出した。このn-ブタノール抽出液を、水で洗浄し(2 x 10 ml)、蒸発させて、さらなる36 mgの黄色粉末を得た(合計収率47%)。
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 5滴のd-TFA) δ 3.00, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.21, t (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.32, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.97, d (J = 13.5 Hz), 2H, NCH2; 6.75, dd (J = 6.5, 7.5 Hz), 1H, H5; 7.35, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4"; 7.44, dd (J = 1.8, 9.3 Hz), 1H, H6"; 7.76, d (J = 9.0 Hz), 1H, H7"; 7.96, dd (J = 2.0, 6.5 Hz), 1H, H4; 8.14, dd (J = 0.8, 8.8 Hz), 1H, H7'; 8.24, dd (J = 1.8, 8.8 Hz), 1H, H6'; 8.60, dd (J = 0.8, 1.8 Hz), 1H, H4'; 8.71, dd (J = 2.0, 7.5 Hz), 1H, H6. 13C nmr (100 MHz, d4-MeOH + 5滴のHOAc) δ 43.6, 4’’’-MeN; 49.2, C2’’’/6’’’; 54.6, C3’’’/5’’’; 102.3, C4”; 108.5, C5; 114.6, C4’; 116.1, 116.6, 116.9, C6”, C7’, C7”; 118.8, C3; 122.7, C6’; 123.1, C5’; 133.4, C7a”; 138.4, C3a’, C3a” or C7a’; 138.7, C4; 139.0, 140.6, C3a’, C3a” or C7a’; 142.4, C6; 148.6, C5”; 151.8, 152.7, C2’, C2”; 162.9, C2. MS (ESI +ve) m/z 426 (MH+, 100%), 214 (MH2 2+, 79). HRMS (ESI +ve) m/z 426.20367, C24H24N7Oの理論質量:426.20368 (△= 0.0 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 66.8
PF = 1.1
DMFm = 1.01
DMF10 = 1.00
(A) 5-モルホリノ-2-ニトロアニリンの調製
1H nmr (500 MHz, CDCl3) δ 3.31, m, 4H, 2 x CH2N; 3.82, m, 4H, 2 x CH2O; 5.95, d (J = 2.7 Hz), 1H, H6; 6.16, br, 2H, NH2; 6.27, dd (J = 9.5, 2.7 Hz), 1H, H4; 8.03, d (J = 9.8 Hz), 1H, H3. 13C nmr (125 MHz, CDCl3) δ 47.3, 2 x CH2N; 66.6, 2 x CH2O; 98.7, 105.6, C4, C6; 125.4, C2; 128.5, C3; 147.2, 155.9, C1, C5.
5-モルホリノ-2-ニトロアニリン(0.50 g, 2.2 mmol)の4:1 酢酸エチル/メタノール(25 ml)中の溶液に、5%の活性炭担持パラジウム(0.11 g)を添加し、この反応混合物を、水素雰囲気下で一晩撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過し、濾過された固体をメタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗液を減圧下で濃縮して、粗2-アミノ-4-モルホリノアニリンを得た。この粗生成物を、即座に次の工程に用いた。
2-アミノ-4-モルホリノアニリン(上記(i)で調製したもの)を、エタノール(10 ml)および氷酢酸(5 ml)に溶解し、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (0.58 g, 2.4 mmol)で処理した後、混合物を窒素下で16時間還流させた。冷却し、減圧下で濃縮した後、残渣を水に溶解させ、激しく撹拌しながら濃アンモニア水を用いて塩基性(pH 12)にした。形成された赤い沈殿物を濾過により集め、水で洗浄した後、減圧下で乾燥させて、4-(5’-モルホリノベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリン (0.67 g, 88%)を得た。mp 265〜267℃。
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.34, m (obs), 2 x CH2N; 3.91, m, 4H, 2 x CH2O; 7.25, d ( J = 9.0 Hz), 1H, H6; 7.28, d (J = 1.5 Hz), 1H, H4’; 7.41, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H6’; 7.66, d (J = 9.0 Hz), 1H, H7’; 7.99, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H5; 8.95, d (J = 2.0Hz), 1H, H3. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 50.9, 2 x CH2N; 67.8, 2 x CH2O; 99.1, C4’; 110.6, C4; 114.9, 118.2, C6’, C7’; 121.8, C6; 126.7, C2, C3a’ or C7a’; 127.7, C3; 132.4, C2, C3a’ or C7a’; 133.4, C5; 134.2, C2, C3a’ or C7a’; 148.6, 150.1, 152.3, C1, C2’ and C5’. MS (ESI +ve) m/z 340 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 340.14047, C17H18N5O3の理論質量:340.14042 (△= 0.1 ppm).
4-(5’-モルホリノベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリン(0.25 g, 0.74 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(17.5 ml)中の溶液に、5%の活性炭担持パラジウム(70 mg)を添加し、この反応混合物を、水素雰囲気下で一晩撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過し、濾過された固体をメタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗浄液を減圧下で濃縮して粗2-アミノ-4-(5’-モルホリノベンズイミダゾール-2’-イル)アニリンを得た。これを即座に次の工程に用いた。
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.32, m (obs), H3”/5”; 3.90, m, 4H, H2”/6”; 7.13, d (J = 8.8 Hz), 1H, H6; 7.27, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4’; 7.37, dd (J = 2.4, 9.2 Hz), 1H, H6’; 7.65, d (J = 9.2 Hz), 1H, H7’; 7.81, dd (J = 2.4, 8.8 Hz), 1H, H5; 7.89, d (J = 2.4 Hz), 1H, H3.
粗2-アミノ-4-(5’-モルホリノベンズイミダゾール-2’-イル)アニリン(180 mg, 0.58 mmol、上記(i)で調製したもの)のエタノール(10 ml)の溶液に、2-ピリジンカルボキシアルデヒド(79 mg, 0.74 mmol, 1.25 eq)のエタノール(3 ml)中の溶液を添加し、この混合物を、窒素下で穏やかに10分還流させた。冷却後、メタ重亜硫酸ナトリウム(113 mg, 0.59 mmol)の水(1 ml)中の溶液を添加し、窒素下で、還流を20時間継続させた。次いで、反応混合物を冷却し、ロータリーエバポレーターで溶媒を除去した。この油状の茶色半固体を、希アンモニア溶液(2.7 M, 10 ml)で処理し、20分間撹拌した。得られた懸濁液を、遠心分離し、上清を除去し、残渣を希アンモニア(2.7 M, 10 ml)で再び処理し、遠心分離し、上清を除去した。得られた暗赤色固体(乾燥後221 mg)を、メタノール (2 ml)に溶解し、シリカゲルのプラグ(30 x 75 mm)に担持させ、酢酸エチル(3 x 50 ml)、次いで5、10、および20%の酢酸エチル中のメタノールで溶出させて、2-(5’-(5”-モルホリノベンズイミダゾール-2”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)ピリジンを、明るい黄褐色粉末として得た(95 mg, 41%)。mp 206〜209℃。
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 5滴のd-TFA) δ 3.31, m (obs), H3’’’/5’’’; 3.90, m, 4H, H2’’’/6’’’; 7.26, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4"; 7.41, dd (J = 2.4, 9.2 Hz), 1H, H6"; 7.70, m, 2H, H5, H7"; 8.08, dd (J = 0.8, 8.8 Hz), 1H, H7'; 8.15, dt (J = 1.2, 8.0 Hz), 1H, H4; 8.19, dd (J =1.8, 8.6 Hz), 1H, H6'; 8.41, br d (J = 8.0 Hz), 1H, H3; 8.57, br d (J = 1.2 Hz), 1H, H4'; 8.89, br d (J = 4.4 Hz), 1H, H6. 13C nmr (100 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 51.7, C3’’’/5’’’; 67.9, C2’’’/6’’’; 100.6, C4”; 115.4, 116.0, 116.5, 116.9, C4’, C6”, C7’, C7”; 122.8, 122.9, C3 and C6’; 123.2, C5’; 126.2, C5; 132.5, C7a”; 137.9, C3a’, C3a” or C7a’; 138.4, C4; 140.6, 141.6, C3a’, C3a” or C7a’; 148.6, 150.6, C2, C5” and C2’ or C2”; 150.9, C6; 151.9, C2, C5” and C2’ or C2”; 154.4, C2” or C2’. MS (ESI +ve) m/z 397 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 397.17719, C23H21N6Oの理論質量:397.17714 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 149.9
PF = 69.6
DMFm = 2.26
DMF10 = 1.66
1H NMR (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.16, m, 4H, H3’’’/5’’’; 3.83, m, 4H, H2’’’/6’’’; 6.96, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4’’; 7.18, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H6’’; 7.49, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7''; 7.65, t (J = 7.6 Hz), 1H, H6 or H7; 7.76, t (J = 7.6 Hz), 1H, H7 or H6; 7.85, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7', 7.90, dd (J = 1.8. 8.6 Hz), 1H, H6'; 7.95, d (J = 8.4 Hz), 1H, H5 or H8; 7.97, d (J = 8.0Hz), 1H, H8 or H5; 8.19, m, 1H, H4'; 8.52, s, 1H, H1 or H4; 9.24, s, 1H, H4 or H1. 13C NMR (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 51.4, C3’’’/5’’’; 67.9, C2’’’/6’’’; 100.1, C4’’; 114.4, C4’; 115.7, 116.0, 116.6, C6”, C7’, C7’’; 119.5, C4; 122.1, C5’; 122.2, C6’; 128.3, 128.6, 129.4, C5, C7, C8; 129.9, C8a; 132.0 (overlap), C6, C7a’’; 136.7, 137.4, 139.7, 141.4 (overlap), C3, C3a’, C3a’’, C4a, C7a’; 150.2, C5’’; 151.2, C2’ or C2’’; 153.4, C1; 154.3, C2’’ or C2’. MS (ESI +ve) m/z 447 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 447.19276, C27H23N6Oの理論質量:447.19279 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 171.9
PF = 11.4
DMFm = 1.57
DMF10 = 1.52
さらなる物質を、アセトニトリル可溶性物質のカラムクロマトグラフィーによってさらに51 mg得た(合計収率73%)。
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 2.58, s, 3H, 4-Me; 3.30, m (obs), H3'''/5'''; 3.90, m, 4H, H2'''/6'''; 7.24, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4"; 7.41, dd (J = 2.5, 9.0 Hz), 1H, H6"; 7.57, br d (J = 5.0 Hz), 1H, H5; 7.70, d (J = 9.0 Hz), 1H, H7"; 8.06, d (J = 8.5 Hz), 1H, H7'; 8.16, dd (J = 1.8, 8.8 Hz), 1H, H6'; 8.27, br s, 1H, H3; 8.55, d (J = 1.5 Hz), 1H, H4'; 8.72, d (J = 5.5 Hz), 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 21.1, 4-Me; 51.3, C3’’’/5’’’; 67.8, C2’’’/6’’’; 100.1, C4”; 115.1, 115.7, 116.3, 116.9, C4’, C6”, C7’, C7”; 122.0, C5’; 122.6, 123.4, C3, C6’; 126.9, C5; 131.5, C7a”; 137.2, 140.1, 141.6, C3a’, C3a”, C7a’; 150.0, C2”, C4 or C5”; 150.4, C6; 150.5, 151.2, C2”, C4 or C5”; 154.3, C2’. MS (ESI +ve) m/z 821 (M2H+, 8%), 411 (MH+, 100). HRMS (ESI +ve) m/z 411.19274, C24H23N6Oの理論質量:411.19279 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 213.4
PF = 18.2
DMFm = 1.77
DMF10 = 1.47
(A) 5-(4’-ヒドロキシピペリジン-1’-イル)-2-ニトロアニリンの調製
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH) δ 1.53, m, 2H, H3’/H5’; 1.91, m, 2H, H3’/5’; 3.12, m, 2H, H2’/6’; 3.78, m, 2H, H2’/6’; 3.84, m, 1H, H4’; 6.17, d (J = 2.5 Hz), 1H, H6; 6.35, dd (J = 2.3, 9.5 Hz), 1H, H4; 7.89, d (J = 9.5 Hz), 1H, H3.
5-(4’-ヒドロキシピペリジン-1’-イル)-2-ニトロアニリン(0.37 g, 1.6 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(20 ml)中の溶液に、5%の活性炭担持パラジウム(0.15 g)を添加し、混合物を、水素雰囲気下、室温で撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過し、濾過された固体をメタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗浄液を蒸発させて、粗2-アミノ-4-(4’-ヒドロキシピペリジン-1’-イル)アニリンを暗色のガラス状固体(300 mg, 93%)として得た。この固体を、さらに精製することなく次の工程に用いた。
粗2-アミノ-4-(4’-ヒドロキシピペリジン-1’-イル)アニリン(300 mg, 1.45 mmol, 上記(i)で調製したもの)を、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (376 mg, 1.53 mmol)、次いで無水エタノール(10 ml)および氷酢酸(5 ml)で処理した。この反応混合物を、窒素下で17時間還流させた。次いで、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターによって除去した。残渣を、アンモニア水(2.7 M, 20 ml)とn-ブタノール(20 ml)との間で分配させ、ブタノール抽出液を水で洗浄(3 x 20 ml)し、蒸発させて、赤色オイルを得た。この物質を、エタノール(10 ml)で処理し、一晩静置すると、微細な赤色沈殿物が得られた。これを集め、乾燥させて、4-(5’-(4”-ヒドロキシピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリンを、赤色粉末として得た(349 mg, 68%)。mp 206〜209℃。
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 2.02, m, 2H, H3”/5”; 2.24, m, 2H, H3"/5"; 3.61, m, 2H, H2"/6"; 3.91, m, 2H, H2"/6"; 4.09, tt (J = 3.8, 7.6 Hz), 1H, H4"; 7.25, d (J = 8.8 Hz), 1H, H6; 7.78, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H6'; 7.89, d (J = 9.2 Hz), 1H, H7'; 7.99, d (J = 1.6 Hz), 1H, H4'; 8.04, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H5; 9.02, d (J = 2.4 Hz), 1H, H3. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 12滴のHOAc) δ 34.5, C3”/5”; 50.3, C2”/6”; 67.5, C4”; 102.1, C4’; 114.5, C4; 115.5, 117.8, 121.1, 126.2, C3, C6, C6’, C7’; 131.4, 132.1, C2, C3a’ or C7a’; 133.7, C5; 137.1, C2, C3a’ or C7a’; 149.0, 149.2, 150.2, C1, C2’, C5’. MS (ESI +ve) m/z 707 (M2H+, 55%), 354 (MH+, 100). HRMS (ESI +ve) m/z 354.15608, C18H20N5O3の理論質量:354.15607 (△= 0.0 ppm).
4-(5’-(4”-ヒドロキシピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリン(206 mg, 0.58 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(20 ml)中の懸濁液に、5%の活性炭担持パラジウム(50 mg)を添加し、反応混合物を、水素雰囲気下で20時間激しく撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過し、濾過された固体をメタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗液を蒸発させて、2-アミノ-4-(5’-(4”-ヒドロキシピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリンを、淡橙色固体として得た。これを即座に次の工程に用いた。
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 2.04, m, 2H, H3”/5”; 2.28, m, 2H, H3”/5”; 3.65, m, 2H, H2”/6”; 3.91, m, 2H, H2”/6”; 4.10, m, 1H, H4”; 7.11, d (J = 8.8 Hz), 1H, H6; 7.82, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H6’; 7.90, m, 2H, H5, H7’; 8.00, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4’; 8.10, d (J = 1.6 Hz), 1H, H3.
2-シアノピリジン(87 mg, 0.84 mmol)に、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液(0.087 M, 1.0 ml, 0.087 mmol)を添加し、溶液を、窒素下、40℃の油浴中で90分間加熱した。次いで、粗2-アミノ-4-(5’-(4”-ヒドロキシピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリン(0.58 mmol, 上記(i)で調製したもの)の、無水メタノール(7 ml)中の溶液、次いで氷酢酸 (0.1 ml, 1.75 mmol)を添加し、混合物を、窒素下で23時間穏やかに還流させた。冷却後、溶媒をロータリーエバポレーターによって除去し、希アンモニア溶液(2.7 M, 15 ml)で処理した。この混合物を40分間撹拌して、均一な懸濁液を得、この懸濁液を遠心分離し、上清を除去した。残渣を、さらなる希アンモニア溶液(2.7 M, 5 ml)、次いでアセトニトリル(2 x 5 ml)で処理した(各処理において遠心分離し、上清を除去した)。残った固体を減圧下で乾燥させて、2-(5’-(5”-(4’’’-ヒドロキシピペリジン-1’’’-イル)ベンズイミダゾール-2”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)ピリジンを、黄色粉末として得た(169 mg, 71%)。mp 226〜229℃。
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 2.02, m, 2H, H3’’’/H5’’’; 2.25, m, 2H, H3’’’/5’’’; 3.62, m, 2H, H2’’’/6’''; 3.92, m, 2H, H2'''/6'''; 4.10, tt (J = 3.6, 7.2 Hz), 1H, H4'''; 7.70, ddd (J = 1.0, 4.8, 7.8 Hz), 1H, H5; 7.75, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H6"; 7.93, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7"; 8.01, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4"; 8.07, dd (J = 0.8, 8.8 Hz), 1H, H7'; 8.15, dt (J = 1.6, 8.0 Hz), 1H, H4; 8.27, dd (J = 1.6, 8.8 Hz), 1H, H6'; 8.41, br d (J = 8.0 Hz), 1H, H3; 8.64, d (J = 1.2 Hz), 1H, H4'; 8.89, m, 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 34.8, C3’’’/5’’’; 49.9, C2’’’/6’’’; 68.0, C4’’’; 101.3, C4”; 115.3, 115.6, 116.9, 117.6, C4’, C6”, C7’, C7”; 122.1, C5’; 122.8 (overlap), C3, C6’; 126.1, C5; 131.4, C7a”; 137.2, C3a”; 138.3, C4; 140.3, C3a’; 141.6, C7a’; 148.4, C2; 150.1, C5”; 150.7, C6; 151.3, 154.3, C2’, C2”. MS (ESI +ve) m/z 821 (M2H+, 6%), 411 (MH+, 100). HRMS (ESI +ve) m/z 411.19275, C24H23N6Oの理論質量:411.19279 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 266.0
PF = 21.3
DMFm = 2.20
DMF10 = 1.47
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 2.01, m, 2H, H3’’’/H5’’’; 2.24, m, 2H, H3’’’/5’’’; 3.61, m, 2H, H2’’’/6’’’; 3.91, m, 2H, H2’’’/6’’’; 4.09, m, 1H, H4'''; 7.71, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H6"; 7.87, ddd (J = 1.2, 7.6, 8.0 Hz), 1H, H6 or H7; 7.89, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7"; 7.94, m, 1H, H7 or H6; 7.96, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4"; 8.08, dd (J = 0.6, 8.6 Hz), 1H, H7'; 8.15, d (J = 7.6 Hz), 1H, H5 or H8; 8.22, d (J = 8.0 Hz), 1H, H8 or H5; 8.27, dd (J = 1.6, 8.8 Hz), 1H, H6'; 8.61, dd (J = 0.4, 1.6 Hz), 1H, H4'; 8.83, s, 1H, H1 or H4; 9.49, s, 1H, H4 or H1. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 34.9, C3’’’/5’’’; 49.4, C2’’’/6’’’; 68.0, C4’’’; 100.5, C4”; 114.4, 115.2, 116.7, 117.4, C4’, C6”, C7’, C7”; 119.6, C4; 120.6, C5’; 122.1, C6’; 128.2, 128.5, 129.3, C5, C7, C8; 129.8, 130.1, C7a”, C8a; 131.9, C6; 136.3, 136.5, 139.5, 141.1, 141.6, C3, C3a’, C3a”, C4a, C7a’; 150.2, 150.3, C2’ or C2”, C5”; 153.2, C1; 154.3, C2” or C2’. MS (ESI +ve) m/z 461 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 461.20849, C28H25N6Oの理論質量:461.20844 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 588.6
PF = 36.5
DMFm = 2.26
DMF10 = 2.13
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 1.84, m, 2H, H4’’’; 2.09, m, 4H, H3’’’/5’’’; 3.74, m, 4H, H2’’’/6’’’; 7.68, ddd (J = 1.0, 4.8, 7.8 Hz), 1H, H5; 7.80, dd (J = 2.3, 8.8 Hz), 1H, H6"; 7.96, d (J = 9.0 Hz), 1H, H7"; 8.06, d (J = 8.5 Hz), 1H, H7'; 8.13, m, 2H, H4, H4"; 8.28, dd (J = 1.5, 8.5 Hz), 1H, H6'; 8.40, d (J = 8.0 Hz), 1H, H3; 8.64, d (J = 1.0 Hz), 1H, H4'; 8.88, br d (J = 4.0 Hz), 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 24.7, C4’’’; 26.7, C3’’’/5’’’; 53.8, C2’’’/6’’’; 102.2, C4”; 115.3, 115.7, 116.9, 117.6, C4’, C6”, C7’, C7”; 122.7, C5’; 122.77, 122.84, C3, C6’; 126.1, C5; 132.5, C7a”; 137.8, C3a’ or C3a”; 138.3, C4; 140.4, C3a” or C3a’; 141.7, C7a’; 148.5, C2; 149.8, C5”; 150.8, C6; 151.9, C2’ or C2”; 154.3, C2” or C2’. MS (ESI +ve) m/z 789 (M2H+, 20%), 395 (MH+, 100). HRMS (ESI +ve) m/z 395.19784, C24H23N6の理論質量:395.19787 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 24.0
PF = 7.5
DMFm = 1.42
DMF10 = 1.35
(A) 5-(4’-メチル-1’,4’-ジアゼパン-1’-イル)-2-ニトロアニリンの調製
1H nmr(9) (400 MHz, CDCl3) δ 2.01, m, 2H, H6’; 2.39, s, 3H, 4’-MeN; 2.57, m, 2H, NCH2; 2.70, m, 2H, NCH2; 3.53, m, 2H, NCH2; 3.60, m, 2H, NCH2; 5.76, d (J = 2.4 Hz), 1H, H6; 6.13, m, 3H, 1-NH2, H4; 8.00, d (J = 10.0 Hz), 1H, H3.
