JP2013243943A - ボトリオコッカス・ブラウニー属の新規株 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明は、直鎖飽和型の炭化水素を産生する、ボトリオコッカス・ブラウニーに属する新規株に関する。
【選択図】なし
Description
本発明のボトリオコッカス・ブラウニーの新規株は、湖沼や池から採取した、ボトリオコッカス属の藻類を含むサンプルから、以下の方法を用いて分離することができる。
炭素源としてCO2を利用し、光合成で増殖する。
ボトリオコッカス属の藻類が産生する炭化水素は、当業者に既知の方法で抽出及び分析することができる。例えば、ボトリオコッカス属の藻類を培養して増殖させ、得られた培養液から濾過等により回収した湿藻体を、凍結乾燥又は加温による乾燥等により乾燥させる。その後、この藻体乾燥物から有機溶媒を用いて炭化水素を抽出することができる。抽出は、異なる有機溶媒を用いて2度以上行ってもよい。有機溶媒としては、n−ヘキサン、クロロホルム:メタノール混合物(例えば、1:1、1:2)等を用いることができる。好ましくは、クロロホルム:メタノール混合物で抽出後、例えば、窒素気流下で濃縮乾固し、再びn−ヘキサンで抽出する。得られた抽出液を、NMR,IR、ガスクロマトグラフィー、GC/MS等により分析する。
本願発明のボトリオコッカス・ブラウニー株から得られる炭化水素は以下の特徴を有する。
本発明で得られる炭化水素(Eicosane)は、直接燃料や防水剤等広範囲に使用することができる。融点36.7℃のパラフィンに属し、常温で固体である。一方、内燃機関の燃料として使用する場合は、熱分解や触媒を用いるクラッキング等の処理が必要になる。
日本各地の湖沼や池から網目30〜100μmのプランクトンネットを用いてボトリオコッカスを含むサンプルを採取した。このサンプルからボトリオコッカスのコロニーを顕微鏡下でマイクロピペットを用いて分離し、これを有効塩素濃度約0.1%になるように添加したAF−6培地に浸けてボトリオコッカス以外の微生物を殺菌した後、AF−6培地(表1)で3回洗浄し、22℃、12時間毎光照射下で培養を行った。その後、三角フラスコに200mlのChu改変培地(表2)と培養した株を加え、20℃、12時間毎光照射下で2〜3ヶ月培養を行った。
得られたボトリオコッカスの培養液を、5μm孔のフィルターで濃縮し、凍結乾燥し、クロロホルム・メタノール(2:1,V/V)を用いて総脂質を抽出し、濃縮乾固後、n−ヘキサンで再抽出した。この試料を以下に示す手順でGC/MSにより解析した。
凍結乾燥した藻体の一部からDNA抽出キット(DNeasy Plant Mini Kit、QIAGEN)により、標準プロトコールに従って、DNA抽出を行った。18SrRNA遺伝子の断片は、オリジナルのプライマーセット、63F(5'-ACGCTTGTCTCAAAGATTA-3')(配列番号1)と1818R(5'-ACGGAAACCTTGTTACGA-3')(配列番号2)を用いて、タカラのサーマルサイクラー(PERSONAL、TAKARA)により、以下の条件で増幅した。
、0.25ユニットのEx taq DNA polymerase(TaKaRa)
Claims (5)
- 直鎖飽和型の炭化水素を産生する、ボトリオコッカス・ブラウニーに属する株。
- 前記直鎖飽和型の炭化水素が、分子式C20H42を有する炭化水素を産生する、請求項1に記載の株。
- 前記ボトリオコッカス・ブラウニーに属する株が、ボトリオコッカス・ブラウニー・tsukuba−2株(受領番号:FERM AP−22238)である、請求項1又は2に記載の株。
- 18SrRNAをコードする遺伝子の塩基配列が配列番号3に示す塩基配列を有するか、又は当該配列に対し90%以上の相同性を示す塩基配列を有する、請求項1〜3のいずれか1項に記載の株。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載のボトリオコッカス・ブラウニーに属する株を用いる、分子式C20H42を有する炭化水素の製造方法。
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JPH09234055A (ja) * | 1996-03-01 | 1997-09-09 | Chikyu Kankyo Sangyo Gijutsu Kenkyu Kiko | ボツリオコッカス属に属する新規な微細藻類及びその培養方法 |
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