JP2013241436A - 脳損傷及び疾患のmapc治療 - Google Patents
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- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0607—Non-embryonic pluripotent stem cells, e.g. MASC
Abstract
【解決手段】脳損傷、機能不全、障害及び/又は疾患に罹患している被験体に、(i)胚幹細胞、胚生殖細胞、及び生殖細胞ではなく、(ii)内胚葉性、外胚葉性及び中胚葉性の胚系統の少なくとも2種それぞれの少なくとも1種の細胞型に分化することができる細胞(MAPCs)を投与することにより、(b)補助的な免疫抑制処置を行う又は行わない、脳損傷、機能不全、障害又は疾患の治療方法。
【選択図】なし
Description
本出願は、以下に列挙する出願番号を有する出願のそれぞれ及び全ての優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる:
本出願は、米国特許仮出願第60/760,951号(2006年1月23日出願)の一部継続出願、PCT/US/43804(2006年11月9日出願)の一部継続出願であり、この出願は、米国特許出願第11/269,736号(2005年11月9日出願)の一部継続出願であり、この出願は、米国出願第11/151,689号(2005年6月13日出願)の一部継続出願であり、この出願は、米国出願第10/963,444号(2004年10月11日出願)(放棄)の一部継続出願であり、この出願は、米国出願第10/048,757号(2002年2月1日出願)の一部継続出願であり、この出願は、PCT/US00/21387(2000年8月4日出願)の米国国内段階の出願であり、この出願は、2001年2月15日にWO01/11011として英語で公開され、35U.S.C.§119(e)により米国仮出願第60/147,324号(1999年8月5日出願)と第60/164,650号(1999年11月10日出願)の優先権を主張し、かつ米国出願第10/467,963号(2003年8月11日出願)の一部継続出願であり、この出願はPCT/US02/04652(2002年2月14日出願)の米国国内段階の出願であり、この出願は、2002年8月22日にWO02/064748として英語で公開され、35U.S.C.§119(e)により米国仮出願第60/268,786号(2001年2月14日出願)、第60/269,062号(2001年2月15日出願)、第60/310,625号(2001年8月7日出願)、及び第60/343,836号(2001年10月25日出願)の優先権を主張する(これらすべての出願と刊行物は参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、本出願においてその優先権の完全な利益を主張する)。
本発明の分野は、多能性成体前駆細胞(MAPCs)を用いた脳損傷、障害、機能不全及び疾患の治療、特に低酸素性及び虚血性脳損傷(限定されるものではないが、低酸素性虚血性脳損傷及び卒中を含む)の治療である。
通常、本明細書で使用する用語及び表現は、当該分野で確立されている意味に従うものとする。しかし、不明確となる可能性を避けるため、本明細書で使用するいくつかの用語及び表現の意味を以下に記載する。
「皮質梗塞」とは、脳の皮質への血液供給の損失に伴う梗塞、典型的には大脳への血液供給の損失に伴う梗塞を指す。皮質梗塞は脳梗塞とほぼ同じ意味を有する。
本発明において細胞は本明細書においてさらに詳細に説明され、本明細書において一般に「多能性成体前駆細胞」、及び頭文字を取って「MAPC」(しばしば複数で「MAPCs」が用いられる)と称される。これらの細胞はES細胞、EG細胞、及び生殖細胞ではなく、かつ3種の原始胚葉系統(外胚葉、中胚葉、及び内胚葉)の少なくとも2種の細胞型、例えば3種すべての原始系統の細胞に、分化する能力を有すると理解される。