5-(4’-メチル-1’,4’-ジアゼパン-1’-イル)-2-ニトロアニリン(0.415 g, 1.66 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(40 ml)中の溶液に、5%の活性炭担持パラジウム(142 mg)を添加し、混合物を、水素雰囲気下、室温で一晩撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過し、濾過された固体をメタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗液を蒸発させて、粗2-アミノ-4-(4’-メチル-1’,4’-ジアゼパン-1’-イル)アニリンを、暗赤色物質として得た。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
粗2-アミノ-4-(4’-メチル-1’,4’-ジアゼパン-1’-イル)アニリン(1.66 mmol, 上記(i)で調製したもの)を、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (449 mg, 1.83 mmol)、次いで、無水エタノール(20 ml)および氷酢酸(10 ml)で処理した。反応混合物を、窒素下で48時間穏やかに撹拌した後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターによって除去した。残渣を水(55 ml、濃アンモニア溶液を用いて(pH 12)に塩基性にしたもの)に溶解させ、30分間0℃にて激しく撹拌して、均一な黒い溶液を得た。この物質を、メタノールで溶出させるカラムクロマトグラフィー(シリカゲル)にかけて、4-(5’-(4”-メチル-1”,4”-ジアゼパン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリンを、暗赤色粉末として得た(262 mg, 43%)。mp 237〜238℃。
1H nmr (500 MHz, d6-dmso) δ 1.91, m, 2H, H6"; 2.25, s, 3H, 4"-MeN; 2.44, m, 2H, NCH2; 2.63, m, 2H, NCH2; 3.45, m, 2H, NCH2; 3.52, m, 2H, NCH2; 6.66, m, 2H, H4', H6'; 7.11, d (J = 8.8 Hz), 1H, H6 or H7'; 7.33, d (J = 9.2 Hz), 1H, H7' or H6; 7.72, br, 2H, 1-NH2; 8.12, dd (J = 2.0, 9.2 Hz), 1H, H5; 8.70, d (J = 2.0 Hz), 1H, H3. MS (ESI +ve) m/z 367 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 367.18771, C19H23N6O2 の理論質量:367.18770 (△= 0 ppm).
4-(5’-(4”-メチル-1”,4”-ジアゼパン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリン (209 mg, 0.57 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(25 ml)中の溶液に、5%の活性炭担持パラジウム(71 mg)を添加し、混合物を、水素雰囲気下、室温で22時間撹拌した。この反応混合物を、セライトを通してろ過し、メタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗液を蒸発させて、粗2-アミノ-4-(5’-(4”-メチル-1”,4”-ジアゼパン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリンを、暗赤色物固体として得た。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
2-シアノピリジン(90 mg, 0.864 mmol)に、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液(0.09 M, 1.0 ml, 0.09 mmol)を添加し、溶液を、窒素下、50℃で1.5時間加熱した。次いで、粗2-アミノ-4-(5’-(4”-メチル-1”,4”-ジアゼパン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリン (0.57 mmol, 上記(i)で調製したもの)の、無水メタノール(15 ml)および酢酸(0.105 ml)中の溶液を添加し、暗褐色溶液を、窒素下で20時間還流させた。反応液を室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去し、残渣をアンモニア溶液(10 ml)で処理した後、n-ブタノールで抽出した。抽出液を塩水(20 ml)で洗浄し、蒸発させて、ガラス状物質を得た。この物質をメタノールから再結晶させて、2-(5’-(5”-(4’’’-メチル-1’’’,4’’’-ジアゼパン-1’’’-イル)ベンズイミダゾール-2”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)ピリジンを、黄褐色固体として得た(162 mg, 67%)。mp185 ℃ (分解)。
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 2.36, m, H6’’’; 2.98, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.40, m, 2H, NCH2; 3.56-3.78, m, 4H, 2 x NCH2; 3.84-4.00, m, 2H, NCH2; 7.06, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4’’; 7.22, dd (J = 2.2, 9.2 Hz), 1H, H6”; 7.70, m, 2H, H5, H7”; 8.08, d (J = 8.5 Hz), 1H, H7’; 8.15, dt (J = 1.5, 7.8 Hz), 1H, H4; 8.19, dd (J = 1.5, 8.5 Hz), 1H, H6’; 8.42, d (J = 7.5 Hz), 1H, H3; 8.59, app. s, 1H, H4’; 8.89, d (J = 4.5 Hz), 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 10滴のHOAc) δ 25.6, C6’’’; 44.9, 4’’’-MeN; 46.4, C2’’’; 48.8, C7’’’; 57.1, 58.5, C3’'', C5'''; 96.0, C4''; 113.6, C4'; 115.8 (overlap), 117.3, C6", C7', C7"; 120.6, C5'; 123.0 (overlap), C3, C6'; 126.5, C5; 128.1, C7a''; 136.3, C3a' or C3a"; 138.6, C4; 140.6, C3a" or C3a'; 142.1, C7a'; 148.4, 148.6, C2, C5''; 150.2, C2' or C2"; 151.0, C6; 154.8, C2" or C2'. MS (ESI +ve) m/z 424 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 424.22421, C25H26N7の理論質量:424.22442 (△= 0.5 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 123.0
PF = 16.7
DMFm = 2.14
DMF10 = 1.77
(A) 5-(3’-ヒドロキシピペリジン-1’-イル)-2-ニトロアニリンの調製
1H nmr(10) (400 MHz, d6-dmso) δ 1.32-1.49, m, 2H, H4’ and/or H5’; 1.72, m, 1H, H4’ or H5’; 1.88, m, 1H, H4’ or H5’; 2.83, dd (J = 8.8, 12.8 Hz), 1H, H2’; 2.96, m, 1H, H6’; 3.50, m, 1H, H3’; 3.59, m, 1H, H6’; 3.68, dd (J = 4.0, 12.8 Hz), 1H, H2’; 4.90, d (J = 4.4 Hz), 1H, 3’-OH; 6.18, d (J = 2.8 Hz), 1H, H6; 6.33, dd (J = 2.6, 9.8 Hz), 1H, H4; 7.22, br s, 2H, 1-NH2; 7.77, d (J = 10.0 Hz), 1H, H3. 13C nmr (100 MHz, d6-dmso) δ 21.7, C5’; 32.4, C4’; 46.0, C6’; 53.3, C2’; 64.4, C3’; 96.2, 104.9, C4, C6; 121.9, C2; 126.8, C3; 148.0, 154.2, C1, C5.
5-(3’-ヒドロキシピペリジン-1’-イル)-2-ニトロアニリン(593 mg, 2.5 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(40 ml)中の溶液に、5%の活性炭担持パラジウム(160 mg)を添加し、混合物を、水素雰囲気下、室温で23時間撹拌した。次いで、この反応混合物を、濾過助剤を通して濾過し、残渣をメタノールで洗浄した。合わせた濾液および洗液を蒸発させて、粗2-アミノ-4-(3’-ヒドロキシピペリジン-1’-イル)アニリンを、暗緑色オイルとして得た(539 mg, 100%)。これを、さらに精製することなく次の反応に用いた。
粗2-アミノ-4-(3’-ヒドロキシピペリジン-1’-イル)アニリン(539 mg, 2.5 mmol)を、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (650 mg, 2.65 mmol, 1.06 eq)、次いで、無水エタノール(20 ml)および氷酢酸(10 ml)で処理した。この反応混合物を、窒素下で21時間還流させた後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。残渣を、希アンモニア水溶液(2.7 M, 25 ml)とn-ブタノール(25 ml)との間で分配し、ブタノール抽出液を水で洗浄(3 x 20 ml)し、蒸発させた。残渣を、エタノールで粒状化させ(2 x 10 ml)、エタノールに不溶な物質を減圧下で乾燥させて、4-(5’-(3”-ヒドロキシピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリンを暗紫色粉末として得た(645 mg, 73%)。mp 255-260℃(分解)。
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 1.74, m, 1H, H4” or H5”; 1.89, m, 1H, H4” or H5”; 1.99, m, 1H, H4” or H5”; 2.23, m, 1H, H4" or H5"; 3.30, m (obs), H2" or H6"; 3.40, m, 1H, H2" or H6"; 3.70, m, 1H, H2" or H6"; 3.75, dd (J = 2.6, 12.0 Hz), 1H, H2" or H6"; 4.10, tt (J = 3.2, 6.4 Hz), 1H, H3"; 7.22, d (J = 9.2 Hz), 1H, H6; 7.64, dd (J = 2.0, 8.8 Hz), 1H, H6'; 7.79, m, 2H, H4', H7'; 8.02, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H5; 8.95, d (J = 2.4 Hz), 1H, H3. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 25滴のHOAc) δ 23.4, C5”; 32.9, C4”; 52.0, C6”; 58.8, C2”; 67.4, C3”; 101.1, C4’; 112.4, C4; 115.1, 118.3, 121.3, 126.8, C3, C6, C6’, C7’; 128.8, 132.0, C2, C3a’ or C7a’; 133.5, C5; 135.6, C2, C3a’ or C7a’; 149.0, 149.2, 150.2, C1, C2’, C5’. MS (ESI +ve) m/z 354 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 354.15609, C18H20N5O3の理論質量:354.15607 (△= 0.1 ppm).
4-(5’-(3”-ヒドロキシピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリン(219 mg, 0.62 mmol)の2:1の酢酸エチル/メタノール(24 ml)中の懸濁液に、5%の活性炭担持パラジウム(50 mg)を添加し、この反応混合物を、水素雰囲気下、室温で20時間激しく撹拌した。次いで、この反応混合物を、濾過助剤を通して濾過し、残渣をメタノール(約130 ml)で洗浄した。合わせた濾液および洗液を蒸発させて、粗2-アミノ-4-(5’-(3”-ヒドロキシピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリンを、くすんだ橙色オイルとして得た(539 mg, 100%)。これを、さらに精製することなく用いた。
2-シアノピリジン(102 mg, 0.98 mmol)に、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液(0.087 M, 1.2 ml, 0.10 mmol)を添加し、溶液を、窒素下、40℃の油浴中で75分間加熱した。次いで、粗2-アミノ-4-(5’-(3”-ヒドロキシピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリン(0.62 mmol, 上記(i)で調製したもの)の無水メタノール(10 ml)中の溶液、次いで氷酢酸 (0.12 ml, 2.0 mmol)を添加し、混合物を、窒素下で21時間穏やかに撹拌した。冷却後、溶媒をロータリーエバポレーターで除去し、残渣を希アンモニア溶液(2.7 M, 15 ml)とn-ブタノール(20 ml)との間で分配させた。ブタノール抽出液を水で洗浄(2 x 15 ml) し、蒸発させて、暗色のガラス状固体を得た。この物質を、9:1の酢酸エチル/メタノール(10 ml)で処理し、65分間撹拌して、均一な懸濁液を得、これを遠心分離し、上清を除去した。残渣を、9:1の酢酸エチル/メタノール(5 ml)でさらに処理し、遠心分離し、上清を除去した。次いで、残った灰色〜茶色の固体を、シリカゲルのプラグ(30 x 70 mm)に担持させ、メタノールで溶出させて、2-(5’-(5”-(3’’’-ヒドロキシピペリジン-1’’’-イル)ベンズイミダゾール-2”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)ピリジンを、淡黄褐色粉末として得た(185 mg, 73%)。mp 278-282℃。
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 1.78, m, 1H, H4’’’ or H5’’’; 1.92, m, 1H, H4’’’ or H5’’’; 2.00, m, 1H, H4’’’ or H5’’’; 2.28, m, 1H, H4’’’ or H5’’’; 3.37, dd (J = 6.0, 12.0 Hz), 1H, H2’’’; 3.47, m, 1H, H6’’’; 3.74, m, 1H, H6’’’; 3.79, dd (J = 2.5, 12.0 Hz), 1H, H2’''; 4.14, tt (J = 3.5, 7.0 Hz), 1H, H3'''; 7.70, m, 2H, H5, H6"; 7.90, d (J = 9.0 Hz), 1H, H7"; 7.93, d (J = 2.5 Hz), 1H, H4"; 8.08, d (J = 8.5 Hz), 1H, H7'; 8.14, dt (J = 1.5, 7.8 Hz), 1H, H4; 8.27, dd (J = 1.5, 8.5 Hz), 1H, H6'; 8.41, d (J = 8.0 Hz), 1H, H3; 8.64, d (J = 1.0 Hz), 1H, H4'; 8.89, d (J = 4.5 Hz), 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 20滴のHOAc) δ 23.6, C5’’’; 33.2, C4’’’; 51.3, C6’’’; 58.3, C2’’’; 67.5, C3’’’; 100.2, C4”; 115.0, 115.8, 117.2, 118.2, C4’, C6”, C7’, C7”; 119.2, C5’; 122.7, 123.1, C3, C6’; 126.4, C5; 128.0, C7a”; 135.1, C3a”; 138.5, C4; 140.0, C3a’; 141.9, C7a’; 147.8, C2; 149.7, C5”; 150.7, C6; 150.9, 154.4, C2’, C2”. MS (ESI +ve) m/z 821 (M2H+, 15%), 411 (MH+, 100). HRMS (ESI +ve) m/z 411.19270, C24H23N6Oの理論質量:411.19279 (△= 0.2 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 77.9
PF = 14.7
DMFm = 1.90
DMF10 = 1.33
(A) 5-(4’-メトキシピペリジン-1’-イル)-2-ニトロアニリンの調製
さらなる物質を、アセトニトリルに可溶な物質を、シリカゲルのプラグに通し、1:1の酢酸エチル/へキサンで溶出させることによって、さらに100 mg得た(合計収率75%)。
1H nmr (500 MHz, d6-dmso) δ 1.44, m, 2H, H3’/H5’; 1.88, m, 2H, H3’/5’; 3.13, ddd (J = 3.5, 9.5, 13.5 Hz), 2H, H2’/6’; 3.26, s, 3H, 4’-MeO; 3.42, app tt (J = 4.0, 8.0 Hz), 1H, H4’; 3.61, m, 2H, H2’/6’; 6.21, d (J = 2.5 Hz), 1H, H6; 6.37, dd (J = 2.5, 9.5 Hz), 1H, H4; 7.21, br, 2H, 1-NH2; 7.78, d (J = 10.0 Hz), 1H, H3. 13C nmr (125 MHz, d6-dmso) δ 30.0, C3’/5’; 44.2, C2’/6’; 55.1, 4’-MeO; 75.1, C4’; 97.3, 105.6, C4, C6; 122.8, C2; 127.5, C3; 148.6, 154.7, C1, C5. MS (ESI +ve) m/z 252 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 252.13414, C12H18N3O3の理論質量:252.13427 (△= 0.5 ppm).
5-(4’-メトキシピペリジン-1’-イル)-2-ニトロアニリン(0.30 g, 1.2 mmol)の、2:1の酢酸エチル/メタノール(45 ml)中の溶液に、10%活性炭担持パラジウム(50 mg)を添加し、混合物を、水素雰囲気下、室温で23時間撹拌した。次いで、この反応混合物を、濾過助剤を通して濾過し、濾過された固体をメタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗液を蒸発させて、粗2-アミノ-4-(4’-メトキシピペリジン-1’-イル)アニリンを、暗色の粘性オイルとして得た(258 mg, 98%)。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
粗2-アミノ-4-(4’-メトキシピペリジン-1’-イル)アニリン(258 mg, 1.16 mmol)を、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (300 mg, 1.22 mmol)、次いで無水エタノール(10 ml)および氷酢酸(5 ml)で処理した。この反応混合物を、窒素下で18時間穏やかに還流させた後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターによって除去した。残渣を、希アンモニア溶液(2.7 M, 20 ml)で処理し、90分間激しく撹拌して、均一で微細な赤色懸濁液を得た。この物質を遠心分離し、上清を除去し、残渣を水(2 x 10 ml)、次いでアセトニトリル(3 x 4 ml)で処理した(各処理において、遠心分離し、上清を除去した)。次いで、残渣を減圧下で乾燥させて、4-(5’-(4”-メトキシピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリン(336 mg, 78%)を、微細な赤色粉末として得た。mp 193-197℃。
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 5滴のd-TFA) δ 2.13, m, 2H, H3"/5"; 2.26, m, 2H, H3"/5"; 3.44, s, 3H, 4"-MeO; 3.61, m, 2H, H2"/6"; 3.68, m, 1H, H4"; 3.86, m, 2H, H2"/6"; 7.25, d (J = 9.2 Hz), 1H, H6; 7.78, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H6'; 7.89, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7'; 8.01, d (J = 1.6 Hz), 1H, H4'; 8.05, dd (J = 2.4, 9.2 Hz), 1H, H5; 9.01, d (J = 2.4 Hz), 1H, H3. 13C nmr (100 MHz, d4-MeOH + 15滴のHOAc) δ 31.1, C3”/5”; 50.0, C2”/6”; 56.0, 4”-MeO; 76.3, C4”; 102.1, C4’; 113.7, C4; 115.4, 117.9, 121.2, 126.5, C3, C6, C6’, C7’; 130.8, 132.1, C2, C3a’ or C7a’; 133.7, C5; 136.7, C2, C3a’ or C7a’; 149.0, 149.1, 150.0, C1, C2’, C5’. MS (ESI +ve) m/z 368 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 368.17154, C19H22N5O3の理論質量:368.17172 (△= 0.5 ppm).
4-(5’-(4”-メトキシピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリン(281 mg, 0.765 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール (25 ml)中の溶液に、5%の活性炭担持パラジウム(55 mg)を添加し、混合物を、水素雰囲気下、室温で20時間撹拌した。この反応混合物を、濾過助剤を通して濾過し、濾過された固体をメタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗液を蒸発させて、粗2-アミノ-4-(5’-(4”-メトキシピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリンを、暗赤色ガラス状固体として得た。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
2-シアノピリジン(119 mg, 1.14 mmol)に、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液(0.09 M, 1.3 ml, 0.119 mmol)を添加し、溶液を、窒素下、40℃にて2時間加熱した。次いで、2-アミノ-4-(5’-(4”-メトキシピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリン(0.765 mmol, 上記(i)で調製したもの)の無水メタノール(15 ml)中の溶液、次いで酢酸 (0.13 ml)を添加し、暗褐色となった溶液を、窒素下で21時間撹拌した。この混合物を室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去し、残渣をアンモニア溶液(5 ml)で処理した後、n-ブタノール(2 x 10 ml)で抽出した。この抽出液を塩水(10 ml)で洗浄し、蒸発させて、ガラス状物質を得た。この物質を、1:4のメタノール/酢酸エチルで溶出させるカラムクロマトグラフィー(シリカゲル)にかけて、2-(5’-(5”-(4’’’-メトキシピペリジン-1’’’-イル)ベンズイミダゾール-2”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)ピリジン(252 mg, 78%)を、橙色粉末として得た。mp 203℃ (分解)。
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 2.04, m, 2H, H3’’’/5’’’; 2.23, m, 2H, H3’’’/5’’’; 3.43, s, 3H, 4’’’-MeO; 3.49, m, 2H, H2’’’/6’’’; 3.64, tt (J = 3.3, 6.5 Hz), 1H, H4’’’; 3.79, m, 2H, H2’’’/6’’’; 7.62, m, 2H, H5, H6’’; 7.82, d (J = 8.5 Hz), 1H, H7’’; 7.83, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4’’; 7.96, d (J = 8.5 Hz), 1H, H7’; 8.06, dt (J = 1.5, 7.8 Hz), 1H, H4; 8.15, dd (J = 1.8, 8.8 Hz), 1H, H6’; 8.34, dd (J = 0.5, 8.0 Hz), 1H, H3; 8.51, s, 1H, H4’; 8.80, dd, (J = 1.0, 4.5 Hz), 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 5滴のHOAc) δ 31.7, C3’’’/C5’’’; 49.9, C2’’’/C6’’’; 55.8, 4’’’-MeO; 77.2, C4’’’; 101.7, C4’’; 115.1, 115.9, 116.9, 117.4, C4’, C6”, C7’, C7”; 122.7, 122.8, C3, C6’; 123.6, C5’; 126.0, C5; 133.0, C7a’’; 138.3 (overlap), C3a’’, C4; 140.5, C3a’; 141.5, C7a’; 148.6, C2; 150.1, C5’’; 150.8, C6; 152.0, 154.2, C2’, C2”. MS (ESI +ve) m/z 425 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 425.20842, C25H25N6Oの理論質量:425.20844 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 69.3
PF = 15.7
DMFm = 1.70
DMF10 = 1.37
(A) 5-ジメチルアミノ-2-ニトロアニリンの調製
1H nmr (500 MHz, CDCl3) δ 3.04, s, 6H, Me2N; 5.76, d (J = 2.7 Hz), 1H, H6; 6.12, dd (J = 2.7, 9.8 Hz), 1H, H4; 7.99, d (J = 9.8 Hz), 1H, H3. 13C nmr (125 MHz, CDCl3) δ 40.4, Me2N; 96.0, C6; 104.5, C4; 124.2, C2; 128.6, C3; 147.4, C1; 155.1, C5.
