JP2013241383A - ケラチノサイト遊走促進剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ヒュウガナツ(日向夏)抽出物、ヒュウガナツ抽出物の水溶性成分、またはヒュウガナツ抽出物よりゲル濾過クロマトグラフィーにて得られる分子量2000〜20万の画分を有効成分とするケラチノサイト遊走促進剤、またはケラチノサイト遊走促進剤を含有する外用剤組成物若しくは医薬品組成物。
【選択図】なし
Description
(炎症反応期)受傷組織に数時間以内に炎症細胞が浸潤する。数分でまず好中球が、続いて単球とリンパ球が到達し、プロテアーゼや活性酸素を産生して微生物による汚染を防ぐ。また、これらの細胞が壊死組織片を貪食作用により取り込むと、成長因子やサイトカインを放出し、増殖期への移行を促進する。
(増殖期)炎症反応から肉芽組織が形成され、上皮化する時期である。血管内皮細胞は血液凝固部に遊走・増殖し、血管を新生する。線維芽細胞の遊走は、受傷後48時間後位から開始され、炎症期に生じたフィブリン網を足場として傷部に移動する。炎症細胞から放出されたPDGF、TGF-α、TGF-β、FGFにより、線維芽細胞は遊走し、細胞増殖を行う。活性化された線維芽細胞は、ヒアルロン酸やコラーゲンなどを生成し、細胞外マトリックスを形成する。新しくできた組織は肉芽組織と呼ばれる。
(組織再構築期)創傷治癒の最終段階にあたり、細胞増殖やコラーゲン産生は徐々に沈静化し、創部の強度が増大する。細胞外マトリックスの再編成が行われ、肉芽組織は成熟した瘢痕組織となる(非特許文献1参照)。
ヒュウガナツの果実及び果皮100gを精製水(約10〜60℃)にて約30分間抽出し、濾過して抽出液を約2.0kg得る。
ヒュウガナツの果実及び果皮100gを30%エタノールにて約30分間抽出し、濾過して抽出液を約2.0kg得る。
「試験方法および評価方法」
ヒト新生児包皮由来角化細胞 NHEK、(NHEK、KURABO)の前培養および本試験にはケラチノサイト増殖培地 KG2(KURABO)を用い、培養は5%CO2、37℃の条件下で行った。
細胞の遊走評価は、Ibidi社のInstruction Manualに従い操作を行った。3〜7×105個/ml のNHEKをカルチャーインサートに70μl/wellフ゜レートで播種し、24時間前培養した。培養後、インサートを取り外し、試料を含む培地に置換して写真撮影(図1又は図2中、右側面の端又は左側面の端より黒い実線までは、0時間目の細胞間隙を表す)を行った。次に、ヒュウガナツ抽出液又はコントロールを添加し、17時間培養後、写真撮影を行うと共に、数1より、ヒュウガナツ抽出液添加による間隙被覆率を求め、その変化をケラチノサイト遊走促進作用として評価を行った。尚、結果を表1及び図1〜2に示した。
「試料」
尚、ケラチノサイト遊走促進作用試験の試料は、1,3-ブチレングリコール(終濃度:0.1%)に調整したものをコントロールとし、本発明の製造例1で得られたヒュウガナツ抽出液(終濃度:0.33%)に調整したものを試験に供した。
間隙被覆率(%) = (1−S1/S0)×100
S0:0時間目の平均細胞間距離、S1:17時間培養後の平均細胞間距離
結果は表1及び図1〜2に示した通り、本発明のヒュウガナツ抽出液を添加した後はコントロールに比べ、間隙被覆率が高くなっており、よって、ヒュウガナツ抽出液はケラチノサイト遊走促進作用を有することが確認できた。又、本発明の製造例1で得られたヒュウガナツ抽出液は精製水による抽出液であり、水溶性成分にケラチノサイト遊走促進作用を有することも確認できた。又、創傷治癒促進剤としても利用可能である。
本発明の製造例1で得られたヒュウガナツ抽出液をエタノールにて脱脂した。脱脂したヒュウガナツ抽出液を精製水で1時間撹拌抽出し、得られた抽出液をゲルろ過クロマトグラフィー用担体のSephadex G-25 Coarse(GEヘルスケア・ジャパン株式会社社製)で分画し、結果を図3に示した。
「試料」
本発明の製造例1で得られたヒュウガナツ抽出液を試験に供した。
結果は図3の通り、得られた分布曲線は保持時間が15分〜22分の範囲にあり、且つ、ピークを示す保持時間が16.1分と21.4分であった。検量線から、実施例1において得られたヒュウガナツ抽出液は分子量の範囲が2.0×103〜2.0×105であり、ピークを示す分子量が9.0×104と2.7×103にあることが確認でき、本発明のヒュウガナツ抽出液に含まれる水溶性成分の分子量範囲は、2000〜20万の分子量の範囲であった。
本発明による様々な剤形の製剤を製造した。以下にその処方例を示すが、各処方例は各製品の製造における常法により製造したもので良く、配合量のみを示した。本発明はこれらに限定されるわけではない。
重量%
1.スクワラン 5.0
2.オリーブ油 5.0
3.ホホバ油 5.0
4.セタノール 1.5
5.グリセリンモノステアレート 2.0
6.ポリオキシエチレン(20)セチルエーテル 3.0
7.ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレート 2.0
8.1,3−ブチレングリコール 1.0
9.グリセリン 2.0
10.リンゴ酸ナトリウム 1.0
11.製造例1のヒュウガナツ抽出液 5.0
12.防腐剤(パラオキシ安息香酸エステル) 適量
13.香料 適量
14.精製水 残余
組成:本発明の実施例1のヒュウガナツ抽出液の濃縮物30mg、ヒドロキシプロピルセルロース20mg、軽質無水ケイ酸3mg、乳糖 8mg、結晶セルロース9mg、タルク10mg、ジアシルグリセロール20mgを定法に従って1錠100mgの錠剤を製造した。
Claims (5)
- ヒュウガナツ抽出物を有効成分とするケラチノサイト遊走促進剤。
- ヒュウガナツ抽出物に含まれる水溶性成分を有効成分とするケラチノサイト遊走促進剤。
- ヒュウガナツ抽出物よりゲル濾過クロマトグラフィーにて得られる分子量2000〜20万の画分を有効成分とするケラチノサイト遊走促進剤。
- 請求項1〜3記載のケラチノサイト遊走促進剤を含有する外用剤組成物。
- 請求項1〜3記載のケラチノサイト遊走促進剤を含有する医薬品組成物。
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JP2012117084A JP2013241383A (ja) | 2012-05-23 | 2012-05-23 | ケラチノサイト遊走促進剤 |
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