MAPCsの性質、活性、及び作用についていずれか1以上の説明的機構に限定されることなく、MAPCsが種々の様式を介してMAPCsによる治療などの有益な影響を発揮することができることは注目に値する。例えば、MAPCsは直接的に有益な作用を有することができる。かかる直接的な作用は主に、MAPCsと宿主の細胞とが直接的に接触することである。接触は、細胞の構造メンバー又はこれらのすぐ近くの環境中の成分との接触でもよい。かかる直接的な機構は、直接的な接触、拡散、取り込み、又は当業者に周知の他のプロセスなどを含み得る。MAPCsの直接的な活性及び作用は、局所的沈着の領域又は注射により接触される身体区画などに、空間的に限定されることがある。
MAPC調製物
MAPCsは種々の組織、例えば骨髄細胞(本明細書で詳述される)から調製することができる。
所与の用途のためのMAPCs投与用の製剤の選択は、種々の要因に応じて異なる。これらの中で顕著なものは、被験体の種、治療する障害、機能不全、又は疾患の性質とその状態、及び被験体における分布、施される他の治療や物質の性質、MAPCs投与のための最適経路、その経路を介するMAPCsの生存性、投与レジメン、並びに当業者に自明の他の因子であろう。特に、例えば適切な担体及び他の添加物の選択は、正確な投与経路及び特定の剤形の性質に依存するであろう。
MAPCsは他の医薬活性物質とともに投与することができる。いくつかの実施形態において、1又はそれ以上のかかる物質は、投与のためにMAPCsとともに製剤化される。いくつかの実施形態において、MAPCs及び1又はそれ以上の物質は別の製剤中に存在する。いくつかの実施形態において、MAPCs及び/又は1若しくはそれ以上の物質を含む組成物は、互いの補助的使用のために調製される。
MAPCsは、細胞を被験体に投与するために使用し得る当業者に公知の種々の経路のいずれかにより被験体に投与することができる。
組成物は、特定の患者の年齢、性別、体重、及び症状、並びに投与される製剤(例えば固体対液体)などの要因を考慮して、医学分野及び獣医学分野の当業者に周知の投与量及び方法で投与することができる。ヒト又は他の哺乳動物についての用量は、過度の実験を行うことなく当業者により、本開示、本明細書で引用される文献、及び当該分野の知識から決定することができる。
ヒトMAPCsが当該分野で記載されている。ヒト及びマウスについてMAPCを単離する方法は当該分野で公知である。すなわち、現在は当業者が、骨髄穿刺液、脳若しくは肝生検、及び他の臓器を得て、これらの細胞で発現される(又は発現されない)遺伝子に依存する当業者に利用可能な陽性若しくは陰性選択を用いて(例えば、上で参照する出願に開示されるような機能的又は形態的アッセイにより(これは参照により本明細書に組み込まれる))細胞を単離することが可能である。例示的な方法は、例えば米国特許第7,015,037号に記載されている(この内容は、MAPCsの説明とその調製方法に関して、参照により本明細書に組み込まれる)。
例えばヒト、ラット、マウス、イヌ及びブタからのMAPC単離方法は、当該分野で公知である。例示的な方法は、例えば、米国特許第7,015,037号、及びPCT/US02/04652(WO02/064748として公開)に記載されており、これらの方法はそこに開示されたMAPCsの特徴付けとともに、例示を目的として、非限定的な例としてのみ、参照により本明細書に組み込まれる。
22〜25回の細胞倍加後に得られたヒトMAPCsのFACSによる免疫表現型分析は、この細胞が、CD31、CD34、CD36、CD38、CD45、CD50、CD62E及び−P、HLA−DR、Muc18、STRO−1、cKit、Tie/Tekを発現せず;低レベルのCD44、HLA−クラスI、及びβ2−ミクログロブリンを発現し、CD10、CD13、CD49b、CD49e、CDw90、Flk1(N>10)を発現することを示した。
A.MAPCsは、CD31、CD36、CD62E、CD62P、CD44−H、cKit、Tie;IL−1、IL−3、IL−6、IL11、G CSF、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、Epo、Flt3−L、又はCNTFの受容体;及び低レベルのHLA−クラスI、CD44−E、及びMuc−18 mRNAを発現しなかった。
B.MAPCsは、サイトカインBMP1、BMP5、VEGF、HGF、KGF、MCP1のmRNA;サイトカイン受容体Flk1、EGF−R、血小板由来増殖因子−R1α、gp130、LIF−R、アクチビンR1と−R2、TGFR−2、BMP−R1A;接着受容体CD49c、CD49d、CD29;及びCD10を発現した。