5-ジメチルアミノ-2-ニトロアニリン(1.94 g, 10.7 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(200 ml)中の溶液に、5%の活性炭担持パラジウム(1.12 g)を添加し、水素雰囲気下、室温で20.5時間撹拌した。この懸濁液を、セライトを通して速やかに濾過し、残渣をメタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗2-アミノ-4-(ジメチルアミノ)アニリンを、暗褐色オイルとして得た。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
粗2-アミノ-4-(ジメチルアミノ)アニリン(上記(i)で調製したもの)およびエチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (2.79 g, 11.4 mmol)を、無水エタノール(60 ml)および氷酢酸(30 ml)中、窒素下で20時間還流させた。室温に冷却した後、溶媒をロータリーエバポレーターによって除去し、残渣を希アンモニア溶液(2.7 M)を用いて塩基性にした後、室温で4日間撹拌した。この懸濁液を、濾過し、暗褐色固体を水、次いでジエチルエーテルで洗浄して、4-(5’-(ジメチルアミノ)ベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリンを、暗赤色〜褐色固体として得た(2.85 g, 90%)。mp 249-251℃。
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 5滴のd-TFA) δ 3.27, s, 6H, Me2N; 7.26, d (J = 9.0 Hz), 1H, H6; 7.53, dd (J = 2.4, 9.0 Hz), 1H, H6’; 7.57, d (J = 2.2 Hz), 1H, H4’; 7.79, dd (J = 0.5, 9.0 Hz), 1H, H7’; 8.02, dd (J = 2.4, 8.9 Hz), 1H, H5; 8.99, d (J = 2.2 Hz), 1H, H3. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 5滴のHOAc) δ 41.4, Me2N; 95.8, C4’; 113.3, C4; 113.5, 115.2, C6’, C7’; 121.0, C6; 125.8, C3; 127.8, 131.8, C2, C7a’; 133.1, C5; 136.2, C3a’; 147.9, 148.8, 149.8, C1, C2’, C5’. MS (ESI +ve) m/z 298 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 298.12984, C15H16N5O2の理論質量:298.12985 (△= 0.0 ppm).
4-(5’-(ジメチルアミノ)ベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリン(0.358 g, 1.20 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(40 ml)中の溶液を、5%の活性炭担持パラジウム(0.20 g)を添加し、水素雰囲気下、室温で17時間撹拌した。この懸濁液を、セライトを通して速やかに濾過し、残渣をメタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗2-アミノ-4-(5’-(ジメチルアミノ)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリンを、褐色オイルとして得た。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
メタ重亜硫酸ナトリウム(0.269 g, 1.41 mmol)の1:1のethanol/水(5 ml)中の溶液を、エタノール(5 ml)中の2-ピリジンカルボキシアルデヒド(0.157 g, 1.47 mmol)に添加し、混合物を穏やかに5分間加熱した。次いで、この溶液を、2-アミノ-4-(5’-(ジメチルアミノ)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリン(上記(i)で調製したもの)のエタノール(40 ml)中の溶液に添加し、混合物を窒素下で22時間還流させた。冷却後、溶媒をロータリーエバポレーターによって除去し、残渣を希アンモニア溶液(2.7 M, 30 ml)で処理し、0℃にて24時間静置した。得られた懸濁液を、遠心分離し、上清を除去して、暗褐色の残渣を得た。これを、水(2 x 13 ml)、ジエチルエーテル(2 x 13 ml)、および酢酸エチル(15 ml and 10 ml)で処理した(各処理において、遠心分離し、上清を除去した)。得られた固体を減圧下で乾燥して、2-(5’-(5”-(ジメチルアミノ)ベンズイミダゾール-2”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)ピリジンを、淡褐色固体(0.190 g, 45%)として得た。mp 180℃(分解)。
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 5滴のd-TFA) δ 3.23, s, 6H, Me2N; 7.41, d (J = 1.2 Hz), 1H, H4”; 7.42, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H6”; 7.70, dd (J = 5.4, 7.5 Hz), 1H, H5; 7.78, d (J = 9.0 Hz), 1H, H7”; 8.08, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7’; 8.15, dt (J = 1.5, 8.0 Hz), 1H, H4; 8.21, dd (J = 1.7, 8.5 Hz), 1H, H6’; 8.42, d (J = 7.8 Hz), 1H, H3; 8.58, d (J = 1.1 Hz), 1H, H4’; 8.90, d (J = 4.4 Hz), 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 5滴のHOAc) δ 41.2, Me2N; 95.5, C4”; 113.7, C6”; 115.2, C7”; 115.4, C4’; 117.1, C7’; 120.2, C5’; 122.5, C6’; 122.8, C3; 126.3, C5; 127.3, C7a”; 135.9, C3a”; 138.4, C4; 140.3, C3a’; 142.0, C7a’; 148.4, C2; 149.3, C2”; 150.0, C5”; 150.8, C6; 154.6; C2’. MS (ESI +ve) m/z 355 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 355.16654, C21H19N6の理論質量:355.16657 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 60.8
PF = 13.5
DMFm = 1.57
DMF10 = 1.30
(A) 5-(4’-(N-BOC-アミノ)ピペリジン-1’-イル)-2-ニトロアニリンの調製
1H nmr (400 MHz, base-washed CDCl3) δ 1.45, m, 11H, O-t-Bu and H3’/5’; 2.04, m, 2H, H3’/5’; 3.01, dt (J = 2.4, 12.4 Hz), 2H, H2’/6’; 3.70, br, 1H, H4’; 3.82, br d, 2H, H2’/6’; 4.46, br, 1H, NH; 5.94, d (J = 2.8 Hz), 1H, H6; 6.13, br, 2H, NH2; 6.26, dd (J = 2.6, 9.8 Hz), 1H, H4; 8.00, d (J = 9.2 Hz), 1H, H3.
5-(4’-(N-BOC-アミノ)ピペリジン-1’-イル)-2-ニトロアニリン(0.57 g, 1.7 mmol)の2:1の酢酸エチル/メタノール(60 ml)中の懸濁液に、10%活性炭担持パラジウム(0.10 g)を添加し、水素雰囲気下、室温で18時間撹拌した。次いで、この反応混合物を、濾過助剤を通して濾過し、濾過された固体をメタノール(150 ml)で洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗2-アミノ-4-(4’-(N-BOC-アミノ)ピペリジン-1’-イル)アニリンを、くすんだカーキ色固体として得た(0.51 g, 98%)。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
1H nmr (400 MHz, base-washed CDCl3) δ 1.45, s, 9H, O-t-Bu; 1.54, m, 2H, H3’/5’; 2.02, m, 2H, H3’/5’; 2.71, dt (J = 2.4, 12.0 Hz), 2H, H2’/6’; 3.39, m, 2H, H2’/6’; 3.55, br, 1H, H4’; 4.47, br, 1H, BOC-NH; 6.32, dd (J = 2.8, 8.4 Hz), 1H, H5; 6.37, d (J = 2.4 Hz), 1H, H3; 6.62, d (J = 8.4 Hz), 1H, H6.
粗2-アミノ-4-(4’-(N-BOC-アミノ)ピペリジン-1’-イル)アニリン(0.51 g, 1.66 mmol)を、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩7(0.429 g, 1.74 mmol)、次いで無水エタノール(20 ml)および氷酢酸(10 ml)で処理した。この反応混合物を、窒素下で19時間還流させた後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。残渣を希アンモニア溶液(2.7 M, 20 ml)で処理し、40分間撹拌して、微細な赤色沈殿を得た。この懸濁液を遠心分離し、上清を除去し、残渣を水(2 x 10 ml)、次いでアセトニトリル(2 x 4 ml)で処理した(各処理において、遠心分離し、上清を除去した)。残渣を減圧下で乾燥させて、4-(5’-(4”-(N-BOC-アミノ)ピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリンを暗赤色粉末として得た(0.498 g, 66%)。mp 155-160℃。
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 1.46, s, 9H, O-t-Bu; 1.97, m, 2H, H3”/5”; 2.24, m, 2H, H3”/5”; 3.63, dt (J = 1.3, 12.0 Hz), 2H, H2”/6”; 3.79, m, 3H, H2”/6”, H4”; 7.25, d (J = 9.2 Hz), 1H, H6; 7.74, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H6’; 7.86, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7’; 7.92, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4’; 8.04, dd (J = 2.4, 9.2 Hz), 1H, H5; 9.01, d (J = 2.4 Hz), 1H, H3. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 25滴のHOAc) δ 28.8, OCMe3; 32.6, C3”/5”; 48.4, C4”; 51.3, C2”/6”; 80.3, OCMe3; 101.5, C4’; 113.0, C4; 115.2, 118.2, 121.3, 126.7, C3, C6, C6’, C7’; 129.7, 132.1, C2, C3a’ or C7a’; 133.6, C5; 136.0, C2, C3a’ or C7a’; 149.2, 149.5, 149.6, C1, C2’, C5’: 157.7, O(C=O)N. MS (ESI +ve) m/z 905 (M2H+, 22%), 453 (MH+, 100). HRMS (ESI +ve) m/z 453.22448, C23H29N6O4の理論質量:453.22448 (△= 0.0 ppm).
4-(5’-(4”-(N-BOC-アミノ)ピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリン(350 mg, 0.77 mmol)の1:1の酢酸エチル/メタノール(20 ml)中の懸濁液に、10%活性炭担持パラジウム(50 mg)を添加し、水素雰囲気下、21時間激しく撹拌した。次いで、この反応混合物を、濾過助剤を通して濾過し、残渣をメタノール(約100 ml)で洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗2-アミノ-4-(5’-(4”-(N-BOC-アミノ)ピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリンを、橙色〜褐色固体として得た(331 mg, 99%)。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 1.46, s, 9H, O-t-Bu; 1.94, m, 2H, H3”/5”; 2.23, m, 2H, H3”/5”; 3.62, dt (J = 2.8, 12.0 Hz), 2H, H2”/6”; 3.79, m, 3H, H2”/6”, H4”; 7.11, d (J = 8.8 Hz), 1H, H6; 7.71, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H6’; 7.85, m, 2H, H5, H7’; 7.91, d (J = 1.6 Hz), 1H, H4’; 7.95, d (J = 2.0 Hz), 1H, H3.
2-シアノピリジン(133 mg, 1.28 mmol)に、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液(0.075 M, 1.7 ml, 0.128 mmol, 0.1 eq)を添加し、この溶液を、窒素下、40℃の油浴中で80分間加熱した。次いで、粗2-アミノ-4-(5’-(4”-(N-BOC-アミノ)ピペリジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリン(331 mg, 0.78 mmol)の無水メタノール(15 ml)中の溶液、次いで氷酢酸(0.14 ml, 2.45 mmol)を添加し、混合物を窒素下で16時間穏やかに撹拌した。冷却後、溶媒をロータリーエバポレーターで除去し、残渣を希アンモニア溶液(2.7 M, 20 ml)で処理し、40分間撹拌して、均一な懸濁液を得、これを遠心分離し、上清を除去した。この残渣を水(15 ml)、次いでアセトニトリル(4 x 3 ml)で処理した(各処理において、遠心分離し、上清を除去した)。残った固体を、シリカゲルの短いプラグ(30 x 70 mm)に担持させ、メタノールで溶出させて、2-(5’-(5”-(4’’’-(N-BOC-アミノ)ピペリジン-1’’’-イル)ベンズイミダゾール-2”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)ピリジンを褐色粉末として得た(261 mg, 65%)。mp 197℃(分解)。
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 1.47, s, 9H, O-t-Bu; 1.93, m, 2H, H3’’’/H5’’’; 2.23, m, 2H, H3’’’/5’’’; 3.59, dt (J = 2.6, 12.0 Hz), 2H, H2’’’/6’’’; 3.80, m, 3H, H2’’’/6’’’, H4’’’; 7.71, m, 2H, H5, H6”; 7.89, m, 2H, H4”, H7”; 8.08, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7’; 8.16, dt (J = 1.6, 8.0 Hz), 1H, H4; 8.23, dd (J = 1.8, 8.6 Hz), 1H, H6’; 8.41, d (J = 7.6 Hz), 1H, H3; 8.63, d (J = 0.8 Hz), 1H, H4’; 8.90, m, 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 28.8, OCMe 3 ; 33.0, C3’’’/5’’’; 48.8, C4’’’; 51.1, C2’’’/6’’’; 80.1, OCMe3; 101.2, C4”; 115.3, 115.6, 116.9, 117.6, C4’, C6”, C7’, C7”; 122.2, C5’; 122.8 (overlap), C3, C6’; 126.1, C5; 131.5, C7a”; 137.3, C3a”; 138.3, C4; 140.3, C3a’; 141.6, C7a’; 148.4, C2; 150.4, C5”; 150.7, C6; 151.3, 154.3, C2’, C2”; 157.7, O(C=O)N. MS (ESI +ve) m/z 510 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 510.26192, C29H32N7O2の理論質量:510.26192 (△= 1.4 ppm).
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 1.86, app. dq (J = 4.0, 12.4 Hz), 2H, H3’’’/H5’’’; 2.18, m, 2H, H3’’’/5’’’; 3.04, dt (J = 1.8, 12.0 Hz), 2H, H2’’’/6’’’; 3.36, m, 1H, H4’’’; 3.90, m, 2H, H2’’’/6’’’; 7.33, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4”; 7.42, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H6”; 7.67, m, 1H, H5; 7.70, d (J = 9.2 Hz), 1H, H7”; 8.05, d (J = 8.4 Hz), 1H, H7’; 8.12, dt (J = 1.2, 8.0 Hz), 1H, H4; 8.17, dd (J = 1.8, 8.6 Hz), 1H, H6’; 8.40, d (J = 8.0 Hz), 1H, H3; 8.56, d (J = 0.8 Hz), 1H, H4’; 8.86, m, 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 31.2, C3’’’/5’’’; 49.7, C4’’’; 50.5, C2’’’/6’’’; 102.2, C4”; 115.2, 116.0, 117.0, 117.4, C4’, C6”, C7’, C7”; 122.8, 123.0, C3, C6’; 123.8, C5’; 126.1, C5; 133.2, C7a”; 138.4, C4; 138.5, C3a”; 140.4, C3a’; 141.6, C7a’; 148.6, C2; 149.8, C5”; 150.8, C6; 152.3, 154.2, C2’, C2”. MS (ESI +ve) m/z 819 (M2H+, 4%), 410 (MH+, 100). HRMS (ESI +ve) m/z 410.20870, C24H24N7の理論質量:410.20877 (△= 0.2 ppm).
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 1.94, app. dq (J = 4.0, 12.0 Hz), 2H, H3’’’/5’’’; 2.25, m, 2H, H3’’’/5’’’; 2.93, s, 6H, 4’’’-Me2N; 2.98, m, 2H, H2’’’/6’’’; 3.43, m, 1H, H4’’’; 4.00, m, 2H, H2’’’/6’’’; 7.30, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4”; 7.42, dd (J = 2.0, 9.3 Hz), 1H, H6”; 7.71, m, 2H, H5, H7”; 8.08, d (J = 8.5 Hz), 1H, H7’; 8.15, dt (J = 1.5, 8.0 Hz), 1H, H4; 8.19, dd (J = 1.5, 8.5 Hz), 1H, H6’; 8.42, d (J = 7.5 Hz), 1H, H3; 8.59, d (J = 1.5 Hz), 1H, H4’; 8.89, m, 1H, H6. 13C nmr (100 MHz, d4-MeOH + 5滴のHOAc) δ 27.5, C3’’’/5’’’; 40.3, 4’’’-Me2N; 50.9, C2’’’/6’’’; 64.7, C4’’’; 102.3, C4”; 115.5, 116.1, 117.0, 117.6, C4’, C6”, C7’, C7”; 122.9, 123.2, C3, C6’; 123.8, C5’; 126.3, C5; 133.2, C7a”; 138.6, C3a”, C4 (overlap); 140.7, C3a’; 141.7, C7a’; 148.7, C2; 149.7, C5”; 150.9, C6; 152.5, 154.4, C2’, C2”. MS (ESI +ve) m/z 438 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 438.23995, C26H28N7の理論質量:438.24007 (△= 0.3 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 46.9
PF = 18.2
DMFm = 1.76
DMF10 = 1.54
(A) エチル 4-アミノ-3-メトキシ-5-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩の調製
1H nmr (500 MHz, d6-dmso) δ 1.47, t (J = 7.0 Hz), 3H, OEt; 3.98, s, 3H, 3-OMe; 4.60, q (J = 6.8 Hz), 2H, OEt; 7.92, d (J = 1.5 Hz), 1H, H2; 7.97, br, 2H, 4-NH2; 8.39, d (J = 1.5 Hz), 1H, H6; 11.60, br, 2H, imidate H2N+.
13C nmr (125 MHz, d6-dmso) δ 13.5, OCH2CH3; 57.2, OMe; 69.2, OCH2CH3; 110.0, C1; 111.2, C2 or C6, 121.0, C6 or C2; 129.5, C4; 141.9, C5; 148.2, C3; 168.7, imidate. MS (ESI +ve) m/z 240 (M-Cl, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 240.09782, C10H14N3O4の理論質量:240.09788 (△= 0.2 ppm).
5-(4’-メチルピペラジン-1’-イル)-2-ニトロアニリン(7) (294 mg, 1.24 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(20 ml)中の懸濁液に、5%の活性炭担持パラジウム(62 mg)を添加し、混合物を、水素雰囲気下、室温で6時間激しく撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過して触媒および残渣を除去し、メタノールで洗浄した。合わせた濾液および洗液を、蒸発させて、粗2-アミノ-4-(4’-メチルピペラジン-1’-イル)アニリンを得た。これを、即座に次の工程で反応させた。
粗2-アミノ-4-(4’-メチルピペラジン-1’-イル)アニリン(1.24 mmol, 上記(i)で調製したもの)の2:1のethanol/酢酸(18 ml)中の溶液に、エチル 4-アミノ-3-メトキシ-5-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(350 mg, 1.27 mmol)を添加し、混合物を窒素下で17時間還流させた。この反応混合物を冷却し、固体を濾過により除去し、希アンモニア溶液(2.7 M, 2 x 20 ml)で注意深く洗浄した後、減圧下および五酸化リンの存在下で乾燥させて、暗赤色固体を得た。濾液を蒸発させて、残渣を水(10 ml)に溶解させ、強塩基性になるまで希アンモニア溶液(2.7 M、約15 ml)で処理した。沈殿物を濾過し、水で洗浄した後、減圧下で乾燥させて、さらなる55 mgの物質を得た。合わせた物質を、メタノール (20 ml)に溶解し、シリカゲルのプラグ(50 x 50 mm)に担持させ、メタノールで溶出させて、2-メトキシ-4-(5’-(4”-メチルピペラジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)-6-ニトロアニリンを、赤色ガラス状固体として得た(405 mg, 85%)。mp 148℃(分解)。
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 3滴のd-TFA) δ 3.00, s, 3H, 4”-MeN; 3.17, t (J = 12.4 Hz), 2H, NCH2; 3.31, m (隠されている), NCH2; 3.67, d (J = 11.6 Hz), 2H, NCH2; 3.86, d (J = 13.2 Hz), 2H, NCH2; 4.01, s, 3H, 2-OMe; 7.07, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4’; 7.18, dd (J = 9.2, 2.0 Hz), 1H, H6’; 7.44, d (J = 9.2 Hz), 1H, H7’; 7.47, d (J = 2.4 Hz), 1H, H3; 8.28, d (J = 2.0 Hz), 1H, H5. 13C nmr (100 MHz, d4-MeOH + 3滴のHOAc) δ 43.6, 4”-MeN; 49.2, C2”/6”; 54.7, C3”/5”; 57.1, 2-OMe; 102.1, C4’; 111.2, C6’; 115.5, C4; 116.1, 116.4, 116.5, C3, C5, C7’; 131.5, C6; 134.4, C7a’; 139.0, C3a’; 140.1, C1; 148.3, C5’; 149.9, C2; 151.4, C2’. MS (ESI +ve) m/z 383 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 383.18251, C19H23N6O3の理論質量:383.18262 (△= 0.3 ppm).
