JP2013500726A5 - - Google Patents
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Claims (27)
- 1以上のアミノ酸置換を導入することによって改変されたアミノ酸配列を含む第IX因子ポリペプチド。
- 残基 86 におけるアミノ酸置換を含むものである、請求項1のポリペプチド。
- アミノ酸残基 85、86 および 87 から選択される1以上のアミノ酸置換を含むものである、請求項1のポリペプチド。
- アミノ酸残基 85、86、87、338 および 410 から選択される1以上のアミノ酸置換を含むものである、請求項1のポリペプチド。
- 1以上のアミノ酸置換が、D85F; D85G; D85H; D85I; D85M; D85N; D85R; D85S; D85W; D85Y; V86A; V86D; V86E; V86G; V86H; V86I; V86L; V86M; V86N; V86P; V86Q; V86R; V86S; V86T; T87F; T87I; T87K; T87M; T87R; T87V; T87W; R338A; R338F; R338I; R338L; R338M; R338S; R338T; R338V; R338W; E410N; E410Q; D85W および T87R; D85F および T87I; D85W および T87W; D85R および T85R; D85I および T87R; D85Y および T87F; D85I および T87M; D85F および T87R; D85F および T87V; D85R および T87K; D85H および T87I; D85I および T87I; D85Y および T87K; D85S および T87R; D85Y および T87R; D85G および T87K; D85H および T87W; D85H および T87K; D85F および T87K; D85H および T87V; D85M および T87I; D85H および T87M; R338A および E410N; R338A および E410Q; D85W、V86A、および T87R; D85F、V86A、および T87I; D85W、V86A、および T87W; D85R、V86A、および T85R; D85I、V86A、および T87R; D85Y、V86A、および T87F; D85I、V86A、および T87M; D85F、V86A、および T87R; D85F、V86A、および T87V; D85R、V86A、および T87K; D85H、V86A、および T87I; D85I、V86A、および T87I; D85Y、V86A、および T87K; D85S、V86A、および T87R; D85Y、V86A、および T87R; D85G、V86A、および T87K; D85H、V86A、および T87W; D85H、V86A、および T87K; D85F、V86A、および T87K; D85H、V86A、および T87V; D85M、V86A、および T87I; D85H、V86A、および T87M;D85W、V86A、T87R、および R338A; D85F、V86A、T87I、および R338A; D85W、V86A、T87W、および R338A; D85R、V86A、T85R、および R338A; D85I、V86A、T87R、および R338A; D85Y、V86A、T87F、および R338A; D85I、V86A、T87M、および R338A; D85F、V86A、T87R、および R338A; D85F、V86A、T87V、および R338A; D85R、V86A、T87K、および R338A; D85H、V86A、T87I、および R338A; D85I、V86A、T87I、および R338A; D85Y、V86A、T87K、および R338A; D85S、V86A、T87R、および R338A; D85Y、V86A、T87R、および R338A; D85G、V86A、T87K、および R338A; D85H、V86A、T87W、および R338A; D85H、V86A、T87K、および R338A; D85F、V86A、T87K、および R338A; D85H、V86A、T87V、および R338A; D85M、V86A、T87I、および R338A; D85H、V86A、T87M、および R338A; D85W、V86A、T87R、R338A、および E410N; D85F、V86A、T87I、R338A、および E410N; D85W、V86A、T87W、R338A、および E410N; D85R、V86A、T85R、R338A、および E410N; D85I、V86A、T87R、R338A、および E410N; D85Y、V86A、T87F、R338A、および E410N; D85I、V86A、T87M、R338A、および E410N; D85F、V86A、T87R、R338A、および E410N; D85F、V86A、T87V、R338A、および E410N; D85R、V86A、T87K、R338A、および E410N; D85H、V86A、T87I、R338A、および E410N; D85I、V86A、T87I、R338A、および E410N; D85Y、V86A、T87K、R338A、および E410N; D85S、V86A、T87R、R338A、および E410N; D85Y、V86A、T87R、R338A、および E410N; D85G、V86A、T87K、R338A、および E410N; D85H、V86A、T87W、R338A、および E410N; D85H、V86A、T87K、R338A、および E410N; D85F、V86A、T87K、R338A、および E410N; D85H、V86A、T87V、R338A、および E410N; D85M、V86A、T87I、R338A、および E410N; D85H、V86A、T87M、R338A、および E410N; D85W、V86A、T87R、R338A、および E410Q; D85F、V86A、T87I、R338A、および E410Q; D85W、V86A、T87W、R338A、および E410Q; D85R、V86A、T85R、R338A、および E410Q; D85I、V86A、T87R、R338A、および E410Q; D85Y、V86A、T87F、R338A、および E410Q; D85I、V86A、T87M、R338A、および E410Q; D85F、V86A、T87R、R338A、および E410Q; D85F、V86A、T87V、R338A、および E410Q; D85R、V86A、T87K、R338A、および E410Q; D85H、V86A、T87I、R338A、および E410Q; D85I、V86A、T87I、R338A、および E410Q; D85Y、V86A、T87K、R338A、および E410Q; D85S、V86A、T87R、R338A、および E410Q; D85Y、V86A、T87R、R338A、および E410Q; D85G、V86A、T87K、R338A、および E410Q; D85H、V86A、T87W、R338A、および E410Q; D85H、V86A、T87K、R338A、および E410Q; D85F、V86A、T87K、R338A、および E410Q; D85H、V86A、T87V、R338A、および E410Q; D85M、V86A、T87I、R338A、および E410Q; D85H、V86A、T87M、R338A、および E410Q; ならびにこれらのいずれかの組合せから選択されるものである、請求項4のポリペプチド。