C.MAPCsは、hTRTとTRF1のmRNA;POUドメイン転写因子oct−4、sox−2(ES/ECの未分化状態を維持するためにoct−4とともに必要とされる、Uwanogho H., 1995)、sox11(神経発生)、sox9(軟骨形成)(Lefebvre V., 1998);ホメオドメイン転写因子:Hox−a4と−a5(頸部と胸部骨格指定;呼吸器の器官形成)(Packer AI, 2000)、Hox−a9(骨髄造血)(Lawrence H, 1997)、Dlx4(前脳と頭部の周囲構造の指定)(Akimenko MA, 1994)、MSX1(胚中胚葉、成体の心臓と筋肉、軟骨形成と骨形成)(Foerst-Potts L. 1997)、PDX1(膵臓)(Offield MF, 1996)を発現した。
D.oct−4、LIF−R、及びhTRT mRNAの存在はRT−PCRにより確認された。
E.さらに、RT−PCRは、rex−1 mRNAとrox−1 mRNAがMAPCs中で発現されることを示した。
7日齢Sprague Dawley(SD)子ラット(試験群当たりn=7)に対して、Riceら、Ann Neurol. 9: 131-141 (1981)(特にこの方法に関して参照によりその全体を本明細書に組み入れる)に記載されているように、片側頚動脈結紮の後の8%低酸素の方法によってHI損傷を行った。損傷後7日目に、SDラット(同系、GFP標識、動物当たり200,000個の細胞)又はFisherラット(同種異系、β−gal標識、動物当たり200,000個の細胞)に由来する凍結乾燥MAPCs(移植の直前に解凍したもの)を動物の海馬領域に定位移植した。全ての動物にその生存期間にわたって毎日免疫抑制処置(CSA、1mg/kg、腹腔内(i.p.))を行った。移植後7日目及び14日目に、上体旋回試験(Elevated Body Swing Test;EBST)及びロタロッド試験を行って、一般的及び協調的運動及び神経機能をBorlonganら、J Neurosci., 15: 5372-5378 (1995)(特に行動遂行を評価するこれらの方法に関して参照によりその全体を本明細書に組み入れる)に記載のように明らかにした。生着したMAPCsの免疫組織化学分析のために、14日目に試験後の動物を安楽死させた。実験のフローチャートを図1に示す。試験過程でMAPCを移植した動物では死亡が観察されなかった。
実施例1に記載のように動物に処置を行った。移植後7日目に、MAPCを移植したHI損傷動物は、ビヒクルを注入した損傷動物と比較して、EBSTで判定した場合に運動非対称性が低くなり(64%〜65%対75%)、ロタロッドでは長い時間費やす(14.1〜16.5秒対18秒)傾向があることが示された。移植後14日目に、MAPCを移植した動物は、ビヒクル注入を行った対照動物よりも有意に低い運動非対称性を示し(66%〜70%対87%)、ロタロッドで長い時間を費やした(27.3〜28.3秒対21秒)。損傷動物に移植した同系及び同種異系MAPCsは、両方の試験期間においてその行動の改善に統計学的差がなかった。結果をグラフとして図2に示す。この結果は、運動及び神経の両方の測定でラットHI損傷モデルに注射したMAPCsの治療効果を示している。
実施例1に記載のように動物に処置を行った。移植後14日目に犠牲にした後、HI損傷動物の脳における生着MAPCsを組織学的検査により検出した。GFP陽性同系移植片は主に、DAPIで同時に標識された、元の海馬CA3移植部位及び隣接するCA2領域において検出された。同種異系移植片は、抗β−gal染色と、DAPIによる同時標識によって検出され、これはHI損傷脳で生存した移植片と同様のパターンを示した。移植片の生存は、14日目に0.96%だった(ANOVA F値24.27、df=2,19及びp<0.0001;Fisher事後検定はp<0.0001)。この結果は、同系及び同種異系MAPCsはいずれも、ラットHI損傷モデルにおいて注射部位に生着し、直接脳内注射後少なくとも2週間持続していることを示す。
実施例1に記載のように動物に処置を行った。組織学的分析をほぼ実施例2Bに記載のように実施したが、別の脳切片をニッスル染色して内因性ニューロン生存能のレベルを決定した。同系又は同種異系MAPCsを注射した動物では、対照ビヒクルを注射した動物と比較して内因性ニューロン死が有意に低減していた。この結果をグラフとして図3に示す。この結果は、MAPC投与によって低酸素虚血性損傷から内因性ニューロンが保護され、結果的にニューロン生存能が増大することを示している。