2-メトキシ-4-(5’-(4”-メチルピペラジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)-6-ニトロアニリン(274 mg, 0.72 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(20 ml)中の溶液に、5%の活性炭担持パラジウム(60 mg)を添加し、混合物を、水素雰囲気下、室温で21時間激しく撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過して触媒および残渣を除去し、メタノールで洗浄した。合わせた濾液および洗液を蒸発させて、2-アミノ-3-メトキシ-5-(5’-(4”-メチルピペラジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリンを、淡橙色固体として得た238 mg (94%)。これを即座に次の工程に用いた。
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH) δ 2.99, s, 3H, 4”-MeN; 3.18, t (J = 11.8 Hz), 2H, NCH2; 3.33, m (隠されている), NCH2; 3.66, d (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.92, d (J = 13.6 Hz), 2H, NCH2; 4.05, s, 3H, 3-OMe; 7.30, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4’; 7.35, dd (J = 8.6, 2.0 Hz), 1H, H6’; 7.56, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4 or H6; 7.61, d (J = 2.0 Hz), 1H, H6 or H4; 7.66, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7’.
ピリジン-2-カルボキシアルデヒド(78 mg, 0.728 mmol)のエタノール(5 ml)中の溶液と、メタ重亜硫酸ナトリウム(151 mg, 0.794 mmol)の水(1 ml)中の溶液とを混合し、2-アミノ-3-メトキシ-5-(5’-(4”-メチルピペラジン-1”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリン(228 mg, 0.647 mmol)のエタノール(10 ml)中の溶液に、10分かけて滴下により添加した。追加のエタノール(2 ml)および水(1 ml)を用いて移送を完了させた。次いで、この混合物を、窒素下で17時間還流させた後、冷却し、溶媒を蒸発させた。残渣を希アンモニア溶液(6%, 30 ml)で洗浄し、n-ブタノール(30 ml)で抽出した。抽出液を水(30 ml)、塩水(30 ml)で洗浄し、乾燥(MgSO4) し、蒸発させて、橙色のガラス状固体を得た。この物質を、アルミナ(中性, 33 x 190 mm)を用い、50:3:1の酢酸エチル/メタノール/トリエチルアミンで溶出させるカラムクロマトグラフィーにかけて、2-(4’-メトキシ-6’-(5”-(4’’’-メチルピペラジン-1’’’-イル)ベンズイミダゾール-2”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)ピリジンを黄色粉末として得た(39 mg, 14%)。mp 200℃(分解)。
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.01, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.21, t (J = 13.2 Hz), 2H, NCH2; 3.35, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.97, d (J = 12.8 Hz), 2H, NCH2; 4.26, s, 3H, 4’-MeO; 7.36, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4”; 7.44, dd (J = 2.4, 9.2 Hz), 1H, H6”; 7.70, ddd (J = 1.2, 4.8, 7.6 Hz), 1H, H5; 7.76, d (J = 9.2 Hz), 1H, H7”; 7.78, d (J = 1.2 Hz), 1H, H5’; 8.15, dt (J = 1.6, 8.0 Hz), 1H, H4; 8.20, d (J = 1.6 Hz), 1H, H7’; 8.43, dt (J = 8.0, 1.0 Hz), 1H, H3; 8.89, ddd (J = 0.8, 1.6, 4.8 Hz), 1H, H6. 13C nmr (100 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 43.6, 4’’’-MeN; 48.9, C2’’’/6’’’; 54.6, C3’’’/5’’’; 56.4, 4’-OMe; 101.8, 102.6, C4” and C5’ or C7’; 107.3, C7’ or C5’; 116.0, 117.0, C6”, C7”; 122.7, C3; 123.4, C6’; 125.9, C5; 132.6, 133.6, C7a’ and C7a”; 137.6, C3a’ or C3a”; 138.3, C4; 139.9, C3a” or C3a’; 148.3, 148.7, C2 and C5”; 150.6, C6; 150.9, C4’; 152.1, 153.0, C2’ and C2”. MS (ESI +ve) m/z 440 (MH+, 58%), 220.6 (MH2 2+, 100). HRMS (ESI +ve) m/z 440.21942, C25H26N7Oの理論質量:440.21933 (△= 0.2 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 158.5
PF = 13.3
DMFm = 1.97
DMF10 = 1.78
(A) (E)-2-(4’-シアノ-2’-ニトロスチリル)ピリジンの調製
1H nmr (400 MHz, CDCl3) δ 7.29, dt (J = 1.2, 6.2 Hz), 1H, H5; 7.31, d (J = 16.0 Hz), 1H, olefinic H; 7.53, d (J = 7.6 Hz), 1H, H3; 7.77, dt (J = 1.6, 7.6 Hz), 1H, H4; 7.88, ddd (J = 0.6, 1.6, 8.2 Hz), 1H, H5’; 7.95, d (J = 8.4 Hz), 1H, H6’; 8.05, d (J =16.0 Hz), 1H, olefinic H; 8.27, d (J = 2.0 Hz), 1H, H3’; 8.66, m, 1H, H6.
1H nmr (500 MHz, d6-dmso) δ 7.30, dd (J = 1.0, 2.5 Hz), 1H, H3; 7.33, dd (J = 1.5, 8.5 Hz), 1H, H5; 7.39, ddd (J = 1.0, 5.0, 7.5 Hz), 1H, H5’; 7.75, d (J = 8.0 Hz), 1H, H4; 7.86, m, 1H, H7; 7.92, dt (J = 2.0, 8.0 Hz), 1H, H4’; 8.08, dt (J = 8.0, 1.0 Hz), 1H, H3’; 8.68, ddd (J = 1.0, 2.0, 5.0 Hz), 1H, H6’; 12.22, s, 1H, 1-NH. 13C nmr (125 MHz, d6-dmso) δ 101.2, C3; 103.6, C6; 116.9, C7; 120.8, CN; 120.9, C3’; 122.0, C4; 122.2, C5; 123.5, C5; 131.8, C3a; 136.0, C7a; 137.5, C4’; 141.2, C2; 149.5, C2’; 149.6, C6’. MS (ESI +ve) m/z 220 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 220.08693, C14H10N3の理論質量:220.08692 (△= 0.1 ppm).
1H nmr (400 MHz, d6-dmso) δ 1.51, t (J = 7.0 Hz), 3H, OEt; 4.66, q (J = 6.9 Hz), 2H, OEt; 7.41, d (J =1.2 Hz), 1H, H3; 7.47, ddd (J = 1.2, 4.8, 7.6 Hz), 1H, H5’; 7.77, dd (J = 1.8, 8.6 Hz), 1H, H5; 7.81, d (J = 8.4 Hz), 1H, H4; 8.01, dt (J = 1.6, 7.8 Hz), 1H, H4’; 8.20, d (J = 8.0 Hz), 1H, H3’; 8.25, br s, 1H, H7; 8.71, br d (J = 4.0 Hz), 1H, H6’; 11.04, br, 1H, 1-NH or C=NH2 +; 11.79, br, 1H, 1-NH or C=NH2 +; 12.62, br, 1H, 1-NH or C=NH2 +. MS (ESI +ve) m/z 266 (M-Cl+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 266.12878, C16H16N3Oの理論質量:266.12879 (△= 0.04 ppm).
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 5滴のd-TFA) δ 3.00, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.20, t (J = 12.1 Hz), 2H, NCH2; 3.33, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 12.2 Hz), 2H, NCH2; 3.94, d (J = 13.2 Hz), 2H, NCH2; 7.30, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4”; 7.38, dd (J = 2.3, 9.2 Hz), 1H, H6”; 7.52, d (J = 0.7 Hz), 1H, H3’; 7.70, d (J = 9.0 Hz), 1H, H7”; 7.76, ddd (J = 1.2, 5.6, 7.6 Hz), 1H, H5; 7.79, dd (J = 1.7, 8.6 Hz), 1H, H5’; 7.98, dd (J = 0.6, 8.4 Hz), 1H, H4’; 8.32, m, 1H, H7’; 8.34, dt (J = 8.1, 1.0 Hz), 1H, H3; 8.41, dt (J = 1.6, 8.0 Hz), 1H, H4; 8.77, ddd (J = 0.7, 1.7, 5.6 Hz), 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 43.6, 4’’’-MeN; 49.2, C2’’’/6’’’; 54.6, C3’’’/5’’’; 102.2, C3’ and C4” (overlap); 111.8, C7’; 115.8, C7”; 117.3, C6”; 119.4, C5’; 121.6, C3; 121.8, C6’; 122.7, C4’; 123.8, C5; 132.65, 132.69, C3a’ and C7a”; 138.0, C3a”; 138.4, C4 and C7a’ (overlap); 141.3, C2’; 149.0, C5”; 150.4, C6; 151.4, C2; 153.4, C2”. MS (ESI +ve) m/z 817 (M2H+, 12%), 409 (MH+, 100). HRMS (ESI +ve) m/z 409.21387, C25H25N6の理論質量:409.21352 (△= 0.9 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 19.8
PF = 22.8
DMFm = 2.20
DMF10 = 2.09
(A) メチル 4-アセトアミド-2-メトキシベンゾエートの調製
1H nmr1 (400 MHz, d6-dmso) δ 2.07, s, 3H, 4-AcNH; 3.74, s, 3H, 2-OMe or COOMe; 3.77, s, 3H, COOMe or 2-OMe; 7.19, br d (J = 8.8 Hz), 1H, H5; 10.22, s, 1H, NH.
参考文献17: J. Med. Chem. 2007, 50(15), 3561-3572
1H nmr (400 MHz, CDCl3) δ 2.33, s, 3H, AcNH; 3.91, s, 3H, 2-MeO or COOMe; 4.03, s, 3H, COOMe or 2-MeO; 8.63, s, 1H, H3 or H6; 8.84, s, 1H, H6 or H3; 10.89, br, NH.
1H nmr (500 MHz, d6-dmso) δ 1.27, t (J = 7.0 Hz), 3H, COOEt; 3.82, s, 3H, 2-MeO; 4.21, q (J = 7.0 Hz), 2H, COOEt; 6.53, s, 1H, H3; 7.83, br s, 2H, 4-NH2; 8.47, s, 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d6-dmso) δ 14.2, OEt; 56.1, 2-MeO; 60.2, OEt; 98.7, C3; 108.8, C1; 124.2, 131.2, C5, C6; 150.1, C4; 163.2, 163.4, C2, C=O. MS (ESI +ve) m/z 263 (MNa+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 263.0638, C10H12N2NaO5の理論質量:263.0638 (△= 0 ppm).
1H nmr (400 MHz, CDCl3) δ 1.35, t (J = 7.0 Hz), 3H, COOEt; 3.82, s, 3H, 2-MeO; 4.29, q (J = 7.1 Hz), 2H, COOEt; 6.29, s, 1H, H3; 7.33, s, 1H, H6.
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 1.33, t (J = 7.2 Hz), 3H, COOEt; 3.99, s, 3H, 6-MeO; 4.36, q (J = 7.2 Hz), 2H, COOEt; 7.39, s, 1H, H7; 7.70, ddd (J = 0.8, 4.8, 7.6 Hz), 1H, H5’; 8.12, s, 1H, H4; 8.14, m (obs), H4’; 8.27, dt (J = 8.0, 1.0 Hz), 1H, H3’; 8.88, ddd (J = 1.2, 1.6, 4.6 Hz), 1H, H6’. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 3滴のHOAc) δ 14.6, OEt; 56.8, 6-MeO; 62.0, OEt; 97.8, br, C7; 118.3, C5; 120.8, br, C4; 122.4, 126.0, C3’, C5’; 135.1, br, C3a; 138.5, C4’; 142.2, br, C7a; 148.9, C2, C2’ or C6; 150.9, C6’; 154.1, 158.1, C2, C2’ or C6; 168.2, C=O. MS (ESI+ve) m/z 298 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 298.1186, C16H16N3O3の理論質量:298.1186 (△= 0 ppm).
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 4.02, s, 3H, 6-MeO; 7.42, s, 1H, H7; 7.72, dd (J = 4.5, 7.5 Hz), 1H, H5’; 8.16, dt (J = 1.5, 7.8 Hz), 1H, H4’; 8.23, s, 1H, H4; 8.29, dd (J = 0.8, 7.8 Hz), 1H, H3’; 8.90, m, 1H, H6’.
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 3.01, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.21, t (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.35, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 12.4 Hz), 2H, NCH2; 3.96, d (J = 13.6 Hz), 2H, NCH2; 4.23, s, 3H, 5’-MeO; 7.35, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4”; 7.44, dd (J = 2.0, 9.2 Hz), 1H, H6”; 7.63, s, 1H, H4’; 7.70, ddd (J = 1.2, 4.8, 7.6 Hz), 1H, H5; 7.77, d (J = 9.2 Hz), 1H, H7”; 8.15, dt (J = 1.6, 7.8 Hz), 1H, H4; 8.39, br d (J = 8.0 Hz), 1H, H3; 8.52, s, 1H, H7’; 8.88, br d (J = 4.0 Hz), 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 3滴のHOAc) δ 43.7, 4’’’-MeN; 49.4, C2’’’/6’’’; 54.8, C3’’’/5’’’; 56.8, 5’-OMe; 97.9, C4’; 102.5, C4”; 113.4, C6’; 116.1, 117.6, C6”, C7”; 118.5, C7’; 122.7, C3; 126.2, C5; 132.3, C7a”; 135.8, C7a’; 137.7, C3a”; 138.6, C4; 142.3, C3a’; 148.9, 149.0, C2 and C5”; 150.3, C2’, C2” or C5’; 150.9, C6; 154.4, 156.5, C2’, C2” or C5’. MS (ESI +ve) m/z 440 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 440.21927, C25H26N7Oの理論質量:440.21933 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 112.0
PF = 23.6
DMFm = 1.56
DMF10 = 1.32
(A) 5-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-2-ニトロフェニルアミンの調製
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.0, d (J=6.6 Hz), 6H; 2.6, m, 4H; 2.17, m, 1H; 3.3, m, 4H; 5.9, d, (J=3.54 Hz), 1H; 6.1, s (broad), 2H; 6.24, dd (J=2.3, 7.4 Hz), 1H; 7.96, d (J=10.8 Hz)
5-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-2-ニトロ-フェニルアミン(1.1 g, 4.2 mmol)の1:1の酢酸/エタノール(100 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(0.32 g)を添加した。得られた混合物を脱気し、次いで、水素雰囲気下、室温にて1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、窒素雰囲気下で、セライトを通して直接濾過して、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (1.02 g, 4.2 mmol)が入った丸底フラスコに入れ、カップリング工程に用いた。
工程(i)から得られたスラリーを、窒素下、80〜90℃で17時間加熱した後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた粘度が高い暗赤色オイルを、希アンモニア水溶液(水中5%、20 ml)で処理し、激しく混合し、一晩4℃に保った。次いで、上清をデカンテーションし、残渣をさらなる水で洗浄した。得られた個体をろ過し、ろ過漏斗上で乾燥したあと、ジエチルエーテルで洗浄した。これにより、粗生成物がレンガ色粉末として1 g得られた(粗収率62%)。この物質を、さらに精製することなく次の工程に直接用いた。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6 + TFA 1滴) δ 1.25, d (J=6.6Hz), 6H; 3.1, m, 2H; 3.19, m, 2H; 3.5, m, 3H; 3.90, m, 2H; 7.12, d (J=1.95Hz); 7.19, d (J=8.99 Hz) 1H; 7.28, dd, (J=1.95, 7.7 Hz), 1H; 7.62, d (J=8.99Hz), 8.3 dd (J=1.15, 7.03Hz), 1H; 8.9 d(J=2.15Hz), 1H.
4-[5-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-1H-ベンズイミダゾール-2-yl]-2-ニトロ-フェニルアミン(500 mg, 1.3 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(50 ml)中の溶液に、5%の活性炭担持パラジウム(120 mg)を添加し、混合物をまず脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日撹拌した。反応混合物をセライトを通して濾過し、メタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗4-[5-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-1H-ベンズイミダゾール-2-yl]-ベンゼン-1, 2-ジアミンを、橙色固体として得、精製することなく次の工程に用いた。
粗4-[5-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-1H-ベンズイミダゾール-2-yl]- ベンゼン-1, 2-ジアミン (1.3 mmol, 上記(i)のとおりに調製したもの)を、メタノール(20 ml)に溶解させた。これに、直前にメタノール(2 mL)中のナトリウムメトキシド(0.195 mmol)で処理(窒素下、40℃にて1時間)した2-シアノピリジン(203 mg, 1.95 mmol)の溶液を添加した。この混合物に、次に、酢酸(0.28 ml, 4.9 mmol)を添加した。
この混合物を、窒素下で1日間80℃に加熱した後、室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。次いで、残渣を5%アンモニア水溶液で処理し、2日間5℃に置き、水性層をデカンテーションし、水で十分に洗浄した。得られた個体を濾過し、水で十分に洗浄し、ろ過漏斗上で乾燥し、アセトニトリルで洗浄した。これにより、生成物が暗赤色粉末として400 mg得られた(収率70%)。
MP: 188-191℃
1H NMR (400 MHz, CD3OD+ TFA 2 drops) δ 1.4, d (J=6.6Hz), 6H, C(CH 3)2; 3.18, m, 2H, NCH2; 3.34, m, 2H, NCH2; 3.6, m, 3H, NCH2 , HC(CH3)2 ; 4.0, m, 2H, NCH2; 7.30, d (J=2.15Hz), 1H; 7.4, dd (J=2.15, 6.84Hz), 1H; 7.61, m, 1H; 7.72, d (J=9.18Hz), 1H; 8.00, d (J = 8.6 Hz), 1H; 8.04-8.14, m, 2H; 8.39, d (J = 8.0 Hz), 1H; 8.52, d (J = 1.5 Hz), 1H; 8.82, d (J = 4.7 Hz), 1H.
13C NMR (100 MHz, CD3OD+HOAc 1滴) δ 15.9, 48.2, 48.4, 57.8, 101.7, 113.9, 115.3, 115.4, 115.7, 121.6, 122.0, 124.1, 124.9, 134.2, 137.2, 138.6, 139.4, 140.3, 147.1, 147.7, 149.7, 152.3, 153.0
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 100.8
PF = 17.4
DMFm = 2.04
DMF10 = 1.87
(A) 5-(4-ブチルピペラジン-1-イル)-2-ニトロ-フェニルアミンの調製
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.9, t (J=7.43Hz), 3H, CH 3CH2CH2CH2; 1.3, m, 2H, CH3CH 2CH2CH2; 1.5, m, 2H, CH3CH2CH 2CH2; 2.3, t (J=7.62Hz), 2H, CH3CH2CH2CH 2; 3.0-3.4, m, 6H, CH3CH2CH2CH 2+2(NCH2); 2.5, m, 4H, 2(NCH2); 3.5, m, 4H, 2(NCH2)
5-(4-ブチルピペラジン-1-イル)-2-ニトロ-フェニルアミン(2.0 g, 7.1 mmol)の1:1の酢酸/エタノール(100 ml)中の溶液に、窒素下、5%の活性炭担持パラジウムを添加した。得られた混合物を脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、窒素下で、セライトを通して直接濾過してエチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (1.77 g, 7.1 mmol)が入った丸底フラスコに入れ、次のカップリング工程に手順を進めた。
工程(i)から得られたスラリーを、窒素下で17時間90℃に撹拌した後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた粘度の高い暗赤色のガム状物を、希アンモニア水溶液(5% in water, 20 ml)で処理し、激しく混合し、2日間4℃に置いた。次いで、上清をデカンテーションし、残渣をさらなる水で洗浄した。得られた固体を濾過し、濾過漏斗上で乾燥した後、ジエチルエーテルで洗浄した。これにより、粗生成物が暗赤色粉末として2.45 g得られた(粗収率87.5%)。この物質を、さらに精製することなく次の工程に用いた。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6 + TFA 1滴) δ 0.9, t (J=7.43Hz), 3H, CH 3CH2CH2CH2; 1.3, m, 2H, CH3CH 2CH2CH2; 1.6, m, 2H, CH3CH2CH 2CH2; 3.0-3.4, m, 6H, CH3CH2CH2CH 2+ N(CH2)2; 3.55, m, 2H, NCH2; 3.85, m, 2H, NCH2; 7.1, s , 1H; 7.19, d (J=8.99 Hz) 1H; 7.26, crude dd, , 1H; 7.61, d (J=8.99Hz); 8.1 crude d, 1H; 8.9 d(J=2.15Hz), 1H.