- 以下のアミノ酸配列を含む第IX因子ポリペプチド:
YNSGKLEEFVQGNLERECMEEKCSFEEAREVFENTERTTEFWKQYVDGDQCESNPCLNGGSCKDDINSYECWCPFGFEGKNCELX 85 X 86 X 87 CNIKNGRCEQFCKNSADNKVVCSCTEGYRLAENQKSCEPAVPFPCGRVSVSQTSKLTRAETVFPDVDYVNSTEAETILDNITQSTQSFNDFTRVVGGEDAKPGQFPWQVVLNGKVDAFCGGSIVNEKWIVTAAHCVETGVKITVVAGEHNIEETEHTEQKRNVIRIIPHHNYNAAINKYNHDIALLELDEPLVLNSYVTPICIADKEYTNIFLKFGSGYVSGWGRVFHKGRSALVLQYLRVPLVDRATCLX 338 STKFTIYNNMFCAGFHEGGRDSCQGDSGGPHVTEVEGTSFLTGIISWGEECAMKGKYGIYTKVSRYVNWIKX 410 KTKLT (配列番号 2);
ここで、X 85 は D、F、G、H、I、M、N、R、S、W および Y から選択され;
ここで、X 86 は A、D、E、G、H、I、L、M、N、P、Q、R、S、T および V から選択され;
ここで、X 87 は F、I、K、M、R、T、V および W から選択され;
ここで、X 338 は A、F、I、L、M、R、S、T、V および W から選択され;
ここで、X 410 は E、N、および Q から選択される。
- 1以上のグリコシル化部位をさらに含む、請求項1〜6のいずれかに記載のポリペプチド。
- 請求項1〜7のいずれかに記載の第IX因子ポリペプチドおよび医薬上許容される担体を含む医薬品。
- 血友病 B の処置のための、請求項8に記載の医薬品。
- 請求項1〜7のいずれかに記載のポリペプチドをコードする DNA 配列。
- 宿主細胞が第IX因子ポリペプチドを発現することを可能にするよう、請求項10に記載の DNA 配列を用いてトランスフェクトされた真核宿主細胞。
- 第IX因子ポリペプチドを生産する方法であって、(i)1以上のアミノ酸置換を導入することによって該ポリペプチドのアミノ酸配列を改変する工程; (ii)細胞株において該ポリペプチドを発現させる工程; および(iii)該ポリペプチドを精製する工程を含む、方法。
- 該1以上のグリコシル化部位に結合した1以上の糖部分をさらに含む、請求項7のポリペプチド。
- 1以上の糖部分がシアル酸である、請求項13のポリペプチド。
- a)請求項13または14のポリペプチドおよび b)該ポリペプチドに共有結合した1以上のポリマー部分を含む複合体。
- 1以上のポリマー部分が1以上の糖部分に共有結合している、請求項15の複合体。
- 1以上のポリマー部分が、ポリ(アルキレングリコール)、ポリ(プロピレングリコール)(PPG)、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ(オキシエチル化ポリオール)、ポリ(オレフィンアルコール)、ポリ(ビニルピロリドン)、ポリ(ヒドロキシアルキルメタクリルアミド)、ポリ(ヒドロキシアルキルメタクリレート)、ポリ(サッカライド)、ポリ(アルファ-ヒドロキシ酸)、ポリ(ビニルアルコール)、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリ(N-アクリロイルモルフォリン)、ポリシアル酸、ヒドロキシエチルスターチ(HES)、ポリエチレンオキサイド、アルキル-ポリエチレンオキサイド、ビスポリエチレンオキサイド、および、ポリアルキレンオキサイド、ポリ(エチレングリコール-コ-プロピレングリコール)、ポリ(N-2-(ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド)のコポリマーまたはブロックコポリマー、ならびにデキストランからなる群より選択される、請求項16の複合体。
- 1以上のポリマー部分がポリ(アルキレングリコール)である、請求項17の複合体。
- ポリ(アルキレングリコール)がポリエチレングリコール(PEG)である、請求項18の複合体。
- 以下を含む複合体:
a) 1以上のアミノ酸置換を導入することによって改変されたアミノ酸配列を含む第IX因子ポリペプチド、ここで、少なくとも1つのアミノ酸置換が残基 338 におけるものである;
b) 1以上のグリコシル化部位と結合した1以上の糖部分; および
c) 1以上の糖部分と共有結合した1以上のポリマー部分。 - 該残基 338 における置換が、R338A、R338F、R338I、R338L、R338M、R338S、R338T、R338V および R338W からなる群より選択されるものである、請求項20の複合体。
- 該ポリペプチドが、アミノ酸残基 157 および 167 から選択される1以上のアミノ酸置換をさらに含む、請求項20または21の複合体。
- 該残基 157 における置換が、N157A および N157Q からなる群より選択されるものである、請求項22の複合体。
- 該残基 167 における置換が、N167A および N167Q からなる群より選択されるものである、請求項22の複合体。
- 以下の工程を含む、ポリペプチドへのポリマー部分の複合化を改善する方法: a) 1以上のグリコシル化部位を有するポリペプチドを提供する工程、ここで、該グリコシル化部位は1以上のシアル酸を含む; b) 該ポリペプチドの該シアル酸を酸化する工程; c) 触媒を提供する工程; および d) アミノオキシ官能基を含むポリマー部分を該酸化されたシアル酸と共有結合させる工程; これにより複合化の割合が増大する。
- 該触媒が、アニリンならびにアニリン誘導体からなる群より選択されるものである、請求項25の方法。
- 該複合化の割合が、触媒を用いない場合と比較して増大する、請求項25の方法。
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