実施例1に記載のように動物に処置を行った。MAPC処置ラットから作製した脳切片に対して、上述したMAPCマーカー(同系MAPCsについてはGFP、又は同種異系MAPCsについてはβ−gal)と、同時にニューロンについて十分に特性決定されているマーカーであるMAP2で同時染色を行った。同系及び同種異系移植動物の両方において各MAPCマーカー及びニューロンマーカーの両方を発現する細胞がいくつかみとめられた。このことは、MAPCsの一部はニューロンに分化したことを示すが、二重染色された細胞は、移植されたMAPC細胞と内因性ニューロン細胞の融合の稀な結果である可能性もある。この結果は、ラットHI損傷モデルにおける動物への投与後14日目におけるMAPCsの初期表現型ニューロン分化を示している。
7日齢のSprague Dawley(SD)子ラット(試験群当たりn=7)に対して、実施例1及びそこで引用された参照文献に記載されているように、片側頚動脈結紮の後の8%低酸素の方法によってHI損傷を行った。HI損傷後7日目に、Fisherラットに由来する凍結乾燥MAPCs(移植の直前に解凍したもの)(同種異系、β−gal標識、動物当たり200,000個の細胞)を動物の海馬領域に定位移植した。移植後7日目及び14日目に、EBST及びロタロッド試験を用いて行動試験を行って、一般的及び協調的運動及び神経機能を明らかにした。14日目までに、PBSのみを投与した対照群と比較して、MAPC処置動物は、頭蓋内及びIV送達群のいずれもEBST及びロタロッド試験の両方において統計学的に有意な改善を示した(両方の試験についてp<0.05)。
24匹のSD成体ラットに中大脳動脈(MCA)閉塞外科手術を行って、この動物に外科的卒中を誘導した。卒中の誘導後7日目に、動物を各7匹からなる4つのコホートに分けた。各コホートには、以下のうち1つを直接脳内投与した。すなわち、(1)3μlのPBSの注射(対照)、(2)100,000個のヒトMAPCsを含む3μlのPBSの注射、(3)200,000個のヒトMAPCsを含む3μlのPBSの注射、及び(4)400,000個のヒトMAPCsを含む3μlのPBSの注射である。以下の実施例に記載するように動物を試験し、21日目に犠牲にした。
実施例6に記載のように動物に処置を行った。細胞移植後7日目及び14日目に、上述したように各動物に対してEBST及びBederson試験を行って運動及び神経機能を判定した。EBSTでは、200,000個又は400,000個の細胞の投与を受けた動物において、対照と比較した場合に、移植後7日目に旋回の偏りに統計学的に有意な改善が観察された。14日目までには、ヒトMAPC注射を行った動物の3つのコホート全てが対照群と比較して有意な改善を示した。この結果を、図4の左側の上下のグラフに示す。
上記の実施例6に記載したようにラットに処置を行った。MAPC移植後14日目の最後の行動試験の後に動物を犠牲にし、脳を採取した。パラフィン包埋組織の半分の厚さの切片をDAPIで染色して細胞核を全て可視化し、マウス抗HuNu(ヒト核)ポリクローナル抗体、続いてFITC結合ヤギ抗マウスモノクローナル抗体を用いて、生着したヒトMAPCsを染色した。MAPCsは、皮質(CTX)、脳室下帯(SVZ)及び線条体(STR)において見とめられた。この結果は、ヒトMAPCsが生存し、ラットに脳内注射された後に生着して、MAPC投与の有意な治療効果を提示していることを示す。細胞の分布は、MAPCsが脳の二次的領域に移動し、細胞を注射した一次部位と共にそこでも生着していることを示す。100,000個又は200,000個のMAPCsの注射について生存及び移動の同じパターンが見られた。ビヒクルのみを注射した対照卒中動物の脳ではHuNu免疫反応性は検出されなかった。生存移植片の割合は、卒中後14日目において、100,000個、200,000個又は400,000個のMAPC移植用量についてそれぞれ0.55%、0.7%及び0.51%であった。この結果は、卒中モデル脳において、MAPCsが注射部位で生存し生着しただけではなく、その注射部位から離れた二次的部位にも移動して生着することを明らかに示している。まとめると、直接脳内注射後少なくとも2週までは、異種ヒトMAPCsは損傷及び注射の部位(線条体)と、皮質及び脳室下帯を含む注射した脳の二次的部位に存在する。