4-[5-(4-ブチルピペラジン-1-イル)-1H-ベンズイミダゾール-2-イル]-2-ニトロ-フェニルアミン(1.0g, 2.5 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(100 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(120 mg)を添加し、混合物を最初に脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過し、1:1の酢酸エチル/メタノール(10 mL)で洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗4-[5-(4-ブチルピペラジン-1-イル)-1H-ベンズイミダゾール-2-イル]-ベンゼン-1,2-ジアミンを、橙色固体として得た。これを精製することなく次の工程に用いた。
粗4-[5-(4-ブチルピペラジン-1-イル)-1H-ベンズイミダゾール-2-イル]-ベンゼン-1,2-ジアミン(2.5 mmol, 上記(i)で調製したもの)を、メタノール(40 ml)に溶解させた。これに、直前にメタノール(4 mL)中のナトリウムメトキシド(0.375 mmol)で処理(窒素下、40℃にて1時間)した2-シアノピリジン(390 mg, 3.75 mmol)の溶液を添加した。この混合物に、次に、酢酸(0.537 ml, 9.4 mmol)を添加した。
この混合物を、窒素下で一晩80℃に加熱した後、室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。次いで、残渣を5%アンモニア水溶液で処理し、2日間5℃に置き、水性層をデカンテーションし、水で十分に洗浄した。得られた赤色個体を濾過し、水で十分に洗浄し、ろ過漏斗上で乾燥し、アセトニトリルで洗浄した。これにより、粗生成物がレンガ橙色粉末として得られた。これを、アセトニトリル(20mL)中で2日間スラリー化し、濾過し、乾燥させて、生成物をレンガ橙色粉末として500 mg得た(収率44.6%)。
MP (impure): 142-145oC (分解)
1H NMR (400 MHz, CD3OD+ TFA 2 drops) δ 1.0, t, 3H, CH 3CH2CH2CH2; 1.4, m, 2H, CH3CH 2CH2CH2; 1.8, m, 2H, CH3CH2CH 2CH2; 3.2-3.3, m, 6H, CH3CH2CH2CH 2+ N(CH2)2; 3.7, m, 2H, NCH2; 3.9, m, 2H, NCH2; 7.30, d (J=2.15Hz), 1H; 7.4, dd (J=2.35, 6.84Hz), 1H; 7.69-7.74, m, 2H; 8.10, d (J = 8.8 Hz), 1H; 8.15 dt (J=1.76 Hz, 6.25Hz), 1H; 8.24, dd (J=1.6, 7.04 Hz), 1H; 8.4, d (J = 7.82 Hz), 1H; 8.63, m, 1H; 8.88, d (J = 4.9 Hz), 1H.
13C NMR (100 MHz, CD3OD+HOAc 1滴 ) : δ 12.7, 19.7, 26.0, 52.1, 56.7, 102.1, 114.4, 115.3, 115.5, 119.7, 121.6, 122.1, 123.9, 124.6, 125.0, 132.9, 134.5, 137.4, 139.3, 147.2, 147.8, 149.7, 152.7, 153.1
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 47.0
PF = 27.6
DMFm = 2.27
DMF10 = 2.05
(A) N1-(2-メトキシエチル)-4-ニトロ-ベンゼン-1,3-ジアミンの調製
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.27, dd (J=5.3, 5.3 Hz), 2H; 3.56, t (J=5.1 Hz), 2H; 5.65, d, (J=2.35 Hz), 1H; 5.92, dd (J=2.4, 7.0 Hz), 1H; 6.1, s (broad), 2H; 7.91, d (J=9.4 Hz)
N1-(2-メトキシエチル)-4-ニトロ-ベンゼン-1,3-ジアミン(1.25 g, 5.9 mmol)の1:2の酢酸 /エタノール(50 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(0.20 g)を添加した。得られた混合物を脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通して直接ろ過して丸底フラスコに移した。これによって、(約4.7 mmolの還元された物質を含む)溶液40 mLを、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (1.16 g, 4.7 mmol)が入った丸底フラスコに移し、次のカップリング工程に手順を進めた。
工程(i)から得られたスラリーを、窒素下、90℃で17時間加熱した後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた粘度が高い赤色ガム状物を、希アンモニア水溶液(水中5%, 50 ml)で処理し、激しく混合し、2日間4℃に置いた。次いで、上清をデカンテーションし、残渣をさらなる水で洗浄した。得られた固体を濾過し、濾過漏斗上で乾燥した後、ジエチルエーテルで洗浄した。これにより、粗生成物が暗赤色粉末として1.1 g得られた(粗収率72 %)。この物質を、さらに精製することなく次の工程に直接用いた。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6 + TFA 1滴) δ 3.3, crude t, 2H; 3.48, crude t, 2H; 7.03, s 1H; 7.06, d (J=8.8 Hz), 1H; 7.16, d, (J=8.9 Hz), 1H; 7.52, d (J=8.8Hz), 8.0 dd (J=1.6, 7.4Hz), 1H; 8.85 d(J=1.8Hz), 1H.
[2-(4-アミノ-3-ニトロ-フェニル)-1H-ベンズイミダゾール-5-イル]-(2-メトキシエチル)アミン(0.5 g, 1.5 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(50 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(120 mg)を添加した。得られた混合物を脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過し、1:1の酢酸エチル/メタノール(10 mL)で洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗4-[5-(2-メトキシ-エチルアミノ)-1H-ベンズイミダゾール-2-イル]-ベンゼン-1,2-ジアミンを得、これを精製することなく次の工程に用いた。
粗4-[5-(2-メトキシ-エチルアミノ)-1H-ベンズイミダゾール-2-イル]-ベンゼン-1,2-ジアミン(1.5 mmol, 上記(i)のとおりに調製したもの)をメタノール(20 ml)に溶解させた。これに、直前にメタノール(3 mL)中のナトリウムメトキシド(0.229 mmol)で処理(窒素下、40℃にて1時間)した2-シアノピリジン(238 mg, 2.29 mmol)の溶液を添加した。この混合物に、次に、酢酸(0.327 ml, 5.7 mmol)を添加した。
この混合物を、窒素下で一晩80℃に加熱した後、室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。次いで、残渣を5%アンモニア水溶液で処理し、水性層をデカンテーションし、水で十分に洗浄した。得られた黒い半個体を減圧下で乾燥し、アセトニトリル(5 mL)でスラリー化し、得られた固体を濾過した。この固体を、アセトニトリル(10 mL)中で再び一晩スラリー化し、濾過し、乾燥して、生成物を褐色粉末として200 mg得た(単離収率34%)。
MP: 220-225oC
1H NMR (400 MHz, CD3OD+ TFA 2 drops) δ 3.31 , t (J=5.47 Hz), 2H, NCH2; 3.57, t (J=5.47 Hz), 2H, OCH2; 6.86, d (J=1.76 Hz), 1H; 6.96, dd (J=2.15, 6.84 Hz), 1H; 7.46, d (J=8.8 Hz), 1H; 7.5, crude dd, 1H; 7.87, d (J = 8.6Hz), 1H; 7.9-7.96, m, 2H; 8.24, d (J = 5.9 Hz), 1H; 8.28, d (J=1.4 Hz) , 1H; 8.7, d (J=8.0 Hz), 1H.
13C NMR (100 MHz, CD3OD+HOAc 1滴) : δ 44.0, 48.0, 70.9, 94.4, 113.4, 114.0, 115.2, 115.8, 121.6, 121.8, 122.6, 125.1, 128.5, 130.1, 137.3, 138.2, 146.7, 147.4, 149.7, 150.2, 153.3 (芳香族ピーク1つは重なっているかまたは非常に弱い).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 125.7
PF = 21.9
DMFm = 2.19
DMF10 = 1.66
(A) 2-ニトロ-5-チオモルフィン-4-イル-フェニルアミンの調製
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.6, m, 4H; 3.75 m, 4H; 5.95, d, (J=2.34 Hz), 1H; 6.1, s (broad), 2H; 6.18, dd (J=2.3, 7.3 Hz), 1H; 7.98, d (J=9.6 Hz)
2-ニトロ-5-チオモルフィン-4-イル-フェニルアミン(2.0 g, 8.4 mmol)の1:1の酢酸/エタノール(100 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(0.32 g)を添加した。得られた混合物を脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通して直接ろ過して、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (2.0 g, 8.1 mmol)が入った丸底フラスコに移し、次のカップリング工程に手順を進めた。
工程(i)から得られたスラリーを、窒素下、90℃で17時間加熱した後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた粘度が高い暗赤色オイルを、希アンモニア水溶液(水中5%, 20 ml)で処理し、激しく混合し、2日間4℃に置いた。次いで、上清をデカンテーションし、残渣をさらなる水で洗浄した。得られた固体を濾過し、濾過漏斗上で乾燥した後、ジエチルエーテルで洗浄した。これにより、粗生成物が暗赤色粉末として2.0 g得られた(粗収率66.9%)。この物質を、さらに精製することなく次の工程に直接用いた。
1H NMR (400 MHz, DMSO + TFA 1滴) δ 3.15, m, 4H; 3.5, m, 4H; 7.04, s 1H; 7.18, d (J=9.2 Hz), 1H; 7.23, dd, (J=1.85, 7.2 Hz), 1H; 7.57, d (J=8.9Hz), 8.0 dd (J=2.1, 7.0Hz), 1H; 8.89 d(J=2.15Hz), 1H.
2-ニトロ-4-(5-チオモルフィン-4-イル-1H-ベンズイミダゾール-2-イル)-フェニルアミン(1.0g, 2.8 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(80 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(240 mg)を添加した。得られた混合物を脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過し、1:1の酢酸エチル/メタノール(10 mL)で洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗4-(5-チオモルフィン-4-イル-1H-ベンズイミダゾール-2-イル)-ベンゼン-1,2-ジアミンを得、これを精製することなく次の工程に用いた。
粗4-(5-チオモルフィン-4-イル-1H-ベンズイミダゾール-2-イル)-ベンゼン-1,2-ジアミンをメタノール (40 ml)に溶解させた。これに、直前にメタノール(4 mL)中のナトリウムメトキシド(0.42 mmol)で処理(窒素下、40℃にて1時間)した2-シアノピリジン(427mg, 4.2 mmol)の溶液を添加した。この混合物に、酢酸(0.6 ml, 10.5 mmol)を添加した。
この混合物を、窒素下で一晩80℃に加熱した後、室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。次いで、残渣を5%アンモニア水溶液(60 mL)で処理し、30分後に水性層をデカンテーションしたところ、オイルが固化した。
この固体を水で十分に洗浄し、ろ過し、水で十分に洗浄し、濾過漏斗上で乾燥させた後、さらにアセトニトリルで洗浄した。これを乾燥して、生成物を橙色粉末として900 mg得た(収率77.6%)。
MP: 187-193 oC
1H NMR (400 MHz, CD3OD+ TFA 2 drops) δ 2.9 , m, 4H, S(CH2)2; 3.7, m, 4H, N(CH2)2; 7.48-7.54, m, 2H; 7.70, m, 1H; 7.77, dd (J=0.58, 8.4 Hz), 1H; 8.00, dd (J = 0.58, 8.0 Hz), 1H; 8.15, dt (J=1.76, 7.25 Hz), 1H; 8.24 dd (J=1.56, 7.03Hz), 1H; 8.4, d (J = 7.81 Hz), 1H; 8.61, m , 1H; 8.89, m, 1H.
13C NMR (100 MHz, CD3OD+HOAc 1 drop) : δ 27.0, 54.0, 101.9, 113.9, 115.1, 115.7, 116.7, 121.6, 121.9, 123.7, 124.9, 128.8, 133.3, 137.3, 138.1, 139.5, 140.4, 147.7, 149.7, 151.7, 153.1
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 31.3
PF = 16.4
DMFm = 1.53
DMF10 = 1.49
(A) 4-(3-アミノ-4-ニトロ-フェニル)-ピペラジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステルの調製
(i)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.4, s, 9H; 3.3, m, 4H; 3.45, m, 4H; 5.9, d (J=2.35 Hz), 1H; 6.15, s (broad), 2H; 6.22, dd (J=2.54, 7.23 Hz), 1H; 8.0, d (J=9.57 Hz), 1H
母液から有機層を分離し、水性層をジクロロメタンで抽出した(3x 100 mL)。合わせた有機層を、無水にし、蒸発させて、9bgのさらなる生成物を得た。合わせた固体により、生成物2-ニトロ-5-ピペラジン-1-イル-フェニルアミン22gが82.5%の収率で得られた。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2. 6, m, 4H; 3.1, m, 4H; 6.1, s, 1H; 6.25, d (J=8.99 Hz), 1H; 6.12, s (broad), 2H; 8.0, d (J=9.57 Hz), 1H
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.8, s, 6H; 3.35 , s, 8H; 5.9, d (J=2.74 Hz), 1H; 6.12, s (broad), 2H; 6.22, dd (J=2.54, 7.03 Hz), 1H; 8.0, d (J=9.57 Hz), 1H
4-(3-アミノ-4-ニトロ-フェニル)- ピペラジン-1-カルボン酸 ジメチルアミド(1.2 g, 4.1 mmol)の1:1の酢酸/エタノール(60 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(0.175 g)を添加した。得られた混合物を脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、窒素雰囲気下、セライトを通して直接ろ過して、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (1.0 g, 4.1 mmol)が入った丸底フラスコに移し、次のカップリング工程に手順を進めた。
工程(i)から得られたスラリーを、窒素下、90℃で24時間加熱した後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた粘度が高い黒色ガム状物を、希アンモニア水溶液(水中5%, 25 ml)で処理し、激しく混合し、1日間4℃に置いた。次いで、上清をデカンテーションし、さらなる水で洗浄した。得られた固体を濾過し、減圧下で乾燥した後、ジエチルエーテル(20 mL)で2日間洗浄およびスラリー化した。これにより、生成物4-[2-(4-アミノ-3-ニトロ-フェニル)-1H-ベンズイミダゾール-5-イル]-ピペラジン-1-カルボン酸 ジメチルアミドが橙色粉末として1.5 g得られた(粗収率89.8%)。この物質を、さらに精製することなく次の工程に直接用いた。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.7, s, 6H; 3.05 , m, 4H; 3.21, m, 4H; 6.87, dd (J=2.15, 6.6 Hz) 1H; 6.92 s, 1H; 7.09, d (J=9.0 Hz), 1H; 7.36, d (J=8.8 Hz), 1H; 7.7, s (broad), 2H; 8.1, dd (J=2.15, 6.84Hz), 1H; 8.7, d (J=2.15 Hz), 1H.
4-[2-(4-アミノ-3-ニトロ-フェニル)-1H-ベンズイミダゾール-5-イル]-ピペラジン-1-カルボン酸 ジメチルアミド(1.0g, 2.4 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(100 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(240 mg)を添加した。得られた混合物を脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過し、1:1の酢酸エチル/メタノール(10 mL)で洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗4-[2-(3,4-ジアミノ-フェニル)-1H-ベンズイミダゾール-5-イル]- ピペラジン-1-カルボン酸 ジメチルアミドを橙色固体として得、これを精製することなく次の工程に用いた。
粗4-[2-(3,4-ジアミノ-フェニル)-1H-ベンズイミダゾール-5-イル]-ピペラジン-1-カルボン酸 ジメチルアミド(2.5 mmol, 上記(i)のとおりに調製したもの)を、メタノール(40 ml)に溶解させた。これに、直前にメタノール(3.7 mL)中のナトリウムメトキシド(0.366 mmol)で処理(窒素下、40℃にて1時間)した2-シアノピリジン(380 mg, 3.66 mmol)の溶液を添加した。この混合物に、次に、酢酸(0.52 ml, 9.0 mmol)を添加した。
この混合物を、窒素下で1日間80℃に加熱した後、室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。次いで、残渣を5%アンモニア水溶液(60 mL)で処理し、2時間の間5℃に置き、水性層をデカンテーションし、水で十分に洗浄した。得られた粘性のある個体を減圧下で乾燥し、アセトニトリル中で2日間スラリー化した。これを濾過することにより、わずかに不純物を含む物質を褐色固体として450 mg得た(粗収率40.5%)。
150 mgのこの物質を、吸引式の焼結漏斗(sinter funnel)上のシリカゲルプラグ(6 cm x 3.5 cm)を通して溶出させた(シリカゲルは、メタノール性アンモニアで最初に処理し、生成物をエタノールで溶出させた)。これにより、生成物2-(5’-(5”-(4’’’-(ジメチルカルバモイル)ピペラジン-1’’’-イル)ベンズイミダゾール-2”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)ピリジンが、褐色粉末として75 mg得られた。MP: >230 oC。
1H NMR (400 MHz, CD3OD+ HOAc 1滴) δ 2.85, s, 6H, 2(CH3); 3.19 , m, 4H, N(CH2)2; 3.41, m, 4H, N(CH2)2; 7.04-7.12, m, 2H; 7.46, m, 1H 7.77, dd (J=0.39, 9.2 Hz), 1H; 8.00, dd (J = 0.58, 8.9 Hz), 1H; 7.9-7.98, m, 2H; 8.26-8.3, m, 2H; 8.7, m, 1H.
13C NMR (100 MHz), CD3OD+HOAc: δ 37.5, 50.7, 100.8, 114.2, 115.1, 115.6, 115.9, 121,6, 122.0, 123.6, 125.9, 137.4, 137.9, 147.8, 149.1, 149.8, 151.7, 153.3, 165.0 (芳香族ピーク3つが重なっているかまたは非常に弱い)。
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 119.9
PF = 34.6
DMFm = 1.82
DMF10 = 1.49
(A) N1-(2-メトキシエチル)-N1-メチル-4-ニトロ-ベンゼン-1,3-ジアミンの調製
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.0, s, 3H; 3.35, s, 3H; 3.9, m, 4H; 5.7, d (J=2.54 Hz), 1H; 6.0-6.3および6.22, d + broad s, overlapping, 3 H; 8.0, d (J=9.5 Hz), 1H
N1-(2-メトキシエチル)-N1-メチル-4-ニトロ-ベンゼン-1,3-ジアミン(1.0 g, 4.4 mmol)の1:1の酢酸 /エタノール(60 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(0.075 g)を添加した。得られた混合物を脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、窒素雰囲気下、セライトを通して直接ろ過して、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (1.09 g, 4.4 mmol)が入った丸底フラスコに移し、次の工程の手順を進めた。
工程(i)から得られたスラリーを、窒素下、80℃で36時間加熱した後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた粘度が高いガム状物を、希アンモニア水溶液(水中5%, 30 ml)で処理し、激しく混合し、2日間4℃に置いた。次いで、上清をデカンテーションし、さらなる水で洗浄した。得られた固体を濾過し、濾過漏斗上で乾燥した後、ジエチルエーテルでスラリー化した。これにより、粗生成物が粉末として1.0 g得られた(粗収率66.6 %)。この物質を、さらに精製することなく次の工程に直接用いた。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.96, s, 3H; 3.32, s, 3H; 3.42-3.58 two crude m (6H) ; 6.8, m, 2H; 7.07, d (J=8.6 Hz) 1H; 7.39, d (J=9.2 Hz) 1H; 8.0, d (J=9.77 Hz), 1H; 8.7, s 1H
[2-(4-アミノ-3-ニトロ-フェニル)-1H-ベンズイミダゾール-5-イル]-(2-メトキシエチル)-メチル-アミン(0.65 g, 1.9 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(50 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(100 mg)を添加し、混合物を脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過して、1:1の酢酸エチル/メタノール(10 mL)で洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗4-{5-[(2-メトキシエチル)-メチル-アミノ]-1H-ベンズイミダゾール-2-イル}-ベンゼン-1, 2-ジアミンを、粘度の高いオイルとして得た。これを、さらに精製することなく次の工程に用いた。
粗4-{5-[(2-メトキシエチル)-メチル-アミノ]-1H-ベンズイミダゾール-2-イル}-ベンゼン-1, 2-ジアミン(1.9 mmol, 上記(i)のとおりに調製したもの)を、メタノール(20 ml)に溶解させた。これに、直前にメタノール(2.9 mL)中のナトリウムメトキシド(0.29 mmol)で処理(窒素下、40℃にて1時間)した2-シアノピリジン(297 mg, 2.9 mmol)の溶液を添加した。この混合物に、次に、酢酸(0.415 ml, 7.25 mmol)を添加した。
この混合物を、窒素下で1日間80℃に加熱した後、室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。次いで、残渣を5%アンモニア水溶液で処理し、一晩5℃に置いた。次いで、水性層をデカンテーションし、残渣を水で洗浄し、減圧下で乾燥した。得られた半個体を、アセトニトリル中で一晩スラリー化して、褐色粉末を得た。これを濾過することにより、わずかに不純物を含む物質を褐色固体として250 mg得た(粗収率38.6%)。
150 mgのこの物質を、吸引式の焼結漏斗上のシリカゲルプラグ(6 cm x 3.5 cm)を通して溶出させた(シリカゲルは、メタノール性アンモニアで最初に処理し、生成物をジクロロメタン中5%のエタノールからジクロロメタン中10%のエタノールまでの勾配で溶出させた)。これにより、生成物2-(5’-(5”-((2’’’-メトキシエチル)(メチル)アミノ)ベンズイミダゾール-2”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)ピリジンが、暗赤色粉末として59 mg得られた。MP: 150〜155℃。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 2.99, s, 3H (NCH3); 3.37, s, 3H (OCH3); 3.51, t, (J=5.66 Hz) (3H) (CH2) ; 3.58, t, (J=5.47 Hz) (3H) (CH2); 6.8-6.9, m, 2H; 7.4-7.5 , m, 2H; 7.7, d (J = 8.2 Hz), 1H; 7.9-8.0, m, 2H; 8.2-8.3, m, 2H; 8.7, d (J=4.7 Hz) , 1H.
13C NMR (100 MHz , CD3OD+HOAc 1滴) : δ 38.8, 53.3, 57.9, 70.2, 95.5, 112.1, 113.9, 114.99, 115.7, 121.6, 121.7, 122.3, 124.9, 130.0, 136.9, 137.2, 140.4, 147.6, 147.7, 149.7, 149.8, 153.2 (1つの芳香族ピークは重なっているかまたは非常に弱い)
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 41.2
PF = 8.8
DMFm = 1.55
DMF10 = 1.32
(A) N1-[2-(2-メトキシエトキシ)-エチル]-4-ニトロ-ベンゼン-1,3-ジアミンの調製
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.2, q (J=5.28 Hz), 2H; 3.34, s, 3H; 3.5, m, 2H; 3.6, m, 2H; 3.65 , t (J=5.1 Hz), 2H; 5.6, d (J=2.54 Hz), 1H; 5.9, dd (J=2.35, 7.03 Hz), 1H, 6.20 broad s , 2H; 7.87, d (J=9.4 Hz), 1H
N1-[2-(2-メトキシエトキシ)-エチル]-4-ニトロ-ベンゼン-1,3-ジアミン(1.1 g, 4.3 mmol)の1:1の酢酸 /エタノール(60 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(0.075 g)を添加した。得られた混合物を脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。この反応混合物を、窒素雰囲気下、セライトを通して直接ろ過して、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (1.00 g, 4.1 mmol)が入った丸底フラスコに移し、次のカップリング工程に手順を進めた。
工程(i)から得られたスラリーを、窒素下、80℃で17時間加熱した後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた粘度が高いオイルを、希アンモニア水溶液(水中5%, 30 ml)で処理し、激しく混合し、一晩4℃に置いた。次いで、上清をデカンテーションし、さらなる水で洗浄した。得られた半固体を減圧下で乾燥し、ジエチルエーテル(150 mL)で1時間スラリー化した。生成物がまだ半固体の形態(1.4g, 88% crude yield)であったため、この物質を、さらなる精製を試みることなく次の工程に直接用いた。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.17 t (J=5.7 Hz), 2H; 3.2, s, 3H; 3.4, m, 2H; 3.5, m, 2H; 3.56 , t (J=6.1 Hz), 2H; 6.55, m, 2H; 7.1, d (J=8.8 Hz), 1H, 7.24, d (J=9.18 Hz), 8.64 , d (J=2.14 Hz), 1H
[2-(4-アミノ-3-ニトロ-フェニル)-1H-ベンズイミダゾール-5-イル]-(2-メトキシエチル)-メチル-アミン(0.8 g, 2.1 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(50 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(100 mg)を添加し、混合物を脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過して、1:1の酢酸エチル/メタノール(10 mL)で洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗4-{5-[2-(2-メトキシエトキシ)-エチルアミノ]-1H-ベンズイミダゾール-2-イル}-ベンゼン-1,2-ジアミンを、粘度の高いオイルとして得た。これを、さらに精製することなく次の工程に用いた。
粗4-{5-[2-(2-メトキシエトキシ)-エチルアミノ]-1H-ベンズイミダゾール-2-yl}-ベンゼン-1, 2-dジアミン(2.1 mmol, 上記(i)のとおりに調製したもの)を、メタノール(25 ml)に溶解させた。これに、直前にメタノール(2.9 mL)中のナトリウムメトキシド(0.32 mmol)で処理(窒素下、40℃にて1時間)した2-シアノピリジン(336 mg, 3.2 mmol)の溶液を添加した。この混合物に、次に、酢酸(0.46 ml, 8.0 mmol)を添加した。
この混合物を、窒素下で1日間80℃に加熱した後、室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。次いで、残渣を5%アンモニア水溶液で処理し、3時間5℃に置いた。次いで、水性層をデカンテーションし、残渣を水で洗浄し、減圧下で乾燥した。得られた半個体を、ジエチルエーテル中でまずスラリー化した後、アセトニトリルで一晩スラリー化した。これを濾過することにより、わずかに不純物を含む物質を褐色粉末として得た(粗収率49 %)。
100 mgのこの物質を、吸引式の焼結漏斗上のシリカゲルプラグ(6 cm x 3.5 cm)を通して溶出させた(生成物をジクロロメタン中2%のエタノールからジクロロメタン中120%のエタノールまでの勾配で溶出させた)。これにより、生成物2-(5’-(5”-(2’’’-(2””-メトキシエトキシ)エチルアミノ)ベンズイミダゾール-2”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)ピリジンが、暗赤褐色粉末として25 mg得られた。MP: 183〜186℃。
MP: 183〜186 oC
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 3.3, m, 2H , (CH2); 3.39, s, 3H, (CH3) ; 3.59, m, 2H, (CH2) ; 3.6 , m, 2H, (CH2); 3.7, t (J=5.5 Hz), 2H, (CH2); 6.7, dd (J=1.56, 7.2 Hz), 1H; 6.8, s, 1H; 7.4 , d (J=8.6 Hz), 1H; 7.44, crude t, 1H; 7.72, d (J = 8.4 Hz), 1H; 7.88-7.98 , m, 2H; 8.2-8.3, m, 2H; 8.7, crude d, 1H.
13C NMR (100 MHz, CD3OD+ 1drop HOAc): 44.0, 57.9, 69.4, 69.9, 71.8, 94.3, 113.1, 113.6, 115.1, 115.7, 121.5, 122.5, 124.8, 128.4, 137.0, 138.2, 139.1, 140.3, 143.8, 146.4, 147.4, 149.5, 150.1, 152.9,
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 173.0
PF = 171.5
DMFm = 2.70
DMF10 = 1.50
(A) 5-[4-(2-メトキシエチル)-ピペラジン-1-イル]-2-ニトロ-フェニルアミンの調製
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.40-2.50, m, 6H; 3.19, s, 3H; 3.25, m, 4H; 3.41, t (J=5.9 Hz), 2H; 6.16, d (J=2.7 Hz), 1H; 6.34, dd (J=2.54, 7.23 Hz), 1H, 7.20 broad s , 2H; 7.76, d (J=9.8 Hz), 1H
5-[4-(2-メトキシエチル)-ピペラジン-1-イル]-2-ニトロ-フェニルアミン(1.0 g, 3.6 mmol)の1:1の酢酸/エタノール(60 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(0.075 g)を添加した。得られた混合物を脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、窒素雰囲気下、セライトを通して直接ろ過して、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (0.83 g, 3.4 mmol)が入った丸底フラスコに移し、次のカップリング反応に手順を進めた。
工程(i)から得られたスラリーを、窒素下、80℃で24時間加熱した後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた粘度が高いガム状物を、希アンモニア水溶液(水中5%, 30 ml)で処理し、激しく混合し、1日間4℃に置いた。次いで、上清をデカンテーションし、残渣をさらなる水で洗浄した。得られた固体をろ過し、濾過漏斗上で乾燥した後、ジエチルエーテルでスラリー化した。これにより、粗生成物が、橙色粉末として1.0 g得られた(粗収率74.6 %)。この物質を、さらに精製することなく次の工程に直接用いた。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.40-2.60, m, 6H; 3.0-3.10, m, 4H; 3.20, s, 3H; 3.42, t (J=5.9 Hz), 2H; 8.7, m, 1H, 8.1, d (J=9.18 Hz), 1H; 7.4, d (J=8.6 Hz), 1H; 7.1 (d (J=8.9 Hz), 6.8-6.9, m, 2H
4-{5-[4-(2-メトキシエチル)-ピペラジン-1-イル]-1H-ベンズイミダゾール-2-イル}-2-ニトロ-フェニルアミン(0.5 g, 1.2 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(60 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(100 mg)を添加し、混合物をまず脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過して、1:1の酢酸エチル/メタノール(10 mL)で洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗4-{5-[4-(2-メトキシエチル)-ピペラジン-1-イル]-1H-ベンズイミダゾール-2-イル}-ベンゼン-1,2-ジアミンを、粘度の高いオイルとして得た。これを、さらに精製することなく次の工程に用いた。
粗4-{5-[4-(2-メトキシエチル)-ピペラジン-1-イル]-1H-ベンズイミダゾール-2-イル}-ベンゼン-1,2-ジアミン(1.2 mmol, 上記(i)のとおりに調製したもの)を、メタノール(20 ml)に溶解させた。これに、直前にメタノール(1.8 mL)中のナトリウムメトキシド(0.18 mmol)で処理(窒素下、40℃にて1時間)した2-シアノピリジン(190 mg, 1.8 mmol)の溶液を添加した。この混合物に、次に、酢酸(0.26 ml, 4.6 mmol)を添加した。
この混合物を、窒素下で1日間80℃に加熱した後、室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。次いで、残渣を5%アンモニア水溶液で処理し、一晩5℃に置いた。次いで、水性層をデカンテーションし、残渣を水で洗浄し、減圧下で乾燥した。得られた半個体を、アセトニトリルで2日間にわたってスラリー化すると、淡褐色粉末が得られた。これを濾過し、アセトニトリルで洗浄することにより、生成物2-(5’-(5”-(4’’’-(2””-メトキシエチル)ピペラジン-1’’’-イル)ベンズイミダゾール-2”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)ピリジンを淡褐色粉末として得た(収率55.1%)。MP: 164〜166℃。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 2.62, t (J=5.7 Hz), 2H, CH2; 2.70, m, 4H, N(CH2)2; 3.0-3.10, m, 4H, N(CH2)2; 3.20, s, 3H; 3.42, t (J=5.4 Hz), 2H; 7.0, dd (J=2.15, 6.64 Hz), 1H; 7.08 , s, 1H; 7.4-7.5 , m, 2H; 7.7, d (J = 8.0 Hz), 1H; 7.9-8.0, m, 2H; 8.2-8.3, m, 2H; 8.69, crude d, 1H.
13C NMR (100 MHz, CD3OD+ 1drop HOAc): δ 49.3, 52.9, 56.8, 57.9, 68.2, 101.1, 113.7, 115.1, 115.4, 115.7, 121.5, 121.9, 124.8, 134.4, 137.1, 138.7, 139.3, 140.2, 147.7, 147.8, 149.6, 152.1, 152.8 (芳香族ピーク1つは重なっているかまたは非常に弱い)
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 80.7
PF = 20.2
DMFm = 1.98
DMF10 = 1.77
(A) 2-[4-(3-アミノ-4-ニトロ-フェニル)-ピペラジン-1-イル]-エタノールの調製
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.50-2.60, m, 6H; 3.30, m, 4H; 3.60, m, 2H; 5.9, crude d (J=2.15 Hz), 1H; 6.1 broad s, 2H; 6.25, crude dd (not resolved), 1H, 7.76, d (J=9.77 Hz), 1H
2-[4-(3-アミノ-4-ニトロ-フェニル)-ピペラジン-1-イル]-エタノール(1.75 g, 6.6 mmol)の1:1の酢酸/エタノール(100 ml)中の溶液に、窒素下で、5%活性炭担持パラジウム(0.150 g)を添加した。得られた混合物を脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、窒素雰囲気下、セライトを通して直接ろ過して、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (1.50 g, 6.3 mmol)が入った丸底フラスコに移し、次のカップリング工程に手順を進めた。
工程(i)から得られたスラリーを、窒素下、80℃で1日間加熱した後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた粘度が高い半固体を、希アンモニア水溶液(水中5%, 30 ml)で処理し、激しく混合し、1日間4℃に置いた。次いで、上清をデカンテーションし、残渣をさらなる水で洗浄した。得られた固体をろ過し、濾過漏斗上で乾燥した後、ジエチルエーテルで洗浄した。これにより、粗生成物が、レンガ橙色粉末として1.9 g得られた(粗収率79.2 %)。この物質を、さらに精製することなく次の工程に直接用いた。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6+TFA) δ 3.1, crude t, 2H; 3.20, broad m, 4H; 3.60 , broad d, 2H; 3.7 broad m, 2H, 3.85, broad d, 2H, 7.6, s, 1H; 7.2, d (J=9.18 Hz), 1H; 7.27, d (d=7.62 Hz), 1H; 8.04 , d (J=8.8 Hz), 1H; 8.9, s, 1H
2-{4-[2-(4-アミノ-3-ニトロ-フェニル)-1H-ベンズイミダゾール-5-イル]-ピペラジン-1-イル}-エタノール(1.0 g, 2.6 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(100 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(200 mg)を添加し、混合物をまず脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過して、1:1の酢酸エチル/メタノール(10 mL)で洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗2-{4-[2-(3,4-ジアミノ-フェニル)-1H-ベンズイミダゾール-5-イル]-ピペラジン-1-イル}-エタノールを、赤色固体として得た。これを、さらに精製することなく次の工程に用いた。
粗2-{4-[2-(3,4-diアミノ-フェニル)-1H-ベンズイミダゾール-5-イル]-ピペラジン-1-イル}-エタノール(2.6 mmol, 上記(i)のとおりに調製したもの)を、メタノール(40 ml)に溶解させた。これに、直前にメタノール(4.0 mL)中のナトリウムメトキシド(0.32 mmol)で処理(窒素下、40℃にて1時間)した2-シアノピリジン(408 mg, 3.9 mmol)の溶液を添加した。この混合物に、次に、酢酸(0.55 ml, 9.83 mmol)を添加した。
この混合物を、窒素下で1日間80℃に加熱した後、室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。次いで、残渣を5%アンモニア水溶液で処理し、一晩5℃に置いた。次いで、水性層をデカンテーションし、残渣を水で洗浄し、減圧下で乾燥した。得られた半個体を、アセトニトリルで一晩スラリー化すると、赤褐色粉末が得られた。これを濾過することにより、わずかに不純物を含む物質800 mgを褐色粉末として得た(粗収率52.6%)。
100 mgのこの物質を、吸引式の焼結漏斗上のシリカゲルプラグ(6 cm x 3.5 cm)を通して溶出させた(シリカゲルを最初にメタノール性アンモニアで処理し、生成物をエタノールからエタノール中10%のメタノール性アンモニアまでの勾配で溶出させた)。これにより、生成物2-(5’-(5”-(4’’’-(2””-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1’’’-イル)ベンズイミダゾール-2”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)ピリジンが、暗赤褐色粉末として44 mg得られた。MP: 218〜221℃。
MP: 218-221 oC
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 2.5, t (J=5.7 Hz), 2H, CH2; 2.70, m, 4H, N(CH2)2; 3.10, m, 4H N(CH2)2; 3.62, t (J=5.4 Hz), 2H, CH2; 6.94, dd (J=2.15, 6.64 Hz), 1H; 7.03, broad s, 1H; 7.34-7.42 , m, 2H; 7.66, broad d, 1H; 7.82-7.9 , m, 2H; 8.20-8.25, m, 2H; 8.63, crude d, 1H.
13C NMR (100 MHz), CD3OD+HOAc: δ 52.4, 55.5, 58.5, 102.0, 114.3, 115.1, 115.7 121.7, 122.1, 124.0, 125.1, 133.8, 137.4, 138.8, 139.7, 142.4, 147.4, 147.8, 149.8, 152.5, 153.5 (芳香族ピーク1つは重なっているかまたは非常に弱い).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 90.6
PF = 19.6
DMFm = 1.95
DMF10 = 1.44
(A) N1-モルホリン-4-イル-4-ニトロ-ベンゼン-1,3-ジアミンの調製
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.30, m, 4H, N(CH2)2; 3.80 , m, 4H, O(CH2)2; 5.9, d (J=2.55 Hz), 1H; 6.1 broad s , 2H; 6.25, dd (J=2.54, 7.03 Hz), 1H, 8.0, d (J=9.8 Hz), 1H
N1-モルホリン-4-イル-4-ニトロ-ベンゼン-1,3-ジアミン(1.0 g, 4.2 mmol)の1:1の酢酸/エタノール(50 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(0.075 g)を添加した。えら得た混合物を脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、窒素雰囲気下、セライトを通して直接ろ過して、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (0.98 g, 4.0 mmol)が入った丸底フラスコに移し、次の工程に手順を進めた。
工程(i)から得られたスラリーを、窒素下、80℃で24時間加熱した後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた粘度が高いガム状物を、希アンモニア水溶液(水中5%, 30 ml)で処理し、激しく混合し、一晩4℃に置いた。次いで、上清をデカンテーションし、残渣をさらなる水で洗浄した。得られた固体をろ過し、濾過漏斗上で乾燥した後、ジエチルエーテルで洗浄した。これにより、粗生成物が、暗赤色粉末として1.0 g得られた(粗収率70.9 %)。この物質を、さらに精製することなく次の工程に直接用いた。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6 + TFA 1滴) δ 3.10, m, 4H,; 3.70, m, 4H; 7.0, s, 1H; 7.3, m, 2H; 7.55, d, (J=8.4 Hz) 1H; 8.0, d (J=8.4 Hz), 1H; 8.1 (broad s), 2H; 8.85, s, 1H
[2-(4-アミノ-3-ニトロ-フェニル)-1H-ベンズイミダゾール-5-イル]-モルフィン-4-イル-アミン(0.5 g, 1.4 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(50 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(100 mg)を添加し、混合物をまず脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過して、1:1の酢酸エチル/メタノール(10 mL)で洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗4-[5-(モルフィン-4-イルアミノ)-1H-ベンズイミダゾール-2-yl]-ベンゼン-1,2-ジアミンを、粘度の高いオイルとして得た。これを、さらに精製することなく次の工程に用いた。
粗4-[5-(モルホリン-4-イルアミノ)-1H-ベンズイミダゾール-2-イル]-ベンゼン-1,2-ジアミン(1.4 mmol, 上記(i)のとおりに調製したもの)を、メタノール(20 ml)に溶解させた。これに、直前にメタノール(2.1 mL)中のナトリウムメトキシド(0.21 mmol)で処理(窒素下、40℃にて1時間)した2-シアノピリジン(219 mg, 2.1 mmol)の溶液を添加した。この混合物に、次に、酢酸(0.300 ml, 5.25 mmol)を添加した。
この混合物を、窒素下で36時間80℃に加熱した後、室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。次いで、残渣を5%アンモニア水溶液で処理し、5時間5℃に置いた。次いで、水性層をデカンテーションし、残渣を水で洗浄し、減圧下で乾燥した。得られた半個体を、アセトニトリルで36時間スラリー化すると、褐色粉末が得られた。これを濾過することにより、わずかに不純物を含む物質200 mgを褐色粉末として得た(粗収率35.1%)。
100 mgのこの物質を、シリカゲルカラム(2 cm x 14 cm)を通すクロマトグラフィーにかけた(物質をジクロロメタン中5%のエタノールからジクロロメタン中100%のエタノールまでの勾配で溶出させた)。これにより、生成物2-(5’-(5”-(モルホリノアミノ)ベンズイミダゾール-2’’-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)ピリジンが、暗赤褐色粉末として40 mg得られた。
MP: 198〜205℃
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 3.10, m, 4H, N(CH2)2; 3.80, m, 4H, O(CH2)2; 6.98, dd (J=2.15, 6.64 Hz), 1H; 7.03, s, 1H; 7.40-7.48, m, 2H; 7.68, d (J=8.4 Hz), 1H; 7.82-7.94 , m, 2H; 8.20-8.25, m, 2H; 8.63, broad d (J=4.3 Hz), 1H.
13C NMR (100 MHz, CD3OD+HOAc 1滴): δ 50.7, 66.7, 99.7, 114.1, 114.9, 115.2, 115.7, 121.6, 121.8, 122.7, 125.0, 132.1, 137.3, 139.9, 147.6, 149.2, 149.3, 149.7, 151.1, 153.2 (芳香族ピーク1つは重なっているかまたは非常に弱い).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 206.4
PF = 17.8
DMFm = 1.86
DMF10 = 1.38
1H NMR (400 MHz, CD3OD + TFA) δ 2.94, s, 6H, N(CH3)2; 3.40, t (J=5.9 Hz), 2H, NCH2; 3.60, t (J=5.9 Hz), 2H, NCH2; 6.95, d (J=1.76 Hz), 1H; 7.02, dd (J=2.15, 6.80Hz) , 1H; 7.56, d (J=8.8 Hz), 1H; 7.70, dq (J=0.98, 3.91, 1.95 Hz), 1H; 8.06-8.22, m, 3H; 8.4 , m, 1H, H3; 8.56, m, 1H; 8.86, m, 1H.
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 117.7
PF = 11.2
DMFm = 1.61
DMF10 = 1.28
1H NMR (400 MHz, CD3OD + TFA) δ 3.00, s, 6H, N(CH3)2; 3.70, t (J=4.9 Hz), 2H, NCH2; 4.5, t (J=4.9 Hz), 2H, OCH2 ; 7.30, dd (J=2.35, 6.60Hz), 1H; 7.40, d (J=1.95 Hz), 1H ; 7.60, broad m, 1H; 7.74, d (J=8.99 Hz), 1H; 8.00-8.20, m, 3H; 8.4, d (J=7.82 Hz), 1H; 8.56, broad s, 1H; 8.80, broad m, 1H.