35匹のSDラットに中大脳動脈(MCA)閉塞外科手術を行って、この動物に外科的卒中を誘導した。卒中の誘導後7日目に、動物を各7匹からなる5つのコホートに分けた。各コホートには、以下のうち1つを直接脳内投与した。すなわち、(1)免疫抑制を行わずに400,000個のラットMAPCsを含む3μlのPBSの注射、(2)免疫抑制処置(CSA、1mg/kg、i.p.)を行って400,000個のラットMAPCsを含む3μlのPBSの注射、(3)免疫抑制を行わずに400,000個のヒトMAPCsを含む3μlのPBSの注射、(4)免疫抑制処置(CSA、1mg/kg、i.p.)を行って400,000個のヒトMAPCsを含む3μlのPBSの注射、及び(5)免疫抑制処置(CSA、1mg/kg、i.p.)を行って400,000個の照射非生存ヒトMAPCsを含む3μlのPBSの注射、である。
実施例9に記載のように動物に処置を行った。細胞移植後14日目に、及びその後8週間にわたって14日毎に、各動物に対してEBST及びBederson試験を行って運動及び神経機能を判定した。異種及び同種異系MAPCsの投与はいずれも、EBST及びBederson評価の両方において、免疫抑制処置を行った場合及び行わなかった場合に、統計学的に有意なかつ持続的な改善をもたらした。この結果は、虚血性損傷後7日目に移植されたMAPCsが、行動及び神経機能に対して統計学的に有意な長期(8週)の持続的治療効果をもたらしたことを示している。この結果はさらに、免疫抑制処置が実証された治療効果に必要ではないことを示している。この結果を図5及び6にグラフとして示す。
42匹のSDラットに中大脳動脈(MCA)閉塞外科手術を行って、この動物に外科的卒中を誘導した。卒中の誘導後7日目に、動物を各7匹からなる6つのコホートに分けた。各コホートには、以下のうち1つを静脈内投与した。すなわち、(1)免疫抑制処置(CSA、1mg/kg、i.p.)を行って400,000個のヒトMAPCs、(2)免疫抑制を行わずに400,000個のヒトMAPCs、(3)免疫抑制処置(CSA、1mg/kg、i.p.)を行って1,000,000個のヒトMAPCs、(4)免疫抑制処置を行わずに1,000,000個のヒトMAPCs、(5)免疫抑制処置(CSA、1mg/kg、i.p.)を行って1,000,000個の照射非生存ヒトMAPCs、及び(6)免疫抑制処置を行わずに1,000,000個の照射非生存ヒトMAPCsである。
実施例11に記載のように動物に処置を行った。細胞移植後14日目に、及びその後8週間にわたって14日毎に、各動物に対してEBST及びBederson試験を行ってそれぞれ運動及び神経機能を評価した。
28匹のSDラットに中大脳動脈(MCA)閉塞外科手術を行って、この動物に外科的卒中を誘導した。動物を各7匹からなる4つのコホートに分けた。各コホートには、免疫抑制を行わずに1,000,000個の異種(ヒト)MAPCsを静注により投与した。全ての群には同じ処置を行ったが、MAPCsを卒中誘導後の異なる時点で投与した。誘導後、以下の日数の後に各群にMAPCsを投与した。すなわち、(1)1日、(2)2日、及び(3)7日。さらに、(4)群には、誘導後7日目に1,000,000個の照射非生存MAPCsを投与した。
実施例12に記載のように動物に処置を行った。細胞移植後7日目に、及びその後8週間にわたって7日毎に、各動物に対してEBST及びBederson試験を行ってそれぞれ運動及び神経機能を評価した。
実施例12に記載のように動物に処置を行った。各群について56日目の最後の行動試験の後に動物を犠牲にした。犠牲にした動物から脳を採取した。この脳からパラフィン包埋組織の半分の厚さの切片を調製した。切片は、DAPIで染色して細胞核を全て可視化し、ポリクローナルマウス抗HuNu(ヒト核)抗体、続いてFITC結合ヤギ抗マウスモノクローナル抗体を用いて、生着したヒトMAPCsを染色した。DAPI染色細胞及びFITC染色細胞の両方を計数した。生着した細胞の合計数は、FITC染色細胞数から決定した。生着した注射MAPCの割合(%)は、各動物に注入された細胞の総数に対する生着した細胞の総数の比率から計算した。