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 145.6
PF = 17.6
DMFm = 1.88
DMF10 = 1.50
(A) 2-ニトロ-5-(テトラヒドロピリダジン-1-イル)-フェニルアミンの調製
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ1.8 (m, 4H); 3.1 (m, 2H); 3.5 (m, 2H); 6.37, (dd, 1H); 6.41, (d, 1H); 7.95, (d, 1H)
2-ニトロ-5-(テトラヒドロピリダジン-1-イル)-フェニルアミン(1.6 g, 7.2 mmol)の1:1の酢酸/エタノール(100 ml)中の溶液に、窒素下で、5%活性炭担持パラジウム(0.20 g)を添加した。得られた混合物を脱気した後、水素雰囲気下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、窒素雰囲気下、セライトを通して直接ろ過して、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (1.9 g, 7.9 mmol)が入った丸底フラスコに移し、次のカップリング工程に手順を進めた。
工程(i)から得られたスラリーを、窒素下、80〜90℃で36時間加熱した後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた紫色オイルを、希アンモニア水溶液(水中3%, 50 ml)で処理し、激しく混合し、一晩4℃に置いた。適切な量の沈殿が無かったため(底に半固体が少量濃化していた)、溶液をデカンテーションし、両方の部分(濃化した半固体および水性フラクション)を別個に蒸発させて水を除去した。次いで、得られた濃い液体を、無水エタノールで共蒸発させて、残った水を共沸によって除去した。両方のフラクションに生成物が含まれていた。半固体フラクションの純度がより高い一方、水性フラクションは1.7 gあったがそれほど純度が高くなかった。合計粗収率は83.3%であった。この粗生成物を、さらに精製することなく次の工程に用いた。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ1.6 (m, 4H); 2.8 (m, 2H); 3.0 (m, 2H); 7.02, (d, 1H); 7.08, (d, 1H); 7.8, (dd, 1H); 7.9, (broad peak, 1H), 8.08 (dd, 1H); 8.5 (d, 1H).
2-ニトロ-4-[5-(テトラヒドロピリダジン-1-イル)-1H-ベンズイミダゾール-2-イル]-フェニルアミン(1.99 g, 5.9 mmol)の2:1の酢酸エチル/メタノール(150 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(240 mg)を添加し、混合物をまず脱気した後、水素雰囲気下(バルーン)、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過し、メタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗ジアミンを、紫色オイルとして得た。これを、精製することなく次の工程に用いた。
粗ジアミン(上述したとおりに調製したもの)を、メタノール(125 ml)に溶解させた。これに、直前にメタノール(12 mL)中のナトリウムメトキシド(0.85 mmol)で処理(窒素下、40℃にて1時間)した2-シアノピリジン(884 mg, 8.5 mmol)の溶液を添加した。これら全ての混合物に、酢酸(1.2 ml, 21 mmol)を添加した。
この混合物を、窒素下で1日間80℃に加熱した後、室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。次いで、得られたえび茶色の残渣を5%アンモニア水溶液(30 ml)で処理し、1日間5℃に置いた。次いで、水性層をデカンテーションし、残渣を水で十分に洗浄してデカンテーションした。得られた残渣を、無水エタノールを用いて共蒸発させて水を除去し、アセトニトリル中で一晩スラリー化した。このアセトニトリルをデカンテーションし、得られた半固体を乾燥した。これをにより、生成物が暗赤色半固体として1 g得られた(粗収率43.4%)。
0.4 gのこの物質を、メタノール中1%のトリエチルアミンで予め処理した1.2 gのシリカゲルに予め吸着させた。これを、2x10 cmのシリカゲルカラム(2 cm x 14 cm)(ジクロロメタン中の20%メタノール+1%のトリエチルアミンで平衡化させておいたもの)にチャージし、ジクロロメタン中の20%メタノール(+ 1%トリエチルアミン)からジクロロメタン中の100%メタノール(+ 1%トリエチルアミン)、さらに最終的にはメタノール中の10%のメタノール性アンモニアまでの勾配で溶出させた。生成物は、主としてメタノール中の10%のメタノール性アンモニアで溶出した。溶媒を除去すると、240 mgの生成物が得られた。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 1.8 (m, 2H); 3.15 (m, 2H); 3.4 (m, 2H); 6.68 (m, 1H); 6.72 (unresolved, 1H); 7.3-7.4 (m, 2H); 7.8 (m, 1H); 7.9 (m, 2H), 8.25 (m, 1H); 8.3 (d, 1H), 8.7 (d, 1H).
(A) 5-(N',N'-ジメチルヒドラジノ)-2-ニトロ-フェニルアミンの調製
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.0 (s, 6H); 5.7, (d, 1H); 6.1, (dd, 1H); 7.95, (d, 1H)
5-(N',N'-ジメチルヒドラジノ)-2-ニトロ-フェニルアミン(1.56 g, 8.0 mmol)の1:1の酢酸/エタノール(100 ml)中の溶液に、窒素下で、5%活性炭担持パラジウム(0.20 g)を添加した。得られた混合物を脱気した後、水素雰囲気(バルーン)下、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、窒素雰囲気下、セライトを通して直接ろ過して、エチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(7) (2.0 g, 8.0 mmol)が入った丸底フラスコに移し、次のカップリング工程に手順を進めた。この還元生成物は不安定であるようであり、急速に暗色化する。
工程(i)から得られたスラリーを、窒素下、80〜90℃で72時間加熱した後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた紫色オイルを、希アンモニア水溶液(水中3%, 60 ml)で処理し、激しく混合し、一晩4℃に置いた。上清をデカンテーションし、沈殿を再び水で洗浄し、デカンテーションし、残った水を蒸発によって除去した。
得られた固体を、エーテル(100 mL)中で一晩スラリー化し、濾過して、褐色固体1.9 gを得た(粗収率76%)。
この粗生成物を、さらに精製することなく次の工程に用いた。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ3.0, (s, 6H); 6.7, (d, 1H); 7.08, (d, 1H); 7.3, (d, 1H); 7.7, (s, 1H), 8.1 (dd, 1H); 8.65 (d, 1H).
粗2-ニトロ-4-[5-(テトラヒドロピリダジン-1-イル)-1H-ベンズイミダゾール-2-yl]-フェニルアミン(1.0 g, 3.2 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(100 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(200 mg)を添加し、混合物をまず脱気した後、水素雰囲気下(バルーン)、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過し、メタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗ジアミンを、暗褐色オイルとして得た。これを、精製することなく次の工程に用いた。
粗ジアミン(上述したとおりに調製したもの)を、メタノール(50 ml)に溶解させた。これに、直前にメタノール(5 mL)中のナトリウムメトキシド(0.48 mmol)で処理(窒素下、40℃にて1時間)した2-シアノピリジン(499 mg, 4.8 mmol)の溶液を添加した。これら全ての混合物に、酢酸(0.67 ml, 12 mmol)を添加した。
この混合物を、窒素下で1日間80℃に加熱した後、室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。次いで、得られた赤褐色の残渣を5%アンモニア水溶液(20 ml)で処理し、1日間5℃に置いた。固体が形成されなかったが粗生成物が粘度の高いオイルとして容器のそこに分離した。次いで、水性層をデカンテーションし、残渣を水で十分に洗浄し、得られた暗赤色フィルムをアセトニトリルと共に撹拌して、粗固体0.5gを得た(粗収率42%)。この固体0.25gを、酢酸エチル中1%のトリエチルアミンで平衡化させた2x9シリカゲルカラム上、酢酸エチル中1〜10%のメタノールで溶出させるクロマトグラフィーにかけた。生成物65 mgを、暗赤褐色固体として単離した。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 3.0 (s, 6H); 6.9 (m, 2H); 7.44 (m, 2H); 7.7 (unresolved d, 1H); 7.9 (m, 2H); 8.26 (m, 2H), 8.68 (d, 1H).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 74.6
PF = 27.9
DMFm = 1.71
DMF10 = 1.29
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 5滴のd-TFA) δ 3.00, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.21, t (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.34, m (obs), NCH2; 3.69, d (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.96, d (J = 13.5 Hz), 2H, NCH2; 7.32, d (J = 1.5 Hz), 1H, H4”; 7.41, dd (J = 2.5, 9.0 Hz), 1H, H6”; 7.73, d (J = 9.0 Hz), 1H, H7”; 7.90, ddd (J = 3.0, 8.5, 8.5 Hz), 1H, H4; 8.02, dd (J = 0.5, 8.5 Hz), 1H, H7’; 8.14, dd (J = 1.8, 8.8 Hz), 1H, H6’; 8.46, dd (J = 4.0, 8.5 Hz), 1H, H3; 8.53, dd (J = 0.5, 1.5 Hz), 1H, H4’; 8.74, d (J = 3.0 Hz), 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 5滴のHOAc) δ 43.6, 4’’’-MeN; 49.3, C2’’’/6’’’; 54.6, C3’’’/5’’’; 102.5, C4”; 115.0, 116.3, 116.8 (overlap), C4’, C6”, C7’, C7”; 122.9, C6’; 124.0, C5’; 124.2, d (3JCF = 5 Hz), C3; 125.0, d (2JCF = 19 Hz), C4; 134.1, C7a”; 138.8, C3a’ or C3a”; 139.0, d (2JCF = 25 Hz), C6; 140.3, C3a” or C3a’; 141.5, C7a’; 145.0, C2; 148.5, C5”; 152.7, 153.1, C2’, C2”; 161.4, d (1JCF = 258 Hz), C5. MS (ESI +ve) m/z 428 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 428.19934, C24H23FN7の理論質量:428.19935 (△= 0.0 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 537.5
PF = 40.0
DMFm = 2.46
DMF10 = 2.20
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 5滴のd-TFA) δ 3.01, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.21, t (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.35, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.96, d (J = 13.6 Hz), 2H, NCH2; 7.32, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4”; 7.41, dd (J = 2.5, 9.2 Hz), 1H, H6”; 7.73, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7”; 7.88, m, 1H, H5; 8.01, dd (J = 0.6, 8.6 Hz), 1H, H7’; 8.09, dd (J = 2.5, 8.8 Hz), 1H, H6’; 8.52, m, 1H, H4’; 8.66, s, 1H, H3; 9.05, d (J = 4.8 Hz), 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 5滴のHOAc) δ 43.6, 4’’’-MeN; 49.4, C2’’’/6’’’; 54.7, C3’’’/5’’’; 102.7, C4”; 115.4, 116.4, 116.8, 117.1, C4’, C6”, C7’, C7”; 118.0, 121.2, C3, C5; 123.4, C6’; 124.1, q (1JCF = 273 Hz), 4-F3C; 124.9, C5’; 134.6, C7a”; 139.2, C3a’ or C3a”; 140.3, d (2JCF = 34 Hz), C4; 140.5, C3a” or C3a’; 141.4, C7a’; 148.5, C5”; 150.2, C2; 152.2, C6; 152.7, 152.9, C2’, C2”. MS (ESI +ve) m/z 478 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 478.19599, C25H23F3N7の理論質量:478.19615 (△= 0.3 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 23.3
PF = 63.8
DMFm = 2.75
DMF10 = 2.58
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 5滴のd-TFA) δ 3.00, s, 3H, 4’’’-MeN; 3.21, t (J = 12.0 Hz), 2H, NCH2; 3.34, m (obs), NCH2; 3.68, d (J = 12.4 Hz), 2H, NCH2; 3.97, d (J = 12.8 Hz), 2H, NCH2; 7.32, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4”; 7.41, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H6”; 7.73, d (J = 9.2 Hz), 1H, H7”; 8.02, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7’; 8.09, dd (J = 1.8, 8.6 Hz), 1H, H6’; 8.38, dd (J = 1.6, 8.4 Hz), 1H, H4; 8.53, d (J = 1.2 Hz), 1H, H4’; 8.56, d (J = 8.4 Hz), 1H, H3; 9.11, s, 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 5滴のHOAc) δ 43.6, 4’’’-MeN; 49.4, C2’’’/6’’’; 54.7, C3’’’/5’’’; 102.7, C4”; 115.3, 116.4, 116.8, 117.2, C4’, C6”, C7’, C7”; 122.4, C3; 123.4, C6’; 124.8, q (1JCF = 271 Hz), 5-CF3; 125.1, C5’; 127.9, q (2JCF = 33 Hz), C5; 134.8, C7a”; 135.7, C4; 139.4, 140.5, C3a’, C3a”; 141.5, C7a’; 147.5, C6; 148.5, C5”; 152.0, 152.5, 152.9, C2, C2’, C2”. MS (ESI +ve) m/z 478 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 478.19601, C25H23F3N7の理論質量:478.19615 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 12.2
PF = 33.1
DMFm = 2.38
DMF10 = 2.21
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 2.00, m, 2H, H3’’’/H5’’’; 2.25, m, 2H, H3’’’/5’’’; 2.58, s, 3H, 4-Me; 3.61, m, 2H, H2’’’/6’’’; 3.91, m, 2H, H2’’’/6’’’; 4.09, tt (J = 3.5, 7.0 Hz), 1H, H4’’’; 7.58, dq (J = 5.0, 0.7 Hz), 1H, H5; 7.74, dd (J = 2.2, 8.8 Hz), 1H, H6”; 7.92, d (J = 8.5 Hz), 1H, H7”; 7.99, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4”; 8.07, dd (J = 0.8, 8.8 Hz), 1H, H7’; 8.27, m, 2H, H3, H6’; 8.64, dd (J = 0.5, 1.5 Hz), 1H, H4’; 8.73, d (J = 5.0 Hz), 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 5滴のHOAc) δ 21.1, 4-Me; 34.8, C3’’’/5’’’; 49.7, C2’’’/6’’’; 68.0, C4’’’; 101.0, C4”; 115.1, 115.5, 116.9, 117.6, C4’, C6”, C7’, C7”; 121.5, C5’; 122.6, 123.4, 126.9, C3, C5, C6’; 130.9, C7a”; 136.9, C3a”; 140.0, C3a’; 141.6, C7a’; 148.0, C2; 149.9, 150.1, C4, C5”; 150.4, C6; 150.9, 154.3, C2’, C2”. MS (ESI +ve) m/z 425 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 425.20844, C25H25N6Oの理論質量:425.20844 (△= 0.0 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 134.3
PF = 23.5
DMFm = 1.79
DMF10 = 1.33
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 2.00, m, 2H, H3’’’/H5’’’; 2.24, m, 2H, H3’’’/5’’’; 2.51, s, 3H, 5-Me; 3.60, m, 2H, H2’’’/6’’’; 3.91, m, 2H, H2’’’/6’’’; 4.09, tt (J = 3.5, 7.0 Hz), 1H, H4’’’; 7.72, dd (J = 2.5, 9.0 Hz), 1H, H6”; 7.91, d (J = 8.5 Hz), 1H, H7”; 7.97, m, 2H, H4, H4”; 8.06, d (J = 8.8 Hz), 1H, H7’; 8.28, m, 2H, H3, H6’; 8.62, d (J = 1.5 Hz), 1H, H4’; 8.75, m, 1H, H6. 13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 5滴のHOAc) δ 18.4, 5-Me; 34.9, C3’’’/5’’’; 49.7, C2’’’/6’’’; 68.0, C4’’’; 100.9, C4”; 115.0, 115.4, 116.7, 117.5, C4’, C6”, C7’, C7”; 121.2, C5’; 122.2, 122.4, C3, C6’; 130.7, C7a”; 136.5, C5; 136.8, C3a”; 138.4, C4; 139.9, C3a’; 141.5, C7a’; 145.5, C2; 150.0, C5”; 150.8, C2’ or C2”; 151.0, C6; 154.3, C2” or C2’. MS (ESI +ve) m/z 425 (MH+, 100%). HRMS (ESI +ve) m/z 425.20846, C25H25N6Oの理論質量:425.20844 (△= 0.1 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 123.9
PF = 58.7
DMFm = 2.07
DMF10 = 1.90
(A) 5-(cis-2’,6’-ジメチルモルホリノ)-2-ニトロアニリンの調製
1H nmr1 (400 MHz, CDCl3) δ 1.26, d (J = 6.4 Hz), 6H, 2’,6’-diMe; 2.56, dd (J = 10.8, 12.4 Hz), 2H, H3’/5’; 3.58, m, 2H, H3’/5’; 3.72, m, 2H, H2’/6’; 5.94, d (J = 2.8 Hz), 1H, H6; 6.14, br, 2H, 1-NH2; 6.27, dd (J = 2.8, 9.6 Hz), 1H, H4; 8.02, d (J = 9.6 Hz), 1H, H3.
参考文献10: WO 02/20500A2
5-(cis-2’,6’-ジメチルモルホリノ)-2-ニトロアニリン(1.26 g, 5.03 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(75 ml)中の溶液に、5%活性炭担持パラジウム(0.24 g)を添加した。得られた反応混合物を、水素雰囲気下、25時間撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過し、濾過した固体をメタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗液を減圧下で濃縮して、粗2-アミノ-4-(cis-2’,6’-ジメチルモルホリノ)アニリンを得た(1.08 g, 97%)。これを次の工程に即座に用いた。
(ii) カップリング反応
粗2-アミノ-4-(cis-2’,6’-ジメチルモルホリノ)アニリン(1.08 g, 4.9 mmol, 上記(i)で調製したもの)およびエチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(1.27 g, 5.2 mmol)を、無水エタノール(25 ml)および氷酢酸(12.5 ml)中、窒素下で19時間還流させた。この反応混合物を室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去し、残渣を水(100 ml)に懸濁させ、濃アンモニア水を用いて約pH 11にまで塩基性にした。2〜3時間撹拌した後、生成した赤い沈殿を集め(por 3の焼結漏斗)、水で注意深く洗浄した後、減圧下、P2O5上で一晩乾燥させて、4-(5’-(cis-2”,6”-ジメチルモルホリノ)ベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリンを、暗赤色粉末として得た(1.62 g, 90%)。mp 147℃(分解)。
1H nmr (400 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 1.26, d (J = 6.4 Hz), 6H, 2”,6”-diMe; 2.54, dd (J = 11.2, 11.6 Hz), 2H, H3”/5”; 3.62, d (J = 10.8 Hz), 2H, H3”/5”; 3.86, m, 2H, H2”/6”; 7.21, d ( J = 2.0 Hz), 1H, H4’; 7.23, d (J = 9.2 Hz), 1H, H6; 7.37, dd (J = 2.0, 9.2 Hz), 1H, H6’; 7.62, d (J = 9.2 Hz), 1H, H7’; 7.96, dd (J = 2.2, 9.0 Hz), 1H, H5; 8.92, d (J = 2.4 Hz), 1H, H3. 13C nmr (100 MHz, d4-MeOH + 15滴のHOAc) δ 19.2, 2”,6”-diMe; 56.4, C3”/5”; 73.0, C2”/6”; 99.6, C4’; 113.1, C4; 115.3, 117.0, 121.2, 126.4, C3, C6, C6’ and C7’; 129.1, C2; 132.0, C3a’ or C7a’; 133.5, C5; 135.8, C7a’ or C3a’; 148.9, 149.1, 150.7, C1, C2’ and C5’. MS (ESI +ve) m/z 735 (M2H+, 6%), 368 (MH+, 100). HRMS (ESI +ve) m/z 368.17163, C19H22N5O3の理論質量:368.17172 (△= 0.2 ppm).
4-(5’-(cis-2”,6”-ジメチルモルホリノ)ベンズイミダゾール-2’-イル)-2-ニトロアニリン (0.38 g, 1.03 mmol)の4:1の酢酸エチル/メタノール(40 ml)中の溶液に、5%活性炭担持パラジウム(100 mg)を添加し、得られた反応混合物を、水素雰囲気下、21時間撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通してろ過し、濾過した固体をメタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗液を減圧下で濃縮して2-アミノ-4-(5’-(cis-2”,6”-ジメチルモルホリノ)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリンを得た(350 mg, 100%)。これを次の工程に即座に用いた。
2-シアノピリジン(207 mg, 1.99 mmol)を、メタノール性ナトリウムメトキシド溶液(0.07 M, 2.9 ml, 0.20 mmol)で処理し、窒素下、40〜45℃の油浴中で2時間加熱した。次いで、加熱を停止し、2-アミノ-4-(5’-(cis-2”,6”-ジメチルモルホリノ)ベンズイミダゾール-2’-イル)アニリン(350 mg, 1.03 mmol)の無水エタノール(15 ml)中の溶液、次いで氷酢酸(12.5 ml)を添加し、混合物を窒素下で19時間穏やかに還流させた。この反応混合物を室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去し、残渣を希アンモニア溶液(3.0 M, 15 ml)で処理し、1時間撹拌した。黄褐色の懸濁液を遠心分離し、上清を除去し、残渣を水(2 x 10 ml)、次いでアセトニトリル(3 x 3 ml)で処理した(各処理において、遠心分離し、上清を除去した)。残渣をメタノール(約3 ml)に溶解させ、シリカゲルカラム(32 x 170 mm)にチャージし、4:1の酢酸エチル/メタノールで溶出させて、2-(5’-(5”-(cis-2’’’,6’’’-ジメチルモルホリノ)ベンズイミダゾール-2”-イル)ベンズイミダゾール-2’-イル)ピリジンを橙色ガラス状固体として得た(246 mg, 56%)。mp 195-197℃。
1H nmr (500 MHz, d4-MeOH + 4滴のd-TFA) δ 1.27, d (J = 6.5 Hz), 6H, 2’’’,6’’’-diMe; 2.52, dd (J = 10.5, 12.0 Hz), 2H, H3’’’/5’’’; 3.64, app. d (J = 10.5 Hz), 2H, H3’’’/5’’’; 3.86, m, 2H, H2’’’/6’’’; 7.23, d (J = 2.0 Hz), 1H, H4”; 7.40, dd (J = 2.5, 9.0 Hz), 1H, H6”; 7.65, ddd (J = 1.0, 4.5, 7.5 Hz), 1H, H5; 7.69, d (J = 9.0 Hz), 1H, H7”; 8.03, d (J = 9.0 Hz), 1H, H7’; 8.11, m, 2H, H4,H6’; 8.40, br d (J = 8.0 Hz), 1H, H3; 8.51, d (J = 1.0 Hz), 1H, H4’; 8.85, m, 1H, H6.
13C nmr (125 MHz, d4-MeOH + 4滴のHOAc) δ 19.2, 2’’’/6’’’-Me; 56.6, C3’’’/5’’’; 72.9, C2’’’/6’’’; 99.9, C4”; 115.1, 115.7, 116.3, 116.9, C4’, C6”, C7’, C7”; 122.1, C5’; 122.6, 122.8, C3 and C6’; 126.1, C5; 131.2, C7a”; 137.2, C3a’, C3a” or C7a’; 138.3, C4; 140.2, 141.6, C3a’, C3a” or C7a’; 148.5, 150.0, C2, C5” and C2’ or C2”; 150.7, C6; 151.0, C2, C5” and C2’ or C2”; 154.2, C2” or C2’. MS (ESI +ve) m/z 849 (M2H+ 7%), 397 (MH+, 100). HRMS (ESI +ve) m/z 425.20831, C25H25N6Oの理論質量:425.20844 (△= 0.3 ppm).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 133.5
PF = 55.9
DMFm = 1.75
DMF10 = 1.40
(A) 6-(4-メチルピペラジン-1-イル)-1-(トルエン-4-スルホニル)-1H-インドールの合成
1H NMR (CDCl3, 400MHz): δ 7.7 (d,2H), 7.48(d, 1H), 7.38 (d,1H), 7.33 (d, 1H), 7.16 (d, 2H), 6.9 (dd, 1H), 6.5 (dd, 1H), 3.2 (m, 4H), 2.6 (m, 4H) , 2.33 (s, 3H), 2.3 (s, 3H)
1H NMR (CDCl3, 400MHz): δ 7.5 (d,2H), 7.3 (m, 1H), 7.13 (d,1H), 6.85 (dd, 1H), 6.65 (s, 1H), 3.2 (m, 4H), 2.56 (m, 4H), 2.3 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 1.5 (m, 6H), 1.3 (m, 6H), 1.1 (m, 6H), 0.85(m, 9H).
この混合物を、窒素下で一晩80℃に加熱した後、室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。次いで、残渣を5%アンモニア水溶液で処理し、5℃に1日間置き、水性層をデカンテーションし、水で十分に洗浄した。得られた淡褐色固体を単離し、エーテルで洗浄して、生成物150 mgを得た(収率15%)。この物質は完全に純粋ではないが、次の工程に用いることができた。
1H NMR (CD3OD, 400MHz): (低い純度に起因して、ピークの帰属および強度は近似である) δ 8.6 (unresolved ,1H), 8.2 (d, 1H) , 7.9 (m, 2H), 7.8 (unresolved, 1H), 7.65 (m,3H), 7.4 (m, 1H), 7.3 (d, 1H), 7.2 (m, 1H), 7.1 (d, 1H), 6.95 (dd, 1H), 6.5, (s, 1H) , 2.9 (m, 4H) , 2.5 (m, 4H), 2.4 (s, 3H), 2.3 (s, 3H)
1H NMR (CD3OD + TFA, 400MHz): δ 8.9 (unresolved d,1H), 8.4 (d, 1H), 8.3 (m, 1H), 8.2 (unresolved, 1H), 8.1 (m, 2H), 7.9 (m,1H), 7.8 (m, 1H), 7.7 (m, 1H), 7.5 (m, 1H), 7.0, (s, 1H), 3.8 (m, 2H), 3.6 (m, 2H), 3.1 (m, 2H), 2.9 (m, 2H)2.9 (s, 3H).
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 34.1
PF = 4.9
DMFm = 1.30
DMF10 = 1.21
(A) 2-[(3-アミノ-4-ニトロ-フェニル)-メチル-アミノ]-エタノールの合成
1H NMR (400 MHz, DMSO): δ 7.75, (d, 1H); 7.2 (broad s, 2H); 6.2, (d, 1H); 5.95, (s, 1H ); 4.75 (crude t, 1H); 3.55 (m, 2H); 3.4 (m, 2H); 2.95 (s, 3H) (NH2およびOHのプロトン)
2-[(3-アミノ-4-ニトロ-フェニル)-メチル-アミノ]-エタノール(1.0 g, 4.7 mmol)の1:1の酢酸/エタノール(60 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(0.075 g)を添加した。得られた混合物を脱気し、次いで水素雰囲気下(バルーン)、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、窒素雰囲気下、セライトを通してエチル 4-アミノ-3-ニトロベンゼンカルボキシイミダート塩酸塩(1.1 g, 4.5 mmol)が入った丸底フラスコに直接濾過し、次のカップリング工程に手順を進めた。
工程(i)から得られたスラリーを、窒素下、80℃で24時間加熱した後、室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた暗色オイルを、希アンモニア水溶液(水中5%, 50 ml)で処理し、激しく混合し、一晩4℃に置いた。上清をデカンテーションし、沈殿した固体を再び水で洗浄し、デカンテーションし、残った水を蒸発によって除去した。
得られた黒色固体を、エーテル(100 mL)中で一晩スラリー化し、濾過して、生成物を、1.0 gの黒色〜紫色の固体を得た(粗収率66%)。この粗生成物を、さらに精製することなく次の工程に用いた。
1H NMR (400 MHz, DMSO):δ 8.6 (s, 1H); 8.05, (d, 1H); 7.65 (broad s, 2H); 7.3, (unresolved , 1H); 7.0, (d, 1H ); 6.65 (unresolved s, 1H); 6.6 (unresolved s, 1H); 4.6 (broad, 1H); 3.55 (crude t, 2H); 3.3 (unresolved-H2Oと重なっている, 2H); 2.95 (s, 3H) (NH2およびOHプロトンを含む)
粗[2-(4-アミノ-3-ニトロ-フェニル)-1H-ベンズイミダゾール-5-イル]-メチル-プロピル-アミン(0.5 g, 1.5 mmol)の3:1の酢酸エチル/メタノール(60 ml)中の溶液に、窒素下で、5%の活性炭担持パラジウム(100 mg)を添加した。得られた混合物を最初に脱気し、次いで水素雰囲気下(バルーン)、室温で1日間撹拌した。次いで、この反応混合物を、セライトを通して濾過し、メタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗液を濃縮して、粗ジアミンを暗褐色オイルとして得、これを精製することなく次の工程に用いた。
(ii) カップリング反応
粗ジアミン(上述のとおりに調製したもの)を、メタノール(20 ml)に溶解させた。これに、直前にメタノール(2.2 mL)中のナトリウムメトキシド(0.23 mmol)で処理(窒素下、40℃にて1時間)した2-シアノピリジン(238 mg, 2.3 mmol)の溶液を添加した。これら全ての混合物に、酢酸(0.33 ml, 5.8 mmol)を添加した。
この混合物を、窒素下で1日間80℃に加熱した後、室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。次いで、得られた案赤色オイルを5%アンモニア水溶液(20 ml)で処理し、1日間5℃に置いた。この上清をデカンテーションし、沈殿した固体を水で再び洗浄し、デカンテーションし、残った水を蒸発によって除去した。得られた固体をアセトニトリル(50 mL)で3日間にわたってスラリー化し、濾過して、粗生成物270 mgを褐色粉末として得た(粗収率48.2%)。この固体130 mgを、9:1のジクロロメタン:メタノール性アンモニアで平衡化させた2cm x 9cmのシリカゲルカラム上、ジクロロメタン中10%のエタノールからジクロロメタン中50%のエタノールまでの勾配で溶出させるクロマトグラフィーにかけた。生成物30 mgを、赤褐色固体として単離した。
1H NMR (400 MHz, CD3OD):δ 8.62 (poorly resolved d, 1H); 8.2 (m, 2H); 7.82 (t, 1H); 7.8 (d, 1H); 7.65 (d, 1H); 7.4, (m, 2H); 7.0, (d, 1H ); 6.8 (s, 1H); 3.6 ( t, 2H); 3.4 (t, 2H); 2.95 (s, 3H);
細胞毒性および放射線防護性の結果
C50 = 94.3
PF = 20.2
DMFm = 1.87
DMF10 = 1.15
(マウス)
近交系C3H/Neu系のマウスは、the Medical Faculty Carl Gustav Carus、Dresden、Germanyにおける繁殖コロニーから供給された。これらの動物を、規定の病原体フリー条件下で繁殖および飼育した。飼育は、湿度(30〜50%)および温度(21〜24℃)の管理された条件下とした。自動化光プログラムは、午前6時から午後6時までの点灯で12/12時間の明/暗リズムに制御した。マウスは、おがくず床敷上で、ケージ当たり最高で10匹を、サイズ3 Macrolonケージ中に保った。標準マウス飼料(Altromin 1326、Altrogge)および標準パースペクス飲水瓶からの濾過した市水道水を自由に与えた。
マウス舌の下面中央の3mm×3mmの照射野に、毎分3.78Gyの線量率が得られる20ミリアンペアの管電流および15cmの焦点-皮膚間距離で操作されるDarpac 150-MC装置(Forward Raytech Ltd、Swinbume、UK)から25kVのx線を照射した。麻酔マウス(ペントバルビトンナトリウム; 1kg当たり60mg)を、予め温められたアルミニウムブロック(おおよそ35℃)の中央円筒孔(直径25mm)内に仰臥位で置いた。舌を、ピンセットを使用してブロックの天井の孔(直径3mm)を通して導き、舌の上面を、両面接着テープでブロックの外面に固定した。頭を、ポリスチレンの楔により支え、舌の底部の牽引および結果としての低酸素症を回避した。コリメーターは、舌の下面にわたって中央に位置する3×3mm2ウィンドウ付きの1mm厚アルミニウムプレートとした。10匹のマウスの群に、10〜20Gyの範囲で5つの異なる線量を照射した。
照射の1時間前に、製剤10マイクロリットルを、置換式マイクロピペットを使用して麻酔マウスの舌の下面に適用した。30分後、製剤の第二の10マイクロリットルアリコートを適用し、マウスを、30分後に照射した。
プロピレングリコール中または水中の適切な薬物のストック溶液を、Poloxamer 407ゲル(BASF Lutrol F 127)の水溶液および/またはプロピレングリコール中のヒドロキシプロピルセルロース(おおよその平均MW 80,000; Aldrich cat no 435007)の溶液で、ならびに、水および/またはプロピレングリコールで希釈し、2つの製剤の各々を製造した:
製剤1-水中の30%プロピレングリコール中にPoloxamer 407 20%およびヒドロキシプロピルセルロース1%中の薬物10または30mMを含有したゲル、および
製剤2-ヒドロキシプロピルセルロース1%の最終濃度を含有するプロピレングリコール中に薬物10、30または60mMを含有した液体。
製剤3-ヒドロキシプロピルセルロース2%の最終濃度を含有する水中に薬物30mMを含有した液体。
照射後の様々な時間に、麻酔マウスの舌の下面を毎日調べた。使用する計数的評価項目(エンドポイント)は、融合性粘膜炎RTOG/EORTCグレード3に対応する粘膜潰瘍とした。図例にプロットされているデータは、粘膜潰瘍のエンドポイントについて、少なくとも連続2日にわたって点数化された10匹のマウスの群の割合である。放射線量効果曲線は、Prism 5.0曲線フィッティングプログラムを使用し、単一パラメーターシグモイド形相関(ロジスティック関数
C3H/HeJマウスに、5匹の群で、0.73 Gy/分の線量率にて137Csγ線(GammaCell 40 Irradiator、Nordion International Inc.、Canada)での全身照射(最高で19Gyまで)の2時間前に、静脈内(尾静脈)注射による2PH(pH5の酢酸緩衝溶液中の30mM溶液;150mg/kg)を投与した。マウスを、照射後3日と14時間に安楽死させ、空腸を切除した。5つの1cm空腸切片を、各マウスから採取し、微小孔テープで束ねた後に中性緩衝ホルマリン中で固定した。次いで、サンプルをパラフィン包埋し、切片化し、ヘマトキシリン-エオシンで染色する。生存陰窩クロノゲンの増殖から生じる濃染コロニー(>10細胞)をカウントし、1周当たりのコロニーに基づいて点数化した。
N0は、1周当たりのクロノゲンの初期数であり、
N(D)は、DGyの放射線量後の1周当たりの生存クロノゲン数であり、
Sは、陰窩当たりのクロノゲン数であり、
αは、致死事象に対応する放射線量の逆数である)にフィットさせた。
Α対照=0.529+/-0.048Gy-1
α2PH=0.431+/-0.039Gy-1(p<0.0001)であった。
これらの2つの値から、1.23+/-0.15の線量修飾係数が得られた。
2-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン(HPCD、Sigma-Aldrich、典型的なMW 1540)ビヒクル溶液を、リン酸緩衝溶液(PBS)9.3mLにHPCD 3.6gを溶かして30% v/w溶液とすることにより調製した。M2PB/HPCDストック溶液は、HPCDビヒクル溶液2mLに約30mgのM2PB(MW 396.45)を溶かすことにより調製し、極めて水溶性の錯体を形成させた。M2PBの濃度は、345nmにおける吸光係数4×108M-1cm-1を使用して、45% MeOH 0.1% TFA中に適切に希釈した後で測定した。M2PB/HPCDストック溶液を、HPCDビヒクル中で8.75mg/mL(22mM)まで希釈して最終M2PB/HPCD製剤を調製し、体重1g当たり8×10-3mlの容積で肩甲骨(頸部の首筋)間に、マウスに皮下注射した。
Claims (20)
- 式Iの放射線防護剤化合物:
X'は、NまたはNHを表し、ここで、XとX'は異なり、
Qは、メトキシルまたはHを表し、
Yは、O、メチレン、ヒドロキシメチルまたはメチルアミノを表し、
Aは、場合により置換されていてもよい2-ピリジル、場合により置換されていてもよい2-ピリミジル、場合により置換されていてもよい2-ピラジニル、場合により置換されていてもよい3-ピラゾリル、場合により置換されていてもよい5-ピラゾリル、場合により置換されていてもよい2-フラニル、場合により置換されていてもよい2-キノリニル、場合により置換されていてもよい1-イソキノリニルまたは場合により置換されていてもよい3-イソキノリニルを表す)
および薬学的に許容できるその誘導体。 - Yが、メチルアミノまたはヒドロキシメチルを表す、請求項1に記載の化合物。
- Aが、場合により置換されていてもよい2-ピリジルを表す、請求項1かまたは請求項2に記載の化合物。
- 式IIの放射線防護剤化合物:
R1およびR2は、同じであるかまたは異なり、水素、C1〜C4アルキルまたはC2〜C4アルケニルから選択され、
R3は、C1〜C4アルキルまたはC2〜C4アルケニルの基または鎖であり、
Zは、同じであるかまたは異なり、NまたはCHを表し、
Z'は、同じであるかまたは異なり、NまたはCを表し、
Xは、CH、NまたはNHを表し、ここで、
X'は、NまたはNHを表し、ここで、XがCHまたはNの場合は、X'はNHであり、XとX'は異なり、さらに、
Qは、H、アルコキシル、-NR1R2、FまたはClを表し、
Q1は、Z'がNの場合は存在せず、Z'がCの場合はH、アルコキシル、-NR1R2、FまたはClを表し、
Aは、複素環のNまたはOがオルト位に位置する5〜10員の単環構造または多環構造を表し、前記環は、任意選択で二重結合、置換および/または他のヘテロ原子を含んでいてよい]
および薬学的に許容できるその誘導体。 - Aが、場合により置換されていてもよい2-ピリジル、場合により置換されていてもよい2-ピリミジル、場合により置換されていてもよい2-ピラジニル、場合により置換されていてもよい3-ピラゾリル、場合により置換されていてもよい5-ピラゾリル、場合により置換されていてもよい2-フラニル、場合により置換されていてもよい2-キノリニル、場合により置換されていてもよい1-イソキノリニル、または場合により置換されていてもよい3-イソキノリニルを表す、請求項4に記載の化合物。
- Aの任意選択の置換が、クロロ、フルオロ、C1〜C4フルオロアルキル、C1〜C4アルキル、C2〜C4アルケニル、C1〜C4アルコキシ、C1〜C4アルコキシアルキル、C1〜C4アルキルアミノ、C2〜C4ジ-アルキルアミノ、またはC1〜C4アミノアルキルによる、請求項5に記載の化合物。
- Aの任意選択の置換が、メチルまたはメトキシルによる、請求項5かまたは請求項6に記載の化合物。
- 少なくとも1つのQが、メトキシルを表す、請求項4から7のいずれか一項に記載の化合物。
- 2-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
4-メチル-2-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
4-クロロ-2-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
4-メトキシ-2-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
1-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)イソキノリン
3-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)イソキノリン
3-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)インダゾール
2-(5'-(5''-モルホリノベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-(5''-モルホリノベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)-4-メチルピリジン
3-(5'-(5''-モルホリノベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)イソキノリン
2-(5'-(5''-(4'''-メチル-1''',4'''-ジアゼパン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-(5''-(4'''-メトキシピペリジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(4'-メトキシ-6'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(6'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)インドール-2'-イル)ピリジン
2-(5'-(5''-(モルホリノアミノ)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-(5''-(4'''-イソプロピルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-(5''-(4'''-ブチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-(5''-((2'''-メトキシエチル)(メチル)アミノ)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
5-メチル-2-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-メトキシ-6'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
3-(5'-(5''-(4'''-ヒドロキシピペリジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)イソキノリン
2-(5'-(5''-(4'''-(2''''-メトキシエチル)ピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-(5''-(2'''-(2''''-メトキシエトキシ)エチルアミノ)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
5-フルオロ-2-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-(5''-(4'''-ヒドロキシピペリジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)-5-メチルピリジン
から選択される、請求項4に記載の化合物。 - 2-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
4-クロロ-2-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
4-メチル-2-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-(5''-モルホリノベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(4'-メトキシ-6'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-(5''-(4'''-ブチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-メトキシ-6'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
4-メトキシ-2-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
3-(5'-(5''-(4'''-ヒドロキシピペリジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)イソキノリン
2-(5'-(5''-(2'''-(2''''-メトキシエトキシ)エチルアミノ)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
2-(5'-(5''-(4'''-イソプロピルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
5-フルオロ-2-(5'-(5''-(4'''-メチルピペラジン-1'''-イル)ベンズイミダゾール2''-イル)ベンズイミダゾール2'-イル)ピリジン
から選択される、請求項4に記載の化合物。 - 電離放射線の損傷効果から生物材料を防護する方法であって、電離放射線による前記材料の被曝の前および/またはそれと同時に、有効量の請求項1から10のいずれか一項に記載の化合物を前記材料に投与することを含む方法。
- 前記生物材料が、放射線治療を受けているヒト患者または動物患者を含む、請求項11に記載の方法。
- 前記生物材料が、電離放射線による被曝が関わる診断手順を受けているヒト患者または動物患者を含む、請求項11に記載の方法。
- 電離放射線による被曝の危険性があるヒトにおいて電離放射線の損傷効果を予防する方法であって、電離放射線によるヒトの可能な被曝の前に、有効量の請求項1から10のいずれか一項に記載の化合物を前記ヒトに投与することを含む方法。
- 電離放射線の損傷効果からの生物材料の防護における、請求項1から10のいずれか一項に記載の化合物の使用。
- 前記生物材料が、放射線治療を受けているヒト患者または動物患者を含む、請求項15に記載の使用。
- 前記生物材料が、電離放射線による被曝が関わる診断手順を受けているヒト患者または動物患者を含む、請求項15に記載の使用。
- 電離放射線によるヒトの可能な被曝の前に請求項1から10のいずれか一項に記載の化合物をヒトに投与することを含む、電離放射線による被曝の危険性があるヒトにおける電離放射線の損傷効果の予防における、前記化合物の使用。
- 電離放射線の損傷効果から生物材料を防護するための医薬品の調製における、請求項1から10のいずれか一項に記載の化合物の使用。
- 請求項1から10のいずれか一項に記載の化合物を、1種または複数種の薬学的に許容できるまたは獣医学的に許容できる担体と組み合わせて含む、組成物。
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