実施例12に記載のように動物に処置を行った。脳切片を実施例14に記載のように調製した。(実施例14で使用したものとは)別の切片をニッスルで染色して内因性ニューロンの生存能を判定した。この結果は、MAPC投与による内因性ニューロン死の統計学的に有意な低減を示している。内因性ニューロン生存能に対するMAPCsの保護効果は、卒中誘導からMAPC投与までの時間が低減するほど増大する。卒中誘導後1日目にMAPCsを投与した動物では、卒中誘導後2日目にMAPCsを投与した動物よりも、多くの生存ニューロンが存在し、その差は統計学的に有意であった。同様に、卒中誘導後2日目にMAPCsを投与した動物では、卒中誘導後7日目にMAPCsを投与した動物よりも、多くの生存ニューロンが存在し、その差もまた統計学的に有意であった。この結果は、虚血事象後早くMAPCsを投与するほど、内因性ニューロン生存能に対する保護効果が高くなることを示している。
Claims (29)
- 被験体における脳損傷の治療方法であって、脳損傷に罹患する可能性があるか、罹患しているか又は罹患した被験体に、該脳損傷を治療するのに有効な経路と有効な量で、細胞を投与することを含み、該細胞は、胚幹細胞、胚生殖細胞又は生殖細胞ではなく、内胚葉性、外胚葉性及び中胚葉性の胚系統の少なくとも2種それぞれの少なくとも1種の細胞型に分化することができるものである、前記方法。
- 被験体が、前記細胞による処置に対して補助的に免疫抑制療法で処置されない、請求項1記載の方法。
- 脳損傷が低酸素により生じたものである、請求項2記載の方法。
- 脳損傷が低酸素性虚血性脳損傷である、請求項3記載の方法。
- 脳損傷が血液供給の閉鎖又は閉塞により生じたものである、請求項2記載の方法。
- 脳損傷が皮質梗塞である、請求項2記載の方法。
- 脳損傷が卒中である、請求項2記載の方法。
- 細胞が、内胚葉性、外胚葉性及び中胚葉性の胚系統それぞれの少なくとも1種の細胞型に分化することができる、請求項2記載の方法。
- 細胞がテロメラーゼを発現する、請求項2記載の方法。
- 細胞がoct−3/4について陽性である、請求項2記載の方法。
- 細胞が、被験体への投与の前に、培養で少なくとも10〜40回の細胞倍加を受けている、請求項2記載の方法。
- 細胞が哺乳動物細胞である、請求項2記載の方法。
- 細胞がヒト細胞である、請求項2記載の方法。
- 細胞が、胎盤組織、臍帯組織、臍帯血、骨髄、血液、脾臓組織、胸腺組織、脊髄組織、脂肪組織及び肝臓組織のいずれかから単離された細胞に由来する、請求項2記載の方法。
- 細胞が被験体に対して同種異系である、請求項2記載の方法。
- 細胞が被験体に対して異種である、請求項2記載の方法。
- 細胞が被験体に対して自家である、請求項2記載の方法。
- 被験体がヒトである、請求項2記載の方法。
- 細胞が、被験体の質量1kgあたり105〜108個の細胞を含む単回又は複数回用量で被験体に投与される、請求項2記載の方法。
- 細胞が、被験体の質量1kgあたり106〜5×107個の細胞を含む単回又は複数回用量で被験体に投与される、請求項19記載の方法。
- 細胞に加えて、1又はそれ以上の増殖因子、分化因子、シグナル伝達因子、及び/又はホーミングを増大させる因子を被験体に投与する、請求項2記載の方法。
- さらに、1又はそれ以上の抗生剤、抗菌剤及び/又は抗ウイルス剤の任意の組合せの1又はそれ以上を被験体に投与する、請求項2記載の方法。
- 細胞が、1又はそれ以上の他の医薬活性物質を含む製剤で投与される、請求項2記載の方法。
- 製剤がさらに1又はそれ以上の抗生剤、抗菌剤及び/又は抗ウイルス剤の任意の組合せを含む、請求項23記載の方法。
- 細胞が非経口経路により被験体に投与される、請求項2記載の方法。
- 細胞が静注により投与される、請求項25記載の方法。
- 細胞が定位注入により被験体に投与される、請求項2記載の方法。
- 被験体が、前記細胞による処置に加えて、1又はそれ以上の免疫抑制剤による処置を受けていた、受ける予定である又は受けているものである、請求項1記載の方法。
- 被験体が、前記細胞による処置に加えて、1又はそれ以上のコルチコステロイド、シクロスポリンA、シクロスポリン様免疫抑制剤、シクロホスファミド、抗胸腺細胞グロブリン、アザチオプリン、ラパマイシン、FK−506、及びFK−506以外のマクロライド様免疫抑制剤、並びに免疫抑制モノクローナル抗体薬剤による処置を受けていた、受ける予定である又は受けているものである、請求項1記載の方法。
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